I. PROCEDIMIENTO

a. Coloque las lminas fijadas de microorganismos sobre el soporte para tincin.b. Extender en una capa fina la capa de muestrac. Agregar 5 o 6 gotas de cristal violeta y exponerlo al fuego, con el fin de fijarla.d. Esperar de 1 a 3 minutos para darse la tincin.e. Una vez cumplido el tiempo, lave cada lmina con la piseta de agua.f. Seque las lminasg. Examinar las preparacionesh. Elaborar los esquemas de las observaciones destacando las diferencias en tamao, forma y agrupaciones.

II. RESULTADOS

Se observo bacterias de muestras de abono lquido orgnico, biofowling y agua estancada. Utilizndose la tcnica de tincin simple se observo bacterias muertas, levadura y se distingui sus formas y agrupaciones.

III. DISCUSIONES

Las bacterias son microorganismos unicelulares que se reproducen por fisin binaria. La mayora son de vida libre, a excepcin de algunas que son de vida intracelular obligada, como Chlamydias y Rickettsias. Tienen los mecanismos productores de energa y el material gentico necesarios para su desarrollo y crecimiento. Las bacterias integran el reino procariota (pro de primitivo y cariota de ncleo). (Prez & Mota, 2006).Hay tcnicas que permiten observar los microorganismos en vivo. Segn Granados y Villaverde (1996) stas son: Examen en fresco, que incluye examen en fresco entre portaobjetos y cubreobjetos y examen en fresco sobre gota pendiente en porta excavado; y tincin vital.En la prctica de laboratorio se realiz un primer ejercicio en examen en fresco entre portaobjetos y cubreobjetos.Esta consiste en suspender el microorganismo objeto de estudio en agua destilada o cualquier otro medio lquido transparente colocndolo en un portaobjetos a fin de poder posteriormente, mediante microscopa, visualizar su morfologa, disposicin y motilidad. (Granados y Villaverde, 1996).En las observaciones hechas en el microscopio hasta 40X era difcil apreciar el tamao y el color. Se pudo observar las estructuras que adoptaban los microorganismos que aparecan en distintas muestras: agua de estanque, abonos de distinto tipo, etc. En cuanto al color, al inicio se observ y se apreciaban muy pocos microorganismos, y sin movimiento. Esto pudo deberse a que la muestra se expuso demasiado tiempo al ambiente, lo que mat a los microorganismos.Adems, Granados y Villaverde (1996) agrega que en esta tcnica se extender la muestra en el portaobjetos con el fin de homogeneizar la mezcla colocando con cuidado sobre la suspensin un cubreobjetos formando inicialmente un ngulo de 45 evitando que se formen burbujas de aire (en nuestra muestra de agua estancada se formaron pequeas burbujas de aire) al caer el cubreobjetos sobre la suspensin.. Luego se sellaran con parafina (vaselina) los bordes de los cubreobjetos para disminuir la evaporacin y evitar corrientes en la preparacin.En la microscopa ptica se toma en cuenta el factor contraste, porque sin un contraste adecuado es difcil diferenciar una estructura del fondo que la rodea.Es as que se usan coloraciones para incrementar el contraste entre el espcimen y el fondo que lo rodea, pero desafortunadamente las coloraciones dificultan la observacin de los microorganismos vivos. (Atlas, 1990).En la mayor parte de las tcnicas de coloracin se pone una suspensin de microorganismos en un portaobjetos y se deja secar. A la preparacin as obtenida se le pasar rpidamente sobre una flama para que el calor fije las clulas que se encuentran all, esto es, las clulas se fijan al portaobjetos de tal manera que no pueden ser arrastradas al lavar la preparacin. Ms adelante, se agrega colorante, se deja actuar por algn tiempo, se enjuaga para quitar el exceso de colorante y se observa. (Atlas, 1990).El segundo ejercicio realizado en la prctica de laboratorio fue de observacin de bacterias por la tcnica de tincin simple. Se utiliz el azul de metileno que permiti apreciar de mejor manera las estructuras, como bacilos, espirilos y una gran cantidad de cocos, en el caso del abono lquido orgnico.En un procedimiento de coloracin simple, se usa un solo reactivo colorante que no intenta producir reacciones de coloracin diferenciales para los distintos tipos de microorganismos o estructuras. Las tcnicas de coloracin simple para microorganismos son de utilidad cuando el colorante es fijado por las clulas y as los microorganismos aparecen de color oscuro o coloreados sobre un fondo luminoso o claro, y son negativas cuando los microorganismos no fijan el colorante, en cuyo caso el fondo es el que se tie y los microorganismos aparecen brillantes sobre el fondo oscuro.Estas dos tcnicas dependen del hecho de que las bacterias y otros microorganismos poseen carga negativa asociada a la capa externa de la clula, principalmente debido a los grupos PO43- de la membrana celular. (Atlas, 1990).En los procedimientos de coloracin positiva un colorante cido (catinico), que tiene cromforo (porcin colorida de la molcula de colorante) cargado positivamente, es atrado hacia la cubierta externa de la clula cargada negativamente. Colorantes como el azul de metileno (que fue el colorante utilizado en el ejercicio de laboratorio) tienen una porcin de la molcula de color azul, que es atrada a la superficie de la clula, dando como resultado una tincin positiva del microorganismo. (Atlas, 1990).

IV. CONCLUSIONES

En la observacin de bacterias en forma directa; para las muestras del abono lquido orgnico, biofowling y agua estancada se observaron colonias de bacterias de diferentes formas desplazndose. Se distinguan formas de cocos y bacilos, pero no claramente. En la observacin de bacterias utilizndose la tcnica de tincin simple se observo cocos (en forma aislada, diplococos, estreptocos) y bacilos (aislados, diplobacilos y estreptobacilos). Tambin se observaron levaduras aisladas y en conjunto. Todas las especies estaban quietas y de un color azul violeta. Se distinguan claramente.

V. CUESTIONARIO

1. Cules son las asociaciones ms frecuentes en bacterias?Segn Burdon y Williams (1971) entre los cocos, y tambin con menor frecuencia entre bacilos y espirilos, las clulas que crecen rpidamente tienden a ordenarse en gurpos caractersticas. El aspecto de cada agrupamiento segn se observa en el microscopio, es una importante ayuda para reconocer las especies.Tenemos: Diplococos: Cocos en parejas. Generalmente los lados adyacentes de los organismos apareados son achatados. Estreptococos: Cocos en cadena. Estafilococos: Cocos en masas irregulares que semejan racimos de uvas. Se dividen en ms de un plano del espacio y permanecen fuertemente adheridos, formando masas irregulares. Ttradas: Cocos en grupos de cuatro. Estos cocos se dividen en dos planos que forman ngulo recto entre s. Sarcinas: Cocos en bloques cbicos. Grupos de bacilos y espirilos: El crecimiento caracterstico de algunas especies de bacilos es por parejas (diplobacilos). Otros pueden formar largas cadenas (estreptobacilos). Algunos muestran una disposicin muy sorprendente de clulas paralelas; otros crecen en una masa entretejida y enmaraada. Los espirilos no se agrupan en ninguna forma caracterstica, sino que crecen en forma de cadenas largas y ondulantes. A veces el espirilo no logra encadenarse y aparece el filamento como una forma de ovillo retorcido.

2. En qu rango de tamao se definen las bacterias?Segn Granados y Villaverde (1996), el tamao de las bacterias se mide en m (0.000001 m) y oscila entre 0.2 y 2 m.El tamao de las bacterias oscila entre las 0.5 y 3 m, pudiendo llegar en algunos tipos a 10 m. Solo son visibles entonces, al microscopio ptico o microscopio electrnico. Para observarlas con el microscopio ptico se usa el objetivo de inmersin (100X), sumergiendo esta lente en una gota de aceite (aceite de inmersin) en el preparado a observar. A modo comparativo, una clula eucariota mide ms de 5 m, mientras que un reo virus mide menos de 0.1 m. (Prez & Mota, 2006).3. Cules son las formas bacterianas ms frecuentes?Antes de que se comience a utilizar el secuenciamiento del ADN, las bacterias eran clasificadas basndose en sus formas y en sus propiedades bioqumicas. Al clasificarlas de acuerdo a su forma o a su estructura morfolgica, la mayora de las bacterias pertenecen a las tres formas bsicas y principales: barras, esferas y espirales. Los otros dos tipos, menos comunes, son los de rickettsia y mycoplasma.BACILOS: (bacterias con forma de barras)Con forma de barras o varillas, los bacilos suelen ser bacterias de tipo Gram positiva o negativa. Los ejemplos ms populares son los de las bacterias de E.Coli y la salmonella, que comnmente, tambin son las responsables de males como la intoxicacin por alimentos y la fiebre tifoidea. Dentro de los bacilos tambin podemos nombrar a dos de las bacterias ms peligrosas que existen: el Bacillus anthracis, que causa la mortal enfermedad pulmonar del ntrax y el Clostridium, que causa el botulismo, el ttanos y la gangrena.COCOS: (bacterias con forma de esferas)Con su caracterstica forma esfrica, las bacterias conocidas como cocos tienen la capacidad de vivir como clulas individuales o bien de enlazarse hasta forman cadenas y racimos. El Staphylococcus y el Streptococcus son los dos tipos de bacterias ms comunes dentro de esta clasificacin y ambas suelen ser Gram positivas. Igualmente, stas bacterias no suelen tener beneficios, sino que por el contrario, siempre nos resultan perjudiciales. Pueden causar infecciones en la piel, intoxicacin alimenticia y tambin amigdalitis, entre otras cosas.

ESPIRILOS: (bacterias con forma de espirales)Los espirilos, como bien nos indica su nombre, poseen una marcada forma de espiral. stas son bacterias Gram negativas y terribles para la salud. Un claro ejemplo es la Treponema, que causa la enfermedad de transmisin sexual de la sfilis.

4. Qu diferencia una tincin directa de una tincin negativa?Las tcnicas de coloracin simple para microorganismos son de utilidad cuando el colorante es fijado por las clulas y as los microorganismos aparecen de color oscuro o coloreados sobre un fondo luminoso o claro, y son negativas cuando los microorganismos no fijan el colorante, en cuyo caso el fondo es el que se tie y los microorganismos aparecen brillantes sobre el fondo oscuro. (Atlas, 1990).En los procedimientos de coloracin positiva un colorante cido (catinico), que tiene cromforo (porcin colorida de la molcula de colorante) cargado positivamente, es atrado hacia la cubierta externa de la clula cargada negativamente. (Atlas, 1990).En los procedimientos de coloracin negativa, se utiliza un colorante bsico (aninico), que posee cromforo cargado negativamente el cual es repelido por el microorganismo con carga negativa. La nigrosina y la tinta china a menudo se usan para coloraciones negativas de clulas microbianas y este tipo de coloraciones son particularmente tiles para observar algunas estructuras como las cpsulas que rodean algunos microorganismos. (Atlas, 1990).En la tincin simple se busca observar la morfologa de la bacteria y la agregacin o tipo de distribucin bacteriana mientras que en la tincin negativa hay una determinacin morfolgica rpida y se evidencia la presencia de cpsulas.5. Qu importancia le atribuye a las diferencias en reactividad de los colorantes empleados?En el caso del azul del metileno, este tipo de tincin es muy importante en microbiologa para detectar rpidamente en agua la actividad metablica de las bacterias reductoras de sulfato. Sin embargo, en un campo ms amplio, este reactivo es til para examinar ARN o ADN presentes en algn organismo.En el caso del cristal violeta, de sta depende la clasificacin de las bacterias en Gram positivas y negativas, luego de realizar la prueba y la tincin con este compuesto. Las bacterias gram positivas absorben por tener un mayor porcentaje de cidos teicoicos en su estructura, lo que permite identificar adems la composicin de su pared celular y dems estructura.

VI. BIBLIOGRAFA

ATLAS, R. 1990. Microbiologa. Fundamentos y aplicaciones. Compaa Editorial Continental, S.A de C.V. Mxico D.F, Mxico. Pp 55-62. BURDON, W & WILLIAMS, R. 1971. Microbiologa. Primera edicin en espaol. Publicaciones Cultural. Mxico D.F, Mxico. Pp 131-135. GRANADOS, R & VILLAVERDE, C. 1996. Microbiologa. Bacteriologa. Caractersticas y clasificacin bacteriana. Virologa. Caractersticas y tcnicas bioqumicas. Editorial Paraninfo. Madrid, Espaa. Pp 9-10, 216-220 PREZ, M & MOTA, M. 2006. Temas de Bacteriologa y Virologa mdica. Captulo 2: Morfologa y estructura bacteriana. Segunda edicin corregida. Universidad de la Repblica. Facultad de Medicina. Departamento de Bacteriologa y Virologa. Instituto de Higiene. Montevideo, Uruguay. Pp 23-26. http://docsetools.com/articulos-para-saber-mas/article_41069.html