practica nº01 concentración de biomasa

7/26/2019 Practica N01 Concentracin de Biomasa

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UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS

ESCUELA ACADMICO PROFESIONAL DE

INGENIERA AGROINDUSTRIAL

Determinacin de a !i"ma#a$ Rec%ent" micr"#c&ic"en c'mara de Ne%!a%er(

CURSO$ Biotecnologa de los productos Agroindustriales

AUTORES$ Duarte Soto, Erick Alexander.

ASESOR: Ing. Jess Alexander. Snche !onales.

CICLO: I"

GUADALUPE ) PER*

+,-.


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PRACTICA N/,-( DETERMINACION DE 0IOMASA$ RECUENTO

MICROSC1PICO EN C2MARA DE NEU0AUER(

I3 INTRODUCCI1N$

En la agroindustria # en sus aplicaciones es i$portante conocer el n$erode $icroorganis$os presentes en una $uestra. Este conoci$iento puedeser utiliado en estudio de cur%as de creci$iento, anlisis de ali$entos,preparaciones de in&culos para 'er$entaci&n, etc.(n par$etro cla%e en el $odelado # $onitoreo del 'unciona$iento deplantas de agroindustriales dedicadas a procesos de 'er$entaci&n,pani'icaci&n entre otros en donde se utilicen in&culo es la concentraci&n de)io$asa. Bio$asa es un t*r$ino general +ue se re'iere a los$icroorganis$os presentes en un siste$a. Existen $uchas $aneras de

$edir la concentraci&n de )io$asa, co$o por ee$plo $asa, %olu$en,extensi&n linear de 'ila$entos, dispersi&n de lu, conteo de c*lulas uorganelos. Existen di'erentes $*todos para cuanti'icar el n$ero de$icroorganis$os o peso -)io$asa de c*lulas $icro)ianas en un culti%o/los $*todos pueden ser directos e indirectos.Entre los directos se puede $encionar a la deter$inaci&n de peso seco # elrecuento de c*lulas en c$ara de 0eu)auer.1a deter$inaci&n de peso seco es un $*todo de cuanti'icaci&n $u#utiliado en culti%os de gran densidad, so)re todo para hongos # le%aduras.2o$o los culti%os se so$eten a %arios procesos -'iltraci&n, la%ado, secadose pueden causar p*rdidas i$portantes de )io$asa # errores en la

cuanti'icaci&n. El $*todo de cuenta directa en c$ara tiene la %entaa deser $u# rpido # econ&$ico, aun+ue no se pueden distinguir las c*lulas%ia)les # no %ia)les. Se puede calcular el n$ero de $icroorganis$os enuna $uestra a partir del %olu$en de la c$ara # de las diluciones de la$uestra +ue sean necesarias. Sin e$)argo, tiene el incon%eniente de +uela o)ser%aci&n # cuanti'icaci&n se di'icultan en c*lulas $u# pe+ue3as -4 5 67$ o en po)laciones de )aa densidad de)ido al pe+ue3o %olu$en de$uestra +ue se utilia -8.4 5 8.9 $$ -A4%ia5%ati6 +,,7.

Entre los indirectos pode$os $encionar a ;ur)idi$etra # 0e'elo$etra las

cuales nos per$iten o)tener aproxi$ada$ente la cantidad de )io$asa deuna $uestra.

II3 O0JETIVOS$

2o$prender el uso # lectura por c$ara de 0eu)auer. Deter$inar la concentraci&n de $icroorganis$os utiliando la c$ara de

0eu)auer en el $icroscopio. Deter$inar la des%iaci&n estndar, pro$edio # coe'iciente de %ariaci&n

de la $uestra a analiar.


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III3FUNDAMENTO TE1RICO$

(na suspensi&n celular se caracteria por presentar un n$ero departculas $icrosc&picas dispersas en un 'luido.


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Fi8%ra +(@anipulaci&n de la c$ara de 0eu)auer.

03 CONTEO EN CAMARA DE NUE0AUER

4. 2olocar el cu)reo)etos so)re el portao)etos de la c$ara e introducirentre a$)os la $uestra celular pre%ia$ente preparada. De)e e%itarse +uela $uestra re)alse, si esto sucede las c*lulas a contar ta$)i*n seperdern.

9. 1a %elocidad de llenado de la c$ara de)e ser ho$og*nea, e%itando as

una $ala distri)uci&n de las c*lulas en el preparado +ue traer apareadoerrores en el recuento.

. 1a $uestra no de)e secarse, por lo tanto es reco$enda)le guardar lac$ara de 0eu)auer cargada dentro de una c$ara h$eda para +uesedi$enten las c*lulas.

. 1uego se coloca la c$ara en un $icroscopio &ptico # se procede alconteo, eligiendo para ello los cuadrados apropiados.

6. Se elegir un criterio para de'inir +u* c*lulas se cuentan # cules no,

cuando las $is$as +uedan so)re uno de los )ordes del cuadrado.


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. (na %e contadas las c*lulas se calcula la concentraci&n en la $uestraoriginal, considerando: la diluci&n de la $uestra hecha para el se$)rado, lacantidad de cuadrados considerados, el n$ero de c*lulas contadas # el%olu$en de $uestra de)ao de cada cuadrado.

V3 MATERIALES 9 METODOLOGIA

A3 MATERIALES

=ipetas. -48 $l., 4 $l.

1a$ina cu)re o)eto.

;u)os de ensa#os. -2apacidad $a#o a 48 $l.

!radilla.

Agua de ca3o. 1e%adura -Saccharo$#ces cere%isiae.

03 E:UIPOS

@icroscopio.

2$ara de 0eu)auer.

C3 METODOLOGIA

Se prepararon las soluciones a distintas concentraciones de

le%adura con agua. De la soluci&n se to$& 48 $l # se colocaron en un tu)o de ensa#o el

cual se lla$& $uestra original. Se to$aron tu)os de ensa#os # se

llenaron con agua a C $l. De la $uestra original se pipeteo 4 $ililitro # se le adiciono al tu)o de

ensa#o con C $ililitros de agua, as se realiaron posterior$ente

para o)tener diluciones de 48?4 ,48?9 #48?. 2on una pipeta se to$& una deter$inada cantidad de la $uestra 48?

9 # se coloc& en el )orde del cu)reo)etos de $anera +ue el l+uido

entre por capilaridad sin +ue se 'or$en )ur)uas en la c$ara. Se 1le%& la c$ara al $icroscopio # con el o)eti%o 48x se locali&

en el ca$po %isual el cuadrante central, en'ocando de tal 'or$a +ue

se o)ser%en ntida$ente los cuadrantes # luego se pas& al o)eti%o

8x.


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2ontar las c*lulas presentes en los cuadros elegidos -general$ente

se cuentan en los cuadrados de los cuatro ngulos # el centro, o en

'or$a diagonal e$peando por el pri$ero de la parte superior

i+uierda. ;a$)i*n se de)en contar las le%aduras +ue estn

u)icadas tocando la pri$era de las tres lneas +ue se encuentran

circundando el cuadro, las +ue se encuentran en la parte superior #

la derecha del cuadrado.

VI3 RESULTADOS 9 DISCUSIONES

CUADRO DE RESULTADOS$

SUSPENSIONES DELEVADURAS N;

Ciacin Pr"medi

"

C"e?icientede

@8 de a>ad%ra=mL de a8%a E#t'ndar Varia!iidad

49.6 g de le%adura 968 $l


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Ta!a -( 0$ero de c*lulas de le%aduras conta)iliadas en la soluci&n de 49.6g de le%adura 968 $l


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Ta!a ( 0$ero de c*lulas de le%aduras conta)iliadas en la soluci&n de 98 gde le%adura 968 $l ad%ra# = mL$

N deCelulas /mL= 130.4 cel

0.2mm0.2mm0.1mm


4 x103mm

3

N deCelulas /mL=32600 cel

mm3

N deCelulas

mL =

32600cel

mm3 x

1000mm3

mL

N deCelulas

mL =3.3 x10

7 cel

mL

CUADRICULAS@7 B 7

CUADRADOS @ B - - -

- 4C 4 46 9 96

9 4 4 99 9. 4G 4C 9 9 9-- 99 99 46 9 94-7 98 9 9 9G 9G-. 98 4 98 9 8

SUMA 499 446 44 4C 46

TOTAL 98G.


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N deCelulas /mL= 40.8cel

0.2mm0.2mm0.1mm


4 x103mm

3


mm3

N deCelulas

mL =

10200 cel

mm3 x

1000mm3

mL


10/15

N deCelulas

mL =1.0 x10

7 cel

mL



0.2mm0.2mm0.1mm


4 x103mm

3

N deCelulas /mL=4900cel

mm

3


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N deCelulas

mL =

4900 cel

mm3 x

1000mm3

mL

NdeCelulas

mL =4.9x 10

6 cel

mL

Ta!a ( 0$ero de c*lulas de le%aduras conta)iliadas en la soluci&n de 468g de le%adura 4888 $l ad%ra# = mL$


0.2mm0.2mm0.1mm


4 x10

3

mm

3


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mm3

N deCelulas

mL

=52650 cel

mm

3 x

1000mm3

mL

N deCelulas

mL =5.3x10

7 cel

mL

Ta!a --(2antidad de 1e%aduras por $1 de Agua en cada disoluci&n

En la ta)las 9, , , G. =ode$os o)ser%ar +ue los coe'icientes de %aria)ilidadson 48.CF, 4.CF,46.6F, 4C.9CF- se de)i& +uis a las 'allas +uepresent& el $icroscopio con el te$a de la lu, +ue al 'inal %a in'luenciar en elresultado 'inal., 4.F respecti%a$ente/ esto nos indica el grado de%aria)ilidad o dispersi&n +ue existe entre los datos. Segn N%He @-+si 2H

es $enor o igual +ue 98F se dice +ue el pro$edio es representati%o, o +ue losdatos son ho$og*neos # si el 2H es $a#or al 98F, el pro$edio no esrepresentati%o de los datos, o los $is$os no son ho$og*neos, es por ello +uea'ir$a$os +ue los datos son ho$og*neos # el $*todo de recuento en$icroscopio utiliando la c$ara de 0eu)auer es adecuado para ladeter$inaci&n de )io$as.

@M%H"6 +,,El conteo en la c$ara de 0eu)auer de)e e'ectuar en los 96cuadrantes de la c$ara, hasta o)tener un n$ero de 88 c*lulas con el 'in detener una con'iana del conteo del C8F.

Segn ern'nde @+,,+. Es i$portante deter$inar al $osto la concentraci&nde c*lulas para +ue luego se dosi'i+ue la cantidad espec'ica para alcanar una

SUSPENSIONES DE LEVADURASN; Cad%ra=mL de a8%a



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concentraci&n en el rango de -4,6 a 9,8 x 48cel$1 de $osto. =or lo +ueciertas cantidades halladas se han aproxi$ado al rango pero ta$)i*ndepender de la relaci&n de entre la cantidad de le%adura con la cantidad deagua.

Es i$portante contar en total en total 48 cuadrados, cinco en cada c$ara, esdecir de la c$ara de arri)a # la de a)ao @A4%ia5%ati6 +,,7sin e$)argo enla prctica realiada solo se contaron 6 cuadrados por lo +ue el porcentae deerror se incre$entar.

Segn Arnai6 et a @+,,,, los $*todos clsicos de deter$inaci&n de )io$asason $*todos directos +ue se )asan en el n$ero de c*lulas o en el pesocelular. 1os $*todos de enu$eraci&n celular, son $*todo de o)ser%aci&n,)asados en propiedades 'sicas o en la acti%idad )iol&gica. @ientras +ue los$*todos indirectos esti$an algn co$ponente celular o alguna acti%idad$eta)&lica espec'ica, estos no re+uieren de exa$en %isual de los organis$osni su incu)aci&n.

Segn Unam @-., en la t*cnica de conteo de c*lulas ha# +ue tener encuenta +ue en esta t*cnica uno de los 'actores +ue a'ecta la o)ser%aci&n de lasc*lulas de le%adura es la correcta diluci&n de la $uestra e$pleada se puededecir +ue si durante el conteo se o)ser%an aproxi$ada$ente C c*lulas la$uestra se encuentra $u# concentrada, $ientas +ue si se o)ser%an $enos de98 c*lulas, la $uestra se encuentra $u# diluida. En nuestro prctica la $uestranos arroaron %alores de un total de c*lulas son $a#ores a C, por lo +uepode$os decir +ue pro)a)le$ente se encuentra $u# diluida.

VII3 CONCLUSIONES$

Se co$prendi& el uso # lectura por c$ara de 0eu)auer. Se deter$in& la )io$asa presente en una soluci&n de le%adura #

expres& en unidades de c*lulas$l o)teni*ndose un rango de 4.89 #

6.9 x 482el$1 con un pro$edio de entre 4C. # 948. c*lulas por

cada cuadro de 8,9$$ x 8,9$$ x 8,4$$ # un coe'iciente de

%aria)ilidad de entre 44 # 4C F, en las 6 celdas al aar, por lo +ue nos

da$os cuenta +ue la $uestra de 6 celdas al aar es una $uestra

representati%a de la general. Se pudo deter$inar las c*lulas por $ililitro

gracias a la c$ara 0eu)auer. Se pudo co$prender # deter$inar el pro$edio de le%aduras contadas en

las 6 celdas al aar, por el $*todo de conteo directo, usando la c$ara

de 0eu)auer, +ue es un $*todo e'ica para el conteo de dichas

le%aduras. =or lo +ue la $uestra de las 6 al aar es representati%a.


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SUSPENSIONES DELEVADURAS N;

Ciacin Pr"medi

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C"e?icientede

@8 de a>ad%ra=mL de a8%a E#t'ndar Varia!iidad



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IMAGEN 1: Observacin de

IMAGEN %: Observacin de

practica nº01 concentración de biomasa

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