procedimiento para la investigaciÓn de fluido seminal

DEPARTAMENTO DE CIENCIAS FORENSESORGANISMO DE INVESTIGACIÓN JUDICIAL (OIJ)

PODER JUDICIAL, COSTA RICAPROCEDIMIENTO PARA LA INVESTIGACIÓN

DE FLUIDO SEMINAL MEDIANTE LA DETERMI-NACIÓN DE PROTEÍNA P30

PROCEDIMIENTO DE OPERA-CIÓN NORMADO ESPECIFICO

P-DCF-ECT-BIO-36

VERSIÓN: 04 Rige desde: 03/08/2021 PAGINA: 1 de 13

Elaborado o modificado por: Revisado por Líder Técnico

Dra. Paola Solano NaranjoLíder Técnico de la Sección de Biología Fo-

renseDr. Rolando Hidalgo Sibaja

Perito Judicial 2B, Sección de Biología Fo-rense

Visto Bueno Encargado de Calidad: Aprobado por:

Lic. Roberto Morales MonteroEncargado de la Calidad de la Sección de

Biología Forense

Lic. John Vargas FonsecaJefe, Sección de Biología Forense

CONTROL DE CAMBIOS A LA DOCUMENTACIÓN

Versión Fecha deAprobación

Fecha deRevisión

Descripción del Cambio SCD Solicitadopor

01 07/05/2019 06/08/2019 Versión Inicial del Procedimiento 013-19 JVF

02 06/08/2019 02/06/2021Modificación de anexo y aclaración

de puntos del procedimiento enlas fotografías y controles.

022-19 JVF

03 02/06/2021 03/08/2021

2. Alcance.3. Referencias.

4. Equipos y Materiales.6. Condiciones ambientales.

7.1 Preparación inicial.

021-21 JVF

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DEPARTAMENTO DE CIENCIAS FORENSES VERSIÓN 04 Página: 2 de 13

PROCEDIMIENTO PARA LA INVESTIGACIÓN DEFLUIDO SEMINAL MEDIANTE LA DETERMINACIÓN

DE PROTEÍNA P30P-DCF-ECT-BIO-36

7.2 Apertura de nuevo lote de kit.7.3 Montaje del análisis de las

muestras.10. Reporte de análisis y resulta-

dos.14. Anexos.

04 03/08/2021 -

4. Equipos y Materiales.7.1 Preparación inicial.

7.2 Apertura de nuevo lote de kit.7.3 Montaje del análisis de las

muestras.Incorporación del procedimiento

con QUIK DME

028-21 JVF

ESTE PROCEDIMIENTO ES UN DOCUMENTO CONFIDENCIALPARA USO INTERNO DEL DEPARTAMENTO DE CIENCIAS FORENSES

SE PROHÍBE CUALQUIER REPRODUCCIÓN QUE NO SEA PARA ESTE FIN

La versión oficial digital es la que se mantiene en la ubicación que la Unidad de Gestiónde Calidad defina. La versión oficial impresa es la que se encuentra en la Unidad de Ges-tión de Calidad. Cualquier otro documento impreso o digital será considerado como co-

pia no controlada

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1. Objetivo

El objetivo de este PON es indicar el procedimiento para realizar la determinación de la presenciade la proteína p30 presente en el fluido seminal, indicativo de la posible presencia de semen encasos forenses trabajados en la UCII.

2. Alcance

Este PON se emplea para verificar o descartar la presencia de fluido seminal por medio de la de-terminación de la proteína p30, en extractos que provienen a partir de muestras levantadas de losindicios trabajados en la UCII cuando no se tiene un resultado positivo en la prueba presuntiva desemen, sin embargo se tiene resultado de lámpara de luz forense positivo o donde la sospecha dela presencia de semen es muy alta de acuerdo al PON “Búsqueda, levantamiento, análisis, emba-laje y conservación de elementos traza”.Además este procedimiento es llevado a cabo por partede los analistas competentes, basados en la validación respectiva y sus resultados publicados enel informe de validación cuya identificación es: 004-BIO-VAL-2019 y 004-BIO-VAL-2021

3. Referencias

• Coastal Healthcare. 1992. Bloodborne Pathogens. Virginia Beach, VA.USA.

• Gartside, Bill et al. 2003. Estimation of Prostatic Specific Antigen extraction efficiency

from Forensic Samples using the Seratec PSA semiquant semiquantitative Membrane Test.Forensic Science Comunications. Vol 5, N° 2.

• Hochmeister, Manfred et al. 1999. Evaluation of Prostatic Specific Antigen (PSA)

Membrane test assays for the forensic identification of seminal fluid. Journal of ForensicScience. 44:1057-1060.

• Informe de validación para determinación de especie humana por medio de ABAcard® p30 Test For the forensic Identification of semen ®. 2019. Sección de Biología Forense. Departamento de Ciencias Forenses. San José, Costa Rica.

• Adendum de la Validación para determinación de especie humana por medio de ABAcard® p30 Test For the forensic Identification of semen ®. 2021. Sección de Biología Forense. Departamento de Ciencias Forenses. San José, Costa Rica.

• Panfleto incluido en el Kit para determinación de p30: “OneStep ABAcard� �p30 Test For The Forensic Identification of Semen”.

• Roitt, Ivan et al. 2000. Inmunología. Harcourt, España. Quinta edición

• Stenman, Ulf-Hakan et al. 1999. Prostatic Specific Antigen. Cancer Biology. 9:83-93.

• Villoutreix, Bruno et al. 1996. Structural investigation of the α �1- antichemiotrypsine: Prostatic Specific Antigen complex by comparative model building. Protein Science. 5:836-857.

4. Equipo y Materiales

• Bolsa de polietileno de alta densidad Fisherbrand, color rojo, o similar, para el descarte de material bioinfeccioso, no punzo cortante.

• Cámara fotográfica digital, marca Canon EOSRebel T4i, o similar.• Centrífuga marca “Thermo scientific” o similar, con capacidad para alcanzar 13000 rpm.• Computadora con acceso a red y al Sistema de Automatización del Departamento de Cien-

cias Forenses (SADCF).

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• Cronómetro o reloj de intervalos que marque minutos y segundos. (rango 0 a 60 minutos)• Formulario “Registro de controles de Kit de p30” (P-DCF-ECT-BIO-36-R1 )” (Ver el Gestor

documental)

• Cubre cabezas

• Formulario para Reactivos preparados (M-DCF-GCG-JEF-01-R2) (Disponible en el gestor documental).

• Formulario “FORMULARIO DE REVISIÓN Y/O TRASLADO DE EXTRACTOS CONFIRMATO-RIOS” (P-DCF-ECT-BIO-37-R13).

• Gabacha limpia de tela o desechable.• Gradilla para tubos de micro centrifuga limpias.• Guantes desechables de nitrilo o similares.• Lapicero.• Lápiz de grafito. • Libros de control de uso de la centrifuga, vórtex y thermomixer.• Marcador con tinta indeleble.• Mascarilla desechable.• Micropipetas limpias* con volumen graduable entre los 200 a 1000 uL. • Papel toalla desechable o toallas de talles “Kimtech Prep* brand”, de Kimberly Clark o simi-

lares.• Puntas de 1000 uL, nuevas y estériles para micropipetas.• Recipiente con bolsa de polietileno de alta densidad Fisherbrand, de color rojo o similar

para el descarte de material bioinfeccioso.• Refrigerador con temperaturas cercanas a los 4 °C (rango de 2- 8 °C)• Thermo Mixer marca Eppendorf o similar, con los siguientes parámetros de operación: ran

go de temperatura de 1 a 100 °C con incertidumbre de ±0,5°C en temperaturas entre 20 y45 °C y ±1,0°C en temperaturas fuera del rango anteriormente indicado y frecuencia de mezcla entre 300 y 3000 rpm.

• Toallas desechables tipo “Kimwipes”.• Tubos para microcentrífuga de 1,5 mL nuevos y autoclavados. • Vórtex marca “Fisher Scientific Touch Mixer” Modelo 231 o similar.

* Limpie la micropipeta por la parte externa con DNA away o similar y luego con etanol al 70%cada vez que se vaya a usar.

5. Reactivos y Materiales de Referencia

• Agua tipo Milli -Q o similar

• Control positivo: se utiliza como control positivo una muestra de semen en una dilución de1/50. La dilución se hace con agua tipo Milli -Q o similar.

• Control negativo vigente.

• DNA away: Solución descontaminante de ADN y ADNasas. (N.º de Cat: 7010 o similar)

• Etanol al 70% grado comercial.

• Kit comercial para la determinación cualitativa de p30: “ABA card ® p30 Test For the fo-

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rensic Identification of semen” el cual contiene los siguientes materiales:

◦ Dispositivo de prueba (placas inmunocromatográficas) empacados individualmente consu correspondiente pipeta plástica o dispensador de la muestra.

◦ Buffer de extracción. (30 mL)

◦ Panfleto informativo con el principio de la prueba y las instrucciones correspondientes.

6. Condiciones Ambientales:

Condiciones de trabajo no son críticas para el análisis. La temperatura no es un factor crítico.

7. Procedimiento

7.1 Preparación inicial.

7.1.1. Utilice, como perito encargado del montaje del análisis: Cubrecabezas guantes, gabacha ymascarilla desechable.

7.1.2. Limpie cuidadosamente la mesa de trabajo con DNA Away o similar y/o etanol al 70% utili-zando toallas de papel desechables.

7.1.3. Busque los extractos de la muestra a analizar, los cuales se encuentran depositados en elrefrigerador ubicado en el laboratorio central, dentro del deposito con llave que se encuentra den-tro de este.

Nota 01: El término “extractos” hace referencia a los tubos eppendorf de 1,5 mL con el recorte dela muestra del indicio que preparó el técnico.

7.1.4. Proceda a tomar el Kit para determinación de p30 “ABAcard® p30 Test For the forensicIdentification of semen ®” que este en uso, verificar que la fecha de vencimiento no se haya cum-plido. Si se gastó o se pasó la fecha de vencimiento abra un nuevo kit con un lote vigente.

7.1.5. En caso que abra un kit nuevo, revise que el número de lote sea igual al que esta en uso,en caso que sea uno diferente debe de montar un control positivo y uno negativo por lote.

7.2 Apertura de un nuevo lote de el Kit (Montaje de los controles)

7.2.1. Prepare los controles positivos y negativos.

7.2.2. Para la preparación del control positivo, tome el trozo de papel que se preparó como controlpositivo (ver anexo 3 en el PROCEDIMIENTO PARA LA BÚSQUEDA, LEVANTAMIENTO, ANÁLISIS,EMBALAJE Y CONSERVACIÓN DE ELEMENTOS TRAZA) y agréguelo en un tubo de 1,5mL y realicela rotulación de tal manera que se identifique que este es el control positivo.

7.2.3. Para la preparación del control negativo, tome el trozo de papel que se preparó como con-trol negativo (ver anexo 3 en el PROCEDIMIENTO PARA LA BÚSQUEDA, LEVANTAMIENTO, ANÁLI-SIS, EMBALAJE Y CONSERVACIÓN DE ELEMENTOS TRAZA) y agréguelo en un tubo de 1,5mL yrealice la rotulación de tal manera que se identifique que este es el control negativo.

Nota 02: los viales con los controles positivos o negativos para controlar el lote del kit de p30, lotienen en su mesa de trabajo los peritos analistas.

Nota 03: En caso de que no tenga controles negativos o positivos, o que estén vencidos, informe-le al encargado de la preparación del control positivo y negativo para semen (análisis de p30) se-gún el rol establecido en la unidad.

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7.2.4. Agregue utilizando la micropipeta de 100-1000uL, 750uL de buffer de extracción que vienecon el kit al tubo de microcentrifuga del control positivo y del control negativo. Agite con ayudadel vórtex por unos segundos y luego deje reposar los extractos por al menos dos horas aproxi-madamente a temperatura de 2- 8°C.

7.2.5. Para el periodo de extracción utilice el thermomixer. La temperatura de funcionamiento sepuede programar de dos maneras mediante el programa que ya esta guardado en el themomixercon el protocolo que corresponde para p30, el cual ya esta listo para su uso en el aparato, o demanera manual regulando la temperatura mediante el tablero que para ese efecto tiene el ther-momixer, de ambas formas la temperatura se va a mantener entre los 2 - 8°C.

7.2.6. Una vez pasado el tiempo de extracción, deje que las muestras se temperen.

7.2.7. Tome dos sobres que contienen las placas inmunocromatográficas de la caja con nuevolote.

7.2.8. Rotule cada una de las placas que serán utilizadas en el montaje de los controles, manual-mente de forma tal que no se presente duda o inconsistencia alguna al momento de leer los resul-tados de cual corresponde a la placa del control positivo y cual a la placa del control negativo.

7.2.9. Centrifugue por 8 minutos aproximadamente a 13.000 rpm aproximadamente, los tubos demicrocentrífuga con los controles.

7.2.10. Al finalizar la centrifugación, agregue 6-7 gotas (con el gotero suministrado en el sobrecon la placa) o 200 uL del sobrenadante del extracto de los controles en el pocillo rotulado como“s” de las placas que se rotularon previamente.

7.2.11. Deje correr por 10 minutos aproximadamente y lea los resultados pasado este tiempo. Sedebe realizar la rotulación de la placa con el resultado obtenido, de manera que sea clara la inter-pretación del resultado observado, ya sea positivo o negativo.

7.2.12. En la placa de control positivo debe observase el marcaje de dos líneas, tanto a la alturade la marca “T” como otra a la altura de la marca “C” de la placa. En el control negativo de obser-vase únicamente una marca a la altura de la marca “C” de la placa. Si alguno de estos dos no semarca de la manera descrita, los mismos se consideran como “no aceptable” y se debe repetircon otras placas de la misma caja, ambos controles.

7.2.13. Si el resultado es Aceptable, repórtelo en el Formulario “Registro de Controles para lotes deKit de p30” (P-DCF-ECT-BIO-36-R1. V01) y continúe con el montaje de los análisis a las muestras.Para esto proceda a partir del punto 7.3 de este PON.

7.2.14. Si el resultado es No Aceptable, tome otra caja del mismo lote y proceda igual del punto7.2.3 al 7.2.7 de este PON, si el resultado sigue siendo No Aceptable, cambie de lote de Kit dep30.

7.2.15. Reporte en el Formulario “Registro de Controles para lotes de Kit de p30” (P-DCF-ECT-BIO-36-R1. V01) el resultado no aceptable de este lote de p30 e infórmeselo a la encargada de com-pras para que proceda como se debe con respecto al proveedor de la prueba.

7.2.16. Una vez con los resultados de los controles de el kit aceptables, tome una fotografía testi-go del resultado, la cual debe adjuntarse junto con el “Registro de Controles para lotes de Kit dep30”(P-DCF-ECT-BIO-36-R1), como lo indica la Nota 04.

7.2.17. Continúe con el montaje de el análisis en las muestras.

Nota 04: El formulario “Registro de Controles para lotes de Kit de p30” (P-DCF-ECT-BIO-36-R1.

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V01), cada vez que se tengan que actualizar guárdelo en G:\Calidad 2.0\7. Trazabilidad\Reacti-vos\2. Controles de fluidos biológicos\Resultados de los Controles de Inmunocromatografías\P30.

Nota 05: Los controles positivos y negativos, únicamente se montan al cambiar el lote de las pla-cas, de lo contrario los resultados de los controles se consideran “Aceptables” para todas las pla-cas pertenecientes al mismo lote.

7.3 Montaje del análisis en las muestras

7.3.1. Revise como perito encargado de los análisis los microtubos y su rotulación, como se des-cribe en el apartado “Apertura del proceso RAS y Revisión” del PON de “Manejo General de casosen la UCII de la sección de Biología Forense”.

7.3.2. Una vez realizada la revisión correspondiente, realice el registro de las muestras tal y comolo indica el apartado “Apertura del proceso RAS y Revisión” del PON de “Manejo General de casosen la UCII de la sección de Biología Forense”. Una vez finalizado este proceso continúe con elmontaje de los análisis para cada muestra.

Nota 06: Si el montaje de los análisis será realizado por un técnico, proceda con el traslado de losextractos para que el técnico se encargue de hacer la apertura del RAS en el sistema.

7.3.3. Agregue de 750 ul de buffer de extracción que viene con el kit a cada tubo con muestra.

7.3.4. Coloque los extractos en agitación a una velocidad de 400 rpm aproximadamente y a unatemperatura comprendida entre los 2 y los 8 grados en el thermomixer, esto por dos horas apro-ximadamente.

7.3.5. Para el periodo de extracción utilice el thermomixer. La temperatura de funcionamiento sepuede programar de dos maneras mediante el programa que ya esta guardado en el themomixer,el cual ya esta listo para su uso en el aparato, o de manera manual regulando la temperatura me-diante el tablero que para ese efecto tiene el thermomixer, de ambas formas la temperatura se vaa mantener entre los 2 - 8°C.

7.3.6. Al finalizar el periodo de extracción, centrifugue por 8 minutos aproximadamente a 13.000rpm aproximadamente, los tubos de microcentrífuga con las muestras.

7.3.7. Tome tantas placas como muestras tenga que realizar el análisis de p30 de la caja del Kit.

7.3.8. Rotule la superficie de cada placa en el extremo libre con la etiqueta que para ese fin se im-primió cuya información es la siguiente: el número de identificación de muestra, número de caso,tipo de muestra y tipo de análisis a realizar. Este paso debe realizarse momentos antes de que fi-nalice el periodo de extracción y centrifugación de las muestras, con el fin de evitar la exposiciónprolongada al ambiente de las placas a utilizar.

Nota 07: En el momento de realizar la rotulación de las placas inmunocromatográficas, se debecalcular el tiempo de tal manera que no se consuma el periodo de extracción y centrifugación delas muestras, debido a que esto podría ocasionar un retraso en el montaje de los análisis de lasmismas. Para cuando las muestras salgan de extracción ya las placas deben estar rotuladas.

7.3.9. Tome las placas que rotuló previamente y agregue 6 gotas o 200 uL del sobrenadante delextracto, al pozo que se encuentra al lado de la letra “S” en la placa.

7.3.10. Lea el resultado a los diez minutos aproximadamente. Sin embargo tenga presente que re-sultados positivos se pueden leer desde el primer minuto, la pronta aparición del resultado positi-vo va a depender de la concentración de p30 presente en la muestra. Resultados leídos posteriora los 10 minutos pueden ser catalogados como falsos positivos, por lo tanto no se recomienda leer

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la placa mucho tiempo después.

Nota 08: Tenga presente que independientemente de el resultado, siempre se debe de marcar lalínea que esta a la altura de la letra “C” marcada en la placa. De lo contrario debe repetir el mon-taje de la muestra a partir del punto 7.3.7. Si continua sin marcarse en alguna de las muestras,solicite otro extracto al técnico que le hizo el traslado de esa muestra y repita a partir del punto7.3.3 de este PON.

7.3.11. Haga la lectura de los resultados las muestras y rotule las placas con el resultado obtenidode tal manera que la rotulación de este sea claro y coincidente con lo observado en la zona de lec-tura según la siguiente interpretación:

• Positivo: Cuando el color del área “T” sea del mismo color o más intenso que el color delárea “C”.

• Positivo débil: Cuando el color del área “T” sea menos intenso que el color del área “C”.

• Negativo: Cuando solamente se marque la línea del área “C”

7.3.12. Tome la fotografía (s) de la (s) placa (s) donde se evidencie el resultado. Para esto conec-te la cámara fotográfica a la computadora y colóquela en el soporte de la cámara.

7.3.13. Utilice el programa QuickDownloader para la toma de la(s) fotografía(s) de la(s) placa(s)donde se evidencie el resultado obtenido. Para la utilización del programa, refiérase al Procedi-miento para el uso del programa QuickDME en la Sección de Biología Forense.

Nota 09: Si no se ve de manera evidente el resultado en la fotografía, debe de realizar la verifica-ción del resultado por medio de un chequeo independiente. Para esto proceda como se describeen el “Procedimiento Manejo general de casos en la UCII de la Sección de Biología Forense”

Nota 10: Las fotografías no deben de ser editadas, ni abiertas en un visualizador de computadoraantes de ser incorporadas al programa. Se conecta la cámara o la tarjeta de memoria y directa-mente se incorporan por medio de dicho programa.

7.3.14. Debe hacer una subida de fotografías por cada proceso de toma de las mismas, sea sola-mente una foto de una placa o varias que plasmen varias placas de un mismo caso.7.3.15. Revise la copia de trabajo que genera el programa cuando se incorporan las fotografías alservidor, esta copia se debe colocar en el disco de red “I:\”. Debe utilizar la misma nomenclaturapara la carpeta “Numero BIO-Año-BIO”, (la cual generalmente ya está creada debido a que lostécnicos ya han incorporado las fotos correspondientes a los procesos anteriores). Dentro de lacarpeta debe colocar directamente las imágenes tomadas y todos reportes de subida correspon-dientes.7.3.16. Adjunte al legajo correspondiente de cada caso, el reporte generado por el programa (lla-mado “TransferReport”) para cada proceso de subida de fotografías. Para esto, en el SADCF, ad-junte el documento como “Reporte generado por software” y en el detalle indique “Fot. SP”. Si poralguna razón se omitió adjuntar el reporte desde el RAS correspondiente, incorpórelo como “docu-mento adjunto” en la funcionalidad de incorporación de documentos.

Nota 11: Si no caben todas las placas de un mismo caso en el mismo cuadro a la hora de tomarla fotografía, se pueden separar en grupos para tomar las fotografías de manera separada, sinembargo, todas las fotos del mismo caso deben ser incorporadas al programa QuickDME en unasola subida.

7.3.17. Enfoque y asegúrese que se observe el número del caso y número de muestra en la placa

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o placas y tome la fotografía.

Nota 12: En caso de que alguna de las fotografías subidas al QuickDME requiera una aclaración,diríjase al programa AccessDME y registre una etiqueta a la imagen en dicho sistema, por mediode la opcion “Edit/edit tags”. Luego de esto, proceda a imprimir un “TagReport” en las opciones“Reports/Tag…”. Este TagReport debe sustituir el reporte mencionado en el punto 7.3.16.

Nota 13: En caso de que haya un error al digitar los datos relacionados al proceso de subida,como puede ser un numero de OT o un numero único incorrectos, puede dirigirse al programa Ac-cessDME, busque el proceso de subida especifico y cambie los datos en las subpestañas de “CaseInfo” o “DownloadInfo” y luego salve la nueva información en el botón “Save changes”. Finalmen-te vuelva a generar el TransferReport en “Reports/Tranfer…” y adjúntelo al proceso que corres-ponda.

Nota 14: Las fotografías no pueden ser eliminadas de la base de datos del Software por los usua-rios. Pero si todo el proceso de subida está incorrecto, se puede solicitar la purga del proceso desubida de imágenes. En estos casos se requiere la autorización por correo electrónico de la Jefatu-ra de la Sección para que el usuario con perfil de administrador en el sistema ejecute la misma.Ademas de esto, en casos debidamente justificados, se pueden purgar fotos individuales al inicio oal final de un proceso de subida en el QuickDME, y de realizarse, proceda nuevamente a generarun TransferReport en programa AccessDME en “Reports/Tranfer…” y adjúntelo al proceso que co-rresponda. Se aclara que si se purga la totalidad de un proceso de subida, el usuario debe tenerdisponibles las imágenes para realizar un nuevo proceso de subida o la posibilidad de repetir latoma de las fotografías, en caso de ser necesario.

7.3.18. Reporte los resultados ya sea en el RAS del sistema o en el proceso de Datos y Resultadosde la siguiente manera:

• Si es en el RAS:

◦ Estando en la pestaña de “resultados en serie” , seleccione en “Metodología” Reaccióninmunocromatográfica de anticuerpos monoclonales específicos para la detección de laproteína P30 humana.

◦ Vaya a la tabla de “Datos y Resultados registrados a los objetos” y seleccione las mues-tras a la que le va a reportar el resultado.

◦ Luego en Valor 1 seleccione: POSITIVO, NEGATIVO O POSITIVO DÉBIL, de acuerdo alos criterios de interpretación descritos en el punto 7.3.9 de este PON y darle guardar(icono de disket verde).

◦ En “valor 2” colocar el número de Lote del Kit de análisis utilizado y en “valor 3” colocarla fecha de vencimiento del Kit del número de lote en mencionado.

◦ Una vez asignados los valores 1, 2 y 3 continuar con la edición del RAS llenando cadauna de las pestañas posteriores.

Nota 15: Para las pestañas Documentación anexa se incorpora a cada caso el Formulario de revi-sión y/o traslado de extractos confirmatorios según el proceso indicado en el apartado “Aperturadel proceso RAS y Revisión” del PON de “Manejo General de casos en la UCII de la Sección de Bio-logía Forense” y el “TransferReport” correspondiente a la incorporación de las fotografías, según loindicado en el punto 7.3.16 del presente procedimiento.

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Nota 16: Para la pestaña “Controles de análisis” reporte el resultado de los controles como sedescribe en el punto 7.3.20 de este PON.

Nota 17: La pestaña “Condiciones ambientales” no se llena.

• Si es reportando directo en “Registro de Datos y Resultados”

◦ Diríjase a la pestaña “Resultados a objetos” seleccione del árbol de objetos la muestraa la cual le va a reportar el resultado y ahí en la función “ análisis realizados” que apa-rece, seleccione el “check verde” para que se despliegue la plantilla de registro de re-sultados de análisis”, Luego en Valor 1 seleccione: POSITIVO, NEGATIVO O POSITIVODÉBIL, de acuerdo a los criterios de interpretación descritos en el punto 7.3.11 de estePON y darle guardar (icono de disket verde).

◦ En “valor 2” colocar el número de Lote del Kit de análisis utilizado y en “valor 3” colocarla fecha de vencimiento del Kit del número de lote en mencionado.

◦ Una vez asignados los valores 1, 2 y 3 continuar llenando cada una de las pestañasposteriores. En este caso tampoco se llena la pestaña “Persona presentes”.

7.3.19. Una vez reportados los resultados (ya sea en un proceso RAS o el proceso datos y resulta-dos) suba las fotografías al SADCF, ya sea en RAS o en Datos y resultados, para esto vaya a lapestaña que se llama “Documentación anexa” , si es en RAS seleccione el número de OT que co-rresponda para incorporar la fotografía de los análisis confirmatorios, seleccione “incorporar” y deldesplegable que emerge complete de la siguiente manera:

• En tipo de documento: “Hoja de resultados de inmunoensayo”.

• En “Detalle del documento” coloque Inmunocr- p30.

Nota 18: En caso de que tenga que subir varias fotos del mismo tipo de análisis con fotos delmismo caso, entonces en detalle coloque Inmunocr- p30 y consecutivo para identificar cuantasfotos son. Por ejemplo: “ Inmunocr- p30 1” y en la siguiente foto “ Inmunocr- p30 2”, etc.

• En “Ruta del documento” busque la dirección del documento adjuntar (carpeta intermediadonde las almacenó temporalmente) y guárdelo haciendo click sobre el disquete verde.

7.3.20. Proceda a hacer el reporte del resultado de los controles positivo y negativo del análisis(para esto tome los que se realizaron por lote punto 7.2 de este procedimiento). Esto se hace enel apartado del proceso de datos y resultados o en RAS en el punto “Controles de análisis” ahí se-leccione la cruz verde para desplegar la casilla de trabajo y complete la información de la siguien-te manera:

• En “tipo de control” seleccione POSITIVO o NEGATIVO según corresponda.

• En descripción escriba el nombre de la prueba “p30/CT”

• En identificación coloque el código del control que corresponda a ese control con el lote.

• En “Tipo de resultado” coloque “aceptable” o “no aceptable según corresponda.

7.3.21. Termine cerrando la pantalla de trabajo haciendo click sobre el disquete verde.

7.3.22. Si estaba en el proceso RAS proceder a finalizarlo y continue luego a finalizar cada proce-so de Datos y Resultados que se generó a partir de ese proceso RAS (de cada orden de trabajoque quedó dentro de ese proceso de análisis en serie), revisándolo y prefinalizandolo.

7.3.23. Una vez prefinalizado el proceso de Datos y Resultados, dele destino a las muestras y a los

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extractos que le se le trasladaron para este análisis.

7.3.24. Finalice el proceso de datos y resultados.

7.3.25. Guarde las muestras en refrigeración (2-8°C) si no va a continuar con más análisis.

7.3.26. Limpie la mesa con etanol 70% y/o DNA away utilizando una toalla desechable.

Nota 19: Sobre como generar el RAS y como llenar los demás aspectos del “registro de Datos yResultados” o “RAS”que no sean propiamente de resultados refiérase al Manual del SADCF.

8. Criterios de Aceptación o Rechazo de Resultados:

En un resultado positivo se debe de observar la presencia de dos líneas color rosado, una en elárea de “T” y la otra en el área de “C”. En un resultado negativo se debe observar la presencia desolo una línea color rosado en el área de “C”. El resultado se invalida cuando no se observa la pre-sencia de una línea visible en el área de “C” tanto en un resultado positivo como negativo o bien,cuando no hay migración de la muestra en la placa.

Si esto sucede, se deberá repetir la prueba con una nueva placa. Si el resultado de esta repeticiónes el mismo y los controles (positivo y negativo) presentan resultados correctos, se debe pedirotra muestra al técnico que le pasó el extracto y si el resultado se mantiene se deberá notificar alLíder Técnico para evaluar el reporte de esta muestra como no concluyente.

9. Cálculos y evaluación de la incertidumbre

N/A.

10. Reporte de Análisis y Resultados.

Los resultados del análisis del proteína p30 deben reportarse en un proceso de Datos y resultadosgenerado en el SADCF para el número de OT respectivo, o bien si el montaje se hizo en lote en elproceso RAS generado para las muestras de los número de OT montados.

La interpretación de los resultados reportados, para concluir en el Dictamen de Análisis Criminalís-tico es la siguiente:

Observación Resultado Interpretación Conclusión

Ambas líneas se mar-can a los 10 minutos. (T) y (S)Con una intensidad igual o similar entre ambas.

Positivo Positivo por presenciade proteína P30

En los indicios <<pren-da_objeto_cuestiona-do>> se detectó la presencia de la proteí-na p30 (antígeno pros-tático específico), la cual se utiliza como marcador forense para la determinación de semen. Queda a crite-rio de la Sección de Bioquímica, determinarsi la cantidad es sufi-ciente para realizar análisis comparativo.

Ambas líneas se mar- Positivo débil Positivo por presencia En los indicios <<pren-

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can a los 10 minutos. (T) y (S)Con una intensidad de la linea (T) menor a la de (S).

de proteína P30 da_objeto_cuestiona-do>> se detectó la presencia de la proteí-na p30 (antígeno pros-tático específico), la cual se utiliza como marcador forense para la determinación de semen. Queda a crite-rio de la Sección de Bioquímica, determinarsi la cantidad es sufi-ciente para realizar análisis comparativo.

Solamente se marca lalínea de (S) a los 10 minutos.

Negativo Negativo por la presen-cia de proteína P30.

Si no hay nada más en el indicio: “Des-pués de realizar la búsqueda de evidenciatraza en el indicio "X", no se encontró presen-cia de la misma en este.”

Si el indicio tiene otros análisis de muestras con resul-tados positivos: No se concluye en el dic-tamen criminalístico por presencia de se-men.

11. Medidas de Seguridad

Recuerde colocarse la gabacha y los guantes antes de manipular las muestras, ya que los fluidosbiológicos son fuente potencial de enfermedades por lo tanto debe manipularse según normas es-tablecidas.

Debe asegurarse de limpiar el área de trabajo con etanol al 70% y/o descontaminante de ADN yADNasas DNAway o similar, antes y después de realizar las pruebas.

Sea cuidadoso con la rotulación de las placas y verifique que el número de rotulación de la mismaconcuerde con el número de rotulación de la muestra.

Abra un tubo eppendorf a la vez, dispense la muestra en la placa correspondiente, ciérrelo inme-diatamente para evitar confusiones y contaminación.

Después de que utilizó la pipeta o dispensador para colocar la muestra en la placa, descarte en elrecipiente de plástico duro Fisherbrand, de color rojo, o similar, para el descarte de material bioin-feccioso, para evitar su reutilización.

Las placas utilizadas en el análisis deben ser desechadas en el recipiente rígido para descarte de

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punso cortantes de color rojo.

Ante una eventual contaminación con la muestra analizada proceda a lavarse la zona afectada conabundante agua de tubo y jabón, posteriormente aplíquese etanol al 70%.

12. Simbología:

BIO: Sección de Biología ForenseDCF: Departamento de Ciencias ForensesFAP: Fosfatasa Ácida ProstáticaL: litrosmg: miligramosmL: mililitrosN/A: No aplicaOT: Orden de trabajo, número de caso BIO.PON: Procedimiento de Operación Normadorpm: revoluciones por minutoUCII: Unidad Centralizada de Inspección de IndiciosuL: microlitros

13. Terminología:

Fenómeno de Zona: Este fenómeno ocurre cuando la cantidad de antígeno es superior a la nece-saria para precipitar todo el anticuerpo,por lo que se produce una reducción de la cantidad de an-ticuerpo precipitado, lo anterior debido a la disolución de los inmunocomplejos en presencia de ex-ceso de antígeno (Roitt et al, 2000).

14 Anexos

No aplica

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procedimiento para la investigaciÓn de fluido seminal

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