preparación de 5x tampón tbe electroforesis
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8/18/2019 Preparación de 5X tampón TBE electroforesis
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Preparación de 5X tampón TBE electroforesis
Visión de conjunto
TBE es uno pf los tampones de electroforesis muy comunes, que se utiliza parael análisis en gel de agarosa de !"#
$ontiene Tris, ácido %órico y E!T#
Tris&%orato proporciona conducti'idad el(ctrica, as) como mantiene el p*#
E!T in+i%e nucleasas dependientes metálicos por quelación de los cationesdi'alentes $a- ., /g- .0, por lo tanto
proteger el !" de las nucleasas durante la carrera#
Tampón TBE tiene mejor capacidad tampón TE a continuación, por lo tanto, se
puede utilizar para e1tendida y
electroforesis repetido#
Borato de tampón TBE se informó de interactuar con el !", lo que puedecausar pro%lemas en posteriores
modi2cación enzimática de fragmento de !" eluido de gel# En tales casos, eluso de tampón TBE de%e ser
e'itado# TE es tampón adecuado para este propósito#
Preparación de 5X Tris&glicina 3!3 Tampón de electroforesis 4 Preparación de
colorante de carga X !" 4
3alina tamponada con fosfato 4 TE Vs tampón TBE 4 Electroforesis en gel deagarosa de !" 4 Preparación
de gel de agarosa para análisis de !" 4 Preparación de 56X Tampón deelectroforesis TE
Preparación de 0,5 M cloruro de rubidio solución (RbCl)
Preparación de cloruro de calcio 1 M solución (CaCl2)Preparación de solución 1 M MOPS
Preparación de 50x TA elec!ro"oresis bu""er#$!%
Re&uisi!o
reac!i'os
Tris base (C11*O+, Peso %olecular 121,1)
l -cido bórico (+.O+, Peso %olecular /1#+)
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Solución de TA de s!oc 0,5 M (p ,0)
esioni3ada 4 aua Milli67
&uipos 8 %a!erial desec$able
Cilindro de %edición
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Ma!ra3 cónico 4 9aso
ai!ador %an:!ico
Co%posición de 5; !a%pón T. elec!ro"oresis
.ora!o 0,5 M Tris
0,01 M TA
p #2 a # (a 25 < C)
Co%posición de 1; T. Ta%pón de elec!ro"oresis
.ora!o = %M Tris
TA 2 %M p #2 a # (a 25 < C)
Ob>e!i'o
Preparación de 1000 %l de !a%pón de elec!ro"oresis T. 5;, p ,+#
Preparación
Para preparar 1000 %l de !a%pón T. 5;, pesar 5 de base Tris 8 2?,5 de
-cido bórico# !rans"erirlos
a 2 @ 'aso de precipi!ados 4 %a!ra3 cónico# Aadir 00 %l de aua desioni3ada 4Milli67# Aadir 20 %l de TA 0,5 M
solución# Me3clar $as!a &ue !odos los inredien!es se disuel'en por co%ple!o#
Conse>os)
1# Bno puede usar ai!ación %anual u!ili3ando una pipe!a de 'idrio para %e3clar
los inredien!es# Ai!ador %an:!ico $ace
el proceso de disolución "-cil 8 con'enien!e#
2# Reco%enda%os aadir solución 0,5 M TA despu:s de aadir aua#
Precaución (s)
*o se disuel'en en =0 %l de aua 4 Milli67 desioni3ada# n la %a8ora de los
casos, au%en!a el 'olu%en de solucióncuando la ran can!idad de solu!o se disuel'e en disol'en!e# 'er preparación de la
solución
A>us!ar el p ,+ si es necesario#
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Precaución s0
Co%o el p depende de la !e%pera!ura, se reco%ienda a>us!ar el p de la
solución en la salala !e%pera!ura (25 < C)#
A>us!ar el 'olu%en de la solución a 1000 %l con aua desioni3ada 4 Milli6
7# Me3clar de nue'o#
Opcional se puede "il!rar la solución para eli%inar cual&uier %a!erial no
disuel!o#
Trans"erir la solución a la bo!ella en au!ocla'e#
Conse>os)
ependiendo del consu%o, se puede $acer pe&ueas alcuo!as de la solución#
s!erili3ar la solución por au!oca'in (20 %inu!os a 15 lb 4 sin# (Psi) a par!ir de
121612 < C en el ciclo de l&uido)# *o!a (s)
Se puede es!erili3ar la solución pasando a !ra':s de 0,22 D unidad de
"il!ro# S!rili3a!ion "il!ro eli%ina !odo
par!culas en suspensión con un !a%ao de %-s de 0,22 D, &ue inclu8e la %a8ora
de las bac!erias, pero no sus esporas
%icoplas%a# Cabe arear, &ue no inac!i'a las ac!i'idades en3i%-!icas (por
e>e%plo, *asas)# l !ra!a%ien!o en au!ocla'e
inac!i'a la %a8ora de las en3i%as, excep!o alunos (por e>e%plo, R*asas) 8
%a!a a la %a8ora, los %icrooranis%os incluidos
%icoplas%a#
lmacenamiento 7a solución se puede almacenar a 85 & -5 9 $ temperaturaam%iente0 durante 'arios meses
aplicaciones Electroforesis en gel de agarosa de !" Electroforesis nodesnaturalizante en gel de agarosa de :" tampón /;P3 se utiliza para gelesdesnaturalizantes0 Electroforesis en gel de poliacrilamida de ácido nucleicotanto no desnaturalización o desnaturalización0 !" gel de secuenciaciónautomatizada $am%io de mo'ilidad electrofor(tica de ensayo E/3
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