IDENTIFICACIÓN DE ESPECIES DE

CALONECTRIA Y CYLINDROCLADIELLA

PRESENTES EN VIVEROS DE EUCALIPTO DE

PAYSANDÚ

Pilar GasparriPilar Gasparri

Guillermo Pérez

Raquel Alonso

Carlos A. Pérez

VI Jornada Técnica Protección ForestalTacuarembó, 15 de noviembre 2013

Enfermedades causadas por “Cylindrocladium”

Muerte de pie madre

Muerte de estacasPodredumbre de tallo

Anillado del tallo

Manchas foliares

Muerte de plantines en el campo

Tizón foliar por Cylindrocladium en Sur de China

FABI

Calonectria TaxonomíaReino: FungiFilum: Ascomycota Familia: NectriaceaeGenero: Calonectria

Biología

Fase Sexual = Calonectria

Peritecio de color rojo-anaranjado, ostiolados y con paredes rugosas. En su interior contiene ascos con ascosporas hialinas, fusiformes. ascos con ascosporas hialinas, fusiformes.

Fase Asexual = Cylindrocladium

Reproducción por conidióforos con conidiosporas cilíndricas

Lombard et al., 2010

Cylindrocladiella

TaxonomíaReino: FungiFilum: AscomycotaFamilia: NectriaceaeGenero: Cylindrocladiella

Reproducción por conidióforos con conidiosporas cilíndricas

Lombard et al., 2012

Conidios pequeños

Fase asexual

Reproducción por conidióforos con conidiosporas cilíndricas

Estípite sin septo

Especies asociadas a manchas foliares

Ca. reteaudii

Ca. ilicicola

Ca. gracile IndiaCa. reteaudii

Sur oeste de Asia Norte de Australia

Ca. avesiculatum

Ca. theae

Ca. cadelabrum

Ca. colhounii

Ca. heptaseptatum

Ca. ovatum

Ca .parasiticum

Ca. pauciramosum

Ca. pteridis

Ca. reteaundii

Ca. variabile

Sudamérica

Ca. gracile Brasil

Ca. pauciramosum Sudáfrica

Ca. candelabrum

Ca. colhounii

Ca. floridanum

Ca. macroconidiale

Ca. parasiticum

Ca. ovatum

Ca. retaudii

Especies asociadas a podredumbre de tallo

Ca. pauciramosum Sudáfrica

Ca. gracile Brasil

Ca. scoparium

Ca. gracile

Especies asociadas a podredumbre de raíz

Ca. retaudii

Ca. scoparium.

Ca. gracile

Ca. curvatum

Ca. floridanum

Cy. camelliae

India

R. Reyna

Escasa información a nivel nacional

OBJETIVO

Identificar especies de Calonectria y Cylindrocladiella presentes en viveros de eucalipto en Paysandú

• Prospección• Aislamiento• Generación de colección de cultivos puros• Identificación por técnicas moleculares

Estrategia de investigación

MATERIALES Y MÉTODOS

Prospección - 4 viveros del departamento de Paysandú.

Plantines con síntoma de Calonectria

Sustrato Arena de mini jardines Suelo

MuestrasMuestras

Suelo Bandejas

Vivero Sustrato Arena Planta Suelo Bandejas Total

A 6 - 14 4 - 24

B 3 3 9 1 - 16

C 3 - 8 5 - 16

Tipo de muestras tomadas en cada vivero

C 3 - 8 5 - 16

D 3 2 6 2 2 15

Total: 71

Cámaras húmedas : Inducción esporulación desde infección

Procesamiento

Pesca : Inducción esporulación desde sustrato

Obtención de cepas puras

Esporulación Lupa Conidióforos extracto de malta 2%

Purificación Repique punta de hifa Cepa pura

Generación de una colección de cultivos puros

Colección de cepas analizada

Vivero Sustrato Arena Planta Suelo Bandejas Total

A 6 0 3 4 0 13

B 0 1 10 0 0 11

C 0 0 0 1 0 1

D 2 0 0 0 4 6

Total 8 1 13 5 4 31

Colección total: 120 cepas

Cepa 48 : Vivero B/plantinN°muestra: 11.40

Cepa 31 : Vivero B/plantinN°muestra: 11.40

Agrupamiento por morfología

Cepa 13 : Vivero A/sustratoN°muestra: 1.4

N°muestra: 11.40

Cepa 30 : Vivero B/plantinN°muestra: 11.40

N°muestra: 11.40

Extracción de ADN desde cultivo puro

Amplificación de la región del ITS

Secuenciación

Identificación molecular

Comparación con cepas de referencia

Análisis filogenético

Cy. lageniformis

Ca colombiensis CBS112221 T

PG25

Cy peruviana CBS113022

Cy camelliae STE U234

Cy peruviana CBS114943

Cy camelliae CPC237

PG10

Cy lageniformis CBS340.92 T

Cy lageniformis CBS111061

PG14

PG20

PG45

PG54

PG60

PG3

PG42

PG44

PG16

PG15

PG24

PG64

PG48

PG63

PG56

PG51

PG61

PG50

Ca sulawesiensis CBS125277 T

Ca sulawesiensis CBS125248

Ca cerciana CBS123693 T

Ca cerciana CBS123695

Ca. sulawesiensis

Complejo camelliae

100

100100

100

100

Cy. natalensisAnálisis filogenético

Análisis realizado por Máxima Parsimonia basado en la región ITS del ADN ribosomal

Ca cerciana CBS123695

Ca reteaudii CBS112143

Ca reteaudii CBS112144 T

Ca pseudospathiphylli CBS109165

Ca insularis CBS114558 T

Ca insularis CBS114559

Ca densa CBS125261 T

Ca densa CBS125250

Ca spathiphylli CBS116168 T

Ca spathiphylli CBS114540

Ca spathulata CBS555.92

Ca spathulata CBS112689

PG17

PG19

Ca scoparia CPC1675

Ca scoparia CPC1679

Ca pentaseptata VM3

Ca pentaseptata VM11

PG58

Ca humicola CBS125251 T

Ca humicola CBS125269

PG52

Ca pauciramosa CMW5683 T

Ca pauciramosa CPC416

Ca hawksworthii CBS111870 T

PG18

PG55

PG53

PG27

PG2

PG13

PG11

Ca. scoparia

Ca. humicola

Ca. pauciramosa

100

100

100

Número de cepas por especie por vivero

Presencia de las especies en los diferentes sustratos

Ca. pauciramosa

África y Australia: patógeno dominante en viveros

Reportada en Uruguay por Lombard et al. 2010

Ca. humicola

Ecuador: suelo

En un vivero, aislado desde compost

África y Australia: patógeno dominante en viveros

Presente en 3 de 4 viveros, en todos los sustratos analizados

Ca. sulawesiensis

Indonesia: patogénica

Presente en todos los viveros y en todos los sustratos analizados, menos arena

Complejo Cylindrocladiella camelliae

Cy. peruviana

Sudáfrica y Brasil: patogénica

Cy. camelliae

Australia, Brasil, Nueva Zelanda y Sudáfrica: patogénica, presente en suelo

Cy. lagenifromis

Brasil y Sudáfrica: patogénica

Sólo aislada de compost de un vivero

Sólo aislada de compost de un vivero

Conclusiones

• Dos géneros presentes en los viveros

• Varios grupos taxonómicos representados

• Confirmación del inóculo en todos los sustratos

• Necesidad de análisis de otras regiones genómicas

4 viveros1 Departamento

IDENTIFICACIÓN

• Conocimiento sobre la biología de cada especie

• Necesidad de evaluar patogenicidad

• Conexión con las especies presentes en el campo

• Resistencia de materiales genéticos

Agradecimientos

� UPM

� Vivero Dodera

� Vivero Nasca

Trabajo realizado en el marco de tesina de grado

Facultad de Ciencias

Financiación:

Muchas gracias!!!