Universidad autónoma de baja california

Facultad de ingeniería

Bioingeniería

Biología molecular

Ma. Fernando Solís Domínguez

Reporte de Práctica #1 “Uso de Micropipetas”

Liza Ma. Valdivia Cazares

1110320

21 de febrero de 2014

Introducción.

Uno de los instrumentos más utilizados en el laboratorio de biología molecular son

las micropipetas de uso básico, las cuales permiten el manejo seguro y la

medición de pequeñas cantidades de soluciones, existen de diferentes volúmenes

de 0.1µL hasta 1mL, las micropipetas pueden ser utilizadas para contener o

depositar volúmenes. Esto es de suma importancia en los protocolos en los que se

requiere exactitud en cuanto a cantidades muy pequeñas de forma rápida y

precisa.

La micropipeta más comúnmente usada en los laboratorios fue introducida por la

compañía Eppendorf y este nombre se adoptó de forma genérica para estos

dispositivos, aunque hoy en día existe una gran cantidad de compañías que

ofrecen modelos similares que operan bajo un mismo principio de pistones.

Existen 2 tipos de mecanismos:

- Pipetas de desplazamiento de aire o neumáticas: es debido a que existe un

volumen de aire entre la cabeza del pistón y el líquido en el cilindro (este es el tipo

más corriente).

- Pipetas de desplazamiento positivo: porque el pistón se encuentra en

contacto directo con el líquido.

Y también están las de regulación del volumen

- Pipetas de volumen fijo: Solamente pueden dispensar un volumen

determinado.

- Pipetas de volumen variable: Se puede ajustar el volumen a dispensar.

Por lo tanto, es aconsejable consultar las instrucciones del fabricante sobre el

correcto uso de cada modelo. Todas las micropipetas utilizan puntas plásticas

desechables que se ajustan al extremo inferior de la misma. En estas puntas de

plástico es donde se deposita el líquido a medir.

Las compañías que producen micropipetas continuamente las ajustan, calibran y

componen, sin embargo, una revisión cuidadosa de la exactitud y reproducibilidad

de la toma y deposición del volumen debe hacerse para asegurar su correcto

funcionamiento.

Imagen 1: en la ilustración se muestran las partes básicas de una micropipeta.

Objetivo.

Familiarice con el uso apropiado de las micropipetas debido a su uso rutinario

dentro del laboratorio de Biología Molecular.

Uso adecuado de las micropipetas:

Pasos:

1. Oprimir el botón pulsador con el dedo pulgar, hasta el primer tope y sin

soltarlo introducir verticalmente la pipeta, hasta que la punta se sumerja de 2 a 5

mm dentro del líquido.

2. Liberar lentamente la presión sobre el botón. Después de 2–3 segundos

retirar, siempre verticalmente, la pipeta del líquido deslizando la punta contra la

pared del recipiente.

3. Apoyando la punta contra la pared del recipiente donde se quiere colocar el

líquido, presionar lentamente el botón pulsador hasta el primer tope. Después de

un segundo, y sin soltar el botón pulsador, terminar de vaciar la pipeta

presionando hasta el segundo tope.

4. Retirar la pipeta deslizando la punta contra la pared del recipiente.

Imagen 2: se muestra el uso correcto de una micro pipeta.

Material, Reactivos y Equipo:

- Micropipetas de 1000 μl, 200 μl y 20 μl Balanza analítica.

- Agua Tubos Eppendorf.

- Gradilla para tubos Eppendorf Charolilla plástica para pesar.

- Puntas para Micropipetas Marcadores indelebles.

- Guantes de látex.

Metodología:

1. Se marcó con un plumón los micro tubos, 18 en total, se pesaron en la

balanza analítica y registro su peso.

2. Se colocaron en una gradilla para micro tubos ya marcados y pesados, con

la micropipeta indicada, según el volumen deseado, añade sucesivamente en

los tubos 5, 10, 20, 100, 500 y 1000 μL de agua.

3. Para asegurarse que el volumen que se introdujo a cada tubo fue el

adecuado, se pesaron los tubos conteniendo los diferentes volúmenes de agua

y se registró su peso.

4. Se realizó una tabla donde indica los pesos que obtenidos tanto de los tubos vacíos como de los tubos con los diferentes volúmenes de agua.

Imagen 3: se muestran los micro tubos con la

numeración correspondiente.

Imagen 4: los micro tubos ya con el líquido en su interior.

Imagen 5: la imagen muestra un micro tubo siendo pesado.

Resultados:

Tubos Eppendorf

volumen numero de tubo

vacíos (gr)

con agua (gr)

liquido (gr)

promedio desviación estándar

5µL 1 1.0206 1.0212 0.0006 0.000633 4.72x10-9

2 1.0179 1.0186 0.0007

3 0.9939 0.9945 0.0006

volumen numero de tubo

vacíos (gr)

con agua (gr)

liquido (gr)

promedio desviación estándar

10µ 4 1.0185 1.0197 0.0012

5 0.9985 0.9999 0.0014 0.001266 9.43x10-5

6 0.9425 0.9437 0.0012

volumen numero de tubo

vacíos (gr)

con agua (gr)

liquido (gr)

promedio desviación estándar

20µL 7 0.991 0.993 0.002

8 0.951 0.9535 0.0025 0.002266 2.06x10-4

9 0.9465 0.9488 0.0023

volumen numero de tubo

vacíos (gr)

con agua (gr)

liquido (gr)

promedio desviación estándar

100µL 10 0.9995 1.1002 0.1007

11 1.0206 1.1206 0.1 0.101233 1.28x10-3

12 0.9555 1.0585

0.103

volumen numero de tubo

vacíos (gr)

con agua (gr)

liquido (gr)

promedio desviación estándar

500µL 13 0.9903 1.4925 0.5022

14 0.9426 1.4679 0.5253 0.518266 1.14x10-2

15 0.9524 1.4797 0.5273

volumen numero de tubo

vacíos (gr)

con agua (gr)

liquido (gr)

promedio desviación estándar

1000µL 16 0.9464 1.9664 1.02

17 0.9484 1.9471 0.9987 1.005 1.07x10-2

18 0.9373 1.9336 0.9963

Tabla 1: en la siguiente tabla se muestra el orden de cómo se fueron midiendo los tubos, además de los pesos solicitados en la práctica, como peso de los tubos vacíos, con agua y la resta entre ambos, que es el peso del líquido. También se muestra el promedio de las muestras y la desviación estándar.

Discusión:

Por los resultados obtenidos, se puede examinar la exactitud y precisión de

las micro pipetas, además que depende mucho del manejo del operador, ya

que si no se usan adecuadamente el volumen introducido en los micro

tubos, no será el correcto por lo cual se obtendrán malos resultados. A

demás entre mis compañeros existieron ciertas dudas en cuento a las

medidas para obtener el volumen correcto que se solicitaba en la práctica,

además observe que una de las balanzas analíticas utilizadas no estaba

correctamente balanceada, por lo que se pudo tener errores en los

resultados debido a eso.

Conclusión.

El uso de una micropipeta es prácticamente sencillo, teniendo en cuenta l

manera adecuada de su funcionamiento y uso, además de que se debe de

tener en cuenta el volumen requerido para utilizar la micropipeta correcta,

además de ser instrumentos delicados ya que no se debe de sobrepasar su

volumen ya que se puede dañar el mecanismo de pistones de las

micropipetas, en cuanto a los volúmenes muy pequeños existieron en su

momento dudas, ya que prácticamente es una pequeña gota de agua, pero

al pesarlo se notó que era el volumen correcto o en cuento a precisión era

bastante cercano, ya que cuando se buscaba un volumen de 5µL se

obtuvieron valores bastante cercanos.

Cuestionario.

a) Qué es una micropipeta?

Es un instrumento básico de laboratorio de biología molecular, las

cuales permiten el manejo seguro y la medición de pequeñas cantidades

de soluciones, existen de diferentes volúmenes de 0.1µL hasta 1mL.

b) Para que se utilizan las micropipetas en el laboratorio?

Por su manejo sencillo y rápido, además de que permite manipular

volúmenes muy pequeños con una precisión elevada.

c) Realiza un esquema de una micropipeta e indica las partes que la

componen

d) Si tuvieras que pipetear un ácido. Cuál es el procedimiento para hacer

esta operación?

El siguiente esquema muestra la forma correcta de pipetear, y en caso

de los ácidos se lleva acabo el mimo procedimiento, solo se debe de

tener en cuenta que al momento de terminar el procedimiento, de debe

desmontar la punta de silicona de la micropipeta y enjuagarla con agua

destilada, dejar secar, armar y comprobar su funcionamiento.

e) Afecta el volumen a pipetear el que la muestra este a baja o alta

temperatura? Y por qué? Los líquidos a diferentes temperaturas, sus

densidades cambien por lo que si afecta la temperatura al momento de

pipetear.

f) Consideras sabias usar adecuadamente las micropipetas antes de esta

práctica de laboratorio?

Pensaba que las manejaba de manera adecuada, pero al momento de ir

investigando más, y al realizar la practica me di cuenta de que se necesita

de mucha técnica para su uso correcto y para obtener el volumen deseado.

Referencias.

-J. M. Becker, G. A. Caldwell, E. A. Zachgo. Biotechnology. A Laboratory

Course. Academic Press, Inc. USA., 1990.

-Facultad de Medicina UNAM, Departamento de Bioquímica. Bioquímica y

Biología Molecular. Objetivos del curso y manual de prácticas de

laboratorio. Mc Graw-Hill

Interamericana Editores, México, 2000.

http://www4.ujaen.es/~pedrajas/Micropipetas.swf

http://www.cultek.com/aplicaciones.asp?

p=Aplicacion_Manejo_Liquidos&opc=tecnicas&idap=53

http://ocw.uv.es/ocw-formacio-permanent/11.Pipetasautomaticas.pdf