EVALUACION DE LA RESISTENCIA A LOS ANTIPARASITARIOS:

ALBENDAZOL, IVERMECTINA Y LEVAMISOL DE LOS NEMATODOS

GASTROINTESTINALES DE OVINOS EN LA VEREDA CAÑUELA Y LLANO DEL

ARBOL EN VILLA DE LEYVA (BOYACA)

VICTOR RODNEY CORTES ROA

EDINSON HERNANDO MONTAÑA GARCIA

FUNDACION UNIVERSITARIA JUAN DE CASTELLANOS

FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS

PROGRAMA DE MEDICINA VETERINARIA

TUNJA

2009

JUSTIFICACION

En Colombia el desarrollo de producciones ganaderas (bovinos, ovinos, caprinos,

porcinos etc.), han estado en constante crecimiento, por tanto la necesidad de un

mejor manejo en cualquiera de esas explotaciones exigirá un control riguroso en el

sentido de salud publica, ya que siempre estarán abiertas las posibilidades de

propagación de enfermedades hacia la población consumidora y los propios

animales.

Los agentes causales de enfermedades caracterizadas por disminuir la producción

de las explotaciones, comprende básicamente, patologías de origen: viral,

bacteriano, parasitario, fúngicas entre otras, siendo las de afección parasitaria

una de las mas frecuentes hallazgos en las producciones pecuarias por los

médicos veterinarios, convirtiéndose así en una prioridad de atención a la

población animal afectada.

Para el control de las parasitosis se han desarrollado numerosos fármacos tales

como: acaricidas, insecticidas, y antihelmínticos de gran eficacia, y poder

residual, que ha permitido al productor pecuario dar un adecuado manejo a su

sistema de producción, pero como es bien sabido, en la mayoría de las veces el

productor utiliza indiscriminadamente estos fármacos, pretendiendo lograr un

estado de salud optimo en sus animales, pero desafortunadamente un uso

excesivo y continua aplicación de dosis subterapeuticas y asociaciones

medicamentosas antiparasitarias con condiciones de sobre pastoreo han

generado que los parásitos adquieran cierta resistencia a dichos productos.

Jamás se termina de conocer algo, pues todo está en constante cambio y es eso

lo que indirecta o directamente altera cualquier investigación, por tanto se hace

indispensable un continuo monitoreo de el objeto de estudio para así poder

evaluar y dar un juicio pertinente y referenciado de lo que verdaderamente pasa

con el material de estudio.

2

DESCRIPCION DEL PROBLEMA

En el ejercicio de la medicina veterinaria, las diferentes técnicas y procedimientos

terapéuticos para la prevención, control y tratamiento de las distintas patologías

que padecen las poblaciones animales, es común encontrar un inadecuado uso

de medicamentos, soporte para remediarlas.

Practicas relacionadas con la terapéutica antiparasitaria, ponen en manifiesto

procedimientos equívocos que se evidencian en la inapropiada dosificación de

medicamentos descritos para las parasitosis, muchas veces en el suministro por

debajo de la dosis efectiva o por intervalos de tiempo no acorde a los requeridos

para el control del agente causal, lo cual contribuye directamente a que los

parásitos puedan crear cierta resistencia.

De acuerdo al CDC (Centro de Control de Enfermedades) de Estados Unidos, la

resistencia se da cuando un medicamento deja de inhibir el crecimiento o matar a

un microorganismo. Hay dos tipos de resistencia: la adquirida y la clínica.

La adquirida se realiza en el laboratorio a través de las mutaciones o por

transferencia de genes, sistemas de conjugación, transducción y transformación.

La resistencia clínica es la observada en la práctica médica, donde no todos los

organismos son igualmente, sensibles o igualmente resistentes a cierto antibiótico

y que requiere la ayuda de técnicas de laboratorio para medir cuantitativamente o

cualitativamente dicho proceso. (1. www.C.D.C.gov, Resistance to antibiotics and other antimicrobial agents. 2002.)

El propósito de este estudio, es evaluar la resistencia de los parásitos nemátodos

a los antiparasitarios: Albendazol, Levamisol, e Ivermectina, en una explotación

ovina.

3

PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

Las enfermedades asociadas a parasitismos, a menudo generan otras patologías

secundarias, relacionadas con complicaciones que pueden ser: respiratorias,

circulatorias, reproductivas pero principalmente digestivas; que podrían prevalecer

debido a la dificultad para enfrentarlas con los antihelmínticos existentes, puesto

que, por la ignorancia de algunos productores han hecho que se generen cierta

resistencia parasitaria frente a lo que deberían ser los tratamientos efectivos.

La consecuencia inicial de que exista la resistencia parasitaria, a futuro será la

poca disponibilidad de tratamientos para enfrentarlas, junto a todo esto ira

asociado la problemática ambiental que muy posiblemente incluirá la salud publica

por la transmisión de enfermedades originadas por parasitismos.

Lo anterior solo nos genera esta pregunta:

¿Podrían los parásitos crear resistencia, frente a los antihelmínticos Albendazol,

Levamizol e Ivermectina?

4

OBJETIVOS

General:

Evaluación de la Resistencia a los Antiparasitarios: Albendazol, Ivermectina

y Levamisol de los Nematodos Gastrointestinales de Ovinos

Específicos:

Realizar un examen coprológico para determinar la presencia del agente

parasitario.

Determinar el grado de reducción de la cantidad de huevos por gramo de

heces (h/gh) eliminados posterior a la desparasitación con Albendazol (AL),

Levamisol (LV) e Ivermectina en el individuo.

Evaluar la eficacia del Albendazol en la dosis descrita para ovinos.

Evaluar la eficacia del Levamisol en la dosis descrita para ovinos.

Evaluar la eficacia de Ivermectina en la dosis descrita para ovinos.

5

MARCO TEORICO

PARÁSITOS: NEMATODOS

Los nematodos (o nemátodos o nematodes; antiguamente nematelmintos)

(Nematoda, del griego nema, "hilo", eidés u oidos, "con aspecto de") son un filo de

vermes pseudocelomados con más de 25.000 especies registradas y un número

estimado mucho mayor, el cuarto del reino animal por lo que se refiere al número

de especies. Se conocen como gusanos redondos, debido a la forma de su

cuerpo en un corte transversal. Son organismos esencialmente acuáticos, aunque

proliferan también en ambientes terrestres. Se distinguen de otros gusanos por ser

pseudocelomados, a diferencia de los anélidos que son celomados al igual que los

animales superiores. Existen especies de vida libre, marinas, en el suelo, y

especies parásitas de plantas y animales, incluyendo el hombre, al que provocan

enfermedades como la triquinosis, filariasis, anquilostomiasis, ascariasis,

estrongiloidiasis, toxocariasis, etc. Sin embargo el número de especies que

parasitan directamente al hombre y las que parasitan plantas (nemátodos

fitoparásitos) son un grupo muy pequeño en comparación al número de especies

del filo Nematoda.

Características

Los nematodos incluyen especies tanto de vida libre (monoxenos,

metabólicamente independientes de un hospedador) como parásitos

(metabólicamente dependientes de un hospedador para continuar su ciclo de

vida). Son dioicos, es decir, los dos sexos en organismos separados. Existe una

gran diversidad de especies. Miden desde menos de 1 mm a 50 cm de largo e

incluso más. La hembra de la especie Placentonema gigantisima llega a alcanzar

los 8 metros y 2,5 centímetros de diámetro, siendo el nematodo más grande

conocido. Ésta parasita la placenta de los cachalotes y posee 32 ovarios que

producen una enorme cantidad de huevos.2

6

Morfología

Los nematodos son gusanos redondos, tienen el cuerpo alargado, cilíndrico y no

segmentado con simetría bilateral. Con frecuencia, el macho tiene un extremo

posterior curvado o helicoidal con espículas copulatorias y, en algunas especies,

una bolsa caudal denominada bursa. El extremo anterior del adulto puede tener

ganchillos orales, dientes, o placas en la cápsula bucal, que sirven para la unión a

tejidos, y pequeñas proyecciones de la superficie corporal conocidas como cerdas

o papilas, que se cree que son de naturaleza sensitiva. Se denominan anfidios,

fasmidios o deiridios según la porción del cuerpo donde se localicen.

1: abertura bucal;

2: intestino;

3: abertura cloacal;

4: órgano excretor;

5: testículo;

6: anillo nervioso perifaríngeo;

7: cordón nerviosos dorsal;

8: cordón nervioso ventral;

9: poro excretor

La superficie exterior del gusano adulto es muy resistente y se denomina cutícula,

de composición escleroproteica, normalmente lisa, aunque existen algunas

especies con estriaciones o rugosidades cuticulares. Bajo la cutícula se

encuentran varias capas musculares y un espacio compuesta de líquido que

funciona como un esqueleto hidrostático llamado pseudocele el cual favorece la

distribución de nutrientes y la recolección de productos de excreción y en el cual

también se encuentran las gónadas. Todos los órganos “flotan” dentro de este

líquido. Los sistemas de órganos internos consisten en un complejo cordón

nervioso (ganglios conectados alrededor del esófago) y un sistema digestivo bien 7

desarrollado con cápsula bucal (donde se encuentran los ya mencionados

ganchos, dientes, placas o papilas), esófago, intestino y ano. No tienen sistema

circulatorio, de manera que para mover el líquido interno deben mover el cuerpo

para hacer presión hidrostática. Las diferentes especies varían de tamaño desde

unos cuantos milímetros (como el Strongyloides stercoralis hasta más de un metro

de longitud (Dracunculus medinensis por ejemplo), e incluso más.

Fisiología

Su metabolismo es fundamentalmente anaeróbico.

La curva de su crecimiento es logarítmica.

Su longevidad es variable, desde 1 mes hasta más de 10 años.

Algunas especies presentan mecanismos de resistencia a condiciones adversas.

Recurren a un tipo de inhibición larvaria conocida como hipobiosis. La

anhidrobiosis, por ejemplo en Ditylenchus dipsaci (nematodo del ajo y de los

tallos), le permite sobrevivir durante años en una condición de sequedad.

Reproducción y órganos sexuales

La reproducción es variable. Se reproducen tanto por partenogénesis como por

reproducción sexual. Los sexos están separados; en general los machos son más

pequeños que las hembras. Los órganos reproductores son en proporción muy

grandes y complejos. En el macho están formados por testículos, vasos

deferentes, vesícula seminal y conducto eyaculatorio. Presentan unas espículas

como órganos copulatorios, a veces con una bursa o bolsa que le ayuda en la

copulación además de órganos accesorios como el gobernáculo. Los órganos

reproductores de la hembra constan de ovarios, oviducto, receptáculo seminal,

útero y vagina. La hembra puede producir desde varios cientos hasta millones de

huevos. Por lo general, la fecundidad es proporcional a la complejidad del ciclo de

vida del parásito.

8

Ciclo biológico

En los nemátodos se pueden encontrar dos tipos de ciclo de vida:

Ciclo directo: Cuando las formas preparasitarias se encuentran libres en el

ambiente, su desarrollo es dentro del huevo o al salir de él.

Ciclo indirecto: Cuando las larvas infectivas se desarrollan hasta la etapa

infectiva en el interior del huésped intermediario.

PRINCIPALES PARÁSITOS GASTROENTERICOS EN CAPRINOS

Animales criados en confinamiento o en pasturas, con toda seguridad van a estar

propensos a adquirir parasitismos; pero las probabilidades de que se infesten o

no, dependerá de uno u otro modo del clima en donde estén; de este modo

encontramos que, en ambientes secos la exposición a esos agentes va a ser

menor; mientras que en un entorno cálido y húmedo las infecciones parasitarias

serán mayores, principalmente por gusanos lo que genera una grave situación

para estas poblaciones.

A continuación se listan los parásitos que con mayor frecuencia son hallados en

los ovinos y los caprinos.

ORGANO PARASITO ESPECIE

Rumen  Trematodos

 Paramphistomum sp.

 Abomaso  Nematodos Haemonchus contortus contortus Ostertagia circumcincta Ostertagia trifurcata Trichostrongylus axei Marshallagia marshalli

9

 Intestino delgado  Nematodos Toxocara vitulorum Cooperia spp. Trichostrongylus spp. Nematodirus spp. Strongyloides papillosus Bunostomum spp.

Capillaria spp.

  Intestino delgado  Cestodos Moniezia expansa Moniezia benedeni Thysanosoma actinoides

  Intestino delgado  Protozoos Eimeria spp. Cryptosporidium sp. Giardia sp.

 Ciego y Colon  Nematodos Oesophagostomum spp. Chabertia ovina Trichuris ovis

Ciego y Colon  Protozoos  Eimeria spp.

Higado y Conductos Biliares

 Cestodos  Thysanosoma actinoides

 Higado y Conductos Biliares

 Trematodos  Fasciola hepatica Fasciola gigantica Fascioloides magna Dicrocoelium dentriticum

Cavidades y Senos Nasales  Artropodos  Oestrus ovis

 Traquea y Bronquios  Nematodos Dictyocaulus filaria Protostrongylus sp.

 Parenquima Pulmonar  Nematodos  Muellerius capillaris

 Parenquima Pulmonar  Cestodos  Echinococcus hydatid cyst

 Parenquima Pulmonar  Protozoos  Toxoplasma gondii cysts

 Corazon  Cestodos  Taenia ovis cysticerci

10

 Arterias  Nematodos  Elaeophora schneideri

 Venas  Trematodos  Schistosoma spp.

 Sangre  Protozoos Babesia spp. (RBC) Trypanosoma spp. (plasma) Theileria spp. (RBC)

 Nodulos Linfaticos  Artropodos  Linguatula serrata larvae

 Sistema Urogenital  Protozoos  Toxoplasma gondii Sarcocystis spp.

Musculos y Tejidos Musculares

 Cestodos  Taenia ovis cysticerci Taenia hydatigena cysticerci

Musculos y Tejidos Musculares

 Protozoos  Toxoplasma gondii cysts Sarcocystis spp. Cysts

 Cavidad Peritoneal  Cestodos  Taenia hydatigena cysticerci

  Cavidad Peritoneal  Artropodos  Linguatula serrata nymphs

 Ojos  Nematodos  Thelazia

 Sistema Nervioso  Nematodos  Parelaphostrongylus tenuis

 Sistema Nervioso  Cestodos  Taenia multiceps coenurus

 Sistema Nervioso  Protozoos  Toxoplasma gondii cysts

11

 

Piel  Artrópodos

Musca autumnalis M. domestica Stomoxys calcitrans Haematobia irritans Calliphorid larvae Melophagus ovinus Damalinia ovis Damalinia caprae Linognathus spp. Sarcoptes scabiei Demodex Psoroptes Chorioptes Otobius Ornithodoros Ixodes Rhipicephalus spp. Dermacentor spp. Amblyomma spp.

2. MARGO, Hale. Managing internal parasites in sheep and goats, NCAT. Agriculture Specialist.

2006

TECNICAS DIAGNOSTICAS PARA LA IDENTIFICACION DE PARASITOS

GASTROENTERICOS

El diagnóstico de las parasitosis internas en rumiantes es una herramienta

indispensable de trabajo para el médico veterinario, quien necesita conocer en

forma precisa la situación parasitológica del ganado a fin de poder establecer el

tratamiento adecuado y poder dar sugerencias y recomendaciones al ganadero.

Uno de los principales problemas parasitarios que afectan a rumiantes domésticos

son los causados por nematodos gastroentéricos (NGE). (3. María Eugenia López

Arellano. 2003. Centro Nacional de Investigaciones Disciplinarias en Parasitología. Veterinaria, Instituto

Nacional de Investigaciones Forestales, Agrícolas y Pecuarias, SAGARPA. Cuernavaca-Cuautla, Col

Progreso, Jiutepc, México.)

12

El diagnóstico para este grupo de parásitos se basa en el uso tradicional de

técnicas coproparasitoscópicas cualitativas como son:

Técnica macroscópica directa: consiste en observar y detectar las fases

adultas de nemátodos, fragmento del cuerpo de céstodos (proglótidos) y

larvas de dípteros (moscas). Se puede utilizar para la identificación en

material fecal o en el contenido de vísceras.

Técnica microscópica directa: consiste en detectar vía microscópica huevos

de helmintos, quistes y trofozooitos de protozoarios y estadío larval de los

parásitos. Se basa en diluir una pequeña cantidad de materia fecal en agua

y contrastar por medio de colorantes, se reportan como positivas o

negativas.

Técnica de flotación: detecta quistes de protozoarios, huevo de céstodos y

nemátodos.

Cultivo larvario: lograr el desarrollo de larvas de nemátodos gastroentéricos

a partir de huevos contenidos en la materia fecal.(técnica de Corticelli LAI.)

Asimismo, se cuenta con técnicas coproparasitoscópicas cuantitativas como:

Técnica de Mc-Master: consiste en cuantificar huevos de nemátodos y

quistes de protozoarios.

Se emplea para estimar el grado de parasitosis, por medio del conteo de ooquistes

de coccidias y huevos por gramo de heces, principalmente Áscaris, Strongyloidea,

Trichuris, Strongyloides, etc.

Un resultado negativo no indica que no estén presentes los parásitos. Los huevos

de gusanos planos solo se reportan como ausentes o presentes, y no se cuentan

porque el número refleja únicamente la maduración de los segmentos y no el

número de gusanos presentes.

13

Esta técnica esta basada en la dilución de 2.0 g de excremento con 28 ml de

solución saturada de glucosa o sal común. La lectura se efectúa en una cámara de

McMaster con un área de 1 cm y una profundidad de 0.15 mm proporcionando un

volumen de lectura de 0.15 ml, es decir se lee una centésima parte por gramo de

excremento; es por esto que para obtener el numero de huevos por gramo se

tiene que usar un factor de corrección de 100 para cada cuadricula observada. (4.

Roger Iván Rodríguez Vivas, Rubén C. Montes Pérez, Ligia Amira Técnicas Diagnosticas En

Parasitología Veterinaria)

ANTIHELMINTICOS

Los helmintos tienen un ciclo de vida más complejo que los protozoos. Pueden

encontrarse a nivel intestinal y en otros órganos y tejidos (hígado, pulmón...).

Estos compuestos deben poder ser absorbidos bien y deben tener una amplia

distribución en el organismo.

Los parásitos son cestodos, trematodos y nemátodos.

Estos parásitos pueden afectar a muchas especies, pero sobretodo a especies de

producción y consumo humano. Son importantes por manifestaciones clínicas y

subclínicas (disminución de la producción).

Es un parasitismo con interés económico importante y hay muchos compuestos.

Estos compuestos deben seguir ciertas condiciones:

         Tener amplio espectro de actividad.

         Tener un elevado margen terapéutico.

         Efectivos frente a las diferentes fases del desarrollo (huevos, larvas y

adultos).

         Capacidad para desarrollar la inmunidad natural.

         No alterar el desarrollo normal del animal.

         Aceptable por los animales y fácil de administrar.

         Económicamente aceptable.

         No deja residuos en los tejidos.

14

BENZIMIDAZOLES

Son una gran familia de químicos utilizados para tratar infecciones por nematodos

y trematodos en los animales domésticos. Sin embargo, con el amplio desarrollo

de la resistencia y la disponibilidad de más eficientes y más fáciles de administrar

los compuestos, su uso está disminuyendo rápidamente.

Se caracterizan por un amplio espectro de actividad frente a nematodos

(nematodos), un efecto ovicida, y un amplio margen de seguridad.

Albendazol

Es un carbamato benzoimidazolico con efectos antihelmínticos y antiparasitarios

frente a los parásitos tisulares e intestinales. El albendazol muestra actividad

larvicida, ovicida y vermicida, y se cree que ejerce el efecto antihelmíntico

inhibiendo la polimerización de la tubulina. Esto causa la disrupción del

metabolismo del helminto, incluyendo la disminución de energía, que inmoviliza y

después mata el helminto sensible.

Posterior a su administración por vía oral, el albendazol es absorbido en escasa

cantidad (5%). Cuando se administra una dosificación de 6.6 mg/kg, la

hemoconcentración del metabolito principal, el sulfóxido de albendazol, es de 0.25

a 0.30 mcg/ml a las dos horas de su ingestión. En el plasma, el sulfóxido de

albendazol tiene una vida media de 8.5 horas. El metabolito es eliminado

principalmente por vía urinaria.

Albendazol (Bendapar) tiene efecto antihelmíntico al inhibir la polimerización de la

tubulina, en consecuencia, disminuyen los niveles de energía hasta que estos son

insuficientes para la sobrevivencia del parásito. De tal forma que el albendazol

inmoviliza y más tarde mata al parásito susceptible.

15

IMIDAZOTIAZOL

Levamisol:

Cuando se sintetizo por primera vez este producto químico, se presento como una

mezcla racémica, denominada tetramisol. La misma estaba compuesta por partes

iguales de isómeros del tetramisol (50% de L-tetramisol y 50% de D-tetramisol).

Posteriormente se separaron químicamente los dos isómeros y se demostró que la

actividad antihelmíntica de la mezcla recaía casi exclusivamente en el isómero L-

tetramisol, que se denomino Levamisol.

Actúa produciendo parálisis del parasito, debido a una contracción muscular

permanente (parálisis espástica). No mata al parasito, y este es expulsado vivo.

Este efecto lo logra por tener acción colinérgica en los ganglios del parasito

susceptible.

LACTONAS MACROCICLICAS

Ivermectina:

Es una lactona macrocíclica perteneciente al grupo de las avermectinas, aparece

en la década de 1980, junto con otro grupo denominado milbemicinas donde

encontramos al moxidectin y milbemicina oxima, siendo efectivo frente a un gran

numero de parásitos tanto internos como externos, permitiendo además varias

formas de administración.

Dentro del grupo de la ivermectina, también encontramos otras drogas como son

Doramectina, Eprinomectina, Abamectina y Selamectina.

Las avermectinas se originan del Streptomyces avermitilis y se caracterizan por

poseer una mezcla de cuatro componentes mayores (A1a, A2a, B1a y B2a) y

cuatro componentes menores (Avermectina A1b, A2b, B1b y B2b).

16

Las lactonas macrocíclicas ejercen su acción al unirse a los canales de Cl-,

ligados al receptor de glutamato (GluCl), estos canales iónicos están compuestos

por tres subunidades (α, β, δ) que se combinan entre sí para formar un

pentámetro, presentando este grupo de drogas afinidad por la subunidad α.

Existen diferencias entre los receptores glutamato de los invertebrados y los de los

mamíferos lo que determina la actividad selectiva de estas drogas y la seguridad

que brinda su uso en estos últimos.

Dichos receptores se encuentran localizados mayoritariamente en las neuronas,

células musculares y en el útero de los invertebrados. Cuando la ivermectina se

une selectivamente e irreversiblemente a estos receptores se produce un

incremento en la permeabilidad al Cl-, lo que origina una hiperpolarización de la

membrana celular.

Las lactonas macrocíclicas, a bajas concentraciones potencian el efecto del

glutamato y a concentraciones elevadas producen, por sí mismas la apertura del

canal, originando una hiperpolarización y un aumento irreversible de la

conductancia de entrada al Cl-.

Como consecuencia de esta acción se produce una parálisis flácida que origina

pérdida de la motilidad y termina provocando la muerte del parásito; además a

concentraciones mucho menores tienen la capacidad de inhibir el bombeo faringeo

en determinados parásitos, alterando ingestión de alimento. (5. Antonelli, Ariel Ivan.

Resistencia de los endoparásitos a la ivermectina)

17

RESISTENCIA ANTIHELMINTICA

La resistencia antihelmíntica (RA) es la presencia de gran proporción de

nematodos capaces de tolerar y sobrevivir a la aplicación de dosis normales de

una o más familias de antihelmínticos, la cual es heredable a las futuras

generaciones, o la reducción heredable de la sensibilidad de una población de

parásitos a la acción de una droga.

La RA puede ser también la detección por medio de pruebas sensitivas, de un

aumento significativo de individuos dentro de una misma especie y población de

parásitos capaces de tolerar dosis de drogas que han probado ser letales para la

mayoría de individuos de la misma especie, lo que hace posible determinar no

solo la especie de nematodo involucrado sino también su grado de sensibilidad a

los químicos disponibles.

Existen tres formas de RA:

Resistencia lateral. Existe cuando la resistencia a un componente es el

resultado de la selección de otro componente con un modo de acción

similar.

Resistencia cruzada. Ocurre cuando los individuos son resistentes a dos o

mas grupos de antihelmínticos diferentes, como resultado de la selección

de cada grupo en forma independiente.

Resistencia Múltiple. Ocurre cuando los individuos son resistentes a dos o

más grupos de antihelmínticos con mecanismos de acción diferentes o

como resultado de la resistencia cruzada.

(4. Roger Iván Rodríguez Vivas, Rubén C. Montes Pérez, Ligia Amira Técnicas Diagnosticas

En Parasitología Veterinaria)

18

Factores que predisponen al desarrollo de resistencia:

Existen diversos factores que pueden favorecer la presentación de la RA entre los

cuales se pueden citar:

El desinterés por parte del productor pecuario, para ofrecer bienestar a sus

animales, llevando rigurosos controles en desparasitación y manejos de

dieta confortables.

No asistencias técnicas a las producciones para instruir a los productores

acerca de los cuidados que se deben tener con los animales.

Suministro de medicamentos sin previa prescripción medica veterinaria.

Inadecuados diagnósticos, permitiendo el uso de una sola familia de

desparasitantes, lo que permite a los nematodos resistentes, sobrevivir y

prevalecer sobre las poblaciones susceptibles.

La desparasitación en intervalos de tiempo inadecuados a los que se

deberían emplear.

Cuando no se hacen rotación de potreros los parásitos logran cumplir si

ciclo, ya que tienen el hospedador continuamente.

La alta diversidad genética en los nemátodos, provoca que aumente la

probabilidad de que los alelos de la resistencia estén presentes

posiblemente en una alta frecuencia en una población. Si la proporción de

nematodos gastrointestinales resistentes a aumentado en comparación con

los individuos susceptibles, o si la resistencia esta ligada a otros genes,

entonces la resistencia tendera a esparcirse en la población.

Los ciclos de vida directos de los nematodos gastrointestinales implican que

los alelos de la resistencia no se disipan por el paso a través de un

hospedador intermediario. Las poblaciones de los parásitos resistentes

tienden a ser móviles esto se agrava especialmente si los hospedadores se

mueven. (5.ANTONELLI, Ariel Ivan. Resistencia de los endoparásitos a la ivermectina)

19

DIAGNOSTICO DE LA RESISTENCIA A LOS ANTIHELMINTICOS

El diagnostico de la RA debe estar en manos de profesionales capacitados para

realizar las pruebas diagnosticas y/o interpretar los resultados enviados por el

laboratorio, lo que hace necesario crear una estrecha relación entre el campo y el

laboratorio, ya que es preciso el desarrollo de estudios especializados para

determinar el tipo de RA de la cepa problema.

En la actualidad se puede diagnosticar la RA con técnicas in vivo e in vitro, las

cuales son:

Técnicas in vivo

- Experimentos de dosis y sacrificio o

pruebas controladas. En este caso se requiere

de animales parasitados artificialmente con los

parásitos sospechosos de ser resistentes, los

cuales se tratan con el antihelmíntico y

posteriormente son sacrificados para aislar y

controlar los parásitos existentes. Esta prueba es

costosa y generalmente se utiliza como una

herramienta de investigación para confirmar

algún caso especial de resistencia.

- Técnica de reducción de conteo de

huevos: es la técnica mas utilizada en los

diversos estudios de prevalencia e incidencia de

NGE (nematodos gastrointestinales), con RA en

diferentes partes del mundo. Esta prueba

compara el número de huevos eliminados antes

y después del tratamiento con el antihelmíntico.

Es necesario incluir un grupo testigo que sirva 20

además de comparación para monitorear

cambios que puedan ocurrir en la eliminación de

huevos durante el estudio. El porcentaje de

eficacia es el único parámetro que se toma en

cuenta para medir la resistencia, a los

antihelmínticos evaluados mediante esta prueba,

el cual siempre deberá ser igual o mayor al 95%.

Técnicas in vitro:

- Eclosión de huevos: Ha sido desarrollada para la detección de

resistencia hacia el grupo de los benzimidazoles, se basa en

las propiedades ovicidas de estos antihelmínticos y en la

capacidad de los huevos de las cepas resistentes para

embrionar y eclosionar a concentraciones mas altas que en

los de las cepas susceptibles.

El procedimiento de la técnica se lleva a cabo mediante la

incubación de huevos sin embrionar durante 48 horas a 23°c

en diluciones seriadas de antihelmíntico, se determina el

porcentaje de huevos que eclosionan en cada dilución y se

corrige por la mortalidad natural observada en los controles,

mediante operaciones estadísticas, se calcula la dosis eficaz

DE50 que es la concentración de antihelmíntico necesaria para

inhibir la eclosión del 50% de los huevos.

- Parálisis de huevos: se utiliza para diferenciar entre cepas

resistentes y susceptibles evaluando la proporción de

recuperación de la parálisis utilizando diferentes

concentraciones de Levamisol a larvas no eclosionadas.

- Parálisis larval: esta técnica es utilizada para determinar el

porcentaje de L3 que quedan paralizadas cuando se incuban

en diluciones seriadas de antihelmíntico.

21

- Desarrollo larvario: se utiliza para detectar resistencia en los

tres grupos de antihelmínticos. En esta técnica los huevos se

desarrollan hasta L3 en una placa con medio nutritivo y

diferentes concentraciones de antihelmínticos, además de

manejar placas de control que solo contienen medio nutritivo

los huevos se incuban 7 días a 26°c , pasado este tiempo se

adicionan unas pocas gotas de lugol y se procede a la lectura

comparando el desarrollo alcanzado de las larvas en las

placas control con el resto de las placas con antihelmíntico.

- Inhibición de la ingestión larvaria: mediante esta prueba se

puede detectar resistencia frente a las lactonas macrocíclicas

(LM). se basa en la actividad que posee este grupo de inhibir

la ingestión de alimentos de las L1 de NGE debido a que

producen una parálisis de los músculos faríngeos.

- Unión a tubulina: esta basada en la diferente unión de los BZD

a la tubulina obtenida de NGE susceptibles y resistentes. Se

desarrolla mediante la producción de un extracto crudo de

tubulina de parásitos adultos, larvas infectivas o huevos, que

es incubado con BDZ marcados con tritio hasta alcanzar un

equilibrio. Cuando el antihelmíntico queda libre es removido

con carbón vegetal formando el complejo benzimidazol-

tritado-tubulina para ser estimado mediante un

espectrofotómetro de centello liquido.

Los extractos de tubulina de los parásitos resistentes unen

menos antihelmíntico, que aquellos que son susceptibles por

lo que la concentración proteica-tubulina, (µg/ensayo) es

comparada contar la cantidad de BZD-tritiado unido.

- Biología molecular: actualmente se han desarrollado técnicas

moleculares para la detección de RA en NGE muchas de

estas se basan en la reacción en cadena de la polimerasa, la

cual es muy útil porque la reacción puede diseñarse, para que

22

sea altamente específica, fácilmente reproducible y capaz de

amplificar pequeñas cantidades de ADN.

Permiten determinar la proporción de cada genotipo en la

población: susceptibles y resistentes. Por tanto, el nivel de la

resistencia en la población viene determinando por la

proporción de individuos homocigotos. (6. HERNANDEZ,

Frechs.2008.Evaluacion de las resistencia a los antiparasitarios: Albendazol,

Ivermectina y Levamisol de los nematodos gastrointestinales de varias razas de

ovino de la región centro y altos de Chiapas)

METODOLOGIA

TIPO DE ESTUDIO

El presente trabajo, es un estudio de tipo experimental; ya que se pretende

evaluar la eficacia que tienen los antihelmínticos (Albendazol, Levamizol,

ivermectina), contra los nematodos en ovinos, además comprobar si estos

parásitos han desarrollado cierto grado de resistencia.

LOCALIZACIÓN DEL ÁREA DE ESTUDIO

El sitio a evaluar esta localizado en la región de Villa De Leyva, las veredas de

Llano del árbol y Cañuela.

El lugar en donde encontramos al municipio de Villa de Leyva se encuentra sobre

la cordillera oriental en la región central del departamento de Boyacá, en una zona

montañosa que rodea un valle conocido desde épocas precolombinas llamado

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inicialmente por los indígenas valle de Zaquencipá posteriormente valle de

Monquirá y actualmente está ocupado por la provincia de Ricaurte. La Provincia

de Ricaurte ha sido dividida en dos zonas llamadas Alto Ricaurte y Bajo Ricaurte,

estas zonas política y administrativamente incluyen trece municipios:

Ricaurte Alto:

o Gachantivá

o Ráquira

o Sáchica

o Santa Sofía

o Sutamarchán

o Tinjacá

o Villa de Leyva

Ricaurte Bajo

o Arcabuco

o Chitaraque

o Moniquirá

o San José de Pare

o Santana

o Togui

El Agua a Villa de Leyva es servida por tres ríos que provienen de las zonas

lluviosas y de páramo cercanos, estos ríos son el Sutamarchán, Sáchica y Cane

que confluyen en el Río Moniquirá. El municipio está limitado al norte por

Arcabuco y Gachantivá, al oriente por Chiquiza, al sur por Sáchica y al occidente

por Santa Sofía y Sutamarchán. Tiene una zona urbana y 12 veredas que dividen

el territorio rural:

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Cañuela

Capilla

Cardonal

Centro

El Roble

La Lavandera

Llano Blanco

Llano del Árbol

Monquirá

Ritoque

Salto

Sopotá

En Villa de Leyva se pueden describir tres zonas climáticas:

1. Lluvias 700 a 1000 mm/año, es la zona desértica cuyo aspecto es de

terrenos erosionados ricos en piedra y fósiles.

2. Lluvias 1000 a 1400 mm de lluvia anual, zona más fértil para los cultivos

3. Lluvias 1400 a 1700 mm/año, zona muy húmeda que está coronada por el

paramo de Iguaque a 3.600 msnm.

25

Ubicación de Villa de Leyva

7. http://es.wikipedia.org/wiki/Villa_de_Leyva

MATERIALES

Animales

Equipos y cámara de Mc Master

Cajas de petri pequeñas y grandes

Micropipeta

Microscopio

Estereoscopio

Bascula electrónica

Estufa u horno estéril

Tubos de ensayo

Vacutainers

Jeringas de 1,3, 5, 10 cm

Nevera de hicopor.

Block de notas

DISEÑO EXPERIMENTAL26

Para el siguiente estudio, utilizaremos una población de 32 animales

ovinos, a los cuales se les realizara un examen clínico, donde tendremos

incluidos:

Cuadro hemático completo

Coprológico (pre administración de antihelmínticos)

Una vez analizados los resultados y observado los animales, dividimos el

grupo en tres, sin importar la edad, o el género; y luego aplicar los

antihelmínticos con los cuales trabajaremos (Albendazol, Levamizol e

Ivermectina).

Una vez aplicados los fármacos, y transcurrido el tiempo de acción de los

fármacos, procederemos a tomar las muestras para coprológico

directamente de los animales, siendo estas posteriormente llevadas al

laboratorio y analizadas.

Finalmente, los resultados y la información en general serán tabulados y

organizada para su posterior análisis. Luego daremos algunas

recomendaciones y sugerencias para el tratamiento de las parasitosis

gastrointestinales en la explotación ovino.

BIBLIOGRAFIA

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1. www.C.D.C.gov, Resistance to antibiotics and other antimicrobial agents.

2002

2. MARGO, Hale. Managing internal parasites in sheep and goats, NCAT.

Agriculture Specialist. 2006

3. LÓPEZ, María Eugenia. 2003. Centro Nacional de Investigaciones

Disciplinarias en Parasitología. Veterinaria, Instituto Nacional de Investigaciones

Forestales, Agrícolas y Pecuarias, SAGARPA. Cuernavaca-Cuautla, Col Progreso,

Jiutepc, México.

4. RODRÍGUEZ, Roger Iván, Rubén C. Montes Pérez, Amira, Ligia Técnicas

Diagnosticas En Parasitología Veterinaria.

5. ANTONELLI, Ariel Ivan. Resistencia de los endoparásitos a la Ivermectina.

6. HERNANDEZ, Frechs.2008.Evaluacion de las resistencia a los

antiparasitarios: Albendazol, Ivermectina y Levamisol de los nematodos

gastrointestinales de varias razas de ovino de la región centro y altos de Chiapas.

7. http://es.wikipedia.org/wiki/Villa_de_Leyva. 25 de mayo de 2009.

CRONOGRAMA28

Me

s

Actividades

1

Desplazamiento a la zona, e inducción al propietario de el procedimiento a

seguir.

2 Clasificación de los animales, examen clínico, pesaje, toma y transporte de

muestras.

3-4 Evaluación de las muestras en el laboratorio, a través del método Mc-

Master y sedimentación.

5 Grupo de trabajo. 32 animales

5 Clasificación y división del grupo

6 Aplicación de los antihelmínticos (albendazol, Levamisol, ivermectina)

7 Seguimiento de los individuos frente al tratamiento.

8 Nueva toma de muestras, y transporte de las mismas.

9 Procesamiento y análisis de muestras.

10 Recopilación y análisis de los datos.

11 Tabulación de los resultados

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COSTOS

Viajes 200000

Medicamentos 100000

Coprológicos 50000

Hemogramas 50000

Otros 100000

Los precios que reporta este estudio aun están abiertos a cambios improvistos, y a

la constante fluctuación en alguna actividad que requiera de alguna herramienta

extra.

30