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UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS
CARRERA DE QUÍMICA FARMACÉUTICA
Aceite de Sacha Inchi como potenciador cognitivo.
Trabajo de investigación presentado como requisito previo para la obtención del título de
Química Farmacéutica.
Autora: Astrid Elena Tobar Estévez
Tutor: Santamaría Aguirre Javier Rodrigo
DMQ, abril 2018
ii
DEDICATORIA
Esta meta alcanzada cumple una etapa más en mi vida y se la quiero dedicar en especial a
dos personas que admiro y aprecio bastante, mis padres Ebli Estévez y Manolo Tobar, pilar
fundamental durante el transcurso de mi carrera, quienes me brindaron su apoyo
incondicional, su amor y sus sabios consejos, los cuales hicieron que me convierta en la
persona que soy ahora y por eso les estaré eternamente agradecida.
A mis hermanos Manolo y Dennise por ser parte primordial en mi vida y por estar siempre
pendientes de mí.
A mis pequeñas sobrinas, mis torbellinos Lucy y Aylin que nos llenan de alegría a diario
con sus ocurrencias y travesuras.
iii
AGRADECIMIENTOS
A Dios, por haberme permitido culminar con éxito el sueño tan anhelado de verme
convertida en una profesional y por darme la hermosa familia que tengo, quienes me han
orientado y aconsejado para tomar las mejores decisiones en mi vida.
A mis padres, por su esfuerzo y dedicación permanente para sacarnos adelante a mis
hermanos y a mí; por sus palabras de aliento y motivación.
A mis hermanos quienes estuvieron a mi lado y contribuyeron de una u otra manera
durante la realización de mi tesis.
A todos y cada uno de mis maestros que fueron mi guía durante el trayecto de toda mi vida
estudiantil, en especial a la Dra. Liliana Naranjo, Dra. Janeth Montalvo, Dra. Dayana
Borja, Dr. Javier Santamaría; quienes me han impartido sus amplios conocimientos durante
el transcurso de la carrera.
A mi Tutor, al Dr. Javier Santamaría por su asesoría, consejos y sobre todo por el tiempo
prestado, para culminar con éxito el trabajo investigativo.
A los Ingenieros Luis Castillo y Raúl Barragán quienes fueron parte primordial en la
realización de la parte estadística de la investigación.
A la Facultad de Ingeniería Química y al Centro de Biología por permitirme hacer uso de
sus instalaciones.
iv
AUTORIZACIÓN DE AUTORÍA INTELECTUAL
Yo, Astrid Elena Tobar Estévez en calidad de autora del trabajo de investigación:
ACEITE DE SACHA INCHI COMO POTENCIADOR COGNITIVO, autorizo a la
Universidad Central del Ecuador a hacer uso de todos los contenidos que me pertenecen o
parte de los que contiene esta obra, con fines estrictamente académicos o de investigación.
Los derechos que como autora me corresponden, con excepción de la presente
autorización, seguirán vigentes a mi favor, de conformidad con lo establecido en los artículos
5, 6, 8; 19 y demás pertinentes de la Ley de Propiedad Intelectual y su Reglamento.
También, autorizo a la Universidad Central del Ecuador a realizar la digitalización y
publicación de este trabajo de investigación en el repositorio virtual, de conformidad a lo
dispuesto en el Art. 144 de la Ley Orgánica de Educación Superior.
Firma:
-------------------------------
Astrid Elena Tobar Estévez
CC: 1720230661
v
CONSTANCIA DE APROBACIÓN DEL TUTOR
Yo, Javier Rodrigo Santamaría Aguirre en calidad de tutor del trabajo de investigación
titulado ACEITE DE SACHA INCHI COMO POTENCIADOR COGNITIVO,
elaborado por la estudiante Astrid Elena Tobar Estévez de la Carrera de Química
Farmacéutica, Facultad de Ciencias Químicas de la Universidad Central del Ecuador,
considero que la misma reúne los requisitos y méritos necesarios en el campo metodológico
y en el campo epistemológico, por lo que lo APRUEBO, a fin de que sea sometido a la
evaluación por parte del tribunal calificador que se designe.
En la ciudad de Quito, a los 26 días del mes de marzo del 2018.
Firma
JAVIER RODRIGO SANTAMARÍA AGUIRRE
CC: 1802467132
vi
CONSTANCIA DE APROBACIÓN DEL TRABAJO FINAL POR EL TRIBUNAL
El Tribunal constituido por: el Dr. Javier Santamaría, la Dra. Dayana Borja y la Dra.
Janeth Montalvo, luego de revisar el trabajo de investigación titulado: ACEITE DE
SACHA INCHI COMO POTENCIADOR COGNITIVO previo a la obtención del título
de Química Farmacéutica presentado por la señorita Astrid Elena Tobar Estévez, APRUEBA
el trabajo presentado.
Para constancia de lo actuado firman:
__________________
Firma
Dr. Javier Santamaría
CC: 1802467132
_____
Firma
Dra. Dayana Borja
CC: 1710993849
_
Firma
Dra. Janeth Montalvo J.
CC: 1001049962
vii
LUGAR DONDE SE REALIZÓ LA INVESTIGACIÓN
El presente trabajo de investigación se realizó en los Laboratorios de: Productos Naturales,
Tecnología Farmacéutica, Microbiología, OSP, Ingeniería Química y Bioterio del Centro
de Biología de la Universidad Central del Ecuador (UCE), en el marco del Proyecto Semilla
"Determinación de la Actividad Nootrópica en Plantas de Uso común en la Dieta
Ecuatoriana" dirigido por la Dra. Dayana Borja.
viii
Índice
Introducción ........................................................................................................................... 1
Capítulo I ............................................................................................................................... 2
El Problema ........................................................................................................................... 2
Planteamiento del Problema .............................................................................................. 2
Formulación del Problema ................................................................................................. 3
Objetivos ............................................................................................................................ 3
Objetivo general. ............................................................................................................ 3
Objetivos específicos. .................................................................................................... 4
Justificación e Importancia ................................................................................................ 4
Capítulo II .............................................................................................................................. 7
Marco Teórico ....................................................................................................................... 7
Antecedentes ...................................................................................................................... 7
Fundamento Teórico .......................................................................................................... 9
Sacha Inchi. .................................................................................................................... 9
Potenciadores Cognitivos. ............................................................................................ 23
Test de aprendizaje en modelos animales. ................................................................... 28
Marco Legal ..................................................................................................................... 32
Hipótesis .......................................................................................................................... 33
Conceptualización de las Variables ................................................................................. 34
Variable independiente. ................................................................................................ 34
Variables dependientes. ................................................................................................ 34
Capítulo III .......................................................................................................................... 35
Marco Metodológico ........................................................................................................... 35
Diseño de la Investigación ............................................................................................... 35
Métodos y Materiales....................................................................................................... 36
Población Experimental. .............................................................................................. 36
Materiales. .................................................................................................................... 36
Métodos. ....................................................................................................................... 39
Diseño Experimental........................................................................................................ 51
Matriz de Operacionalización de las Variables ............................................................... 51
ix
Técnicas e Instrumentos de recolección de datos ............................................................ 52
Técnicas de Procesamiento y Análisis de Datos .............................................................. 53
Capítulo IV .......................................................................................................................... 54
Análisis y Discusión de Resultados ..................................................................................... 54
Análisis Microbiológico de las semillas de Sacha Inchi .................................................. 54
Extracción del aceite de las semillas de Sacha Inchi por prensado en frío ...................... 55
Caracterización Fisico-química del aceite de Sacha Inchi ............................................... 57
Composición Química del aceite de Sacha Inchi............................................................. 61
Test de Aprendizaje en roedores de la especie Mus musculus ........................................ 63
Peso de los ratones ....................................................................................................... 63
Laberinto Acuático de Morris ...................................................................................... 65
Laberinto Radial de 8 Brazos ....................................................................................... 71
Disección de los ratones .................................................................................................. 78
Capítulo V ........................................................................................................................... 80
Conclusiones y Recomendaciones ...................................................................................... 80
Conclusiones .................................................................................................................... 80
Recomendaciones ............................................................................................................ 81
Bibliografía .......................................................................................................................... 82
Anexos ................................................................................................................................. 96
A) Certificado Botánico ................................................................................................... 96
B) Certificado de la Materia Prima .................................................................................. 97
C) Parte Experimental ...................................................................................................... 98
x
Índice de Figuras
Figura 1: Laberinto Acuático de Morris..............................................................................45
Figura 2: Laberinto Radial de 8 Brazos .............................................................................48
xi
Índice de Tablas
Tabla 1: Matriz de operacionalización de variables ..........................................................51
Tabla 2: Ensayo microbiológico de las almendras sin tratamiento previo ........................54
Tabla 3: Ensayo microbiológico de las almendras con tratamiento previo .......................55
Tabla 4: Análisis del % de rendimiento del aceite .............................................................56
Tabla 5: Control de calidad del aceite de Sacha Inchi / propiedades fisicoquímicas ........57
Tabla 6: Perfil de los principales ácidos grasos presentes en el aceite de Sacha Inchi .....61
Tabla 7: Peso promedio de los ratones en función de las sustancias administradas .........63
Tabla 8: Latencia de escape promedio en el Laberinto Acuático de Morris .....................65
Tabla 9: Latencia de escape promedio en el Laberinto Radial de 8 Brazos ......................71
Tabla 10: Número de desaciertos promedio en el Laberinto Radial de 8 Brazos ..............77
xii
Índice de Gráficos
Gráfico 1: Pesos promedio de los ratones por sexo .............................................................64
Gráfico 2: Latencia de escape promedio en el Laberinto Acuático de Morris ...................66
Gráfico 3: Latencia de escape en el Laberinto Acuático de Morris / sustancia administrada
Agua .....................................................................................................................................67
Gráfico 4: Latencia de escape en el Laberinto Acuático de Morris / sustancia administrada
Ginkgo Biloba ......................................................................................................................68
Gráfico 5: Latencia de escape en el Laberinto Acuático de Morris / sustancia administrada
Aceite de Sacha Inchi Dosis 1 ..............................................................................................69
Gráfico 6: Latencia de escape en el Laberinto Acuático de Morris / sustancia administrada
Aceite de Sacha Inchi Dosis 2 ..............................................................................................70
Gráfico 7: Latencia de escape promedio en el Laberinto Radial de 8 Brazos .....................72
Gráfico 8: Latencia de escape en el Laberinto Radial de 8 Brazos / sustancia administrada
Agua .....................................................................................................................................73
Gráfico 9: Latencia de escape en el Laberinto Radial de 8 Brazos / sustancia administrada
Ginkgo Biloba ......................................................................................................................74
Gráfico 10: Latencia de escape en el Laberinto Radial de 8 Brazos / sustancia administrada
Aceite de Sacha Inchi Dosis 1 ..............................................................................................75
Gráfico 11: Latencia de escape en el Laberinto Radial de 8 Brazos / sustancia administrada
Aceite de Sacha Inchi Dosis 2 ..............................................................................................76
Gráfico 12: Promedio del número de desaciertos en el Laberinto Radial de 8 Brazos /
ratones machos .....................................................................................................................77
Gráfico 13: Promedio del número de desaciertos en el Laberinto Radial de 8 Brazos /
ratones hembras ...................................................................................................................78
xiii
Aceite de Sacha Inchi como potenciador cognitivo.
Autora: Astrid Tobar
Tutor: Santamaría Javier
Resumen
El incremento de las enfermedades neurodegenerativas, asociado en parte con el
envejecimiento de la población, se ha estudiado durante muchos años desde su faceta clínica
y, en pocos casos, terapéutica; los insuficientes recursos sociosanitarios del país destinados
a su abordaje, hacen necesario desarrollar estrategias específicas y más económicas para
enfrentarlas. Se necesitan alternativas menos tóxicas que las actualmente conocidas. El
presente trabajo tuvo como propósito determinar la actividad del Aceite de Sacha Inchi como
potenciador cognitivo a través de estudios in vivo con modelos rodentes de la especie Mus
musculus. Los animales fueron divididos en cuatro grupos: al control negativo se le
administró Agua, al control positivo Ginkgo Biloba y dos grupos recibieron diferentes dosis
del aceite de Sacha Inchi. La administración oral durante 42 días incluyó una etapa de
aprendizaje con una duración de semana tanto para el Laberinto Acuático de Morris como
para el Laberinto Radial de 8 brazos. La variabilidad intragrupal no permitió calcular
diferencias estadísticamente significativas entre las sustancias administradas, sin embargo,
los estimadores no paramétricos de kernel Gaussianos mostraron tendencia a potenciar el
poder cognitivo con el Aceite de Sacha Inchi en dosis de 974.16 mg/Kg. No existieron
diferencias estadísticamente significativas en el peso de los individuos durante el tiempo de
estudio ni cambios macroscópicos en sus órganos internos. El laberinto radial de 8 brazos es
una prueba de comportamiento más sensible a los distractores externos que el Laberinto
Acuático de Morris: el estrés enfoca la atención en la supervivencia. Se recomienda ampliar
el presente estudio usando éste método con dosis superiores de Aceite de Sacha Inchi, por
tiempos de administración prolongados, con un tiempo de ensayo no mayor a tres días,
incluyendo ratones jóvenes con su sistema nervioso central en desarrollo y ratones
envejecidos con deterioro cognitivo natural.
PALABRAS CLAVE: POTENCIADOR COGNITIVO, ACEITE DE SACHA INCHI,
LABERINTO ACUÁTICO DE MORRIS, LABERINTO RADIAL DE 8 BRAZOS.
xiv
Abstract
The increase in neurodegenerative diseases, associated in part with the aging of the
population, has been studied for many years from its clinical side and, in a few cases,
therapeutic; the insufficient socio-sanitary resources of the country destined to its approach,
make it necessary to develop specific and more economic strategies to face them. Less toxic
alternatives are needed than those currently known. The purpose of this work was to
determine the activity of Sacha Inchi oil as a cognitive enhancer through in vivo studies with
rodent models of the species Mus Musculus. The animals were divided into four groups: the
negative control was given water, the positive control Ginkgo Biloba and two groups
received different doses of Sacha Inchi oil. The oral administration for 42 days included a
week-long learning stage for both the Morris Water Maze and the Radial 8-arm Maze. The
intragroup variability did not allow to calculate statistically significant differences between
the administered substances, however, the nonparametric Gaussian kernel estimators showed
a tendency to enhance the cognitive power with the Sacha Inchi oil in a dose of 974.16
mg/Kg. There were no statistically significant differences in the weight of the individuals
during the study time or macroscopic changes in their internal organs. The Radial 8-arm
Maze is a behavioral test more sensitive to external distractors than Morris Water Maze:
stress focuses attention on survival. It is recommended to extend the present study using this
method with higher doses of Sacha Inchi oil, for prolonged administration times, with a test
time of no more than three days, including young mice with their central nervous system in
development and mice aged with deterioration cognitive natural.
KEYWORDS: COGNITIVE ENHANCER, SACHA INCHI OIL, MORRIS WATER
MAZE, RADIAL 8-ARM MAZE.
1
Introducción
En nuestro país y específicamente en la facultad la inexistencia de estudios relacionados
para determinar la actividad nootrópica de extractos vegetales disminuyen las posibilidades
de poder obtener tratamientos alternativos naturales que sean menos tóxicos y que sirvan
como coadyuvantes en el tratamiento para el mejoramiento de los procesos cognitivos, por
tanto es conveniente recurrir al análisis exhaustivo para la posible utilización de los
beneficios de los componentes que brindan determinadas especies vegetales usando como
modelo el aceite de Sacha Inchi para la creación de nootrópicos naturales con relación al
mejoramiento de los procesos cognitivos. Es entonces que la presente investigación se basó
en determinar la actividad nootrópica del aceite de Sacha Inchi a través de estudios in vivo
con modelos rodentes de la especie Mus musculus, para lo cual se utilizaron test de
aprendizaje: el Laberinto Acuático de Morris y el Laberinto Radial de 8 Brazos, en los cuales
previa administración del aceite a los roedores tenían que realizar determinadas pruebas con
el fin de probar la mejora de las funciones cognitivas. Además se podrá llevar a cabo la
implementación de los métodos, los cuales servirán como guía referente para posteriores
estudios de extractos vegetales de los cuales se quiera evaluar su actividad nootrópica.
En el capítulo I se aborda el problema, el cual contiene los siguientes elementos: el
planteamiento y la formulación del problema, las preguntas directrices, los objetivos tanto
general como específicos, y además consta la justificación e importancia de la investigación.
El capítulo II presenta el marco teórico, donde se hace mención a los antecedentes
bibliográficos del tema, el fundamento teórico, el marco legal de la investigación, además
de las hipótesis y la conceptualización de las variables.
En capítulo III se hace referencia sobre el marco metodológico, en el que constan el diseño
de la investigación, los materiales y métodos, el diseño experimental, la operacionalización
de las variables, los instrumentos de recolección de datos y las técnicas de procesamiento y
análisis de datos.
El capítulo IV contiene el análisis y discusión de resultados, conseguidos a lo largo de la
parte experimental realizada. Y por último en el capítulo V se habla de las conclusiones y
recomendaciones obtenidas en el presente trabajo de investigación.
2
Capítulo I
El Problema
Planteamiento del Problema
La demencia es un síndrome generalmente de naturaleza crónica o progresiva
caracterizado por el deterioro de la función cognitiva, más allá de lo que podría considerarse
una consecuencia del envejecimiento normal (Organización Mundial de la Salud (OMS),
2017). Este tipo de enfermedad es gravemente incapacitante para aquellos que la padecen y
suele ser devastadora para sus cuidadores y familiares. (Organización Mundial de la Salud
(OMS) , 2017)
Es así como la alta prevalencia mundial y el impacto económico de la demencia en las
familias, los cuidadores y las comunidades, así como el estigma y la exclusión social
asociados, presentan un importante reto para la salud pública. (Organización Mundial de la
Salud (OMS) , 2017).
La incidencia de esta enfermedad aumenta exponencialmente con el aumento de la edad,
duplicándose cuando la edad se incrementa en 6,3 años. El incremento va del 3,9 de cada
1.000 personas contraen la enfermedad a la edad de 60-64 años; mientras que esta cifra sube
al 10,4 de cada 1.000 personas a la edad de 90 años y más. (Alzheimer's Disease
International, 2015)
En el Ecuador aún no se da la suficiente importancia sobre el estudio del cerebro y sus
potencialidades a diferencia de los países del primer mundo como es el caso de los Estados
Unidos con la iniciativa BRAIN propuesta por el expresidente Barack Obama la cual
pretendía acelerar el desarrollo y la aplicación de nuevas tecnologías para permitir a los
investigadores obtener un mapa dinámico del cerebro que muestre cómo interactúan los
complejos circuitos neuronales y de esa manera hallar nuevos tratamientos para
enfermedades derivadas de su mal funcionamiento tan devastadoras como el Alzheimer, el
Parkinson, la esquizofrenia o el autismo. (ABC Ciencia, 2013)
3
En nuestro país las inversiones en investigación sobre el cerebro son escasas o
prácticamente inexistentes, lo que es más grave aún si se considera el envejecimiento
poblacional pues, según se indica en la Agenda de Adultos Mayores, ocasiona un
crecimiento “de los índices de enfermedades crónico degenerativas e incapacidades”.
(Cárdenas, 2015)
En vista de la inexistencia de estudios relacionados para determinar la actividad
nootrópica de extractos vegetales en el país y específicamente en la facultad, se hace
necesario entonces, realizar un estudio para evaluar la actividad nootrópica de determinadas
especies vegetales usando como modelo el aceite de Sacha Inchi para determinar el efecto
sobre las funciones cognitivas.
Por tanto es conveniente recurrir al análisis exhaustivo para la posible utilización
mediante el aprovechamiento de los beneficios de los componentes que brinda el aceite de
Sacha Inchi para la creación de nootrópicos naturales con relación al mejoramiento de los
procesos cognitivos (Hidalgo, 2016). Como una alternativa menos tóxica para la población
que está envejeciendo.
Formulación del Problema
¿El aceite de Sacha Inchi tiene actividad como potenciador cognitivo?
Preguntas Directrices
¿Cómo se va a extraer el aceite de las semillas de Sacha Inchi?
¿Qué métodos se van a emplear para caracterizar el aceite fijo de Sacha Inchi?
¿Qué métodos se van a emplear para comparar la actividad como potenciador
cognitivo entre el aceite de Sacha Inchi y el extracto de Ginkgo Biloba?
Objetivos
Objetivo general.
Determinar la actividad del Aceite de Sacha Inchi como potenciador cognitivo.
4
Objetivos específicos.
Extraer el aceite fijo de las semillas de Sacha Inchi por el método de prensado en
frío.
Caracterizar el aceite fijo de Sacha Inchi usando métodos físico-químicos.
Comparar la actividad como potenciador cognitivo entre el aceite de Sacha Inchi y
el extracto de Ginkgo Biloba utilizando el método del laberinto acuático de Morris y
el laberinto radial de 8 brazos en roedores de la especie Mus musculus.
Justificación e Importancia
«La exploración de cómo funciona el cerebro es la última gran frontera», dijo Story
Landis, director del Instituto nacional de Trastornos Neurológicos e Infartos. «Este es el
momento: hay oportunidades maravillosas para empujar la frontera de las ciencias
cerebrales». (ABC Ciencia, 2013)
Es así como se llevó a cabo una de las iniciativas sobre el estudio del cerebro en los
Estados Unidos de Norteamérica, en el cual el Expresidente Barack Obama anunció un
proyecto de investigación denominado “BRAIN” cuyas iniciales se pueden traducir como
“Investigación del Cerebro a través del Avance de Neurotecnologías Innovadoras” (Salinas,
2015). El proyecto partió de una inversión inicial de cien millones de dólares con cargo al
presupuesto del 2014, (ABC Ciencia, 2013) el cual, según algunos investigadores no existe
un presupuesto firme pero podría requerir más de $ 300 millones al año, o alrededor de $ 3
mil millones durante la primera década, en apoyo federal (Boffey, 2013). Adicionalmente
fundaciones e instituciones de investigación privadas también estaban invirtiendo en la
neurociencia para hacer avanzar la iniciativa BRAIN. (Collins & Prabhakar, 2013)
El objetivo de este proyecto se basaba en hacer un mapeo cerebral para conocer cómo
interactúan las células cerebrales y así lograr un mayor entendimiento de la compleja
actividad cerebral y contribuir también al desarrollo de tecnología para entender
enfermedades graves e incurables como el Alzheimer o el Parkinson. (ABC Ciencia, 2013)
En el Ecuador, este tipo de inversión en el campo de la investigación sobre el cerebro es
inexistente, considerando que se deberían realizarlas puesto que el aumento de la esperanza
de vida está contribuyendo a que el incremento de adultos mayores se produzca con mayor
rapidez, lo que conlleva al aumento de la prevalencia de enfermedades crónicas
5
neurodegenerativas como el Alzheimer y otras demencias. (Alzheimer's Disease
International, 2015)
El Alzheimer y otras demencias en Ecuador se estima que afecta al 5 % de las personas
de 65 años, pero esta cifra se va duplicando cada 4 años hasta alcanzar el 30 % a los 80 años
y sobre los 90 años al 50 % de las personas, según datos de la Fundación TASE (Trascender
con Amor, Servicio y Excelencia). (Paredes, 2016)
Las cifras de personas que padecen esta enfermedad son aproximadas porque no existen
los estudios e investigaciones suficientes que permitan saber cantidades exactas y orienten
las acciones a seguir. Pero se estima que cerca de 100.000 personas tienen esta enfermedad.
(Paredes, 2016)
Según el Informe Mundial sobre el Alzheimer del 2015, la prevalencia global de demencia
estima que 46.8 millones de personas en el mundo viven con demencia y se proyecta que
este número se duplique cada 20 años, alcanzando los 74.7 millones en el 2030 y los 131.5
millones en el 2050 (Alzheimer's Disease International, 2015). Cabe recalcar que a nivel
mundial, los costos que representa la demencia en el 2015 se ubicaron en más de $ 818.000
millones, en el 2018, la demencia se convertirá en la enfermedad del billón de dólares, y
ascenderá a 2 billones en 2030. (Paredes, 2016)
En base a resultados obtenidos a partir de estudios observacionales y de intervención en
humanos sugieren, con diferentes grados de evidencia, que los ácidos grasos poliinsaturados
de cadena larga omega-3 (cuya fuente alimentaria la encontramos en las nueces, pescado,
linaza, chía, etc) pueden tener diferentes efectos beneficiosos sobre la salud en diferentes
etapas de la vida y situaciones fisiológicas. (Prados, Farré, & Faig, 2015)
En teoría la proporción que deberíamos consumir de ácidos grasos esenciales
linoleico/linolénico (omega-6 y omega-3 respectivamente) es cercana a 1/1. Estas cantidades
se han asociado a mejores resultados funcionales del neurodesarrollo en los niños y a un
menor riesgo en los adultos de padecer algunas enfermedades crónicas de alta prevalencia.
(Prados, Farré, & Faig, 2015)
Por tanto se pretende dar a conocer como una nueva alternativa las semillas de Sacha
Inchi que son de gran interés debido a su alto contenido de aceite (35 – 60 %), el cual contiene
6
niveles elevados de ácidos grasos poliinsaturados como el linolénico (omega-3) y el linoleico
(omega-6). Estos ácidos alcanzan aproximadamente el 45 % y el 35 % respectivamente de
los ácidos grasos totales. (Gutiérrez, Rosada, & Jiménez, 2011)
Tomando en consideración la composición del aceite de Sacha Inchi, por su alto contenido
en ácidos grasos poliinsaturados especialmente omega-3, es esperable que la mayor
efectividad se asocie específicamente en el aumento de las funciones cognitivas del cerebro.
(Shivakumar, Shivaraj, Rao, Shalam, & Richa, 2011)
En el caso de los trastornos neurodegenerativos como el Parkinson y la enfermedad de
Alzheimer también parecen presentar pérdida de membrana de los ácidos grasos
poliinsaturados. Por lo tanto, puede ser que una dieta óptima con un equilibrio de ácidos
grasos omega 3 y 6 puede ayudar a retrasar su aparición o reducir el deterioro de las
funciones cerebrales que provocan estas enfermedades. (Youdim, Martin, & Joseph, 1999)
Es por tal razón que la presente investigación se basó en determinar la actividad
nootrópica del aceite de Sacha Inchi a través de estudios in vivo con modelos rodentes de la
especie Mus musculus, con el fin de mejorar las funciones cognitivas, con lo cual se podría
dar un mayor valor agregado como producto natural al aceite extraído de las semillas de
Sacha Inchi una vez que se haya comprobado la actividad de “potenciador cognitivo”.
Además se puede llevar a cabo la implementación de los métodos, los cuales servirían como
guía referente para posteriores estudios de extractos vegetales de los cuales se quiera evaluar
su actividad nootrópica.
Por eso en vista de la inexistencia de estudios en el Ecuador queremos dar el primer paso
que será importante e ineludible para obtener un producto natural que se convierta en
coadyuvante en el mantenimiento de las funciones cognitivas en adultos mayores.
7
Capítulo II
Marco Teórico
Antecedentes
El conocimiento de las enfermedades neurodegenerativas ha estado limitado durante
muchos años a sus aspectos clínicos y, en algunos casos, a diferentes intentos terapéuticos.
Hace años atrás, poco se conocía sobre las causas de estas enfermedades, que permitieran
una actuación más eficaz sobre las mismas o, al menos, una alternativa de tratamiento para
mantener controlada la enfermedad. (Segovia & Mora, 2002)
Hacia fines del siglo XVIII, los trastornos cognitivos ya habían sido claramente
identificados, y existía una excelente descripción semiológica de los principales síntomas y
signos de estos trastornos y se identificó la existencia de un deterioro asociado a la edad, que
se atribuía a una rigidez de las fibras nerviosas. (Slachevsky & Oyarzo, 2008)
Es así que durante el siglo XIX, el término de demencia empieza a ser usado para referirse
principalmente a cuadros de trastornos cognitivos adquiridos y es en la segunda mitad del
siglo XIX, que su uso se restringe casi exclusivamente a trastornos irreversibles de las
funciones intelectuales que afectan predominantemente a las personas de edad avanzada.
(Slachevsky & Oyarzo, 2008)
En la década de los noventa el estudio de las demencias y de la enfermedad de Alzheimer
estuvo caracterizada por el inicio de la era de los estudios genéticos, la creación de modelos
animales y la identificación de factores de riesgo relacionados con las demencias y la
enfermedad de Alzheimer, como la hipertensión arterial, la diabetes mellitus, las
hiperlipoproteinemias, la enfermedad cerebrovascular y cardiaca isquémica, cuya detección
temprana y control podrían retardar el comienzo de las demencias en varios años y de esta
forma reducir de manera sorprendente el número de enfermos. (Llibre, García, & Díaz, 2014)
Si bien el aumento en la prevalencia de demencias se asocia de gran forma con el
envejecimiento de la población, no obstante, no constituye una condición propia de la edad
avanzada y progresivamente aumenta también el número de personas más jóvenes con el
diagnóstico. (Gajardo & Abusleme, 2016) No existe una “demencia senil” ni una “demencia
8
presenil”, sino demencias específicas, independientes de la edad del enfermo, tales como
demencia tipo Alzheimer, vascular o frontotemporal. (Guajardo, 2016)
En la actualidad las demencias constituyen una condición prioritaria para la salud pública,
por la creciente prevalencia e incidencia con que se presentan en el mundo, debido al
aumento en la esperanza de vida de la población, los cuales se ven afectados por los
trastornos crónicos degenerativos. (Acosta, y otros, 2012) Es por lo tanto que el creciente
número de personas con algún tipo de demencia y los insuficientes recursos sociosanitarios
para su abordaje, son los que hacen necesario desarrollar estrategias específicas para
enfrentarla. (Gajardo & Abusleme, 2016)
En el Ecuador las cifras de personas que padecen esta enfermedad son aproximadas
porque no existen los estudios e investigaciones suficientes que permitan saber cantidades
exactas, pero se estima que cerca de 100.000 personas tienen esta enfermedad. (Paredes,
2016)
Según el Informe Mundial sobre el Alzheimer del 2015, la incidencia de esta enfermedad
aumentará exponencialmente con el aumento de la edad, duplicándose cuando la edad se
incrementa en 6,3 años (Alzheimer's Disease International, 2015), por lo cual se estima que
el número total de personas con demencia a nivel mundial prácticamente pase a cerca de 75
millones en el 2030 y a casi el triple en el 2050 (132 millones). Registrándose
aproximadamente cada año 9,9 millones de nuevos casos. (Organización Mundial de la Salud
(OMS), 2017)
En Perú, en el año 2015 el Químico Farmacéutico Peter Barrera realizó su trabajo de
investigación titulado “Estudio del efecto neuroprotector del aceite de sacha inchi
(Plukenetia volubilis) en la neurotoxicidad inducida por metilmercurio durante la gestación
y lactancia en ratas”. En dicha tesis se evaluó el efecto del aceite de Sacha Inchi sobre la
capacidad de aprendizaje, el estrés oxidativo y sobre el daño del tejido cerebeloso por medio
del análisis histológico, en las ratas crías expuestas al metilmercurio durante el periodo de
gestación y lactancia. Determinándose que la dieta suplementada a las ratas con aceite de
Plukenetia volubilis L. en las concentraciones de 2 y 4 mL/Kg/día evitó el deterioro de la
capacidad de aprendizaje, el incremento del estrés oxidativo y el deterioro tisular del
cerebelo. (Barrera, 2015)
9
Según la Revista Chilena de Nutrición, en su artículo científico titulado “Composición de
ácidos grasos de Sacha Inchi (Plukenetia volúbilis Linneo) y su relación con la bioactividad
del vegetal” publicado en el año 2012, menciona que se realizó estudios con Sacha Inchi en
los que muestran que el vegetal es una fuente importante de aceite, quizá comparable a otras
de alto reconocimiento como el de oliva, la soya, el maíz, el maní, el girasol y la palma, por
el alto contenido de ácidos grasos omega, a lo que se adicionaría la posibilidad de encontrar
en él ácidos grasos funcionales, los que además de complementar la aptitud nutricional de
los ácidos grasos poliinsaturados actúan benéficamente sobre algunas actividades del
organismo humano. Además hacen énfasis en que los fitocompuestos presentes en la
fracción hidrofílica de Sacha Inchi, podrían tener efecto protector frente al daño oxidativo
de las macromoléculas y se constituirían en una ventana para nuevas aplicaciones de la
planta, considerando el efecto conjunto que producen los esteroles y los ácidos grasos
poliinsaturados (PUFA) encontrados. (Castaño, Valencia, Murillo, Méndez, & Eras, 2011)
El artículo científico publicado por la Revista Scielo, en el año 2016, titulado como
“Sacha Inchi (Plukenetia volubilis Linneo): ¿una experiencia ancestral desaprovechada?
Evidencias clínicas asociadas a su consumo” menciona que de la semilla de Sacha Inchi se
extrae un aceite rico en antioxidantes y ácidos grasos poliinsaturados con elevado potencial
agro tecnológico y aplicaciones en las industrias alimentarias humanas y animales, así como
cosméticas. Además señala que el consumo del maní de Sacha Inchi o sus derivados,
caracterizados por su elevado contenido de ácidos grasos poliinsaturados omega-3 y omega-
6, se ha relacionado con la mejoría del perfil bioquímico relacionado con riesgo
cardiovascular, lo que permite suponer beneficios a mediano y largo plazo, en acciones
preventivas de distintos niveles. Hace énfasis también en que su consumo ancestral, sumado
a los resultados de las investigaciones en modelos animales y en humanos, ha demostrado la
inocuidad y ha permitido evidenciar que su sabor no es un problema al momento de
considerar su inclusión como aceite de mesa, en forma de complemento alimenticio, o como
alternativa terapéutica. La presencia de compuestos antioxidantes podrían contribuir con
efectos protectores del daño oxidativo celular, al tiempo que otorgan al producto
características fisicoquímicas que aseguran su estabilidad y le confieren un elevado potencial
agroindustrial. (Alayón & Echeverri, 2016)
Fundamento Teórico
Sacha Inchi.
Generalidades.
El Sacha Inchi (Plukenetia volubilis L.) es una planta generalmente trepadora o liana,
catalogada por primera vez en 1753 por el naturalista Linneo en la Amazonía peruana. Su
10
nombre deriva de dos palabras quechuas: ‘sacha’ que significa silvestre, e ‘inchi’, cuyo
término hace referencia al maní que produce. (Alayón & Echeverri, 2016)
También es conocida como sacha yuchi, sacha yuchiqui, sacha inchik, maní del monte,
maní silvestre, maní del inca, entre otras. Su nombre de maní de los incas o, en inglés, inca
peanut, responde a las evidencias que muestran que fue cultivada por los incas (Alayón &
Echeverri, 2016). Porque las representaciones de esta planta y de sus frutos se han
encontrado en vasijas en las tumbas incaicas. (Guillén, Ruiz, Cabo, Chirinos, & Pascual,
2003)
El Sacha Inchi es una planta oleaginosa de la familia Euphorbiaceae que crece en las
selvas tropicales de América (Guillén, Ruiz, Cabo, Chirinos, & Pascual, 2003), su presencia
se da principalmente en Perú, Bolivia, Antillas Menores, Surinam, Venezuela, Colombia,
Ecuador y Brasil, sitios que cumplen sus exigencias óptimas de crecimiento: altitudes de
entre 200 y 1500 m sobre el nivel del mar, clima tropical o sub-tropical, con temperaturas de
10 a 26 °C y una humedad relativa del 78 %. (Alayón & Echeverri, 2016)
Morfología.
El Sacha Inchi, es una planta hermafrodita, de crecimiento indeterminado, abundantes
hojas y ramas, semileñosa y perenne; la altura de la planta es de aproximadamente 2,0 m
(Ramos, 2014). Sus hojas son alternas, de forma acorazonada, de 10 a 12 cm de largo y de 8
a 10 cm de ancho, elípticas, aserradas, de color verde oscuro, con pecíolos de 2 a 6 cm de
largo, ápice puntiagudo y la base plana. Las nervaduras nacen en la base de la nervadura
central orientándose al ápice. (Ayala, 2016)
En cuestión de las flores: las masculinas son pequeñas, blanquecinas y dispuestas en
racimo mientras que las femeninas se encuentran en la base del racimo y se ubican
lateralmente de una a dos flores (Andrade & Calderón, 2009). El fruto es de color verde,
tiene forma de estrella con número variable de lóbulos aristados que pueden ir desde cuatro
hasta ocho, predominando aquellos que tienen cuatro o cinco lóbulos, miden de 3 a 5 cm de
diámetro y son dehiscentes (Ayala, 2016). Estos frutos se dividen cuando éste madura y se
diferencia, endureciendo sus paredes. Cuando el fruto se encuentra maduro se torna marrón
negruzco, dentro del fruto se hallan las semillas que en la mayoría de los ecotipos, es de
forma ovalada, de color marrón oscuro, corrugadas y venadas, ligeramente abultada en el
centro y aplastada hacia el borde. Su diámetro fluctúa entre 1,3 y 2,1 cm. (Manco, 2006)
11
Composición Química.
Las semillas de Sacha Inchi están conformadas de 33-35 % de cáscara y 65-67 % de
grano. El grano o almendra presenta alrededor de 48-50 % de aceite y 27-28 % de proteínas
altamente digeribles y ricas en aminoácidos esenciales: cisteína, tirosina, treonina y
triptófano, excepto leucina y lisina. (Alayón & Echeverri, 2016)
Además dentro de sus componentes se encuentran principalmente ácidos grasos
esenciales (omegas 3, 6, y 9) y vitamina E (tocoferoles y tocotrienoles) en contenidos
significativamente elevados, respecto de semillas de otras oleaginosas (maní, palma, soya,
maíz, colza y girasol). (Manco, 2006)
Por ello, de su semilla se extrae un aceite rico en antioxidantes y ácidos grasos
poliinsaturados con un gran potencial agro tecnológico y aplicaciones en las industrias
alimentarias (humanas y animales) y farmacéuticas, así como cosméticas. (Alayón &
Echeverri, 2016)
Aceite de Sacha Inchi.
Las semillas son principalmente industrializadas en aceite debido a su composición única
de ácidos grasos, que comprende aproximadamente el 34 % de ácido linoleico (ω-6) y el 51
% de ácido linolénico (ω-3) (Chirinos, Necochea, Pedreschi, & Campos, 2015), mientras que
otros ácidos grasos, como el oleico, el palmítico y el esteárico, también están presentes pero
en proporciones menores. (Gutiérrez, Rosada, & Jiménez, 2011)
De este modo, el aceite de Sacha Inchi es una fuente importante de los grupos sanos ω-3
linolénico y ω-6 linoleico, que son importantes en la prevención de las enfermedades
coronaria y la hipertensión, mostrando un efecto hipocolesterolémico cuando se usa como
complemento alimenticio (Gutiérrez, Rosada, & Jiménez, 2011), aunque hay experiencias
que sugieren que podría también ser efectivo en tratamientos preventivos y curativos de
enfermedades de la piel, lo que demuestra la amplia variedad de aplicaciones posibles.
(Alayón & Echeverri, 2016)
Tomando en consideración la composición del aceite de Sacha Inchi, por su alto contenido
en ácidos grasos poliinsaturados especialmente omega-3, es esperable que la mayor
efectividad se asocie específicamente en el aumento de las funciones cognitivas del cerebro
(Shivakumar, Shivaraj, Rao, Shalam, & Richa, 2011). Por lo tanto, puede ser que una dieta
óptima con un equilibrio de ácidos grasos omega 3 y 6 puede ayudar a retrasar la aparición
12
o reducir el deterioro de las funciones cerebrales que provocan los trastornos
neurodegenerativos como el Parkinson y la enfermedad de Alzheimer. (Youdim, Martin, &
Joseph, 1999)
Métodos de extracción del aceite.
El procesamiento de las semillas y de los frutos oleaginosos se hace cada vez más
importante debido a que un número creciente de personas solicitan cada vez más la
utilización de aceites para la nutrición y también para aplicaciones técnicas. En general, son
tres métodos diferentes los que se utilizan para la extracción de aceite: prensado, extracción
por disolvente, y una combinación de ambos. La eficacia de estos métodos puede mejorarse
con la ayuda de enzimas o dióxido de carbono. (Matthäus, 2012)
La selección de la tecnología de extracción depende en gran medida del costo, la
disponibilidad, las propiedades del material, el uso que se le va a dar a la torta (comida), las
preocupaciones ambientales y otras. (Aydeniz, Guneser, & Yilmaz, 2013)
El prensado es un método muy antiguo que hoy en día es desplazado por el uso de
disolventes que es más eficiente, especialmente para semillas oleaginosas con contenidos de
aceite más bajos tales como la soya. Mientras que las semillas que presentan un mayor
contenido de aceite son pre-prensadas antes de la extracción por disolventes. Para la
producción de aceites vírgenes de alta calidad, sólo se permite el prensado mediante prensa
de tornillo y la purificación por sedimentación, filtración o centrifugación. (Matthäus, 2012)
Extracción por prensado en frío.
El prensado mecánico es una técnica simple y segura, aunque más aceite se quede retenido
en la torta que por el método de la extracción con disolvente. Ocasionalmente, una versión
especial de prensado llamada "prensado en frío" se utiliza para la producción única de aceite.
(Aydeniz, Guneser, & Yilmaz, 2013)
El procedimiento de prensado en frío no implica ni tratamientos térmicos ni químicos a
las semillas oleaginosas con el afán de preservar los ácidos grasos esenciales, vitaminas y
antioxidantes naturales que poseen, y además se está convirtiendo en un sustituto interesante
para las prácticas convencionales debido al deseo de los consumidores de productos
alimenticios naturales y seguros. (Siger, Nogala, & Lampart, 2007)
13
La técnica de prensado en frío puede producir aceites vírgenes muy puros, seguros,
nutricionalmente ricos y sensorialmente aceptables que no requieren refinación y pueden
consumirse directamente. Sin embargo, el rendimiento de aceite es usualmente menor que
el prensado en caliente y la extracción con disolvente. (Aydeniz, Guneser, & Yilmaz, 2013)
Con el fin de mejorar el rendimiento de aceite en el sistema de prensado en frío, se aplican
algunos pretratamientos a semillas oleaginosas enteras antes de prensar, como por ejemplo,
tratamiento con microondas, vaporización, aplicación de enzimas y pre-tostado. También se
indica que los aceites especiales prensados en frío son productos de alta demanda en los
mercados mundiales no sólo para el uso de alimentos sino también para usos medicinales,
cosméticos y otros. (Aydeniz, Guneser, & Yilmaz, 2013)
En el caso de los aceites vírgenes, la extracción por prensado en frío origina un aceite que
sólo contiene impurezas sólidas, principalmente partículas del material de la semilla. Por lo
tanto la purificación es un paso importante para garantizar la calidad del aceite durante un
tiempo más largo de almacenamiento, debido a que las partículas de las semillas contienen
enzimas, y también microorganismos que pueden metabolizar el aceite para formar
productos de degradación que afecten especialmente la calidad sensorial del aceite.
(Matthäus, 2012)
Por lo cual el propósito de la purificación es la separación del sistema en dos fases que
consisten en aceite (fase líquida) y partículas de semilla (fase sólida). En general, dos
métodos diferentes, sedimentación y filtración, están en uso, en función del rendimiento de
la planta. Existe un tercer método, la centrifugación del aceite crudo, que no está muy
generalizado. (Matthäus, 2012)
Caracterización Fisico-química del aceite.
La calidad de los aceites fijos es de gran importancia para justificar el cultivo de la especie
que lo provee en forma rentable. Existe una gran serie de propiedades e índices que en su
conjunto revelan el grado de calidad y conservación del aceite (Sánchez & Figueroa, 2013).
Algunos de los parámetros de calidad que permiten caracterizar los aceites extraídos se
relacionan con aspectos físicos y químicos, como por ejemplo:
Densidad.
La densidad simbolizada habitualmente por la letra griega ρ, también expresada como
“densidad verdadera”, es una magnitud referida a la cantidad de masa por unidad de volumen
14
a una temperatura determinada, dada la gravedad específica, definida como la razón de cierto
peso de aceite al mismo volumen de agua. (Sánchez & Figueroa, 2013)
La densidad relativa de una sustancia es la relación existente entre su densidad y la de
otra sustancia de referencia a temperatura y presión definidas; en consecuencia, es una
magnitud adimensional (Norma Mexicana, 2012). Generalmente para líquidos y sólidos, la
densidad de referencia habitual es la del agua líquida a la presión de 1 atm y la temperatura
de 4 °C, en esas condiciones, la densidad absoluta del agua destilada es de 1 g/cm3. (Sánchez
& Figueroa, 2013)
La densidad de un aceite es factor dependiente de su índice de saponificación, por cuanto
está influenciado por el promedio del peso molecular de los ácidos grasos; de igual manera,
está asociado al índice de yodo en lo que tiene que ver con el grado de insaturación de los
componentes grasos, al contenido de ácidos libres en el aceite y, fundamentalmente, con la
temperatura a la que se haya hecho la medición. (Castaño, Valencia, Murillo, Méndez, &
Eras, 2011)
La técnica consiste en determinar con ayuda de un picnómetro la masa a volúmenes
iguales de aceite y de agua que se utilizarán para calcular la relación entre ambos valores,
bajo condiciones específicas de temperatura a 20 °C para aceites. (Norma Mexicana, 2012)
La densidad relativa se calcula por medio de la siguiente fórmula:
𝜌20 =𝑚2 − 𝑚0
𝑚1 − 𝑚0
En donde:
𝜌20 : es la densidad relativa a 20°C
𝑚0 : es la masa en gramos del picnómetro vacío
𝑚1 : es la masa en gramos del picnómetro lleno de agua
𝑚2 : es la masa en gramos del picnómetro lleno de muestra
Índice de refracción.
El índice de refracción (n) de una muestra es un valor adimensional que relaciona el
ángulo de incidencia de un rayo luminoso sobre una muestra con respecto al ángulo de
15
refracción, por lo tanto mide el cambio de dirección que se produce cuando un rayo de luz
pasa a través de la sustancia problema (Paucar, 2013).
Para la determinación del índice de refracción se utilizan los aparatos denominados
Refractómetros, siendo el más utilizado el de Abbe, que está basado en la medida del ángulo
límite (Pérez F. , 2015). La técnica consiste en colocar la muestra en los prismas del
refractómetro, luego se hace incidir la luz procedente de una lámpara, de modo que el haz
atraviese los prismas con la muestra problema situado entre ambos. Observando por el ocular
y moviendo el mando giratorio de los prismas, se hace coincidir la divisoria del campo con
el centro del retículo, cuando se observe la mitad del campo clara y la otra mitad oscura.
Luego, con ayuda del flexo auxiliar, se ilumina por reflexión una escala graduada en la que
directamente se observa el valor del índice de refracción de la muestra. (Pérez F. , 2015)
En general los índices de refracción de las sustancias grasas oscilan entre 1.4600 y 1.5000
a más o menos 15 a 20 °C (Sánchez & Figueroa, 2013). Este índice es característico dentro
de ciertos límites para cada aceite por lo que es un indicador de pureza del aceite (Yaulema,
2014). Además este valor está relacionado con el peso molecular de la sustancia, el grado de
insaturación, el grado de conjugación de los componentes y la longitud de sus cadenas, que
depende de la temperatura (Rincón & Martínez, 2009), ya que este valor aumenta a medida
que aumenta el grado de insaturaciones y el peso molecular de los ácidos grasos (Paucar,
2013).
Humedad.
Todos los alimentos contienen agua en mayor o menor proporción, la cual la podemos
hallar en los alimentos de dos formas: como agua libre que es la forma predominante y como
agua ligada que está adsorbida en la superficie de las partículas coloidales. (García &
Fernández, 2012)
La determinación de la humedad en los alimentos es uno de los procesos más importantes
y de mayor uso en el procesado, control y conservación de los mismos, debido a que el
contenido de humedad en un alimento es, comúnmente, un índice de estabilidad del
producto. (Planta Piloto de Ciencia y Tecnología de los Alimentos, 2014)
La valoración volumétrica de Karl Fischer (KF) utilizada para la determinación
cuantitativa del contenido de agua en líquidos y sólidos, consiste en un titulador que contiene
yodo, el cual se agrega gradualmente a la muestra que contiene agua hasta que ésta se
16
desplace completamente y se puede detectar el yodo libre en la solución de titulación. El
punto final de la titulación se registra usando la indicación bivoltamétrica, es decir, el
potencial en el electrodo polarizado de doble platino y pin cae por debajo de un cierto valor
por ejemplo 100 mV. La valoración volumétrica de Karl Fischer es adecuada para muestras
con un contenido de agua en el rango de 100 ppm a 100 %. (Mettler Toledo, 2008)
Los aceites refinados suelen tener niveles de humedad menores de 0.1 %; los aceites
crudos tienen niveles entre 0.1-0.3 %, mientras que los aceites ácidos, por ser de naturaleza
más polar, pueden tener mayores niveles de humedad. (Sánchez & Figueroa, 2013)
Materia insaponificable.
Materia Insaponificable en aceites o grasas, se refiere a aquellas sustancias que no son
saponificables por medio de hidróxidos alcalinos, pero que son solubles en disolventes de
grasas comunes, y a los productos de saponificación que son solubles en dichos disolventes.
(USP 39 NF 34, 2016)
La materia insaponificable está relacionada con el contenido de sustancias presentes en
el aceite que son solubles en solventes apolares, pero que no sufren reacción de
saponificación, como es el caso de los esteroles, tocoferoles, tocotrienoles y carotenos, entre
otros. (Rincón & Martínez, 2009)
La técnica consiste en saponificar una cantidad determinada de muestra y realizar una
serie de extracciones con éter de petróleo. Después se lava el extracto con agua para eliminar
el exceso de álcali. Se evapora el solvente, se pesa el residuo, se titulan los ácidos grasos
presentes en el residuo en presencia de fenolftaleína como indicador, y se calcula el
porcentaje de materia insaponificable.
La Materia Insaponificable se calcula usando la siguiente fórmula:
𝑀 =𝑚2 − 0,282 𝑉 𝑥 𝑁
𝑚1𝑥 100
En donde:
𝑀 : contenido de materia insaponificable, en porcentaje de masa.
17
𝑚1 : masa de la muestra analizada, en g.
𝑚2 : masa del residuo extraído, en g.
𝑉 : volumen de la solución de hidróxido de potasio empleado en la titulación, en ml.
𝑁 : normalidad de la solución de hidróxido de potasio.
Índice de acidez.
La acidez o también denominada grado de acidez determina la cantidad de ácidos grasos
libres presentes en los aceites y grasas (Jiménez & Carpio, 2010), provenientes de la
hidrólisis química o enzimática de los triglicéridos (Franco, 2014), que normalmente se
expresa como porcentaje de ácido oleico. (Grasso, 2013)
La acidez de las grasas y los aceites fijos pueden expresarse como el número de ml de
álcali 0,1 N requerido para neutralizar los ácidos grasos libres en 10,0 g de sustancia. La
acidez también se expresa frecuentemente como Índice de Acidez, que es el número de mg
de hidróxido de potasio necesarios para neutralizar los ácidos grasos libres en 1,0 g de la
sustancia. (USP 39 NF 34, 2016)
La técnica consiste en una valoración ácido-base, en la cual tiene lugar la reacción de
neutralización entre los ácidos grasos libres del aceite y el hidróxido de sodio, utilizando
como indicador una solución de fenolftaleína. (García M. P., 2008)
El porcentaje de acidez es sumamente variable, pudiendo expresarse que trabajando en
condiciones adecuadas los aceites no deben presentar valores superiores a 0.4 - 0.5 % en
ácido oleico. En general se toma como límite la acidez de 1% en ácido oleico para calificar
comercialmente aceites finos o calidad extra (Paucar, 2013). Un valor elevado para este
índice nos muestra un alto grado de enranciamiento de los aceites. (Yaulema, 2014)
La Acidez se calcula empleando la siguiente fórmula:
𝑎𝑐𝑖𝑑𝑒𝑧 % =( 𝑁𝑁𝑎𝑂𝐻 𝑥 𝑀 𝑥 𝑉 ) 𝑥 100
1000 𝑥 𝑚
En donde:
𝑁 : normalidad de la solución de NaOH
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𝑉 : volumen en ml de NaOH utilizados
𝑚 : peso en gramos de la muestra
𝑀 : masa molecular del ácido expresado en gramos
La Acidez también se puede expresar como Índice de Acidez aplicando la siguiente
fórmula:
𝑖 =( 56,1 𝑥 𝑁𝑁𝑎𝑂𝐻 𝑥 𝑉 )
𝑚
En donde:
𝑖 : índice de acidez del producto en mg NaOH/g
𝑁 : normalidad de la solución de NaOH
𝑉 : volumen en ml de NaOH utilizados
𝑚 : peso en gramos de la muestra
Índice de saponificación.
Es una medida de la cantidad de los ácidos grasos libres y combinados que existen en las
grasas, además este índice ofrece una medida aproximada del peso molecular promedio de
los triglicéridos que constituyen la grasa. (Rodríguez, Maldonado, Muro, & Miranda, 2016)
El índice de saponificación es el número de mg de hidróxido de potasio necesario para
neutralizar los ácidos grasos libres y saponificar los ésteres existentes en 1,0 g de la sustancia
(USP 39 NF 34, 2016). Este índice varía entre 160 y 250. Para los aceites vegetales, en
general, oscila alrededor de 190. (Grasso, 2013)
La técnica consiste en saponificar una cantidad determinada de muestra por ebullición en
condiciones de reflujo con un exceso de hidróxido de potasio etanólico, seguido de la
valoración del exceso de hidróxido de potasio con una solución 0,5 N de ácido clorhídrico
(NTE INEN-ISO 3657, 2013). Simultáneamente para cada determinación debe realizarse un
blanco con todos los reactivos, realizado bajo las mismas condiciones, pero sin la muestra.
19
Por lo tanto, las grasas que contienen ácidos grasos de cadena corta consumirán más KOH
en su saponificación mostrando índices de saponificación más grandes y las que poseen
ácidos grasos de cadena larga consumen menos álcali exhibiendo valores pequeños de índice
de saponificación. (Rodríguez, Maldonado, Muro, & Miranda, 2016)
El Índice de Saponificación se calcula mediante la siguiente fórmula:
𝑖 =56,1 ( 𝑉1 − 𝑉2 ) 𝑥 𝑁
𝑚
En donde:
𝑖 : índice de saponificación del producto en mg KOH/g
𝑉1 : volumen de solución de ácido clorhídrico empleado en la titulación del ensayo en
blanco, en ml.
𝑉2 : volumen de solución de ácido clorhídrico empleado en la titulación de la muestra, en
ml.
𝑁 : normalidad de la solución de ácido clorhídrico
𝑚 : masa de la muestra analizada, en g
Índice de yodo.
Este parámetro determina la proporción de insaturaciones (dobles enlaces) de los
componentes de una grasa, mas no del tipo de éstos (Castaño, Valencia, Murillo, Méndez,
& Eras, 2011). Será mayor cuanto mayor sea el número de dobles enlaces por unidad de
grasa, utilizándose por ello para comprobar la pureza y la identidad de las grasas (Grasso,
2013). Por tanto el índice de yodo representa el número de g de yodo absorbido, por 100 g
de la sustancia. (USP 39 NF 34, 2016)
Por su parte, los valores de yodo y de saponificación, además de estar relacionados a las
propiedades físicas y químicas del material graso, son considerados como índices de
estructura y utilizados como control de calidad en los procesos de hidrogenación. (Castaño,
Valencia, Murillo, Méndez, & Eras, 2011)
La técnica consiste en una disolución de la muestra problema con cloroformo, seguido de
la adición del reactivo de Wijs. Se deja en reposo, protegido de la luz, durante 1 o 2 horas
20
dependiendo del índice de yodo de la muestra: un índice < 150, 1 hora; un índice ≥ 150, 2
horas (USP 39 NF 34, 2016). Una vez transcurrido el tiempo, se procede con la adición de
una solución acuosa de yoduro de potasio y luego se realiza la valoración del yodo liberado
con una solución de tiosulfato sódico en presencia de almidón como indicador (Panreac
Química, 2005). Simultáneamente para cada determinación debe realizarse un blanco con
todos los reactivos, realizado bajo las mismas condiciones, pero sin la muestra.
El Índice de Yodo se calcula aplicando la siguiente fórmula:
𝑖 =12,69 ( 𝑉 − 𝑉1 ) 𝑥 𝑁
𝑚
En donde:
𝑖 : índice de yodo de la muestra, en cg/g
𝑉 : volumen de solución de tiosulfato de sodio empleado en la titulación del ensayo en
blanco, en ml.
𝑉1 : volumen de solución de tiosulfato de sodio empleado en la titulación de la muestra en,
ml
𝑁 : normalidad de la solución de tiosulfato de sodio
𝑚 : masa de la muestra analizada, en g
Índice de peróxido.
Es una medida que determina el grado de oxidación primaria (rancidez oxidativa) de los
productos grasos, la cual implica transformaciones químicas provocadas por exposición al
aire y efecto catalítico de distintos agentes (metales, radiaciones, calor, humedad). (Grasso,
2013)
Las grasas al entrar en contacto con el oxígeno del aire se oxidan y provocan importantes
cambios en sus características organolépticas. Cuando una grasa comienza a oxidarse se
forman diversos compuestos; entre ellos, se encuentran los peróxidos, que se consideran los
primeros productos de la oxidación (Jiménez & Carpio, 2010).
El índice de peróxido es el número que expresa, en miliequivalentes de oxígeno activo,
la cantidad de peróxido contenido en 1000 g de la sustancia. Esta prueba debe realizarse
21
inmediatamente después de tomar la muestra para evitar la oxidación de la muestra de
prueba. (USP 39 NF 34, 2016)
La técnica consiste en disolver la muestra problema en ácido acético y cloroformo, luego
se trata con una solución de yoduro de potasio y finalmente el yodo liberado se titula con
una solución valorada de tiosulfato sódico en presencia de almidón como indicador. (Panreac
Química, 2005)
El Índice de Peróxido se calcula mediante la siguiente fórmula:
𝑖 =𝑉 𝑥 𝑁
𝑚 𝑥 1000
En donde:
𝑖 : índice de peróxido en meq. de O2 por Kg del producto
𝑉 : volumen de solución de tiosulfato de sodio empleado en la titulación de la muestra, en
ml.
𝑁 : normalidad de la solución de tiosulfato de sodio
𝑚 : masa de la muestra analizada, en g
Índice de esterificación.
El índice de esterificación es el número de mg de hidróxido de potasio necesario para
saponificar los ésteres en 1,0 g de la sustancia. Si se han determinado el Índice de
Saponificación y el Índice de Acidez, la diferencia entre éstos dos representa el Índice de
Esterificación (USP 39 NF 34, 2016). Además este índice nos permite obtener una mejor
aproximación del peso molecular promedio de los triglicéridos de una grasa. (Manrique,
2016)
La técnica consiste en una valoración ácido-base, en la cual tiene lugar la reacción de
neutralización entre los ácidos grasos libres del aceite y el hidróxido de potasio, utilizando
como indicador una solución de fenolftaleína (García M. P., 2008). Luego se saponifica la
muestra por ebullición en condiciones de reflujo con un exceso de hidróxido de potasio
etanólico, seguido de la valoración del exceso de hidróxido de potasio con una solución
0,5 N de ácido clorhídrico (NTE INEN-ISO 3657, 2013). Simultáneamente para cada
22
determinación debe realizarse un blanco con todos los reactivos, realizado bajo las mismas
condiciones, pero sin la muestra.
El Índice de Esterificación se calcula mediante la siguiente fórmula:
𝑅𝑒𝑠𝑢𝑙𝑡𝑎𝑑𝑜 =[𝑀𝑟 𝑥 (𝑉𝐵 − 𝑉𝑇) 𝑥 𝑁]
𝑊
En donde:
𝑀𝑟 : peso molecular del hidróxido de potasio, 56, 11
𝑉𝐵 : volumen de ácido clorhídrico 0,5 N consumido en la prueba del blanco (ml)
𝑉𝑇 : volumen de ácido clorhídrico 0,5 N consumido en la prueba real (ml)
𝑁 : normalidad exacta del ácido clorhídrico
𝑊 : peso de la sustancia tomada para la prueba (g)
O también se puede aplicar la siguiente fórmula:
Í𝑛𝑑𝑖𝑐𝑒 𝑑𝑒 𝐸𝑠𝑡𝑒𝑟𝑖𝑓𝑖𝑐𝑎𝑐𝑖ó𝑛 = Í𝑛𝑑𝑖𝑐𝑒 𝑑𝑒 𝑆𝑎𝑝𝑜𝑛𝑖𝑓𝑖𝑐𝑎𝑐𝑖ó𝑛 − Í𝑛𝑑𝑖𝑐𝑒 𝑑𝑒 𝐴𝑐𝑖𝑑𝑒𝑧
Índice de hidroxilo.
Muchas muestras que contienen grupos hidroxilo, especialmente grasas y aceites, son
mezclas complejas y carecería de sentido un <<porcentaje de pureza >> basado en una
determinación. Para tales muestras es común expresar un índice de hidroxilo (Connors,
1981). El Índice de Hidroxilo es el número de mg de hidróxido de potasio equivalente al
contenido de hidroxilo de 1,0 g de la sustancia. (USP 39 NF 34, 2016)
Los métodos para la determinación del contenido en hidroxilos no son capaces de
diferenciar, los que están unidos a las cadenas de los ácidos grasos, de los que corresponden
al radical glicérido, en los mono y diglicéridos; por esto, la grasas parcialmente hidroxiladas
pueden presentar un elevado índice de acetilo, sin contener hidroxiácidos (Bailey, 1984). Es
decir este índice no distingue hidroxilos, reaccionan todos los disponibles en la muestra.
(Manrique, 2016)
23
La técnica consiste en acetilar una masa de la muestra con una cantidad en exceso
conocida de anhídrido acético en piridina. El anhídrido acético que no reaccionó se hidroliza
y finalmente el hidrolizado se valora con una solución alcohólica de hidróxido de potasio
utilizando fenolftaleína como indicador (Manrique, 2016). Simultáneamente para cada
determinación debe realizarse un blanco con todos los reactivos, realizado bajo las mismas
condiciones, pero sin la muestra.
El Índice de Hidroxilo se calcula mediante la siguiente fórmula:
𝑅𝑒𝑠𝑢𝑙𝑡𝑎𝑑𝑜 = [(𝑀𝑟 𝑥 𝑁)/𝑊] 𝑥 {𝐵 + [(𝑊 𝑥 𝐴)/𝐶] − 𝑇}
En donde:
𝑀𝑟 : peso molecular del hidróxido de potasio, 56, 11
𝑁 : normalidad exacta del hidróxido de potasio alcohólico
𝑊 : peso de la sustancia tomada para la acetilación (g)
𝐶 : peso de la sustancia tomada para la determinación de ácido libre (g)
Si se conoce el Índice de Acidez de la muestra, calcular el Índice de Hidroxilo
mediante la siguiente fórmula:
𝑅𝑒𝑠𝑢𝑙𝑡𝑎𝑑𝑜 = [(𝑀𝑟 𝑥 𝑁)/𝑊] 𝑥 (𝐵 − 𝑇) + Í𝑛𝑑𝑖𝑐𝑒 𝑑𝑒 𝐴𝑐𝑖𝑑𝑒𝑧
Potenciadores Cognitivos.
Definición.
Los potenciadores cognitivos son sustancias exógenas al organismo que estimulan al
sistema nervioso central con el afán de pretender mejorar las funciones cognitivas (Moreno
& López, 2016), ya que tienen la propiedad de elevar el nivel de vigilancia y la capacidad
para concentrarse en una tarea (incrementando, por ejemplo, el período de atención). (Dale
& Bloomfield, 2015)
Es por eso que los fármacos que mejoran la cognición, conocidos también como Smart
Drugs (drogas inteligentes) o nootrópicos (de las raíces griegas noo- mente y -tropo, giro,
cambio), no sólo representan importantes farmacoterapias para trastornos neurocognitivos
24
como la demencia, el trastorno de déficit de atención y la esquizofrenia sino que también
pueden aumentar el poder cognitivo en personas sanas. (Cakic, 2009)
Por lo tanto los potenciadores de las funciones cognitivas son fármacos que
aparentemente mejoran el rendimiento mental, como por ejemplo respecto a la focalización,
concentración, memoria o motivación, tomando en cuenta que tanto sus efectos como la
duración de los mismos dependerán de la dosis y del período de tratamiento o consumo,
aunque sujetos siempre a diferencias individuales. (Dale & Bloomfield, 2015)
Entonces con un sentido más amplio, se puede decir que los «fármacos potenciadores del
rendimiento» incluyen también entre sus indicaciones la mejora en la adquisición de
habilidades motoras o afectivas, reduciendo por ejemplo la ansiedad asociada con la
ejecución de determinadas tareas, o estimulando los sentimientos de confianza y pertenencia.
(Dale & Bloomfield, 2015)
A pesar de que actualmente estos fármacos ofrecen modestas mejoras en el rendimiento
cognitivo en el mejor de los casos, se cree que futuros nootrópicos abarcarán una amplia
gama de medicamentos que mejoren la memoria, la atención, el estado de alerta, la
motivación, la función ejecutiva, la creatividad o la necesidad de dormir. (Cakic, 2009)
Fármacos utilizados como potenciadores cognitivos.
Los potenciales potenciadores cognitivos farmacológicos incluyen una variedad de
fármacos desarrollados para tratar la disfunción cognitiva. Es decir, estos fármacos se
desarrollaron con el objetivo de mover a individuos cognitivamente alterados hacia arriba en
la escala de capacidad hacia un nivel normal. (Farah, Smith, Ilieva, & Hamilton, 2014)
Cabe recalcar que estos mismos fármacos han sido utilizados como potenciadores
cognitivos por individuos sanos en un intento de lograr una capacidad cognitiva "mejor que
lo normal". (Farah, Smith, Ilieva, & Hamilton, 2014)
Por lo tanto resulta complicado describir el panorama de los fármacos utilizados como
potenciadores de las funciones cognitivas o del rendimiento. Sin embargo, son tres los
principales fármacos asociados habitualmente con la mejora de las funciones cognitivas
(Dale & Bloomfield, 2015): los estimulantes tradicionales, usados principalmente para tratar
el Trastorno por Déficit de Atención con Hiperactividad, los inhibidores de la
acetilcolinesterasa, usados para tratar la enfermedad de Alzheimer, y el modafinil, un
25
estimulante novedoso usado principalmente para tratar la narcolepsia. (Farah, Smith, Ilieva,
& Hamilton, 2014)
Ejemplos de potenciadores cognitivos farmacológicos aparentemente comunes son:
piracetam, metilfenidato (por ejemplo, Ritalin®), sales mixtas de anfetamina (por ejemplo,
Aderall®) y modafinilo (por ejemplo, Provigil®). Originalmente, los dos primeros se
desarrollaron como tratamiento para el Trastorno de Déficit de Atención con Hiperactividad
y el segundo como tratamiento para Narcolepsia, pero ahora se están utilizando para mejorar
el rendimiento en individuos sanos. (Schelle, Faulmuller, Caviola, & Hewstone, 2014)
La evidencia de su beneficio en varios procesos cognitivos ha generado en la ciencia de
los fármacos un nuevo comienzo, en el cual está incrementando el interés por su
investigación con el fin de crear sustancias selectivas que permitan alterar la química natural
del cerebro apostando por conseguir una mejora en la eficiencia cerebral humana. (Moreno
& López, 2016)
Ginkgo Biloba.
En las prácticas tradicionales de la medicina, numerosas plantas se han utilizado para
tratar trastornos cognitivos, incluyendo enfermedades neurodegenerativas como la
enfermedad de Alzheimer y otros trastornos relacionados con la memoria. (Howes, Perry, &
Houghton, 2003)
Cabe recalcar que algunos suplementos dietéticos, tales como polifenoles, resveratrol,
Ginkgo Biloba, curcumina y ácidos grasos omega-3 se informó que tienen efectos positivos
sobre el rendimiento cognitivo. Pero de entre los agentes a base de plantas con potencial
acción neuroprotectora, se ha prestado mucha atención al extracto de Ginkgo Biloba
estandarizado (GBE o EGb 761). (Belviranlı & Okudan, 2014)
Las hojas de esta planta son conocidas por aumentar el flujo de sangre al cerebro y de
proporcionar mayores cantidades de oxígeno a los tejidos (Pranav, 2013). Además se ha
encontrado que el GBE estandarizado (EGb 761), contiene aproximadamente 24% de
glucósidos de flavonoides, 6% de trilactonas terpénicas, 7% de proantocianidinas y ciertos
ácidos orgánicos de bajo peso molecular (Belviranlı & Okudan, 2014), los cuales mejoran el
funcionamiento mental tanto en personas jóvenes como en adultos mayores. (Pranav, 2013)
26
El Ginkgo Biloba tradicionalmente utilizado para el tratamiento de los problemas
circulatorios, se sugirió posteriormente que tenía un efecto sobre la función cognitiva,
incluyendo la enfermedad de Alzheimer; y con el extracto estandarizado de ginkgo biloba
(EGb 761), se mostró que tenía una eficacia similar al donepezil. (Shakir, Coulibaly, &
Kehoe, 2013)
Existen varios mecanismos por los cuales el Ginkgo ejerce su efecto beneficioso sobre el
funcionamiento mental. Se conoce que mejora la circulación al cerebro, por lo cual parece
iniciar la vasodilatación en los capilares, lo que explica el aumento del flujo sanguíneo y,
por tanto, un mayor nivel de oxígeno y nutrientes para las células cerebrales. (Pranav, 2013)
Por lo tanto los extractos de Ginkgo mejoran la transmisión nerviosa en el cerebro y
mejoran la producción y el uso de neurotransmisores dentro del cerebro. Se sabe que los
componentes del Ginkgo actúan como poderosos antioxidantes en el cerebro, eliminando así
los radicales libres que de otro modo causarían la muerte prematura de las células. Además,
el Ginkgo Biloba promueve el metabolismo más eficiente de la glucosa, la principal fuente
de energía del cerebro. Con lo cual el resultado de estas acciones significa una mejora en el
rendimiento del cerebro. (Pranav, 2013)
En un estudio realizado sobre los efectos del extracto de Ginkgo Biloba sobre las
funciones cognitivas en ratas hembra envejecidas dio como resultado, que la suplementación
con GBE mejoró la función cognitiva, disminuyendo el daño oxidativo en el tejido cerebral
y aumentando en varias regiones cerebrales los niveles del factor neurotrófico derivado del
cerebro (BDNF) en plasma en ratas hembra envejecidas, importante mediador molecular de
la neuroplasticidad del cerebro que influye en las funciones cerebrales como el aprendizaje
y la memoria. (Belviranlı & Okudan, 2014)
Otros estudios relacionados con el aprendizaje y memoria han demostrado que el
tratamiento de ratones con EGb 761 mejora la memoria a corto plazo en un paradigma de
evitación pasiva y aumenta la fluidez de la membrana neuronal cerebral, que puede ser una
función de las propiedades antioxidantes y anti-lipoperoxidativas de EGb 761. (Smith &
Luo, 2004)
En cuanto a la eficacia clínica de los extractos de Ginkgo Biloba, incluyendo EGb 761 se
observaron modestas mejoras en la función cognitiva después de la administración a
pacientes con enfermedad de Alzheimer y a los que no tenían esta enfermedad en diversos
estudios, incluidos ensayos aleatorios, doble ciego, controlados con placebo y
multicéntricos. (Howes, Perry, & Houghton, 2003)
27
Ácidos Grasos.
Los aceites y grasas son componentes esenciales de la dieta humana, ya que contienen
ácidos grasos y vitaminas que son indispensables para el crecimiento y la salud de los seres
humanos. (Morillo, Fernández, Hernández, Castillo, & Marquina, 2010)
Los ácidos grasos contribuyen no sólo a la consistencia del material graso sino también,
se encargan del transporte de vitaminas liposolubles; algunos de ellos permiten el
movimiento de proteínas, dan fluidez a las membranas celulares, e intervienen en diversas
funcionalidades biológicas, tales como la antioxidante y las relacionadas con los sistemas
nervioso y visual. (Castaño, Valencia, Murillo, Méndez, & Eras, 2011)
Un grupo especial son los “ácidos grasos omega” que se les reconoce por sus bondades
asociadas con la salud y la nutrición. (Castaño, Valencia, Murillo, Méndez, & Eras, 2011)
Ácidos Grasos Poliinsaturados.
Los ácidos grasos poliinsaturados de cadena larga (AGPICL) son componentes dietarios
que participan en múltiples procesos fisiológicos, donde cumplen un rol estructural en los
fosfolípidos de las membranas celulares y son sustratos para la síntesis de diversos
mediadores fisiológicos. (Valenzuela, Tapia, González, & Valenzuela, 2011)
En los AGPICL encontramos dos grupos principales; los ácidos grasos omega-3 (ω-3) y
omega-6 (ω-6). Dentro de los ácidos grasos omega-3 tenemos como exponente principal al
ácido α-linolénico (C18:3) el cual se puede transformar en el ácido eicosapentaenoico
(C20:5, EPA) y posteriormente en el ácido docosahexaenoico (C22:6, DHA); el exponente
de los ácidos grasos ω-6 es el ácido linoleico (C18:2) y uno de sus derivados más importantes
es el ácido araquidónico (C20:4, AA). Cabe resaltar que los omegas 3 y 6 son ácidos grasos
esenciales para el ser humano debido a que carecen de la maquinaria enzimática necesaria
para biosintetizarlos. (Valenzuela, Tapia, González, & Valenzuela, 2011) (Valenzuela,
Tapia, González, & Valenzuela, 2011)
Las fuentes alimentarias tanto del ácido linoleico como del ácido α-linolénico son los
alimentos de origen vegetal, especialmente los aceites (soya, linaza, canola, entre otros.) y
los frutos secos (almendra, nuez, maní, entre otros). (Valenzuela, Tapia, González, &
Valenzuela, 2011)
28
Si bien los omega-3, por su estructura química con numerosos dobles enlaces, son más
vulnerables al estrés oxidativo, en las células en general y especialmente las neuronas,
pueden reducir el daño ocasionado por el estrés oxidativo a través de las neuroprotectinas
(docosanoides derivados del DHA). (Valenzuela, Tapia, González, & Valenzuela, 2011)
Actualmente se postula que los AGPICL ω-3, especialmente el DHA, pueden ser
utilizados como parte del tratamiento de múltiples neuropatologías, además de la neuropatía
diabética y la enfermedad de Alzheimer, entre las que destacan la enfermedad de Parkinson,
la esclerosis múltiple, la depresión y la esquizofrenia. (Valenzuela, Tapia, González, &
Valenzuela, 2011)
Cabe mencionar que las membranas del tejido cerebral son ricas en ácidos grasos
poliinsaturados omega-3, incluyendo el ácido docosahexaenoico (DHA), que son
importantes para la fluidez de la membrana. El ácido eicosapentaenoico (EPA) también
parece desempeñar un papel neuroprotector. Por lo tanto la falta de tipos específicos de grasa
en la dieta puede ser un factor importante para el deterioro cognitivo y la demencia. (Kröger,
y otros, 2009)
Todos los efectos neuroprotectores del DHA también pueden ser relevantes para el
deterioro cognitivo en el envejecimiento normal. Tanto el DHA como la EPA también son
probablemente protectores contra las enfermedades vasculares, una de las otras causas
principales de la demencia relacionada con la edad. Dado que tanto el costo como los
problemas de toxicidad son mínimos, los lípidos marinos omega-3 son adecuados para la
prevención primaria. (Cole, y otros, 2005)
Existe una creciente evidencia científica de que los ácidos grasos omega-3 son
beneficiosos para la salud humana. Sin embargo, la dieta del mundo occidental es deficiente
en estos tipos de ácidos grasos. Por lo tanto, hay interés en encontrar nuevas fuentes ricas en
ácidos grasos omega-3. (Cisneros, Paredes, Arana, & Cisneros, 2014)
Test de aprendizaje en modelos animales.
Los modelos animales son muy beneficiosos para la comprensión de los fundamentos
psicológicos y fisiológicos de muchos estados patológicos. Tal es el caso por ejemplo, en el
campo del aprendizaje y la memoria, los modelos de animales han sido fundamentales para
dar forma a nuestra comprensión de cómo el cerebro normal y dañado procesa la
información. Es así que la investigación en animales nos ha enseñado que existen múltiples
29
sistemas de memoria que interactúan: competitivamente, cooperativamente o en paralelo-
dependiendo de las demandas cognitivas y la naturaleza psicológica de la tarea. (Narwal, y
otros, 2012)
La evaluación de las funciones cognitivas en roedores representa una variable
experimental crítica en muchos campos de la investigación, es por eso que el uso cada vez
mayor de las pruebas de comportamiento de los animales como "ensayos" para la evaluación
de los efectos sobre el aprendizaje y la memoria ha dado lugar a una considerable
heterogeneidad de datos, particularmente en el campo de la psicofarmacología y del
comportamiento. (Sarter, 2004)
En estos test de aprendizaje la mayoría de los animales se orientan en el espacio para
poder organizar sus conductas en relación con el entorno en el que se encuentran en cada
momento. Dicha orientación espacial es importante para muchos de los repertorios
conductuales de los animales: búsqueda de comida, conducta parental y reproductiva,
regreso al nido o huida a un lugar seguro. En los cuales el aprendizaje y la memoria espacial
se relacionan con la capacidad de adquirir y retener asociaciones de las características del
ambiente, lo que permite al organismo desenvolverse en el espacio (Vicens, Redolat, &
Carrasco, 2003). El proceso final es la construcción de mapas cognitivos del entorno
interpretando la información sensorial obtenida durante la exploración. (Barrera, 2015)
La prueba de cognición es un parámetro extremadamente importante para evaluar los
cambios en la memoria y las habilidades de aprendizaje en los roedores. Para lo cual se han
desarrollado una amplia gama de tareas de comportamiento como es el caso de los laberintos:
el laberinto en Y, el laberinto en T, el brazo radial, el laberinto elevado y el laberinto acuático
de Morris para probar las capacidades cognitivas en roedores. Estas tareas se utilizan con
diferentes paradigmas de comportamiento, incluyendo el aprendizaje de evitación, el
aprendizaje de reversión, la memoria consolidada y la memoria a largo plazo en los estudios
experimentales. (Singh, Kaur, & Sandhir, 2015)
Laberinto Acuático de Morris.
El laberinto acuático de Morris también conocido como Morris Water Maze (MWM) fue
desarrollado por el neurocientífico Richard G. Morris en 1981 con el afán de poner a prueba
el aprendizaje dependiente del hipocampo, incluyendo la adquisición de la memoria espacial
y la memoria espacial a largo plazo en roedores. (Bromley-Brits, Deng, & Song, 2011)
30
Este laberinto es uno de los modelos más empleados en el estudio de la memoria espacial
en roedores. Aquí los animales tienen que nadar desde diferentes puntos de salida situados
en el perímetro de la piscina hasta localizar la plataforma sumergida en el agua, sobre la que
acaban situándose para evitar seguir nadando. Este paradigma resulta de especial interés,
puesto que no necesita de la privación de agua o comida ni de la aplicación de una descarga
eléctrica para motivar la conducta. (Vicens, Redolat, & Carrasco, 2003)
La temperatura del agua oscila entre 18 y 27 °C, lo que hace que los animales quieran
escapar sin sentirse tan estresados como para que se inhiba su conducta de búsqueda de la
plataforma (Chamorro, 2012), cabe mencionar que en el procedimiento habitual, el agua se
vuelve opaca con leche o alguna sustancia no tóxica, aunque se ha demostrado que no es
necesario, ya que el animal nada con la cabeza por encima del agua, lo que le impide ver la
plataforma. (Vicens, Redolat, & Carrasco, 2003).
El entorno de este laberinto suele disponer de amplias referencias ambientales, llamadas
claves espaciales (luces, cajas, muñecos, etc), que ayudan a los animales a orientarse
espacialmente en su búsqueda de la plataforma. Ello permite ejecutar desde tareas simples a
complicados protocolos de entrenamiento que implican mecanismos también diferentes de
navegación, aprendizaje y memoria. (Chamorro, 2012)
Con este test es posible valorar la memoria de referencia, si la plataforma permanece en
el mismo lugar durante los ensayos; y la memoria de trabajo, cuando se cambia la plataforma
de posición en cada ensayo. (Vicens, Redolat, & Carrasco, 2003)
El aprendizaje se mide a partir de la latencia de escape, es decir, el tiempo que el roedor
tarda en encontrar la plataforma en cada ensayo de entrenamiento. Una menor latencia se
interpreta como un mayor aprendizaje. (Chamorro, 2012)
Además, cabe recalcar que en este test de aprendizaje se requieren relativamente pocos
ensayos, ya que los animales aprenden rápido, guiándose por claves extra-laberinto, y se
pueden valorar los efectos de los fármacos sobre los procesos de aprendizaje y memoria de
forma más efectiva que en otros laberintos de adquisición más lenta, como el laberinto radial,
en el que resulta más difícil distinguir entre los efectos agudos y crónicos. No obstante, hay
una correlación elevada entre los efectos de las manipulaciones farmacológicas en el
laberinto acuático y el radial, aunque el primero parece ser más sensible a las alteraciones
cognitivas. (Vicens, Redolat, & Carrasco, 2003)
31
Por lo tanto el aprendizaje espacial en el laberinto acuático es un método comúnmente
utilizado y confiable para evaluar la función cognitiva dependiente del hipocampo en
roedores, ya que dicho laberinto ha demostrado ser una prueba robusta y confiable que está
fuertemente correlacionada con la plasticidad sináptica del hipocampo y la función del
receptor NMDA (de N-metil-D-aspartato). (Singh, Kaur, & Sandhir, 2015)
Laberinto Radial de 8 brazos.
El laberinto de brazos radiales utilizado para medir el aprendizaje espacial y la memoria
en roedores fue diseñado por Olton y Samuelson en 1976. Este laberinto originalmente
consiste en ocho brazos equidistantes y espaciados, los cuales se proyectan radialmente
desde una pequeña plataforma central circular. (Narwal, y otros, 2012)
Este test de aprendizaje consiste en colocar al inicio de cada ensayo pequeñas cantidades
de comida al final de cada uno de los brazos (Barrera, 2015) y la tarea de los roedores
expuestos a esta situación implica recorrer cada brazo del laberinto, para recoger el alimento
que estaba ubicado en sus extremos (Soto & Saavedra, 2005), con la práctica, los animales
aprenden a obtener la comida con la menor cantidad de visitas posibles a los brazos del
laberinto. (Barrera, 2015)
En los procedimientos típicos en los que se usa el laberinto radial y se estudia la memoria
de trabajo espacial y además se evalúa la integridad de la corteza frontal y el hipocampo
(Haider, y otros, 2011), una característica a resaltar es que el criterio para una respuesta
correcta es que el roedor no elija los lugares previamente visitados. Se dice entonces que el
roedor recuerda qué lugares ya ha visitado, por lo que tenderá a dirigirse sólo a aquellos que
quedan sin visitar para no cometer un error (Cabrera, 2009). Es por lo cual que la estrategia
de respuesta estaría basada en el aprendizaje previo acerca de la relación entre claves distales
o alocéntricas del ambiente y cada uno de los brazos del laberinto, lo que permitiría
identificar las avenidas ya visitadas. (Soto & Saavedra, 2005)
Según esta estrategia, los roedores tenderán a dirigirse siempre a los lugares que quedan
sin visitar, en donde es más probable encontrar alimento. Los resultados en diversos
experimentos han mostrado esta tendencia a elegir estaciones no visitadas anteriormente.
(Cabrera, 2009)
32
Este laberinto ha sido utilizado extensamente en estudios de memoria espacial en
animales, lo que incluye estudios acerca de los factores sensoriales, neurofisiológicos,
farmacológicos y etarios de este tipo de memoria (Soto & Saavedra, 2005).
Marco Legal
Constitución de la República del Ecuador
TITULO VII: Régimen del buen vivir. Capítulo primero
Sección segunda. Salud
Art. 361.- El Estado ejercerá la rectoría del sistema a través de la autoridad sanitaria
nacional, será responsable de formular la política nacional de salud, y normará, regulará y
controlará todas las actividades relacionadas con la salud, así como el funcionamiento de las
entidades del sector. (Constitución de la República del Ecuador, 2008)
Sección octava. Ciencia, tecnología, innovación y saberes ancestrales
Art. 385.- El Sistema Nacional de ciencia, tecnología, innovación y saberes ancestrales,
en el marco del respeto al ambiente, la naturaleza, la vida, las culturas y la soberanía, tendrá
como finalidad:
1. Generar, adaptar y difundir conocimientos científicos y tecnológicos.
2. Recuperar, fortalecer y potenciar los saberes ancestrales.
3. Desarrollar tecnologías e innovaciones que impulsen la producción nacional,
eleven la eficiencia y productividad, mejoren la calidad de vida y contribuyan a
la realización del buen vivir.
(Constitución de la República del Ecuador, 2008)
Art. 387.- Será responsabilidad del Estado:
2. Promover la generación y producción de conocimiento, fomentar la investigación
científica y tecnológica, y potenciar los saberes ancestrales, para así contribuir a
la realización del buen vivir, al sumak kawsay.
4. Garantizar la libertad de creación e investigación en el marco del respeto a la ética,
la naturaleza, el ambiente, y el rescate de los conocimientos ancestrales.
5. Reconocer la condición de investigador de acuerdo con la Ley.
(Constitución de la República del Ecuador, 2008)
33
Ley Para la Conservación y Uso Sustentable de la Biodiversidad
TITULO IV: Del uso sustentable de la biodiversidad y sus funciones.
Capítulo I. De la Utilización Sustentable de la Biodiversidad
Artículo 64.- Las actividades productivas que se realicen en el país y que utilicen recursos
biológicos en sus procesos, tienen la obligación de usar sustentablemente dichos recursos de
un modo y a un ritmo que no ocasione el deterioro y la disminución a largo plazo de la
diversidad biológica, el patrimonio cultural asociado y la salud humana.
(Ley Para la Conservación y Uso Sustentable de la Biodiversidad, 2011)
Código Civil
TÍTULO INNUMERADO DE LOS ANIMALES Y DE SU DOMINIO, POSESIÓN Y
LIMITACIONES
Art. 3.- Agréguese los siguientes artículos en el Título innumerado de los animales y de
su dominio, posesión y limitaciones.
Artículo innumerado C.- El dominio o posesión de animales para experimentación
científica se rige por la legislación específica y normas de bioseguridad especiales en el
marco de la Constitución de la República. Queda prohibida la propiedad o posesión de
animales para experimentación en cosméticos y para creación y fabricación de armas.
(Código Civil, 2015)
Artículo innumerado E.- El dominio o posesión de animales permitidos por la ley los
cuales sean usados para la alimentación o experimentación científica estarán regidos bajo
buenas prácticas de analgesia, anestesia y eutanasia, para manipulación que lo requiera y
siempre se observará las normas bioéticas.
Si es necesaria la muerte de un animal, ésta debe ser instantánea, indolora y no comportará
angustia injustificada alguna al animal.
La experimentación animal que implique un sufrimiento físico o psicológico es
incompatible con los derechos del animal y están prohibidos de realizar o autorizar por la
persona propietaria o tenedora. (Código Civil, 2015)
Hipótesis
Hi: El aceite fijo de Sacha Inchi es un potenciador cognitivo similar al Ginkgo Biloba.
Ho: El aceite fijo de Sacha Inchi no es un potenciador cognitivo similar al Ginkgo Biloba.
34
Conceptualización de las Variables
Variable independiente.
Dosis de aceite de Sacha Inchi: Cantidades de aceite que se van a administrar a los roedores
para determinar si dicha sustancia posee el efecto de potenciador cognitivo que se busca.
Variables dependientes.
Latencia de escape en el Laberinto Acuático de Morris: Tiempo empleado por el roedor
para encontrar la plataforma sumergida.
Latencia de escape en el Laberinto Radial de 8 Brazos: Tiempo empleado por el roedor
en visitar los 8 brazos hasta obtener las recompensas alimenticias que se encontraban en los
extremos.
Número de Elecciones Correctas de los brazos en el Laberinto Radial de 8 Brazos:
Cuando el roedor visita una sola vez cada brazo del laberinto hasta conseguir el alimento
que se encuentra en el extremo, sin repetir la entrada.
Número de Elecciones Incorrectas de los brazos en el Laberinto Radial de 8 brazos:
Cuando el roedor visita más de una vez el mismo brazo para conseguir el alimento.
35
Capítulo III
Marco Metodológico
Diseño de la Investigación
La presente investigación correspondió al paradigma cuantitativo el cual se basa en un
modelo de razonamiento lógico-deductivo, para la formación de conceptos, la definición
operacional y la medición de las definiciones operacionales (Medina C. I., 2001), haciendo
uso de la recolección de datos y su análisis para contestar las preguntas de investigación y
probar las hipótesis que fueron establecidas previamente; mediante la aplicación de
herramientas estadísticas para establecer con exactitud, patrones de comportamiento en una
población experimental (Mortis, Rosas, & Chaires, 2007), debido a que en esta investigación
se determinó la actividad nootrópica del aceite de Sacha Inchi en modelos animales con
roedores de la especie Mus musculus mediante una cuantificación de las respuestas obtenidas
después de la realización de los test de aprendizaje.
El nivel de investigación que se aplicó en este estudio está dentro del nivel explicativo, el
cual está dirigido a responder por las causas de los eventos y fenómenos físicos, es decir se
enfoca en explicar por qué ocurre un fenómeno y en qué condiciones se manifiesta, o porqué
se relacionan dos o más variables (Hernández, Fernández, & Baptista, 2006), debido a que
en este estudio se determinó tanto la latencia de escape como el número de aciertos y errores
que lograron los roedores de la especie Mus musculus en los laberintos en función de las
dosis administradas del aceite de Sacha Inchi para la determinación de la actividad
nootrópica.
Los tipos de investigación empleados fueron de tipo experimental y bibliográfico; de tipo
experimental ya que se llevó a cabo para analizar si una o más variables independientes
afectan a una o más variables dependientes (Hernández, Fernández, & Baptista, 2006), es
decir se basa en la manipulación de las variables experimentales no comprobadas,
en condiciones rigurosamente controladas, con el fin de describir de qué modo o por qué
causa se produce una situación o acontecimiento particular (Grajales, 2000), y de tipo
bibliográfico ya que permitió, entre otras cosas, evitar emprender investigaciones ya
realizadas, y buscar información sugerente para apoyar la presente investigación, entre otras
finalidades, para garantizar la calidad de los fundamentos teóricos de la investigación
(Rodríguez M. , 2013).
36
Métodos y Materiales
Se utilizó dos test de aprendizaje: Laberinto Acuático de Morris y Laberinto Radial de 8
brazos, en los cuales, los roedores de la especie Mus musculus fueron sometidos a dos fases
de experimentación: entrenamiento y pruebas de adquisición. Con lo cual se estudiaron los
efectos del aceite de Sacha Inchi en el desempeño de los roedores en los laberintos;
administrándolo por vía oral antes y durante el entrenamiento para finalmente evaluar sus
efectos en la fase de adquisición a fin de determinar el aumento de la capacidad cognitiva.
Población Experimental.
Una población experimental de 24 ratones (machos y hembras) de la especie Mus
musculus divididos en cuatro grupos de 6 ratones cada uno (tres machos y tres
hembras), de acuerdo a lo planteado en la presente investigación.
Los cuatro grupos fueron divididos de la siguiente manera: un grupo de control
negativo (agua), un grupo de control positivo (Ginkgo Biloba), y dos grupos a los
cuales se les administró diferentes dosis del Aceite de Sacha Inchi.
Materiales.
Equipos.
Molino manual marca Corona
Estufa de calentamiento WSU 400
Prensa hidráulica de 50 toneladas
Centrifugadora marca Hettich Rotofix II
Balanza analítica ± 0.0001 g marca Mettler Toledo XSE204
Balanza analítica ± 0.001 g marca Mettler PJ360
Valorador volumétrico de Karl Fischer V20 marca Mettler Toledo
Refractómetro Abbé
Cocineta eléctrica
Baño María
Cromatógrafo de gases acoplado a un espectrómetro de masas marca Agilent
Technologies (Agilent 5977E GC/MSD)
Micropipetas de 2-20 μL y de 20-200 μL
37
Laberinto Acuático de Morris
Laberinto Radial de 8 brazos
Materiales.
Guantes
Papel aluminio
Pliegos de papel empaque
Tela sintética (organdí o visillo)
Frascos de vidrio ámbar de 120 ml
Tubos de ensayo
Gradilla para tubos
Cajas Petri plásticas estériles
Matraces Erlenmeyer de 125, 250 y 500 ml
Vasos de precipitación de 25, 100 y 250 ml
Pipetas volumétricas de 10 y 25 ml
Pipetas graduadas de 5 y 10 ml
Probetas de 10, 50 y 100 ml
Refrigerantes de reflujo
Soportes universales y pinzas
Picnómetros de 10 ml
Embudos de separación de 500 ml
Desecador
Buretas de 25 y 50 ml
Gavetas de plástico y malla metálica
Alimento para cuyes y conejos en fase de engorde de Pronaca
Bebederos para hamsters
Talco
Termómetro
Cronómetro
38
Caja de disección
Reactivos.
Hipoclorito de sodio al 0,075 % (v/v)
Medio Trypticase Soy Broth (TSB)
Medio Trypticase Soy Agar (TSA)
Medio Sabouraud Dextrose Agar (SAB)
Medio MacConkey Broth
Aceite de Sacha Inchi
Extracto de Ginkgo Biloba con 26,49 % de Ginkgólidos A y B, Lote: GS150820
Agua destilada
Alcohol etílico al 96 %
Solución de Wijs
Cloroformo
Yoduro de potasio al 5 %
Yoduro de potasio al 15 %
Tiosulfato de sodio 0,1 N
Tiosulfato de sodio 0,002 N
Mezcla ácido acético-cloroformo 3:1
Mezcla alcohol-éter 1:1 previamente neutralizado
Hidróxido de sodio 0,1 N
Hidróxido de sodio 0,5 N en metanol
Ácido clorhídrico 0,5 N
Éter de petróleo
Hidróxido de potasio al 50 %
Hidróxido de potasio 0,02 N
Hidróxido de potasio alcohólico 0,5 N
Acetona
Fenolftaleína
39
Almidón al 1 %
BF3-metanol
Cloruro de sodio (solución saturada en agua)
Hexano
Piridina-Anhídrido acético 3:1
Alcohol butílico previamente neutralizado
Métodos.
Análisis Microbiológico de las semillas de Sacha Inchi.
Recuento de Microorganismos Aerobios Totales (RTMA):
Se realizó una dilución 1/10 es decir se dispersó 1 g de la semilla triturada de Sacha Inchi
en un tubo con 9 ml de TSB, de esta dilución se tomó 1 ml y se la colocó en la caja petri
estéril, luego se vertió 25 ml de medio Trypticase Soy Agar (TSA) sobre la muestra agitando
ligeramente para que se distribuya, aplicando la técnica de siembra por vertido. Las cajas
fueron incubadas durante 24 horas a 37 °C, reportándose el número de microorganismos
encontrados en la muestra como ufc/g. El análisis fue realizado por duplicado.
Recuento Total de Mohos y Levaduras (RTML):
De la dilución realizada en el RTMA se tomó 1 ml y se la colocó en la caja petri estéril,
luego se vertió 25 ml de medio Sabouraud Dextrose Agar (SAB) sobre la muestra agitando
ligeramente para que se distribuya, aplicando la técnica de siembra por vertido. Las cajas
fueron incubadas durante 7 días a 25 °C, reportándose el número de microorganismos
encontrados en la muestra como ufc/g. El análisis fue realizado por duplicado.
Pruebas de Microorganismos específicos:
Identificación de Escherichia coli:
Se dispersó 1 g de la semilla triturada de Sacha Inchi en un tubo con 9 ml de TSB, se
mezcla y se deja reposar 5 min. Luego se incuba a 37 °C durante 24 horas para revitalizar la
muestra. Después se agita el cultivo revitalizado y se transfiere 1 ml a un frasco con 100 ml
de caldo de enriquecimiento MacConkey y se incuba por 72 horas a 37 °C. Si no hay
crecimiento se reportará como Ausencia, caso contrario si hay crecimiento se evidenciará
turbidez y cambio de color del medio de morado a amarillo, para lo cual se hará un subcultivo
por estriación en una placa de Agar MacConkey, se observará la morfología de las colonias y
se realizarán las pruebas confirmatorias.
40
Extracción del aceite de las semillas de Sacha Inchi por prensado en frío.
1. Las semillas de Sacha Inchi fueron adquiridas a través de la empresa Agroindustrias del
Noroccidente ubicada en Puerto Quito – Ecuador.
2. Seleccionar de forma manual las semillas de Sacha Inchi, verificando que las almendras
(semilla sin cáscara) estén en buen estado es decir que no tengan ninguna lesión ya sea
que estén comidas por insectos o a su vez que sus tejidos estén deteriorados o
envejecidos.
3. Desinfectar las almendras, primero lavándolas con agua a fondo y luego sumergiéndolas
en una solución de Hipoclorito de sodio al 0,075 % (v/v) por 3 minutos; posteriormente
se las enjuagó con agua destilada.
4. Secar las semillas en la estufa durante 1 hora a 35°C., para ello las semillas fueron
esparcidas en cajas de papel empaque de 40 x 30 x 3 cm.
5. Triturar las semillas en un molino manual hasta obtener partículas de menor tamaño
para facilitar la extracción del aceite cuando sean sometidas estas partículas a la prensa
hidráulica.
6. Colocar las semillas trituradas en unas bolsas elaboradas manualmente con tela sintética
(organdí o visillo) de 10 x 4 cm.
7. Poner estas bolsas en un tubo de acero inoxidable de 2 pulgadas, en cuya base tiene una
tapa con orificios para filtrar aceite, el mismo que fue sometido a una prensa hidráulica.
8. El prensado se lo realizó con una prensa hidráulica de 50 toneladas, y la extracción del
aceite se llevó a cabo en un tiempo de 3 - 5 minutos.
9. Purificar el aceite obtenido mediante centrifugación durante 20 min a 4200 rpm para
eliminar las partículas en suspensión presentes.
10. Envasar el aceite en frascos de vidrio ámbar de 120 ml y almacenarlo en refrigeración a
4 °C hasta la realización del control de calidad del aceite.
Caracterización Fisico-química del aceite.
Densidad.
Para la determinación de la Densidad se siguió el procedimiento que está establecido en
la Norma INEN NTE INEN 0035:2012 Primera revisión, correspondiente a ACEITES Y
GRASAS DE ORIGEN ANIMAL Y VEGETAL. DETERMINACIÓN DE LA DENSIDAD
RELATIVA.
41
Humedad.
Para la determinación de la Humedad se siguió el procedimiento que está establecido en
el Volumen I de la USP 39 NF 34 del 2016, correspondiente al capítulo <<921
DETERMINACIÓN DE AGUA>>, en el apartado de la página número 807 - 809 que dice
DETERMINACIÓN DE AGUA haciendo referencia al Método Ia (Valoración Volumétrica
Directa).
Materia insaponificable.
Para la determinación de la Materia insaponificable se siguió el procedimiento que está
establecido en la Norma INEN NTE INEN 41, correspondiente a GRASAS Y ACEITES
COMESTIBLES. DETERMINACIÓN DE LA MATERIA INSAPONIFICABLE.
Índice de refracción.
Para la determinación del Índice de refracción se siguió el procedimiento utilizado en el
Laboratorio de la OSP.
Índice de acidez.
Para la determinación del Índice de acidez se siguió el procedimiento utilizado en el
Laboratorio de la OSP que está basado en el método oficial de la Norma INEN NTE INEN-
ISO 660:2013, correspondiente a ACEITES Y GRASAS DE ORIGEN ANIMAL Y
VEGETAL. DETERMINACIÓN DEL ÍNDICE DE ACIDEZ Y DE LA ACIDEZ (IDT).
Índice de saponificación.
Para la determinación del Índice de saponificación se siguió el procedimiento utilizado
en el Laboratorio de la OSP que está basado en el método oficial de la Norma INEN NTE
INEN 40, correspondiente a GRASAS Y ACEITES COMESTIBLES. DETERMINACIÓN
DEL ÍNDICE DE SAPONIFICACIÓN.
Índice de esterificación.
Para la determinación del Índice de esterificación se siguió el procedimiento que está
establecido en el Volumen I de la USP 39 NF 34 del 2016, correspondiente al capítulo <<401
GRASAS Y ACEITES FIJOS>>, en el apartado de la página número 326 que dice ÍNDICE
DE ESTERIFICACIÓN.
42
Índice de hidroxilo.
Para la determinación del Índice de hidroxilo se siguió el procedimiento que está
establecido en el Volumen I de la USP 39 NF 34 del 2016, correspondiente al capítulo <<401
GRASAS Y ACEITES FIJOS>>, en el apartado de la página número 326 que dice ÍNDICE
DE HIDROXILO.
Índice de yodo.
Para la determinación del Índice de yodo se siguió el procedimiento utilizado en el
Laboratorio de la OSP que está basado en el método oficial de la AOAC International of
Official Methods of Analysis, 19th Edition (2012), correspondiente a la AOAC Official
Method 993.20 Iodine Value of Fats and Oils.
Índice de peróxido.
Para la determinación del Índice de peróxido se siguió el procedimiento utilizado en el
Laboratorio de la OSP que está basado en el método oficial de la Norma INEN NTE INEN
277, correspondiente a GRASAS Y ACEITES. DETERMINACIÓN DEL ÍNDICE DE
PERÓXIDO.
Composición Química del aceite.
Para determinar la cantidad de ácidos grasos poliinsaturados (omegas 3, 6 y 9) presentes
en el aceite de Sacha Inchi, se realizó un análisis de Perfil lipídico por Cromatografía de
Gases en el Laboratorio del Área de Investigación de la Facultad de Ingeniería Química.
Preparación de la muestra.
La preparación de los ésteres metílicos de ácidos grasos se la realizó de acuerdo al método
utilizado en el Laboratorio de la OSP que está basado en el método oficial de la AOCS Ce
2-66.
Parámetros usados en el análisis cromatográfico.
Una vez obtenido los metil ésteres, fueron analizados en un equipo de cromatografía de
gases acoplado a un espectrómetro de masas marca Agilent Technologies, el cual consta de
un Agilent 7820A GC y un Agilent de la serie 5977E GC/MSD.
43
Dicho sistema está equipado con inyección Split-splitless, modo de ionización EI
(impacto electrónico), sistema de inserción directa controlado por el software MassHunter.
Columna DB-5ms compuesta de Fenilo al 5%, dimetil arileno siloxano al 95% (de 30 m de
longitud x 0,25 mm de diámetro interno x 0,25 μm de espesor de la película) y base de datos
del Instituto Nacional de Estándares y Tecnología (NIST).
La temperatura del inyector fue de 250° C manteniéndose así durante toda la corrida
cromatográfica, la temperatura del horno 100° C durante 2 minutos, después se llevó hasta
300° C con una razón de 7° C/min, y se mantuvo allí durante 5 minutos. Volumen de
inyección 1 μL, modo de inyección de split 4:1, modo de control de flujo velocidad lineal 4
mL/min, flujo en la columna de 1,0 mL/min, velocidad lineal del gas 37,293 cm/seg, gas de
arrastre helio, temperatura de la fuente de iones 250° C, temperatura de interfase 280° C,
tiempo de inicio 3 min, tiempo de finalización 35,571 min. La identificación de los picos se
la realizó comparando con los tiempos de retención de los estándares. La estandarización de
los parámetros instrumentales para la técnica cromatográfica se basó del artículo de (López,
Arrubla, & Guerrero, 2009).
Protocolo del Experimento.
1. Dar a los ratones una alimentación basada en una dieta estándar para roedores y agua
durante todo el experimento (Haider, y otros, 2011).
2. Al inicio del experimento los animales fueron divididos en cuatro grupos que constaban
de 6 ratones (tres machos y tres hembras) cada uno: un grupo control negativo al cual se
le administró agua 25 uL, un control positivo al cual se les administró una dosis de Ginkgo
Biloba (3.43 mg/Kg), y dos grupos de ensayo a los cuales se les administró diferentes
dosis del aceite de Sacha Inchi: dosis 1 (487.08 mg/Kg) equivalente a 12.86 mg de
omega3/Kg y dosis 2 (974.16 mg/Kg) equivalente a 25.72 mg de omega3/Kg.
3. Administrar por vía oral las sustancias a los ratones con ayuda de micropipetas durante
42 días: en los cuales se incluyen el entrenamiento con los dos laberintos que duró 5 días,
y las pruebas de adquisición tanto en el Laberinto Acuático de Morris que duró 1 semana
como en el Laberinto Radial de 8 brazos que se llevó acabo también en 1 semana para
evaluar sus efectos en el aprendizaje (Haider, y otros, 2011).
4. Después de que han transcurrido 30 min de haberles administrado las sustancias se realizó
las respectivas pruebas ya sea de entrenamiento o de la adquisición de la memoria y el
aprendizaje con cada uno de los laberintos.
44
Método 1. Laberinto Acuático de Morris.
Animales.
Para el experimento se utilizaron ratones machos y hembras de la cepa Mus musculus, de
aproximadamente 3 meses de edad y con un peso aproximado de entre 25 g para las hembras
y 42 g para los machos al inicio de la investigación. Los ratones fueron colocados en jaulas
de plástico con acceso libre tanto a su comida como al agua (Haider, y otros, 2011). El peso
corporal de todos los ratones fue monitoreado semanalmente.
Aparato.
El aparato que se utilizó en esta investigación consistió en un tanque circular hermético
elaborado en tol galvanizado de 100 cm de diámetro y 50 cm de profundidad (Wenk, 2004),
el cual fue dividido en cuatro cuadrantes iguales (Singh, Kaur, & Sandhir, 2015) con ayuda
de una cuerda para tener como referencia qué cuadrante es el que más visitaban los ratones.
La plataforma de escape cuadrangular de 10 cm de base x 30 cm de altura elaborada en
tol galvanizado fue sumergida 1 cm por debajo de la superficie del agua en uno de los
cuadrantes (cuadrante objetivo) (Singh, Kaur, & Sandhir, 2015), ésta plataforma era lo
suficientemente pesada como para permanecer en posición vertical cuando estuviera
sumergida (Wenk, 2004). Además se ubicaron varias señales distales alrededor del tanque
para orientar al ratón mientras navegaba dentro de la piscina (Singh, Kaur, & Sandhir, 2015).
Cabe mencionar que la plataforma permaneció en una posición fija tanto durante el
entrenamiento como en los ensayos que se realizó.
A continuación se procedió a llenar el tanque circular con agua, tomando en cuenta que
la plataforma quede sumergida, cabe mencionar también que el agua se volvió opaca
agregando una dispersión de talco en agua al 75 % (p/v). La temperatura del agua era
monitoreada constantemente para que se mantuviera aproximadamente entre 27 y 32° C lo
que hace que los animales quieran escapar sin sentirse tan estresados como para que se inhiba
su conducta de búsqueda de la plataforma (Chamorro, 2012). También fue útil disponer de
un amplio suministro de toallas cerca de los animales para mantenerlos secos y calientes
durante los ensayos (Wenk, 2004).
El laberinto que se colocó sobre el piso, disponía además de una línea de drenaje y una
válvula para facilitar la limpieza del tanque (Vorhees & Williams, 2006).
45
Figura 1: Laberinto Acuático de Morris
Fuente: (Tobar. A, 2018)
El test del Laberinto Acuático de Morris estaba compuesto por las siguientes etapas:
Entrenamiento: Tiempo establecido cinco días; dentro del cual, los dos primeros
días la plataforma no se encontraba sumergida para que pudiera ser visualizada por
los ratones, a fin de que se orienten hacia ella; en los tres días restantes la plataforma
estaba sumergida con lo cual se esperaba que si el animal ha aprendido nadaría hacia
donde estaba situada la plataforma o a su vez nadaría más tiempo en el cuadrante
meta (Singh, Kaur, & Sandhir, 2015).
Para lo cual se introdujo al ratón en la piscina desde la posición de inicio seleccionada
(Cuadrante IV) para que buscara la plataforma en el cuadrante meta (Cuadrante I)
durante un tiempo máximo de 120 seg. El ensayo se detenía después de este tiempo
o después de que el animal llegara a la plataforma y permaneciera en ella 5 o 10 seg.
En el caso de no encontrarla en el tiempo máximo establecido se le ayudó al ratón a
orientarse para que llegara a la plataforma y permaneciera ahí durante 10 a 20 seg
(Vicens, Redolat, & Carrasco, 2003).
46
Después se retiró al ratón de la plataforma y se lo dejó descansar durante 5 min antes
de iniciar el siguiente ensayo. Este procedimiento se repitió a lo largo del
entrenamiento y durante los distintos ensayos. La capacidad del animal para localizar
eficientemente la plataforma dependía de la utilización de las claves que rodeaban a
la piscina, por lo cual fueron necesarias las señales extra-laberinto para localizar la
meta invisible (Vicens, Redolat, & Carrasco, 2003). En este caso se dispuso de
señales circundantes como por ejemplo una puerta, una silla, el experimentador y
unas figuras coloridas en la pared del cuadrante meta, para facilitar el aprendizaje de
los roedores (Soto & Saavedra, 2005).
Pruebas de Adquisición: Tiempo establecido siete días.
1. Insertar la plataforma en el cuadrante I de la piscina, y sumergirla para que los
ratones no la puedan visualizar (Wenk, 2004).
2. Ubicar al ratón en la posición de inicio deseada (Cuadrante IV), y liberarlo a
nivel del agua (no se lo deja caer). El cronómetro se inicia en el momento en que
el animal fue liberado (Vorhees & Williams, 2006).
3. Detener el cronómetro y registrar el tiempo (en segundos) cuando el animal
alcanzó o tocó la plataforma (porque algunos animales suben inmediatamente en
la plataforma, pero hay excepciones). El límite de prueba estándar es de 2 min
por ensayo. Los animales que no encontraron la plataforma dentro de este límite
de tiempo fueron colocados en la plataforma o a su vez se les dirigió a ella
(Vorhees & Williams, 2006).
4. Permitir que el ratón permanezca en la plataforma durante 5 a 10 segundos
(Vicens, Redolat, & Carrasco, 2003). Esto da al experimentador tiempo para
volver a un lugar apropiado en el lado de la piscina para estar listo para el
siguiente paso (Wenk, 2004).
El objetivo de dejar al animal en la plataforma es permitir que se oriente hacia
su posición en el espacio y recuerde la posición de la meta en relación con las
señales circundantes. Sin embargo, los animales también pueden aprender lo que
necesitan durante su navegación a la plataforma (Vorhees & Williams, 2006).
5. Retirar al ratón de la piscina y esperar durante 5 minutos para que haya un
intervalo de tiempo entre ensayos (Wenk, 2004).
Es decir permitir que el animal permanezca 5 o 10 seg en la plataforma, luego
retirarlo a su jaula y probar el segundo animal en el ensayo 1 y repetir esta
rotación hasta que todos los animales han completado el ensayo 1, después se
repitió el mismo proceso para los ensayos posteriores. Este último método
mejora el rendimiento de aprendizaje en ratones (Vorhees & Williams, 2006).
47
6. Colocar al siguiente ratón en la piscina desde el mismo lugar de partida y con la
plataforma en la misma ubicación, registrar el tiempo que el ratón tardó en
encontrar la plataforma (Wenk, 2004).
7. Con cuatro ensayos al día por ratón (Wenk, 2004), se tardaban alrededor de
1 min en el primer día y progresivamente se iba requiriendo menos tiempo por
animal cada día, a partir de entonces hasta completar los 7 días de prueba (28
ensayos) (Vorhees & Williams, 2006).
8. En los días siguientes, se repitieron los ensayos con la plataforma en la misma
ubicación que el primer día (Wenk, 2004).
9. Finalmente se procedió a realizar el análisis de los datos obtenidos.
Método 2. Laberinto Radial de 8 Brazos.
Animales.
Para el experimento se utilizaron ratones machos y hembras de la cepa Mus musculus, de
aproximadamente 3 meses de edad y con un peso aproximado de entre 25 g para las hembras
y 42 g para los machos al inicio de la investigación. Los ratones fueron colocados en jaulas
de plástico con acceso restringido aproximadamente en un 50 % a su alimentación durante
una semana antes de someterlos a la prueba del laberinto radial de 8 brazos, pero tenían
acceso libre al agua (Haider, y otros, 2011). El peso corporal de todos los ratones fue
monitoreado semanalmente.
Aparato.
El laberinto radial de 8 brazos que se utilizó en esta investigación fue elaborado en tol
galvanizado, el cual se colocó elevado a 1 m desde el suelo (Wenk, 2004), dicho laberinto
estaba compuesto de ocho brazos idénticos de 35 cm de longitud x 5 cm de ancho
distribuidos radialmente, unidos a una plataforma central con un diámetro de 20 cm para
acomodar al animal y permitir que se movilice fácilmente entre los brazos. La plataforma
central estaba rodeada de una pared de 25 cm de altura, con unas puertas tipo guillotina que
conectarán a cada brazo las cuales se pueden abrir o cerrar para permitir o impedir la entrada
de los ratones (Wenk, 2004). Además cada brazo disponía de un orificio de 5 mm de
profundidad a 1 cm del extremo, que se utilizaba como recipiente para mantener la comida
fuera de la vista del ratón (Haider, y otros, 2011), y las paredes a lo largo del borde de los
brazos del laberinto eran cortas, de 2 cm de altura, las cuales evitaban que el animal se caiga
del laberinto durante la ejecución de la tarea (Wenk, 2004).
48
El laberinto radial de 8 brazos fue ubicado en una habitación cerrada que contenía varias
señales externas (ambientales) que eran visibles para el ratón mientras permanecía en el
laberinto (Wenk, 2004). En este caso se utilizaron ciertas señales externas como por ejemplo
una puerta, una mesa, una silla, algunos diseños simples en las paredes de los extremos de
los brazos y el experimentador, para facilitar el aprendizaje de los roedores (Soto &
Saavedra, 2005).
No se dispuso de medios especiales para disipar el efecto del olfato porque en el laberinto
radial la visión es más importante que el olfato (Haider, y otros, 2011).
Figura 2: Laberinto Radial de 8 brazos
Fuente: (Tobar. A, 2018)
El test del Laberinto Radial de 8 brazos estaba compuesto por las siguientes etapas:
Entrenamiento: Tiempo establecido cinco días.
1. Ubicar la recompensa de alimento en la jaula por algunos días para aclimatar al
ratón a la recompensa en un ambiente familiar para que se sintiera cómodo con
el experimentador (Wenk, 2004).
49
2. Difundir recompensas de alimento alrededor de todo el laberinto para fomentar
la exploración. La aclimatación debe requerir sólo 2 días (Wenk, 2004).
Durante este ensayo de habituación, los ratones tenían el acceso libre a todos los
brazos y visitaron libremente cada brazo tantas veces como quisieran (Haider, y
otros, 2011).
3. El primer día colocar dos ratones en el laberinto al mismo tiempo, debido a que
el uso de dos ratones reduce el tiempo que tardaría cada uno en aclimatarse al
laberinto (Wenk, 2004).
4. El segundo día dejar que cada ratón explore el laberinto individualmente para
que pueda adaptarse a éste (Soto & Saavedra, 2005). Esta habituación no fue
contada ni registrada (Haider, y otros, 2011).
5. El tercer día, se colocó la recompensa alimenticia a pequeños intervalos a lo
largo del brazo con el fin de atraer al ratón hasta el extremo del brazo (Haider, y
otros, 2011).
6. Los dos últimos días del entrenamiento se colocó el alimento sólo en los
recipientes que están al final de cada brazo.
7. Ubicar al ratón en el laberinto. La prueba comenzaba cuando el ratón se sentía
cómodo de ser recogido por el experimentador y, además cuando se lo colocaba
solo en el laberinto, exploraba sin vacilación y sin defecación excesiva o micción
(Wenk, 2004).
8. En cada nueva sesión de entrenamiento se ubicó un refuerzo de comida al final
de cada brazo del laberinto, dichos refuerzos no fueron reemplazados a lo largo
de la sesión, por lo que cada ratón tendría acceso a un máximo de 8 piezas de
comida (Soto & Saavedra, 2005).
9. Un ratón estaría listo para empezar la prueba, es decir, restringido en los
alimentos y aclimatado al laberinto en un plazo de aproximadamente 5 días.
Cabe mencionar que los ratones tenían que recorrer el laberinto una vez al día
todos los días (incluyendo los fines de semana) durante el entrenamiento y las
pruebas de adquisición (Wenk, 2004).
Pruebas de Adquisición:
1. Colocar la recompensa de comida al final de cada brazo antes de cada sesión de
prueba (Wenk, 2004).
2. Ubicar al ratón en la plataforma central del laberinto con todas las puertas tipo
guillotina abiertas para que tuvieran acceso libre a todos los brazos (Wenk,
2004).
50
3. Dar inicio al cronómetro desde el momento en que el ratón fue colocado en el
área central de la plataforma y se registró el tiempo (en segundos) una vez que
el ratón haya visitado todos los 8 brazos.
En dicho recorrido que hacía el ratón por los brazos del laberinto tenía la opción
de comer su recompensa alimenticia o a su vez solo visitar el brazo, regresar a
la plataforma central y continuar con su trayecto de exploración por los otros
brazos del laberinto (Wenk, 2004).
4. Proceder de la misma manera en los días posteriores, es decir hasta que cada
ratón visitara los 8 brazos del laberinto, hasta completar los 7 días que implica
la prueba de adquisición (Wenk, 2004).
5. Registrar los siguientes datos:
¿En qué brazo entró cada vez el ratón y si recibió una recompensa de
alimentos?
Tiempo transcurrido entre el comienzo de la sesión de prueba y el ratón
obteniendo las ocho recompensas alimenticias.
Número de elecciones correctas de los brazos: aquellas que se eligieron la
primera vez.
Número de elecciones incorrectas de los brazos: visitas al mismo brazo más
de una vez durante una sesión de prueba única.
El tiempo transcurrido desde el comienzo de la sesión se considera para
determinar qué tan rápido el ratón está tomando decisiones y encontrando
las recompensas alimenticias. Esta es también una indicación indirecta de la
motivación.
La visita a un brazo previamente elegido se considera un error de memoria
de trabajo.
(Wenk, 2004)
6. Realizar el análisis de los datos obtenidos.
Disección de los Ratones (Eutanasia por Dislocación Cervical).
1. Colocar el ratón sobre una superficie rugosa para que se pueda agarrar.
2. Sujetar al animal colocando una pinza en la región cervical ejerciendo presión en la base
del cráneo y apretando firmemente contra una superficie dura para realizar la maniobra.
3. Con la otra mano se tira rápidamente de la base de la cola para provocar la separación
entre las vértebras cervicales y el cráneo. (Pérez & Melgar, 2015)
51
4. Confirmar la separación de la vértebra cervical con el cráneo. Si se realizó correctamente
la dislocación debe causar daños graves al tallo cerebral y una inconsciencia instantánea.
(Pérez & Melgar, 2015)
5. Colocar al animal sobre la plancha de espuma flex.
6. Fijar el animal a la espuma flex en posición decúbito dorsal, sujetando sus patas
delanteras y patas traseras con cinta adhesiva.
7. Levantar la piel del abdomen con una pinza, realizar una abertura y cortar la piel
cuidando de no dañar los órganos situados debajo.
8. Fijar la piel con alfileres, seccionar las costillas a ambos lados del esternón y levantarlo
para abrir el tórax.
9. Retirar los distintos órganos y proceder a la observación, descripción y disección en
caso de presentarse anomalías.
Diseño Experimental
Los datos obtenidos se evaluaron mediante un arreglo factorial AxBxC con una
distribución de bloques completamente al azar (DBCA), en donde el factor A con 4 niveles
hace referencia a las sustancias que fueron administradas, el factor B con 2 niveles toma en
cuenta el sexo de los ratones y el factor C, con siete niveles, corresponde a la duración del
ensayo. El número de repeticiones fue de 4 para el laberinto acuático y no existieron
repeticiones para la prueba del laberinto radial.
Matriz de Operacionalización de las Variables
Tabla 1
Matriz de operacionalización de variables
Variables Dimensiones Indicadores
Aceite de Sacha
Inchi
Método de extracción
Caracterización
físico-química
Prensado en frío
Densidad
Humedad
Materia insaponificable
Índices de: Refracción,
Acidez, Saponificación,
52
Composición química
Esterificación, Hidroxilo,
Yodo, Peróxido.
Cantidad de omegas 3, 6 y 9
Actividad
Nootrópica
Latencia de Escape
Calidad de Respuesta.
Tiempo de llegada a la
plataforma sumergida en el
Laberinto Acuático de
Morris.
Tiempo empleado hasta
obtener las ocho
recompensas alimenticias en
el Laberinto Radial de 8
brazos.
Número de elecciones
correctas de los brazos en el
Laberinto Radial de 8
brazos.
Número de elecciones
incorrectas de los brazos en
el Laberinto Radial de 8
brazos.
Elaborado por: Tobar Astrid
Técnicas e Instrumentos de recolección de datos
La técnica que se empleó en esta investigación fue la observación directa, la cual nos
permitió detectar ciertos eventos usuales e inusuales que ocurrieron durante la realización de
la parte experimental; con la posterior recolección y asimilación de toda la información
mediante un registro.
Como instrumento de recolección de datos se utilizó una guía de observación, la cual
estuvo basada en una lista de indicadores para la recopilación de los datos que se obtuvieron
53
durante la parte experimental como lo son: la latencia de escape en el Laberinto Acuático de
Morris y en el Laberinto Radial de 8 brazos, además en este último laberinto se registró
también el número de aciertos y desaciertos que cometieron los ratones ya sea cuando
visitaron una sola vez cada brazo del laberinto, o a su vez si entraron más de una vez a los
brazos. Adicionalmente a eso se registró también el peso corporal de los ratones una vez por
semana.
Técnicas de Procesamiento y Análisis de Datos
Se utilizó el Software Estadístico R Versión 3.4.3, el cual permite obtener visualizaciones
gráficas para el análisis de datos, a través de funciones de densidad asociadas a las
distribuciones de probabilidad más comunes.
Las gráficas fueron obtenidas a partir de un estimador no paramétrico de funciones de
densidad considerado como estimador de Kernel que son funciones asociadas a cada uno de
los datos los cuales permite suavizar la densidad evitando al máximo el “ruido” que induce
la utilización de una muestra en lugar de la población total según menciona (Huesca &
Rodríguez, 2008). Las densidades mostradas fueron calculadas utilizando un Kernel
Gaussiano en el cual cada dato se representa como una curva normal (con superficie de
unidad) centrada sobre el mismo, (Santos, 2015), y la suma ponderada de estas funciones es
un estimador para aproximar la función de densidad desconocida (Rodríguez L. , 2014). Por
lo tanto se trata de alcanzar una representación de la «tendencia» o pauta global de su
distribución, dónde existe más concentración, dónde menos, y con qué gradiente se produce
la variación espacial, etc, según lo señala (Moreno A. , 2009).
54
Capítulo IV
Análisis y Discusión de Resultados
Análisis microbiológico de las semillas de Sacha Inchi
A las almendras de Sacha Inchi se les realizó un análisis microbiológico por duplicado
antes de la extracción del aceite, para evaluar la necesidad de reducir la carga microbiana
por medio de una desinfección previa.
Por la similitud de las características de la materia prima se tomó en consideración las
especificaciones señaladas en la farmacopea americana para suplementos nutricionales con
productos botánicos.
Tabla 2
Ensayo microbiológico de las almendras sin tratamiento previo
Especificación
(USP 39 NF 34, 2016)
Resultado
(ufc/g de muestra) Interpretación
Recuento Total de
Microorganismos
Aerobios (RTMA) ≤ 104 5.0 x 101 Cumple
Recuento Total de
Mohos y Levaduras
(RTML) ≤ 103 8.5 x 101 Cumple
Microorganismo
Específico
Ausencia de
Escherichia coli
Ausencia de
Escherichia coli Cumple
Elaborado por: Tobar Astrid
Según los resultados obtenidos podemos determinar que la materia prima de origen
vegetal cumple con todos los parámetros establecidos dentro de los límites microbianos
recomendados por la farmacopea americana, sin embargo en el caso del recuento de mohos
y levaduras a pesar de no sobrepasar el límite máximo aceptable presenta un valor alto en
consideración al crecimiento de bacterias, una de las causas probables son las condiciones
ambientales durante el almacenamiento, por lo cual absorbieron la humedad del medio y eso
desencadenó el desarrollo fúngico en las almendras.
55
Como de las almendras se va a extraer el aceite para ser administrado por vía oral, se hizo
la identificación de Escherichia coli como microrganismo específico en un producto oral
acuoso, teniendo como resultado que cumple con lo establecido por la farmacopea americana
que es la ausencia de este microorganismo específico.
A pesar de que la materia prima cumplió con las especificaciones de los límites
microbianos recomendados por la norma en cuestión, se realizó la desinfección de las
almendras con una solución de hipoclorito de sodio al 0,075 % (v/v) y se hizo el análisis
microbiológico empleando las mismas técnicas para determinar si hay una reducción de la
carga microbiana. Los resultados se muestran en la Tabla 3.
Tabla 3
Ensayo microbiológico de las almendras con tratamiento previo
Especificación
(USP 39 NF 34, 2016)
Resultado
(ufc/g de muestra) Interpretación
Recuento Total de
Microorganismos
Aerobios (RTMA) ≤ 104 4.0 x 101 Cumple
Recuento Total de
Mohos y Levaduras
(RTML) ≤ 103 8.0 x 101 Cumple
Microorganismo
Específico
Ausencia de
Escherichia coli
Ausencia de
Escherichia coli Cumple
Elaborado por: Tobar Astrid
Pese a que la reducción de la carga microbiana fue mínima se nota la diferencia con
respecto al análisis de las almendras que no tuvieron tratamiento previo; por lo cual se
considera necesario realizar la desinfección de las almendras antes de la extracción del aceite
con el afán de evitar una posible proliferación de estos microorganismos los cuales
ocasionarían una degradación temprana del aceite.
Extracción del aceite de las semillas de Sacha Inchi por prensado en frío
Las almendras de Sacha Inchi fueron sometidas a un proceso de acondicionamiento
previo: desinfección, secado y triturado para facilitar la extracción del aceite por el método
de prensado en frío con el propósito de no modificar la naturaleza ni la calidad del aceite;
con dicho método se obtuvo un porcentaje de rendimiento de aceite de 14.02 % el cual es
56
bajo debido a que esta técnica conlleva a la pérdida de gran parte del producto obteniéndose
así una recuperación parcial del aceite de las almendras.
Tomando en cuenta el bajo rendimiento de aceite obtenido con el método de extracción
por prensado en frío fue necesario realizar un análisis de las almendras de Sacha Inchi
mediante un proceso físico-químico para tener una referencia del contenido graso que se va
a extraer con este otro método y así poder determinar el rendimiento del aceite obtenido,
para lo cual se empleó la técnica utilizada en el Laboratorio de la OSP para la determinación
de la grasa cruda (%) siguiendo el método de extracción con solventes (sumersión) que está
basado en el método oficial de la AOAC 991.36 modificado (19th Edition, 2012) utilizando
éter dietílico como solvente, con lo cual se obtuvo como resultado un porcentaje de 44.62 %
de grasa cruda en la semilla.
Tabla 4
Análisis del % de rendimiento del aceite
Porcentajes de
Extracción
( % )
Método de extracción Prensado en frío 14.02
Análisis físico-químico Grasa cruda 44.62
Elaborado por: Tobar Astrid
Al comparar los porcentajes de extracción que se muestran en la Tabla 4 se puede
observar que el primer valor es significativamente menor, lo cual nos indica que este método
de extracción por prensado en frío no es tan viable ya que genera menor rendimiento debido
a las elevadas pérdidas que se generan durante su procesamiento; sin embargo, este método
mecánico se diferencia de los demás por producir aceites más naturales, porque al no utilizar
solventes orgánicos durante su extracción, los efectos deteriorantes se reducen al hacer
menos severas las operaciones de separación que implican el empleo de calor. (Millán,
Ramírez, & Inungaray, 2011)
El grado de madurez de las semillas, el período óptimo de recolección, su estado sanitario
y el almacenamiento son los factores más relevantes a considerar al momento de la
extracción, debido a que tienen una gran incidencia tanto en el rendimiento como en la
calidad del aceite que se desea obtener. Por tanto debería determinarse la fecha óptima de la
recolección de las semillas con el propósito de conseguir una mayor cantidad de aceite,
57
mantener sus propiedades organolépticas y evitar de este modo la producción del aceite de
Sacha Inchi de inferior calidad causada por una recolección tardía (Franco, 2014). Se debe
considerar también que el tiempo de almacenamiento hasta el momento del procesado debe
ser lo más corto posible (inferior a 48 horas) para evitar fermentaciones en las almendras las
cuales producirán atributos negativos en cuanto a las características organolépticas del aceite
quedando muy devaluada su calidad (Sanz, 2018). De ser posible lo más óptimo sería extraer
el aceite de las almendras de Sacha Inchi el mismo día de su cosecha.
Debido a que el aceite de Sacha Inchi posee un alto contenido en ácidos grasos
poliinsaturados especialmente omega-3, es más vulnerable a sufrir reacciones de oxidación
ya sea por el oxígeno del aire o por la exposición directa a la luz que hace que se aceleren
estas reacciones, las cuales van a deteriorar la calidad del producto, por tal razón para envasar
el aceite extraído se utilizaron frascos de vidrio ámbar como medida de protección frente a
los posibles factores ambientales que pueden dañar el producto tales como la exposición
directa a la luz, la entrada de oxígeno, la humedad, salvaguardando de este modo la
estabilidad del aceite.
Caracterización físico-química del aceite de Sacha Inchi
Los datos reportados en la Tabla 5 son los resultados experimentales que se obtuvieron al
realizar las pruebas de control de calidad del aceite de Sacha Inchi e implican el valor
promedio de tres determinaciones en cada prueba.
Tabla 5
Control de calidad del aceite de Sacha Inchi / propiedades fisicoquímicas
Prueba
Especificación
Resultado Referencia
Valor mín. Valor máx.
Densidad relativa a 20° C 0,926 0,931 0,956 (NTE INEN
2688, 2014)
Índice de refracción a 20°
C 1,478 1,481 1,480
(NTE INEN
2688, 2014)
Humedad (%) ---- 0,2 0,2 (NTE INEN
2688, 2014)
58
Materia insaponificable
(%) ---- 0,36 0,33
(NTE INEN
2688, 2014)
Índice de acidez
(mg NaOH/g de aceite) Informativo 5,66
Presente
investigación
Acidez libre expresada
como ácido oleico (%)
- Aceite virgen
----
2,00
2,85
(NTE INEN
2688, 2014)
Índice de saponificación
(mg KOH/g de aceite) 192 196 190
(NTE INEN
2688, 2014)
Índice de yodo (cg/g) 183 199 189 (NTE INEN
2688, 2014)
Índice de peróxido
(meq de O2/Kg de aceite)
- Para aceites
vírgenes y
prensados en frío
----
15,00
28,40
(NTE INEN
2688, 2014)
Índice de esterificación
(mg KOH/g de aceite) Informativo 185,84
Presente
investigación
Índice de hidroxilo
(mg KOH/g de aceite) Informativo 178,95
Presente
investigación
Elaborado por: Tobar Astrid
La densidad es utilizada como un parámetro de análisis en la evaluación de los aceites
vegetales comerciales y como se puede observar en la Tabla 5 el valor de la densidad relativa
es ligeramente superior a los rangos establecidos por la Norma Técnica Ecuatoriana INEN
2688, esto puede deberse a variaciones asociadas fundamentalmente con la temperatura a la
que se hizo la medición, y otra de las razones puede ser que la densidad de un aceite es factor
dependiente de su índice de saponificación, por cuanto está influenciado por el peso
molecular promedio de los ácidos grasos que lo constituyen; y de igual manera, está asociado
al índice de yodo con lo que respecta al grado de insaturación de los componentes grasos
(Castaño, Valencia, Murillo, Méndez, & Eras, Revista Chilena de Nutrición, 2011), por lo
59
tanto la densidad va a aumentar conforme disminuye el peso molecular de los ácidos grasos
y aumente el número de insaturaciones. (Medina G. B., 2010)
El índice de refracción presenta un valor acorde a los rangos establecidos por la NTE
INEN 2688. Esta magnitud es característica dentro de ciertos límites para cada aceite y se
emplea para verificar la identidad, calidad y pureza del aceite (Rincón & Martínez, 2009).
El índice de refracción obtenido muestra un valor ligeramente alto (1.480) en comparación
a los valores reportados por (Hurtado, 2013) de los aceites de oliva (1.4672), girasol (1.4610)
y maní (1.4690), este hecho guarda relación con lo citado por (Paucar, 2013) quien menciona
que el índice de refracción aumenta conforme aumenta la proporción de insaturaciones de
los ácidos grasos y el peso molecular, por lo tanto se podría aducir que el aceite de Sacha
Inchi presenta un alto contenido de ácidos grasos insaturados de cadenas largas.
El valor reportado de la humedad se encuentra dentro de la especificación establecida por
la norma previamente citada, y concuerda con lo mencionado por (Sánchez & Figueroa,
2013) quien señala que los aceites crudos poseen porcentajes de humedad entre 0.1 - 0.3 %,
por lo tanto haciendo referencia a la poca cantidad de agua que contiene el aceite de Sacha
Inchi, se traduciría en términos de estabilidad del producto a la oxidación durante el
transcurso de su almacenamiento debido a la lenta generación de ácidos grasos libres.
(Millán, Ramírez, & Inungaray, 2011)
El porcentaje obtenido de materia insaponificable se encuentra dentro del rango
establecido por la norma referida y concuerda también con lo citado por la (Facultad de
Química de la UNAM, 2008) quien manifiesta que la mayoría de los aceites y grasas
contienen una pequeña parte de materia insaponificable normalmente menos del 2 %,
refiriéndonos a aquellas sustancias presentes en el aceite que no son saponificables por
medio de álcalis, pero que son solubles en los disolventes comunes de las grasas (USP 39
NF 34, 2016), como es el caso de los esteroles, tocoferoles, tocotrienoles, carotenos, entre
otros. (Rincón & Martínez, 2009)
La acidez es un parámetro que se utiliza para verificar y clasificar a los diferentes tipos
de aceites según su calidad, este criterio se basa en determinar la cantidad de ácidos grasos
libres presentes en el aceite (Jiménez & Carpio, 2010) provenientes de la hidrólisis química
o enzimática de los triglicéridos (Franco, 2014). Como se muestra en la Tabla 5 el valor
reportado del índice de acidez es de 5.66 mg NaOH/g lo que representa calculado como
ácido oleico el 2.85 % de ácidos grasos libres, valor que está por encima del rango
establecido por la NTE INEN 2688, incumpliendo de esta manera con este requisito. Este
60
valor de la acidez es elevado en comparación a lo citado por (Gorriti, y otros, 2010) cuyo
valor reportado fue de 0.231 ± 0.003 %, lo cual nos da la pauta que el aceite de Sacha Inchi
en estudio estaría más predispuesto a la degradación oxidativa debido al alto contenido de
ácidos grasos libres que posee, dándose así el inicio a los procesos de enranciamiento, lo
cual hace referencia a lo citado por (Manrique, 2016) quien menciona que a medida que
aumenta la cantidad de ácidos grasos libres, se incrementa la acidez, consecuentemente con
el deterioro proporcional de su calidad. Sin embargo, el incremento de la acidez también se
verá reflejado a causa de otros factores entre ellos tenemos las características de la materia
prima utilizada (tipo de semilla, su estado y grado de maduración), el procesamiento y
almacenamiento del aceite. En este sentido la calidad del aceite dependerá de los factores
antes mencionados.
La mayoría de los aceites no refinados contienen cantidades relativamente elevadas de
ácidos grasos libres (Millán, Ramírez, & Inungaray, 2011), por lo cual se sugiere para su uso
comercial la refinación o emplear aditivos para obtener valores menores de acidez (Mora,
Castaño, Morales, Castañeda, & Arriaga, 2015). Durante los procesos de refinado del aceite
se eliminan los ácidos grasos libres mediante la formación de pastas jabonosas durante la
neutralización con sosa. (Millán, Ramírez, & Inungaray, 2011)
El índice de saponificación presenta un valor ligeramente inferior a los rangos
establecidos por la norma INEN, pero en comparación a otros estudios se aprecia que hay
cierta similitud con los resultados reportados por (Gorriti, y otros, 2010) y (Castaño,
Valencia, Murillo, Méndez, & Eras, 2011) quienes muestran valores de 184.748 ± 0,200 y
185.20 ± 0.50 respectivamente. Este hecho guarda relación con lo mencionado por (Grasso,
2013) quien refiere que este índice varía entre 160 y 250 y para los aceites vegetales, en
general, oscila alrededor de 190. Cabe mencionar que este parámetro nos permite establecer
una medida aproximada del peso molecular promedio de los triglicéridos que constituyen la
grasa. (Rodríguez, Maldonado, Muro, & Miranda, 2016)
Como se puede observar en la Tabla 5 el valor reportado del índice de yodo se encuentra
dentro de los rangos establecidos por la norma en cuestión. Según (Castaño, Valencia,
Murillo, Méndez, & Eras, 2011), éste índice es directamente proporcional a la cantidad de
insaturaciones de los componentes de la grasa. Se podría inferir entonces que el valor
obtenido se debe al alto contenido de ácidos grasos poliinsaturados presentes en el aceite de
Sacha Inchi. Cabe mencionar también que este índice es considerado como un indicador de
la estabilidad oxidativa de los aceites y grasas (Pérez L. F., 2008) debido a que las
insaturaciones son más susceptibles a la oxidación con lo cual se producirá
consecuentemente el enranciamiento.
61
Otro parámetro analítico que nos permite determinar la calidad y el grado de conservación
(estabilidad) de los aceites es el índice de peróxidos, el cual está relacionado con la
formación de peróxidos e hidroperóxidos que son los responsables de la rancidez oxidativa
de los aceites (Mora, Castaño, Morales, Castañeda, & Arriaga, 2015). El índice de peróxido
obtenido en este estudio es muy alto, casi el doble de acuerdo a lo establecido por la NTE
INEN 2688, valor que también difiere con los resultados obtenidos por (Gorriti, y otros,
2010) y (Pérez L. F., 2008) quienes reportan valores entre 0.889 ± 0.143 y 0.78
respectivamente aplicando las mismas condiciones de extracción. El índice de peróxido alto
nos demuestra que en el aceite de Sacha Inchi está progresando la descomposición auto-
oxidativa la cual implica transformaciones químicas provocadas por exposición al oxígeno
del aire y el efecto catalítico de distintos agentes (metales, radiaciones, calor, humedad)
(Grasso, 2013), este resultado también se ve influenciado debido al alto contenido de ácidos
grasos poliinsaturados presentes en el aceite en estudio, haciéndolo más susceptible a la
oxidación. Además como la oxidación lipídica es una reacción en cadena, es de esperar que
los peróxidos e hidroperóxidos se incrementen durante el almacenamiento siendo éstos los
principales responsables de los cambios en las características organolépticas del producto.
(Rincón & Martínez, 2009)
Dentro del control de calidad del aceite de Sacha Inchi también se realizó la determinación
de los índices de esterificación e hidroxilo para los cuales no hay especificaciones de ninguna
referencia pero se pueden observar los valores reportados en la Tabla 5. Con respecto al
aceite en estudio el índice de éster nos indica que hay la presencia de una gran cantidad de
enlaces éster en los constituyentes del aceite (Millán, Ramírez, & Inungaray, 2011). El índice
de hidroxilo nos revela la gran cantidad de grupos hidroxilos presentes en el aceite, cabe
mencionar que este método no es capaz de diferenciar los que están unidos a las cadenas de
los ácidos grasos, de los que corresponden al radical glicérido, en los mono y diglicéridos
(Bailey, 1984), por lo tanto este índice no distingue hidroxilos, reaccionan todos los
disponibles en la muestra. (Manrique, 2016)
Composición química del aceite de Sacha Inchi
La determinación de la composición química del aceite se realizó utilizando un equipo de
cromatografía de gases acoplada a un espectrómetro de masas (GC/MSD), el cual nos
permitió cuantificar como componente mayoritario al ácido linolénico (ω-3) con una
proporción de 53.845 %, seguido del ácido linoleico (ω-6) con 37.594 % y otros compuestos
identificados que mostraron cantidades relativamente bajas fueron: el ácido eicosenoico (ω-
9), el ácido palmítico y el ácido esteárico.
62
Tabla 6
Perfil de los principales ácidos grasos presentes en el aceite de Sacha Inchi
Ácidos Grasos Tiempo de
Retención (min)
Porcentaje
(%)
Saturados
Palmítico (C16:0) 16.897 3.889
Esteárico (C18:0) 19.605 3.714
Monoinsaturados Eicosenoico (C20:1) / ω-9 21.777 0.958
Poliinsaturados
Linoleico (C18:2) / ω-6 19.221 37.594
Linolénico (C18:3) / ω-3 19.324 53.845
Elaborado por: Tobar Astrid
De acuerdo a los resultados del perfil lipídico del aceite de Sacha Inchi reportados en la
Tabla 6 nos podemos dar cuenta que los compuestos mayoritarios en su composición son los
ácidos grasos poliinsaturados con una proporción del 91.439 %, y dentro de los ácidos grasos
minoritarios para el aceite se cuantificaron los ácidos grasos monoinsaturados con un
cantidad relativamente baja 0.958 % y los ácidos grasos saturados que representan el
7.603 %.
Los resultados obtenidos concuerdan con lo citado por (Chirinos, Necochea, Pedreschi,
& Campos, 2015) quienes mencionan que las semillas de Sacha Inchi son industrializadas
principalmente debido a que el aceite posee una composición única de ácidos grasos, que
comprende aproximadamente el 51 % de omega-3 y el 34 % de omega-6, este hecho se
relaciona con los resultados reportados por (Gorriti, y otros, 2010) y (Castaño, Valencia,
Murillo, Méndez, & Eras, 2011) que muestran valores prácticamente similares a los del
aceite en estudio en cuanto a su composición en los cuales se determina una mayor
proporción de ácidos grasos insaturados en la composición del aceite de Sacha Inchi.
Sin embargo, debido a la alta cantidad de ácidos grasos insaturados que posee este aceite
se verá afectado en su composición ya que son más susceptibles a cambios, los mismos que
pueden producirse durante la cosecha de la materia prima, la producción del aceite, o durante
el transporte y almacenamiento. (Ramos, Ponce, Barnett, Celi, & Ramos, 2016)
63
En cuanto a las bondades asociadas con la salud y la nutrición que se les atribuye a este
grupo especial de ácidos grasos poliinsaturados (omegas 3 y 6) (Castaño, Valencia, Murillo,
Méndez, & Eras, 2011) se recomienda su consumo en la ingesta total diaria de lípidos para
mantener una buena salud. (Millán, Ramírez, & Inungaray, 2011)
Test de aprendizaje en roedores de la especie Mus musculus
Peso de los ratones
El peso de los ratones se controló durante las siete semanas en las que se llevó a cabo la
parte experimental, debido a que en función del peso se les administró por vía oral las cuatro
sustancias en estudio y también con el afán de evaluar si las sustancias administradas
producen algún cambio notable en el peso de los roedores. Los resultados obtenidos de los
pesos de los ratones se muestran en la Tabla 7.
Tabla 7
Peso promedio de los ratones en función de las sustancias administradas
Peso (g)
Sustancias Semanas
1 2 3 4 5 6 7
Agua Macho 37.7 38.7 39.0 39.3 36.0 38.9 41.0
Hembra 30.3 29.8 29.6 30.3 28.3 30.8 31.1
Ginkgo Biloba Macho 33.3 33.7 34.0 35.5 35.2 37.4 37.6
Hembra 28.3 28.5 28.5 29.6 27.5 30.5 31.4
Aceite de Sacha Inchi
(Dosis 1)
Macho 38.0 38.0 37.9 38.5 36.8 39.8 41.9
Hembra 26.3 25.9 26.4 27.2 25.4 25.3 25.9
Aceite de Sacha Inchi
(Dosis 2)
Macho 38.7 39.8 39.0 40.0 34.9 39.7 41.6
Hembra 26.3 27.5 26.9 27.5 25.9 28.1 28.0
Elaborado por: Tobar Astrid
Los pesos promedio de los ratones por sexo fueron graficados en función de las siete
semanas de prueba con respecto a las sustancias administradas, tal como se muestra en el
Gráfico 1.
64
Abreviaturas: M= Macho; H= Hembra; G.B= Ginkgo Biloba; A.S.I.D1= Aceite de Sacha Inchi Dosis 1;
A.S.I.D2= Aceite de Sacha Inchi Dosis 2.
Gráfico 1: Pesos promedio de los ratones por sexo
Elaborado por: Tobar Astrid
Se consideró como estimador puntual el peso promedio de los ratones de acuerdo al sexo
con un intervalo de confianza al 95 %; podemos observar que sí hay diferencias significativas
en los pesos de los ratones acorde al sexo, ya que en general los machos pesaban más que
las hembras, sin embargo se pudo determinar que al hacer un traslape total, el punto medio
de un intervalo está dentro de los otros intervalos, lo cual nos indica que no hay diferencias
significativas dentro de los grupos de machos y hembras con respecto a las sustancias
administradas por lo que se podría decir que el peso promedio de los ratones tanto para
machos como para hembras siempre se mantuvo en los mismos rangos durante las siete
semanas de prueba; el único contraste que existió fue la variabilidad que presentó cada grupo
lo cual se demuestra mediante el ancho del intervalo de confianza ya que a medida que se
hace más ancho este intervalo habrá más variabilidad lo cual influirá en que no haya
diferencias significativas entre los grupos.
En la semana cinco se nota una ligera tendencia a la disminución de los pesos de los
ratones machos y hembras, probablemente debido a que durante el transcurso de esa semana
se realizó la prueba con el Laberinto Radial de 8 Brazos en la cual los ratones debían estar
65
restringidos en su alimentación en un 50 % como motivación para buscar el alimento que se
encontraba ubicado en el extremo de cada brazo, sin embargo a pesar de que hubo esta leve
disminución en cuanto a los pesos de igual manera no hubo diferencias significativas en
función de las sustancias administradas y se puede observar como vuelven a ganar peso
conforme pasan a la siguiente semana.
Laberinto Acuático de Morris
- Latencia de Escape.
La prueba consistió en colocar al ratón dentro de la piscina, desde la posición de inicio
seleccionada (cuadrante IV) y la tarea que tenían que realizar consistía en encontrar la
plataforma sumergida que estaba ubicada en el cuadrante meta (cuadrante I), el tiempo se
registró a partir de que los ratones fueron colocados en la piscina y se detuvo en el momento
en el que localizaron la plataforma a esto se lo denomina latencia de escape. Los resultados
obtenidos se muestran en la Tabla 8.
Tabla 8
Latencia de escape promedio en el Laberinto Acuático de Morris
Tiempo (seg)
Sustancias Días
1 2 3 4 5 6 7
Agua Macho 10.9 8.1 4.2 4.9 6.3 6.1 6.7
Hembra 9.2 8.6 7.1 3.8 6.7 12.4 7.2
Ginkgo Biloba Macho 5.4 6.6 3.6 3.9 4.1 3.7 3.8
Hembra 17.1 13.6 5.0 7.7 7.9 14.3 11.7
Aceite de Sacha Inchi
(Dosis 1)
Macho 9.4 5.0 4.1 6.9 3.8 5.0 5.8
Hembra 14.2 12.7 4.8 7.1 4.5 8.9 8.3
Aceite de Sacha Inchi
(Dosis 2)
Macho 18.0 6.9 4.4 7.5 4.9 6.5 5.0
Hembra 13.1 12.7 5.6 3.9 6.8 7.3 5.3
Elaborado por: Tobar Astrid
En el Gráfico 2 la latencia de escape promedio, en segundos, con un estimador de
intervalo al 95 % se grafica con respecto a los días evaluados en función de las sustancias
administradas.
66
Gráfico 2: Latencia de escape promedio en el Laberinto Acuático de Morris
Elaborado por: Tobar Astrid
Como se puede observar en el Gráfico 2 durante el primer día de ensayo el grupo de
ratones que empleó el menor tiempo para encontrar la plataforma sumergida fue al que se le
administró Agua, seguido de los grupos que recibieron Ginkgo Biloba, Aceite de Sacha Inchi
Dosis 1 y Dosis 2. En el segundo día podemos ver una disminución marcada en el tiempo
que emplearon los ratones de la Dosis 1 y 2, la misma tendencia se observa en el tercer día.
Del cuarto día hasta el séptimo ya no se ven mayores diferencias, pero es notable el caso del
grupo Dosis 2 que empezó con un tiempo relativamente alto en comparación con las otras
sustancias y al tercer día tuvo una imponente disminución del tiempo promedio.
En general si se observó una disminución paulatina de la latencia de escape desde el
primer día hasta el séptimo, pero debido a los comportamientos particulares y a la alta
variabilidad existente en cada grupo no se aprecian diferencias estadísticamente
significativas en cuanto a las sustancias administradas a los diferentes grupos de ratones.
En el Gráfico 3 se muestra la estructura de las curvas obtenidas a partir de un estimador
no paramétrico de funciones de densidad considerado como estimador de Kernel el cual
según menciona (Huesca & Rodríguez, 2008) permite suavizar la densidad evitando al
máximo el “ruido” que induce la utilización de una muestra en lugar de la población total.
Las densidades mostradas fueron calculadas utilizando un Kernel Gaussiano en el cual cada
dato se representa como una curva normal (con superficie de unidad) centrada sobre el
67
mismo, (Santos, 2015), y la suma ponderada de estas funciones es un estimador para
aproximar la función de densidad desconocida (Rodríguez L. , 2014). Por lo tanto se trata de
alcanzar una representación de la «tendencia» o pauta global de su distribución, dónde existe
más concentración, dónde menos, y con qué gradiente se produce la variación espacial, etc,
según lo señala (Moreno A. , 2009).
Gráfico 3: Latencia de escape en el Laberinto Acuático de Morris / sustancia
administrada Agua
Elaborado por: Tobar Astrid
Como se puede observar en el Gráfico 3 se muestran las estimaciones de las densidades
del tiempo promedio que emplearon los ratones hasta llegar a la plataforma (latencia de
escape) en función de la sustancia administrada, que en este caso fue el Agua, con respecto
a los días evaluados. En el día 1 podemos notar que las distribuciones sufrieron un
desplazamiento hacia la derecha como señal de incremento de la latencia de escape para toda
la población, sin embargo podemos notar que a partir del día 2 esta distribución se va
estrechando un poco hacia la izquierda como señal de que este grupo de ratones está
empleando una menor latencia de escape, en el día 3 se puede ver una evidente
homogeneidad de los datos basados en su distribución que se desplazó más hacia la
izquierda, lo cual implicaría un mayor aprendizaje según lo señalado por (Chamorro, 2012).
La ligera dispersión de los datos que se observa como una segunda curva que se desplaza
hacia la derecha probablemente se debió a la variabilidad marcada que existía durante la
realización de los ensayos. Desde el cuarto día hasta el séptimo ya no se ve esta tendencia,
68
al contrario vuelven a emplear una mayor latencia de escape más evidente en los días 6 y 7;
las distribuciones empiezan a desplazarse más hacia la derecha, este comportamiento se
podría interpretar como una señal de acostumbramiento.
El mismo tratamiento estadístico gráfico se aplicó a los otros grupos. En el caso del
Gráfico 4 se muestran las estimaciones de las densidades de la latencia de escape promedio
en función de la sustancia administrada, Ginkgo Biloba, con respecto a los días evaluados.
Gráfico 4: Latencia de escape en el Laberinto Acuático de Morris / sustancia administrada
Ginkgo Biloba
Elaborado por: Tobar Astrid
Como se observa en el Gráfico 4, el comportamiento del grupo que recibió Ginkgo Biloba
es similar al que recibió agua. Los dos primeros días sus distribuciones se desplazaron hacia
la derecha como señal de incremento de la latencia de escape al parecer para toda la
población, sin embargo en el tercer día podemos observar una tendencia similar al Gráfico
3 con respecto al comportamiento particular de emplear una menor latencia de escape debido
a la concentración de los datos. A partir del día 4 y 5 vemos que estas distribuciones se van
desplazando cada vez más hacia la derecha en función de que están presentando datos
heterogéneos y en los días 6 y 7 se ve un desplazamiento más marcado de sus distribuciones
hacia la derecha.
69
En el Gráfico 5 se muestran las estimaciones de las densidades de la latencia de escape
promedio en función de la sustancia administrada, Aceite de Sacha Inchi Dosis 1, con
respecto a los días evaluados.
Gráfico 5: Latencia de escape en el Laberinto Acuático de Morris / sustancia administrada
Aceite de Sacha Inchi Dosis 1
Elaborado por: Tobar Astrid
Podemos observar en el Gráfico 5 con respecto a los dos primeros días que sus
distribuciones se desplazan hacia la derecha como señal de incremento de la latencia de
escape al parecer para casi toda la población pese a que se evidencian ciertas dispersiones
en los datos, sin embargo se nota un comportamiento diferente a partir del tercer día hasta el
quinto en el cual se puede evidenciar que las distribuciones se concentran alrededor de datos
cada vez más homogéneos lo que indican una menor latencia de escape. No obstante en los
días 6 y 7 se aprecian nuevamente los desplazamientos marcados de sus distribuciones hacia
la derecha en función de que emplearon una mayor latencia de escape, pero en comparación
a las otras sustancias el tiempo conseguido fue menor en los dos últimos día de prueba.
En el Gráfico 6 se muestran las estimaciones de las densidades de la latencia de escape
promedio en función de la sustancia administrada, Aceite de Sacha Inchi Dosis 2, con
respecto a los días evaluados.
70
Gráfico 6: Latencia de escape en el Laberinto Acuático de Morris / sustancia administrada
Aceite de Sacha Inchi Dosis 2
Elaborado por: Tobar Astrid
En el primer día podemos observar una amplia dispersión de los datos por el
desplazamiento pronunciado de su distribución hacia la derecha. A diferencia de los otros
grupos, ya en el segundo día podemos notar una disminución del tiempo puesto que la
distribución de los datos se desplaza hacia la izquierda y la concentración de datos se
mantiene hasta el séptimo día del ensayo, comportamiento claramente diferente al de los
otros grupos.
Este comportamiento marcado podría ser un indicio a confirmar que el grupo de ratones
que recibió la Dosis 2 aprendió más rápido, lo cual podría sugerir que existe una dependencia
con la dosis.
Considerando los datos para todas las sustancias administradas y, a pesar de que no se
mostraron diferencias estadísticamente significativas entre ellas, podemos ver un
comportamiento marcado en cuanto a la disminución en latencia de escape que se presentó
en el tercer día para todas las sustancias analizadas, lo cual nos llevaría a pensar que
probablemente bastaría trabajar solo con 3 días de pruebas para poder determinar el
incremento del aprendizaje lo cual tendría relación con el estudio hecho por (Haider, y otros,
2011) en el cual evaluaron las funciones de aprendizaje y memoria en tres días, a diferencia
71
de lo señalado por (Soto & Saavedra, 2005) quien evaluó estos mismos parámetros pero al
cabo de 12 días.
Laberinto Radial de 8 Brazos
- Latencia de Escape.
La prueba consistió en colocar al ratón en el centro del laberinto y la tarea que tenían que
realizar consistía en visitar los 8 brazos para obtener las recompensas alimenticias que se
encontraban en los extremos de los brazos, el tiempo se registró a partir de que los ratones
fueron colocados en el centro del laberinto y se detuvo en el momento en el que obtuvieron
las 8 recompensas alimenticias a esto se lo denomina latencia de escape. Los resultados
obtenidos se muestran en la Tabla 9.
Tabla 9
Latencia de escape promedio en el Laberinto Radial de 8 Brazos
Tiempo (seg)
Sustancias
Días
1 2 3 4 5 6 7
Agua Macho 656.8 601.8 387.9 630.7 397.6 475.3 487.3
Hembra 325.6 549.3 478.2 529.9 404.2 387.9 213.4
Ginkgo Biloba Macho 519.8 394.5 301.1 384.8 392.0 326.1 185.4
Hembra 708.8 581.8 443.2 374.7 389.9 348.6 407.5
Aceite de Sacha Inchi
(Dosis 1)
Macho 600.6 565.6 423.9 299.3 332.7 273.6 223.6
Hembra 197.9 363.9 288.7 338.1 260.1 152.4 282.2
Aceite de Sacha Inchi
(Dosis 2)
Macho 235.5 413.2 489.8 397.6 281.8 255.8 268.1
Hembra 288.8 159.5 263.7 339.3 237.6 234.6 294.9
Elaborado por: Tobar Astrid
En el Gráfico 7 la latencia de escape promedio, en segundos, con un estimador de
intervalo al 95 % se grafica con respecto a los días evaluados en función de las sustancias
administradas.
72
Gráfico 7: Latencia de escape promedio en el Laberinto Radial de 8 Brazos
Elaborado por: Tobar Astrid
En el Gráfico 7 podemos observar que durante el primer día de ensayo el grupo de ratones
que empleó el menor tiempo en visitar los 8 brazos fue al que se le administró Aceite de
Sacha Inchi Dosis 2, seguido de los grupos que recibieron la Dosis 1, Agua y Ginkgo Biloba.
En el segundo día podemos ver una disminución evidente en el tiempo que empleó el grupo
de ratones que recibió Ginkgo Biloba, la misma tendencia se observa en el tercer día. Sin
embargo a partir del cuarto día hasta el séptimo ya no se ven mayores diferencias, pero se
pudo observar un comportamiento diferente en el caso del grupo de Ginkgo Biloba debido a
que empezó con un tiempo ligeramente alto en comparación con las otras sustancias y al
tercer día tuvo una notable disminución del tiempo promedio lo cual se relaciona como un
mayor aprendizaje según lo indica (Chamorro, 2012), lo cual sería esperable debido a que
esta sustancia estándar según (Pranav, 2013) está comprobada que mejora el funcionamiento
mental tanto en individuos jóvenes como en adultos mayores.
En general si se observó una disminución paulatina de la latencia de escape desde el
primer día hasta el séptimo, pero debido a los comportamientos particulares y a la alta
variabilidad existente en cada grupo no se aprecian diferencias estadísticamente
significativas en cuanto a las sustancias administradas a los diferentes grupos de ratones.
En el Gráfico 8 se muestran las estimaciones de las densidades del tiempo promedio que
emplearon los ratones al visitar los 8 brazos del laberinto para obtener las recompensas
73
alimenticias (latencia de escape) en función de la sustancia administrada, Agua, con respecto
a los días evaluados.
Gráfico 8: Latencia de escape en el Laberinto Radial de 8 Brazos / sustancia
administrada Agua
Elaborado por: Tobar Astrid
En los días 1 y 2 podemos notar que las distribuciones sufrieron un desplazamiento
pronunciado hacia la derecha por incremento de la latencia de escape, la presencia de la
segunda curva en el día 2 probablemente se debió a la variabilidad marcada que existía
durante la realización de los ensayos las cuales generaban la dispersión de los datos. En el
tercer día es evidente la homogeneidad de los datos, su distribución se desplazó más hacia
la izquierda, probablemente como efecto del aprendizaje según lo señalado por (Chamorro,
2012). Desde el cuarto día hasta el séptimo ya no se ve esta tendencia, al contrario vuelven
a emplear una mayor latencia de escape más evidente en los días 6 y 7 debido a que las
distribuciones empiezan a desplazarse más hacia la derecha, este comportamiento se podría
deber a la curiosidad por seguir explorando el laberinto.
En el Gráfico 9 se muestran las estimaciones de las densidades de la latencia de escape
promedio en función de la sustancia administrada, Ginkgo Biloba, con respecto a los días
evaluados.
74
Gráfico 9: Latencia de escape en el Laberinto Radial de 8 Brazos / sustancia
administrada Ginkgo Biloba
Elaborado por: Tobar Astrid
Durante los cinco primeros días las distribuciones se ven ampliamente desplazadas hacia
la derecha como señal de incremento de la latencia de escape, sin embargo en los dos últimos
días (6 y 7) se puede evidenciar un comportamiento diferente en este grupo de ratones; sus
distribuciones se van desplazando cada vez más hacia la izquierda en función de que están
presentando datos más homogéneos con menor latencia de escape, comportamiento contrario
a lo que se evidenció en el grupo que recibió agua.
En el Gráfico 10 se muestran las estimaciones de las densidades de la latencia de escape
promedio en función de la sustancia administrada, Aceite de Sacha Inchi Dosis 1, con
respecto a los días evaluados.
75
Gráfico 10: Latencia de escape en el Laberinto Radial de 8 Brazos / sustancia
administrada Aceite de Sacha Inchi Dosis 1
Elaborado por: Tobar Astrid
En los dos primeros días las distribuciones se desplazan ampliamente hacia la derecha
como señal de incremento de la latencia de escape, a partir del tercer día hasta el séptimo se
nota un comportamiento diferente en el cual se puede evidenciar que sus distribuciones se
van concentrando alrededor de datos cada vez más homogéneos lo cual indica una menor
latencia de escape.
En el Gráfico 11 se muestran las estimaciones de las densidades de la latencia de escape
promedio en función de la sustancia administrada, Aceite de Sacha Inchi Dosis 2, con
respecto a los días evaluados.
76
Gráfico 11: Latencia de escape en el Laberinto Radial de 8 Brazos / sustancia
administrada Aceite de Sacha Inchi Dosis 2
Elaborado por: Tobar Astrid
A diferencia de los otros grupos, en éste la dispersión de datos es menor desde el día 1, y,
con excepción del día 4, prácticamente se mantiene hasta el final del ensayo.
A pesar de que no se mostraron diferencias estadísticamente significativas en cuanto a las
sustancias administradas a los diferentes grupos podríamos sugerir que con la Dosis 2 del
Aceite de Sacha Inchi se observaron mejores resultados en razón que presentaron datos más
homogéneos en cuanto a una menor latencia de escape a diferencia de las otras sustancias
administradas.
- Número de Desaciertos.
Para esta variable respuesta se consideró como visita errónea o desacierto cuando el
roedor entró más de una vez al mismo brazo para conseguir el alimento. Los resultados
obtenidos se muestran en la Tabla 10.
77
Tabla 10
Número de desaciertos promedio en el Laberinto Radial de 8 Brazos
Desaciertos
Sustancias Días
1 2 3 4 5 6 7
Agua Macho 9.0 9.7 7.0 9.0 5.0 5.3 5.7
Hembra 3.3 6.7 5.0 4.0 2.7 2.7 3.3
Ginkgo Biloba Macho 8.7 5.0 3.7 3.7 6.7 6.7 3.3
Hembra 8.0 6.7 2.3 3.7 4.0 3.0 3.3
Aceite de Sacha Inchi
(Dosis 1)
Macho 6.3 3.0 4.7 3.7 6.0 3.0 2.0
Hembra 3.0 4.0 3.7 2.7 4.5 1.5 12.0
Aceite de Sacha Inchi
(Dosis 2)
Macho 5.0 5.7 4.3 6.0 4.3 2.0 4.3
Hembra 3.7 2.3 1.7 4.3 2.0 4.3 6.7
Elaborado por: Tobar Astrid
En el Gráfico 12 se muestra el promedio del número de desaciertos en función de las
sustancias administradas con respecto a los días evaluados en el caso de los ratones machos.
Gráfico 12: Promedio del número de desaciertos en el Laberinto Radial de 8 Brazos /
ratones machos
Elaborado por: Tobar Astrid
0,00
2,00
4,00
6,00
8,00
10,00
12,00
14,00
Agua Ginkgo Biloba Aceite D1 Aceite D2
PR
OM
ED
IO D
E D
ES
AC
IER
TO
S
SUSTANCIAS ADMINISTRADAS
Día 1 Día 2 Día 3 Día 4 Día 5 Día 6 Día 7
78
En general si se observó una disminución paulatina del número de desaciertos desde el
primer día hasta el séptimo, pero debido a los comportamientos particulares y a la alta
variabilidad existente en cada grupo no se aprecian diferencias estadísticamente
significativas en cuanto a las sustancias administradas a los diferentes grupos de ratones. Sin
embargo se puede apreciar que con el Aceite de Sacha Inchi se consiguieron datos un poco
más homogéneos en cuanto a una disminución del número de desaciertos conforme pasaban
los días a diferencia de las otras sustancias administradas.
En el Gráfico 13 se muestra el promedio del número de desaciertos en función de las
sustancias administradas con respecto a los días evaluados en el caso de los ratones hembras.
Gráfico 13: Promedio del número de desaciertos en el Laberinto Radial de 8 Brazos /
ratones hembras
Elaborado por: Tobar Astrid
En comparación con los machos, los cuatro grupos de ratones hembras presentaron un
menor número de desaciertos durante todo el ensayo. Sin embargo no se puede apreciar
tendencias relacionadas a una sustancia u otra debido a los comportamientos particulares y
a la alta variabilidad existente en cada grupo.
Disección de los ratones
La disección se la realizó a dos ratones representativos de cada grupo, en los cuales se
aplicó el método de eutanasia por dislocación cervical, bajo la supervisión de la veterinaria
0,00
2,00
4,00
6,00
8,00
10,00
12,00
14,00
Agua Ginkgo Biloba Aceite D1 Aceite D2
PR
OM
ED
IO D
E D
ES
AC
IER
TO
S
SUSTANCIAS ADMINISTRADAS
Día 1 Día 2 Día 3 Día 4 Día 5 Día 6 Día 7
79
a cargo. Se procedió a realizar una inspección visual a los distintos órganos en busca de
anomalías, con especial énfasis en el hígado, en función del aceite en estudio que recibieron
los ratones.
Se extrajeron el cerebro, el hígado y el bazo cuidando de no romperlos, luego se procedió
a pesarlos y medirlos para ver si algún grupo de ratones presentó diferencias marcadas.
Además se realizó un corte transversal en el hígado para ver si no presentaban daños internos.
No se encontraron daños en los órganos de los diferentes grupos de ratones y también con
respecto a las medidas de los pesos y longitudes de estos órganos presentaron resultados
similares con las diferentes sustancias administradas.
Las sustancias que fueron administradas a los ratones durante los 42 días aparentemente
no les ocasionaron ningún daño externo ni interno visible.
80
Capítulo V
Conclusiones y Recomendaciones
Conclusiones
El aceite fijo de Sacha Inchi fue extraído a partir de las almendras por el método de
prensado en frío con el propósito de no modificar la naturaleza ni la calidad del aceite; se
obtuvo un rendimiento de 14.02 %, menor al teórico reportado en otros trabajos.
Se caracterizó el Aceite de Sacha Inchi mediante pruebas físico-químicas las cuales
permitieron demostrar que el aceite en estudio cumple parcialmente con los estándares de
calidad establecidos por la norma INEN 2688 (2014); para su uso comercial este aceite
requiere del uso de aditivos o a su vez ser refinado para eliminar los ácidos grasos libres
presentes.
La variabilidad de resultados en la latencia de escape del Laberinto Acuático de Morris
no permitió obtener diferencias numéricas estadísticamente significativas. Sin embargo, la
representación de la tendencia de la distribución, conseguida a través de los estimadores no
paramétricos de kernel Gaussiano, evidenció una mayor concentración de datos en tiempos
menores a los 20 seg para el grupo que recibió la Dosis 2 (974.16 mg/Kg); comportamiento
claramente diferente al de los otros grupos.
La tendencia anterior se confirma con la latencia de escape del Laberinto Radial de 8
Brazos, los datos son más homogéneos y concentrados en tiempos menores a 800 seg para
el grupo que recibió la Dosis 2 (974.16 mg/Kg).
Las hembras presentaron menor número de desaciertos que los machos en el Laberinto
Radial de 8 Brazos, y, si bien la tendencia es que estos disminuyan según avanza el tiempo
del estudio, se pudo observar menor número de desaciertos en los grupos que recibieron
Aceite de Sacha Inchi.
81
La alta variabilidad dentro de los grupos no permitió calcular diferencias estadísticamente
significativas en cuanto a las sustancias que fueron administradas, sin embargo se observó
una tendencia a potenciar el poder cognitivo con el Aceite de Sacha Inchi en dosis de
974.16 mg/Kg.
No existieron diferencias estadísticamente significativas en el peso de los individuos
durante el tiempo de estudio (42 días). No hay evidencia de que el consumo de aceite de
Sacha Inchi genere cambios en el peso corporal. Tampoco se observaron cambios
macroscópicos en sus órganos internos.
Recomendaciones
Optimizar el proceso de extracción de aceite a partir de la almendra cruda con la finalidad
de mejorar su rendimiento. Realizar un estudio de antinutrientes tanto en la almendra como
en el aceite de Sacha Inchi previo a su utilización.
El Laberinto Radial de 8 Brazos es una prueba de comportamiento, más sensible a los
distractores externos que el Laberinto Acuático de Morris, pues en este los sujetos se
encuentran en una situación de estrés que enfoca su atención en el objetivo de sobrevivencia.
Por lo anterior se recomienda ampliar el presente estudio usando este método con dosis
superiores de Aceite de Sacha Inchi, por tiempos de administración prolongados y con un
tiempo de ensayo no mayor a tres días.
Adicionalmente se recomienda incluir ratones jóvenes con su sistema nervioso central en
desarrollo y ratones envejecidos con deterioro cognitivo natural.
82
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96
Anexos
A) Certificado Botánico
97
B) Certificado de la Materia Prima
98
C) Parte Experimental
C.1. Extracción del aceite de las almendras de Sacha Inchi por prensado en frío.
Figura 3: Sacha Inchi: (a) fruta verde, (b) fruta madura, (c) semillas,
(d) almendras (semillas sin cáscara)
Fuente: (Tobar. A, 2018)
Figura 4: Desinfección Figura 5: Secado
Fuente: (Tobar. A, 2018) Fuente: (Tobar. A, 2018)
a) b)
c) d)
99
Figura 6: Triturado Figura 7: Llenado
Fuente: (Tobar. A, 2018) Fuente: (Tobar. A, 2018)
Figura 8: Prensado
Fuente: (Tobar. A, 2018)
100
Figura 9: Envasado
Fuente: (Tobar. A, 2018)
Figura 10: Purificado
Fuente: (Tobar. A, 2018)
101
C.2. Certificado de la realización del control de calidad del Aceite de Sacha Inchi.
102
C.3. Perfil lipídico del Aceite de Sacha Inchi mediante cromatografía de gases acoplada a
un espectrómetro de masas (GC/MSD).
103
C.4. Datos obtenidos durante el entrenamiento de los ratones en el Laberinto Acuático de
Morris (Latencia de Escape).
TIEMPO (seg)
Grupo Ratones #
Días
Repeticiones
D1 D2 D3 D4 D5
CO
NT
RO
L N
EG
AT
IVO
(AG
UA
)
Machos
1
R1 95.00 44.63 41.85 10.27 132.00
R2 21.60 3.25 5.84 21.38 90.00
R3 22.52 3.76 6.58 23.82 37.55
2
R1 22.72 19.59 2.36 1.98 2.56
R2 16.84 30.84 5.51 4.99 2.60
R3 2.60 2.95 9.76 4.71 2.55
3
R1 6.06 31.25 3.62 28.29 3.49
R2 5.67 3.38 9.56 9.53 3.54
R3 72.00 2.91 4.06 2.86 9.22
Hembras
1
R1 40.37 8.70 28.21 3.27 5.40
R2 8.93 7.79 14.54 2.95 4.35
R3 36.76 10.60 4.76 3.47 4.66
2
R1 138.00 5.58 41.47 5.66 13.18
R2 100.00 4.91 3.13 7.91 2.04
R3 40.10 11.17 10.59 2.10 11.09
3
R1 15.44 13.55 8.40 15.12 5.00
R2 21.84 2.36 5.23 2.47 3.05
R3 2.84 6.34 2.66 2.05 5.19
104
TIEMPO (seg)
Grupo Ratones # Días
Repeticiones D1 D2 D3 D4 D5
CO
NT
RO
L P
OS
ITIV
O
(GIN
KG
O B
ILO
BA
)
Machos
1
R1 87.00 26.10 3.84 22.43 7.19
R2 7.53 5.73 2.21 2.75 3.90
R3 16.23 3.25 2.43 1.76 9.86
2
R1 10.77 9.51 2.12 12.14 7.42
R2 20.21 1.80 22.91 20.12 12.64
R3 2.01 6.26 2.29 9.31 47.49
3
R1 47.67 87.00 6.64 3.38 2.95
R2 96.00 7.83 13.47 19.82 2.70
R3 3.78 8.39 68.00 9.62 29.91
Hembras
1
R1 7.47 5.23 2.77 24.11 20.48
R2 71.00 27.83 2.07 11.15 12.01
R3 55.90 16.88 2.19 7.94 61.00
2
R1 10.11 35.20 26.06 22.91 11.99
R2 104.00 61.00 14.26 8.65 13.76
R3 120.00 3.45 12.87 8.43 13.91
3
R1 29.81 10.27 2.54 3.11 12.35
R2 8.51 2.21 26.72 40.76 1.95
R3 6.25 2.26 16.67 3.17 38.28
TIEMPO (seg)
Grupo Ratones # Días
Repeticiones D1 D2 D3 D4 D5
AC
EIT
E D
E S
AC
HA
IN
CH
I
(DO
SIS
1)
Machos
1
R1 19.20 123.00 13.35 25.88 10.32
R2 25.80 12.64 13.60 37.33 4.40
R3 8.43 4.90 3.99 3.85 4.13
2
R1 18.16 19.80 3.42 37.58 1.96
R2 5.98 6.08 1.98 2.65 5.87
R3 2.14 37.39 2.85 1.59 3.66
3
R1 36.08 6.10 2.07 6.08 3.97
R2 47.49 4.79 9.37 5.42 32.72
R3 3.03 10.76 2.63 2.89 2.32
Hembras
1
R1 13.89 7.63 120.00 39.30 83.00
R2 120.00 120.00 22.46 2.85 22.00
R3 120.00 81.00 26.05 28.60 113.00
2
R1 31.55 5.12 13.44 9.42 11.63
R2 2.50 30.23 18.77 22.22 7.58
R3 13.80 28.26 30.92 51.53 42.23
3
R1 120.00 50.27 38.17 63.00 4.26
R2 28.57 20.03 20.85 37.53 9.27
R3 120.00 20.79 7.86 71.00 24.92
105
TIEMPO (seg)
Grupo Ratones # Días
Repeticiones D1 D2 D3 D4 D5
AC
EIT
E D
E S
AC
HA
IN
CH
I
(DO
SIS
2)
Machos
1
R1 69.00 10.76 39.24 28.74 35.56
R2 47.84 3.08 14.32 117.00 24.07
R3 20.11 10.16 16.11 30.59 36.41
2
R1 84.00 38.85 40.42 53.36 22.85
R2 30.93 33.09 4.84 11.06 30.90
R3 58.65 9.48 12.82 2.77 56.85
3
R1 45.05 19.94 5.55 25.02 8.96
R2 10.66 2.19 6.62 23.00 4.88
R3 7.90 4.81 9.89 45.71 5.34
Hembras
1
R1 26.23 5.27 20.56 7.69 8.02
R2 16.26 11.63 12.59 3.10 3.74
R3 20.03 4.12 15.31 4.25 4.49
2
R1 26.10 29.54 8.43 1.94 7.71
R2 4.68 4.39 48.44 1.66 2.05
R3 27.76 4.28 26.74 3.90 2.40
3
R1 16.79 45.52 59.65 5.13 42.09
R2 31.53 2.94 21.52 32.48 44.14
R3 12.46 35.70 48.21 29.75 9.46
106
C.5. Datos obtenidos durante el entrenamiento de los ratones en el Laberinto Radial de 8
brazos (Latencia de Escape).
TIEMPO (seg)
GRUPO RATONES # D1 D2 D3 D4 D5
CO
NT
RO
L
NE
GA
TIV
O
(AG
UA
) Machos
1
H A
B I T
U A
C I Ó
N
240 200 342 196
2 420 229 202 975
3 420 228 576 227
Hembras
1 600 138 483 398
2 120 142 245 278
3 420 592 233 620
CO
NT
RO
L
PO
SIT
IVO
(GIN
KG
O
BIL
OB
A)
Machos
1 240 164 128 202
2 240 116 76 258
3 720 635 896 817
Hembras
1 480 822 770 481
2 360 248 120 203
3 120 255 291 260
AC
EIT
E D
E
SA
CH
A I
NC
HI
(Dosi
s 1)
Machos
1 600 172 354 210
2 120 458 538 576
3 420 384 1050 1206
Hembras
1 240 98 368 472
2 180 96 120 106
3 120 88 86 168
AC
EIT
E D
E
SA
CH
A I
NC
HI
(Dosi
s 2)
Machos
1 180 179 399 111
2 120 173 183 144
3 300 101 238 204
Hembras
1 360 134 536 396
2 180 163 123 149
3 240 181 232 165
107
C.6. Datos obtenidos durante el entrenamiento de los ratones en el Laberinto Radial de 8
brazos (Número de Aciertos y Desaciertos).
Número de Elecciones Incorrectas
de los Brazos
Número de
Elecciones
Correctas de los
Brazos GRUPO RATONES # D1 D2 D3 D4 D5
CO
NT
RO
L
NE
GA
TIV
O
(AG
UA
) Machos
1
H A
B I T
U A
C I Ó
N
10 9 9 2 8
2 8 2 0 12 8
3 9 7 15 6 8
Hembras
1 12 3 12 17 8
2 7 4 3 9 8
3 9 7 3 4 8
CO
NT
RO
L
PO
SIT
IVO
(GIN
KG
O
BIL
OB
A)
Machos
1 8 12 4 4 8
2 6 4 2 3 8
3 7 14 7 7 8
Hembras
1 12 19 9 4 8
2 9 12 1 6 8
3 8 6 1 3 8
AC
EIT
E D
E
SA
CH
A I
NC
HI
(Dosi
s 1)
Machos
1 9 3 7 4 8
2 12 19 22 15 8
3 10 3 11 13 8
Hembras
1 9 1 7 8 8
2 6 3 1 0 8
3 6 3 2 5 8
AC
EIT
E D
E
SA
CH
A I
NC
HI
(Dosi
s 2)
Machos
1 9 3 11 0 8
2 7 4 3 1 8
3 8 0 8 6 8
Hembras
1 9 1 12 6 8
2 3 6 0 3 8
3 6 5 7 2 8
108
C.7. Disección de los ratones.
Figura 11: Disección
Fuente: (Tobar. A, 2018)