SLIDEX Strepto Plus

MARCELA MAYORGAANDRES QUINTERO

SLIDEX Strepto Plus

Prueba de aglutinación de micro partículas de poliestireno (látex) para la detección rápida de los estreptococos de los grupos de Lancefiel A, B, C, D, F y G. Esta prueba se realiza mediante el uso de colonias aisladas en medios sembrados con muestras de origen humano.

FUNDAMENTO

Se recogen las colonias aisladas de estreptococos y se colocan en un tubo que contiene la enzima de extracción. El antígeno específico de grupo se extrae de forma enzimática de la pared celular del estreptococo. Se identifica el antígeno en el extracto mediante partículas de látex sensibilizadas con el anticuerpo antiestreptococo del grupo específico. Se forman aglutinaciones visibles en la suspensión específica de partículas de látex que reaccionan con el antígeno extraído. El látex permanecerá en suspensión si el antígeno no estuviera presente en el extracto.

PROCEDIMIENTO

Muestras (toma y preparación)Selección de colonias

• Sembrar la muestra sobre un medio sólido adecuado. • Después de 18-24 horas de incubación a 33-37°C en una atmósfera

enriquecida de CO2 al 5%, o en una atmósfera no enriquecida, escoger las colonias sospechosas.

• Si la siembra se hubiera realizado sobre Agar chromID™ CPS® asegurarse que la colonia es un estreptococo: color turquesa a violeta, morfología, coloración Gram y catalasa.

• Si se hubiera sembrado sobre Agar chromID™ Strepto B, escoger las colonias de color rosa pálido a rojo, y que sean redondas y nacaradas.

Procedimiento

ReconstituciónReconstituir la enzima de extracción con 10 ml de agua destilada estéril.

Preparación del extracto• Transferir 0,4 ml de enzima de extracción en un tubo de ensayo. - Usar cultivos procedentes de un medio sólido, escoger de 3 a 5 colonias características según

su tamaño, y emulsionarlos en 0,4 ml de enzima de extracción.

• Homogeneizar en un mezclador tipo vórtex e incubar en la estufa durante 10 minutos a 37°C.

Identificación 1.Permitir que los reactivos alcancen la temperatura ambiente (18-25°C) al menos 10 minutos antes de su uso. 2.Resuspender los reactivos de látex. Eliminar las burbujas retenidas en el cuentagotas. 3.Registrar la referencia de la cepa sobre una tarjeta (fuera de los pocillos de reacción). 4.Agitar bien las suspensiones de látex.5.Depositar 1 gota de cada reactivo de látex en los pocillos de reacción de la tarjeta. Cuidar que los frascos cuentagotas estén en posición vertical durante la distribución de las gotas.

6. Distribuir 15 µl de extracto al lado de cada gota de látex.7. Mediante un bastoncillo, mezclar las 2 gotas y extenderlas sobre toda la superficie del pocillo. 8. Realizar cuidadosamente un ligero movimiento de rotación con la tarjeta durante 2 minutos como máximo

LECTURA E INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS

• Un resultado positivo se manifiesta por la aparición de una aglutinación visible con un reactivo de látex en menos de 2 minutos.

• Un resultado negativo viene indicado por la ausencia de aglutinación: suspensión homogénea o granulación muy fina en 2 minutos.

• La reacción es ininterpretable cuando se observa la aglutinación en varias de las suspensiones de látex. Esto puede corresponder a una cepa poliaglutinante o a una mezcla de cepas. Un resultado es no-identificable si no se observa ninguna aglutinación en ninguno de los reactivos de látex.

• La interpretación de los resultados de la prueba debería realizarse teniendo en cuenta la historia del paciente, el origen de la muestra, los aspectos macro y microscópicos de la colonia, y, si fuera necesario, los resultados de cualquier otra prueba que se haya realizado.

Para cada serie de pruebas, comprobar:

•reactividad de las suspensiones de látex. Para ello, consultar la sección "Identificación" y sustituir el extracto por el control positivo. La aglutinación debería ser visible en cada una de las suspensiones de látex en menos de 2 minutos.•especificidad del análisis de aglutinación. Para ello, consultar la sección "Identificación" y sustituir el extracto por 0,15 mol/l de cloruro sódico, pH = 7. No se debería ver ninguna aglutinación en cualquiera de las suspensiones de látex después de 2 minutos.