3.- ¿Qué es toxicología alternativa? Menciona ejemplos de toxicología alternativa.

El término completo debe ser “Toxicología Alternativa a la Experimentación Animal”.

La Alternativa propone, la forma, el número y los procedimientos para el uso de los animales de laboratorios en la experimentación científica. Todo bajo el Principio de las Tres R’s (Reemplazo, Reducción y Refinamiento).

Las tres R se refieren a reemplazar los animales de experimentación por otros métodos que no impliquen su uso, reducir su número cuando sea necesario utilizarlos y refinar las técnicas para aminorar su sufrimiento. Lo ideal es reemplazar los animales por otros métodos, aunque, en muchos casos, por la necesidad de experimentar con ellos, sólo se pueda aspirar a la reducción y el refinamiento.

Métodos aceptados

A pesar del gran esfuerzo realizado en el desarrollo de métodos alternativos, son pocos los totalmente aceptados por las autoridades reguladoras.

La OECD ha aprobado tres métodos de reducción y refinamiento de la toxicidad aguda: el de la dosis fija, el de la clase tóxica aguda y el método arriba y abajo.

Desde 2002 se ha eliminado el procedimiento clásico de determinación de la dosis letal o DL50. Los métodos admitidos permiten determinar una dosis aproximada que provoca toxicidad aguda por vía oral y, también, clasificar a los productos en función de dicha toxicidad.

Se han realizado varios estudios de validación de alternativas in vitro al ensayo de irritación ocular. En la actualidad, se ha refinado el método para reducir el sufrimiento de los animales, validando cuatro alternativas in vitro con fines reguladores para identificar productos irritantes severos y para el etiquetado de productos peligrosos:

Método de la membrana corioalantoidea del huevo de gallina o HET-CAM , utiliza huevos fecundados de nueve días de incubación.

Método del ojo aislado, obtenido de conejos que se hayan sacrificado con otros fines. Ensayo de opacidad y permeabilidad de la córnea bovina, utiliza córneas obtenidas del

matadero. Método del ojo aislado de pollo, obtenido también del matadero.

Estos procedimientos tienen algunas limitaciones: si se obtiene un resultado positivo en uno de los cuatro métodos no es necesario realizar más ensayos con animales; si el producto da un resultado negativo se debe realizar el ensayo en uno a tres conejos para confirmar los resultados.

El ensayo de irritación/corrosión dérmica en conejos ha sido recientemente reemplazado en los países miembros de la Unión Europea por dos ensayos in vitro. En 2000 se aceptaron por primera vez dos métodos in vitro, según la Directiva de la Unión Europea.

Ensayo de resistencia transepidérmica (TER), mide la conductividad eléctrica a través de la piel aislada de conejo.

Método Episkin®, utiliza un modelo comercial de piel humana.

En 2004 se aceptó otro método para valorar la corrosión y un protocolo para estudiar la absorción y penetración cutánea utilizando un método in vitro que utiliza piel humana procedente de operaciones. El ensayo sustituye al que se realizaba in vivo en la rata, obligatorio para evaluar productos acabados, cosméticos, pesticidas y biocidas.

La OECD aceptó en 2002 un método para ensayar el potencial efecto sensibilizante de los productos. El procedimiento se denomina "de nódulo linfático" y utiliza ratones en lugar de los cobayos (se usaban tradicionalmente en este tipo de ensayos). Se trata de un método en que se ha aplicado el refinamiento de las técnicas para reducir el sufrimiento de los animales.

Otro método es el ensayo de foto-toxicidad: se realiza in vitro utilizando una línea celular de fibroblastos (las células 3T3) y determina la captación de rojo neutro. El ensayo recibe el nombre de foto-toxicidad in vitro 3T3.

Para los ensayos a largo plazo, únicamente se ha aceptado la aplicación de criterios de refinamiento y reducción del número de animales.

Métodos experimentales alternativos.1.- Evitar la repetición innecesaria de experimentos in vivo e in vitro.Protocolos y estudios previos: disponibilidad de la información, intercambio. Flexibilidad. Estrategias integradas.

2.- Modelos matemáticos de predicción:Cinética ambiental de compuestos químicos.Fármaco toxico-cinética

3.- Mejoras en el diseño de estudios animales.Reducción: número de animales usados.Refinamiento: minimización del dolor y distres.

4.- Uso de organismos inferiores no protegidos: Bacterias, Hongos, Protozoos, algas, plantas, animales invertebrados.

5.- Vertebrados en etapas iniciales de desarrollo.Peces, anfibios, reptiles, pájaros, mamíferos.

6.- Métodos in vitro:Órganos: perfusión, cultivo, cortes, órganos reconstruidos, ex plantes, re agregados celulares Líneas celulares /transgénesis Sistemas libres de células

7.- Otros:Estudios en humanos: voluntarios, epidemiológicos, vigilancia.Modelos en la enseñanza y formación: modelos mecánicos, sistemas audiovisuales y simulaciones por ordenador y de realidad virtual.

Los métodos utilizados en experimentación, ensayo y enseñanza están en continuo progreso ya que los investigadores están en permanente búsqueda de posibles alternativas que mejoren la calidad de su trabajo. Esto debido en parte a la lógica de evolución de los conocimientos científicos y de sus aplicaciones tecnológicas y en parte a consideraciones éticas logísticas, económicas, sociopolíticas y legales.

Referencias

REPETTO Guillermo, Jorge L. Zurita, “Métodos alternativos a la experimentación animal en la evaluación de la seguridad”, Instituto Nacional de Toxicología y Ciencias Forenses y A rea de Toxicología de la Universidad de Sevilla.

REPETTO Jiménez Manuel, “Toxicología Fundamental”, 4o Edición, Editorial Díaz de Santos. María Pilar Vinardell Martínez-Hidalgo, “Alternativas a la Experimentación Animal en

Toxicología: Situación Actual”, Facultad de Farmacia, Universidad de Barcelona, España.