universidad central del ecuador facultad de ciencias … · quito, 2016 . ii dedicatoria dedico...
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UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
FACULTAD DE CIENCIAS MÉDICAS
CARRERA DE LABORATORIO CLÍNICO E HISTOTECNOLÓGICO
“Eficacia del Método Kato Katz en el diagnóstico de la infección por Amphimerus
comparando con las Técnicas de Concentración Formalina-Éter (Método de Ritchie),
Frotis Simple y de Sedimentación Simple en personas de la Comunidad Corriente Seca -
Río Cayapas - Esmeraldas en Agosto del 2015”.
Trabajo de Titulación previo a la obtención del Título de Licenciada en Laboratorio Clínico e
Histotecnológico
AUTORA: Díaz Gavilanes Fernanda Abigail
TUTOR: Dr. Calvopiña Hinojosa Segundo Manuel PhD.
QUITO, 2016
ii
DEDICATORIA
Dedico este trabajo a mis padres por ser el pilar fundamental de mi vida, por su amor y apoyo incondicional día a día, por ser quienes han permanecido en cada uno de mis triunfos y sobre todo en mis adversidades, dando así el matiz único en mi formación humana y profesional, por ser ellos quienes me han enseñado las más grandes lecciones de la vida.
También dedico a mis hermanos, familiares, amigos y docentes quienes han depositado su confianza en mí y no ha decaído su inmenso cariño y confianza en mí potencial.
Díaz Gavilanes Fernanda Abigail
iii
AGRADECIMIENTOS
Agradezco a Dios por sus planes para mi vida, por su amor perfecto y constante, por ser mi fortaleza siempre, a mi familia por su apoyo, por sembrar en mí valores y educación, porque son la base de lo que soy y llegaré a ser. Agradezco de forma especial al Dr. Manuel Calvopiña, tutor de mi proyecto investigativo porque más allá de brindarme sus conocimientos y su apoyo en el área académica científica, me ha enseñado dedicación, esfuerzo y entrega total en su diario laborar.
Agradezco con inmenso cariño a mis amigos quienes han formado parte de este proceso investigativo, quienes han dejado más que un granito de arena, y por su constante motivación.
Díaz Gavilanes Fernanda Abigail
iv
AUTORIZACIÓN DE LA PUBLICACIÒN DEL TRABAJO DE TITULACIÓN
Yo, Fernanda Abigail Díaz Gavilanes, en calidad de autora del Trabajo de Titulación realizado
sobre “Eficacia del Método Kato-Katz en el diagnóstico de la infección por Amphimerus spp
comparando con las técnicas de concentración formalina-éter (Método de Ritchie), Frotis
Simple y de Sedimentación Simple en personas de la Comunidad Corriente Seca - Río Cayapas
– Esmeraldas en Agosto del 2015”, por la presente autorizo a la UNIVERSIDAD CENTRAL
DEL ECUADOR, hacer uso de todos los contenidos que me pertenecen o de parte de los que
contienen esta obra, con fines estrictamente académicos o de investigación.
Los derechos que como autor me corresponden, con excepción de la presente autorización,
seguirán vigentes a mi favor, de conformidad con lo establecido en los artículos 5, 6, 8, 19 y
demás pertinentes de la Ley de Propiedad Intelectual y su Reglamento.
Quito, 29 de julio del 2016
Fernanda Abigail Díaz Gavilanes
CI: 172226728-1
Correo: [email protected]
v
APROBACIÓN DE LA TUTORÍA DEL TRABAJO DE TITULACIÓN
En calidad de Tutor del Trabajo de Fin de Carrera, presentado por la señorita DÍAZ
GAVILANES FERNANDA ABIGAIL, para optar por el grado de Licenciada en Laboratorio
Clínico e Histotecnológico, cuyo título es: “EFICACIA DEL MÉTODO KATO-KATZ EN
EL DIAGNÓSTICO DE LA INFECCIÓN POR AMPHIMERUS COMPARANDO CON
LAS TÉCNICAS DE CONCENTRACIÓN FORMALINA - ÉTER (MÉTODO DE
RITCHIE), FROTIS SIMPLE Y DE SEDIMENTACIÓN SIMPLE EN PERSONAS DE
LA COMUNIDAD CORRIENTE SECA - RÍO CAYAPAS - ESMERALDAS EN
AGOSTO DEL 2015”, considero que dicho trabajo reúne los requisitos y méritos suficientes
para ser sometido a la presentación pública y evaluación por parte del tribunal examinador que
se designe.
En la ciudad de Quito a los 29 dias del mes de julio del 2016.
Atentamente,
Dr. Manuel Calvopiña PhD.
TUTIR DEL TFC
CI. 0501308415
vi
APROBACIÒN DEL TRIBUNAL
Los miembros del Tribunal Examinador aprueban el informe de titulación “EFICACIA DEL
MÉTODO DE KATO-KATZ EN EL DIAGNÓSTICO DE LA INFECCIÓN POR
AMPHIMERUS SPP COMPARANDO CON LAS TÉCNICAS DE CONCENTRACIÓN
FORMALINA-ÉTER (MÉTODO DE RITCHIE), FROTIS SIMPLE Y DE
SEDIMENTACIÓN SIMPLE, EN PERSONAS DE LA COMUNIDAD CORRIENTE
SECA – RIO CAYAPAS – ESMERALDAS EN AGOSTO DEL 2016” presentado por:
DIAZ GAVILANES FERNANDA ABIGAIL.
Para constancia certifican,
__________________________ __________________________
DR. MARCELO CHIRIBOGA MSc. MERCEDES TAPIA
PRESIDENTE VOCAL
_________________________
MSc. LUCRECIA PABÓN
VOCAL
vii
TABLA DE CONTENIDO
DEDICATORIA ..................................................................................................................... ii
AGRADECIMIENTOS ......................................................................................................... iii
AUTORIZACIÓN DE LA PUBLICACIÒN DEL TRABAJO DE TITULACIÓN ............ iv
APROBACIÓN DE LA TUTORÍA DEL TRABAJO DE TITULACIÓN ........................... v
APROBACIÒN DEL TRIBUNAL ....................................................................................... vi
TABLA DE CONTENIDO .................................................................................................. vii
ÍNDICE DE ANEXOS .......................................................................................................... xi
ÍNDICE DE ILUSTRACIONES .......................................................................................... xii
ÍNDICE DE GRAFICOS…………………………………………………………………..xii
ÍNDICE DE TABLAS .......................................................................................................... xii
RESUMEN .......................................................................................................................... xiv
ABSTRACT ......................................................................................................................... xv
INTRODUCCIÓN .................................................................................................................. 1
CAPITULO I .......................................................................................................................... 3
1. E L PROBLEMA ............................................................................................................... 3
1.1UBICACIÓN ..................................................................................................................... 3
CAPITULO II ......................................................................................................................... 6
2.1 MARCO LEGAL ............................................................................................................. 6
Constitución de la República del Ecuador .............................................................................. 6
Leyes de la Universidad Central del Ecuador ........................................................................ 7
Universidad Central del Ecuador – Centro de Biomedicina................................................... 7
2.1.1 Misión y Visión ............................................................................................................. 7
2.2 MARCO TEÓRICO ......................................................................................................... 8
2.2.1 RESEÑA HISTÓRICA DE AMPHIMERUS ............................................................... 8
2.2.2 UBICACIÓN DE AMPHIMERUS EN LA CLASIFICACIÓN DE PARÁSITOS .... 13
2.2.3 DISTIBUCION GEOGRÁFICA DEL PARÁSITO AMPHIMERUS ........................ 15
2.2.4 AMPHIMERUS ......................................................................................................... 18
2.2.4.1 DEFINICIÓN AMPHIMERUS ................................................................................ 18
viii
2.2.4.2 CICLO VITAL ......................................................................................................... 18
2.2.4.2.1 DESCRIPCIÓN DEL CICLO DE VIDA .............................................................. 18
2.2.4.3 ESTRUCTURA Y CARACTERÍSTICAS ............................................................... 20
2.2.4.3.1 DESCRIPCIÓN DE CADA ESTADIO ................................................................ 20
2.2.4.4 PRESENTACIÓN CLÍNICA Y PATOGENIA EN ANIMALES ........................... 23
2.2.4.5 TRATAMIENTO EN HUMANOS .......................................................................... 24
2.2.4.6 EPIZOOTIOLOGÍA ................................................................................................. 24
2.2.4.7 PELIGRO PARA OTROS ANIMALES .................................................................. 24
2.2.4.8 PELIGRO PARA HUMANOS ................................................................................ 24
2.2.4.9 CONTROL Y PREVENCIÓN ................................................................................. 24
2.2.5 DESCRIPCIÓN DEL SITIO DE INVESTIGACIÓN ............................................... 25
2.2.5.1 UBICACIÓN GEOGRÁFICA ................................................................................. 25
2.2.6 GRUPO ÉTNICO CHACHI ........................................................................................ 26
2.2.6.2 LENGUA ETNIA CHACHI .................................................................................... 27
2.2.6.3 ORIGEN ................................................................................................................... 27
2.2.6.4 TERRITORIO .......................................................................................................... 27
2.2.6.5 POBLACIÓN ........................................................................................................... 27
2.2.6.6 VESTIMENTA ......................................................................................................... 28
2.2.6.7 CULTURA ............................................................................................................... 28
2.2.6.8 ECONOMÍA ............................................................................................................. 28
2.2.6.9 GASTRONOMÍA ..................................................................................................... 28
2.2.6.10 SITUACIÓN ACTUAL ......................................................................................... 29
2.2.7 COMUNIDAD CORRIENTE SECA .......................................................................... 30
2.2.7.1 POBLACIÓN ........................................................................................................... 30
2.2.7.3 CONTACTO ........................................................................................................... 32
2.2.7.4 SOCIALIZACIÓN CON LA COMUNIDAD ......................................................... 32
2.2.8 TÉCNICAS PARA LA IDENTIFICACIÓN DE PARÁSITOS ................................ 34
2.2.8.1 MÉTODOS DIRECTOS ......................................................................................... 34
2.2.8.1.1 EXAMEN EN FRESCO ....................................................................................... 35
2.2.8.1.2 SEDIMENTACIÓN SIMPLE .............................................................................. 35
2.2.8.1.3 CONCENTRACIÓN FORMOL ÉTER ............................................................... 35
ix
2.2.8.1.4 KATO KATZ ....................................................................................................... 36
2.2.8.1.5 TÉCNICAS INMUNOLÓGICAS DIRECTAS ................................................... 37
2.2.8.1.5.1 INMUNOFLUORESCENCIA DIRECTA ........................................................ 37
2.2.8.1.5.2 DETECCIÓN DE ANTÍGENOS ...................................................................... 38
2.2.8.1.5.3 DETECCIÓN DE ACIDOS NUCLEICOS ....................................................... 38
2.2.8.2 METODOS INDIRECTOS ..................................................................................... 39
2.2.8.2.1 TÉCNICAS DE PRECIPITACIÓN EN GEL AGAR .......................................... 39
2.2.8.2.2 TÉCNICAS DE AGLUTINACIÓN ..................................................................... 40
2.2.8.2.2.1 AGLUTINACIÓN DIRECTA .......................................................................... 40
2.2.8.2.2.2 AGLUTINACIÓN DE PARTÍCULAS ............................................................. 41
2.2.9 FASES DEL ANÁLISIS COPROPARASITARIO ................................................... 41
2.2.9.1 FASE PREANALÍTICA ......................................................................................... 41
2.2.9.1.1 INDICACIONES PARA LA OBTENCIÓN DE LA MUESTRA ....................... 42
2.2.9.1.2 OBTENCIÓN DE LA MUESTRA ...................................................................... 42
2.2.9.1.3 ALMACENAMIENTO ........................................................................................ 42
2.2.9.1.4 TRANSPORTE .................................................................................................... 42
2.2.9.2 FASE ANALÍTICA ................................................................................................. 43
2.2.9.2.1 APLICACIÓN DE LOS MÉTODOS ................................................................... 43
2.2.9.3 FASE POST ANALÍTICA ...................................................................................... 43
2.2.10 VARIABLES Y SU OPERACIONALIZACÍON .................................................... 44
2.2.11 PARÁMETROS DE ANÁLISIS ESTADÍSTICOS ................................................. 45
2.2.11.1 PREVALENCIA .................................................................................................... 45
2.2.11.2 INTERVALO DE CONFIANZA .......................................................................... 45
2.2.11.3 VALOR P .............................................................................................................. 45
2.2.11.4 SENSIBILIDAD .................................................................................................... 46
2.2.11.5 ESPECIFICIDAD .................................................................................................. 47
CAPÍTULO III ..................................................................................................................... 48
METODOLOGÍA ................................................................................................................. 48
3.1 TIPO DE ESTUDIO ...................................................................................................... 48
3.2 NIVEL DE INVESTIGACIÓN ..................................................................................... 48
3.3 TÉCNICAS E INSTRUMENTOS DE INVESTIGACIÓN .......................................... 48
x
3.4 UNIVERSO ................................................................................................................... 49
3.5 MUESTRA .................................................................................................................... 49
3.5.1 Criterios de inclusión .................................................................................................. 49
3.5.2 Criterios de exclusión ................................................................................................. 49
3.6 TÉCNICA E INSTRUMENTO DE RECOLECCIÓN DE DATOS ............................. 49
3.6.1 Instrumentos ............................................................................................................... 49
3.6.2 Métodos ...................................................................................................................... 50
3.7 TIPOS DE ANÁLISIS .................................................................................................. 50
3.8 CONSIDERACIONES ÉTICAS………………………………………………………50
CAPÍTULO IV……………………………………………………………………………..51
4.1 RESULTADOS ............................................................................................................. 51
4.2 DISCUSIÓN .................................................................................................................. 64
BIBLIOGRAFÍA .................................................................................................................. 67
ANEXOS .............................................................................................................................. 71
xi
ÍNDICE DE ANEXOS
Anexo 1 Materiales Técnica de Sedimentación Simple ...................................................... 71
Anexo 2 Materiales de la Técnica de Frotis Simple ............................................................. 73
Anexo 3 Procesamiento de la Técnica del Frotis Simple .................................................... 74
Anexo 4 Materiales Técnica de Kato Katz ........................................................................... 76
Anexo 5 Procesamiento de la Técnica Kato Katz ................................................................ 78
Anexo 6 Materiales Técnica de Ritchie ................................................................................ 80
Anexo 7 Procesamiento de la Técnica de Ritchie ................................................................ 82
Anexo 8 Recolección de Muestras ....................................................................................... 82
Anexo 9 Visita y Socialización en Comunidad Corriente Seca ........................................... 83
Anexo 10 Comunidad Corriente Seca .................................................................................. 83
Anexo 11Trabajo de Campo Revisión y supervisión por parte del Tutor ............................ 84
Anexo 12 Trabajo de Campo Fernanda Díaz y Daniel Romero ........................................... 84
Anexo 13 Hallazgos de huevos de Amphimerus spp más representativos ........................... 85
Anexo 14 Equipo de Trabajo ................................................................................................ 86
Anexo 15 Salida de la Comunidad de Alojamiento ............................................................. 86
Anexo 16 Aprobación del Comité de Bioética del Acceso a la Comunidad ........................ 87
xii
ÍNDICE DE ILUSTRACIONES
Ilustración 1 Clasificación de los Parásitos .............................................................................. 13
Ilustración 2 Clasificación de Trematodos ............................................................................... 14
Ilustración 3 Clasificación de Trematodos de acuerdo a la localización en el huésped ........... 14
Ilustración 4 Clasificación de trematodos, Amphimerus no descrito ....................................... 15
Ilustración 5 Distribución Geográfica de las especies de Amphimerus ................................... 17
Ilustración 6 ciclo vital de Clonorchis y Opistorchis ............................................................... 18
Ilustración 7 huevo de Amphimerus spp estructura ................................................................ 20
Ilustración 8 Estructura de Amphimerus adulto ....................................................................... 23
Ilustración 9 Mapa geográfico de la Comunidad Corriente Seca ............................................. 25
Ilustración 10 Ubicación Geográfica de Esmeraldas ................................................................ 26
Ilustración 11 Vivienda Chachi ................................................................................................ 27
Ilustración 12 Gastronomía Chachi .......................................................................................... 29
Ilustración 13 Comunidad Corriente Seca ................................................................................ 30
Ilustración 14Ruta desde Quito hasta Borbón .......................................................................... 31
Ilustración 15 Socialización con la Comunidad Corriente Seca............................................... 33
Ilustración 16Inmunofluorescencia directa en parásitos .......................................................... 37
Ilustración 17 Detección de Ag parasitarios mediante aglutinación ........................................ 38
Ilustración 18 Técnicas moleculares para el diagnóstico de parásitos ..................................... 39
Ilustración 19 Técnicas de precipitación en gel agar ................................................................ 40
Ilustración 20 Aglutinación Directa ......................................................................................... 40
Ilustración 21 Aglutinación de partículas ................................................................................. 41
ÍNDICE DE GRAFICOS
Grafico 1 Amphimeriasis mediante técnica de Frotis Simple .................................................. 55
Grafico 2 Amphimeriasis Mediante el Método de Sedimentación Simple .............................. 56
Grafico 3 Amphimeriasis mediante la técnica de Concentración de Ritchie ........................... 57
Grafico 4 Amphimeriasis mediante la Técnica de Kato-Katz ................................................. 58
Grafico 5 Curvas COR Comportamiento de sensibilidades y especificidades ......................... 61
xiii
ÍNDICE DE TABLAS
Tabla 1 Población Corriente Seca ........................................................................................ 30
Tabla 2 Población incluida en el proyecto............................................................................ 51
Tabla 3 Amphimeriasis en Corriente Seca ........................................................................... 51
Tabla 4 Frecuencia de género ............................................................................................... 52
Tabla 5 Amphimeriasis de acuerdo al género ...................................................................... 52
Tabla 6 Frecuencia de edades ............................................................................................... 53
Tabla 7 Frecuencia de Amphimeriasis según la edad........................................................... 54
Tabla 8 Frecuencia deAmphimeriasis mediante la técnica de Frotis Simple ...................... 55
Tabla 9 Frecuencia de Amphimeriasis mediante la técnica de Sedimentación Simple ........ 56
Tabla 10 Frecuencia de Resultados Amphimeriasis por el Método de Ritchie .................... 57
Tabla 11 Frecuencia de Amphimeriasis mediante la técnica de Kato Katz ......................... 58
Tabla 12 Sensibilidad y Especificidad de la Técnica de Sedimentación Simple ................. 59
Tabla 13 Sensibilidad y Especificidad de la Técnica de Ritchie ......................................... 59
Tabla 14 Sensibilidad y Especificidad de la técnica de Kato - Katz .................................... 60
Tabla 15 P- value entre Kato Katz, Concentración Ritchie y Sedimentación simple ....... 62
Tabla 16 P- value de las técnicas de Kato Katz, Técnica de Ritchie y Sedimentación Simple
con relación al Frotis Simple ............................................................................................... 62
Tabla 17 Intervalos de Confianza ......................................................................................... 63
xiv
TEMA: “Eficacia del método de Kato-Katz en el diagnóstico de la infección por Amphimerus
spp comparando con las técnicas de concentración formalina-éter (método de Ritchie), frotis
simple y de sedimentación simple, en personas de la Comunidad Corriente Seca – Rio Cayapas
– Esmeraldas en Agosto del 2016”.
Autora: Díaz Gavilanes Fernanda Abigail
Tutor: Dr. Manuel Calvopiña PhD.
RESUMEN
Amphimerus spp, parásito trematodo que infecta vías biliares, fue reportado por primera vez en
el Ecuador en el 2011. El diagnóstico parasitológico se realiza por la observación de huevos de
este trematodo en heces fecales. El presente estudio se realizó en habitantes Chachis de la
comunidad Corriente Seca en la provincia de Esmeraldas. En total se analizaron 105 muestras.
Empleando 4 tecnicas, la prevalencia de amphimeriasis en la comunidad fue del 36.1%. Los
resultados de intervalos de confianza y prevalencias obtenidos para Kato Ktaz fueron (25.7%,
95% CI: 17.5 – 33.9%), la Técnica de Sedimentación Simple detectó (21%, 95% CI: 13.1 –
28.6%), para la Técnica de Concentración de Ritchie (18%, 95% CI: 10.7 – 24.8%) y el Frotis
Simple reportó (1%, 95% CI: 0.9 – 2.9%). En el análisis estadístico se determinó que entre las
3 primeras técnicas no existe diferencia estadísticamente significativa (P = > 0.05), mientras
que si fue significativa en relación al frotis simple (P = < 0.05). De acuerdo a los resultados
obtenidos en este estudio recomendamos la técnica Kato-Katz como la mejor en observar
huevos de Amphimerus en heces fecales.
Palabras Clave
AMPHIMERUS SPP / AMPHIMERIASIS / DIAGNOSTICO / MÉTODO DIRECTO /
COPROPARASITARIO / ECUADOR.
xv
I CERTIFY that the above and foregoing is true and correct translation of the original
document in Spanish
_________________________
CAZA PANTUSINA RAUL ISAIAS
Certified Translator
ID: 1706488556
TITLE: "Effectiveness of Kato-Katz method in the diagnosis of infection by Amphimerus spp.
compared with formalin-ether concentration technique (Ritchie method), simple sedimentation
and simple smear, in individuals of Corriente Seca Community – Rio Cayapas Esmeraldas,
Ecuador in August 2015”.
Author: Díaz Gavilanes Fernanda Abigail
Tutor: Dr. Manuel Calvopiña PhD.
ABSTRACT
Amphimerus spp, a trematode parasite that infects bile ducts, was reported for the first time in
Ecuador, in 2011. The parasitological diagnosis is made by observing this trematode eggs in
stool samples. The present study was conducted in Chachi´s population Corriente Seca
community in the province of Esmeraldas. In total 105 samples were analyzed using four
techniques. The Amphimeriasis prevalence in the community was 36.1%. Confidence intervals
and prevalence results obtained for Kato Katz were (25.7%, 95% CI: 17.5-33.9%), The Simple
Sedimentation Technique detected (21%, 95% CI: 13.1-28.6%), for the Concentration Ritchie
Technique (18%, 95% CI: 10.7- 24.8%) and Simple Smear reported (1%, 95% CI: 0.9-2.9%).
The statistical analysis determined that between the first 3 techniques there is no statically
significant difference, (P= > 0.05), while it was significant in relation to the simple smear (P=
<0.05). According to the results obtained in this study, we recommended Kato-Katz technique
as the best to observe Amphimerus eggs in people stool samples.
Key words
AMPHIMERUS SPP / AMPHIMERIASIS / DIAGNOSTIC / DIRECT METHOD /
COPROPARASITOLOGIC / ECUADOR.
1
INTRODUCCIÓN
Amphimerus es un parasito trematodo que infecta las vías biliares del hígado y causa la
enfermedad llamada Amphimeriasis. La infección en humanos fue reportada por primera vez
en el año 2011 en indígenas Chachis residentes en el Río Cayapas de la provincia de
Esmeraldas-Ecuador. El diagnóstico parasitológico se realiza por la observación de sus huevos
en las heces fecales por el método directo de frotis. En un estudio anterior a este, los resultados
obtenidos con respecto a la prevalencia fueron similares mostrando una prevalencia del 24%
cuyo diagnóstico parasitario fue realizado mediante el Método de Ritchie (Calvopiña M,
2011).No existen investigaciones que determinen el intervalo de confianza, P-value,
sensibilidad, especificidad de las técnicas que se aplican en el diagnóstico de Amphimerus spp
como el Kato Katz, que es la técnica recomendada por la OMS para la detección de parásitos
helmintos (Proyecto AECID, 2012), el Método de Ritchie, Técnica de Sedimentación Simple,
entre otras. Es por ello que este estudio fue diseñado como prospectivo y comparativo con el
objetivo principal de comparar el intervalo de confianza de cada una de las técnicas
coproparasitológicas aplicadas en este estudio, tanto de concentración y cuantitativas en su
diagnóstico con la finalidad de encontrar la técnica que muestre mayor prevalencia en el
diagnóstico de esta parasitosis.
La técnica de Kato Katz consiste en la diafanización de las heces con el uso de glicerol añadido
verde malaquita o azul de metileno, que permite observar las formas parasitarias. (Instituto
Nacional de Salud) una vez que se ha realizado la aclaración de la muestra se permite con
facilidad realizar el contaje de los huevos de los parásitos, una de las ventajas es que brinda al
profesional de laboratorio es la cantidad que puede llegar a ser hasta 25 veces mayor que la
preparación directa, otras ventajas son el transporte, el tiempo, la desventaja es que se requieren
heces sin fijar, no se aconseja realizar en muestras diarreicas, no es para larvas, no es para
protozoos, también puede ser utilizado sin realizar el contaje. (Kaminsky). Además esta técnica
ha sido empleada en otros parásitos helmintos encontrándose mayor sensibilidad en
Schistosoma mansoni (SCIELO, 2002).
2
El método de Concentración de Ritchie o formalina - éter, se basa en la concentración de los
quistes y huevos por sedimentación mediante la centrifugación, con la ayuda de formol y éter
para separar y visualizar los elementos parasitarios (Instituto Nacional de Salud), éste método
permite separar las heces en partes que no se mezclan, entre las ventajas del método de Ritchie
es el uso de formalina al 40% el cual actúa como conservador de muestras, desinfectante,
esterilizante y biocida destruyendo en este caso las bacterias. (Proyecto AECID, 2012), otra
ventaja para el personal de laboratorio es que se puede transportar con facilidad con el uso del
conservante hacia el lugar donde se procesen las muestras e incluso por mucho más tiempo.
La técnica del frotis simple, se realiza principalmente para la observación de las formas móviles
de los protozoos intestinales (trofozoitos). La movilidad puede alterarse si la muestra se seca
por lo que su realización debe ser lo más rápida posible una vez obtenida la muestra antes de
los 20 a 30 minutos tras su emisión (Proyecto AECID, 2012). La técnica se basa en la gravidez
que presentan todas las formas parasitarias para sedimentar espontáneamente en un medio
menos denso y adecuado como la solución fisiológica. En este método es posible la detección
de quistes, trofozoítos de protozoarios, huevos y larvas de helmintos (Instituto Nacional de
Salud), ésta técnica permite conocer la intensidad del entero parasitismo y a su vez corroborar
el hallazgo del método directo. (Instituto Nacional de Salud).
En este estudio comparativo de técnicas de laboratorio aplicadas en el diagnóstico
parasitológico presentamos las prevalencias 1%, 21%, 18%, 25,7% correspondiente al frotis
directo, técnica de Sedimentación Simple, Método de Ritchie, y Técnica del Kato-Katz
respectivamente.
3
CAPITULO I
1. E L PROBLEMA
1.1 UBICACIÓN
Recientemente y por primera vez en el mundo se descubrió en el Ecuador la infección en
personas Chachis, del parasito Amphimerus spp, trematodo de vías biliares, los huevos de
Amphimerus miden en un promedio de 31.5 x 13.5 micras, poseen una cubierta engrosada,
opérculo en el polo anterior y un botón en el polo posterior contiene un embrión ciliado con
órganos asimétricos, perteneciente a los trematodos, que pertenece al grupo de los
Helmintos.(J.D. Rodríguez, 1949). Se han encontrado prevalencias significativas para describir
como zonas endémicas a las áreas afectadas. Posteriormente en pobladores de la parroquia
Pedro Pablo Gómez en Jipijapa-Manabí también con prevalencias altas. Además en perros y
gatos de las poblaciones de los Chachis. Estos diagnósticos se realizaron mediante la
observación de los huevos en las heces fecales por el método directo o simple. No se han
realizado estudios posteriores sobre prevalencia, sensibilidad y especificidad de las técnicas
empleadas en la identificación de este parasito. Existen varias técnicas para detectar la presencia
de parásitos en heces, entre ellas la técnica de Kato-Katz que es la técnica recomendada por la
OMS (Proyecto AECID, 2012) para la detección de huevos de helmintos entre otras. El
diagnóstico de infección por Amphimerus spp es al momento por el método directo de frotis,
Existen otras técnicas empleadas como lo son Método de Ritchie, Técnica de sedimentación
simple, a pesar de ello no se conoce la especificidad y sensibilidad en relación a este parásito
debido a que existe escasa evidencia científica en relación a este y a las técnicas de diagnóstico
de referencia por su reciente hallazgo e investigación, en vista a esto es necesario establecer una
técnica de referencia o buscar una técnica que permita obtener un diagnóstico preciso, que
brinde resultados confiables y reproducibles con el fin de establecer valores de sensibilidad y
especificidad del resto de las técnicas mencionadas en este estudio.
4
1.2 JUSTIFICACIÓN
El presente estudio que es comparativo tiene importancia y relevancia al ser realizado en un
parásito que ha sido descubierto recientemente, Amphimerus spp, un parásito trematodo
perteneciente al grupo de los Helmintos, que infecta vías biliares del hígado y causa la
enfermedad llamada Amphimeriasis. Esta infección fue reportada por primera vez en humanos
en el 2011 (Calvopiña M, 2011) al noroeste del Ecuador en la provincia de Esmeraldas en
comunidades Chachis pertenecientes a la reserva ecológica Cotacachi Cayapas con altos
porcentajes de infección. No existe aún una prueba de oro en el diagnóstico de esta parasitosis.
Al momento no existen investigaciones sobre este parásito en humanos a excepción del antes
mencionado y tampoco existen estudios en técnicas diagnósticas en este parásito que determinen
la sensibilidad, especificidad, niveles de confianza y valores estadísticos en general que
recomienden el uso de una técnica específica en el diagnóstico de Amphimeriasis. Por lo cual
es urgente tener un método diagnóstico sensible y específico para ser aplicado y recomendado
a las autoridades sanitarias del país. La técnica del frotis simple fue empleado en el primer
estudio realizado en el Ecuador, reportándose sensibilidad baja. Además, este estudio se
realizará en la zona endémica donde fue descrito por primera vez el parásito y en donde la
prevalencia de infección es del 34%. Esta propuesta es viable, por cuanto esta soportada y
financiada por un proyecto en marcha sobre este parásito desde la Dirección General de
Investigación en Parasitosis (DGIP) de la Universidad Central del Ecuador (UCE). Las técnicas
y observaciones serán realizadas y controladas por expertos en exámenes coproparasitarios del
CBM de la UCE. Este estudio además determinará la prevalencia actual de la infección en la
comunidad objeto de estudio, lo que permitirá el diagnóstico y tratamiento oportuno de las
personas infectadas así como la probable disminución de la transmisión en la comunidad.
5
1.3 OBJETIVOS
1.3.1 Objetivo General
Comparar la técnica de Kato Katz con las técnicas convencionales como lo son el Frotis Simple,
Sedimentación Simple y Método de concentración de Ritchie, en el diagnóstico de la presencia
de huevos de Amphimerus spp, en habitantes de la comunidad Corriente seca, Rio Cayapas-
Esmeraldas.
1.3.2 Objetivos Específicos
Encontrar la prevalencia de infección del parasito Amphimerus spp en la Comunidad
Corriente Seca por las cuatro técnicas a comparar.
Determinar intervalos de confianza, p-value, porcentajes de infección que guíen a la
recomendación de una técnica para el diagnóstico de Amphimeriasis en muestras de
heces fecales de personas.
Recomendar la técnica que brinde mayor prevalencia para el diagnóstico de
Amphimeriasis mediante los resultados estadísticos obtenidos.
Hallar la sensibilidad y especificidad de las técnicas de Kato Katz, Sedimentación
Simple y Concentración de Ritchie en base a la actual técnica utilizada para el
diagnóstico de parasitosis en las casas de salud del Ecuador como lo es el frotis simple
6
CAPITULO II
2.1 MARCO LEGAL
El desarrollo del Proyecto de Investigación de Fin de Carrera, se halla sustentado por las leyes
Ecuatorianas las cuales promueven el desarrollo de la investigación y la adquisición de nuevos
conocimientos. Además, como parte de su función, el Estado asegura el bienestar de sus
pobladores, de tal manera que contempla en sus leyes el incentivo a la promoción de nuevos
conocimientos en beneficio de aquellos (Universidad Central del Ecuador, 2015).
Constitución de la República del Ecuador
Art. 343: El sistema nacional de educación tendrá como finalidad el desarrollo de capacidades
y potencialidades individuales y colectivas de la población, que posibiliten el aprendizaje, y la
generación y utilización de conocimientos, técnicas, saberes, artes y cultura. El sistema tendrá
como centro al sujeto que aprende, y funcionará de manera flexible y dinámica, incluyente,
eficaz y eficiente (Universidad Central del Ecuador, 2015).
Art. 350: El sistema de educación superior tiene como finalidad la formación académica y
profesional con visión científica y humanista; la investigación científica y tecnológica; la
innovación, promoción, desarrollo y difusión de los saberes y las culturas; la construcción de
soluciones para los problemas del país, en relación con los objetivos del régimen de desarrollo.
(Universidad Central del Ecuador, 2015)
Art 360: El sistema garantizará, a través de las instituciones que lo conforman, la promoción
de la salud, prevención y atención integral, familiar y comunitaria, con base en la atención
primaria de salud; articulará los diferentes niveles de atención; y promoverá la
complementariedad con las medicinas ancestrales y alternativas. (Universidad Central del
Ecuador, 2015)
Art. 385: El sistema nacional de ciencia, tecnología, innovación y saberes ancestrales, en el
marco del respeto al ambiente, la naturaleza, la vida, las culturas y la soberanía, tendrá como
finalidad: 1. Generar, adaptar y difundir conocimientos científicos y tecnológicos.
2. Recuperar, fortalecer y potenciar los saberes ancestrales. 3. Desarrollar tecnologías e
innovaciones que impulsen la producción nacional, eleven la eficiencia y productividad,
7
mejoren la calidad de vida y contribuyan a la realización del buen vivir. (Universidad Central
del Ecuador, 2015)
Leyes de la Universidad Central del Ecuador
El estatuto de la Universidad Central del Ecuador también contempla y ampara la realización
del Proyecto de Investigación de Fin de Carrera, como medio para fomentar la investigación
científica y como requisito para la obtención del título al que aspira el estudiante al finalizar la
carrera. (Universidad Central del Ecuador, 2015).
La Ley Orgánica de Educación Superior establece como Derechos de las y los estudiantes,
acceder, movilizarse, permanecer, egresar y titularse sin discriminación conforme sus méritos
académicos (Universidad Central del Ecuador, 2015)
Art. 212: El trabajo de graduación o titulación constituye un requisito obligatorio para la
obtención del título o grado para cualquiera de los niveles de formación. Dichos trabajos pueden
ser estructurados de manera independiente o como consecuencia de un seminario de fin de
carrera. Para la obtención del grado académico de licenciado o del título profesional
universitario de pre o posgrado, el estudiante debe realizar y defender un proyecto de
investigación conducente a una propuesta que resolverá un problema o situación práctica, con
característica de viabilidad, rentabilidad y originalidad en los aspectos de aplicación, recursos,
tiempos y resultados esperados. (Universidad Central del Ecuador, 2015)
Universidad Central del Ecuador – Centro de Biomedicina.
2.1.1 Misión y Visión
El Centro de Biomedicina (CBM) se define como un organismo autónomo, sin fines de lucro y
de utilidad pública, creado en el marco legal de la UCE. La estructura orgánica del CBM lidera
en la perspectiva del desarrollo nacional, el estudio de los principales problemas de salud –
enfermedad del país como una actividad multidisciplinaria, socialmente organizada y
sistematizada de los procesos científicos y tecnológicos inherentes.
La producción científica del CBM se encuentra articulada a la incorporación e innovación de
procesos tecnológicos imprescindibles para el desarrollo y transformación de la realidad
ecuatoriana.
8
2.2 MARCO TEÓRICO
2.2.1 RESEÑA HISTÓRICA DE AMPHIMERUS
Este trematodo fue descubierto originalmente en un gato en Nebraska, USA y fue diferenciado
el género Amphimerus del género Opisthorchis y se transfirió la especie pseudofelineus al nuevo
género, además de la descripción original de los hallazgos en Nebraska, Amphimerus
pseudofelineus ha sido descrito en gatos de Illinois, Michigan y experimentalmente en gatos de
Manitoba, Canadá. Las infecciones en humanos por Opisthorchis guyaquilensis en el Ecuador,
más tarde fueron identificadas como Amphimerus psuedofelineus. Miyazaki en 1991 estadificó
que acerca de 10 especies han sido encontradas en América y que todos son potencialmente
infectantes para humanos y en una manera similar puede ser que todas sean capaces de contraer
la infección por gatos. (WARD 1911).
En Korea, Issiki en 1984, reportó por primera vez un parásito trematodo en un pato. Se analizó
un total de 105especímenes, encontrándose 4 especies de trematodos localizados en los
conductos biliares, en este estudio también se realiza la descripción del parasito adulto y no se
puede realizar la descripción del huevo debido a la ausencia de este. Se encontró una especie de
Amphimerus en el hospedero que fue clasificado como Amphimerus anatis, este fue descrito por
primera vez por Yamaguti en 1933 como opisthorchis anatis, más tarde este fue corregido y
clasificado en el género Amphimerus que se diferencia del género Opistorchis por la
interrupción de la vitelaria a nivel del ovario (Kee-Seon Eom, 1984).
En el año de 1962 y 1972 se reportó el hallazgo de Clonorchis sinensis en Guayaquil - Ecuador
por Alvarez Crespo quien reconoció este parásito en muestras de heces y contenido duodenal
de inmigrantes Asiáticos (DÍAZ, GALARZA, 1985).
En 1947, en el Instituto Nacional de Higiene “Leopoldo Izquieta Pérez” de Guayaquil fueron
observados huevos operculados en heces fecales de rutina por J.D. Rodríguez y su equipo y
realizaron la siguiente descripción; Los huevos medían de 27 a 35 micras de largo y 11 a17
micras de ancho un promedio de 31.5 x 13.5 micras.
9
La cubierta era engrosada, el opérculo localizado en el polo anterior y un botón en el polo
posterior contiene un embrión ciliado con órganos asimétricos, el cual tenía una semejanza a
los trematodos Opistorchidae y Heterophidae, el problema radico que ninguna de las dos
especies eran autóctonas del país y ni siquiera del continente, es por ello que se eliminó la idea
de que perteneciera a los Helmintos-Neohelmintos, debido a que estos no tienen huevos
operculados.
Tampoco se los pudo clasificar en los platelmintos o cestodos debido al tamaño ya que estos
tienen huevos operculados pero son mucho más grandes, que no tienen su fase en miracidio
durante el ciclo vital, de acuerdo al tipo de reproducción y características en conjunto fue
localizado en el grupo de los trematodos digenéticos en el orden prosomata, suborden Distomata
debido al alojamiento del parásito en el huésped.
Cuatro meses después se recibe otro paciente enfermo del mismo sitio de origen y es por ello
que se decide investigar la comunidad de estos dos pacientes con el objetivo de descubrir un
foco infeccioso, un sitio endémico para lo cual en la comunidad de Pedro Pablo Gómez y sus
alrededores se receptan 245 muestras y se observó una incidencia generalizada del 7,3% lo que
representa 18 personas positivas para éste parásito.
El equipo realizó la investigación del ciclo vital de este parásito mediante la observación de las
condiciones que esta comunidad cumplía para este parásito, recogieron peces, crustáceos,
moluscos, caracoles, camarones y fueron analizados al igual que lo fueron algunos animales
domésticos como perros y cerdos encontrándose la presencia del parásito en algunas especies
de peces, camarones y también en perros, en base a los hallazgos se realizó una descripción de
la estructura y de acuerdo a los hallazgos se definió a este como Opistorchis (J.D. Rodríguez,
1949).
En esta investigación se mencionaron 7 especies de Amphimerus de América Latina como lo
son Amphimerus guayaquilensis, en perros en el Ecuador por Rodríguez, Gomez Lince, y
Montalvan, la misma especie fue también reportada en gatos en Panamá por Caballero, Grocott
y Zerecero.
10
Amphimerus pricei en la zarigüeya de cuatro ojos en Panamá por Calero, Ortiz, y De Sousa en
1955, Amphimerus caudalitestis en el zorro de agua en 1953 por Caballero et al, Amphimerus
neotropicalis descrita por Caballero y montero Gei en la Zarigueya de 4 ojos en Costa Rica en
1963,Amphimerus pseudofelineus minutus en la zarigüeya común por Artigas y Pérez en
1964,Amphimerus lancea por Barker en un delfín de Brasil en 1911 Amphimerus parcivatus
descrito por Ñegrao de Sousa Franco en la Zarigueya común en Brasil en 1967 (VERNON,
1970).
En Venezuela en los alrededores de Maracay se realizaron estudios en material procedente de
gatos necropsiados, 2 de los trece gatos se encontraron parasitados por Amphimerus
pseudofelineus clasificados así de acuerdo a la estructura, los mismos que fueron comparados
con Opistorchis, este fue el primer hallazgo en centro y sur América (H.Mayaudon, 1969-1970).
En Louisiana, fue realizado un estudio sobre helmintos en aves acuáticas, se analizaron hígados
de los ejemplares y se encontró que unos de estos estaba plagado de trematodos en el interior,
se procesó histotecnológicamente al hígado con todo el contenido y se observó en el
microscopio huevos operculados en la disección de los gusanos, se determinó a este parásito
como Amphimerus elongatus, se observó hiperplasia de las paredes de los conductos biliares,
hepatocitos cariolíticos, descamación completa de los conductos, fibrosis, inflamación con
presencia de eosinófilos y linfocitos, tejido graso en degeneración y atrofia en el centro del
lóbulo lo que ocasiona una disminución de la función hepática y posiblemente la muerte del
hospedero. (Childs, July 1972).
Más tarde, Adolfo Varas explica que (Opistorchis) Amphimerus guayaquilensis fue descubierto
en este país por el Dr. Luis Fernando Gómez Lince, José Rodríguez, Juan Antonio Montalván
en 1947, y a su vez reporta un caso mediante la realización de un examen de heces en el cual
observó huevos operculados en una paciente de Guayaquil que adolecía decolecistitis aguda con
ictericia. Comenta al respecto que se habían observado tanto en Guayaquil como en Quito
mediante examen directo en pacientes procedentes del Asia que vinieron al país después de la
segunda guerra mundial, pacientes atacados de clonorchiasis.
11
Se describe a la vez que este pequeño trematodo produce hiperplasia de las paredes de los
conductos biliares y a veces adenocarcinomas del hígado (Calderón, 1980)
En el estado de Minas Gerais en Brasil Se analizaron roedores que vivieron atrapados o
enjaulados, se les practicó eutanasia y necropsia se diseccionaron hígado, conductos biliares y
vesícula después del procesamiento correspondiente de tejidos se observó al microscopio, de
acuerdo a las características de su estructura, forma y tamaño se lo clasificó como Amphimerus
bragai, comparándolos con Amphimerus lancea, Amphimerus vallecaucensis, se realizó una
comparación minuciosa de éstas especies y definiéndola a esta como propia de roedores.
(Antonio HA de Moraes Neto, 1998)
En el 2003 se encontraron 13 individuos de la comunidad Chachi al Norte de Esmeraldas, los
mismos que al realizarles el examen de heces se observaron huevos con características
compatibles con Opistorchis guayaquilensis o Amphimerus pseudofelineus, relata en el
presente estudio que esta infección principalmente se da en personas de origen asiático, a su vez
se halla también en áreas lacuestres, cuencas de algunos ríos de la Ex Unión Soviética y algunos
focos menores en Europa Oriental, Meridional y Central. (Juan Moreira, 2008)
Actualmente la validez de la denominación Opisthorchis guayaquilensis es sujeto de
controversia. Algunos autores señalan que éste parásito es sinónimo de Amphimerus
pseudofelineus descrito en 1911 por Barker. (WARD 1911) También Artigas y Pérez en 1964
consideraron a Amphimerus pricei y Amphimerus guayaquilensis como sinónimo de
Amphimerus pseudofelineus. (Rodríguez, 2007) (VERNON, 1970)
En 1971, Yamaguti sugirió que un parásito ya se ha informado en el Ecuador como en el hecho
de O. guayaquilensis Podría ser Amphimerus spp. Posteriormente, publicaciones referidas a este
parásito como A. guayaquilensis; Sin embargo, la exactitud de reclasificación no está claro. El
análisis molecular podría ayudar a aclarar las ambigüedades en la identificación de género /
especie de O. guayaquilensis y las especies congéneres de Amphimerus spp. (Calvopiña M,
2011)
12
En el 2009 debido a la positividad de diagnósticos para huevos Opistorchiidae en muestras
fecales de 3 personas indígenas Chachis, se llevó a cabo un estudio en todos los habitantes
voluntarios de esas comunidades a orillas del Río Cayapas, se recogieron 297 muestras las
mismas que fueron transportadas al CBM y procesadas mediante el método de formalina-éter,
además 120 muestras pertenecientes a afroamericanos se procesaron simultáneamente, en 4
personas Chachis portadoras de este parásito.
Se realizaron duodenoscopías para analizar el líquido biliar y se observaron microscópicamente
huevos similares a los hallados en las muestras fecales de estas personas, los resultados fueron
de 24% de positividad en estas comunidades Chachis y las personas afroamericanas en su
totalidad fueron negativas, se realizaron minuciosos análisis en la estructura del parasito
encontrado y en base al tamaño, la forma del parasito adulto, los tamaños de las ventosas oral y
ventral, la forma del huevo la presencia del botón, el opérculo se determinó como perteneciente
al género Amphimerus spp.
Este estudió demostró que la infección por este parásito puede afectar a humanos debido a que
también se analizaron hígados de animales domésticos y los hallazgos fueron similares a los
hallados en humanos.(Calvopiña M, 2011).
En el 2012, 89 de 109 habitantes de comunidades Chachis participaron en este estudio, en el
cual también se colectaron muestras fecales de 14 gatos y 31 perros con el propósito de hallar
parásitos como Amphimerus spp. Después de los estudios pertinentes realizados.
Se encontró una Amphimeriais en 71.4% de los gatos, 38.7% en perros, por lo cual se concluyó
que estos animales no solo eran un reservorio de este parásito sino también hospederos
definitivos para el mismo, lo cual se define como una enfermedad zoonótica, es por ello que
investigadores recomiendan una implementación de un programa de tratamiento y control tanto
en humanos como en animales para minimizar la transmisión de ésta infección parasitaria
hepática. (Calvopiña Manuel, 2015).
13
2.2.2 UBICACIÓN DE AMPHIMERUS SPP EN LA CLASIFICACIÓN DE
PARÁSITOS
Ilustración 1 Clasificación de los Parásitos
Fuente:http://www.fbioyf.unr.edu.ar/evirtual/pluginfile.php/125853/mod_resource/content/4/Parasitos%20P
rotozoos%20%20Microbiologia%20de%20Farmacia.pdf
Elaborado por: Fernanda Díaz
14
Ilustración 2 Clasificación de Trematodos
Fuente: http://www.fcnym.unlp.edu.ar/catedras/parasitologia_general/pdf/TP9.pdf Elaborado por: Fernanda Díaz
Ilustración 3 Clasificación de Trematodos de acuerdo a la localización en el huésped
Fuente: http://www.uprm.edu/biology/profs/bunkley/lab5.htm
Elaborado por: Fernanda Díaz
15
Ilustración 4 Clasificación de trematodos, Amphimerus no descrito
Fuente: Botero David, Restrepo Marcos (2005). Parasitosis humanas. Medellín , Colombia : Corporación para
investigaciones Biológicas 4 ta edición.
Consultada por: Fernanda Díaz
2.2.3 DISTIBUCION GEOGRÁFICA DEL PARÁSITO AMPHIMERUS
1. Amphimerus guayaquilensis (Rodríguez, Gomez Lince, y Montalvan, 1949) en perros en el
Ecuador. (WARD 1911).
2. Amphimerus guayaquilensis(Caballero, Groccott, y Zerecero en 1953), en gatos y zarigüeya
común en Panamá. (WARD 1911).
3. Amphimerus guayaquilensis (Calero, Ortiz y De Sousa en 1955) (WARD 1911).
4. Amphimerus pricei (Foster en 1939). De la Zarigüeya peluda en Panamá (WARD 1911).
16
5. Amphimerus caudalitestis (Caballero, Groccott, y Zerecero en 1953), en Zarigüeya de agua
en Panamá y Colombia. (WARD 1911).
6. Amphimerus neotropicalis fue descrito por Caballero, Montero Gei, Caballero, 1963 en Costa
Rica y Colombia (WARD 1911).
7. Amphimerus pseudofelineus (Artigas y Pérez en 1964) de la Zarigüeya común en Brasil
(WARD 1911).
8. Amphimerus Lancea (Diesting en 1850) delpin en Brazil, e India Yamaguti (1971) (WARD
1911).
9. Amphimerus parcivatus (Ñegrao de Sousa Franco en 1967) en la Zarigüeya común en
Brasil(WARD 1911).
10. Amphimerus minimus en Colombia Yamaguti (1971) (WARD 1911).
11. Amphimerus Pseudofelineus minutus en Brasil, Yamaguti (1971) (WARD 1911)
12. Amphimerus anatis en Korea, Issiki lo describió por primera vez en 1934 (Kee-Seon
Eom, 1984)
17
DISTRIBUCIÓN GEOGRÁFICA DEL PARÁSITO AMPHIMERUS.
Fuente: tomado de la Reseña Histórica del presente trabajo Elaborado por: Fernanda Díaz
Ilustración 5 Distribución Geográfica de las especies de Amphimerus
18
2.2.4 AMPHIMERUS
2.2.4.1 DEFINICIÓN AMPHIMERUS
Etimología: Amphi = en ambos lados y merus = parte (en referencia a la ruptura de la
Vitellaria), junto con la pseudo = false y felineus = gato de acogida, (WARD 1911)(Dwigth D.
Bowman, 2002).
2.2.4.2 CICLO VITAL
Ilustración 6 ciclo vital de Clonorchis y Opistorchis (CDC)
Fuente:https://www.google.com.ec/search?q=ciclo+vital+de+clonorchis+sinensis&source=lnms&tbm=isch&sa=X&ved=0ahUKEwjbornP2I3PAhXJej4KHWVLBvkQ_AUICCgB&biw=1821&bih=882&dpr=0.75#imgrc=USwMZmxIjAG8AM%3ª Consultado por: Fernanda Díaz
2.2.4.2.1 DESCRIPCIÓN DEL CICLO DE VIDA
No existe descripción del ciclo de vida de Amphimerus spp, por cuanto y siendo de la misma
familia Opisthorchiidae en donde se encuentran Clonorchis sinensis y Opisthorchis spp, se
describe el ciclo vital de los mencionados anteriormente.
19
Huevos: estos huevos embrionados que generalmente son depositados en heces a las orillas de
los ríos rompen su membrana para penetrar en ciertos caracoles en donde continúan su ciclo de
vida.
Miracidio: avanza a esta fase cuando es liberado del huevo embrionado y penetra en estado de
miracidio algunas especies de caracoles.
Sporocysto: esta fase continúa después del miracidio y se lleva a cabo dentro del caracol cuando
culmino la etapa de penetración en el mismo.
Redia: se transforma a redia al finalizar la fase de Sporocysto cuando comienza a cambiar a la
forma alargada dentro del caracol.
Cercaría: finalmente después de la fase de redia continua alargando su tamaño dentro del caracol
da lugar a esta fase y es la última fase que se lleva a cabo dentro del caracol y se encuentra lista
para salir.
Cercaría libre: esta se encuentra libre en el agua y está lista para ser enquistada en los peces o
en algunos camarones.
Metacercaria: que están localizadas en la piel o músculo de algunas especies de peces o
camarones estas listas para ser ingeridas y avanzar en su ciclo ya sea por animales o personas
cuando estos peces no son cocidos correctamente o son ingeridos crudos, después de pasar por
el estómago llega al duodeno donde se produce una enquistación.
Adulto: después de la enquistación se alberga en los conductos biliares, donde dos meses
después finalmente se convierte en parásito adulto donde ya pueden ocasionar cuadros de
ictericia obstructiva, existen otros hospederos definitivos, además del ser humano, son los
perros, gatos, cerdos, ratas, entre otras. .Los parásitos adultos miden de 10 a25mm por3 a 5 mm,
reside en los conductos biliares pequeños y medianos. (Juan Moreira, 2008).
Además delos humanos, los animales carnívoros pueden servir como huéspedes y reservorios
de este parásito.
20
2.2.4.3 ESTRUCTURA Y CARACTERÍSTICAS
2.2.4.3.1 DESCRIPCIÓN DE CADA ESTADIO
Huevo: Los huevos son de color amarillo, son el resultado de la única fase de reproducción
sexual, tiene la forma ovoide y alargada, las medidas varían desde 28 µm a 33 µm de largo y
de 12um a 15 µm de ancho, cuentan con un opérculo (Calvopiña Manuel, 2015).
Ilustración 7 huevo de Amphimerus spp estructura
Fuente: Imagen tomada de hallazgos del proyecto
Elaborado por: Fernanda Díaz
Su estructura consta de un opérculo (operculum) y las protuberancias del opérculo (shoulders),
los cuales no son prominentes, ocasionalmente se observa una pequeña proyección pero con
mayor frecuencia se observa una espina curvada al final del opérculo. (Calvopiña Manuel, 2015)
Normalmente los huevos pasan al lumen intestinal del hospedador por el poro genital y desde
el intestino salen al exterior con las heces del hospedador. Los huevos de los trematodos
consisten en el embrión rodeado de la cáscara o cápsula. Son típicamente operculados, y puede
salir del útero ya embrionado (incluso en algunas especies pueden eclosionar dentro del útero)
o bien la embriogénesis puede producirse en el medio. En este último caso factores como el pH
21
del medio, la temperatura y el tenor de oxígeno influencian fuertemente la
embriogénesis.(Universidad de la Plata, 2015)
Miracidio: estructura interna de los huevos, este se encuentra completamente desarrollado
cuando los huevos salen del gusano.
Esta larva es pequeña, piriforme, alargada y cubierta de láminas epidérmicas ciliadas.
Normalmente presenta una variedad de receptores y terminaciones sensoriales que incluyen
fotoreceptores, quimiorreceptores y receptores de corriente. En el extremo anterior posee una
papila apical móvil, que se invagina durante el proceso de penetración, funcionando como una
copa suctora en la que se vierte la secreción de una glándula apical que se encuentra en el
parénquima. Hay miracidios que eclosionan en el medio (acuático) y tienen una corta vida libre,
de algunas horas, hasta encontrar al molusco apropiado que servirá como próximo hospedador.
La secreción de la glándula apical colabora en la disolución de los tejidos del molusco durante
el proceso de penetración. En muchas especies el miracidio no eclosiona hasta que es ingerido
por el caracol apropiado, después de lo cual penetran la pared del intestino de este último (en
ciclos terrestres y en algunos ciclos acuáticos). El miracidio lleva en su parte posterior las
células germinales que persistirán en el siguiente estadio para iniciar la reproducción asexual.
(Universidad de la Plata, 2015)
Esporocistos y redias: estos se desarrollan dentro del caracol del género bithynia.
Esporoquiste: Dentro del molusco el miracidio pierde su epidermis ciliada, adquiere un nuevo
tegumento con microvellosidades y se transforma en esporoquiste. El esporoquiste carece de
boca y de sistema digestivo, y absorbe los nutrientes a través del tegumento. Usualmente se lo
encuentra cerca del sitio de penetración (pie, antena, branquia) pero puede estar en cualquier
tejido, dependiendo de la especie. Algunos pueden extenderse notablemente e incluso
ramificarse. Dentro del esporoquiste hay células germinales que incrementan su número
mediante sucesivas divisiones mitóticas y se transforman en esferas germinales, cada una de las
cuales aumenta su tamaño y se diferencia dando lugar a la siguiente generación larvaria. Según
las especies, esta generación puede ser de nuevos esporoquistes (llamados esporoquistes hijos),
de redias o incluso directamente de cercarias.(Universidad de la Plata, 2015)
22
Redia
Es un organismo alargado con un sistema digestivo incompleto con boca, una faringe musculosa
y un intestino ciego. Pueden tener dos o cuatro apéndices (procesos ambulacrales), y usualmente
migran hacia la gónada o hepatopáncreas del molusco hospedador. Las redias se alimentan
activamente de células del hospedador, por ello el daño causado a sus hospedadores es mayor
que el originado por los esporoquistes. Como en el esporoquiste, ciertas células germinales de
la cámara de incubación de la redia dan lugar al cuarto estadio larvario que recibe el nombre de
cercaria. Algunas especies no poseen redias en su ciclo de vida.(Universidad de la Plata, 2015)
Cercarias: son las formas larvarias que entran al segundo huésped intermediario, abandonan
las redias maduras antes que estas maduren y dos meses después salen del caracol, viajan por el
agua hasta las escamas del pez miden de 132 a 172 um de largo por 41 a 48um de ancho, su
cola es de 400 a 500 um de largo.
La cercaria es el estado juvenil del parásito. Este estadio no sufre reproducción asexual, es decir
que de una cercaria se originará luego un adulto. Es un estadio normalmente libre y móvil, que
sale del molusco hospedador y presenta según las especies diferentes estrategias de dispersión
y diferentes adaptaciones para acceder al siguiente hospedador, ya sea el definitivo u otro
intermediario. Algunas son organismos libres que nadan en busca del siguiente hospedador.
Otras pueden enquistarse en diferentes sustratos o formar quistes flotantes para ser consumidas
por el siguiente hospedador. En algunos casos, de ciclos terrestres, pueden enquistarse en la
huella de mucus dejada por el caracol. En otros casos las cercarias no abandonan al molusco, y
permanecen dentro del mismo, incluso a veces dentro de la redia o el esporoquiste que las
originó.(Universidad de la Plata, 2015)
Metacercarias: desenquistan en el duodeno los gusanos migran por la ampolla de váter y vías
biliares, éstas son puntiformes y ovoides de 2mm de longitud por 0,30 o 0.40mm de ancho,
presentan un tegumento espinoso, se encuentra la faringe a lo largo del esófago y el intestino
está ramificado en sus extremos posterior ovarios y testículos ovales y lobulares.
La metacercaria es un organismo intermedio entre la cercaria y el adulto. Este estadio está
ausente en la familia Schistosomatidae. La metacercaria puede estar enquistada (en la mayoría
de los casos) o no. La mayoría se encuentran sobre o dentro de un hospedador intermediario,
23
aunque algunas especies se enquistan en sustratos inertes. El primer paso del enquistamiento es
la pérdida de la cola de la cercaria. La formación del quiste es más compleja en las especies que
se enquistan en el medio. Aquellas que se enquistan en otro hospedador usualmente presentan
quistes más finos y de estructura más simple.(Universidad de la Plata, 2015)
Parásito Adulto
Ilustración 8 Estructura de Amphimerus adulto
Fuente: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4315407/ Elaborado por: Fernanda Díaz
2.2.4.4 PRESENTACIÓN CLÍNICA Y PATOGENIA EN ANIMALES
( Clonorchis sinensis y Opistorchis)
Infección de los gatos pueden dar lugar a cirrosis grave del hígado, En los casos crónicos del
hígado se puede ampliar con una superficie que aparece granular. Secciones de corte del hígado
fibrótico aparecen con un moteado amarillo-marrón clara. Los conductos biliares más grandes
pueden contener un exudado de color marrón oscuro. Epitelio del conducto biliar se vuelve más
gruesa y fibrosa. Los signos clínicos reflejan la progresión en disfunción el hígado con
24
anorexia, pérdida de peso, diarrea, vómitos periódicos, e ictericia, con hepatomegalia
inicialmente, entonces microhepatía.(WARD 1911)
2.2.4.5 TRATAMIENTO EN HUMANOS El praziquantel (Calvopiña Manuel, 2015)
2.2.4.6 EPIZOOTIOLOGÍA: Los gatos no son los únicos anfitriones de este
parásito. También se ha informado de los coyotes en los EE.UU. y como Opisthorchis
guayaquilensis en perros en Ecuador y en gatos y zarigüeyas, Didelphis marsupialis en
Panamá. Una especie relacionada a Amphimerus lancea, ha informado de marsopas de agua
dulce en aguas brasileñas. (WARD 1911).
Las infecciones causadas por Anphimerus provocan enormes daños en quienes llegan a ser sus
hospederos definitivos principalmente en los conductos biliares, la infección causada por este
parasito en las regiones rurales y cercanas a zonas tropicales y subtropicales, como es el caso
de la comunidad esmeraldeña Corriente seca.
2.2.4.7 PELIGRO PARA OTROS ANIMALES: No se conocen.
2.2.4.8 PELIGRO PARA HUMANOS: Ha habido registros de infecciones humanas con este
parásito en Ecuador donde se encontraron 4% de los seres humanos y el 3% de los perros en un
pueblo de infectarse.(Rodríguez, 2007). Se cree que las infecciones se obtuvieron por la
ingestión de pescado crudo.
2.2.4.9 CONTROL Y PREVENCIÓN: evitar la ingestión de camarones y peces crudos o mal
cocidos, debido a que son la fuente de contagio de Amphimerus spp por poseer cercarias del
mismo que pueden desarrollar a parásitos adultos en los conductos biliares.(Calvopiña Manuel,
2015) (Juan Moreira, 2008)
25
2.2.5 DESCRIPCIÓN DEL SITIO DE INVESTIGACIÓN
2.2.5.1 UBICACIÓN GEOGRÁFICA
Ilustración 9 Mapa geográfico de la Comunidad Corriente Seca (Esmeraldas)
Fuente:http://app.sni.gob.ec/snilink/sni/PDOT/ZONA1/NIVEL_DEL_PDT_PROVINCIAL/INFORMACION_GAD/01
%20GOBIERNO%20PROVINCIAL
Consultado por: Fernanda Díaz
26
2.2.6 GRUPO ÉTNICO CHACHI
2.2.6.1 UBICACIÓN: Provincia de Esmeraldas.
Ilustración 10 Ubicación Geográfica de Esmeraldas (Esmeraldas Provincia Verde, 2012)
Fuente: http://esprovinciaverde.blogspot.com/2012/12/ubicacion-geografica.html Consultado por: Fernanda Díaz 6 Febrero 2016
Geográficamente se halla ubicada en latitud Norte, Longitud occidental, al noroccidente del
Ecuador. (Esmeraldas Provincia Verde, 2012)
27
Extensión: 15954km2
Límites
Norte: Colombia, Río Mataje
Sur: Santo Domingo de los Tsáchilas, Carchi e Imbabura.
Oeste: Océano Pacífico
2.2.6.2 LENGUA ETNIA CHACHI: CHA PALAA (Chapalache).
2.2.6.3 ORIGEN: de acuerdo a la tradición son originarios de la provincia de Imbabura de
donde salieron a causa de la conquista incásica y española hasta ubicarse en el sitio actual.
Ilustración 11 Vivienda Chachi
Fuente: Imagen capturada por Fernanda Díaz Elaborado por: Fernanda Díaz.
2.2.6.4 TERRITORIO: Poseen una extensión territorial de 115.000 hectáreas.
2.2.6.5 POBLACIÓN: esta población es de aproximadamente de 8.000 a 10.000 habitantes
organizados en 29 centros en tres zonas bien marcadas en el norte, centro y sur de la provincia
28
de Esmeraldas, siete centros comparten territorio con la población afro ecuatoriana. (Lincango,
2013)
2.2.6.6 VESTIMENTA: el vestido que acostumbra la gran mayoría de hombres y mujeres es
de tipo occidental y no se diferencia significativamente del usado por los campesinos
esmeraldeños, unos pocos hombres de edad avanzada utilizan todavía el camisón tradicional,
largo hasta las rodillas, combinado con pantalón y botas de caucho o zapatos, contadas mujeres
llevan una falda de color brillante, el torso desnudo y collares de chaquira. (Lincango, 2013).
2.2.6.7 CULTURA: ancestralmente la base de la organización social fue la familia ampliada y
estaba constituida por la unión de varias familias nucleares sobre la base alianzas matrimoniales
de carácter endogámico, la pareja conyugal es formada a edad temprana, los varones se casan
aproximadamente a los 17 o 18 y las muchachas a los 15, como norma general, al ser recién
casados adoptan la residencia patrilocal que generalmente es en la casa del padre del marido, en
el momento de que los esposos están en condiciones de construir una vivienda propia, de llevar
una vida familiar autónoma, entonces la residencia se convierte en monolocal, los novios
generalmente contraen matrimonio civil, eclesiástico y tradicional, este último de acuerdo a las
leyes de la comunidad es permitido solo entre personas de la misma etnia, están a riesgo de
sanciones que van desde el castigo físico (cepo y azotes), a pérdida de derechos comunales,
continúa en vigencia la autoridad tradicional es el Uñi Chaitarucula de los valores y normas
éticas, ejerce el orden local y la autoridad y vigila el cumplimiento de la “ley tradicional oral”.
(Lincango, 2013)
2.2.6.8 ECONOMÍA: Se dedican a la caza, pesca, recolección de frutos silvestres comestibles
y a la fabricación de artesanías. (Lincango, 2013)
2.2.6.9 GASTRONOMÍA: desde su ancestro la base de las comidas y bebidas con que se
alimentan a diario es de la pesca y caza, plátano, arroz, yuca, maíz y frutas cítricas. (Lincango,
2013)
29
Ilustración 12 Gastronomía Chachi
Fuente: Proyecto Amphimerus 2015 Elaborado por: Daniel Romero Agosto 2015
2.2.6.10 SITUACIÓN ACTUAL
Se dedican a la fabricación y confección de las artesanías en las que participan mujeres, jóvenes
y niños para lo cual posee un centro adecuado donde se reúnen los jóvenes y niños, se reúnen a
elaborar las artesanías comprendidas en tejido de lana, cestería paja toquilla, rampira
(carludovica Palmata) (Terraincógnita, 2000) y piquigua, labranza, lanzas, bisutería y pintura
facial. (Lincango, 2013).
2.2.6.11 ECOSISTEMA DE LA REGIÓN: En el extremo noroccidental de Ecuador, culturas
con raíces que abarcan todo el planeta se reúnen en medio de bosques, ríos y mar. Este curioso
nexo de pueblos y ecosistemas es la esencia de la provincia de Esmeraldas y de la atracción que
esta ejerce sobre sus visitantes. Los primeros españoles que tocaron suelo ecuatoriano lo
hicieron por la costa pacífica en 1526, precisamente en las playas de esta provincia. Aunque
actualmente Esmeraldas posee muy pocas esmeraldas, al menos si hace honor a su epíteto de
“provincia verde”. La más septentrional de las provincias costeras, es también la más exuberante
al estar cubierta de estuarios, manglares y bosques tropicales anegados. Sus salvajes y remotas
tierras interiores, sólo accesibles en canoas. (Esmeraldas Provincia Verde, 2012).
30
2.2.7 COMUNIDAD CORRIENTE SECA
Ubicada en la provincia de Esmeraldas en el Cantón Borbón a orillas del río Cayapas al noroeste
del Ecuador, en el Cantón Eloy Alfaro en la Parroquia Borbón. (Esmeraldas Provincia Verde,
2012).La población de la comunidad Corriente Seca está conformada por 27 familias que
habitan en 20 casas que conforman la comunidad.
Ilustración 13 Comunidad Corriente Seca
Fuente: imagen tomada con la cámara de Fernanda Díaz por Manuel Calvopiña Elaborado por: Fernanda Díaz
2.2.7.1 POBLACIÓN: Comunidad Corriente Seca
Tabla 1 Población Corriente Seca
Fuente: CECOMET-Esmeraldas (Cintia Caicedo, 2015) Elaborado por: Fernanda Díaz
31
2.2.7.2 ACCESO A LA COMUNIDAD
Ilustración 14Ruta desde Quito hasta Borbón
Fuente: http://ec.rutadistancia.com/distancia-entre-quito-a-borbon (Mapa Ecuador Rutas, 2016) Consultado por: Fernanda Díaz
32
El acceso a la comunidad desde la ciudad de Quito se realiza por vía terrestre hasta el Cantón
Borbón al Noroeste en la provincia de Esmeraldas a lo largo de la vía Panamericana Avanzando
desde Quito a Puembo, Cayambe Otavalo, Cotacachi, Atuntaqui, Ibarra, Urcuqui, Parroquia de
Tumbabiro, Cahuasquí, Alto Tambo, Pulún a través de la Transversal Fronteriza, hasta El Pailón
y se toma la vía Troncal del Pacífico hasta Borbón. La distancia desde Quito a Borbón es de
310km, y un tiempo estimado de 5 horas.(Mapa Ecuador Rutas, 2016). El transporte mediante
cooperativa privada llega a costar 14 dólares.
Para fines de este Proyecto salimos un grupo conformado por Dr. Hiromu Sugiyama, Dr.
Manuel Calvopiña PhD, Dr. William Cevallos PhD, Dr. Daniel Romero, Fernanda Díaz, de la
ciudad de quito a las 3:00am en transporte privado, contratado por el CBM, llegamos a las8:00
am al Cantón Borbón, en el mismo que realizamos un transbordo en canoa y a lo largo del Río
Cayapas nos dirigimos a la comunidad San Miguel ubicada a 3 horas y media desde borbón, el
costo de la lancha por persona es de 5 dólares, es allí donde fue el lugar de hospedaje y sitio de
trabajo para el procesamiento de muestras, en dicha comunidad realizamos el hospedaje en un
hotel que mantiene un servicio comunitario todo el tiempo, los costos del alojamiento varían
de acuerdo al menú del día en cada servicio, Desde la Comunidad San Miguel continuando el
trayecto del Río Cayapas mediante una lancha al cabo de 20 a 30 minutos se llega a la
Comunidad Corriente Seca que es el sitio de investigación de este Proyecto.
2.2.7.3 CONTACTO
El contacto directo con la comunidad fue realizado mediante la señora Corina Estupiñan,
encargada de la administración de las comunidades negras y chachis del alto Cayapas.
2.2.7.4 SOCIALIZACIÓN CON LA COMUNIDAD
La socialización con la comunidad Corriente Seca se realizó en la misma comunidad con la
presencia de los habitantes, el guía turista Gerson quién mantiene contacto a los miembros de
la comunidad, se contó con la presencia del Dr. Hiromu Sugiyama, Dr. Manuel Calvopiña, Dr.
William Cevallos, Dr. Daniel Romero y Fernanda Díaz, para la comunicación y explicación del
proyecto con la comunidad, más tarde se contó con la ayuda del profesor de la escuela de la
comunidad para la traducción debido al idioma autóctono el Chapalaache de los habitantes
Chachis, se realizó una presentación por parte del equipo de trabajo, explicando quienes somos
y porque estábamos allí, cabe recalcar que ellos ya nos esperaban, se dio a conocer los objetivos
33
de proyecto, así también la importancia del parásito Amphimerus spp en esta comunidad su ciclo
de vida y el posible contagio que puede poseer esta comunidad debido al ambiente y las
condiciones de alimentación que manejan allí. Finalmente, se explicó las etapas de este trabajo,
las indicaciones para la recolección de la muestra, así como también se repartieron los frascos
estériles para la recolección de muestras fecales.
Ilustración 15 Socialización con la Comunidad Corriente Seca
Fuente: imagen capturada por Fernanda Díaz durante el Proyecto Elaborado por: Fernanda Díaz.
Durante la Socialización con la comunidad se realizó una serie de preguntas a la comunidad en
general a través del traductor de acuerdo a:
Que es lo que con mayor frecuencia incluyen en su dieta alimentaria?
34
Los habitantes de la comunidad en general respondieron que incluyen en su alimentación
cotidiana principalmente el pescado, la yuca, verde, chontacuros, etc.
En cuanto al modo de cocción explican las amas de casa acostumbran a ahumar las carnes, el
pescado y que está listo para servirse, lo cual es una característica nativa de los Chachis.
Cómo realizan la eliminación de excretas?
La población responde que la eliminación de las excretas las realiza al aire libre, o a las orillas
del río.
Realizan actividades como casa y pesca?
La gran mayoría de la población realiza pesca, esta actividad comienza a estar presente en la
vida de los hombres Chachis desde que soy pequeños desde los 5, 6 años en adelante esta es
una característica representativa de esta comunidad, y realizan caza de animales permitidos en
la región que en la actualidad es muy escasa.
Poseen animales domésticos y de qué tipo?
El 100% de los presentes afirmaron que tienen animales domésticos, esto varía en el numero
pero la mayoría tiene perros, gatos.
2.2.8 TÉCNICAS PARA LA IDENTIFICACIÓN DE PARÁSITOS
2.2.8.1 MÉTODOS DIRECTOS
Son aquellos que ponen en evidencia el agente o sus formas evolutivas, fragmentos, antígenos,
ADN, entre otros y que permiten visualizar directamente parásitos en material patológico o
aislarlos del mismo, los parásitos pueden ser vistos estudiando el material en fresco o mediante
coloraciones, los materiales pueden ser tratados previamente para concentrar y/o mejorar la
visualización de parásitos.(CEFA Departamento de Parasitología-Micología)
35
2.2.8.1.1 EXAMEN EN FRESCO
Consiste en la colocación del material en una lámina portaobjetos montando en algún medio
líquido, los más comunes suero fisiológico o solución salina y lugol, cubierto con una laminilla,
para la observación al microscopio, con la finalidad de observar estructuras correspondientes a
parásitos o a estos mismos en sus diferentes estadios.(CEFA Departamento de Parasitología-
Micología).
2.2.8.1.2 SEDIMENTACIÓN SIMPLE
Diferentes estadíos de los parásitos que se alojan en los humanos como son los trofozoítos,
quistes, ooquistes, larvas y huevos, pueden concentrarse por diversos procedimientos, lo cual
permite corroborar el hallazgo del método directo y conocer la intensidad del enteroparasitismo.
Estos uno de estos procedimientos es el de concentración que a su vez es el método de
sedimentación. La elección de cada procedimiento en el presente estudio es con fines
comparativos. Los resultados de esta técnica principalmente dependen de las facilidades del
laboratorio, el adiestramiento del personal, la procedencia de la muestra (zona geográfica), el
conocimiento de la prevalencia de los parásitos (zona costeña, andina y selvática o área rural o
urbana), y la especie del parásito que se desea investigar. (Instituto Nacional de Salud)
Se basa en la gravidez que presentan todas las formas parasitarias para sedimentar
espontáneamente en un medio menos denso y adecuado como la solución fisiológica. En este
método es posible la detección de quistes, trofozoítos de protozoarios, huevos y larvas de
helmintos. (Instituto Nacional de Salud)
2.2.8.1.3 CONCENTRACIÓN FORMOL ÉTER
Esta técnica tiene como objetivo aumentar la sensibilidad del estudio parasitológico debido a
que con frecuencia las muestras fecales contienen escaso número de quistes o huevos de
parásitos, éste método permite separar las heces en dos partes que no se mezclan, en una se
localizarán restos fecales y en otra el sedimento que contiene elementos parasitarios, es
importante conocer el fundamente de la técnica de concentración por los reactivos que utiliza
la formalina al 40% es un potente conservador de muestras o tejidos, debido que ataca a las
proteínas que inhiben la autolisis, la formalina también tiene un efecto desinfectante,
esterilizante y biocida destruyendo en este caso las bacterias, esto hace que las muestras
36
conservadas no se descompongan y que la muestra sea purificada es por ello que al observar en
el microscopio las preparaciones con éste método se observe un fondo bastante limpio.
(Proyecto AECID, 2012)
Se basa en la concentración de los quistes y huevos por sedimentación mediante la
centrifugación, con la ayuda de formol y éter para separar y visualizar los elementos parasitarios
(Instituto Nacional de Salud).
2.2.8.1.4 KATO KATZ
En 1954, dos científicos Kato y Miura introdujeron el frotis grueso para el examen de heces,
éste fue mejorado, evaluado y adoptado en programas de control de parásitos intestinales en
Japón, fue dado a conocer en 1963 por la OMS, en 1972 fue modificado por Katz llamándose
desde entonces “Kato-Katz”, Método que consiste en la diafanización o aclaración de las heces
con el uso de verde malaquita o glicerina que permite preparar una capa transparente y observar
las formas parasitarias. (Instituto Nacional de Salud) principalmente las membranas parasitarias
su forma, una vez que se ha realizado la aclaración de la muestra se permite con facilidad
realizar el contaje de los huevos de los parásitos, para ello se utiliza un templete que permite
obtener una cantidad estipulada de heces, la ventaja de esta técnica es que brinda al profesional
de laboratorio es la cantidad que puede llegar a ser hasta 25 veces mayor que la preparación
directa, las heces no están diluidas otras ventajas son el transporte, debido a que tenemos un
valor conocido de muestra también tendremos un valor conocido de huevos, es de fácil
transporte, el tiempo, debido a que no necesita de ningún proceso de centrifugación se puede
leer de 30 a 45 min, la desventaja es que se requieren heces sin fijar, no se aconseja realizar en
muestras diarreicas, no es para larvas, no es para protozoos, otra desventaja es que no se
recomienda para el diagnóstico de Uncinaria debido a que estos huevos son muy frágiles, y
tienden a volverse inaparentes en poco tiempo, también puede ser utilizado sin realizar el
contaje. (Kaminsky). Este ha sido difundido ampliamente por la Organización Mundial de la
Salud (OMS) y la Organización Panamericana de la Salud (OPS) y es actualmente recomendado
como el método de elección para el diagnóstico cualitativo y cuantitativo de las geohelmintiasis
humanas, el método es sencillo, preciso, robusto y de bajo precio y por tanto aplicable a gran
escala, permite la comparación de prevalencias e intensidades entre diversos países o regiones,
el proceso de aclaramiento de la muestra con verde malaquita que conlleva este método hace
37
que los huevos de los helmintos resalten en el campo microscópico, facilitando su detección ya
que el método utiliza una plantilla estandarizada para medir aproximadamente 41.7 mg ó 50 mg
de muestra (dependiendo de la plantilla utilizada), el conteo sistemático de huevos presentes en
la preparación permite hacer una estimación cuantitativa de la carga parasitaria y con ello la
estratificación de la intensidad de las infecciones. (Gabrie José Antonio, 2012)
2.2.8.1.5 TÉCNICAS INMUNOLÓGICAS DIRECTAS
2.2.8.1.5.1 INMUNOFLUORESCENCIA DIRECTA
Existen técnicas como la inmunofluorescencia directa, la cual mediante la utilización de un
microscopio de fluorescencia, la utilización de un conjugado anti-Ac y fluoresceína, más
Anticuerpos específicos y el material patológico, indica mediante una coloración fluorescente
la presencia del parásito que refleja la formación de inmunocomplejos que se formaron por la
interacción de un complejo anti-Ac presente en el conjugado unidos con los antígenos presentes
en la muestra a diagnosticar.(CEFA Departamento de Parasitología-Micología)
Ilustración 16Inmunofluorescencia directa en parásitos
Fuente: http://www.higiene.edu.uy/parasito/teo09/metest.pdf
Consultado por: Fernanda Díaz
38
2.2.8.1.5.2 DETECCIÓN DE ANTÍGENOS
Se observan partículas aglutinantes debido a la reacción de antígenos presentes en el suero del
paciente con partículas de látex cubiertas de Ac específicos.(CEFA Departamento de
Parasitología-Micología)
Ilustración 17 Detección de Ag parasitarios mediante aglutinación
Fuente: http://www.higiene.edu.uy/parasito/teo09/metest.pdf
Consultado por: Fernanda Díaz
2.2.8.1.5.3 DETECCIÓN DE ACIDOS NUCLEICOS
Se realiza mediante técnicas moleculares como lo es la PCR, reacción en cadena de la
polimerasa, que a partir de la obtención de ADN parasitario se da un reconocimiento de una
secuencia específica mediante un primer o iniciador, con la consecuente multiplicación o
amplificación de la secuencia específica mediante la polimerización de la cadena y finalmente
La identificación del conjunto de secuencias reproducidas, mediante electroforesis y
cromatografía.(CEFA Departamento de Parasitología-Micología).
39
Ilustración 18 Técnicas moleculares para el diagnóstico de parásitos
Fuente: http://www.higiene.edu.uy/parasito/teo09/metest.pdf
Consultado por: Fernanda Díaz
2.2.8.2 METODOS INDIRECTOS
Este conjunto de métodos permiten determinar la presencia de parásitos en el organismo
mediante el estudio de la respuesta inmunológica del hospedero mediante la producción de
anticuerpos específicos, reacciones de hipersensibilidad tardía, producción de linfoquinas, entre
otras.(CEFA Departamento de Parasitología-Micología)
2.2.8.2.1 TÉCNICAS DE PRECIPITACIÓN EN GEL AGAR
La técnica que se presenta a continuación de doble difusión su diagnóstico se realiza mediante
la observación de arcos de precipitación donde se forman y concentran los complejos Ag-Ac
cuya reacción se produce en pocillos en agar de vidrio colocando el antígeno en un pocillo y
el suero a diagnosticar en el otro pocillo.(CEFA Departamento de Parasitología-Micología)
40
Ilustración 19 Técnicas de precipitación en gel agar
Fuente: http://www.higiene.edu.uy/parasito/teo09/metest.pdf
Consultado por: Fernanda Díaz
2.2.8.2.2 TÉCNICAS DE AGLUTINACIÓN
2.2.8.2.2.1 AGLUTINACIÓN DIRECTA.- Suspensiones de parásitos enteros son
enfrentadas a sueros de pacientes para determinar la presencia de anticuerpos presentes que
aglutinan los parásitos formando acúmulos consistentes.(CEFA Departamento de Parasitología-
Micología)
Ilustración 20 Aglutinación Directa
Fuente: http://www.higiene.edu.uy/parasito/teo09/metest.pdf
Consultado por: Fernanda Díaz
41
2.2.8.2.2.2 AGLUTINACIÓN DE PARTÍCULAS.- Suspensiones de partículas inertes, con
superficies cubiertas de Ag parasitarios, son enfrentadas a sueros de pacientes. Los anticuerpos
presentes aglutinan estas partículas, formando acúmulos consistentes(CEFA Departamento de
Parasitología-Micología).
Ilustración 21 Aglutinación de partículas
Fuente: http://www.higiene.edu.uy/parasito/teo09/metest.pdf
Consultado por: Fernanda Díaz
2.2.9 FASES DEL ANÁLISIS COPROPARASITARIO
Conlleva un conjunto de técnicas diagnósticas que constituyen la metodología para la
identificación de la mayoría de las enteroparasitosis causadas protozoarios, helmintos, la
especificidad o sensibilidad de la misma dependen de la correcta toma de muestras, preparación
en el laboratorio, y de su completa ejecución durante el examen microscópico.(Biblioteca
Nacional de Medicina). Se trata de un conjunto de técnicas complementarias, que permiten
demostrar la presencia de las diferentes formas evolutivas de los protozoos y helmintos,
enteroparásitos: esporas, trofozoitos, quistes, ooquistes, huevos, larvas, adultos, se realiza este
análisis para diferenciar estructuras, variaciones en la resistencia de las formas evolutivas.
(Fernandez, 2016)
2.2.9.1 FASE PREANALÍTICA
En el presente trabajo se entregan frascos estériles con 3 ml de alcohol al 70% para la
conservación de la muestra, rotulados con nombre, apellido y edad a cada paciente Se explica
42
la forma de recolección, debido a que el frasco contiene una cuchara plástica para la fácil
recolección de la muestra.
2.2.9.1.1 INDICACIONES PARA LA OBTENCIÓN DE LA MUESTRA DE HECES
Lavarse las manos con agua y jabón antes de recolectar la muestra.
Colocar papel comercio en el lugar donde se realizará la deposición.
Realizar la deposición.
Realizar la higiene adecuadamente.
Abrir el frasco
Con la cuchara que está adherida a la tapa tomar la cantidad necesaria.
Depositar dentro del frasco del frasco.
Cerrar con cuidado
Conservarla a T° ambiente
Entregar la muestra
Realizar la recolección de la muestra en la mañana
Realizar la entrega en la mañana.
2.2.9.1.2 OBTENCIÓN DE LA MUESTRA
No se requiere dieta previa
Muestra emitida espontáneamente
El recipiente de recolección debe ser de boca ancha, tapa rosca y con la adecuada
rotulación del nombre del paciente (Fernandez, 2016)
2.2.9.1.3 ALMACENAMIENTO
Conservar en un lugar fresco, hasta su transporte al laboratorio.
almacenamiento en este trabajo se llevó a cabo en coolers con hielo para obtener la
temperatura adecuada y el ambiente correcto.
2.2.9.1.4 TRANSPORTE
el transporte se realizó en coolers, lo cual benefició a la conservación de las muestras y
a un correcto manejo de las mismas para su posterior evaluación
43
Una vez que se han recolectado las muestras, se colocan dentro de termos o coolers, los
cuales brindan a la muestra un adecuado transporte para evitar derrames.
2.2.9.2 FASE ANALÍTICA
Corresponde a todos los procedimientos para llevar a cabo el diagnóstico de la muestra. Las
técnicas empleadas se describen continuación.
2.2.9.2.1 APLICACIÓN DE LOS MÉTODOS
Existen métodos de detección como lo son el método directo que es la observación del agente
etiológico y su caracterización morfológica que se realiza en el caso en el que la cantidad de
microorganismos presentes estén en suficiente cantidad para ser descubiertos por este examen
en pequeñas cantidades de heces este método se llama frotis simple o examen de fresco, examen
macroscópico, microscópico, métodos de concentración eje: sulfato de zinc, y formalina-éter,
métodos cuantitativos (kato-katz),métodos cualitativos, y métodos de coloración rápida;
también existen métodos indirectos que implican la detección indirecta del parásito, ya sea por
la respuesta humoral que desencadena el paciente o por la captura de los antígenos que el
parásito libera. Estos son de mucha relevancia en el caso de que el parásito no se detectable en
heces y se aloje en otro sitio pudiendo ser la pared intestinal, tejidos u otros sitios de difícil
acceso, la mayoría de estas técnicas permite identificar anticuerpos llamados complejos
inmunes y células efectoras de la respuesta inmune como reacciones del complemento y
citosinas, entre estas podemos encontrar aglutinación clásica, fijación del complemento,
métodos de difusión en gel, inmunofluoresencia, western blot, ELISA (coproantígenos).
El método diagnóstico más utilizado mundialmente en encuestas parasitológicas y estudios
epidemiológicos para la detección de Amphimeriasis es el denominado Kato-Katz. Este método
se utiliza para determinar infecciones por helmintos transmitidos por el suelo. A pesar de ser
un método de concentración sencillo, robusto y relativamente sensible, la calidad de los
resultados del Kato-Katz está sujeta a su apropiada estandarización en cada laboratorio.
2.2.9.3 FASE POST ANALÍTICA
Interpretación, Manejo y comparación de resultados, validación, emisión del informe y
tratamiento.
44
2.2.10 VARIABLES Y SU OPERACIONALIZACÍON
VARIABLES
DEFINICIÓN
CONCEPTUAL
DEFINICIÓN
OPERACIONAL
INDICADOR
UNIDAD DE
ANALISIS
TÉCNICA
INSTRUMENTO
Edad
Tiempo que ha
vivido una persona
desde su
nacimiento
Es importante conocer la
edad porque nos interesa
conocer el grupo etario con
mayor susceptibilidad de
tener o ser portador de
Amphimeriasis.
Se aceptaron
muestras de
todas las
edades, valor
numérico
establecido por
los
participantes
de este
proyecto
Paciente
Documental
Hoja de
recolección de
datos
Genero Es la persona que
posee genotipos y
fenotipos
diferenciados en
masculinos o
femeninos
Determina el sexo del
paciente
Masculino
Femenino
Paciente
Documental
Hoja de
recolección de
datos
45
2.2.11 PARÁMETROS DE ANÁLISIS ESTADÍSTICOS
2.2.11.1 PREVALENCIA
La prevalencia se define como el número de casos de una enfermedad o evento en una población
y en un momento dado. Existen dos tipos de prevalencia: Prevalencia puntual y Prevalencia de
periodo
Prevalencia puntual
La prevalencia puntual es la frecuencia de una enfermedad o condición en un punto del tiempo.
Es una proporción que expresa la probabilidad de que una persona sea un caso en un momento
o edad determinados son, la medida estimada en las llamadas encuestas de prevalencia o
transversales. La prevalencia puntual se estima con la siguiente fórmula: (Sameens, 2016)
Prevalencia puntual = Ct/Nt
Ct= número de casos existentes (prevalentes) en un momento o edad determinados.
Nt= número total de individuos en la población en ese momento o edad determinados.
2.2.11.2 INTERVALO DE CONFIANZA
En el contexto de estimar un parámetro poblacional, un intervalo de confianza es un rango de
valores (calculado en una muestra) en el cual se encuentra el verdadero valor del parámetro, con
una probabilidad determinada.
La probabilidad de que el verdadero valor del parámetro se encuentre en el intervalo construido
se denomina nivel de confianza, y se denota 1- . La probabilidad de equivocarnos se
llama nivel de significancia y se simboliza . Generalmente se construyen intervalos con
confianza 1- =95% (o significancia =5%). Menos frecuentes son los intervalos con =10%
o =1%. (Rada, 2007)
2.2.11.3 VALOR P
Una vez obtenida la muestra, se puede calcular una cantidad que permite resumir el resultado
del experimento de manera objetiva. Esta cantidad es el p-valor que corresponde al nivel de
46
significación más pequeño posible que puede escogerse, para el cual todavía se aceptaría la
hipótesis alternativa con las observaciones actuales. Cualquier nivel de significación escogido
inferior al p-valor (simbólicamente p) comporta aceptar H0. Obviamente, al ser una
probabilidad, se cumple que:0 ≤ pv ≤ 1
El p-valor es una medida directa de lo verosímil que resulta obtener una muestra como la actual
si es cierta H0. Los valores pequeños indican que es muy infrecuente obtener una muestra como
la actual, en cambio, los valores altos que son frecuente. El p-valor se emplea para indicar
cuánto (o cuán poco) contradice la muestra actual la hipótesis alternativa.
Informar sobre cuál es el p-valor tiene la ventaja de permitir que cualquiera decida qué hipótesis
acepta basándose en su propio nivel de riesgo α. Esto no es posible cuando se informa, como ha
sido tradicional, indicando sólo el resultado de la decisión, es decir, si se acepta o se rechaza
H0 con un α fijo.
Al proporcionar el p-valor obtenido con la muestra actual, la decisión se hará de acuerdo a la
regla siguiente: si pv ≤ α, aceptar H1, si pv > α, aceptar H0
Entrando en el terreno práctico, algunos paquetes estadísticos proporcionan en sus listados
el significance level, cuya traducción literal es nivel de significación, cuando muchas veces se
refieren en realidad al p-valor (p-value)(Statmedia, 2015)
2.2.11.4 SENSIBILIDAD
Es el porcentaje de resultados positivos en pacientes con una determinada enfermedad. Mide el
porcentaje de individuos enfermos correctamente diagnosticados La sensibilidad indica la
capacidad de una prueba para detectar a un sujeto enfermo. La sensibilidad es la probabilidad
de que la prueba identifique como enfermo a aquel que realmente lo está. La sensibilidad
expresa cuán "sensible" es la prueba a la presencia de la enfermedad. Una alta sensibilidad
indica un bajo número de falsos negativos. La sensibilidad sería la probabilidad de que un
paciente enfermo diese la prueba positiva o el porcentaje de positivos de la prueba en pacientes
con la enfermedad. (SEQC)
47
También se considera a la sensibilidad como la proporción de los individuos clasificados como
positivos por el estándar de oro que se identifican correctamente por la prueba en
estudio.(Cuevas Corina, 2010)
2.2.11.5 ESPECIFICIDAD
Especificidad Es el porcentaje de resultados negativos en pacientes que no padecen esa
enfermedad. Valora la capacidad de una prueba para detectar correctamente individuos sanos.
La especificidad es la probabilidad de que un individuo sano tenga un resultado negativo. Una
alta especificidad indica una baja frecuencia de falsos positivos. La especificidad sería la
probabilidad de que un paciente sano diese la prueba negativa o el porcentaje de negatividad de
la prueba diagnóstica en ausencia de enfermedad (SEQC)
La especificidad de una prueba en estudio se refiere a la proporción de los individuos
clasificados como negativos por el estándar de oro que se identifican correctamente por la
prueba en estudio.(Cuevas Corina, 2010)
48
CAPÍTULO III
METODOLOGÍA
3.1 TIPO DE ESTUDIO
Prospectivo y Comparativo de pruebas diagnósticas, realizado en 107 individuos residentes de
la comunidad Corriente Seca - Río Cayapas en la provincia Esmeraldas dela en periodo
comprendido entre Agosto 2015 a Diciembre 2015.
A los cuales después de haberles entregado frascos para la recolección de muestras de heces y
haber realizado la recepción de dichas muestras se realizó un análisis minucioso mediante cuatro
técnicas descritas anteriormente, se procesó las muestras en el laboratorio de Biomedicina de la
Facultad de Ciencias Médicas.
3.2 NIVEL DE INVESTIGACIÓN
Estudio tendrá un nivel descriptivo y comparativo de las técnicas coprológicas utilizadas para
la detección de Amphimeriasis en los habitantes de la comunidad Corriente Seca – Río Cayapas
provincia de Esmeraldas.
3.3 TÉCNICAS E INSTRUMENTOS DE INVESTIGACIÓN
Mediante socialización con la comunidad se explicó el problema, actividades a realizar así
también como el protocolo, las indicaciones de recolección de muestras.
Las técnicas aplicadas como el Frotis simple. Sedimentación simple. Método de concentración
formol-éter y Método de Kato-Katz se realizó aplicando normas según las exigencias de la casa
comercial, técnicas diseñadas previamente para el análisis estadístico se elaboró una base de
datos en Excel.
49
3.4 UNIVERSO
Para la realización de la investigación de Amphimeriasis se tomó como universo la población
de la comunidad Corriente Seca- Río Cayapas Provincia de Esmeraldasde la cual se obtuvieron
107 muestras.
3.5 MUESTRA
La población participante en el presente estudio no sufrió exclusión alguna debido a que se
realizó una charla informativa, en la cual se dio a conocer los objetivos del estudios después de
la aceptación verbal y escrita por parte de los representantes de la comunidad Corriente Seca,
se explican procesos de toma de muestra recolección de muestra y recepción par parte de
analistas, se da un plazo de dos días para recolectar la muestra, la mista que debe ser recolectada
en recipientes estériles los cuales fueron repartidos anteriormente escribiendo en ellos el nombre
y apellido de la persona.
3.5.1 Criterios de inclusión
Ser morador de la comunidad Corriente Seca.
Que estén de acuerdo con la actividad realizar.
Ser voluntario.
3.5.2 Criterios de exclusión
Personas que entregaron Frascos vacíos, sin muestra.
Personas que ya habían recibido tratamiento para este parásito.
Personas que no pudieron colectar la muestra en el tiempo determinado.
3.6 TÉCNICA E INSTRUMENTO DE RECOLECCIÓN DE DATOS
3.6.1 Instrumentos
Los datos serán recopilados mediante una nómina de individuos realizada a partir de la entrega
de muestras en la cual se tomó en cuenta la edad, nombre y apellido y la recolección de las
muestras de heces por cada uno en un frasco específico para la muestra de heces para la
50
determinación de parasitosis en cada paciente de dicha comunidad procesadas en el laboratorio
de Biomedicina de la Facultad de Ciencias Médicas de la Universidad Central del Ecuador.
3.6.2 Métodos
Se utilizó el kit comercial de determinación cuantitativa de Huevos de parasitosis causadas por
helmintos de Kato-Katz, lugol para realizar la tinción en el Frotis simple y método de
concentración formol-éter, así como también formalina y éter como lo describe la técnica, y
para el método de sedimentación simple, se utilizó principalmente solución salina. A variadas
temperaturas.
3.7 TIPOS DE ANÁLISIS
El análisis que se utilizará para la elaboración de esta investigación será de tipo cuantitativo y
cualitativo se hará estadística descriptiva con gráficos, tablas, frecuencias, porcentajes,
hallazgos de prevalencia de Amphimeriasis de acuerdo a cada técnica, intervalos de frecuencia
de cada una, valor p, para señalar la significancia de cada técnica y finalmente la sensibilidad y
especificad de la técnica de frotis simple, sedimentación simple o espontánea y la técnica de
Concentración formalina-éter en Relación con la técnica que muestre mayor significancia para
ser recomendada como Gold estándar, a su vez que se realizarán gráficos con curvas Roc que
indicarán el comportamiento de la sensibilidad y especificidad de dichas técnicas.
3.8 CONSIDERACIONES ÉTICAS
Para la recolección de datos se contó con consentimiento de la comunidad, bajo normas de
manejo ético, moral y profesional, aprobación del Comité de ética, reunión con la comunidad,
obtención de consentimiento verbal de los representantes y de cada uno, anteriormente se realizó
un consentimiento escrito por parte de representantes de la comunidad que para fines de
realización de este trabajo se presentó una copia del consentimiento a la dirección de la Carrera
de Laboratorio Clínico e Histotecnológico de la Facultad de Ciencias Médicas de la Universidad
Central del Ecuador.
51
CAPÍTULO IV
4.1 RESULTADOS
Tabla 2 Población incluida en el proyecto
Comunidad Corriente Seca
Número de personas incluidas en la investigación 105 77%
Número de habitantes en la Comunidad 135 100%
Fuente: Base de datos del Proyecto Elaborado por: Fernanda Díaz
ANÁLISIS
La población total de la comunidad Corriente Seca son 135 habitantes que equivalen al 100%
y la población objeto de estudio es de 105 personas que equivalen al 77,77% del total de la
comunidad, lo cual indica que la población estudiada corresponde a un porcentaje elevado y es
considerable para la generalización en los resultados obtenidos.
Tabla 3 Amphimeriasis en Corriente Seca
Amphimeriasis Corriente Seca
Total de personas 105 100%
Frecuencia de Amphimeriasis 38 36.10%
Fuente: Base de datos del proyecto Elaborado por: Fernanda Díaz
ANÁLISIS
Del total de habitantes Chachis de Corriente Seca hay una prevalencia de Amphimeriasis de
36.1% que equivale a 38 personas infectadas por este parásito.
52
Tabla 4 Frecuencia de género
Fuente: Base de datos del proyecto Elaborado por: Fernanda Díaz
ANÁLISIS
De acuerdo a la frecuencia de género, el 43,8% que equivalen a 46 personas corresponden al
género masculino y el 55,2% que equivalen a 58 personas de género femenino, que es el género
predominante es este estudio, además indica la tabla que existe una persona que se desconoce
de su género por ausencia de información en la base de datos.
Tabla 5 Amphimeriasis de acuerdo al género
Fuente: Base de datos del proyecto Elaborado por: Fernanda Díaz
ANÁLISIS
La frecuencia de Amphimeriasis de acuerdo al género señala que un 36.8 % de las personas
infectadas corresponden al género masculino (14 hombres), y un porcentaje de 63.2% (24
mujeres) que corresponden al género femenino.
53
Tabla 6 Frecuencia de edades
Fuente: Base de datos del proyecto Elaborado por: Fernanda Díaz
ANÁLISIS
Frecuencia de personas de acuerdo a la edad, 25% de personas que en la base de datos no
proporcionan información acerca de su edad (27 personas), seguidos del grupo de 30 niños que
equivalen al 28.6%, un 14.3% de 11 a 20 años que equivalen a 15 personas, un 7.6% de 21 a 30
años (8 personas), de 31 a 40 años representan un 9.5% (10 adultos), de 41 a 50 años un 10.5%
(11 personas), de 51 a 60 años un 2.9% (3 adultos)y finalmente el rango comprendido entre 61
a 70 años un 1%, que equivale a 1 persona, el grupo etario que se encuentra en mayor número
es el comprendido por niños de 1 a 10 años, que representan al 28.6% del total de personas
involucradas en el proyecto.
54
Tabla 7 Frecuencia de Amphimeriasis según la edad
Fuente: Base de datos del proyecto Elaborado por: Fernanda Díaz
ANÁLISIS
Aquí se muestra la frecuencia de personas infectadas por Amphimerus de acuerdo a la edad, a
la clasificación etaria en la que nos basamos nos indica que existe un 23.7% de personas que en
la base de datos no proporcionan información acerca de su edad, que representan a 9 personas
de las 38 personas infectadas, sin embargo tenemos un 26.3% de niños de 1 a 10 que representan
a 10 niños que indican que la mayor infección por Amphimerus se da en niños, después tenemos
el grupo de 11 a 20 años que tienen una prevalencia de Amphimeriasis de 15.8% que son 6
personas, un 10.5% de prevalencia de infección por Amphimerus en personas de 31 a 40 años
al igual que en la población de 41 a 50 años,, después el grupo etario de 21 a 30 años muestra
una prevalencia de Amphimerus del 7.9% que representan a 3 personas y finalmente los grupos
etarios comprendidos entre 51 a 60 y 61 a 70 años con un porcentaje del 2.6% cada grupo que
son equivalentes a 1 persona en cada grupo etario.
55
Fuente: Base de datos del proyecto Elaborado por: Fernanda Díaz
Tabla 8 Frecuencia de Resultados Positivos y Negativos para Amphimerus spp Mediante la técnica de Frotis Simple
Fuente: Base de datos del proyecto Elaborado por: Fernanda Díaz
ANÁLISIS
La prevalencia de Amphimeriasis mediante la técnica de frotis simple fue 1%, que equivale a 1
muestra positiva de 105 muestras y 99 % que equivale a 104 muestras negativas.
Grafico 1 Amphimeriasis mediante técnica de Frotis Simple
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Fuente: Base de datos del proyecto Elaborado por: Fernanda Díaz
Tabla 9 Frecuencia de Resultados Positivos y Negativos para Amphimerus spp. Mediante la técnica de Sedimentación Simple
Fuente: Base de datos del proyecto Elaborado por: Fernanda Díaz
ANÁLISIS
La prevalencia de Amphimeriasis es del 21%, que equivale a 22 muestras positivas de 105
muestras y 79 % de casos negativos, que equivale a 83 muestras.
Grafico 2 Amphimeriasis Mediante el Método de Sedimentación Simple
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Grafico 3 Amphimeriasis mediante la técnica de Concentración de Ritchie
Fuente: Base de datos del proyecto Elaborado por: Fernanda Díaz
Tabla 10 Frecuencia de Resultados Positivos y Negativos para Amphimerus spp por el Método de Ritchie
Fuente: Base de datos del proyecto Elaborado por: Fernanda Díaz
ANÁLISIS
Los resultados positivos son un 18.1% que equivale 19 muestras de 105 muestras analizadas y
81,9% que equivale a 86 muestras con resultados negativos.
58
Grafico 4 Amphimeriasis mediante la Técnica de Kato-Katz
Fuente: Base de datos del proyecto Elaborado por: Fernanda Díaz
Tabla 11 Frecuencia de Resultados Positivos y negativos para Amphimerus spp mediante la técnica de Kato Katz
Fuente: Base de datos del proyecto Elaborado por: Fernanda Díaz
ANÁLISIS
Esta tabla muestra los porcentajes de resultados obtenidos mediante la técnica Kato-Katz para
el diagnóstico de Amphimeriasis los resultados positivos son un 25.7% que equivale
27muestras de 105 muestras y 74.3% que equivale a 78 muestras con resultados negativos
estos porcentajes son en base del total de las 105 personas que representan el 100%.
59
Tabla 12 Sensibilidad y Especificidad de la Técnica de Sedimentación Simple
Fuente: Base de datos del proyecto Elaborado por: Fernanda Díaz
ANÁLISIS
La técnica de Sedimentación Simple expresa una sensibilidad de un 100% y una especificidad
de 79.8% considerando el frotis simple como el Gold estándar para el hallazgo de los parásitos.
Tabla 13 Sensibilidad y Especificidad de la Técnica de Ritchie
Fuente: Base de datos del proyecto Elaborado por: Fernanda Díaz
ANÁLISIS
La técnica de Ritchie expresa una sensibilidad de un 100% y una especificidad de 82.7%
considerando el frotis simple como el Gold estándar para el hallazgo de los parásitos.
60
Tabla 14 Sensibilidad y Especificidad de la técnica de Kato – Katz
Fuente: Base de datos del proyecto Elaborado por: Fernanda Díaz
ANÁLISIS
La tabla anterior brinda los datos correspondientes para sensibilidad de un 100% de la técnica
de Kato Katz con relación a la técnica del frotis simple que es considerada como el Gold
estándar para el hallazgo de los parásitos, esto refleja que el 100% de pacientes que fueron
detectados como positivos mediante el frotis simple fueron positivos también para la técnica de
Kato Katz, este dato no es curioso debido a que esta técnica brindo porcentajes considerables
de prevalencia de Amphimeriasis y uno de ellos fue el que concordó con la única muestra
positiva mediante el frotis directo, la especificidad de la técnica de Kato Katz es del 75.0% lo
cual indica la relación del porcentaje de los pacientes diagnosticados como sanos mediante el
frotis directo o negativos para Amphimerus spp entre los pacientes que fueron diagnosticados
como sanos mediante la técnica de Kato - Katz.
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Grafico 5 Curvas COR Comportamiento de sensibilidades y especificidades
Fuente: Base de datos del proyecto
Elaborado por: Fernanda Díaz
ANÁLISIS
La ilustración anterior muestra el comportamiento de la sensibilidad y especificidad de la
técnica de Sedimentación Simple, la técnica de Concentración de Ritchie (método de formalina-
éter), y la técnica para detección de Helmintos Kato Katz, las tres comparadas al gold estándar
que es el frotis simple. En el caso del eje x que es el eje de la especificidad, mientras más alejado
esta del cero tiene mayor especificidad y de acuerdo al eje y correspondiente a la sensibilidad
mientras se encuentre más alejado del cero o arriba de 0 tendrán sensibilidades más altas, en la
figura el comportamiento de la sensibilidad y especificidad de la tres técnicas a probar
mantienen valores que se acercan entre ellas es por ello que las tres nacen en la parte superior
con la misma sensibilidad y solo se diferencian en la especificidad.
62
Tabla 15 P- value entre Las Técnicas Kato Katz, Concentración Ritchie y, Sedimentación simple
P - value KATO KATZ CONCENTRACIÓN
>0.05 DE RITCHIE
SEDIMENTACIÓN 0.48992 0.63095
SIMPLE
CONCENTRACIÓN 0.2441 DE RITCHIE
Fuente: Base de datos del proyecto Elaborado por: Fernanda Díaz
ANÁLISIS
El valor p hallado entre las técnicas de Sedimentación Simple, Concentración de Ritchie, y
técnica de Kato Katz, es > a 0.05 entre las mismas, suponiendo que los resultados obtenidos
sean tal cual, se considera que no hay significancia estadística al realizar una de estas tres
pruebas en lugar de las otras, porque los resultados a obtenerse serian bastante similares.
Tabla 16 P- value de las técnicas de Kato Katz, T. Ritchie, Sed. Simple; en relación al Frotis Simple
P - value COPROPARASITARIO < 0.05 SIMPLE
SEDIMENTACIÓN 0.00002 SIMPLE
CONCENTRACIÓN 0.00009 DE RITCHIE
KATO KATZ 0.000001
Fuente: Base de datos del proyecto Elaborado por: Fernanda Díaz
ANÁLISIS
El valor p hallado de las técnicas de Sedimentación Simple, Concentración de Ritchie, y técnica
de Kato Katz, entre la técnica del coproparasitario simple es < a 0.05, el valor p que está definido
como la probabilidad de obtener un resultado al menos tan extremo como el que realmente se
ha obtenido, suponiendo que los resultados obtenidos sean tal cual, cuando los valores de p son
menores a 0.05 se considera que existe significancia estadística al realizar una de estas tres
pruebas en lugar del coproparasitario simple, porque los resultados a obtenerse marcarían una
diferencia significativa.
63
Tabla 17 Intervalos de Confianza
Técnica Frec. %C. Intervalo de Confianza CI
Kato Katz 25.7% 95% (17.5 - 33.9%)
Sedimentación Simple 21% 95% (13.1 - 28.6%)
Concentración de Ritchie
18% 95% (10.7 - 24.8%)
Frotis Simple 1% 95% (0.9 - 2.9%)
Fuente: Base de datos del proyecto Elaborado por: Fernanda Díaz
ANÁLISIS
En la tabla de Intervalos de confianza podemos apreciar que la Técnica del Kato Katz, con una
frecuencia de 25.7% para Amphimeriasis con un nivel de confianza del 95% el intervalo de
confianza de esta prueba es de 17.5 a 33.9%, la Técnica de Sedimentación Simple con una
frecuencia para Amphimerus spp del 21% mostró un CI: 13.1 - 28.6%, la técnica de
Concentración de formalina éter con un 18% para Amphimeriasis indicó un CI: 10.7 -
24.8%, y la técnica de frotis simple con una prevalencia del 1% mostró un CI: 0.9 - 2.9%,
todas con las mismas condiciones que la técnica del Kato Katz, en cuanto a nivel de
confianza.
64
4.2 DISCUSIÓN
En el presente trabajo comparamos técnicas diagnósticas de laboratorio para identificar la
presencia del parásito Amphimerus spp, un trematodo que infecta vías biliares, el objetivo
principal de este proyecto fue demostrar la eficacia del método Kato Katz en el diagnóstico de
esta parasitosis, en relación a la técnica de sedimentación simple, concentración de Ritchie y
frotis directo, lo cual se realizó mediante herramientas estadísticas como lo son la prevalencia
de Amphimeriasis en cada técnica comparada, la sensibilidad, especificidad realizando análisis
estadísticos cruzados, relacionando las tres primeras técnicas con la técnica que hasta hoy es
considerada la prueba de oro para el hallazgo de parásitos y que se utiliza día a día en las casas
de salud como lo es el frotis directo.(Diagnostico de laboratorio de Parasitosis, s.f.); Este
estudio comparativo fue llevado a cabo en la Comunidad Corriente Seca, la cual está localizada
en la Provincia de Esmeraldas, al Noroeste del Ecuador, se eligió esta comunidad debido a que
cuenta con las condiciones ambientales probas para que el parásito Amphimerus spp haga de
ese lugar, su hábitat. Cuenta con un clima cálido – húmedo, el 100% de sus habitantes son
Chachis, siendo ellos quienes mantienen las costumbres de caza, pesca, e incluyen en su
alimentación el pescado crudo, siendo este el factor fundamental que hasta el momento se cree
es fundamental para la propagación de esta parasitosis. En estudios anteriores se comparó los
resultados de análisis coprológicos de comunidades negras versus comunidades Chachis. Los
resultados revelaron que todos los habitantes de raza negra fueron negativos a pesar de tener
costumbres similares y vivir en el mismo entorno natural (J.D. Rodríguez, 1949). La prevalencia
de Amphimeriasis encontrada en la comunidad Corriente Seca fue de 36.1%, lo cual señala que
es una enfermedad endémica y la información recopilada en el estudio realizado en el 2009 por
el Dr. Manuel Calvopiña se corrobora que ésta es una zona endémica debido al porcentaje de
infección por Amphimerus spp 24 % correspondiente para Amphimeriasis en comunidades
aledañas. (Calvopiña M, 2011). Los resultados de prevalencia encontrados por cada técnica son
de suma importancia para el programa de diagnóstico laboratorial de parasitosis que maneja el
Ministerio de Salud Pública del Ecuador, debido a que en el frotis simple encontramos una
prevalencia de 1% de casos positivos para Amphimerus spp, en la técnica de Sedimentación
Simple hallamos un 21 %, en la técnica de Ritchie un 18.1% mientras que la técnica de Kato
Katz reflejo un
65
25.7% de prevalencia de casos positivos, sin duda fue la técnica Kato Katz, la que mostró
niveles de prevalencia para Amphimerus spp, Kato Katz, aquí corroboramos la información
contenida que refiere la técnica Kato Katz como la recomendada por la OMS como la técnica
de oro en el diagnóstico de helmintiasis (Proyecto AECID, 2012). Sin embargo ninguna de las
4 técnicas detectaron el 36.1% de casos positivos que fue la prevalencia general de
Amphimeriasis en esta población. Basándonos en el estudio realizado por (Wayne Melrose,
2012) sobre la utilización de la técnica para realizar en el campo, basándonos en un estudio
comparativo de técnicas coproparasitológicas para el hallazgo de la técnica gold estándar entre
las técnicas estudiadas, realizados los análisis estadísticos para el hallazgo de la técnica que
brinde mejores resultados(Bruno Levecke, 2011), utilizando al frotis simple como gold
estándar, se calcula la sensibilidad y especificidad de la técnica de sedimentación simple, la
técnica de Ritchie y la técnica de Kato Katz.y se encuentran sensibilidades del 100% para cada
una de estas técnicas, resultados que no sorprenden debido a que el frotis directo solo presento
1 resultado positivo a diferencia de las tres técnicas que presentaron mayores prevalencias para
Amphimerus spp. Los valores p encontrados entre las técnicas de Sedimentación simple,
Concentración de Ritchie y Kato Katz reflejan que no hay una significancia estadística el
realizar una técnica en lugar de la otra, pero estas tres técnicas relacionadas con el frotis simple
si muestran un significancia estadística, por lo cual se demuestra que la técnica del frotis simple
no es una técnica que sea aplicable en el diagnóstico de Amphimeriasis y que la técnica que ha
brindado mayor número de resultados positivos es la técnica del Kato Katz y es por ello que
recomendamos el Kato Katz como la mejor de estas cuatro técnicas para realizar el diagnóstico
de Amphimeriasis. Los Niños entre 1 a 10 años representan la población en mayor número con
un 28,6%, de la población estudiada y es este mismo grupo etario quienes representan un 26,3
% de población infectada por Amphimerus. Lo cual asumimos que es por las costumbres de los
Chachis como lo es la caza y la pesca ya que desde muy pequeños se dedican a la pesca artesanal
y consumen el pescado crudo, que es la población más vulnerable a adquirir la infección por
Amphimerus spp.
66
4.3 CONCLUSIONES
Comunidades aledañas a la estudiada podrían presentar cuadros similares de infección por
Amphimerus spp, debido a su entorno, costumbres y tradiciones.
La Técnica del Kato Katz fue la mejor técnica en el diagnóstico de Amphimerus spp,
presentando el mayor número de casos positivos en el trabajo realizado.
El Frotis Simple, que es la técnica de rutina empleada en el diagnóstico de parásitos hasta ahora
en todas las casas de salud, no es apta en el diagnóstico de Amphimerus spp.
4.4 RECOMENDACIONES
Se recomienda la permanente investigación y monitoreo en las poblaciones alojadas en esta
zona endémica de Amphimeriasis, realizar programas de desparasitación específicos para
Amphimerus spp con el fin de reducir los niveles de esta parasitosis, brindar charlas educativas
y de capacitación para evitar infecciones y reinfecciones por este parásito.
Recomiendo el uso de la técnica de Kato Katz para el diagnóstico de Amphimeriasis, así como
también sugiero la implementación de este método en las casas de salud, esto ayudaría a la
detección y tratamiento propicio de esta parasitosis.
Sugiero realizar estudios sobre técnicas de diagnóstico de parásitos que proporcionen altos
niveles de confiabilidad para el diagnóstico de Amphimerus.
67
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71
ANEXOS
Técnica de Sedimentación Simple: Materiales, reactivos y Equipos
Solución salina normal
gasas para filtración
frascos con material fecal
tubos de 50 ml.
pipetas plásticas.
placas porta objetos
Placas cubre objetos
lugol.
Microscopio óptico.
Palillos de madera
Mascarilla, guantes
Anexo 1 Materiales Técnica de Sedimentación Simple
Fuente: Proyecto Amphimerus Elaborado por: Fernanda Díaz
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Modo Operatorio
Previa obtención de la muestra mediante los parámetros recomendados de recolección
de muestras en un recipiente estéril.
Preparación de materiales
Se homogeniza la muestra de heces 4 gramos en 25 ml de solución salina a temperatura
ambiente
Se filtra la suspensión dentro de un tubo cónico de 50 ml de capacidad.
Se llena el volumen del tubo cónico con solución salina a 34°C
Se agita vigorosamente por 30 segundos.
Se deja reposar el tubo de manera vertical por 45 minutos.
Se descarta el sobrenadante.
observación de la muestra se recoge el sedimento con una pipeta de plástico estéril y se
examina la muestra en el microscopio óptico.
Frotis fecal simple
Material y reactivos y equipos
Aplicadores de madera (palillos o fósforos)
Portaobjetos (75 x 25 mm)
Cubreobjetos
Lápices o rotuladores indelebles
Frascos cuentagotas con:
solución yodada de Lugol {al 1 %).
Muestra
Microscopio Óptico
Mascarilla
Guantes
Mandil
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Anexo 2 Materiales de la Técnica de Frotis Simple
Fuente: Proyecto Amphimerus Elaborado por: Fernanda Díaz
Modo operatorio
Con un lápiz graso o un rotulador, escríbase el nombre del paciente (o el número de
identificación) y la fecha en el extremo izquierdo o derecho del portaobjetos.
Deposítese una gota de suero salino en el centro de la mitad izquierda del portaobjetos
y una gota de solución yodada en el centro de la mitad derecha (Nota. Las preparaciones
en fresco tratadas con solución yodada son sumamente útiles para identificar protozoos,
pero algo menos para los helmintos )
Con un aplicador (palillo o fósforo) , tómese una pequeña porción de heces (del tamaño
de la cabeza del fósforo, es decir, unos 2 mg) y deposítese en la gota de suero salino;
añádase una porción análoga a la gota de solución yodada
Mézclense las heces con cada gota para obtener sendas suspensiones.
Colóquese un cubreobjetos sobre cada gota, apoyándolo primero en ángulo sobre el
borde de la misma y bajándolo luego con cuidado a fin de que no queden burbujas entre
74
el cubreobjetos y el portaobjetos. (Nota: Lo ideal es extender uniformemente los 2 mg
de heces, de manera que la preparación no sea tan espesa que los residuos fecales oculten
los microorganismos ni tan fina que deje espacios en blanco.)
Examínense las preparaciones con el objetivo de 10X (o, si es preciso para la
identificación, con objetivos de mayor aumento) de manera sistemática (bien de arriba
abajo o de un lado a otro) hasta haber observado toda la zona situada bajo el
cubreobjetos.
Cuando se encuentren microorganismos u objetos sospechosos, pásese a un mayor
aumento para observar con más detalle la morfología del objeto en cuestión.
Realizar la lectura de toda la muestra debajo del cubre objetos realizando un análisis
completo, ya sea de izquierda a derecha o de arriba hacia abajo.
Descartar la muestra juntamente con el porta y cubre objetos es un contenedor de
desechos corto punzantes.
Apagar y desconectar el microscopio correctamente.
Anexo 3 Procesamiento de la Técnica del Frotis Simple
Fuente: Botero David, Restrepo Marcos (2005). Parasitosis humanas. Medellín , Colombia : Corporación para investigaciones Biológicas 4 ta edición. Elaborado por: Fernanda Díaz
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Técnica de Kato – Katz
Materiales y reactivos
Muestra obtenida previamente.
Paletas de madera.
Rejilla de acero inoxidable, nilón o plástico
Plantilla de acero inoxidable, plástico o cartón. En varios países se fabrican plantillas de
diferentes tamaños. La plantilla de 1 mm de espesor con un agujero de 9 mm suministra
50 mg de heces, la de 1,5 mm de espesor con un agujero de 6 mm, 41,7 mg de heces, y
la de 0,5 mm de espesor con un agujero de 6,5 mm, 20 mg de heces.
Las plantillas deben estar estandarizadas en el país. Siempre se debe utilizar el mismo
tamaño a fin de que los datos de prevalencia e intensidad sean comparables y
reproductibles.
Espátula de plástico.
Portaobjetos
Tiras de celofán hidrófilo de 25 x 30 ó 25 x 35 mm y 40-50 um de espesor
Tarro de fondo plano con tapa
Pinzas.
Papel higiénico o absorbente
Papel de periódico.
Solución de glicerina-verde de malaquita o de glicerina-azul de metileno (1 a 3 ml de
solución acuosa de verde de malaquita al 3% o de azul de metileno al 3% añádanse 100
ml de glicerina y 100 ml de agua destilada, mézclese bien, y viértase sobre las tiras de
celofán en un tarro, dejando luego que repose la mezcla por lo menos 24 horas antes de
utilizarla).
Realizar la lectura de la muestra de todo el campo.
Descartar la muestra en desechos corto punzantes.
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Anexo 4 Materiales Técnica de Kato Katz
Fuente: Proyecto Amphimerus Elaborado por: Fernanda Díaz
Modo operatorio
Deposítese una pequeña cantidad de heces sobre un papel de periódico u otro papel
ordinario y colóquese encima la rejilla, haciendo presión para que parte de las heces
pase a través y aparezca en la parte superior.
Ráspese la superficie de la rejilla con una espátula plana para recoger las heces que han
pasado a través de aquélla.
Colóquese la plantilla agujereada en el centro de un portaobjetos y deposítese el material
fecal de la espátula en el agujero hasta llenarlo por completo. Elimínese el material que
sobresalga pasando sobre el agujero el borde de la espátula (tanto ésta como la rejilla
pueden desecharse luego o, si se lavan cuidadosamente, volver a utilizarse).
Retírese con cuidado la plantilla, de manera que el material fecal quede sobre el
portaobjetos formando un pequeño cilindro.
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Cúbrase el material fecal con una tira de celofán humedecida con la solución. El celofán
debe estar muy húmedo si las heces son secas y no tanto si las heces son blandas (si hay
un exceso de solución de glicerina en la cara superior de la tira, empápese con papel
higiénico) En los climas secos el exceso de glicerina retrasa pero no impide la
desecación.
inviértase el portaobjetos y comprímase bien la muestra fecal contra la tira de celofán
hidrófilo sobre otro portaobjetos o alguna otra superficie lisa (p. ej., un azulejo o piedra
plana).
El material fecal deberá quedar uniformemente extendido entre el portaobjetos y la tira
de celofán.
Una vez aclarado, los caracteres de imprenta de periódico deben ser visibles a través del
frotis.
Retírese el portaobjetos, deslizándolo con suavidad hacia un lado para que no se
desprenda el celofán, o levantándolo cuidadosamente. Colóquese el portaobjetos sobre
la mesa con el celofán hacia arriba. El agua se evapora mientras la glicerina aclara las
heces.
Salvo si se trata de huevos de anquilostoma, déjese el portaobjetos durante una o varias
horas a la temperatura ambiente para aclarar el material fecal antes de examinarlo al
microscopio.
Para acelerar el aclaramiento y el examen, déjese la muestra al sol o en una estufa a 40
°C durante algunos minutos.
Los huevos de Ascaris y Trichuris permanecen visibles y reconocibles durante muchos
meses en las preparaciones de este tipo. Los huevos de anquilostoma se aclaran
rápidamente y dejan de ser visibles al cabo de 30-60 minutos.
Los de esquistosoma pueden ser reconocibles durante varios meses, pero en las zonas
endémicas es preferible examinar las preparaciones en las primeras 24 horas.
Hay que examinar sistemáticamente el frotis y notificar los recuentos de huevos de cada
especie. A continuación, multiplíquese por el número apropiado para obtener la cifra de
huevos presentes por gramo de heces {20, si la plantilla es de 50 mg; 50, si es de 20 mg;
y 24, si es de 41,7 mg). Cuando el recuento de huevos dé cifras más altas, aplíquese una
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metodología rigurosa reduciendo el tiempo de lectura y utilizando de preferencia la
técnica de dilución cuantitativa de Stoll con O, 1 mol/litro de NaOH.
Anexo 5 Procesamiento de la Técnica Kato Katz
Fuente: Botero David, Restrepo Marcos (2005). Parasitosis humanas. Medellín , Colombia : Corporación para investigaciones Biológicas 4 ta edición. Elaborado por: Fernanda Díaz
Una vez realizados los procedimientos de acuerdo a los protocolos anteriormente descritos de
las tres técnicas; frotis simple, sedimentación simple y método de Kato Katz, se agrega alcohol
a la muestra para la conservación de estructuras parasitarias y para el transporte de las muestras
hasta el laboratorio del CBM donde se realizará la técnica de Concentración de Ritchie o
Formalina - éter.
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Técnica de Concentración De Ritchie.
Equipos, materiales y reactivos
formol éter /acetato de etilo/gasolina
Centrifuga, con cabezal y cubetas para tubos cónicos de 15 ml.
Conviene utilizar cestillos herméticamente cerrados
Tubos de centrifugadora, 15 ml, cónicos con tapa.
Frascos de distribución o recipientes de plástico
Aplicadores (palillos) de madera.
Gasa quirúrgica o tamiz de plástico o metal.
Portaobjetos.
Cubreobjetos.
Pipetas Pasteur desechables.
Pipetas de cristal con peras de goma
Gradilla para colocar los tubos.
Formol al 10%
Éter, acetato de etilo o, si no se dispone de esos disolventes, gasolina. (Advertencia: el
éter es sumamente volátil y puede inflamarse y explotar rápidamente si hay una llama,
salta una chispa en las inmediaciones
Guárdense las latas o frascos abiertos en un estante situado en la zona más fría del
laboratorio.
No colocar recipientes abiertos de éter en el refrigerador, ya que los vapores que se
desprenden y acumulan pueden provocar una explosión al abrir la puerta )
Frascos cuentagotas con: suero salino isotónico (0,85%, 8,5 g/litro). solución yodada de
Lugol al (1%)
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Anexo 6 Materiales Técnica de Ritchie
Fuente: Proyecto Amphimerus Elaborado por: Fernanda Díaz
Modo operatorio
Añádanse con un aplicador 1 ,0-1 ,5 g de heces a 10 ml de formol en un tubo de
centrifuga.
revuélvase para obtener una suspensión.
Fíltrese la suspensión por un tamiz de mallas de 400 um o de dos capas de gasa
quirúrgica húmeda, pasándola directamente a otro tubo de centrifugadora o a un pequeño
vaso de precipitados.
Deséchese la gasa.
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Añádase más formol al 10% a la suspensión del tubo hasta obtener un volumen total de
10 ml.
Centrifúguese la muestra 5 min 3000 a 4000 rpm.
Descártese 5 ml de formalina que forma parte del sobrenadante.
Añádanse 3,0 ml de éter (o acetato de etilo o gasolina) a la suspensión y mézclese bien,
tapando luego el tubo con un tapón de goma y sacudiéndolo enérgicamente durante 10
segundos.
Destápese el tubo y colóquese en la centrifugadora; equilíbrense los tubos y
Centrifúguese la muestra 5 min 3000 a 4000 rpm.
Retírese el tubo de la centrifugadora.
El contenido se habrá separado en cuatro capas: una capa superior de éter (o acetato de
etilo o gasolina), un tapón de residuos grasos que se adhiere a las paredes del tubo, una
capa de formol, y un sedimento.
Sepárese con cuidado el tapón de residuos con un aplicador de madera mediante un
movimiento en espiral.
viértanse las tres capas superiores de golpe, invirtiendo el tubo para que se vacíe durante
cinco segundos por lo menos. Cuando esta maniobra se practica correctamente queda
una pequeña cantidad de líquido en las paredes del tubo que refluye hasta el sedimento.
Mézclese el líquido con el sedimento (a veces es necesario añadir una gota de suero
salino a fin de obtener suficiente líquido para suspender el sedimento) con una pipeta de
vidrio o plástico desechable.
Transfiérase una gota de la suspensión a un portaobjetos para examinarla bajo
cubreobjetos; también puede hacerse una preparación teñida con yodo.
Examínense las preparaciones con el objetivo de 10X (o, si es necesario para la
identificación, con objetivos de más aumento) de manera sistemática hasta haber
observado toda la zona situada bajo el cubreobjetos.
Cuando se encuentren microorganismos u objetos sospechosos, pásese a un mayor
aumento para observar con más detalle la morfología del objeto en cuestión.
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Anexo 7 Procesamiento de la Técnica de Ritchie
Fuente: Botero David, Restrepo Marcos (2005). Parasitosis humanas. Medellín , Colombia : Corporación para investigaciones Biológicas 4 ta edición. Elaborado por: Fernanda Díaz
Anexo 8 Recolección de Muestras
Fuente: Proyecto Amphimerus Elaborado por: Fernanda Díaz
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Anexo 9 Visita y Socialización en Comunidad Corriente Seca
Fuente: Proyecto Amphimerus Elaborado por: Fernanda Díaz
Anexo 10 Comunidad Corriente Seca
Fuente: Proyecto Amphimerus Elaborado por: Fernanda Díaz
84
Anexo 11Trabajo de Campo Revisión y supervisión por parte del Tutor
Fuente: Proyecto Amphimerus Elaborado por: Fernanda Díaz
Anexo 12 Trabajo de Campo Fernanda Díaz y Daniel Romero
Fuente: Proyecto Amphimerus Elaborado por: Fernanda Díaz
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Anexo 13 Hallazgos de huevos de Amphimerus spp más representativos
Fuente: Proyecto Amphimerus Elaborado por: Fernanda Díaz
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Anexo 14 Equipo de Trabajo
Fuente: Proyecto Amphimerus Elaborado por: Fernanda Díaz
Anexo 15 Salida de la Comunidad de Alojamiento
Fuente: Proyecto Amphimerus Elaborado por: Fernanda Díaz
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Anexo 16 Aprobación del Comité de Bioética del Acceso a la Comunidad
Fuente: Proyecto Amphimerus Elaborado por: Dr. Manuel Calvopiña PhD.