Introduccion:

La técnica de blotting (transferencia) se basa en la transferencia de bandas de acidos nucleicos o proteínas desde un gel hacia una membrana de nitrocelulosa. Esto permite identificar La presencia de una banda por electroforesis

La electroforesis permite la separación ya sea de proteína o acidos nucleicos en un gel. Cuando se trata de proteínas se utiliza un gel de poliacrilamida mientras que para los acidos nucleicos uno de agarosa.

Cuando lo que se intenta identificar es DNA, se denomina Southern Blot, para esto se utilizan moléculas de DNA marcadas con radioactividad y que tengan una secuencia conocida y se identifican asi las bandas de gel que contienen secuencias complementarias a la muestra.

Si se trata de RNA, se denomina Northern Blot, para esto se utilizan moléculas de RNA marcadas con radioactividad y con una secuencia conocida y se identifican también las bandas de gel que contengan las secuencias complementarias a la muestra.

Desarrollo:

Southern Blot: Este método de biológica molecular que permite detectar la presencia de una secuencia de ADN en una mezcla compleja utiliza la técnica de electroforesis en gel de agarosa para asi separar los fragmentos de ADN en razón de su longitud, esto luego es transferido a una membrana en la que se realiza la hibridación de la sonda.

Pasos:

1. Extraccion del ADN.2. Digestion del ADN.3. Electroforesis en gel de agarosa4. Ensayo5. Hibridación con sonda radioactiva6. Autorradiografia7. Re-ensayo

Northern Blot: Empieza con la extracción del RNA de un tejido homogenizado, el RNA mensajero entonces es aislado mediante una cromatografía. Estas muestras son entonces separadas por electroforesis en gel. Luego las muestras de RNA son separadas por tamaño y transferidas a una membrana mediante capilaridad o transferencia al vacio.

LA membrana de Nylon cargada positivamente es el medio mas común que se utiliza en este tipo de método, ya que los acidos nucleicos prestan una alta afinidad al estar cargados negativamente.

Luego de la transferencia el ARN es inmovilizado mediante la unión con enlaces covalentes que se forman con la membrana con la ayuda de luz ultravioleta o calor.

Northern Blot reverso: Escribirlo

Diagramas:

Integrantes 5.

1. Generalidades

2. Northern blot

3. Southern Blot

4. Ventajas y desventajas

5. Apliaciones y conclusión.

Aplicaciones:

Tanto el Northern Blot como el Southern Blot son útiles para la identificación de un patrón particular de expresión genética ya sea en tejidos, órganos. Por lo tanto esta técnica ha sido de gran ayuda en el campo de la medicina, el estudio de ciertas patologías en particular en el campo de la oncología, ya que muestra los oncogenes de manera sobreexpresada y la desregularización de genes supresores tumorales al comparar el tejido con uno normal. Esta identificación es útil entonces para conocer las funciones de los genes, esto ya que luego de la separación en cromatografía nos indica deleciones o errores en la transcripción. Alterando la sonda es posible determinar que región del RNA ha sido delecionada.

Por otra parte es precuentemente utilizado en el ámbito de la criminalística.

Ventajas y desventajas:

Estas técnicas presentan la ventaja de detectar pequeños cambios en la expresión de genes que otras técnicas como los microarrays no pueden detectar, se puede definir el tamaño de la cadena de ARN, se pueden utilizar sondas con homología parcial, medir el tamaño y calidad del ARN antes de ser inmovilizado en la membrana y es posible mantenerla para posteriores estudios y reensayos.

El problema reside es que es muy común la degradación de las muestras por RNAsas por contaminación ambiental pero que puede ser evitada por esterilización de los materiales en uso y el uso de inhibidores de estas RNAsas

Conclusión