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Proyecto FO‐CIBIOGEM‐186671

Determinación y cuantificación de granos de polen deSoya (Glycine max L.) en miel de abeja (Apis mellifera)y su relación con el comportamiento de éstas, en áreasde cultivo cercanas a apiarios de la Península deYucatán.

Antecedentes

Miel de exportación y OGMs

Karl Heinz Bablok Maíz MON810

Miel de exportación y OGMs

Análisis para la detección de OGM´s en la Miel

Muestra de MIEL

Aislamiento del Polen

PCR tiempo real

Negativo Positivo

OGM NOautorizado

Contenido polen > 0.9%

Contenido polen 90% OGM´s

Antecedentes

¿Cómo el polen de los cultivos GM´s llegan a la miel?

Como resultado de las necesidades nutricionales delas abejas adultas y sus crías (colonia de abejas).

Somerville, 2005

Néctar (Miel) Polen

Carbohidratos (azúcares), Proteínas (aminoácidos),Grasas / lípidos (ácidos grasos), Minerales, Vitaminas.

NÉCTAR

Volumen del néctar.

Concentración de azúcares.

Aromas.

Abundancia de la floración.

Distancia de las floraciones.

NÉCTAR

El polen es transportado en las corbículas Existen forrajeadoras de polen y néctar

Diversidad del polen en las trampasDiversidad de pólenes almacenados en los panales

La Soya y la miel yucateca

Soya = especie autógama*, y puede ser poco atractiva paralos insectos polinizadores incluyendo a las abejas.*reproducen sexualmente por autofecundación

La flor posee un nectario anular en la base del gineceo que ofrece unarecompensa a las abejas forrajeadoras (Erickson, 1979).

Importancia de las ABEJAS para la soya =

Importancia de la SOYA para las abejas=

Keog, y Col. RIRDC, 2005

Ciclos de producción de miel / Yucatán

90 % captación de miel8 % de miel

CRISIS

Períodos Críticos / Alimentación colonias

Períodos de floración / Extracción de Miel

Ciclos de producción de miel / Yucatán

90 % captación de miel8 % captación de miel

Floración SO

YA

CRISIS

Vegetación nativa¿Competencia?

¿Almacenan?¿Consumen?

Porter‐Bolland, 2009

Pueden ser + atractivas para las abejas si: Mayor volumen de néctar. Mayor concentración de azúcares. Cercanas a los apiarios.

Para Yucatán= 1,349 especies de plantas.849 son melíferas (63%) = 81 familias, 332 génerosFlores‐Guido, 2010.

Para Yucatán, se desconocía la atracción de lasflores de soya como fuente de néctar para lasabejas africanizadas de la región, de acuerdo lavariedad de Glycine max (L), que ha sidoautorizado para su liberación (MON-0432-6) =fenotipo tolerante a herbicidas que contienen elingrediente activo glifosato.

?

OBJETIVO GENERALEvaluar la atracción de Glycine max para las abejas Apismellifera y la presencia y proporción de granos de polen enmieles extraídas de apiarios establecidos en un gradientede distancia de cultivos de soya en la península de Yucatán.

OBJETIVOS ESPECÍFICOS

1) Determinar la presencia y proporción de granos de polende soya (Glycine max), en las mieles cosechadas yprovenientes de las áreas cultivadas durante el cicloPrimavera-Verano de 2011.

2) Evaluar la conducta de colecta de recursos (néctar y/opolen) de las abejas africanizadas en las flores de soya, bajocondiciones de la Península de Yucatán.

3) Determinar la presencia y proporción de granos de polende soya en las mieles extraídas de colonias de abejasestablecidas a diferentes distancias de las parcelas con estecultivo.

Ciclo Primavera – Verano 2012

Soya convencional Huasteca 200 y 400

TOTALES8 Cultivos de soya (5 – 221 has).31 Apiarios.73 Colonias de abejas.95 muestras de miel de las colonias experimentales.

1) Determinar la presencia y proporción de granos depolen de soya (Glycine max), en las mieles cosechadas yprovenientes de las áreas cultivadas durante el cicloPrimavera-Verano de 2011.

Referencias palinológicas de los granos de polen de soya.

Se prepararon montajes al natural y acetolizado con material proveniente de 2cultivos con la variedad Huasteca 200 (flor blanca) y Huasteca 400 (flor morada).

Descripción y caracterización de los granos de polen desoya (Glycine max).

Mónadas isopolares, tamaño mediano, con un eje polar de 18-23 µm (EP: X= 20.2µm), eje ecuatorial de 19-23 µm (EE: X= 21.2 µm).Aperturas: Tricolporados, raramente tetracolporados. Exina: Psilada, exinaligeramente engrosada en la zona de los poros.

Se analizó la presencia de granos de polen de soya (Glycinemax), en muestras de miel (lotes) que fueron extraídasposterior al período de siembra y floración de la soya GM(evento MON-04032-6), cultivada Campeche y Yucatán,durante el ciclo P-V 2011.

Las muestras de miel fueron colectadas durante el período comprendidodel 01 de Noviembre del 2011 al 06 de Marzo de 2012, y provinieron de26 lotes (±21 toneladas de miel) conformadas por mieles diversas(diversas fuentes = apicultores) provenientes de los centros de acopiocercanos a estos cultivos, del estado de Yucatán, o cercanos a las áreascultivadas en Campeche, cuya miel fue canalizada hacia el estado deYucatán para su procesamiento y exportación.

Se recuperaron un total de 26 sedimentos polínicos de igualnúmero de lotes de miel provenientes de 2 centros de acopiode Yucatán.

En general, se encontraron 69 tipos polínicos en lasmuestras de miel de ambos centros de acopio y fueronidentificadas hasta familia, género, especie o permanecieroncomo morfotipos, = 31 familias botánicas.

Muestra LocalidadEntrada centro acopio

Especies vegetales encontradas en la muestra

* 2 BM Sta. Elena 20/01/12Pisonia, Thouinia, M. bahamensis, Viguiera, Bursera, Trema,

Parthenium, Tithonia, Citrus, Jacquemontia, Amaranthus, Ipomoea, Glycine max (0.15%).

* 2AM Sta. Elena 16/01/12 Thouinia paucidentata, Croton, Caesalpinia sp. Glycine max(0.52%).

Áreas principales del cultivo de soya (Glycine max), en los estados de Campeche y Yucatán, y los sitios de muestreo de loslotes de miel. Las flechas indican el ingreso de miel con la posibilidad de contener granos de polen soya, debido a la cercaníadel centro de acopio con las áreas de cultivo.

2) Evaluar la conducta de colecta de recursos (néctar y/opolen) de las abejas africanizadas en las flores de soya,bajo condiciones de la Península de Yucatán.

El comportamiento de forrajeo y colecta de recursos (néctar y/opolen) por parte de las abejas Apis mellifera, se desarrolló en 2áreas del cultivo de soya de las variedades Huasteca 400 (flormorada), Campeche, y de la variedad Huasteca 200 (flor blanca)en Yucatán.

2) Evaluar la conducta de colecta de recursos (néctar y/opolen) de las abejas africanizadas en las flores de soya, bajocondiciones de la Península de Yucatán.

El comportamiento de forrajeo y colecta de recursos (néctar y/opolen) por parte de las abejas Apis mellifera, se desarrolló en 2áreas del cultivo de soya de las variedades Huasteca 400 (flormorada), Campeche, y de la variedad Huasteca 200 (flor blanca)en Yucatán.

Número de abejas forrajeadoras (en 50 inflorescencias) y horario de las visitas deforrajeo para la colecta de néctar en las flores de soya.

Volumen (µl) y concentración (% Bx) del néctar de soya colectado del buchede las abejas forrajeadoras, visitando este cultivo.

3) Determinar la presencia y proporción de granos depolen de soya en las mieles extraídas de colonias deabejas establecidas a diferentes distancias de lasparcelas con este cultivo.

Para cumplir con los objetivos de esta actividad, se visitarondiversos cultivos de soya de las variedades Huasteca 200 y 400,cultivadas durante el ciclo P-V de 2012, en Campeche y Yucatán,y se localizaron y visitaron apiarios establecidos a diferentesgradientes de distancia de estos cultivos, los cuales fuerongeoreferenciados para conocer su ubicación exacta.

CAMPECHE

Área de siembra de soya y distancia de los apiarios en relación al cultivo (Localidad: Hopelchén, Campeche

Porcentaje de granos de polen de soya en las mieles extraídas de coloniasestablecidas a diferentes distancias del cultivo (Localidad: Hopelchén, Campeche)

Área de siembra de soya y distancia del apiario en relación al cultivo (Localidad: Hopelchén, Campeche).

Área de siembra de soya y distancia de los apiarios en relación al cultivo (Localidad: San Miguel Allende, Campeche).

Porcentaje de granos de polen de soya en las mieles extraídas de coloniasestablecidas a diferentes distancias del cultivo (Localidad: San Miguel Allende, Campeche).

Área de siembra de soya (Glycine max) y distancia de los apiarios en relación al cultivo (Localidad: San Miguel Allende, Campeche).

Porcentaje de granos de polen de soya (Glycine max) en las mieles extraídas decolonias establecidas a diferentes distancias del cultivo (Localidad: San Miguel Allende, Campeche)

YUCATÁNNohalal, Tekax.

Área de siembra de soya (Glycine max) y distancia del apiario en relación alcultivo (Localidad: Tekax, Yucatán).

Área de siembra de soya (Glycine max) y distancia de los apiarios en relación alcultivo (Localidad: Tekax, Yucatán).

Porcentaje de granos de polen de soya (Glycine max) en las mieles extraídas decolonias establecidas a diferentes distancias del cultivo (Localidad: Tekax, Yucatán).

Área de siembra de soya (Glycine max) y distancia de los apiarios en relación al cultivo(Localidad: Tekax, Yucatán).

Porcentaje de granos de polen de soya (Glycine max) en mieles extraídas en 2012 y2013 (Localidad: Tekax, Yucatán).

b) Determinación de la presencia y frecuencia de granos de polende soya, en cargas corbiculares (pelotas de polen) colectadas encolonias de abejas establecidas a diferentes distancias del cultivode soya (Glycine max).

El objetivo de este trabajo, fue determinar si las flores de Glycine max,son fuente de polen para las colonias de abejas establecidas adiferentes distancias de los cultivos, estudiando las cargas corbículares(pelotas de polen) proveniente de trampas colocadas en las entradas delas colonias de abejas.

Muestras de polen corbicular (pelotas de polen) colectados en las trampas de doscolonias del mismo apiario. Se aprecian las diferentes fuentes u orígenes florales(colores) visitadas por las abejas para la colecta de este recurso.

Muestras de polen corbicular (pelotas de polen) separadas por colores, paraposteriormente determinar su origen botánico

En los apiarios establecidos a diferentes distancias de los cultivos de soya deCampeche y Yucatán, NO se observó la presencia de polen proveniente de estecultivo, cuando se estudiaron pelotas de polen colectadas en las trampas.

c) Presencia y frecuencia de granos de polen de soya aéreo,colectado en laminillas receptoras distribuidas en diferentesdistancias del área de cultivo.

Distribución de las laminillas en el centro y alrededor del cultivo de soya (Glycinemax), para la evaluación de la dispersión de los granos de polen a través delviento.

Se observó la presencia de solo dos granos de polen de soya, en unalaminilla que fue colocada en posición horizontal a dos metros dedistancia del cultivo, en la orientación Este, donde se registraron losvientos dominantes.

Ciclo Primavera – Verano 2013

Soya convencional Huasteca 200 y 400Soya GM (evento MON-04032-6)

90 % captación de miel8 % captación de miel

Floración SO

YA

CRISIS

DF L PC

Ciclo Primavera – Verano 2013Soya convencional Huasteca 200 y 400

Soya GM (evento MON-04032-6)

Floración SOYA

DF L PC

Ciclo Primavera – Verano 2013Soya convencional Huasteca 200 y 400

Soya GM (evento MON-04032-6)

TOTALES

Mieles / Temporadas *

Cultivo / Agricultor Estado / Soya

Apiarios cercanos Colonias DF L PC TOTAL

JS ‐ 001 CampecheGM MON‐04032‐6 7 21 17 26 16 59

LOr ‐ 002 CampecheGM MON‐04032‐6 5 15 0 13 1 14

DIgna ‐ 003 CampecheGM MON‐04032‐6 / H400 5 15 13 11 8 32

FP ‐ 004 YucatánHuasteca 200 6 16 16 18 0 34

LC ‐ 005 YucatánHuasteca 200 3 9 5 9 8 22

5 cultivos Total 26 76 51 77 33 161

www.intertek.com59 Kurt-Peter RaezkeDirector Testing & Analytics

GMO Testing in Honey – Sample Preparation

Isolation of pollen- Heat honey to 65°C- Homogenize honey (ca. 250 g) by shaking- Weigh out 50 g - Liquefy the honey with 180 ml H2O (65°C)- Spin down the pollen by centrifugation

(10 min, 4.000 g)

- Discard the supernatent, wash the pellet (100 ml H2O, 65°C)- Spin down the pollen by centrifugation (5 min, 4.000 g)- Discard the supernatent, suspend the pellet in the residual water- Transfer the pellet to a reaction vessel (1,5 ml), spin down (5min, 4.000 g)- Resuspend the pellet (with containing pollen) in 200 µl H2O


GMO Testing in Honey - Screening on GMO

Multiplex Real Time PCR (4 primer/probe systems in one reaction):- „SureFood GMO 4plex“ (Congen)- Qualitative analysis (LOD < 10 copies)- Detection of

- P35S (FAM, 522 nm) - T-nos (Cy5, 670 nm)- FMV (ROX, 610 nm)- Evaluation of gmo-negative samples by amplifi-

cation of an internal positive control (VIC, 553 nm)

7500 Fast Real Time PCR System

- App. 40 samples per run (two-fold determination)- Less than 1,5 h

1) Determinar la presencia y proporción de granos depolen de soya (Glycine max), en las mieles cosechadas yprovenientes de las áreas cultivadas durante el cicloPrimavera-Verano de 2013.Referencias palinológicas de los granos de polen de soya.Se prepararon montajes al natural y acetolizado con material proveniente de 2cultivos con la variedad Huasteca 200 (flor blanca) y Huasteca 400 (flor morada), yla soya GM (flor blanca).

Flores de soya (Glycine max) de las variedades genéticamente modificada evento MON-04032-6 (a), Huasteca 200 (b) y Huasteca 400 (c), colectadas en las áreas de cultivo de losestados de Campeche y Yucatán, para la descripción y caracterización de los granos de polen

2) Evaluar la conducta de colecta de recursos (néctar y/opolen) de las abejas africanizadas en las flores de soya,bajo condiciones de la Península de Yucatán.El comportamiento de forrajeo y colecta de recursos (néctar y/opolen) por parte de las abejas Apis mellifera variedades estudiadas

Obreras de Apis mellifera colectando néctar en flores de soya (Glycinemax) genéticamente modificada (evento MON-04032-6).


Obreras de Apis mellifera colectando néctar en las flores de soya(Glycine max) convencional de la variedad Huasteca 200.


Obrera de Apis mellifera colectando néctar en las flores de soya(Glycine max) convencional de la variedad Huasteca 400, y unaobrera siendo depredada por una araña cangrejo en este cultivo


Número de abejas forrajeadoras en cultivos con soya genéticamente modificada (evento MON-04032-6) y las variedades convencionales Huasteca 200 (flor blanca) y Huasteca 400 (flormorada)


Número de abejas forrajeadoras en cultivos con soya genéticamente modificada (evento MON-04032-6) y las variedad Huasteca 400 (flor morada)

Volumen (µl) y concentración (% Bx) del néctar de soya colectado del buchede las abejas forrajeadoras, visitando este cultivo.

3) Determinar la presencia y proporción de granos depolen de soya en las mieles extraídas de colonias deabejas establecidas a diferentes distancias de lasparcelas con este cultivo.

Para cumplir con los objetivos de esta actividad, se visitarondiversos cultivos de soya de las variedades Huasteca 200 y 400, yla soya GM (evento MON-04032-6) cultivadas durante el ciclo P-Vde 2013 en Yucatán y Campeche.

CAMPECHEUbicación: Noyaxché, CampecheEtapa de floración observada: Primera, segunda y tercera etapaHectáreas sembradas: 60 haVariedad de soya: Flor blanca – Soya GM (evento MON-04032-6)Numero de apiarios cercanos: 7

ApiarioDespués de la floración (DF)(% granos polen soya / + o -

(positivo o negativo) al evento MON 04032-6)

Limpieza (L) Primera Cosecha (PC)

402 m 12% / + 0% / - 0% / -1,101 m 0% / - 0% / - 0% / -1,330 m 0% / + 0% / - 0% / -1,811 m 0% / - 0% / - 0% / -3,158 m 0% / - 0% / - 0% / -3,547 m 0% / - 0% / - 0% / -4,160 m 0% / - 0% / - 0% / -

Porcentaje de granos de polen de soya (Glycine max) en las mieles extraídas decolonias establecidas a diferentes distancias del cultivo (Localidad: Noyaxché,Campeche)

Ubicación: San Miguel de Allende, CampecheFecha de siembra: 16 de Julio de 2013.Etapa de floración observada: Segunda etapa.Hectáreas sembradas: 50 haVariedad de soya: Flor blanca, Soya GM (evento MON-04032-6).Numero de apiarios cercanos: 5

Apiarios Después de la floración (DF) Limpieza (L) Primera Cosecha (PC)

946 m 0% / - 0% / - 0% / -

1,215 m 0% / - 0% / - 0% / -2,745 m 0% / - 0% / - 0% / -

4,455 m 0% / - 0% / - 0% / -

4,938 m 0% / - 0.04% / - 0% / -

Área de siembra de soya (Glycine max) genéticamente modificada evento MON 04032-6 (Flor blanca) y distancia de los apiarios en relación al cultivo (Localidad: San Miguel de Allende, Campeche)

Porcentaje de granos de polen de soya (Glycine max) en las mieles extraídas de colonias establecidas a diferentes distancias del cultivo (Localidad: San Miguel de Allende, Campeche)

Ubicación: Alfredo V. Bonfil, CampecheFecha de siembra: 19 de Julio de 2013.Etapa de floración observada: Segunda y tercera etapa.Hectáreas sembradas: 48 ha (19ha de huasteca 400, 29 ha de soya GM)Variedad de soya: Flor blanca, Transgénica (solución Faena) – Flor morada,Huasteca 400.Número de apiarios cercanos: 5

Apiarios Después de la floración (DF) Limpieza (L) Primera Cosecha (PC)

514 m 0% / - 0% / - 0% / -869 m 0.3% / - 0% / - 0% / -

1,709 m 0% / - 0% / - 0% / -2,389 m 0.03% / - 0% / - 0% / -2,770 m 0% / - 0% / - 0% / -

Porcentaje de granos de polen de soya (Glycine max) en las mieles extraídas de colonias establecidas a diferentes distancias del cultivo (Localidad: Alfredo V. Bonfil, Campeche)

YUCATÁNUbicación: Tekax, Yucatán.Fecha de siembra: 19 de Junio de 2013.Etapa de floración observada: primera, segunda y tercera etapa.Hectáreas sembradas: 35 haVariedad de soya: Flores blancas, Huasteca 200Número de apiarios cercanos: 6

Apiario Después de la floración (DF) Limpieza (L) Primera Cosecha (PC)

404 m 0% / - 0% / - 0% / -

1,244 m 0% / - 0% / - 0% / -

2,268 m 0% / - 0% / - 0% / -

4,661 m 0% / - 0% / - 0% / -

5,108 m 0.11% / - 0% / - 0% / -

5,499 m 0% / - 0.06% / - 0% / -

Porcentaje de granos de polen de soya (Glycine max) en las mieles extraídas de colonias establecidas a diferentes distancias del cultivo (Localidad: Tekax, Yucatán).

Conclusiones

1) La presencia de lotes de miel (2 lotes) con granos de polen de soya se

observó en el centro de acopio cercano a las áreas de siembra de Campeche,

para las primeras mieles que fueron extraídas y canalizadas al centro de acopio

de la localidad de Santa Elena (Yucatán) durante el período del 01 de noviembre

de 2011 al 06 de marzo de 2012. Estos resultados indican que grandes

extensiones de este cultivo pueden incrementar la presencia de polen en

las primeras mieles extraídas del ciclo apícola, y bajo el esquema actual donde

en los centros de acopio se mezclan las mieles provenientes de diferentes

apiarios para conformar los lotes.

Conclusiones …2) Las abejas melíferas visitan las flores de soya tanto de las variedades

convencionales (Huasteca 200 y 400), así como la soya Genéticamente

Modificada (evento MON-04032-6) para la colecta de néctar, sin embargo, la

densidad de abejas forrajeando en estos cultivos fue muy bajo

considerando el número de abejas presentes en las inflorescencias.

3) Las flores de soya producen una baja cantidad de néctar, lo que reduce su

atracción hacia las abejas, en comparación con la flora nativa.

4) La baja cantidad de néctar producido en las flores de soya, resulta en un

tiempo muy breve de visita de las abejas para la colecta de este recurso (

Conclusiones …

5) No se observaron abejas colectando polen en las flores (en ambos períodos),

sin embargo, en el segundo periodo se registraron pequeñas pelotas de

polen de soya en las trampas, por lo que las flores de este cultivo no

contribuyen de manera significativa en la formación de las cargas

corbiculares.

Conclusiones…

6) Las abejas forrajeadoras pueden visitar las flores de soya hasta distancias

de 5,859 metros del cultivo, sin embargo, el porcentaje de granos de polen en la

miel tiende de manera general a disminuir cuando se incrementan las

distancias.

7) A nivel de apiario, el porcentaje de granos de polen de soya en las mieles

fue mínimo y con variaciones entre colonias y entre apiarios dependiendo no solo

de la distancia de las colonias, sino también de las extensiones cultivadas con

soya, y posiblemente de la disponibilidad de recursos siendo diferente para cada

sitio.

Conclusiones…

8) La dispersión de los granos de polen de soya debido a la acción del viento, es

insignificante, y no se registró a distancias superiores a los dos metros del cultivo.

Conclusiones9) La presencia de granos de polen de soya en las mieles obtenidas

inmediatamente después de la floración, no se registran posteriormente en

las mieles colectadas durante las cosecha de “limpieza”, y en las primeras

mieles obtenidas durante el ciclo apícola posterior al flujo de néctar de la

soya, confirmado por la observación de los granos de polen de soya en las

mieles, así como a través de biología molecular (PCR) para identificar el

evento Soya MON 04032-6.

Esto indica que aún cuando las abejas colecten este recurso en baja proporción,

no aparece en las mieles posteriores (o es reducido el riesgo de su presencia)

considerando que al ser un período crítico cuando se siembra y florece la soya, el

néctar y/o miel es consumido por las abejas, y no se incorpora en las mieles

extraídas por los apicultores.

Conclusiones…


GMO Testing in Honey – Results for Mexico

negative screenings

97%

positive screenings

3%

Amount of positive and negative screening results (n≈1300) after the ECJ

judgement in Mexico

negative screenings

97%

positive screenings presumably Roundup-

Ready1%

other positive

screenings 2%

Amount of positive and negative screening results in % after the ECJ

judgement in Mexico

Consideraciones

Consideraciones

18-10-2014

Consideraciones

Soya en YucatánGTS 40-3-2

P-V 2011Huasteca 200 – 400

P-V 2012

2,160 has 1,300 has

Faena (Glifosato) Fusiflex (fomesafen + fluazifop - p butil)Flex (fomesafen)

$350.00 / L $1,000.00 / L

2.0 - 2.5 Ton/Ha 1.5 – 2.0 Ton/Ha

AgradecimientosApoyo técnico:

María Isabel May Canché (Palinología)Fernando A. Fleites Ayil (Colecta de muestras en campo)

Jorge A. Escalante Pasos (Colecta de muestras en campo)Simmón E. Montes Rodríguez (Colecta de muestras en campo)

Antonio Durán Yáñez (Colecta de muestras en campo)Christian Salazar Fleites (Colecta de muestras en campo)

A los apicultores y productores de soya de Campeche y Yucatán

Gracias por su atención

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