PRUEBAS COLORIMÉTRICAS PRELIMINARES

Para las pruebas colorimétricas (Figura 3) se realizaron 4 soluciones

stock de 10 ml con agua destilada (H2O) y 10 ml ácido clorhídrico (HCl)

al 10 %, a estos se les agrego 0.05 g del extracto metanólico hojas de

Hamelia patens; a 40 ml de etanol (EtOH) se le agrego 0.20 g del mismo

extracto, y a 15 ml de cloroformo (CHCl3) se le agrego 0.75 g del mismo

extracto.

Alcaloides:

Se tomo 10 ml de la solución stock de HCl al 10 %, se agito y se calentó

en baño María por 10 minutos a 70 °C, después se enfrío y se filtro hasta

que el filtrado fue completamente transparente. El filtrado se ensayo

con los reactivos para alcaloides; Mayer, Dragendorff, Wagner y Hager,

usando 2 gotas de cada reactivo. Se considero como positiva, las

pruebas en las que apareció un turbidez o precipitado rojo, blanco a

crema, marrón, o naranja.

Saponinas

La prueba se realizo con agua caliente

Se tomo 5 ml de la solución stock H2O y se calentó de 15 a 30 minutos a

100°C, luego se agitó vigorosamente durante 3 a 5 minutos. La

formación de espuma con apariencia de panal de abeja, se estableció

por unos 30 minutos. Se considera positiva la prueba si presenta

espuma. (Domínguez, 1973)

Taninos

De la solución stock H2O, a 3 ml del extracto acuoso, se le adicionaron

de 1 a 2 gotas de solución de cloruro férrico al 10%. Una coloración azul

nos indicaría la posible presencia de taninos hidrolizables, y coloración

verde de taninos condensados. Para su confirmación se dividió el resto

del extracto acuoso en tres partes iguales y se adiciono en cada uno:

solución de gelatina, solución de gelatina y sal, y solución salina.

La aparición de precipitado blanco en los tubos con soluciones de

gelatina y de gelatina-sal son resultados positivos para test de taninos.

Pero si también aparece en la solución salina se considera negativo.

Saponinas

En Rosenthaler

A 1 ml del stock EtOH, se le añadió una gota del reactivo de Rosenthaler

y una gota de ácido sulfúrico concentrado. Las saponinas de triterpenos

pentacíclicos dan color violeta (Fragoso, 2001)

Flavonoides

a) Shinoda con HCl concentrado

A un tubo con 2 ml del stock EtOH se le agrego un trocito de viruta de

magnesio amalgamado y unas gotas de ácido clorhídrico concentrado.

La aparición de colores que van del rojo profundo a magneta nos

indicaría la presencia de una flavanona o dihidroflavanol.

Dihidrochalconas y otros flavonoides no reaccionaron. (Fragoso, 2001).

b) Shinoda con HCl diluido

Se coloco en un tubo de ensaye, 2 ml del stock EtOH y algunos

fragmentos de magnesiog, también se agregaron por las paredes del

tubo, unas gotas de HCl diluido.

c) Pew´s

A un tubo con 2 ml del stock EtOH se le agrego polvo de zinc y unas gota

de ácido clorhídrico 5 N. Solo los dihidroflavonoles reaccionaron para dar

colores que van del rojo púrpura al rojo cereza. Flavononas,

dihidrochalconas y otros flavonoides dieron coloración rosa o café.

(Fragoso, 2001)

d) Hidróxido de sodio

A un tubo con 2 ml del stock EtOH diluido se le agregaron unas gotas de

hidróxido de sodio diluido. La aparición de colores amarillo o naranja se

considero indicativa de la presencia de flavonoides, según Fragoso,

2001.

Taninos

Se tomo del stock EtOH alícuotas de 1 mL para las pruebas con cloruro

férrico (al 10%), y 0.5 ml de las soluciones de gelatina, gelatina y sal, y

salina.

Los taninos hidrolizables y condensados se diferenciaron según el color o

precipitación con sales férricas; los hidrolizables dieron coloración y

precipitados azul-negruzcos y los taninos condensados dieron

precipitados pardo-verdoso, según Fragoso, 2001)

Cumarinas

En un tubo de ensayo se coloco 2 ml del stock EtOH, se introdujo en su

interior papel de filtro impregnado en solución diluida de NaOH al 5 % y

se llevo a baño de María a 100ºC por algunos minutos. Se removió el

papel de filtro y se examino bajo luz UV, siendo la fluorescencia amarilla

indicativa de la presencia de cumarinas.

Glucósidos cianogenéticos

La presencia de ácido cianhídrico en este grupo de compuestos pudo

observarse por su reacción con picrato de sodio.

Reacción de Grignard

Se coloco 4 ml del stock EtOH en un tubo de ensaye junto con 1 ml de

cloroformo y una tira de papel impregnado con reactivo de Grignard en

la boca del tubo. Se calentó de 30 a 35°C y se observo la coloración que

aparece en el papel. Un color rojo o rosa se considero positivo. (Fragoso,

2001)

Glucósidos cardiotónicos y lactosas sesquiterpénicas

a) Baljet

A 3 mL del stock EtOH se le adiciono de 3 o 4 gotas de reactivo de

Baljet, si se forma coloración anaranjada o roja obscura se considera

positiva según Fragoso, 2001.

b) Cloruro de Antimonio

El cloruro de antimonio se disuelve en cloroformo y se añade unas gotas

al extracto etanólico, la aparición de un color violeta azulado se

considera positiva. (Fragoso, 2001)

Triterpenos

Se tomo 10 ml del stock CHCl3 y se filtró con algodón.

a) Reacción de Liebermann-Burchard.

A 1 ml de extracto en cloroformo, se le agregó 1 ml de anhídrido

acético por las paredes del tubo de ensaye y se dejó reposar en frío. La

aparición de colores rojo, rosa, verde, púrpura o azul en la interface

cuando se añade 1 o 2 gotas de ácido sulfúrico concentrado, se

considera positiva.

b) Reacción de Salkowski:

A 1 ml del extracto de cloroformo se le adicionó una gota de ácido

sulfúrico concentrado (1 ml de H2SO4) por las paredes del tubo de

ensaye.

Glucósidos cardiotónicos

A 10 ml del stock EtOH se le adiciono 5 ml de solución de acetato de

plomo al 10% y 4 ml de agua destilada. Se calentó la mezcla a baño

María durante 10 min. Y se filtró con algodón. Después se agito el

filtrado con 20 ml de CHCl3, se separo la capa clorofórmica en 6 tubos de

ensayo, y se llevo a sequedad.

A los tubos se les adiciono lo siguiente:

- al primer tubo 1 ml de reactivo de Baljet. (Coloración roja, naranja-

rojiza o violeta con cardenólidos).

- al segundo 1 ml de reactivo de Kedde. (Coloración rosa o azul-violeta al

visible indican cardenólidos, los bufadienólidos no reaccionan. El color se

atenúa en pocos minutos).

- al tercero: 1 ml de reactivo de Raymond-Marthoud (anillo lactónico de

los cardenólidos). Igual coloraciones que reactivo de Baljet.

- en el cuarto se realizo a reacción de Keller-Kiliani. (ácido acético

glacial, 1 gota de cloruro férrico al 5% en metanol y ácido sulfúrico

concentrado) Coloraciones intensas.

- en el quinto se realizo la reacción de Liebermann-Burchard (1 mg de

muestra/pocas gotas de ácido acético + 3 ml anhídrido acético/ácido

sulfúrico (50:1)). Coloración verde, azul verdoso, vía rojo al azul.

- en el sexto se realizo la reacción de Salkowski (núcleo esteroidal).

Coloración amarilla-rojo sangre.

Derivados antracénicos libres

Se tomo 5 ml del stock CHCl3, se dividió en 2 tubos de ensayo, se agito y

dejo 15 min en reposo.

a) Reacción de Borntraeger

En el 1er. tubo se agrego 1 ml de solución de NaOH al 5% en agua.

Coloración rojiza en la fase acuosa, indico presencia de antraquinonas.