preparacion de muestras para observarlas al microscopio
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como preparar muestras de tejido para su observacion al microscopioTRANSCRIPT
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CAMPUS CIENCIAS DE LA SALUD
EDUARDO HERNANDEZ BERNAL
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TÉCNICAS DE PREPARACIÓN DE MUESTRAS PARA OBSERVARLAS AL
MICROSCOPIO.
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Al observar una estructura al microscopio óptico o al electrónico, la luz o los electrones atraviesan la muestra, dando lugar a la formación de imágenes que son ampliadas por las lentes del microscopio.
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En el caso de la microscopía óptica las muestras deben tener un grosor de 5-8 μm
aproximadamente, y para microscopía electrónica, valores entre 20 y 40 nm. Es necesario, por tanto, cortar el material que ha de ser estudiado en "lascas" muy finas.
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La preparación del material biológico muerto, para su estudio al microscopio óptico o al electrónico, consta de cuatro pasos fundamentales.
-1ro. La fijación. -2do. La inclusión. -3ro. El corte. -4to. La coloración.
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Se detiene el proceso de autolisis
FIJACION QUIMICA: Se utilizan sustancias como el formol que actúan sobre los componentes celulares con el fin de mantener las estructuras a estudiar lo mas naturales posibles.
FIJACIÓN
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FIJACION FISICA:Por calor: aplicamos calor de manera que se produce la coagulación de las proteínas. No es buena ya que las células se destruyen.
Por frío: se congela el tejido con dióxido de carbono o N liquido. Es mejor que la anterior pero se pueden formar cristales.
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Para que el material tenga la suficiente fuerza al cortarse se sustituye el agua que contiene por una sustancia que le de rigidez y que evite que se deforme. Estas sustancias son la parafina para la microscopia óptica y las resinas sinteticas para la microscopia electrónica.
INCLUSIÓN
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INCLUSION EN PARAFINA
1.- se deshidrata el tejido con la ayuda de alcoholes.
2.- Aclaramiento: se sustituye el alcohol por un liquido intermediario (hidrocarburo bencenico “silol)
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3.-Impregnación: el tejido se coloca en parafina liquida(a 60 º C)
4.-Inclusión: se saca el tejido de la parafina y lo ponemos en el fondo de un molde metálico y lo rellenamos de parafina liquida colocándolo a temperatura ambiente de manera que la parafina se solidifica quedando el bloque realizado y preparado para el corte.
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el corte se realiza equipos especiales, los cuales presentan una cuchilla que corta "lascas" del material.
Para microscopía óptica se utilizancuchillas de acero y el equipo recibe el nombre de micrótomo
CORTE
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En microscopía electrónica se utilizan los ultramicrótomos, que emplean cuchillas de vidrio o diamante.
1.-microscopio estereoscópico2.-aparato de iluminación3.-muestra4.-centro de comando5.-portaobjetos6.-manivela
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Los colorantes que corrientemente se emplean para la observación de láminas histológicas, son sales neutras que presentan radicales ácidos o básicos, es decir, colorantes ácidos y básicos.
COLORACIÓN
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Una coloración de uso corriente en histología es la hematoxilina y eosina (H/E) que emplea
ambos tipos de colorantes. Con esta coloración se observa que el núcleo se tiñe con el
colorante básico (azul), y el citoplasma se colorea con el colorante ácido (rosado).
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fibra colágena de tejido conjuntivo
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Impregnación argénica
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En el microscopio electrónicoNo se utilizan colorantes, no se observan colores solo blancos, grises y negros. Se utilizan sales de metales pesados para contrastar el tejido.
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Fotografía tomada con microscopio electrónico de los tubos de un macrofito.