RETROVIRUS Y VIHIntegrantesMayra Alexandra OrozcoAna Carolina Rojas CARACTERÍSTICASLa familia Retroviridae es una de las más complejas de los virus animales. El término retro significa hacia atrás, y hace referencia a que tienen un modo inverso de replicar el ácido nucleído. Los retrovirus son virus con un genoma constituido por ARN, pero se replican por medio de un ADN intermediario usando la enzima transcriptasa inversa. Entre lo más característico que encontramos de ellos es:1. Causan cancer.2. Causantes del SIDA3. El genoma de los retrovirus puede integrarse específicamente en el genoma del hospedador gracias al ADN intermediario.CLASIFICACIÓN DE BALTIMOREEl virus del VIH es un virus ARN monocatenario retrotranscrito  (o virus ssRNA-RT)  perteneciente al grupo VI. Son virus de ARN cuyo genoma podría actuar como mensajero pero “in vivo” no lo hace. Poseen una transcriptasa inversa que de un genoma ARN transcribe una molécula de ADN, primero de una cadena y luego de dos. Posteriormente y usando los enzimas celulares se elabora un mensajero. Estos virus son capaces de alcanzar el núcleo de las células, se insertan a los cromosomas de las células que infectan, son los retrovirus. TAXONOMÍA Y CLASIFICACIÓNSe dividide en tres subfamilias. La primera, Oncovirinae, comprende los grupos: C, B y D; y un grupo sin nombre donde se encuentra el virus de la leucemia humana de células T (o linfotrópico): VLTH-I y VLTH-II. La segunda, Lentivirinae, comprende el grupo de los virus Visna y el VIH. Se parecen a los anteriores en lo que se refiere a su morfología, a la naturaleza de su genoma y a la posesión de una transcriptasa reversa, pero no transforman células. El nombre de la subfamilia alude al largo período de incubación. La tercera, Spumavirinae, comprende los virus “espumantes” los cuales se encuentran en cultivo de células de riñón que degeneran de forma espontánea y que provocan la formación de células gigantes vacuoladas y multinucleadas.GENERALIDADES MORFOLÓGICAS DE LOS RETROVIRUSPresentar una morfología común. Un genoma constituido por dos moléculas idénticas de ARN de polaridad positiva. Poseen una transcriptasa reversa. Son partículas envueltas. Tienen un diámetro entre 80 y 120 nm. Existen varias proteínas en la cubierta de los virus y siete proteínas internas típicas, cuatro estructurales y tres enzimáticas. Contienen nucleocápside enrollada dentro de una cubierta probablemente

icosaédrica. La envoltura contiene glicoproteínas víricas (espículas) adquirida al brotar por gemación a través de la membrana plasmática de la célula huésped. Las proteínas con actividad enzimática que se encuentran dentro de la partícula vírica son, la transcriptasa inversa, una endonucleasa de ADN (integrasa) y una proteasa. El virión también contiene moléculas específicas de ARNt celular que se usan en la replicación.Características del genomaEl genoma de los retrovirus contiene dos copias de ARN monocatenario de polaridad positiva. El extremo 5´ del ARN presenta cap y el extremo 3´ esta poliadenilado, de modo que el ARN es capaz de actuar directamente como ARNm, aunque no es usado como tal.• Todos contienen los siguientes genes y en el mismo orden:• gag: que codifica proteínas estructurales internas (antígeno especifico de grupo).• pol: que codifica la transcriptasa inversa, la proteasa y la integrasa.• env: que codifica las proteínas de la envoltura. REPLICACIÓNLa replicación inicia por la unión de las espículas a proteínas receptoras específicas de la superficie celular. La presencia de receptores para el virus es el determinante inicial del tropismo para tejidos y huéspedes concretos. Replicación del virus Empieza con la entrada a la célula, transcripción inversa, integración del ADNc (ADN copia) viral en el genoma hospedador, transcripción del ADN vírico originando la formación de ARNm víricos y el ARN de la progenie, encapsidación en el citoplasma, la gemación de viriones con envoltura, liberación de la célula. La transcriptasa inversa es una ADN polimerasa que convierte el ARN viral en una copia de ADN lineal y monocatenario en el citoplasma de la célula huésped. Esta enzima muestra tres actividades: 1) síntesis de ADN usando como molde el ARN viral, 2) síntesis de ADN usando como molde ADN, y 3) actividad de ribonucleasa H (degrada la cadena de ARN de un híbrido ARN:ADN).

La transcriptasa inversa necesita un cebador, que es un ARN de transferencia específico (ARNt) de origen celular. Usando el ARNt como cebador, se transcribe a ADN un centenar de nucleótidos cercanos al extremo 5´ del ARN viral, allí el proceso de transcripción se detiene Para copiar el resto del ARN viral (que representa la mayor parte), se emplea un mecanismo distinto. Primero se eliminan secuencias terminales redundantes del extremo 5´ de la molécula de ARN por medio de la ribonucleasa H. Esto conduce a la formación de un pequeño ADN monocatenario que es complementario al segmento de ARN que esta en el otro extremo del ARN vírico (3´). Este pequeño trozo de ADN híbrida luego el otro extremo de la molécula de ARN (3´) donde continua la copia de las secuencias del ARN vírico (“cambio de plantilla”), así se crea una cadena negativa de ADN. Estas LTRs contienen promotores transcripcionales y están relacionadas con el proceso de integración.La integración del genoma viral puede ocurrir en cualquier zona del ADN celular (que una vez integrado se denomina provirus) pasa a ser un elemento genético estable. Así, el provirus puede expresarse o permanecer en un estado latente y no expresarse. Si se activan los promotores en la LTR adecuada, se transcribe el ADN proviral integrado formándose transcriptos que pueden ser encapsidados en partículas víricas o pueden ser procesados y traducidos a proteínas vírales. Cuando las proteínas víricas se acumulan en suficiente cantidad, tiene lugar el ensamblaje de la nucleocápside que luego se mueven hacia la membrana citoplasmática para la constitución final de las partículas víricas con envoltura.

Patogenia de los retrovirusLa mayoría de los retrovirus afectan a un espectro de huéspedes y especies muy limitado. El espectro restringido de huéspedes y el tropismo tisular limitado han dificultado la consecución de sistemas celulares apropiados para su cultivo. La capacidad para integrarse en los cromosomas y permanecer allí, dificulta su detección, estudio y tratamiento. Los retrovirus han proporcionado un instrumento fundamental para la biología molecular y han permitido el análisis del crecimiento y la diferenciación de las células y de la oncogénesis a través del estudio de los oncogenes víricos.Aunque no todos los retrovirus causan cáncer, son muy comunes los retrovirus tumorales. Algunos conocidos virus tumorales causan sarcomas o leucemia aguda y poseen un alto potencial oncogénico. La infección con uno de estos virus puede originar transformación celular y la formación de tumores. Se cree que estos retrovirus poseen un gen transformante u oncogén que codifica una proteína responsable de la transformación celular. Este gen codifica una fosfoproteína que posee actividad de proteína quinasa, estas catalizan la fosforilación de proteínas, mecanismo que regula la actividad de las proteínas. En las células normales se han encontrado genes similares, los protooncogenes, lo que sugiere que estos genes son importantes en el crecimiento celular. Los retrovirus son capaces de incorporar esas secuencias normales, que luego se alteran o se expresan de modo anormal. En consecuencia, los retrovirus son agentes mediante los cuales tales genes se transfieren de célula a célula. Un retrovirus importante, el VIH causante del SIDA, es un retrovirus no tumoral.

VIH- VIRUS DE LA INMUNODEFICIENCIA HUMANASIDA sindrome de inmunodeficiencia adquiridad es una inmunodepresión progresiva que sin acciones terapéuticas y preventivas puede llegar a ser fatal. Puede presentarse desarrollo de infecciones oportunistas, neoplasias segundarias y manifestaciones neurologicas. El primer caso de SIDA fue descrito en Estados Unidos actualmente los pacientes infectados con VIH se concentra en los países pobres (95%) y se encuentra en aumento, estimándose unas 14.000 infecciones diarias a nivel mundial a fines del 2003 la cifra aproximada de personas infectadas por VIH es de 40 millones, siendo el África subsahariana la región más afectada, según la OMS La terapia antirretroviral disponible en los países industrializados, ha disminuido la progresión de la enfermedad, las muertes y la transmisión vertical; el número de nuevas infecciones se ha mantenido constante. Predomina la transmisión

sexual (71%) sobre la sanguínea(25,4%), seguida de la perinatal (3,6%). Existe además un porcentaje de casos en los que no se ha determinado la forma de transmisión. Existe un periodo de incubación desde la primoinfección por el virus y el desarrollo del SIDA, que varía en general desde 1 a 15 años. El virus VIH-1, es el más ampliamente estudiado y es el que está más distribuido a nivel mundial. Los casos de VIH/SIDA continúan diseminándose por todas las regiones del mundo en diferentes proporciones. El virus VIH-1, es el más ampliamente estudiado y es el que está más distribuido a nivel mundial. TRANSMISION DEL VIH Puede trabsmitirse por contacto sexual, inoculación parenteral, pasaje vertical madre e hijo. Situaciones que facilitan el intercambio de sangre o líquidos orgánico que contienen el virus o células infectadas por este. Grupos de alto riesgo de adquirir infección

Varones homosexuales o bisexuales Usuarios de drogas intravenosas

Usuario de drogas no intravenosas, inhaladas Hemofílicos Receptores de sangre y hemoderivados no

hemofílicosLa transmisión sexual es la principal forma de infección en el mundo, responsable de aproximadamente el 75% de todos los casos El virus se transmite de dos formas: 1) a través de las células de Langerhans (células dendríticas) de la mucosa y 2) por la inoculación directa en los vasos sanguíneos rotos por traumatismos TAXONOMIA Y CLASIFICACIÓN Es un virus perteneciente a la familia Retroviridae, se ubica en la subfamilia lentivirinae. En esta familia están también: el virus de inmunodeficiencia felina, el virus de inmunodeficiencia de los simios, el virus visna de las ovejas y el virus de la anemia infecciosa equina VIH-1 y VIH-2 poseen antígenos comunes existen pruebas especificas para detectarlos a ambos. VIH-1, tiene M, O (u outlier) y N (o no M/no O). El grupo M a su vez se divide en distintos subtipos que van de A-L. El grupo M es el responsable de la pandemia SIDA, mientras que el grupo O está restringido a unos pocos países del África occidental. VIH-2, se divide en cinco subtipos (A-E).MORFOLOGIA VIRAL Es un virión esférico de 100-200 nm de diámetro, contiene una nucleocápside electrondensa en forma de cono, rodeado de una bicapa lipídica que proviene de la membrana de la célula huésped. La proteína p24 es el antígeno más fácil de detectar y son los anticuerpos contra él, los que se utilizan para el diagnostico de infección por VIH por medio de ELISA. El núcleo del virus contiene: la proteína de la cápside, p24 (p26 en VIH-2); la proteína p7/p9 de la nucleocápside; dos copias de ARN; y tres enzimas virales (proteasa, transcriptasa inversa e integrasa).

GENOMA VIRAL Dos moléculas de ARN de cadena simple de 9400 pares de bases, unidas por enlaces no

covalentes. Los clásicos genes estructurales gag, pol, y env codifican proteínas precursoras que serán divididas luego por la proteasa en proteínas maduras.

El precursor gag es clivado en cuatro proteínas p17-18 para el VIH-1 y p16 para el VIH-2, una proteína mayor, parte de la capside, p24-25 en el VIH-1 y p26 en el VIH-2, nucleocápside p7

El gen pol la proteasa que cliva los productos de gag y pol; la transcriptasa reversa y la integrasa

El gen env, a las glicoproteínas de envoltura, que serán sintetizadas como un gran precursor que luego es clivado dejando una proteína transmembrana (gp41) El genoma del VIH contiene además otros genes: tat, rev, vif, nef, vpr y vpu, encargados de la regulación de la síntesis y de la organización de las partículas virales infecciosas:

La proteína Tat aumenta 1000 veces la transcripción de los genes virales, favorece la replicación del virus.

La proteína Rev tiene su efecto a nivel postranscripcional, regulando el transporte de ARNm desde el núcleo al citoplasma.

El gen vpu fundamental para la gemación del virus desde las células infectadas. Interfieren con la unión intracelular del precursor env con CD4.

La proteína Nef necesaria para el desarrollo de la infección progresiva, produciría la apoptosis de algunas células y una regulación en baja de las moléculas del complejo mayor de histocompatibilidad (MHC) de clase I en las células infectadas por el VIH.

El gen vpr facilita la infección de las células que no están en división (por ej.: macrófagos) y detiene el ciclo celular en fase G2, con esto incrementa al máximo la protección del virus.

El gen vif es importante para la creación de virus libre con capacidad de infectar otras células. SINTESIS E INTEGRACIÓN DEL ADN VIRAL Ingresa a la célula luego, las dos moléculas de ARN son transcriptas en forma reversa en una molécula lineal de ADN de doble cadena. La síntesis en el citoplasma el ADN viral es transportado al núcleo La cadena positiva de ADN tiene dos sitios de origen distintos para su síntesis El VIH tiene una segunda región en el centro de su genoma que se utiliza como sitio de origen adicional, este sitio mejora el proceso de transcripción reversa se integra a la cedula huésped, esta reacción es mediada por una integrasa codificada por un sector del ADN viral.

REGULACIÓN DE LA EXPRESIÓN GÉNICA La región LTR del VIH contiene promotores virales activos que para su transcripción requieren la presencia de activadores celulares. La proteína Tat es requerida para la transcripción y se une a una parte de la región R del LTR y junto con los activadores

transcripcionales de origen celular (SP-1, NF-κB) promueven el inicio de la transcripción y la elongación del transcripto aparecen en la infección aguda tres clases de transcriptos: moléculas de ARN que producen las proteínas gag y pol moléculas para las glicoproteínas de envoltura y moléculas para las proteínas reguladoras. El sistema Rev controla la exportación citoplasmática y estabilidad de estos transcriptos. VARIABILIDAD GENETICA La región más variable del genoma es la que codifica para las glicoproteínas de envoltura. La región mas conservada es la de los genes gag y pol. Las glicoproteínas de envoltura evaden el sistema inmune porque se originan en regiones hipervariables. Gracias a esta variabilidad el virus escapa a la respuesta inmune antiviral. MECANISMOS DE PATOGENICIDAD En los infectados con el VIH es usual observar distintas anormalidades inmunológicas severa linfopenia, principalmente de células T CD4 + reacciones de hipersensibilidad cutánea retardada disminuidas o ausentes perdida de la función citotóxica de las células natural killer (NK) función anormal de los monocitos, hipergammaglobulinemia policlonal La molécula CD4 sirve como receptor del VIH, el virus no solo infecta a los linfocitos T CD4 +, sino a otras células que también expresan este receptor, como monocitos de sangre periférica, precursores de células T de la medula ósea y el timo, y macrófagos tisulares reduce la capacidad funcional global de los linfocitos T periféricos y de las células presentadoras de antígeno, e inhibe la producción y maduración de los precursores de la medula. ENTRADA A LA CELULA El virus necesita de: la presencia de otro correceptor que son los denominados receptores para quemoquinas. receptor CD4. Las quemoquinas son péptidos pequeños, con función quimiotactica para las células que intervienen habitualmente en los mecanismos de defensa: neutrofilos, macrófagos, linfocitos. En presencia de un proceso inflamatorio, estas células son atraídas hacia el foco de infección, por medio de sustancias: las quemoquinas. Estas células presentan en su superficie receptores para quemoquinas, a su vez son correceptores para el VIH. Se inicia cuando una partícula viral completa encuentra una célula con receptor CD4. La glicoproteína gp120 se une fuertemente a este receptor para que la célula sea infectada por el VIH. Debe expresar un correceptor (quemoquinas) al que se unirá la gp41, produciendo entonces la fusión del virus y la célula. Existen dos tipos de correceptores, presentes en tipos distintos de células: CCR-5: se encuentra en monocitos y macrófagos CXCR-4: se encuentra en los linfocitos T

CICLO VIRAL Retrotranscripción: en el citoplasma celular la enzima transcriptasa inversa convierte en ARN viral en ADNc. Integración: el ADN viral así formado migra hacia el núcleo donde es integrado al ADN celular con la ayuda de la integrasa. Una vez incorporado el genoma celular el ADN viral pasa a llamarse provirus Transcripción: para la producción de nuevos virus se necesita de ARNm, sintetizado en el proceso de transcripción utilizando enzimas de origen celular. Los genes virales controlan este proceso a través de el gen tat. Traducción: el ARNm procesado en el núcleo es transportado al citoplasma, aquí el gen rev es critico, sin la proteína rev no existirían proteínas estructurales. En el citoplasma el ARNm, utilizando la maquinaria de síntesis proteica celular, sintetiza las largas cadenas de proteínas y enzimas virales Ensamblaje y brotación: las proteínas del core, las enzimas y el ARN se ubican debajo de la membrana celular, mientras que las proteínas de envoltura viral se agregan a la membrana celular. Esto da origen a formas virales inmaduras (no infecciosas aún) que surgen de la superficie celular adquiriendo una envoltura que incluye proteínas virales y celulares. Nuevas generaciones de partículas infectivas por gemación se acumulan partículas virales en el interior de la célula infectada, produciéndose la destrucción de ésta, liberándose al exterior esas partículas virales, la mayoría de las cuales son defectivas ya que carecen de la cubierta necesaria. EVENTOS DE LA INFECCIÓN Vida sexual permite la entrada del virus a través de las mucosas: orofaríngea, genital y anal. La efectividad de la transmisión es mayor si es por vía parenteral Las partículas virales que viajan en las secreciones vaginales o en el semen, atraviesan la barrera mucosa se encuentran en la mucosa o la submucosa con las CPA. Las células reconocen a la partícula viral como extraña la incorporan a su superficie por medio de fagocitosis para ser presentados a los linfocitos. El macrófago es incapaz de destruir a la partícula viral.

En un macrófago es posible encontrar innumerables partículas virales. La partícula viral puede encontrarse además con los linfocitos CD4+. el virus una vez atravesada la barrera mucosa puede: a) quedar dentro de un macrófago c) adherirse directamente a los linfocitos CD4+ y comenzar a multiplicarse en su interior b) ser presentado a los linfocitos CD4 por las CPA, las células foliculares dendríticas, se encuentran en los ganglios linfaticos regionales Estas tienen en su superficie numerosas proyecciones con receptores CD4a los que se unirán las partículas virales libres de la circulación, atrapando de esta manera innumerables virus. Estos son presentados por estas células a todos los linfocitos que estan circulando por la linfa o la sangre, pasan por dichos ganglios, siendo así infectados. Las partículas virales se diseminan por todo el organismo infectando varios órganos particularmente órganos linfoides como nódulos linfoides, bazo, amígdalas y adenoides. Si bien tiene una diseminación sistémica, el blanco fundamental del VIH es el sistema inmune y dentro de éste, los linfocitos CD4+. En la etapa temprana se puede detectar gran cantidad de partículas virales a nivel plasmático La carga viral, en esta etapa de la infección puede llegar a 10 millones o más de partículas por ml de plasma (10/ml). Estas partículas tienen una corta vida media libre en el plasma (aproximadamente unos 10-15 minutos). Los linfocitos CD4 que están produciendo virus tienen una vida media de 1-2 días La partícula viral, una vez liberada al plasma busca nuevas células con receptores CD4 para poder infectar continuar su ciclo de replicación viral fase aguda: las células CD4+ decrece en 20 a 40%, por muerte celular o por dejar la circulación. De dos a cuatro semanas las personas sufren síntomas similares a un gripe. De dos a tres meses se van generando una serie de respuestas por parte del sistema inmune del huésped, produciéndose de manera espontánea una drástica caída de la carga viral, sin que medie un tratamiento antiviral la carga viral cae, y no existen síntomas, la replicación viral continúa permanentemente. Se establece un equilibrio, por el cual habría una producción y destrucción de 10 billones de partículas virales por día, así como una producción y destrucción de 2 billones de linfocitos CD4 por día PERIODO DE ENFERMEDAD CLINICA Existen variaciones en el período de infección sin clínica de enfermedad. Distintos factores influyen en la progresión hacia la enfermedad edad, diferencias genéticas entre los individuos, la virulencia de las diferentes cepas y la coinfección con otros microorganismos. La existencia de mutaciones en los correceptores

puede influenciar el curso evolutivo hacia la enfermedad. Cuando el paciente alcanza el estadio clínico de SIDA, aparecen infecciones oportunistas características y neoplasias el curso de la enfermedad esta caracterizado por la hiperactivación del sistema inmune con consecuencias negativas. La activación crónica del sistema inmune en la enfermedad puede resultar en una estimulación masiva de las células B, perdiendo éstas la habilidad de producir anticuerpos contra otros patógenos. También lleva a la apoptosis y al aumento en la producción de citoquinas que no solo estimulan la replicación del VIH, sino que también tiene efectos perjudiciales.

RESPUESTA INMUNE La respuesta humoral contra las proteínas virales más importantes (Gag, Pol, Env) aparece entre tres semanas y tres meses luego de la exposición viral. Posee dos componentes: Componente celular, Componente humoral Componente celular

Respuesta de los linfocitos T CD8+ citotóxicos: al reconocen en la célula infectada la presencia de partículas virales unidas a moléculas del CMH de tipo I; estos liberan enzimas que destruyen la célula infectada.

Los linfocitos T CD8+: otro mecanismo es liberando quemoquinas que se unen a los receptores para quemoquinas presentes en las células, bloqueado la fusión de nuevas partículas virales a estas células.

Los linfocitos T CD4+ : reconocen las partículas virales presentadas en conjunto a moléculas MHC de tipo II, produciendo linfoquinas que se unen a sus receptores de quemoquinas bloqueando también la unión de nuevos virus a células Componente humoral

Es dada por los linfocitos B Reconocen la presencia de sustancias antigénicas y se activan

produciendo anticuerpos anti-VIH, monta una respuesta humoral, pero el virus, elabora partículas virales capaces de evadir la neutralización. Se da un ciclo de neutralización, y se producen anticuerpos que pueden ser específicos de tipo o pueden ser específicos de grupo

La producción de anticuerpos: puede detectarse de dos a ocho semanas después de la infección, luego de la declinación de la viremia inicial. La seroconversión se inicia con la respuesta IgM anti proteína Gag; la respuesta IgG se produce entre la primera semana y la 41. los primeros marcadores serológicos en ser evidenciados son IgG anti-p24 e IgG anti-gp120, seguido de IgG anti-gp41. Luego de la infección aguda por VIH sigue una fase de infección activa inaparente con una duración de entre 1 y 15 años, donde los pacientes están asintomáticos pero con una disminución lenta y progresiva de su sistema inmune. Después el sistema inmune, que hasta ese momento había sido capaz de equilibrar la producción y destrucción de las partículas virales, fracasa y ya no logra contener la replicación viral

La perdida progresiva de linfocitos T CD4+ (calculada entre 60 y 70 linfocitos CD4+ por mm por año), puede atribuirse a una variedad de mecanismos como, Muerte celular directa, Apoptosis, Formación de sincicios, Observadores inocentes, Daño a los precursores celulares y Anergia METODOS DE ESTUDIO Diagnóstico a personas que se sospechan pueden estar infectadas y requieren de atención médica, consejo y educación sanitaria respecto a su estado. También para la seguridad en las transfusiones, productos hemoderivados y donaciones de órganos. Y la aplicación de programas de vigilancia serológica de esta infección o en programas de investigación clínica, farmacológica, virológica e inmunológica. ENSAYOS SEROLOGICOS DE TAMIZAJE

• Enzimoinmunoanálisis (EIA). La detección de anticuerpos anti-VIH con técnicas de EIA es el método más empleado, hay distintos principios

en la detección de los anticuerpos (ELISA indirecto, competitivo, “sandwich” y captura).

• Aglutinación. Estas pruebas están basadas en la aglutinación de antígenos de VIH que previamente han sido fijados a partículas capaces de aglutinarse en presencia de suero que contenga anticuerpos anti-VIH.

• Pruebas de EIA de membrana (Dot-Blot). En estas pruebas los anticuerpos anti-VIH son detectados mediante un método inmunoenzimático. El antígeno, compuesto por proteínas recombinantes o péptidos sintéticos de uno o ambos virus, está fijado a tiras de nitrocelulosa.

• Pruebas fluorimétricas. Los antígenos específicos están ligados a micropartículas y el indicador de la reacción es un fluorocromo que actúa como sustrato. La fluorescencia emitida durante la reacción es medida por un fluorómetro PRUEBAS DE CONFIRMACIÓN Se utilizan para la confirmación de sueros positivos, pero en determinados casos pueden emplearse también para continuar el estudio en casos dudosos, dada su mayor sensibilidad en muchos casos. radioinmunoprecipitación (RIPA), inmunofluorescencia indirecta (IFI), inmunoelectrotransferencia o Western Blot (WB) Western Blot: Técnica de inmunoelectrotransferencia, permite una discriminación puntual de anticuerpos frente a las distintas proteínas del virus. Las tiras de nitrocelulosa contienen, generalmente, casi todas las proteínas estructurales del VIH y algunas proteínas precursoras de aquellas. Se revela la presencia de anticuerpos frente a las diferentes proteínas del virus mediante reacciones inmunoenzimáticas distintas. la aparición de bandas coloreadas de mayor o menor intensidad, en el lugar de la tira de nitrocelulosa en el que están situadas las proteínas del VIH contra las cuales existen anticuerpos en el suero problema. Existen distintos criterios de positividad para el Western Blot. El propuesto por la OMS resulta el más sensible cuando se manejan sueros de muy variada procedencia poblacional. Adoptando este criterio un suero es considerado positivo cuando presenta reactividad al menos frente a dos de los siguientes 3 antígenos virales: p24, gp120 y gp4l.

• Inmunofluorescencia indirecta la confirmación por esta técnica está basada en la demostración de anticuerpos frente a células infectadas por VIH, los resultados sólo pueden expresarse como positivos o negativos. Las células infectadas expresan gran cantidad de antígenos correspondientes a distintos momentos de la infección celular, por lo que esta técnica detecta todo tipo de anticuerpos anti-VIH.

• Técnica de radioinmunoprecipitación demostración de la existencia de anticuerpos

anti-VIH en el suero en estudio, que en presencia de proteínas vírales marcadas radioactivamente conduce a la formación de innunocomplejos. Los complejos proteína viral-anticuerpo específico son separados por técnicas electroforéticas según su peso molecular y se ponen en evidencia mediante la impresión del marcaje radioactivo en una placa fotográfica.

• Detección de Ag p24: Este antígeno puede detectarse en suero o plasma durante la fase aguda de la infección primaria por VIH y durante la fase SIDA. El antígeno p24 es detectable solamente en el 4% de los adultos asintomáticos. La detección de este antígeno puede utilizarse para el diagnóstico de infección por VIH en lactantes nacidas de madres VIH positivas.

• PCR: La amplificación genómica por reacción en cadena de la polimerasa, demuestra la existencia de parte del genoma viral a partir de muestras de sangre periférica.recién nacidos de madres infectadas por VIH (sensibilidad: 75 a 97%), demostración de infecciones por VIH-2 con serología no concluyente, detección de mutaciones específicas asociadas a la resistencia a los antivíricos.

• Aislamiento viral: el aislamiento del VIH sigue siendo hoy en día una técnica de referencia, su empleo queda restringido a laboratorios bien equipados. Supone el cultivo del virus a partir de muestras clínicas que contengan partículas virales libres o células infectadas. Requiere el cocultivo de linfocitos de sangre periférica del paciente con linfocitos de un donante no infectado, junto con la adición de IL-2 para favorecer el crecimiento de células

• Detección y cuantificación de ARN viral: Esto radica en que los recién nacidos presentan en su sangre hasta los seis meses de vida IgG maternos, por lo que los ensayos serológicos podrían arrojar falsos positivos. Por otra los títulos de IgM en esta población son sumamente bajos. Los ensayos de PCR de ADN proviral y de cultivo de células mononucleares de sangre periférica son los métodos más sensibles para la determinación de la infección por VIH, alcanzando un 50% durante el primer mes de vida y cerca del 100% en lactantes mayores de 6 meses. PREVENCION Y CONTROL Anualmente se destinan unos 500 millones de dólares a la investigación de vacunas eficaces contra el VIH, habiéndose evaluado desde 1987 hasta el presente unas 30 vacunas candidatas. Hoy en día existen dos de estas vacunas en ensayos de eficacia de fase III, una de ellas en Estados Unidos, basada en el subtipo (B) circulante en esa región. la otra, en evaluación en Tailandia, se basa en los subtipos que circulan en dicho país (B y E). Ambas vacunas estarían dirigidas contra la glicoproteína de envoltura gp120. No existe vacuna disponible para la

inmunización activa y al alcance de la población con riesgo de contagio por el VIH-1; probablemente requerirá aún varios años de estudios y en la actualidad la posibilidad real de obtener una vacuna efectiva parece todavía bastante alejada. En ausencia de una vacuna, la prevención de la infección por el VIH-1 debe basarse en evitar su transmisiónTRATAMIENTO ANTIRRETROVIRAL El tratamiento de la infección por el virus de la inmunodeficiencia humana se basa en una combinación de varias drogas se emplean dos inhibidores de la retrotranscriptasa análogos de nucleósidos (AZT, ddI o didanosina, lamivudina, entre otros) con un inhibidorde la proteasa (nelfinavir, saquinavir, indinavir), logrando una supresión impresionante en la replicación viral, tanto en nivel como en duración. diferentes causas que pueden motivar dicho cambio se encuentran

• Una mala respuesta virológica temprana a la terapéutica

• Un aumento significativo de la carga viral luego de un mínimo, no correlacionado a una causa corregible

• La disminución continúa del conteo de células T CD4+

• El deterioro clínico del paciente bajo tratamiento con un régimen estable PREVENCIÓN DE LA TRANSMISIÓN VERTICAL: EMBARAZODebe aconsejarse a aquellas mujeres infectadas por el VIH-1 que eviten el embarazo, ya que es posible la transmisión de la infección al feto en al menos el 10-30% de los casos. La administración de zidovudina a partir de las semanas 14-34 del embarazo y en el período del parto, y en el recién nacido durante las seis primeras semanas de vida, reduce la tasa de transmisión maternofetal a menos del 8% y se tolera muy bien. La combinación del tratamiento con AZT y cesárea ha disminuido la transmisión vertical del VIH-1 a menos del 2%.PROFILAXIS POSTEXPOSICIÓN Para el personal sanitario, el riesgo de infección es del 0,2-0,5% en caso de herida accidental con un objeto contaminado con sangre, y si sólo ha existido un contacto accidental con la piel y las mucosas intactas. Debe recomendarse el tratamiento triple con AZT o d4T, 3TC e indinavir o nelfinavir. El tratamiento debe instaurarse lo antes posible (menos de cuatro horas) y debe administrarse durante al menos cuatro semanas. PRECAUCIONES UNIVERSALESEs obligatorio la aplicación de precauciones universales el personal sanitario deberá utilizar métodos de barrera y adoptar precauciones para evitar la producción de heridas por agujas, bisturíes u otros instrumentos punzantes en el transcurso de su empleo o limpieza. El descarte de tales elementos debe realizarse en recipientes

de paredes rígidas a fin de evitar cortes y pinchaduras. ESTERILIZACIÓN DEL INSTRUMENTAL SANITARIOLos métodos habituales de esterilización y desinfección son adecuados para esterilizar el instrumental sanitario o efectuar una desinfección ambiental. Estos virus son rápidamente inactivados por detergentes y desinfectantes efectivos contra otros virus envueltos. Se recomienda el uso de hipoclorito de sodio en una concentración de 5.000 ppm para superficies contaminadas, emplear concentraciones más elevadas cuando se trabaje con cultivos virales. BIBLIOGRAFÍA

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