Republica Bolivariana de VenezuelaUniversidad de los AndesFacultad de CienciasDepartamento de BiologiaProtozoologa B-2015Leonardo da Silva Augusto, Nilmar Silvio Moretti, Thiago Cesar Prata Ramos, Teresa Cristina Leandro de Jesus, Min Zhang, Beatriz A. Castilho, Sergio SchenkmanNoviembre, 2014

IntroduccinLa subunidad alfa del factor iniciador de la transcripcin 2, es la subunidad reguladora de la actividad de dicho factor iniciador (eIF2).Su inhibicin es por fosfoliracin y ocurre en condiciones de estrs.Se han reportado 4 kinasas descritas en mamferos que la inhiben.

eIF2K4PKRPERKHRIExtrado de Kimball (1999)

Extrado de Baird & Wek (2012)

Y ahora Trypanosoma cruziCAgente patolgico de la Enfermedad de Chagas.Perteneciente a la familia Trypanosomatidae, donde se encuentra otro peligroso parasito: Leishmania.Es polimorfico y presenta un complejo ciclo de vida.Es deficiente en disitintas rutas metabolicas.

Que relacin tienen ambos puntos?Se han encontrado protenas ortologas a las kinasas descritas en mamiferos, en otros organismos.En los trypanosomatidaes, se han encontrado kinasas putativas.A pesar de que la funcin principal de estas kinasas se conserva, los eventos que desencadena su funcionamiento son distintos e igualmente las consecuencias.Previas revisiones, han detallado una dependencia de la accion de 2 kinasas (PERK y GCN2) en respuesta al estrs nutritivo.

Qu novedad se presenta en el trabajo?

Partes relevantes de la metodologa de trabajo.Organismos utilizados:

Columnas de purificacin por afinidad:Trypanosoma cruzi cepa YEscherichia coli cepa BL21Nickel AgarosaProteina G-Sefarosa

Plsmidos producidos:

Inmunoprecipitacion

Knock- OutPlasmido para Knock-Out.Plasmido que contenia a TcK2-HAPlasmido que contenia a eIF2 con una cola de Hys.Plasmido que contenia a un anti-TcK2.Plasmidos que contenia a TcK2-GST.

Resultados

La T. cruzi K2 es una protena unida a la membrana que se autofosorila y fosforila a eIF2.

Porcin de protena reconocida por el anticuerpoTcK2 fosforilada

La T. cruzi K2 est localizada en compartimentos internos de la clula y esta fosforilada en las fases no proliferativas del parsito.

Colocalizacin BiP-TcK2Mayor fosoforilazacin

Los grupos Hemos promueven la proliferacin, acumulandose en endosmas.

Colocalizacin Cruzipain-TcK2Endosoma (Reservosoma) menos densosEndosoma (Reservosoma) mas densos

Los grupos Hemos se unen especficamente al dominio cataltico e inhibe la fosforilacin y la metacclogenesis

La clulas TcK2 KO son disparejos en la diferenciacin clular y hay ralentizacin en el crecimiento

El ascorbato restaura el crecimiento de los parasito TcK2 nulos, la diferenciacin e infectividad, pero no la proliferacin intracelular.

Las clulas de con TcK2 nulo, pierden lo denso de los endosomas y no se recobra con ascorbato

Las clulas con TcK2 nulo, incorporan mas grupos hemos que las WildTypes resultado en el incremento H2O2 y SRO (Especies Reactivas de Oxgeno).

Wild Type, pero no la quinasa muerta TcK2 restaura los fenotipos Knock Out.

Discusin y Conclusiones.

El balance nutricional de la clula, es la promotora de diferenciacin celular.La fosforilacin de eIF2 por TcK2, ocurre principalmente en la fases del hospedador vertebrado.Existe una correlacin Cruzipain-TcK2.Los grupos hemos son inhibidores de la transformacin.La localizacin subcelular de TcK2 cambia, de acuerdo al estado.

Existe un aumento de la actividad de la superxido dimutasa y una reduccin de la actividad peroxidasa.El transporte de los grupos hemos aun no estan claros.Los agentes antioxidantes son capaces de recobrar la funcionalidad parcial de la celula.TcK2 no es la unica que fosforila a eIF2.

eIF2a es una proteina de 36 KD, contiene en un sitio de fosf. en la serina 51, intervien en la union del complejo trimerico IF2-GTP-MET-TRNA.Las 4 kinasas son: IF2A kinasa 4, ausencia de aa; PKR (protein kinasa activada por RNA) en caso de virus; PERK (PK de reticulo endoplasmatico, error de plegamiento) y Kinasas inhibidas por hemo, deficiencia.

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