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Transferencia de material genético II
Transferencia de material genético II Transformación
13.Octubre.2009
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Objetivos Conocer el fundamento para transformar células
bacterianas Realizar la técnica de transformación bacteriana Aprender a identificar células transformadas
mediante su fenotipo Conocer la definición de organismo transgénico
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Plásmido
Son cadenas dobles de DNA circular de 1 kb a 200 kb que se pueden encontrar en las bacterias.
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Características
1. ORIGEN DE REPLICACIÓN Capaz de hacer copias exactas de si mismo independiente del cromosoma del hospedero
2. MARCADORES DE SELECCIÓN
Permite aislar a las células que poseen el gen deseado, generalmente resistencia a un antibiótico
3. SITIO DE CLONACIÓN MULTIPLE (SCM) Sitios de enzimas de restricción en regiones no esenciales. Permite abrir al plásmido e insertar DNA.
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Enzimas de restricción
· Las enzimas de restricción, también conocidas como endonucleasas, son enzimas que cortan los enlaces fosfodiester del material genético a partir de una secuencia que reconocen.
Permiten cortar DNA de hebra doble, donde reconocen secuencias palindrómicas (secuencias que se leen igual en ambas
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Enzimas de restricción Nomenclatura Ejemplo Corresponde a: E Escherichia Género de la bacteria co coli Especie de la bacteria R RY13 Cepa de la bacteria I La primera enzima identificada Orden de identificación de la enzima
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Plásmido
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Plásmido
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TRANSFORMACIÓN Es la introducción y expresión de material genético externo (DNA)
Microinyección permite introducir ADN en el núcleo celular (Ej. microinyección de DNA en óvulosfecundados para obtención de animales transgénicos)
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TRANSFORMACIÓN
En el caso de transformación de bacterias, generalmente se introduce mediante un choque térmico o por electroporación.
CHOQUE TÉRMICO Las bacterias (hospederas) son tratadas con agentes como como CaCl2 y temperatura que ocasiona un incremento en la permeabilidad membranal. (CELULAS COMPETENTES)
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TRANSFORMACIÓN
ELECTROPORACIÓN Aumento de la conductividad electrica y la permeabilidad de la membrana causado por un campo eléctrico aplicado externamente, formando poros.
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TRANSFORMACIÓN
Células competentes Hielo
1-5 uL plásmido
30 min hielo
45 s
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ORGANISMO TRANSGÉNICO
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ORGANISMO TRANSGÉNICO
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ORGANISMO TRANSGÉNICO
Cualquier planta, animal o bacteria que tiene información genética de otra especie introducida mediante ingenieria genética.
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ORGANISMO TRANSGÉNICO
Producción de Proteínas Recombinantes de uso médico • Insulina: para diabéticos • Factor VIII: para pacientes con hemofilia A • Factor IX: para hemofilia B • Hormona del crecimiento humana: enanismo • Eritropoyetina: para el tratamiento de anemias • Interferón: defensa contra infecciones • Antígeno de superficie de hepatitis B: vacunas • Activador del plasminógeno tisular: disolución de coágulos