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BiomoléculasProteínas
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SITIO CATALITICO DE iNOS
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8enzimas
8hormonas
8receptores
8anticuerpos
8transportadores
8proteínas estructurales
8etc…
Función Proteínas
ej: GAPDH, HMGCoAreductasa, DNA polimerasa, FA
ej: oxitocina, insulina, FSH, GH, BMP
ej: EGF-R, IL-3R, acetilcolinaR
ej: IgG, IgA
ej: hemoglobina, GLUT, CFTR
ej: actina, tubulina, citoqueratina, colágeno
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Respecto del tamaño:- péptidos: oligopéptidos (2 - 10 amino ácidos)
polipéptidos (10 - 100 amino ácidos)
- proteínas (100 - 30.000 amino ácidos)(promedio 2.000)
Nomenclatura de proteínas
Respecto de la cantidad de cadenas polipeptidicas:
- monoméricas: 1,
- oligoméricas: 2 o más, unidos no covalentemente
Aspartamo (2 aa)Oxitocina (9 aa)veneno setasantibióticos
Glucagón (29 aa)
Citocromo c
Hb
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Estructura básica de las proteínasAmino ácidos
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Alanina y Glicina
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Valina, Leucina, Isoleucina y Metionina
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Cisteína
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Prolina
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Fenilalanina
Tirosina
Triptofano
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Serina y Treonina
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Lisina
Arginina
Histidina
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Aspartato, Glutamato, Asparagina, Glutamina
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Unidades básicas de las proteínas
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Estado ionización de los amino ácidos
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Formación del enlace peptídico
reacción de condensaciónsustitución nucleofílica
peptidil transferasas
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ESTRUCTURA PRIMARIA: Enlace peptídico
N-terminal C-terminal
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Formación puente disulfuro
2 R-SH R-S-S-R
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Formación puente disulfuroSecuencia de la insulina de bovino
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Estructura de proteínas
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Proteins can be separated for analysis orcharacterization on the basis of :
•size•solubility•charge•binding affinity
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PURIFICACIÓN DE PROTEÍNAS
Cromatografía: separa a los componentes de una mezclapor su afinidad relativa a dos fases, una móvil y otra estacionaria.• Filtración en gel• Cromatografía de intercambio iónico
Electroforesis: separa los componentes en base a sus caraterísticas de carga y/o tamaño
•Electroforesis en geles de poliacrilamida (PAGE)•Isoelectroenfoque (IEF)
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Intercambio Iónico
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Cromatografía deAfinidad
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ELECTROFORESIS
Dodecilsulfato de sodio (SDS)
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Cálculo de masa molecular
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Separación por tamaño:
•Dialisis•Ultrafiltration•Ultracentrifugation
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Métodos de separación por solubilidad
•Precipitación con sulfato de amonio: las proteínas son menos solubles en soluciones con sales presentes (Salting out)Ej: 0.8 M sulfato de amonio precipita fibrinógeno en cambio para precipitaralbúmina plasmática se requiere una solución de 2,4 M de la sal
•Solubilidad diferencial por diferentes solventes
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Methods for structural determinations of proteins•X-ray diffraction (crystallography) -- solid•3-D structure determination•NMR spectroscopy -- liquid•provides structural and functional information aboutparticular atoms in a protein•Circular dichroism spectroscopy -- amount and type ofsecondary structure•Mass spectroscopy -- determination of very small amountsof protein
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Agentes desnaturantes
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ESTRUCTURA TRIDIMENSIONAL
FUNCIÓN
PATOLOGÍA
ESTRUCTURA CANTIDAD
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Concentración
Velocidad de síntesis Velocidad de degradación
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ALTERACIONES EN CANTIDAD
SÍNTESIS: (AUMENTO O DISMINUCIÓN)
MUTACIONES GENÉTICASALTERACIONES TRANSCRIPCIONALESALTERACIONES TRADUCCIONALES
DEGRADACIÓN: (AUMENTO O DISMINUCIÓN)
ACTIVIDAD PROTEOLÍTICA (proteasas)PROTEÓLISIS DEPENDIENTE DE UBIQUITINA
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FUNCIÓN
PATOLOGÍA
ESTRUCTURA CANTIDAD
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Falla en procesamiento de mRNA de beta globina
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FALLAS ESTRUCTURALES
MUTACIONESMODIFICACIONES POSTRADUCCIONALESPROCESAMIENTO (splicing)PROTEÓLISIS
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Hemoglobin S Disorders
Point Mutation of B Globin Gene
Hgb S Gene - 8% in American Blacks- 30% in Some African Populations- Confers Resistance to
plasmodium falciparum Malaria
GLU
VAL
HgA
HgS6th
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Sickle Cell Disease
Deoxygenation
Polymerizationof Hgb S
Sickle cell
O2
↑ Ca↓ K, O2
(or ↓H20, ↓pH)
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PRION
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PROTEÍNAS PLASMÁTICAS
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MOVIMIENTO DE FLUIDOS A TRAVES DE LA PARED CAPILAR
CAPILAR
TEJIDO
PRESION ONCÓTICA
PRESIÓN HIDROSTÁTICA
PHc
Liquido Intersticial
PH-li
PO-c
PO-li
ARTERIA VENA
EDEMA: Desbalance de fluidos
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CAUSAS DE EDEMA
1) Aumento de la Presión Hidrostática2) Obstrucción linfática3) Retención de sodio4) Inflamación5) Hipoproteinemia:
Glomerulopatías (pérdida de proteínas)Cirrosis hepáticaDesnutriciónGastroenteropatía (pérdida de proteínas)
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1. based on the migration of charged proteinparticles in an electric field2. direction and rate of migration depends ontype of charge of protein, size of protein, intensity of the electric field, support medium3. confirms the presence of a gammopathy4. allows classification as either polyclonal ormonoclonal
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Tracing of serum protein electrophoresis -abnormal
Albumin
α1
α2β
γ
M spike
Stained gelimage
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Patrón normal de proteínas plasmáticas
α-1 antitripsina transferrina IgGLDL IgA
α-2 macroglobulina C3 IgMceruloplasmina IgD
IgE
4,0 g%
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Patrón anormal
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PATOLOGÍA FRACCIÓN PLASMÁTICA
Síndrome nefrótico Albúmina α2
Hepatitis aguda α1
Reumatismo α2 γ
Hemorragia digestiva β
Inflamación crónica α1 α2
α1: constituída en un 80-90% por α1-antitripsina, proteasa de fase aguda
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![Page 94: Proteínas...PURIFICACIÓN DE PROTEÍNAS Cromatografía: separa a los componentes de una mezclapor su afinidad relativa a dos fases, una móvil y otra estacionaria. • Filtración](https://reader030.vdocuments.co/reader030/viewer/2022040909/5e8126673d20544e8f4a2119/html5/thumbnails/94.jpg)
![Page 95: Proteínas...PURIFICACIÓN DE PROTEÍNAS Cromatografía: separa a los componentes de una mezclapor su afinidad relativa a dos fases, una móvil y otra estacionaria. • Filtración](https://reader030.vdocuments.co/reader030/viewer/2022040909/5e8126673d20544e8f4a2119/html5/thumbnails/95.jpg)
PARAPROTEINEMIAS(Cambios cualitativos:aparición proteína no habitual)
MacroglobulinemiaCrioglobulinemiaMieloma MúltipleFetoproteína (adulto)Proteína C Reactiva
ALTERACIONES DE PROTEINAS PLASMÁTICAS
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DISPROTEINEMIAS(Cambios cuantitativos:ana, hipo o hiper).
AnalbuminemiaAfibrinogemiaAcatalasemiaAgamaglobulinemiaHipogamaglobulinemiaHiperglobulinemia
ALTERACIONES DE PROTEINAS PLASMÁTICAS