Proteómica y sus aplicaciones

Conceptos básicos en proteómica

aplicaciones

metodologías

Electroforésis en dos dimensiones

MALDI-TOF/ Esi LC-MS/MS

Aplicaciones de la proteómica al estudio de la tuberculosis y la

paratuberculosis

Genómica Funcional: Utilización de aproximaciones experimentales

globales para el entendimiento de las funciones de genes y/o proteínas, que permiten establecer vías genéticas integradas que gobiernan la fisiología de un organismo

Ofrece una imagen completa de las interacciones entre miles de genes o productos génicos simultáneamente en función de una situación particular

Variación del

genoma Polimorfismos SNPs

Transcriptómica

Proteómica

Interacción de proteínas

Sistemas de Doble hibrido

Organización en redes interconectadas

Organismos modelo

Manipulación génica

Knockout, RNAi

Nuevos fenotipos

Biología estructural

Expresión de proteínas

Cristalización, X-ray

Función de proteínas

Salud y Sanidad

Medio Ambiente

Producción

Bioinformática

Metabolómica

Porque estudiar las proteínas ?

Las modificaciones postraduccionales tales como la

fosforilación y el clivaje proteolítico frecuentemente regulan la

actividad de las proteínas.

El genoma y los transcriptomas no son suficientes para modelar

y predecir sistemas biológicos.

La cantidad de proteína en una célula no siempre es regulada

por la expresión del RNA mensajero. En vez, la traducción y la

degradación pueden determinar la abundancia de las proteínas.

Principales aplicaciones de la proteómica

Perfil de proteínas (identificación de proteínas a gran

escala)

Proteómica comparativa

Proteómica funcional (interacción proteína-proteína)

Proteómica

Gran rango dinámico (posibilita identificar proteínas de abundancia

muy baja en presencia de proteínas de abundancia muy alta)

Amplio rango de pesos moleculares (750 kDa to 350 Da)

• de pI (3 to 12)

• de hidrofobicidad

• Las tecnologías proteómicas no han sido tan desarrolladas

como las genómicas principalmente debido a la falta de

esquemas de amplificación como la PCR.

• Solo se pueden analizar proteínas de su fuente natural.

• La complejidad de los proteomas se debe a que muchas

proteínas son procesadas y modificadas de forma compleja y

pueden ser producto de splicing diferencial.

Algunas limitaciones en los estudios

proteómicos….

Perfiles proteómicos comparativos

Geles de 2D

Shotgun Análisis Muestra (células, tejidos, fluidos)

LC2D

Electroforésis de proteínas

en dos dimensiones (2-DE)

Purificar las proteínas del

tejido o células

Separar las proteínas en 1

dimensión por su PI

Separar las proteínas en 2

dimensiones por su peso

molecular

Tinción de las proteínas, análisis

de los spots

Identificación de las proteínas por

MS

Métodos de separación

Isoelectroenfoque de las proteínas

Electroforésis en una dimensión

No hay un protocolo de solubilización

universal.

Las mezclas de urea-reductores-

detergentes generalmente logran

romper los puentes disulfuro y las

interacciones no-covalentes.

Objetivos

Romper las inteacciones

moleculares (puestes di-

sulfuro).

prevenir cualquier

modificación artificial de las

proteínas en el medio.

Remover cualquier

sustancia que pueda interferir

con las 2D.

Mantener las proteínas en

solución durante el proceso

de 2D.

Solubilización de las proteínas para geles de 2D

Solubilización de las proteínas para geles de 2D

Agentes caotrópicos (Estos agentes interfieren con los

enlaces no covalentes )

8-7M UREA

2M TIOUREA

Surfactantes (Bajan la tensión superficial)

4-2% CHAPS

Agentes Reductores (Reduce a un agente oxidante traspasándole

electrones a este último)

65 -100mM DDT

Anfolitos 2%

Tiras para isoelectroenfoque

individuales comerciales

1.Re hidratación de la tiras (12hs)

2.Se aplica la muestra de proteínas

3.Se separan la proteínas en las tiras

por corrida electroforética a alto V

Isoelectroenfoque (1ª dimensión)

SDS PAGE (2ª dimensión)

Separación de las proteínas por peso molecular

Procedimiento:

1.Preparado de los geles

(12%)

2. Equilibrado de las tiras de

la primera dimensión

3. Cargado de la tira en el SDS

PAGE

4. Sellado con agarosa

5. Separación de las proteínas

por electroforésis según su

peso molecular

6. Tinción de los geles

7. Toma de la imagen

8. Análisis de spots

(manualmente o con

programas informáticos)

Métodos Generales de Tinción

Tinción con nitrato de plata

Tinción con Coomassie blue (R and G)

Métodos de marcado radioactivo

Métodos fluorescentes

Expresión diferencial de proteínas

RESUMEN DEL ANALISIS DE EXPRESSION

DIFERENCIAL DE PROTEINAS

Para cuantificar cambios en los niveles de proteínas

se utiliza marcación fluorescente

Análisis de imágenes

Condición control Con tratamiento

Detección de spots

Superposición de perfiles

http://expasy.org/melanie/

Aislado de las proteínas del gel 2D

Manual

Automático

Digestión en gel:

• Lavado

• Deshidratación y secado

• Digestión enzimática

• Extracción

• Desalado y concentración de los

péptidos

Identificación de proteínas por 2-DG

Espectrometría de masas

Digestión en gel

Base de datos de

secuencias de proteínas/ADN

www.us.expasy.org

Reactivos químicos y enzimas empleadas para el

mapeo de péptidos

Espectrometría de masas

Fuente de iones

+

Acelerador

Analizador de masas Detector

Electron impact (EI)

Chemical Ionization (CI)

Fast Atom Bombardment (FAB)

Matrix Assisted Laser Desorption/

Ionization (MALDI)

Electropsray Ionization (ESI)

Magnetic Sector

Fourier Transform Ion Cyclotron

Resonance (FTICR)

Quadrupole

Ion Trap

Time-of-Flight (TOF)

MALDI es uno de los métodos para

ionizar péptidos y otras moléculas

En MALDI las

muestras son

depositadas en una

matriz que absorbe

UV, la cual capta la

energía láser, ioniza y

protona las moléculas

de la muestra

+ + +

Field free drift region Detector Sample

probe

Matrix Assisted Laser Desorption Time-of-Flight

Mass spectrometer (MALDI-TOF-MS)

335 nm nitrogen

m/z

Rela

tive

In

ten

sit

y

MH+

MH+

MH+

MALDI generalmente se usa con

espectrómetros TOF (tiempo de vuelo)

1570.673

1571.673

1572.673

1573.673

1574.673

Espectro de masas TOF

Espectro de masas de una mezcla de 11 péptidos

Gel 2DE

Proteína

intacta

Proteólisis

experimental

MS Experimental

MS Teórico

Proteólisis

teórica Base de

datos de

ADN

Base de

datos de

proteínas

Análisis informático

Identificación de proteínas por el mapa peptídico (datos del

MALDI-TOF)

SELDI – Surface-Enhanced Laser Desorption

and Ionization

Es una extensión de:

MALDI – Matrix-assisted laser desorption/ionization

Como en MALDT TOF, en SELDI TOF;

• Las proteínas son co cristalizadas con una matriz que

absorve UV

• Son vaporizadas por un pulso de UV laser

• Las proteína ionizadas son aceleradas en un campo

eléctrico

• Se mide la relación carga/masa de las proteínas

36

Metodología alternativa a 2D MALDI-TOF es Esi LC

MS/MS

Proteínas de membrana

Baja abundancia de la proteína

Resolución de la proteína blanco poco satisfactoria

Que hacer cuando no la tecnología de geles de 2D no

es aplicable?

Baja homología con secuencias depositadas en

bases de datos

Perfiles proteómicos comparativos

Geles de 2D

Shotgun Análisis Muestra (células, tejidos, fluidos)

LC2D

IONIZACION POR ELECTRO ESPRAY

TANDEM MS/MS

Secuenciación de proteínas Usa Tandem MS: dos

analizadores de masa en series con una celda de colisión entre ellos

Celdas de Colisión: región donde los iones colisionan con un gas (He, Ne, Ar) resultando en la fragmentación del ion

La fragmentación de los pétidos ocurre de forma predecible, principalmente en la unión peptídica

Los iones hijos resultante poseen masas que son consistentes con pesos moleculares conocidos de dipéptidos, tripéptidos, etc.

Ser-Glu-Leu-Ile-Arg-Trp

Celda de colisión

Ser-Glu-Leu-Ile-Arg

Ser-Glu-Leu

Ser-Glu-Leu-Ile

Etc…

Comparación entre MALDI-TOF y ESI-MS-

MS para la identificación de proteínas

MALDI-TOF MS

Muestra en un soporte

(matriz cristalina).

Los espectros indican masas

de los péptidos.

La identificación de la

proteína es por MS es por

huella peptídica.

Requiere la secuencia del

proteoma.

ESI-MS-MS

Muestra en solución (HPLC).

Los espectros MS-MS

revelan patrones de

fragmentación.

Se identifica la proteína por

algoritmos de correlación

cruzada.

Síntesis de novo.

Ejemplo de un reactivo ICAT

SO

INH

**

**

O

O

ONH

O

ONH

NH

Biotin Affinity tag:

Se une a la resina

de estreptavidina-

agarosa

Linker: La versión pesada

tiene deuterio en*

La versión liviana tiene

hidrógeno en*

Reactive group: Grupo tiol

reactivo que se une a la

cisteína

Como funciona ICAT?

Proteolisis

(eg tripsina)

Lisado y

marcado

MIX

Aislamiento por

afinidad a bolitas de

estreptavidina

Quantificación

MS

Identificación

MS/MS

100

m/z

200 400 600 0

100

550 570 590 0

m/z

liviano

pesado

NH2-EACDPLR-COOH

Ventajas vs. desventajas Estima los niveles

relativos de una proteína entre muestras con bastante presición (10%)

Se puede usar en mezclas complejas de proteínas

Si se usa MS-MS los péptidos se pueden identificar directamente

• Caro

• Fragmentación de los Tag

• Solo para péptidos con cisteína.

HERRAMIENTAS EXPASY

http://expasy.org/tools/#proteome

Similarity searches

ExPASy BLAST

Pattern and profile searches

translational modification prediction

Topology prediction

Primary structure analysis

Secondary structure prediction

Tertiary structure analysis and prediction

Molecular modeling and visualization

ExPASy Proteomics tools

Protein identification and characterization

Identification and characterization with peptide mass fingerprinting data

Aldente - Identify proteins with peptide mass fingerprinting data. A new, fast and powerful tool that takes advantage of Ho ugh transformation for spectra recalibration and outlier exclusion. Download the stand - alone version

FindMod - Predict potential protein post - translational modifications and potential single amino acid substitutions in peptides. Experimentally measured peptide masses are compared with the theoretical pept ides calculated from a specified Swiss - Prot entry or from a user - entered sequence, and mass differences are used to better characterize the protein of interest.

FindPept - Identify peptides that result from unspecific cleavage of proteins from their experimental masses, taking into account artefactual chemical modifications, post - translational modifications (PTM) and pr otease autolytic cleavage

Mascot - Peptide mass fingerprint from Matrix Science Ltd., London PepMAPPER - Peptide mass fingerprin ting tool from UMIST, UK ProFound - Search known protein sequences with peptide mass information

from Rockefeller and NY Universities [or from Genomic Solutions ] ProteinProspector - UCSF tools for peptide masses data (MS - Fit, MS - Pattern,

MS - Digest, etc.)

http://expasy.org/swiss-2dpage/viewer&map=ecoli&ac=all

Base de datos con proteomas de diferentes células y

organismos

Proteómica funcional

Una proteína puede ser identificada pero aun así no

conocemos:

Detalles estructurales

Localización

Interacción- pequeñas moléculas

Interacción con otras proteínas

Modificaciones postraduccionales

Vida media

DETECCIÓN DE INTERACCIONES PROTEÍNA-PROTEÍNA

POR MICROARREGLOS

Microarreglo de proteínas

MAPAS DE INTERACCIÓN-BIOLOGÍA DE SISTEMAS

• Convergencia entre ciencia del descubrimiento y ciencia conducida por hipótesis.

• La biología de sistemas puede detectar conexiones entre muchas funciones celulares que no son aparentes ni predecibles.

• Puede colectar datos más allá de nuestras habilidades, validarlos, integrarlos e interpretarlos.

Trabajos del grupo de tuberculosis y

paratuberculosis bovina en proteómica aplicada

Búsqueda de antígenos candidatos en

diferentes especies de bacterias

Identificación de las proteínas reguladas por el

represor Mce3R (un regulador transcripcional)

Identificación de glicoproteínas de M.

tuberculosis

Caracterización de la unión del antígeno P27 de

M. bovis a receptor celular

Biomarcadores de TB bovina

• La tuberculosis (TBC) es una enfermedad

infectocontagiosa crónica causada por bacterias del

género Mycobacterium, que afecta tanto a hombres como

a animales desde tiempos remotos.

• En 1882, Robert Koch descubrió el agente causal de la

TBC, al encontrar un bacilo constantemente asociado

con la enfermedad clínica.

El agente etiológico de la tuberculosis en humanos es

Mycobacterium tuberculosis.

• Entre el 5 % y el 10 % de los infectados desarrollarán la

enfermedad en algún período de sus vidas.

• 9 millones de personas por año contraen la enfermedad activa,

mientras que otros 2 millones mueren por consecuencia de ello.

(WHO, 2007)

• Un tercio de la población mundial está infectada.

La tuberculosis bovina es causada por Mycobacterium bovis

ocasionando a nivel productivo:

• Disminución de hasta un 6% en la fertilidad.

• Disminución de un 10% en la producción láctea.

• Pérdida del 15% en promedio del peso del animal, disminuyendo la

producción de carne.

• Aumento de la susceptibilidad a otras enfermedades.

(SENASA, 2006).

1. Mycobacterium tuberculosis glycoproteomics

based on ConA-lectin affinity capture of

mannosylated proteins

Margarita González-Zamorano1, Guillermo Mendoza-Hernandez2, Wendy

Xolalpa1,Cristina Parada1, Antonio J Vallecillo1, Fabiana Bigi3, and Clara

Espitia

Instituto de Investigaciones

Biomédicas Nacional Autónoma de México,

Departamento de Bioquímica

Instituto de Investigaciones Biomédicas.,

Instituto de Biotecnología, CICVyA-INTA

Objetivo: Identificar las glicoproteínas de

Mycobacterium tuberculosis

Las glicoproteínas juegan son importantes

inmunoduladores ya que muchas de ellas une

receptores Toll-like

Existen dos tipos de glicosilaciones: O-glicosilación y N-

gliosilación

En micobacterias: O-glicosilación por residuos de

manosa (o-manosilación)

Estrategia experimental:

1. Purificar las glicoproteínas presentes en el

sobrenadante de cultivo de M. tuberculosis mediante

pasaje por una columna de ConA

2. Separar las proteínas por electroforésis en dos

dimensiones

3. Identificar las proteínas presentes en el gel por

Tandem Mass spectrometry (LC/ESI-MS/MS)

4. Confirmar la identidad de las proteínas mediante

western blot con anticuerpos específicos

Cromatografía de afinidad por unión a ConA

Concanavalina A Proteínas

totales

libres

Proteínas pegadas

específica e

inespecificamente

1. Cargado

de las

muestras

2. Unión de las

proteínas a la

matriz-ConA

Unión específica de

glicoproteínas

Proteínas inespecíficas

liberadas con los lavados

glicoproteínas

3. lavados 4. eluído

1. Proteínas de SC totales

2. Proteínas eluídas de

columna ConA

3. Western blot con ConA

4. WB con Con A en

presencia de metil-α-D-

mannopiranosido

coomasie ConA ConA+ metil-α-D-

mannopiranosido

Se identificaron 41

proteína, 34

posibles manosil

glicoproteínas

Anti- Pst1

y anti-

LpqH

Anti- LprG/P27

LprG/P27 es un importante factor de virulencia de las

micobacterias patógenas ya que la eliminación de su gen produce

una severa atenuación de la bacteria en el modelo de ratón

Se demostró que esta proteína forma junto con otra un sistema de

eflujo de compuesto

Ejerce un efecto inmunomodulador en ratones cuando es

administrada como proteína o como gen

Conclusión: El factor de virulencia P27/LprG de

las micobacterias patógenas es una manosil

glicolipoproteina capaz de unir el receptor DC-

SING en células dendríticas

Estos hallazgos pueden explicar porque esta

proteína es tan relevante para la virulencia de M.

tuberculosis y M. bovis

UNAM (O-manosilación)

University of Oxford, England (unión a DC-SING)

IB-INTA

2. Identificación de antígenos proteicos en

aislamientos clínicos de alta prevalencia de

Mycobacterium tuberculosis

Dos cepas de brotes de TB en Argentina

Inducen respuesta inmune diferencial en

pacientes tuberculosos

Objetivo: Identificar las proteínas responsables

de esa respuesta diferencial

IB-INTA

Academia Nacional de Medicina

Inst. Malbrán

H: aquellas proteínas presentes en una cepa pero ausentes en la otra son las

responsables de inducir la respuesta inmune diferencial observada

Proteínas pared cepa 12

1

2

3

4

5

6

Table 1. Rates of malachite green decolorization by M. tuberculosis ΔP27 strains

Proteínas pared cepa 10

1

2

3 4

5 6

7

8

Nombre Cepa Fracción Proteína Comentario

10P 2 10 pared hypothetical protein

MtubT1_15527

function unknown

10P 4 10 pared orotate phosphoribosyltransferase

pyrE

involved in pyrimidine

biosynthesis

10P 5 10 pared iron-regulated peptidyl-prolyl-cis-

trans-isomerase A ppiA

ppiases accelerate the

folding of proteins [

10P 7 10 pared F420-dependent glucose-6-

phosphate dehydrogenase

catalyzes oxidation of

glucose-6-phosphate to 6-

phosphogluconolactone

using coenzyme f420

12P 6 12 pared short-chain type

dehydrogenase/reductase

function unknown;

supposed involved in

cellular metabolism

10C 6 10 citoplasma heat shock protein HtrA possibly hydrolyzes

peptides and/or proteins

10SN 10 sobrenadant

e

pyruvate dehydrogenase subunit

E1 aceE

Involved in energy

metabolism; contributes

to acetyl-CoA production

as part of pyruvate

dehydrogenase complex

PR

OT

EIN

AS

DIF

ER

EN

CIA

LE

S

Validación de la expresión diferencial de proteínas

por qRT-PCR

0,0

0,2

0,4

0,6

0,8

1,0

1,2

Rv0

009

Rv0

382

Rv0

407

Rv1

144

Rv2

624

Rv1

223

Rv2

241

Lo

g 2

Rati

o

Genes

3. Identificación de nuevos antígenos para el

diagnóstico serológico de M. paratuberculosis

Estrategia experimental:

1. Extracción de proteínas de pared de M.

paratuberculosis

2. Separación de las proteínas en geles de 2D

3. Transferencia de los geles a filtros de nitrocelulosa

4. Análisis por inmunoblot de los filtros con sueros negativos y

positivos (de bovinos con paraTB)

5. Identificación de los spots diferenciales (positivos-

negativos)

6. Aislamiento del spot correspondiente e identificación por

MALDI-TOF y Mascot

Objetivo:

Extraer y Resolver por medio de electroforesis en 2D las proteínas

de la pared de Mycobacterium spp.

Identificar las proteínas de la pared de M. avium y M. avium subsp.

paratuberculosis reconocidas por sueros provenientes de bovinos con

paratuberculosis.

Comparar el perfil de proteínas de pared de las dos especies,

reconocidas por los sueros de los bovinos.

Electroforésis en 2D de proteínas de pared

de micobacterias para la identificación de

antígenos humorales.

Resultados

M. paratuberculosis

97

66

45

31

21

14

7 4

M. avium

97

66

45

31

21

14

7 4

M. tuberculosis

97

66

45

31

21

14

7 4

M. smegmatis

97

66

45

31

21

14

7 4

El procedimiento descrito permitió la extracción, resolución y separación de proteínas

de la pared de varias especies micobacterianas, inclusive M. tuberculosis

Reconocimiento de proteínas

(sueros de animales con paratuberculosis)

97

66

45

31

21

14

97

66

45

31

21

14

Western blot de proteínas de pared de Mycobacterium avium. Western blot de proteínas de pared de Mycobacterium

avium subsp paratuberculosis.

(confirmados por ELISA y aislamiento del patógeno)

4 7 4 7

7 4

97

66

45

31

21

14

97

66

45

31

21

14

4 7 4 7

M. avium subsp paratuberculosis M. avium

Óvalos negros: proteínas reconocidas por animales con paratuberculosis luego de adsorción y no reconocidas por negativos.

Óvalos verdes: proteínas reconocidas por animales positivos y negativos.

Óvalos naranja: proteínas reconocidas solo por animales positivos, no se encuentran luego de la adsorción.

Rectangulos y cuadrados rosas: proteínas diferenciales reconocidas por animales positivos y / o reconocidas por animales positivos que

desaparecen luego de la adsorción.

* En esta diapositiva la membrana correspondiente a M. avium subsp paratuberculosis fue girada en sentido horizontal (espejo).

Análisis comparativo de proteínas Inmunoreactivas presentes en pared

micobacteriana de las especies M. avium subsp paratuberculosis y M. avium

4. Identificación del regulón Mce3R de

Mycobacterium tuberculosis

INSTITUTO DE BIOTECNOLOGÍA CICVyA INTA.

Las proteínas Mce del género Mycobacterium se encuentran

codificadas en varios operones (cuatro en M. tuberculosis/bovis)

Son importantes para la replicación del bacilo en el hospedador

Se cree que constituyen sistemas de transporte, pero no se conoce

aún la función

yrbE1B::hyg (mce1)

mce2A::km (mce2)

mce3A::km (mce3)

(mce4)

km

km

hyg

Mutantes de los operones mce

0

20

40

60

80

100

2 4 6 8 10 12 14 16 18 20

Weeks post infection

H37Rv

MCE1

MCE2

MCE3 D1

Sobrevida de ratones incoulados por via intratraqueal

Trabajo realizado en colaboracion con el Dr. R Hernandez-Pando del Inst. Nac. de la Nutricion Mexico DF

Posibles funciones de los operones mce

Transporte y Invasión

dominios de transportadores ABC

ABC transporter permeases and substrate-binding proteins

Arruda S, Bonfim G, Knights R, Huima-Byron T, Riley L W: Cloning of an M. tuberculosis DNA fragment associated with entry and survival inside cells. Science 1993, 261:1454-1457.

Kumar A, et al.Comparison of mammalian cell entry operons of mycobacteria: in silico analysis and expression profiling. FEMS Immunol Med Microbiol 2005, 43: 185-195.

Rv1963c

mce3

yrbEA mceA mceC lprM Rv1974 Rv1972

Rv1975 Rv1973

Hyg

Knockout de Rv1963c en M. tuberculosis

Rv1963c codifica para un regulador transcripcional de la familia

Tet

Rv1963c (Mce3R) reprime completamente la expresión del operón

mce3 de M. tuberculosis

Basados en la premisa que todos los genes regulados por un mismo

regulador trascripcional cumplen funciones asociadas, se buscaron

todos aquellos genes cuya expresión este regulada por Mce3R con el

objeto de descifrar la función del operón mce3

Se comparó el proteoma de la cepa mutante (Dmce3R) con la cepa

salvaje (H37Rv)

Objetivo general: descifrar la función de los genes mce

de M. tuberculosis

Mediante búsqueda en bases de datos se investigó en la función de los

genes regulados por Mce3R

Comparación de los proteomas de la pared celular

de la cepa mutante Dmce3R y la salvaje H37RV

MUTANTE SALVAJE

MONOXIGENASA

Probable sintetasa de riboflavina subunidad β

Probable metiltransferasa

Probable

metiltransfe-

rasa

Rv1498c

Proteína

conservada

hipotética

Rv2315c

Probable

succinato

semialdehido

deshidroge-

nasa

Rv0234c

(gabD1)

Probable

acetil-CoA

acetiltransfe-

rasa FadA4

Rv1323

(fadA4)

Myo-inositol-1-

fosfato-sintetasa

Ino1

Rv0046c

(ino1)

WT Mut WT Mut

Extracto Sobrenadante

EphB

EphB

Mono oxigenasa

SDS-PAGE (1D), tinción con

nitrato de plata

Conclusión: El operón mce3 podría codificar para

un transportador cuyo sustratos son lípidos

Se identificaron posibles miembros del regulón Mce3R

Dos de las proteínas identificadas en pared y

sobrenadante de cultivo de la cepa mutante (Rv1936 y

EphB) también fueron detectadas como

sobreexpresadas en experimentos de microarreglos

Muchas de las proteínas sobreexpresadas en la cepa

mutante están involucradas en el metabolismo de

lípidos

5. PROTEINAS DIFERENCIALES DE Salmonella

gallinarum

CEPA VACUNAL-AISLAMIENTO DE CAMPO

OBJ: Identificar proteínas marcadoras de los aislamientos de campo para

determinar si los brotes son debidos a la cepa vacunal.

6. PROTEOMA DE CELULAS MONONUCLEARES DE SANGRE

PERIFERICA DE BOVINOS

Obj. Identificar proteínas biomarcadoras de tuberculosis bovina en sangre

periférica

Proteómica comparativa en muestras de animales infectados y controles sanos

1D 2D

Conclusiones

Aplicaciones de las tecnologías

proteomicas a:

1. Identificación de proteínas bacterianas con

expresión diferencial (Laura Klepp)

4 y 5 Estudios inmunológicos-Inmuno proteomica

para la identificación de antígenos candidatos

(Gabriela Echeverria y M Romano, L. Klepp)

2. Identificación de proteínas con modificaciones

postraduccionales (Lab C. Espitia e IB-INTA)

3. Identificación de interacciones proteína-proteína

Unión a receptores celulares (María Carrol Univ of Oxford e IB-INTA)

6. Biomarcadore de TB bovina (F. Blanco)