Técnicas de estudio de la materia viva

Javier Medina

Técnicas de estudio de la materia viva

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MET: Partes

Cañón de electrones, que emite los electrones que chocan contra el espécimen, creando una imagen aumentada.

Lentes magnéticas para crear campos que dirigen y enfocan el haz de electrones, ya que las lentes convencionales utilizadas en los microscopios ópticos no funcionan con los electrones.

Sistema de vacío es una parte muy importante del microscopio electrónico. Debido a que los electrones pueden ser desviados por las moléculas del aire, se debe hacer un vacío casi total en el interior de un microscopio de estas características.

Placa fotográfica o pantalla fluorescente que se coloca detrás del objeto a visualizar para registrar la imagen aumentada.

Sistema de registro que muestra la imagen que producen los electrones, que suele ser una computadora.

La MET no explora superficies: el haz de electrones incidente atraviesa la muestra y genera una sombra de la ultraestructura que es capturada en una pantalla fosforescente , ubicada en la parte inferior de la columna.

Microscopio electrónico de barrido

En el microscopio electrónico de barrido la muestra es recubierta con una capa de metal delgado, y es barrida con electrones enviados desde un cañón. Un detector mide la cantidad de electrones enviados que arroja la intensidad de la zona de muestra, siendo capaz de mostrar figuras en tres dimensiones, proyectados en una imagen de TV.

Comparación microscopios electrónicos

:

Cromatografía de intercambio iónico

Electroforesis

Centrifugación

Las centrífugas son instrumentos que permiten someter a las muestras a intensas fuerzas que producen la sedimentación en poco tiempo de las partículas que tienen una densidad mayor que la del medio que las rodea.

Tipo:– centrífugas (de pocas g a aprox. 3000 g)– super-centrífugas (o centrífugas de alta velocidad, rango de 2000

g a 20000 g) – ultracentrífugas (de 15000 g a 600000 g).

En las centrífugas se suele controlar la temperatura de la cámara para evitar sobrecalentamiento de las muestras debido a la fricción. En las ultracentrífugas, la velocidad extrema (más de 100000 rpm), hace que sea necesario hacer un intenso vacío en la cámara de la centrífuga para evitar el calentamiento de rotor y muestra.

Centrifugación: coeficientes de sedimentación

El coeficiente de sedimentación de una partícula o macromolécula se calcula dividiendo su velocidad constante de sedimentación (en m/s) por la aceleración aplicada (en m/s2).

El resultado tiene dimensiones de tiempo y se expresa habitualmente en svedbergs (S).

Los valores de coeficientes de sedimentación no son aditivos, debido a que dependen tanto de la masa, como de la forma que tenga la molécula. Una partícula formada por la unión de dos partículas 5 S no tiene un coeficiente de sedimentación de 10 S. Por ejemplo, los ribosomas eucarióticos están formados por dos subunidades, una 60 S y otra 40 S. Sin embargo, el valor final del conjunto del ribosoma no es 100 S, sino 80.

Centrifugación diferencial

Separación por sedimentación en gradiente de sacarosa