reaccion de widal
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SALMONELLA
OBJETIVOS
Conocer el fundamento de la reacción de Widal. Realizar la prueba de Widal. Identificar los diferentes anticuerpos presentes en el suero. Hallar el título de anticuerpos presentes en el suero. Interpretar los resultados y títulos encontrados.
SALMONELLA
A diferencia de otros miembros de la familia Enterobacteriaceae, Salmonella no son habitantes normales del intestino humano (excepto en portadores después de la infección).
Causan enfermedad diarreica, que puede ser grave. Se trasmiten desde los animales y los productos de estos hacia el hombre, en el cual producen enteritis, infección general y fiebre intestinal.
Son bacilos gramnegativos, móviles, no esporulados. Todos excepto S. typhi, carecen de cápsula. Capaces de respiración aerobia y anaerobia.
SALMONELLA
Sus antígenos son: Los antígenos O, están constituidos por los polisacáridos de la
pared celular. Flagela H Capsular Vi (virulencia).
IDENTIFICACION DE LABORATORIO
Existe una serie de técnicas utilizadas en microbiología distintas de las técnicas clásicas de cultivo e identificación.
El diagnóstico de una infección por Salmonella se realiza aislando este microorganismo mediante cultivos. Su aislamiento a partir de sangre, orina y heces indica el diagnóstico.
Toleran la bilis. No delicados. Oxidasa negativa. No fermentan la lactosa. Producen ácido y gas a partir de la
glucosa (excepto S. typhi, que es anaerogénico). La identificación final de las cepas aisladas se basa en las
características bioquímicas y las pruebas de aglutinación con antisueros monoespecíficos, estas pruebas constituyen el método de diagnóstico serológico más empleado.
IDENTIFICACION DE LABORATORIO
Sobreviven a la congelación en el agua durante periodos prolongados. son resistentes a ciertos productos químicos (verde brillante, desoxicolato)que inhiben a otras bacterias intestinales, por lo que son de utilidad su inclusión en los medios con la finalidad de aislar salmonellas.
Medios de cultivo selectivos para el aislamiento de Salmonella: Agar Desoxicolato Citrato, Salmonella Shigella, Hektoen Entérico, Xilosa Lisina Desoxicolato, Sulfito Bismuto.
La serotipificación y la tipación con fagos es útil para investigar los brotes epidémicos.
Agar Desoxicolato Citrato ADC
El medio contiene 3 veces mayor cantidad de sales biliares que el agar Mac Conkey, es muy útil para seleccionar especies de Salmonella en muestras abundantemente contaminadas con bacilos coliformes u organismos grampositivos.Los citratos sódico y férrico retardan el desarrollo de Escherichia. Coli.La lactosa es el único hidrato de carbono.El rojo neutro detecta la producción de ácido.
Las colonias de E. coli son pequeñas y rojo intenso´.Los no fermentadores de lactosa, forman colonias grandes incoloras. Salmonella, Shigella, Proteus.
Agar Salmonella Shigella
El agar SS es un medio altamente selectivo, que inhibe el desarrollo de la mayoría de los coliformes y permite el crecimiento de Salmonella y Shigella.La alta concentración de sales biliares y citrato de sodio inhibe a todas las bacterias Grampositivas y muchas Gramnegativas, incluyendo a los coliformes.La lactosa es el único carbohidrato y el rojo neutro detecta la producción de ácido.El tiosulfato de sodio es una fuente de S, permitiendo la detección del H2S por el precipitado negro formado con el citrato férrico.Colonias incoloras, son lactosa (-) y H2S (-), Salmonella y Shigella.Las Colonias lactosa (+) se colorean de rojo, Escherichia coli.Colonias incoloras con centro negro, son lactosa (-) y H2S (+), Proteus, Salmonella.
Agar Hektoen Entérico H.E.
La alta concentración de sales biliares inhibe el desarrollo de todas las bacterias Grampositivas y retarda el desarrollo de muchas cepas de coliformes.
La fucsina ácida reacciona con el azul de timol, virando al amarillo al bajar el pH del medio por acción de los ácidos que se pueden producir a partir de tres hidratos de carbono (Lactosa, Sacarosa y Salicina).
El tiosulfato de sodio es una fuente de S y la producción de H2S se detecta por el citrato férrico.
Lactosa (+) forman colonias color naranja brillante a rosa salmón. Escherichia coli.
Lactosa (-) muestran colonias semitranslúcidas de color verde azulado
Colonias negras, productoras de H2S. Salmonella.
Agar Sulfito Bismuto S.B.
El agar SB es altamente selectivo para Salmonella typhi y es uno de los medios más sensibles para detectar H2S producido por este organismo.
Este medio contiene: glucosa en la fórmula: la fermentación de glucosa produce reducción del sulfito, con formación de sulfuro de hierro y colonias negras.
El metal pesado bismuto y el verde brillante son inhibidores del desarrollo de todas las bacterias Grampositivas y de la mayoría de las Gramnegativas, excepto la Salmonella.
Las colonias de Salmonella typhi son negras con brillo metálico. Las colonias de Salmonella enteritidis forman colonias negras y sin brillo. Las colonias de Salmonella paratyphi forman colonias verdosas.
IDENTIFICACION DE LABORATORIO
La detección de anticuerpos circulantes (prueba de Widal) puede ayudar en el diagnóstico de la fiebre entérica.
Es importante el estadio de la enfermedad para valorar el significado de un título elevado de aglutininas. Los bacilos tíficos pueden aislarse en la sangre, las heces y la orina, antes que la prueba de aglutinación de una reacción positiva. A medida que aumenta el título de aglutininas, disminuye el número de cultivos positivos.
Las reacciones de aglutinación tienen por finalidad demostrar la presencia de anticuerpos en el suero del enfermo a partir de la primera semana de la enfermedad.
La demostración de anticuerpos en el suero contra las especies de Salmonella, resulta útil para el diagnóstico de las formas tifoideas y puede constituir el único resultado positivo de laboratorio, si los métodos de cultivo fallan.
REACCION DE WIDAL
FUNDAMENTO Se trata de una reacción de aglutinación, donde los anticuerpos actúan
sobre los antígenos constituidos por bacilos muertos. Los anticuerpos se denominan aglutininas y los antígenos bacilares
aglutinógenos. La reacción de Widal es un método serológico que se utiliza
frecuentemente para el diagnóstico de la fiebre tifoidea, de las fiebres intestinales y de la fiebre ondulante.
La reacción mide el título del suero para suspensiones de gérmenes conocidos.
La reacción de Widal puede realizarse en placa de vidrio (microscópica) o en tubos (macroscópica).
REACCION DE WIDAL
INTERPRETACION DE RESULTADOS La reacción de Widal se considera positiva cuando la aglutinación se
observa en una dilución 1/80 o mayor, lo que indicaría infección tifoidea, siempre que el paciente no haya recibido vacunas antitíficas. La reacción negativa no excluye el diagnóstico. Por lo común la aparición de las aglutininas específicas ocurre entre el 6 y 8 día de evolución de la enfermedad y así el título aglutinante alcanza la mayor intensidad al llegar al vigésimo día, comenzando luego el desarrollo paulatino. En algunos casos, la persistencia de un título aglutinante elevado se prolonga durante un lapso muy grande. Títulos pequeños de aglutinación que pueden llegar hasta 1/40 se observan en otras infecciones y en la tuberculosis.
REACCION DE WIDAL
INTERPRETACION DE RESULTADOS La reacción de Widal es inútil para efectuar el diagnóstico temprano de
la fiebre tifoidea, puesto que la positividad no se obtienen antes de los 4 a 8 días de enfermedad. Por eso se aconseja recurrir en principio al hemocultivo o urocultivo. Cuando transcurre cierto tiempo el hemocultivo o urocultivo dejan de ser adecuados, y aumenta la importancia de la reacción de Widal.
La vacunación antitífica puede ser responsable de reacciones positivas durante varios años.
Pueden observarse reacciones inespecíficas con antígeno de Salmonella O grupo D en suero de pacientes con influenza. También se encontraron reacciones inespecíficas en pacientes con enfermedad hepática crónica activa y consumidores de narcóticos.
REACCION DE WIDAL
INTERPRETACION DE RESULTADOS Los anticuerpos H aparecen hacia el 10-12 día y se elevan a cifras muy
superiores (1/160). Después de la curación, disminuyen lentamente y persisten durante meses y años, por lo que pueden encontrarse títulos altos en los vacunados o en antiguos tifoideos con enfermedades interecurrentes.
Los anticuerpos O aparecen hacia el 8 día, su tasa se eleva progresivamente para alcanzar cifras del orden de 1/320 en el período de estado. Después de la curación, disminuyen rápidamente y desaparecen en el curso de algunas semanas. Las aglutininas O, en cambio, tienen gran valor a títulos bajos.
La presencia de una tasa significativa de anticuerpos O, tiene mucho más valor para el diagnóstico de una infección actual o reciente que la presencia de anticuerpo H, que pueden no ser más que la prueba de una infección antigua.
REACCION DE WIDAL
CURVA DE EVOLUCIÓN DE LAS TASA DE ANTICUERPOS pg 130
REACCION DE WIDAL
PREPARACION DEL ANTIGENO
1. ANTIGENOS FLAGELARES (H)
Se siembra en frasco con caldo una cepa activa y móvil de Salmonella typhi, incubando durante 24 horas a 37 C. Luego se pasan unas décimas de ml del cultivo a tubos inclinados o frascos con agar, continuando la incubación a 37 C de 18 a 24 horas. El cultivo desarrollado se lava con 5 a 10 ml de solución salina estéril formolada (1.4% de formol). Se agita y se coloca en refrigerador a 6-8 C. Se inspeccionan a diario los cultivos para cerciorarse de la esterilidad y se preparan diluciones de la suspensión que contengan 1,000 millones de microorganismos por ml, conservándose en frascos estériles, oscuros y refrigerados.
REACCION DE WIDAL
PREPARACION DEL ANTIGENO
2. ANTIGENOS SOMATICOS (O)
Se procede igual pero partiendo de cepas inmóviles, suspendiéndose los microorganismos en solución salina fenolada (0.5% de fenol). Después de agregar la mitad de volumen de alcohol absoluto se incuba a 37 C, 18 a 24 horas, comprobándose luego la esterilidad del medio. Se lleva la concentración a 1,000 millones de gérmenes por ml con una concentración alcohólica entre 2.5 y 4%.
REACCION DE WIDAL
PROCEDIMIENTO1. MUESTRA Suero limpido, no debe inactivarse ni calentarse ya que los anticuerpos son
termolábiles.
2. REACTIVOS Antígenos Febriles Salmonella, suspensión de antígenos bacterianos. Antígenos Paratyphoid A (Salmonella antígeno flagelar a). Antígenos Paratyphoid B (Salmonella antígeno flagelar b). Antígenos Typhoid H (Salmonella antígeno flagelar c) Antígenos Typhoid O (Salmonella antígeno somático d). 3. MATERIAL Placa de vidrio Micropipetas automáticas Reloj Fuente de luz
REACCION DE WIDAL
4. METODO DE AGLUTINACION EN PLACA
En una placa de vidrio, colocar en cada pocito 40ul de suero y agregar una gota de suspensión de antígeno, mezclar y agitar la placa en forma circular durante 3 minutos.
Observar la presencia o ausencia de aglutinación utilizando una fuente de luz.
Tífico H Tífico O Paratífico A Paratífico B
Antígenos 1 gota 1 gota 1 gota 1 gota
Suero 40 ul 40 ul 40 ul 40 ul
REACCION DE WIDAL
4.1. TITULACION Empleando micropipetas apropiadas colocar en cada pocito 80ul, 40ul, 20ul,
10ul y 5 ul de suero. Colocar 1 gota de antígeno sobre cada gota de suero. Mezclar el suero y el antígeno utilizando una varilla. Agitar la placa durante 3 minutos en forma circular. Observar la aglutinación utilizando una fuente de luz. Los grados de aglutinación se interpretan de acuerdo a la siguiente escala:
Aglutinan 100% 4+
Aglutinan el 75% 3+
Aglutinan el 50% 2+
Aglutinan el 25% 1+
Negativo, no aparece aglutinación.
REACCION DE WIDAL
4.1. TITULACION Las diluciones del suero en la titulación en placa se muestra a
continuación.
Volumen de suero Título
80 ul 1/20
40 ul 1/40
20 ul 1/80
10 ul 1/160
5 ul 1/320
REACCION DE WIDALVALORACION DE RESULTADOS
En un tratamiento precoz con cloramefenicol puede, en algunos casos, frenar o impedir la aparición de anticuerpos O. No se encontrarán más que las aglutininas H aisladas.
En el curso de una fiebre tifoidea, la presencia de anticuerpos O y cifras muy débiles de anticuepos Paratyphi A y B. Esto se debe a que estos tres gérmenes tienen en común un factor de su antígeno somático, el responsable de estas aglutinaciones cruzadas.
Sí un sujeto vacunado tuviera, a pesar de la vacunación, una fiebre tifo-paratífica, se hallarían en el serodiagnóstico, además de los anticuerpos H, reflejo de la vacunación, aglutinina O del gérmen infectante, mientras que el título de las aglutininas H correspondientes se elevaría.
Resultados falso positivos se evidencian: Curso de paludismo, Tifus exantemático, Lupus eritematoso, Yersinia pseudotuberculosis, algunas levaduras.
Las diluciones del suero en la titulación en placa se muestra a continuación.
Volumen de suero Título
80 ul 1/20
40 ul 1/40
20 ul 1/80
10 ul 1/160
5 ul 1/320
ENFERMEDADES
La Salmonella no es un habitante normal del intestino humano (excepto en portadores después de la infección). Se trasmiten desde los animales y los productos de estos hacia el hombre, en el cual producen enteritis, infección general y fiebre intestinal.
La enfermedad diarreica es la manifestación más común de infección por especies de Salmonella distintas de S. Typhi y S. Paratyphi. Estas últimas especies invaden el cuerpo desde el tracto gastrointestinal para causar enfermedad sistémica: tifoidea y paratifoidea (fiebres entéricas).
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ENFERMEDADES LA ENTEROCOLITIS Se caracteriza por una invasión en el tejido epitelial y subepitelial de los
intestinos delgados y grueso. Las cepas que no invaden no causan enfermedad. Los microorganismos penetran a través y entre las células mucosas de la lámina propia, causando inflamación y diarrea.
La diarrea se produce como consecuencia de la invasión por Salmonellas de las células epiteliales en la porción terminal del intestino delgado. Las bacterias emigran hasta la lámina propia de la región ileocecal, donde se multiplican estimula una respuesta inflamatoria que confirma la infección al tracto gastrointestinal y media la liberación de prostaglandinas. Las prostaglandinas a su vez activan el AMP cíclico y la secreción de líquidos, lo que da lugar a diarrea.
ENFERMEDADES LA ENTEROCOLITIS Al contrario de la enterocolitis por Shigella, en donde la dosis infectantes es
muy pequeña (100microorganismos), la dosis por Salmonella es mucho mayor (100,000 microorganismos). El ácido gástrico es una defensa importante del huésped; la gastrectomía o el uso de antiácidos abate la dosis infectante de modo significativo.
DATOS CLINICOS La S. Typhimurium es la causa más común de enterocolitis. Después de un período de incubación de 6 a 48 horas, los síntomas
comienzan con náuseas y vómitos, que luego progresan a dolor abdominal y diarrea, que puede variar de leve a grave, con o sin sangre.
DIAGNOSTICO DE LABORATORIO El microorganismo se aísla con mayor facilidad de una muestra de heces.
La Gastroenteritis es la Manifestacion más común de la Infeccion por Salmonella
Ingestión de Salmonella enteritidis
Se adhiere a las células epiteliales en la porción terminal del intestino delgado
La bacteria penetra en las células y emigra a la lámina propia de la región ileocecal
Se multiplica en los folículos linfoides, causando hiperplasia e hipertrofia reticuloendoteliales
Los leucocitos polimorfonucleares confinan la infección al tracto gastrointestinal
La respuesta inflamatoria media también la liberación de prostaglandinas
Estimula la producción de AMPc y la secreción activa de líquido
DIARREA
ENFERMEDADES EN LA TIFOIDEAY OTRAS FIEBRES ENTERICAS La infección comienza en el intestino delgado, pero hay pocos síntomas
gastrointestinales. Los microorganismos entran a los fagocitos mononucleares de las Placas de Peyer, se multiplican y luego se propagan a fagocitos hepáticos, de vesícula biliar y esplénicos. De este modo se produce bacteriemia, que acompaña al comienzo de la fiebre y a los otros síntomas, quizá debida a una endotoxina.
La supervivencia y proliferación del microorganismoen fagocitos es una carácterística sorprendente de esta enfermedad, así como su predilección por invadir la vesícula biliar, hecho que puede conducir al establecimiento del estado de portador y a la excreción de bacterias por heces durante largos períodos.
ENFERMEDADES EN LA TIFOIDEAY OTRAS FIEBRES ENTERICAS DATOS CLÍNICOS La fiebre tifoide es causada por S. Typhi, y en la fiebre entérica por S. Paratyphi A
y B, el comienzo de la enfermedad es lento, predominando fiebre y estreñimiento en lugar de vómitos y diarrea. Después de la primera semana, conforme la bacteriemia se vuelve sostenida ocurren fiebre alta, delirio, abdomen sensible y esplenomegalia. Las manchas rosáceas, es decir, paulas rosa en el abdomen, se relacionan con la fiebre tifoidea, pero sólo rara vez aparecen. En la tercera semana, la enfermedad comienza a resolverse, pero pueden producirse complicaciones graves como hemorragia o perforación intestinal. Casí 3% de los pacientes con fiebre tifoidea se vuelven portadores crónicos. Este índice es más elevado en mujeres que han padecido enfermedad biliar.
DIAGNOSTICO DE LABORATORIO Un hemocultivo es el procedimiento que tiene mayor probabilidad de revelar al
microorganismo durante las dos primeras semanas de la enfermedad.
ENFERMEDADES LA SEPTICEMIA Se produce sólo en alrededor de 5 a 10% de las salmonelosis y se presenta en
una de dos situaciones: en pacientes con una enfermedad crónica subyacente como anemia por células falciformes, cáncer o en niños con enterocolitis.
El curso séptico es más indolente que el desarrollado por muchos otros bacilos gramnegativos. La bacteriemia siembra en numerosos órganos, con osteomielitis, neumonía y meningitis como las secuelas más comunes. Los tejidos con lesiones previas, como infartos u aneurismas, son a menudo sitios de ábscesos metastásicos.
DATOS CLINICOS La causa más frecuente es producida por la S. Choleraesuis. Los síntomas
empiezan con fiebre y enterocolitis ligera o sin ella, y luego prosiguen a síntomas focales relacionados con el órgano afectado, a menudo huesos, pulmón o meninges.
Enfermedades Clínicas producidas por Salmonella
Fiebres intestinales Septicemias Gastroenteritis
Período de incubación 7 a 20 días Variable 8 - 48 horas
Iniciación Insidiosa Súbita Súbita
Fiebre Gradual, después una “meseta”alta con estado “tifoideo”
Ascenso rápido, despuéstemperatura en agujas“séptica”
Generalmente baja
Duración de la enfermedad Varias semanas Variable 2 a 5 días
Síntomas gastrointestinales A menudo constipación temprana;más tarde, diarrea sanguinolenta
A menudo no hay Náuseas, vómitos,diarrea la comienzo
Hemocultivo Positivo durante la primera ysegunda semana de la enfermedad
Positivo durante la fiebre alta Negativo
Coprocultivo Positivo de la segunda semana enadelante; negativo al principio dela enfermedad
Pocas veces es positivo Después del comienzo,rápidamente positivo
CURSO DE LA FIEBRE TIFOIDEA
Frecuencias relativas con que son positivos los cultivos de sangre, orina, heces y pruebas de aglutinación durante
el curso de la fiebre tifoidea. Pg 128
TRANSMISION
Diseminación en animales; se encuentran en la cadena de alimentos (especialmente en pollos, huevos, carne, leche y crema).
Se adquieren por ingestión de alimentos contaminados o de persona a persona (por vía fecal-oral) S. typhi sólo es patógeno para el hombre.
Diseminación por vía fecal-oral, habitualmente a través de agua o alimentos contaminados. Los portadores son una fuente importante de infección.
Ciclo de Transmisión de Salmonellas entre los Animales y el Hombre
Alimentos de origen animal
“comida” de animales
domésticos
efluente
Alimentos humanos
excretas
HOMBRE
HOMBRE
Animales salvajes
Taxonomía de las Salmonellas
La clasificación de Ewing limita el género a sólo tres especies.
La clasificación de Kauffman reconoce cada salmonella serológicamente distinta. Estas especies se disponen después en grupos. Son alrededor de 1500 serotipos, nombrados por lo general por la ciudad en que se aislaron.
Las demás distinciones serológicas se reconocen como subtipos.
CLASIFICACION DE EWING
Tres especies:
Salmonella cholerae-suis (un serotipo)
Salmonella typhi (un serotipo)
Salmonella enteritidis (>2000 serotipos)
CLASIFICACION DE KAUFFMAN-WHITE
Antígeno flagelar (H)Grupo Nombre
Antígeno somático(O) Fase I Fase II
A S. paratyphi A 1, 2, 12 a -
BS. paratyphi BS. typhimurium
1, 4, 5, 121, 4, 5, 12
bi
1, 21, 2
C1S. paratyphi CS. cholerae-suisS. virchow
6, 7, Vi6, 76, 7
ccr
1, 51, 51, 2
DS. typhiS. enteritidis
9, 12, Vi1, 9, 12
dg. m
--
VARIACIÓN
Los microorganismos pueden perder los antígenos H y convertirse en no mótiles.
La pérdida del antígeno O se acompaña de un cambio en las colonias, de lisa a rugosas.
El antígeno Vi se puede perder en parte o por completo. también se puede adquirirse o perderse los antígenos en el proceso de transducción.
INMUNIDAD
Las infecciones por S. typhi y S. paratyphi suelen conferir cierto grado de inmunidad.
La reinfección a menudo es más leve que la primer infección.
Los anticuerpos circulantes contra los antígenos O y Vi se relacionan con la resistencia a la infección y a la enfermedad.
TRATAMIENTO
Se efectúa con cloramfenicol, trimetropim con sulfametoxazol. Es un problema la resistencia múltiple a los fármacos transmitida de manera
genética por los plásmidos entre las bacterias intestinales. En la mayor parte de los portadores, los microorganismos persisten en la vesícula
biliar (sobre todo si hay cálculos). La enterocolitis es una enfermedad que se resuelve de manera espontánea, sin
tratamiento. Puede requerirse restitución de líquidos y electrólitos. El tratamiento con antibióticos no acorta la enfermedad ni reduce los síntomas; en realidad, puede prolongar la excreción de microorganismos, incrementar la frecuencia del estado de portador y seleccionar mutantes resistentes al antibiótico.
Para fiebres entéricas y septicemia, el tratamiento es la ampicilina o el cloramfenicol. La ampicilina deberá usarse en portadores crónicos de S. Typhi. Para abolir el estado de portador, puede requerirse colecistectomía.
Los abscesos focales se drenarán con cirugía, siempre que sea factible.
PREVENCION
Las Salmonelosis se previenen con reglamentos de salud pública y medidas de higiene personal.
Son importantes el tratamiento de aguas negras, la cloración del suministro de agua que se controla por investigación de bacterias coliformes contaminantes.
Los cultivos de heces de manejadores de alimentos para detectar portadores, el lavado de manos antes de trabajar con alimentos.
La pasteurización de la leche y el cocimiento apropiado de las aves de corral y las carnes.
Se disponen de dos vacunas que confieren cierta protección contra S. Typhi:
Una se compone de acetona exterminadora de microorganismos S. Typhi y se administra de manera intramuscular.
La otra consiste en S. Typhi vivo atenuado y se toma de modo oral.