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UNIVERSIDAD AUTÓNOMAMETROPOLITANA

Presenta: J. Patricia Ambrosio TorresAsesor Interno: M.B.E. Enrique Mendieta

MarquezAsesor Externo: Dra. Leticia Rocha Zavaleta.INSTITUTO DE INVESTIGACIONES BIOMÉDICASDEPARTAMENTO DE BIOLOGÍA MOLECULAR Y

BIOTECNOLOGÍAUNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE

MÉXICO.

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ESTUDIO DE LA RESPUESTA INMUNE HUMORAL PROVOCADA POR EL VIRUS PAPILOMA HUMANO,

EN MUJERES INFECTADAS.

ANTECEDENTES.

El cáncer representa la segunda causa de muerte en la población mundialdespués de las cardiopatías. Podemos definir como cáncer ó neoplasia, a toda unapatología producida por alteraciones en los mecanismos que regulan el ciclo celulary que trae como consecuencia la división descontrolada de las células que formanun tejido y por tanto, la formación de tumores, y la manifestación de las siguientespropiedades, características de las células cancerosas: [2]

Clonalidad: En la mayoría de los casos, el cáncer se origina de una única célulaprogenitora que prolifera y da lugar a un clono de células malignas.Autonomía: El crecimiento no es regulado de forma adecuada por las influenciasbioquímicas y físicas normales del ambiente. [2]

Anaplasia: Existe una ausencia de diferenciación celular normal coordinada.Metástasis: Las células cancerosas tienen la capacidad de crecer y diseminarse aotras partes del cuerpo. [2]

Estas propiedades pueden ser expresadas por las células normales no malignasdurante épocas adecuadas, por ejemplo, durante la embriogenesis y cicatrizaciónde heridas, no obstante, en las células cancerosas, estas características tienen ungrado excesivo. El proceso mediante el que una célula normal se convierte en unacélula maligna que presenta estas características se denomina transformaciónmaligna y su sintomatología dependerá de los productos moleculares específicoselaborados por el tumor y de la localización del mismo. [2]

Cada año a nivel mundial se presentan más de seis millones de muertes poralgún tipo de neoplasia maligna, de las que corresponden 235,000 a cáncercervical. A este respecto, la Organización Mundial de la Salud estima que en 25años, de no implantarse programas organizados de prevención en países en vía dedesarrollo, se presentarán 350,000 muertes anuales por esta enfermedad, a pesarde ser una neoplasia que puede ser 100% prevenible, a través de la prueba dePapanicolaou. [2]

En México mueren 12 mujeres cada día (una cada dos horas) por cáncercervico uterino, pese a que más del 50% de estos tumores malignos tienen cura,(Dir. Gral. de Servicios Médicos de la UNAM, 2002). Una lesión precancerosa,requiere unos diez años para desarrollarse, y la detección temprana de lesionespermite una tasa de curación del 95%. Además este padecimiento malignopresenta síntomas de alerta como sangrados o hemorragias inusuales, secreciones

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o dolores en la parte baja del abdomen; que la mayoría de veces pasaninadvertidos por falta de información de la mujer. Según el Instituto deCancerología, el 88% de los pacientes con este problema pertenecen a la escalamás baja de ingresos, lo cual se traduce en baja escolaridad, desnutrición y lejaníageográfica de los centros de salud.

Actualmente existe evidencia experimental y epidemiológica de que la infecciónpor virus de papiloma humano es la principal causa de cerca del 85% de neoplasiacervical. La infección por VPH se trasmite por contacto personal íntimo y estáfavorecida por pequeños traumatismos ó heridas en el sitio de la infección.

En varones, los condilomas se sitúan más a menudo en el frenillo o el surcocoronal, pero pueden afectar a cualquier sitio del pene. En mujeres, las verrugasaparecen primero en el interior posterior y labios adyacentes; después seextienden a otras partes de la vulva, siendo frecuente que alcancen el perineo y elano. Los condilomas suelen afectar a vagina y cervix. Estas lesiones puedenhallarse sin que existan verrugas externas, por lo que en ocasiones su diagnosticoes difícil ya que no da sintomatología clínica, por lo que cuando se trata de un tipode VPH maligno, a menudo, cuando hay aparición de síntomas ya existe cáncer.

Las reacciones defensivas del huésped a la infección por VPH se conocen mal.La mayor parte de los estudios inmunológicos han sido difíciles de interpretar, puesno se han utilizado antígenos bien caracterizados. La posible importancia de lasreacciones tipo-específicas no se ha valorado bien debido a la escasez del materialantigénico adecuado que existe. Se han descubierto anticuerpos IgM e IgGespecíficos contra el virus en enfermos con y sin signos clínicos de infección activa.Se han medido las reacciones de inmunidad celular a los antígenos del VPH, y alparecer, los enfermos con defectos de la inmunidad celular son más susceptiblesque las personas normales a las infecciones por VPH. Estos enfermos, enocasiones, presentan una extensa afección por VPH.

El progreso en el entendimiento de la respuesta inmune celular y de otrosaspectos de la respuesta inmune del hospedero contra la infección del VPH, asícomo el desarrollo tanto de diversos tipos de vacunas y estrategias deinmunoterapia como de muchos de los resultados obtenidos en estasinvestigaciones, han permitido un futuro prometedor para implementar medidasterapéuticas que involucran la respuesta inmune en el tratamiento del cáncercervicouterino. Sin embargo, mientras no se demuestre la eficacia de losanticuerpos neutralizantes del VPH, los datos provenientes de modelos animalesquedarán como simple aproximación de vacunas profilácticas.

Como ya se ha demostrado, para disminuir la incidencia del cánceríntimamente relacionados y para ello es necesario principalmente tomar medidascervicouterino, debe controlarse el problema infeccioso del VPH, ya que están

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CÁNCER CERVICOUTERINO

Prolapso de vagina con verrugas y cáncer.

LESIONES POR VPH

Verrugas en el escroto

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propedéuticas adoptando una cultura de prevención y por otro lado seguirconociendo e investigando acerca de las respuestas generadas en el huésped,inducidas por las proteínas codificadas por este virus, que muta con frecuencia ypor tanto, presenta diversos determinantes antigénicos. En este proyecto se realizaun estudio de la respuesta inmune humoral empleando un epítope que conformala proteína más abundante en la cápside del VPH, tipo 16, que es el más común enneoplasias malignas en las mujeres de nuestro país.

INTRODUCCIÓN

ANATOMIA DEL UTERO

El útero sexualmente maduro, de aspecto piriforme y unos 7-8centímetros de longitud, está situado inclinado hacia delante y flexionado tambiénhacia delante, por detrás y en parte, por encima de la vejiga urinaria. Su partemás gruesa está arqueada hacia delante y arriba y la más delgada hacia delante yabajo. Los dos tercios superiores del útero forman el cuerpo uterino, y el tercioinferior constituye el cuello uterino (cervix). [4]

El paso entre el cuerpo y el cuello uterino forma el estrecho uterino, deunos 6 mm de longitud, también llamado istmo del útero. Una parte del cuellouterino, la llamada porción vaginal, sobresale hacia la vagina. La región cervicalque no sobresale hacia la vagina se denomina porción supravaginal. La longitudtotal del canal cervical más la cavidad uterina alcanza los 6-7 centímetros. [4]

HISTOLOGIA DEL CERVIX

El cuello forma la pared del canal cervical. Su revestimiento mucosotiene un grosor de 2 a 3 mm. Su superficie irregular está formada por unospliegues ramificados llamados plicae palmatae. Su estroma es denso y lasglándulas, que son relativamente escasas, están orientadas oblicuamente enrelación con el eje del canal cervical. [4]

El canal está revestido por epitelio cilíndrico alto cuyos núcleos selocalizan cerca de la base de células, mientras que la mayor parte del citoplasmaestá lleno de moco. La mucosa contiene muchas glándulas grandes, que difierende las del cuerpo y del istmo por el hecho de que están notablemente ramificadasy revestidas por células cilíndricas altas, secretoras de moco, semejantes a las delepitelio superficial. Hay de vez en cuando células ciliadas. [4]

La superficie externa de la porción vaginal del cuello es lisa y estárecubierta por epitelio desde plano simple hasta estratificado, dividido en tresestratos, que desde su porción más interna hasta la más externa que se encuentra

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totalmente diferenciada son: la basal, la espinosa, granulosa y córnea. Las célulasde este epitelio son ricas en glucógeno. La transición entre el epitelio cilíndricomucosecretor del canal cervical y el epitelio plano estratificado de la porciónvaginal es brusco. Por regla general, la frontera está justamente dentro del orificioexterno del cuello. En algunas mujeres, sin embargo, particularmente después dehaber tenido niños, hay placas de epitelio cilíndrico del endocervix que se extiendepor la porción vaginal hasta distancias variables. Se les llama de modo inapropiado“erosiones cervicales”. Son particularmente susceptibles a las reaccionesinflamatorias y son causa frecuente de flujo vaginal ó leucorrea. Si no se las trata,las erosiones cervicales y la inflamación crónica pueden predisponer al cáncercervicouterino. [4]

Las células superficiales del epitelio cervical se están desprendiendoconstantemente al líquido vaginal. Se las puede examinar en los frotis vaginalesteñidos y el hallazgo de células anormales puede proporcionar un diagnosticoprecoz del cáncer. [4]

VIRUS DE PAPILOMA HUMANO

Los VPH pertenecen al género A de la familia Papovaviridae y son virussin cubierta , de 50 a 55 nm de diámetro, con cápsides icosaédricas formadas por72 capsómeros. Contienen un genoma de ADN circular de doble filamento con7900 pares de bases aproximadamente, que codifican para dos tipos de proteínas;uno de expresión temprana, que son de regulación (E1, E2, E4, E5, E6, E7) y otrode expresión tardía, y en este grupo se encuentran las proteínas estructurales (L1y L2). Hablamos de proteínas tempranas ó tardías, en base al ciclo de vida normaldel virus, ya que aquellos productos que regulan la expresión génica, es decir, lasproteínas tempranas, son liberadas por las células de las capas basal y suprabasaldel epitelio infectado; la proteína E4, que participa en la regulación de lareplicación del ADN viral, se expresa en las capas espinosa y granular de dichoepitelio, mientras que la producción de las proteínas denominadas “tardías”, esdecir, L1 y L2, se observa en la capa escamosa, que es la última que conforma elepitelio, que con frecuencia es remplazada, lo cual representa una estrategia delvirus para escaparse del sistema inmune ya que es la proteína L1, la que presentalos determinantes antigénicos más importantes. [17]

CLASIFICACIÓN DE LOS VPH

Se conocen más de 80 tipos de VPH. De acuerdo con la similitud de lassecuencias nucleotídicas del ADN viral, son especies específicos e infectan célulasepiteliales de mamíferos. Los VPH, pueden ser clasificados como virus de “bajoriesgo” o virus de “alto riesgo”; induciendo enfermedades desde verrugas hastacondilomas, y lesiones que pueden progresar a neoplasias malignas. Con base aeste criterio, los VPH’s se pueden clasificar en tres grupos: los asociados conlesiones benignas o de bajo riesgo (VPH 6, 11, 30, 34, 40, 42, 43, 44, 53, 55, 57,

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66) y los asociados con lesiones escamosas intraepiteliales y carcinomas invasivosdivididos a su vez en un grupo de riesgo intermedio (VPH 31, 33, 35, 51, 52) y ungrupo de alto riesgo oncogénico (VPH 16, 18, 45, 46). [5]

Los tipos 16 y 18 de VPH, se han encontrado aproximadamente en el50-70% de los carcinomas y otros tipos como el 31, 33, 35, 51, 52 y 58, se hanpodido encontrar en los casos restantes. [5]

La infección por VPH no es lítica y generalmente produce lesionesverrugosas planas o hiperqueratosas del epitelio escamoso sin inflamación local.Los VPH aparentemente han evolucionado para evadir la respuesta inmune, y lainfección generalmente dura varios años. El ciclo de replicación de los VPH se llevaa cabo dentro de los queratinocitos; los viriones maduros escapan de la superficieepitelial infectada en los queratinocitos que se descaman. De esta manera,durante la infección hay poca presentación de antígenos virales al sistema inmunepor células presentadoras de antígenos (tanto local, tanto local comosistémicamente ) La lesión producida por los VPH de los genotipos trópicospara la mucosa anogenital, ocasionalmnte se convierte en maligna,particularmente en los sitios de unión del epitelio escamo-columnar. La infecciónpor VPH del cérvix humano es el principal antecedente del cáncer cervicouterino,por lo tanto se le ha dado prioridad a la infección por VPH como blanco para eldesarrollo de tratamiento profiláctico y terapéutico. [5]

VIRUS PAPILOMA HUMANO Y CANCER.

Gran cantidad de estudios epidemiológicos revelan que la mayor parte delos canceres están asociados a factores del medio ambiente. La mayoría de estosfactores inducen mutaciones en el ADN, como lo hacen algunos virus que actúanen periodos largos y probablemente en combinación con otros agentes. Estamisma acción la encontramos en los carcinógenos sospechosos de causar algunasneoplasias. Existen diversos ejemplos de relaciones virus-cáncer, tales como el dehepatitis B con el cáncer hepático, el Epstein-Barr con Linfoma de Burkitt, etcétera,en los cuales no ha sido posible determinar una relación causal directa entre estosy la neoplasia. [22]

El VPH, se encuentra claramente asociado con la inducción al cáncer. Elciclo de vida de el papilomavirus, puede ser dividido en tres etapas . La primera deellas incluye la entrada, a la célula huésped, en esta etapa el genoma del VPH esamplificado produciéndose alrededor de 1000 copias por célula infectada. Enrealidad no hay una fase lítica, la fase infecciosa, tiene la finalidad principal, demultiplicar el genoma del VPH y tiene lugar en las células basales del epitelio. Lasegunda fase, incluye ya el primer paso hacia la transformación celular, es decir, laintegración al genoma del huésped del VPH, antes de este evento, se da la

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Representación esquemática del genomaviral del VPH - 16

HPV-16

7904/1

1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

AL

P97LCR

E6

E7

E1

E4E2

E5

L2

L1

VIRUS DE PAPILOMA HUMANO

ApoptosisE2F

+Rb-E7

Rb-E2F

P53-E6

p53

E6 E7

E2

p97

E6 E7

VIRUS PAPILOMA HUMANO YCANCER.

Progresodel

Ciclocélular

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expresión de los genes tempranos , controlada por la acción de E1 y E2, pero en elmomento en que el genoma del VPH se integra al de la célula, queda bloqueada laexpresión del gen E2, con lo cual se pierde el control de la regulación de los genesE6 y E7, que llevan a la transformación. La proteína codificada por el gene E2, seune la promotor p97, controlando así la transcripción de E6 y E7, estos eventos sellevan a cabo ya en los estratos espinoso y granuloso del epitelio. Durante estafase, el genoma viral se replica al replicarse el ADN de la célula, por lo que el virusevita que se detenga la división celular, garantizando así, su permanencia yreplicación. [13,17]

La tercera fase, que ocurre en el estrato corneo del epitelio, es decir, en lascélulas que ya están diferenciadas, se expresan los genes tardíos, como son L1 yL2 cuyos productos proteicos forman parte de las capsides virales. [13]

El VPH ha desarrollado, un eficiente sistema para modular la actividad degenes supresores de tumores en la célula. Concretamente, la proteína E6, de VPH-16 y 18, tiene la capacidad de interactuar con la proteína p53 promoviendo sudegradación por la vía de la ubiquitina, mientras que la proteína E7 forma uncomplejo con la proteína retinoblastoma (pRb). Actualmente se ha comprobado,que la proteína p53 es capaz de actuar como factor de transcripción de variasproteínas y enzimas involucradas en la reparación y replicación del ADN. Alestudiar el proceso de replicación del VPH, se ha observado que la proteína p53,es un potente represor de este proceso, al evitar que se forme el dímero entre E1y E2, indispensable en la replicación del genoma de VPH. Por su parte, la pRb,forma un complejo con la proteína E2F evitando el paso de la fase G1 a S del ciclocelular, en caso de que haya alteraciones genómicas, ya que E2F, actúa comofactor de transcripción de elementos proteicos importantes para la progresión delciclo celular. La proteína E7 de VPH-16 y 18, se une a pRb, liberando a E2F,favoreciendo la inmortalización y evitando el arresto del ciclo celular, y la induccióna apoptosis.[23]

BASES DE LA RESPUESTA INMUNE HUMORAL.

La inmunidad humoral, es mediada por anticuerpos, los cuales sonproducidos por las células de la línea de los Linfocitos B. La función fisiológica delos anticuerpos, es la de neutralizar y eliminar el antígeno que promovió suformación. Un aspecto fundamental, en la inmunidad humoral, es que laproducción de todas las variedades de anticuerpos, es iniciada, por la interacciónde un antígeno con un fragmento de moléculas de IgM y IgD expresados porlinfocitos B específicos para dicho antígeno. El antígeno provoca una respuesta anivel de las células de la médula ósea, provocando la diferenciación de éstas hacíala formación de Linfocitos B específicos hacia un tipo de antígeno. [1]

Las propiedades más importantes de una respuesta mediada poranticuerpos son las siguientes:

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1. Los antígenos proteicos, no inducen respuesta inmune humoral enausencia de Linfocitos T. La producción de anticuerpos, para el caso de antígenoproteicos, requiere la estimulación de los Linfocitos B, mediante la intervención deun tipo especial de Linfocitos T, conocidos como auxiliares. Los Linfocitos B,requieren dos tipos de señales ó estímulos para su proliferación y diferenciación.Un tipo de señal proviene del antígeno, el cual interactúa con la molécula de Ig,localizada en la membrana del Linfocito B específico. El segundo tipo de señal,proviene del Linfocito T auxiliar, y sus productos de secreción. [1]

2. Los antígenos no proteicos, como los polisacáridos y los lípidos, inducenla respuesta inmune humoral, de forma inespecífica y sin la intervención deLinfocitos T auxiliares. [1]

3. La respuesta humoral, primaria y secundaria, difieren cualitativa ycuantitativamente en varios aspectos. Primero, la respuesta secundaria sedesencadena más rápido que la respuesta primaria, y la cantidad de anticuerposproducidos, se aprecian en mayor cantidad en la respuesta secundaria. Este es unclaro ejemplo, de memoria inmunológica. La respuesta inmune humoral primaria,resulta de la activación de células B, que no se habían estimulado previamente,mientras la respuesta secundaria, obedece a la estimulación de las células dememoria, previamente diferenciadas y clonadas. En la respuesta primaria, la clasedominante de Ig secretada, es la IgM. En contraste, otros tipos deinmunoglobulinas, como la IgG, IgA, ó IgE, se observan durante el contactosecundario con el antígeno específico. Finalmente, hay una mayor afinidad hacia elantígeno, durante la respuesta secundaria que durante la primaria. [1]

4. La memoria inmunológica, se observa solamente en la respuesta inmuneproducida por antígenos proteicos; esto sugiere, que la respuesta humoralsecundaria, está regulada por la acción de Linfocitos T, y/o sus productos desecreción. [1]

Aunque todos los macrófagos pueden fagocitar antígenos, solo algunos tienenla capacidad para prepararlos de modo que pueden estimular los Linfocitos B.Tales macrófagos se caracterizan por presentar en su membrana un antígeno dehistocompabibilidad clase II. Estas células permiten que sobre la membranacelular queden restos de antígeno, donde éste es varias veces más eficazparaestimular una respuesta inmunitaria que el no fijado. Tanto linfocitos B comocélulas T auxiliares sólo responderán al antígeno si está unido a un macrófago conMHC clase II. Estos macrófagos también fomentan la respuesta de linfocitos Bliberando una sustancia conocida como interleucina 1, que activa a las células Tauxiliares. [1]

La proliferación de células B se regula rigurosamente, y en condicionesnormales sólo sucederá si se cumplen ciertos requisitos. Primero, que el antígenosea preparado por ciertos macrófagos y presentado al Linfocito B cuando todavíaestá adherido a la superficie de uno de éstos; segundo los Linfocitos T auxiliares,deben responder también al mismo antígeno. [1]

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La unión de un antígeno, con la molécula de inmunoglobulina, ubicadaen la membrana del Linfocito B específico, constituye el evento inicial, para que sedesencadene la respuesta inmune humoral. Los antígenos proteicos, al entrar encontacto con los Linfocitos B, promueven dos tipos de respuesta. Primero, estosantígenos, provocan la producción de segundos mensajeros intracelulares, queestimulan la entrada de las células B al ciclo celular; la interacción con el antígeno,tal vez, también promueva la preparación de las células B para la subsecuenteestimulación por los Linfocitos T auxiliares. Cuando las células T auxiliares entranen contacto con un antígeno unido a un macrófago, también secretan substancias,las cuales son mezclas complejas de proteínas ; algunas como interleucina 2,actúan en forma inespecífica respecto al antígeno, facilitando las respuestas delinfocitos B a antígenos. Otras son específicas, y estimulan la respuesta delinfocitos B únicamente para un antígeno. [1,14]

Cuando dos determinantes antigénicos se unen a las inmunoglobulinasubicadas en la membrana de una célula B, se producen en ésta una serie decambios como: un incremento en los niveles de Ca++, intracelular, asi como laactivación de proteín-cinasas, esto sucede después de los primeros minutos delcontacto. Después de los 30 a 60 minutos, seguidos al contacto Ag-Ac, los nivelesde RNA mensajero, en células T y B, que codifican para los proto-oncogenes c-fosy c-myc, incrementan, lo cual trae como consecuencia la continua división y portanto proliferación de las células del sistema inmunocompetente. [1,14]

Doce horas después, del reconocimiento, del antígeno por la célula B,por medio de las moléculas de Ig´s, se registra un incremento en los Linfocitos B,de RNA mensajero para la síntesis de elementos proteicos, que intervienen en elpaso de la fase Go a G1 del ciclo celular. [1,14]

Después de 24 horas, las células B, muestran un incremento en losniveles de expresión de los receptores de membrana, para las citosinas derivadasde los Linfocitos T auxiliares. [1,14]

Una vez que las células B han sido estimuladas, tanto por losmacrófagos que presentan al antígeno, como por las T auxiliares, éstas comienzana presentar un flujo y el antígeno unido a la membrana se concentra en unapequeña región ( o casquete). Después de formarse el casquete, el linfocito B seagranda y empieza a dividirse repetidamente. Al cabo de unos días, ladescendencia de esta célula se diferencia gradualmente en dos poblacionescelulares de forma y función distintas. Unas adquieren capacidad de fabricargrandes cantidades de anticuerpos y se laman células plasmáticas. Las otras nocambian de forma y sirven como células de memoria. [1]

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Las células plasmáticas son ovoides, con un diámetro de 8 a 20µm. Seencuentran ampliamente distribuidas en todo el organismo, pero se concentransobre todo en la pulpa roja del bazo, la médula de los ganglios linfáticos y lamédula ósea. Poseen un núcleo redondo en posición excéntrica, cuya cromatina sedistribuye de manera desigual, en forma tal que el núcleo puede parecerse a unarueda de carreta. Poseen un citoplasma abundante, intensamente basófilo, comocorresponde a una célula llena de ribosomas, que produce anticuerpos. Como espreciso que dichos anticuerpos sean secretados rápidamente, estas células poseentambién un aparato de Golgi de gran tamaño que se tiñe mal. En condicionesnormales, los anticuerpos se secretan mediante pinocitosis invertida al pocotiempo de sintetizarse. La especificidad de la inmunoglobulina producida por estascélulas plasmáticas es la misma del receptor de antígenos que existía inicialmenteen la membrana de la célula B progenitora. Una vez alcanzada su plenadiferenciación, las células plasmáticas mueren al cabo de tres a seis días,desapareciendo población celular. El fenómeno se refleja en los niveles deanticuerpos en suero, pues a partir de la desaparición de estas células, lasinmunoglobulinas producidas por ellas disminuyen progresivamente, aconsecuencia de la obligada muerte de las células plasmáticas. [1,14]

La otra población celular a la cual da origen una célula B sensible a losantígenos cuando es estimulada, es decir, las células de memoria, siguepresentándose como linfocitos pequeños y es imposible distinguirmorfológicamente de la célula inicial. Estas células poseen receptores que soninmunoglobulinas provistas de la misma especificidad que las de la célulaprogenitora, aunque cambia la clase inmunoglobulina de superficie; en lugar deIgM, es ahora IgG, IgA o IgE. Estas células viven muchos meses o años despuésde la primera exposición al antígeno. [1,14]

ESTRUCTURA DE LAS INMUNOGLOBULINAS

La inmunoglobulina G (IgG) es la que se encuentra en mayorconcentración en el suero, y su estructura puede utilizarse como modelo para lasdemás inmunoglobulinas. La IgG tiene peso molecular de 180 000 y constante desedimentación de 7S. Mediante el microscopio electrónico, se logra ver que setrata de una molécula con forma de Y, y los “brazos “ de la Y pueden enlazarantígenos. Si la molécula se trata con sustancias que rompen los enlaces disulfuro(-S-S-), se separa en cuatro cadenas polipeptidicas. Dos de estas cadenas sellaman “pesadas “ , pues cada una tiene un peso molecular del orden de 50 000.Las otras dos son “ligeras” y el valor correspondiente es casi de 25 000. Al tratarcon papaína la molécula de IgG, ésta se rompe en tres fragmentos de tamañoaproximadamente igual, que corresponden a los dos brazos y a la cola de lamolécula en forma de Y. Dos de los fragmentos correspondientes a los “brazos” dela molécula son idénticos, y conservan la capacidad de fijar los antigenos, por locual se les llama fragmentos Fab. El tercer fragmento, desde la “cola” no puede

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fijar antigenos, pero es cristalizable y se le llama Fc, pero deja unidos los dosfragmentos Fab, obteniéndose un fragmento nuevo que se llama F(ab)’. [3]

Si se observa la IgG con microscopio electrónico, puede verse que lasregiones Fab son móviles, y se pueden desplazar libremente alrededor del centrode la molécula, como si existiera una bisagra. Cuando se estudia la serie deaminoácidos en esta región se encuentra un número muy alto de prolina. En virtuda su forma especial, la prolina produce un doblez a ángulo recto en las cadenaspolipeptídicas, puesto que dicha cadenas polipeptídicas pueden girar librementealrededor de los enlaces peptídicos, el efecto de varias prolinas ligadas equivale acrear una especie de “junta universal” alrededor de la cual pueden girar librementelas cadenas polipeptidicas. [3]

Al comparar la composición en aminoácidos de una gran variedad deproteínas de tipo IgG, se vio que las cadenas polipeptidicas, tanto ligeras comopesadas, se podían dividir en dos regiones diferentes. La porción de estas cadenascorrespondientes al extremo terminal C (carboxilo) mostraba composición y ordenrelativamente constantes. En cambio, la porción correspondiente al extremo N(amino), en cada cadena resultó muy variable. Cada región variable poseeaproximadamente 110 aminoácidos y representa poco más o menos la mitad de lacadena ligera o un cuarto de la cadena pesada. [3]

Las fuerzas de enlace entre antígenos y anticuerpos se puedenconsiderar todas como interacciones no covalentes, las cuales permiten volver autilizar las moléculas de anticuerpos, es decir, se trata de uniones reversibles. Losenlaces no covalentes suelen formarse a distancias intermoleculares relativamentepequeñas, y por consiguiente, sólo pueden aparecer cuando las dos moléculas seaproximan mucho. Por tanto, la unión más firme entre el antígeno y el anticuerpose dará cuando la forma de los determinantes antigénicos y la forma del foco decombinación sobre el anticuerpo sean muy semejantes. Esta necesidad de unaestrecha correspondencia se ha comparado con la especificidad de una llave por sucerradura. [3]

Una de las fuerzas más evidentes que participan en la unión antígeno -anticuerpo es la interacción electrostática (iónica) entre ácidos aspártico oglutámico, de carga negativa, en una de las moléculas y las cadenas laterales de lalisina, arginina e histidina, de carga positiva, sobre la otra molécula. Sin embargo,las fuerzas no covalentes más importantes entre las que contribuyen la interacciónantígeno-anticuerpo son los enlaces hidrófobos. Muchas cadenas laterales nopolares en los aminoácidos son hidrófobas, y tienden a unirse en forma tal que noquede agua entre ellas, formándose asi un enlace estable. [3]

El segundo grupo de fuerzas no covalentes que contribuyen al enlaceantígeno-anticuerpo son los puentes de hidrógeno. Estos se forman cuando un ion

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hidrógeno ligado a un átomo electronegativo interactúa con otro átomoelectronegativo, y así une a ambos.[3]

La región constante de la cadena pesada (CH) constaaproximadamente de 330 aminoácidos; y al estudiar dicha secuencia en la IgG, seencontró que comprende 3 subunidades similares, o regiones homólogas, llamadasCH1, CH2 y CH3. Es en la región constante de la cadena pesada (CH) en donde elantígeno es reconocido, y además se inicia la activación del sistema delcomplemento. [3]

CLASES DE INMUNOGLOBULINAS.

Inmunoglobulina G: Es la clase de Ig más abundante en el suerosanguíneo, razón por la cual desempeña el principal papel en los mecanismos dedefensa debidos a anticuerpos. En vista de su tamaño relativamente menor, enrelación con el resto de las Ig’s, sale de los vasos bastante más fácilmente que lasdemás, interviniendo así sin dificultad en la defensa de espacios tisulares ysuperficies corporales. La IgG es capaz de opsonizar, aglutinar y precipitar losantígenos, pero sólo puede activar la serie del complemento si se han acumuladosobre la superficie del antígeno un número suficiente de moléculas, en ladisposición correcta. [14]

Inmunoglobulina M: La IgM ocupa el segundo lugar deconcentración entre las proteínas séricas de la mayor parte de los animales. Constade cinco subunidades 7S, cada una bastante parecida a la molécula básica deinmunoglubulina en forma de Y, con la diferencia de que cada subunidad tienecuatro unidades homólogas CH, en lugar de tres. Los monómeros de IgM, seencuentran enlazados por puentes disulfuro, en forma circular y dos de lasunidades mencionadas se encuentran unidas a su vez por un pequeño polipéptidorico en cisteína, llamado cadena J. La IgM es la principal inmunoglobulinaproducida durante la respuesta inmune primaria. También se produce en caso derespuesta secundaria pero el fenómeno tiende a quedar enmascarado por laabundante formación de igG en este tipo de respuesta. A pesar de su producciónrelativamente escasa, la IgM resulta mucho más eficaz que la IgG en cuanto aactivación del complemento, opsonización, neutralización de virus y aglutinación.En vista de su gran tamaño, las moléculas de IgM prácticamente no salen nuncade los vasos, y es probable que tengan poco que ver con la protección en loslíquidos tisulares o las secreciones corporales. [14]

Inmunoglobulina A: Es una inmunoglobulina rica en carbohidratos,cuya estructura corresponde al modelo mencionado, Tiende a formar polímeros,además de la molécula básica 7S. La IgA es la más abundante en las secrecionesexternas del cuerpo. Como tal asume una importancia fundamental respecto a laprotección de tubo digestivo, vías respiratorias, aparto genitourinario y ojos. LaIgA no activa la serie del complemento, ni actúa como opsonina,. Sin embargo, escapaz de aglutinar las partículas antigénicas y de neutralizar los virus. [14]

Inmunoglobulina E: Es una Ig típica en forma de Y, compuesta porcuatro cadenas, que posee una región homóloga adicional en la cadena pesada,cerca de la región de la bisagra. Su concentración en el suero es muy baja, a pesarde lo cual posee una gran importancia por su intervención en reacciones dehipersensibilidad de tipo I (alergias y anafilaxias); también está relacionada con larespuesta inmune en muchas infecciones por helmintos. La IgE muestra unaregión Fc especial, que le permite fijarse a ciertas células cebadas y los basófilos,donde, en unión del antígeno, ocasiona la liberación por dichas células desustancias vasoactivas. [14]

Inmunoglobulina D. La IgD, es una inmunoglobulina 7S que se hallaprincipalmente en la superficie de ciertos Linfocitos B, donde funciona comoreceptor de antígeno. [14]

VIRUS PAPILOMA HUMANO Y EL SISTEMA INMUNOCOMPETENTE.

Estudios recientes, han demostrado que algunas proteínas codificadaspor el VPH, interactúan con elementos del sistema inmune, contrarrestandoconsiderablemente su función; además las partículas virales, libran mediantediversas estrategias la respuesta inmune , debido en parte a que las partículasvirales son presentadas minimamente a el sistema inmunocompetente. [11,22]

Los elementos de las familias Poxviridae y Herpesviridae, puedencodificar proteínas homólogas a las que en el huésped, regulan la expresión degenes que codifican para elementos del sistema inmune como las citocinas, ó bienpueden también inhibir la activación del sistema del complemento. Lospapilomavirus, son mucho más pequeños, de tal manera que no son capaces, deregular directamente la respuesta inmune, sin embargo, se han encontradoalgunas áreas importantes en las que los papilomavirus pueden actuar y modificarla respuesta inmune: [11]

1) Interrupción de la ruta de Interferón IFN:La síntesis de IFNα y β, por las células infectadas, tiene tres funciones

principales: a) Provoca la disminución de la síntesis de proteínas virales aldisminuir RNA mensajeros, que codifican para éstas. [11]

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b) Induce la expresión del Complejo Mayor de Histocompatibilidad tipo I(MHC-I), en las células no infectadas del cuerpo, incrementando su resistencia a laacción de asesinas naturales y por tanto, haciendo más susceptibles a las célulasinfectadas. [11]

c) Activan a las células asesinas naturales (NK), para que cumplan con lafunción de eliminar a células MHC-I negativas. [11]

Para que se lleve a cabo, la síntesis de IFNα, se requiere la formaciónde un complejo formado por el factor SGF-3 y el IFN tipo I unido a su receptor,dicho complejo actúa como factor de trasncripción. La proteína E7 de VPH-16,evita la formación de dicho complejo, con lo que inhibe la síntesis del IFNα.Además la proteína E7, tiene una interacción física con el factor que se une alpromotor, para la iniciación de la transcripción de IFNβ, evitando la síntesis deéste. Estas funciones de E7, se encuentran reguladas, por el dominio que se une ala proteína Retinoblastoma (Rb). [11] E6, puede regular la expresión de IFN α, β y STAT- I uniéndose a los factoresde transcripción correspondientes. [11]

2) Interferencia en el proceso de presentación del antígenoDurante un proceso infeccioso, los linfocitos T citotóxicos, reconocen a las célulasafectadas, mediante la unión a su receptor con moléculas MHC clase I de lascélulas infectadas ligado a peptidos virales ubicados en su superficie, de estaforma, el antígeno es presentado a los linfocitos T citotóxicos. Debido a laimportancia de este proceso, muchos virus tratan de bloquearlo. Además se haobservado, que las células tumorales no presentan el MHC-I. [11]E7 de VPH-16 y 18 puede reprimir al promotor de la cadena pesada del MHC-I.E7 de VPH-18, puede además regular la expresión de TAP-1 y LMP-2 (proteínaschaperonas, que transportan al MHC-1 a la superficie celular).Por su parte E5 de VPH, es una pequeña proteína hidrofóbica que se coloca en laendomembrana del Retículo Endoplasmico y el Aparato de Golgi de la célulahuésped; interactuando con la proteína 16K ductina / subunidad C que escomponente de las estructuras que conforman las uniones Gap y del sector VOque forma parte de la Bomba de Protones alterando el equilibrio osmótico y alintervenir en la comunicación celular promueve la activación de Factores deCrecimiento. [11] El transporte, de moléculas del Retículo Endoplásmico a través del Aparato deGolgi, a la membrana plasmática requiere de la glucosilación de las proteínastransportadoras. Dicha función, así como el ensamblaje del MHC se ve afectadopor la alcalinización en Aparato de Golgi y Endosomas producido por la entradade Na+. Adicionalmente, E5 de VPH, secuestra al MHC-I en el Aparato de Golgievitando así que llegue a la membrana. [11]E5 de VPH, afecta también la presentación del antígeno por MHC-II a través dela ruta endosomal: ya que inhibe el trafico de esta proteína al provocar cambiosen el pH de los endosomas. [11]

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3) Inhibición de Interleucina-18 (IL-18) La IL-18, es una citosina que juega un papel muy importante en lageneración de protección inmune en caso de infecciones por microorganismospatógenos como virus y bacterias. IL-18 es expresada por macrófagosprincipalmente. Una de las funciones de IL-18 es la de estimular la respuesta deTh1, induciendo la producción de IFN-γ, el cual se requiere para la producción deLinfocitos T citotóxicos específicos. La IL-18 actúa como citosina proinflamatoria,induciendo la expresión de factor de necrosis tumoral, IL-1 y varias quimiosinas.Actualmente se sabe que varios virus, tales como citomegalovirus y poxvirus,inhiben la síntesis de IL-18. Por su parte, la proteína codificada por E6 de VPH-16, actúa directamente uniéndose a IL-18, evitando así, la identificación por sureceptor en las células NK, y en los Linfocitos B, contrarrestando una respuestatanto Th1 como Th2, adecuada [11].

4) Resistencia a la lisis provocada por las células (asesinas naturales) Las células NK, son un importante componente del sistema inmune celularinnato de defensa antiviral, particularmente durante la respuesta inmunetemprana, promoviendo la inducción de Linfocitos T citotóxicos (CTL). Estemecanismo se lleva a cabo, mediante la intervención de las moléculas delComplejo Mayor de Histocompabilidad (MHC) clase I, principalmente,localizadas en la membrana de los macrófagos, y que tienen la función depresentar aquellas partículas que no identifican como propias (antígenos), a lascélulas NK, desencadenando así una respuesta inmune de tipo Th1. Aquellascélulas que presentan bajos ó nulos niveles de expresión de las moléculas MHCclase I ó II, no pueden ser reconocidas por las células NK, ya que no localizan,el receptor adecuado y por lo tanto pueden escapar a la acción lítica de éstas.Por esta razón, varias familias de virus, han desarrollado mecanismos pararegular negativamente la expresión de las moléculas MHC, en las célulasinfectadas. Un mecanismo, desarrollado por algunos virus, es que puedensintetizar, elementos homólogos, a algunos miembros del MHC, ocupando susreceptores en las células NK, pero sin desencadenar ninguna respuesta. [11]

En la mayoría de los casos, la respuesta inmune, rebasa la acción delvirus, sin embargo, en algunos casos, en que la infección es persistente, latransformación oncogénica ocurre. El virus, aparentemente, convive en armoníacon el huésped, pero se desconoce en que momento, y bajo que señales, iniciala transformación, y libra las barreras que ofrece el sistema inmunocompetente.[11]

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ESTUDIOS REALIZADOS PARA DETECTAR ANTICUERPOS CONTRAVLP’s (PARTICULAS PARECIDAS A VIRUS).

Los estudios sobre vacunas de VPH se han hecho principalmente enperros, conejos y bovinos. De estos estudios se ha podido demostrar que lainfección con VPH se puede prevenir en estos animales al ser inmunizados conla proteína L1. Asimismo, la proteína L2 desnaturalizada sólo previeneinfecciones en bovinos y conejos. Aún no se sabe cuáles inmunizacionesprotegen contra infecciones por exposición a mucosas, como vía natural de lainfección; además se desconoce cómo y dónde los anticuerpos sistémicos IgGneutralizan virus que solamente infectan células epiteliales. [6,7,8,9,15]

En humanos, se ha demostrado la presencia de anticuerpos específicos ode reacción cruzada contra partículas parecidas a virus, producidas poringeniería genética, compuestas por las proteínas externas de membrana L1 óL1/ L2, e incapaces de infectar por sí mismas una célula viva (VLP’s). De 50 a60% de las mujeres infectadas con VPH tienen anticuerpos contra VPH-16(VLP). A diferencia de otros tipos, los VPH-16 tienen algunas variantes yserológicamente presentan reacción cruzada. [6,7,8,9,16]

En neoplasia intraepitelial cervical (CIN VPH-16+), estadio anterior a uncáncer cervical invasivo, se demuestran anticuerpos contra proteínas de lacápside; sin embargo, en cáncer invasivo VPH-16+, donde se están expresandoproteínas tempranas y no viriones, no siempre se encuentran anticuerposcontra VLP de VPH . Estudios de serorreactividad contra las VLP de los VPHsugieren que anticuerpos contra la cápside son inducidos durante infeccionesseveras o persistentes de VPH, y se pierden levemente después de que pasa lainfección productiva. Los anticuerpos específicos contra la cápside, porconsiguiente, no son marcadores confiables de infecciones por VPH-16recientes o pasadas en un individuo. [6,7,8,9,15]

Estudios realizados recientemente (2003), han demostrado que laaplicación intramuscular de la vacuna a base de VLP L1- VPH-16, es útil comotratamiento profiláctico ante la infección de VPH, promoviendo inmunidad detipo celular con proliferación de linfocitos T, y producción de citocinas. Elestudio se realizó con 43 pacientes que recibieron la vacuna profiláctica y 10que recibieron un placebo. Se observó también incremento en la producción deinterferón-gama, y de interleucinas 5 y 10. Además se observaron significativosniveles de anticuerpos, en los pacientes que fueron vacunados, 7 mesesdespués de dicha inoculación, estos cambios no se presentaron en lospacientes en los que se aplicó el placebo. La vacuna, VLP L1- VPH-16 inducefuerte respuesta inmune humoral y celular, al provocar la proliferación delinfocitos T tipo CD4 y CD8. [12]

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Por otra parte, en el laboratorio de Inmunobiología de la Facultad deEstudios Superiores Zaragoza de la UNAM, se lograron aislar dos péptidos queforman parte de L1-VPH-16 y 18 presentados por moléculas correspondientesal complejo mayor de histocompatibilidad clase I . Una fracción de éstospéptidos fue capaz de estimular la proliferación de linfocitos T. [10]

En octubre de 2002, se publicó un trabajo realizado en HeildenbergAlemania, en el cual se realizó la prueba de inmunoabsorbente ligado a enzima(ELISA), para detectar anticuerpos contra VLP’s de VPH-16,18 y 6b, empleandola enzima glutatión S-transferasa; encontrándose 16 anticuerpos altamenteespecíficos para L1 demostrando una gran sensibilidad para esta prueba. [20]

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OBJETIVO GENERAL: Evaluar la presencia de anticuerpos contra péptidos de lacápside del virus del papiloma humano (VPH) en suero y secreciones cervicales depacientes infectadas.

OBJETIVOS ESPECÍFICOS:1. Determinar la presencia de VPH en biopsias de cerviz con y sin evidencia

colposcópica de infección por VPH por PCR universal.2. Determinar la presencia de VPH-16 en biopsias de cerviz con y sin evidencia

colposcópica de infección por PCR específico.3. Evaluar la presencia de anticuerpos contra VPH-16 en ensayos de ELISA

usando péptidos p10 y p23 derivados de la cápside de VPH-16 y VPH-18respectivamente.

4. Estudiar si existe una correlación entre la presencia de anticuerpos y DNAdel virus.

HIPÓTESIS: Existe una correlación positiva entre la presencia de anticuerpos ensuero y secreciones cervicales, y la integración del VPH al genoma de laspacientes.

ANÁLISIS ESTADÍSTICO: Este se llevo a cabo por la Prueba Exacta de Fisherpara tablas de contingencia de 2x2.

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DISEÑO EXPERIMENTAL

P10 (VPH-16)

FLUIDO CERVICAL (IgA) P23 (VPH-18)102 MUESTRAS

SUERO (IgG) P10 (VPH-16)

P23 (VPH-18)

P10(VPH-16)

119 MUESTRAS FLUIDO CERVICAL (IgA)(Sin evidencia colposcópica)

P23 (VPH-18)

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METODOLOGÍA:

PRUEBA DE INMUNOABSORBENTE LIGADO A ENZIMA(ELISA).

Esta prueba se realizó con la finalidad de descubrir y medir los niveles deanticuerpos en las muestras de las pacientes, (sueros y secreciones cervicales). Para llevar a cabo esta prueba, se emplearon placas de poliestireno, lascuales se revistieron con los dos tipos de antígeno, es decir, p10 epítopepresente en VPH-16 y p23, presente en VPH-18, y se dejaron incubar durantetoda la noche en una solución de bicarbonatos (pH 9.6).Después de eliminar por lavado con una solución de TBS (pH 7.6) -Tween –20al 0.1% , el antígeno que no se ha unido, se agrega la solución bloqueadoraconsistente en: TBS pH 7.6, Tween al 0.1% y BSA (albumina sérica bovina) al2%; nuevamente se llevaron al cabo los lavados y se procedió a aplicar elsuero ó las secreciones cervicales de las muestras para que los anticuerpospresentes en éstas, se unan a los antígenos adheridos a la pared. Después deincubación, y lavado para retirar el anticuerpo no unido, los anticuerpos unidosse identifican agregando antiglobulina ligada a la enzima fosfatasa alcalina.Esta se une al anticuerpo y, después de otra incubación y otro lavado, puedeidentificarse y medirse agregando el sustrato específico, que al ser reconocidoserá manifiesto por la presencia de color de tono amarillo. Por consiguiente, laintensidad del cambio de color es proporcional a la cantidad de antiglobulinaligada a enzima que se une, lo cual, a su vez depende de la cantidad deanticuerpo presente en la muestra. Para determinar la concentración deanticuerpos, se empleó un lector especial para pruebas de ELISA, que realiza lafunción de un espectrofotometro. La lectura se realizó a 405nm.

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PRUEBA DE LA REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA

Una vez que se hizo evidente la presencia de anticuerpos en las muestras delas pacientes, se confirmó la integración del VPH, en el genoma de estas, mediantela técnica de RCP, con la finalidad de establecer una relación entre ambasvariables. La técnica de RCP permite producir un gran número de copias de secuenciasespecíficas de ADN en corto tiempo. La ADN polimerasa emplea una cadena simplede ADN como molde para la síntesis de una nueva cadena complementaria. Estacadena molde puede ser producida a partir de una doble cadena al someterla atemperaturas que favorezcan la ruptura de los puentes de hidrógeno quemantienen unidas ambas cadenas. La ADN pol. requiere además de un pequeñofragmento de ADN de doble cadena (cebador), para iniciar la síntesis. Esimportante que la fracción que comprende el cebador sea complementaria con laregión del ADN que se desea amplificar, por lo que debe ser de alta especificidad.Ambas cadenas de ADN pueden servir como moldes para la síntesis. Cadaoligonucleótido cebador tiene su porción complementaria en cada cadena. [16]

1. En un microtubo para centrífuga de 0.5 ml estéril, se realiza la siguiente mezclarespetando el orden:-Agua estéril 11.8µl-Solución amortiguadora amplificador 2.0µl-Mezcla de 4 dNTPs**, en un pH 7 con una concentración 2.0mM 2.0µl-MgCl 1.0µl-Cebador 1 (en 5µl de agua) 1.0µl-Cebador 2 (en 5µl de agua) 1.0µl-Taq Polimerasa 0.2µl-ADN molde 1.0µlVolumen final 20.0µl

El ADN molde empleado será obtenido de células presentes en las muestras delas pacientes y los cebadores serán oligonucleótidos específicos para que lapolimerasa reconozca al genoma de VPH-16.

**dNTP's: desoxinucleotidos trifosfatados

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Originalmente se empleó en esta técnica la ADN polimerasa de E. coli pero esta enzima es muy sensible a la desnaturalización por altas temperaturas, las cualesson necesarias para separar la doble cadena de ADN, con lo cual se complicaba elproceso. Un hallazgo importante para el desarrollo de esta técnica fue eldescubrimiento de la bacteria Thermus aquaticus, la cual vive en agua atemperaturas cercanas a los 75°C. Su ADN pol (Taq polimerasa) tiene unatemperatura óptima de 72°C pero es razonablemente estable a 94°C. [16]La Taq ADN polimerasa se encuentra suspendida en un amortiguador que contiene50g de glicerol. Esta solución es muy viscosa lo cual dificulta su pipeteo. La mejorforma de realizar dicho pipeteo es someter la solución a centrifugación a 12,000gpor 10 segundos a 4°C, este procedimiento permite el pipeteo del volumenrequerido.

2. Las condiciones requeridas para desnaturalización, alineación y polimerizaciónson las siguientes:

Ciclo Desnaturalización Alineación Polimerización

Primero 5 minutos a 94°C 1 minuto a 54°C 90 segundos a 72°CSubsecuentes 30 segundos a 95°C 1 minuto a 54°C 90 segundos a 72°CUltimo 30 segundos a 95°C 1 minuto a 54°C 10 minutos a 72°C

La RCP puede se automatizó con un termocilador. Mediante estosinstrumentos se pueden estandarizar en cada ciclo, el volumen transferido de lamuestra y la temperatura, durante muchas horas.

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Electroforesis en gel de agarosa para detectar VPH 16(PCR especifico)

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DISCUSIÓN

Con base en los resultados obtenidos, se observó que de ambas series, depacientes analizadas la mayoría son VPH positivas, lo cual indica que aún aquellasque no presentan lesiones ó evidencias colposcópicas, han tenido contacto con elvirus, y el Sistema Inmunocompetente evitó la proliferación de ulceras ó lesionesen el cervix. Es importante comentar que la mayoría de las pacientes sin evidenciacolposcópica, resultaron positivas a VPH, pero este, no era del tipo 16 yprobablemente tampoco al 18, hay que recordar que existen aproximadamente 80tipos de VPH con similitudes antigénicas muy importantes.

Los valores de anticuerpos, en suero y en secreciones cervicales, es decir,tanto del tipo IgG como IgA, en ambas poblaciones resultó poco significativo. Estonos confirma que el Virus de Papiloma Humano, ha desarrollado una serie deestrategias para librar al Sistema Inmune, desde su ciclo de vida; sabemos que laproteína L1, principal componente de la cápside, contiene los epítopes másimportantes en el desarrollo de la respuesta inmunológica, y ésta se expresa en lacapa escamosa del epitelio del cuello uterino, que de manera normalcontinuamente es reemplazada y difícilmente existe contacto entre el virus y elSistema Inmune. Por otro lado algunas proteínas codificadas por el VPH, actúandirectamente sobre algunos elementos importantes para que la respuestainmunológica se lleve a cabo con eficiencia, como el Complejo Mayor deHistocompatibilidad, la Interleucina 18, el Interferón β, factores apoptóticos óinterfiere en el proceso de presentación del antígeno. [11]

En el total de pacientes estudiadas, el tipo de VPH, predominante fue el 16,tanto al evaluar a la proteína p10 como p23, esto podría indicarnos que tal vezexista una antigenicidad cruzada entre los tipos 16 y 18, ya que p10, correspondea VPH-16 y p23 a VPH-18.

Con respecto a la hipótesis planteada, no existe una correlaciónsignificativa entre los niveles de anticuerpos y la integración del VPH al genomade las pacientes, esto puede ser debido a que una vez que esto sucede, sedetiene la replicación mediada por el virus, no hay síntesis de proteínasestructurales y por tanto no hay producción de anticuerpos.

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CONCLUSIONES:

• El VPH se encuentra ampliamente difundido en mujeres mexicanas, ya queaún las pacientes que no presentan evidencia colposcópica, han tenidocontacto con el virus.

• No existe una correlación significativa entre los niveles de anticuerpos y laintegración del VPH al genoma de las pacientes.

• En el total de pacientes VPH (+) los niveles de anticuerpos fueron inferioresque los encontrados en las pacientes VPH (-).

• Existe inmunidad cruzada entre VPH-16 y VPH-18.

PERSPECTIVAS:

Debido a que se comprobó la capacidad antigénica de p10 y de p23, yademás la antigenicidad cruzada, de VPH 16 y 18 puede pensarse en laelaboración de una vacuna que contenga ambos epítopes, como un tratamientopreventivo.

Como se ha podido comprobar la prueba de Inmunoabsorbente ligado aenzima (ELISA), no es muy objetiva con fines diagnósticos, debido a lasparticularidades inmunológicas que ofrece el virus; y con esto, solo enfatizamosque hasta ahora solo las pruebas tradicionales: Papanicolaou y Colposcopia,seguidas para mayor precisión de la Prueba de la Reacción en Cadena de laPolimerasa (PCR), pueden ofrecen mayor certeza en el diagnostico.

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