practica nro 2 bioquimica

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MANUAL DE PRÁCTICAS

PRACTICA DE

LABORATORIO NRO. 2

- DETERMINACIÓN DEGLUCOSA

1. INTRODUCCIÓN

La glucosa es la principal fuente de energía para el metabolismo celular. Se obtiene fundamentalmente a través de la alimentación, y se almacena principalmente en el hígado, el cual tiene un papel primordial en el mantenimiento de los niveles de glucosa en sangre (glucemia). Para que esos niveles se mantengan y el almacenamiento en el hígado sea adecuado, se precisa la ayuda de la insulina, sustancia producida por el páncreas.

La glucosa es un azúcar que es utilizado por los tejidos como forma de energía al combinarlo con el oxígeno de la respiración. Cuando comemos el azúcar en la sangre se eleva, lo que se consume desaparece de la sangre, para ello hay una hormona reguladora que es la insulina producida por el páncreas (islotes pancreáticos). Esta hormona hace que la glucosa de la sangre entre en los tejidos y sea utilizada en forma de glucógeno, aminoácidos, y ácidos grasos. Cuando la glucosa en sangre está muy baja, en condiciones normales por el ayuno, se secreta otra hormona llamada glucagón que hace lo contrario y mantiene los niveles de glucosa en sangre. Cuando la insulina es insuficiente, la glucosa se acumula en sangre, y si esta situación se mantiene, da lugara una serie de complicaciones en distintos órganos. Esta es la razón principal por la que se produce aumento de glucosa en sangre, pero hay otras enfermedades y alteraciones que también la provocan.

El tejido más sensible a los cambios de la glucemia es el cerebro, en concentraciones muy bajas o muy altas aparecen síntomas de confusión mental e inconsciencia.

El mantenimiento de la glucemia, o concentración plasmática de glucosa, en los organismos superiores el fundamental para el funcionamiento de todos los órganos, al ser la glucosa un metabolito energético principal.

La coordinación de los procesos metabólicos implicados en este cometido se lleva a cabo por la relación insulina/glucagón. La ingestión de glucosa o sustancias que la produzcan (almidón, fructosa, galactosa, proteínas, pero no grasas) va seguida, en las personas sanas, por un aumento de la glucosa en sangre. Este aumento origina la puesta en marcha del mecanismo regulador: aumento de la utilización de glucosa (por glucólisis, entre otras), aceleración de

Lic. Yesenia Zorrilla Gutarra 2014 - II

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la glucogenogénesis y disminución de la glucogenólisis; todo ello ocurre principalmente mediante la secreción de insulina, una hormona pancreática de tipo polipeptídico. En el caso de que la producción de insulina esté disminuida, la glucosa no puede ser utilizada por las células, lo cual ocasiona niveles elevados de glucosa en sangre (hiperglucemia); así ocurre en las personas que sufren diabetes del tipo denominado "dependiente de insulina" o "tipo 1".

2. OBJETIVO: Capacitar al alumno para que conozca, maneje y determine el valor de la glucosa

en sangre, utilizando el análisis objetivo para la deducción de un resultado real.

3. PARTE TEÓRICA:La glucosa es un glúcido o carbohidrato, más precisamente un monosacárido, la estructura más sencilla dentro de los azúcares simples, presente en forma libre en las frutas y la miel. Entre los carbohidratos de absorción rápida, la glucosa es la que se absorbe más rápidamente.

La glucosa es una fuente importante de energía para la mayoría de las células del cuerpo, incluidas las del cerebro. Los carbohidratos que se encuentran en las frutas, los cereales, el pan, la pasta y el arroz se transforman rápidamente en glucosa en el cuerpo, lo que eleva el nivel de dicho azúcar en la sangre.Las hormonas producidas en el cuerpo llamadas insulina y glucagón ayudan a controlar los niveles de azúcar en la sangre. Es un examen que mide la cantidad de un azúcar llamado glucosa en una muestra de sangre.

3.1. FORMA EN QUE SE REALIZA EL EXAMEN:

Se necesita una muestra de sangre. Esto se realizará antes del procedimiento de la glucosa a través de la venopunción o flebotomía.

3.2. PREPARACIÓN PARA EL EXAMEN:

Después de no haber comida nada (en ayunas) durante 7-8 horas.

3.3. LO QUE SE SIENTE DURANTE EL EXAMEN:

Cuando se inserta la aguja para extraer la sangre, algunas personas sienten un dolor moderado, mientras que otras sólo sienten un pinchazo o sensación de picadura. Posteriormente, puede haber algo de sensación pulsátil.

3.4. RAZONES POR LAS QUE SE REALIZA EL EXAMEN:El médico puede solicitar este examen si uno tiene signos de diabetes. Sin embargo, otros exámenes (prueba de tolerancia a la glucosa y examen de glucemia en ayunas) son mejores para diagnosticar la diabetes.


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El examen de glucemia también se utiliza para monitorear a pacientes que padezcan diabetes. También se puede hacer si usted presenta:

Un cambio en el comportamiento Episodios de desmayo Convulsiones por primera vez

¿Por qué se hace esta prueba?

Por lo general, la prueba de glucosa en la sangre se hace para detectar la diabetes mellitus.

¿Recomendaciones para el análisis de glucosa?

La forma más fácil de detectar la diabetes es medir la cantidad de azúcar en la sangre (glucosa) antes de que el paciente coma o beba algo por la mañana. En la mayoría de los casos, el paciente deberá ayunar durante la noche anterior, no comer ni beber nada más

Que agua después de la cena y por la mañana antes de la extracción de sangre.

4. PARTE PRÁCTICA

4.2. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

4.3. PLANTEAMIENTO DE LA HIPÓTESIS

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4.4. PROCEDIMIENTOS DE EXPLORACIÓN

Organizados en grupos de trabajo dispongan en la mesa de trabajo los siguientes

materiales y reactivos

MÉTODO TRINDER – PUNTO FINAL

4.4.1. PRINCIPIO:

La glucosa oxidasa (GOD) oxida a la glucosa en ácido glucónico y forma el peróxido hidrógeno. En presencia de peroxidasa (POD) el peroxido hidrógeno reacciona con el fenol y 4-aminofenazona y produce un complejo coloreado, cuya intensidad de color es directamente proporcional a la concentración de glucosa en la muestra.

4.4.2.MUESTRA: (Suero/Plasma)

Evitar muestras hemolizadas. Separar tan pronto sea posible las células de la sangre puesto que la glicólisis

consume la glucosa (aproximadamente 5% por hora) y proporciona falsamente valores disminuidos.

La glucosa en suero es estable hasta 3 días de 2-8° C.


MATERIALES Y EQUIPOS REACTIVOS Micropipetas de 10ul y 1.0ml 6 tips descartables para

micropipetas Cronometro 2 tubos vacutainer 2 agujas vacutainer Capuchón Gradillas para tubo de ensayo Timer Ligadura Algodón Esparadrapo Centrifuga 3 tubos de ensayo de 6 ml Cubetas para

espectrofotómetro Baño maría a 37°C Espectrofotómetro

Reactivo glucosa enzimática Alcohol.

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4.4.3.ESTABILIDAD:

Los reactivos están listos para su uso. Almacenar de 2- 8°C y protegerlo de la luz los reactivos son estables hasta la

fecha de expiración indicada en el rótulo. No congelar. Una vez abiertos los reactivos son estables por 2 meses de 2º- 8ºC si se evita

la contaminación. Mantener los frascos cerrados cuando no están en uso. No usar los reactivos

en caso de turbidez.

4.4.4.PROCEDIMIENTO:

calibración y absorbancia del espectrómetro

Método:……………………………. punto final en Incremento Longitud de onda:…………….510 nm (500-520 ) Cubeta:…………………………….1 cm de vía óptica Temperatura:……………………37°C Tiempo de reacción:…………5 - 10 minutos Lectura:…………………………...Contra reactivo blanco Reactivo/Muestra:…………....1/100

Toma de muestra través de la venopunción o flebotomía se utilizan las venas situadas en la flexura del codo. La estudiante encargada de tomar la muestra utilizará guantes, una aguja (con una jeringa o tubo de extracción).

le pondrá un tortor (cinta de goma-látex) en el brazo para que las venas retengan más sangre ya parezcan más visibles y accesibles.

limpiará la zona del pinchazo con un antiséptico y mediante una palpación localizará la vena apropiada y accederá a ella con la aguja. Le soltarán el tortor.

Cuando la sangre fluya por la aguja el sanitario realizará una aspiración (mediante la jeringa o mediante la aplicación de un tubo con vacío).

al terminar la toma, se extrae la aguja y se presiona la zona con una torunda de algodón o similar para favorecer la coagulación y se le indicará que flexione el brazo y mantenga la zona presionada con un esparadrapo durante unas horas

Colocar en baño maría de 5-10 min para que se coagule la muestra Centrifugación de la muestra 3000 rpm 3-5 min Rotular los 3 tubos de ensayo R. Blanco, Estándar y muestra.

4.4.5. PREPARACION DE SOLUCIONES:


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Mezclar e incubar de 5-10 minutos a 37°C en baño maría. luego leer la absorbancia del estándar (abstd) y la muestra (absm) contra el

blanco de reactivo en el espectrofotómetro. Los volúmenes de reacción pueden ser variados proporcionalmente sin

ninguna modificación en el cálculo.

4.4.6.RESULTADOS DE CÁLCULOS:

CALCULAR LA CONCENTRACIÓN DE GLUCOSA EN LA MUESTRA USANDO LA SIGUIENTE FÓRMULA:

|muestra||estándar|

x 100

4.4.7.VALORES:

VALORES DE REFERENCIALES:

PREMATUROS: 30mg/dl(1.6 mmol/L) RECIÉN NACIDOS: 40-60mg/dl(2.2 ÷ 3.3 mmol/L) NIÑOS: 60 - 100 mg/dl (3.8 ÷ 6.10 mmol/L) ADULTOS: 70 - 110 mg/dl (3.8 ÷ 6.10 mmol/L)

VALORES NORMALES:

Si le hicieron un examen de glucemia en ayunas, un nivel entre 70 y 100 miligramos se considera normal.

Si le hicieron un examen de glucemia aleatorio, los resultados normales dependen de cuándo fue la última vez que comió. La mayoría de las veces, los niveles de glucemia estarán por debajo de 125 mg/dL.


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Los rangos de los valores normales pueden variar ligeramente entre laboratorios. Hable con el médico acerca del significado de los resultados específicos de su examen.

Los ejemplos anteriores muestran las mediciones comunes para los resultados de estas pruebas. Algunos laboratorios usan diferentes medidas o pueden evaluar distintas muestras.

4.4.8.SIGNIFICADO DE LOS RESULTADOS ANORMALES

SI LE HICIERON UN EXAMEN DE GLUCEMIA EN AYUNAS:

Un nivel de 100 a 125 mg/dL significa que usted tiene una alteración de la glucosa en ayunas, un tipo de prediabetes. Esto incrementa el riesgo para la diabetes tipo 2.

Un nivel de 126 mg/dL o mayor casi siempre significa que usted tiene diabetes.

Los niveles aleatorios de glucosa en la sangre superiores a los normales pueden ser un signo de diabetes. En alguien que tenga diabetes, puede significar que la enfermedad no está bien controlada. El médico probablemente ordenará una glucemia en ayunas o un examen de tolerancia a la glucosa, dependiendo del resultado del examen aleatorio.

OTROS PROBLEMAS MÉDICOS TAMBIÉN PUEDEN PROVOCAR NIVELES DE GLUCOSA EN LA SANGRE SUPERIORES A LO NORMAL, COMO:

Hipertiroidismo Cáncer pancreático Pancreatitis

Tumores raros, entre ellos feocromocitoma, acromegalia, síndrome de Cushing o glucagonoma

LOS NIVELES DE GLUCOSA EN LA SANGRE INFERIORES A LO NORMAL (HIPOGLUCEMIA) PUEDEN DEBERSE A:

Hipopituitarismo (un trastorno de la hipófisis) Hipotiroidismo Insulinoma (muy poco común) Muy poco alimento Demasiada insulina u otros medicamentos para la diabetes

4.4.9.RIESGOS:


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Las venas y las arterias varían de tamaño de un paciente otro y de un lado del cuerpo a otro, razón por la cual obtener una muestra de sangre de algunas personas puede resultar más difícil que de otras.

OTROS RIESGOS ASOCIADOS CON LA EXTRACCIÓN DE SANGRE SON LEVES, PERO PUEDEN SER:

Sangrado excesivo Desmayo o sensación de mareo Hematoma (acumulación de sangre debajo de la piel) Infección (un riesgo leve cada vez que se presenta ruptura de la piel)

5. CONSIDERACIONES:

Muchas formas de estrés intenso (por ejemplo, traumatismo, accidente cerebrovascular, ataque cardíaco y cirugía) pueden aumentar temporalmente los niveles de glucosa en la sangre.

ENTRE LOS FÁRMACOS QUE PUEDEN AUMENTAR LAS MEDICIONES DE LA GLUCOSA ESTÁN LOS SIGUIENTES:

Ciertos medicamentos para tratar la esquizofrenia y la psicosis Betabloqueadores (como propanolol) Corticosteroides (como prednisona) Estrógenos Glucagón Isoniazida Litio Anticonceptivos orales (píldoras anticonceptivas) Fenotiazinas Fenitoína Salicilatos (ver sobredosis de ácido acetilsalicílico (aspirin)) Diuréticos tiazídicos (como hidroclorotiazida) Triamtereno Antidepresivos tricíclicos

ENTRE LOS FÁRMACOS QUE PUEDEN DISMINUIR LAS MEDICIONES DE GLUCOSA ESTÁN LOS SIGUIENTES:

Paracetamol Alcohol Esteroides anabólicos Clofibrato Disopiramida Gemfibrozilo


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Inhibidores de la monoaminoxidasa (IMAO) Pentamidina

6.REFLEXIÓN: 1. ¿Qué es la prueba de glucosa en la sangre? 2. ¿Por qué se hace esta prueba? 3. ¿Cómo preparo a mi hijo para esta prueba? 4. ¿Cómo se hace esta prueba? 5. ¿Cómo conoceré el resultado de la prueba? 6. ¿Qué significa el resultado de la prueba? 7. ¿Qué sucede si el resultado de la prueba no es normal?

7. APLICACION:1. Averiguar cuantos técnicas y métodos existe para determinar la glucosa2. ¿Qué otras pruebas complementarias serán necesarias para complementar

la prueba de tolerancia a la glucosa? 3. ¿Cómo es la glucosa a falta de insulina?

8. BIBLIOGRAFÍA: -http://colombiamedica.univalle.edu.co/Vol38No1/html/v38n1a10.pdf-http://www.netdoctor.es/XML/verArticuloMenu.jsp?XML=000437-http://www.ferato.com/wiki/index.php/Glucosa-http://www.medicinapreventiva.com.ve/laboratorio/glicemia.htm-http://external.doyma.es/pdf/277/277v27n106a13105169pdf001.pdf-http://www.uned.es/pea-nutricion-y-dietetica-I/guia/diabetes/prodinsu.htm-http://jama.ama-assn.org/cgi/data/297/2/230/DC1/1


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