INSTITUTO TECNOLGICO DE CHETUMAL

LICENCIATURA EN BIOLOGA

TURNO VESPERTINO ZB

BIOLOGA CELULAR

III SEMESTRE

UNIDAD 1 INTRODUCCIN AL ESTUDIO CELULAR

PRCTICA # 1- TINCIN DE WRIGHT

INTEGRANTES DE EQUIPO: ALAN JAIR BASTO CAB EDUARDO AVILEZ CETZ

PROFESORA: LAURA SNCHEZ LARA

SEPTIEMBRE DE 2011

PRCTICA # 1- TINCIN DE WRIGHT

OBJETIVO General: Realizar una tincin de las clulas blancas presentes en un frotis de sangre mediante la tcnica de tincin de Wright. Especficos Identificar los tipos de clulas sanguneas presentes en la muestra de sangre una vez teida. Identificar los reactivos a utilizar. Seguir los pasos indicados de la prctica.

INTRODUCCIN Las tinciones hematolgicas son un conjunto de procesos que conducen a la coloracin de las estructuras que componen las clulas sanguneas. Esto tiene por objeto el aumentar el contraste entre esas estructuras y el medio que las rodea, y permite por tanto que las clulas sean visual izadas microscpicamente con mayor facilidad. Las tinciones hematolgicas pueden clasificarse segn distintos criterios:

Atendiendo al nivel de vitalidad de las clulas que se pretende colorear, se dividen en tinciones vitales y no vitales. Atendiendo al momento en el que empezaron a ser utilizadas para el diagnstico hematolgico, se dividen en tinciones tradicionales y especiales.

Las tinciones vitales y supravitales son aquellas que se practican sobre clulas que estn vivas. Las tinciones vitales son aquellas que se efectan sobre clulas que estn vivas, mediante la introduccin de un colorante en la circulacin de un organismo vivo. Son colorantes vitales, por ejemplo, el verde Jano y el azul de metileno. Las tinciones supravitales son aquellas que se realizan sobre clulas o tejidos vivos, pero que estn aislados del organismo del que proceden. Las tinciones no vitales se realizan sobre clulas muertas. La coloracin de clulas muertas requiere un proceso previo de fijacin, que tiene por objeto el mantener inalterada su estructura y el adherirlas firmemente a la superficie del

portaobjetos. La fijacin puede realizarse habitualmente se realiza con etanol o metanol.

mediante

calor,

aunque

La tincin de Wright es una tincin de tipo Romanowsky. Es extremadamente importante en el laboratorio de hematologa este tipo de tincin, ya que puede obtenerse una cantidad abundante de informacin a partir del examen de un frotis de sangre perifrica bien teido Una tincin de Romanowsky consiste en azul de metileno y sus productos de oxidacin, as como eosina Y o eosina B. La accin combinada de estos colorantes produce el efecto Romanowsky y da una coloracin prpura a los ncleos de los leucocitos y a los grnulos neutroflicos y de color rosado a los eritrocitos. Los componentes de este efecto son el azul B y la eosina Y. Las propiedades de tincin de Romanowsky dependen del enlace de los colorantes a las estructuras qumicas y de las interacciones del azul B y la eosina Y. Los agrupamientos de cidos nucleicos, las protenas de los ncleos celulares y el citoplasma inmaduro reactivo, fijan el azul B, colorante bsico. La eosina Y, colorante cido, se fija a los agrupamientos bsicos de las molculas de hemoglobina y a las protenas bsicas.

MATERIALES Y EQUIPO Portaobjetos Cubreobjetos Jeringa estril Lansetas (algodn con alcohol etlico) Tubos de ensayo con anticoagulante Guantes Liga o torniquete Microscpio Frotis de sangre Colorante de Wright Agua destilada

PROCEDIMIENTO Tomamos una muestra de sangre de un integrante del equipo con ayuda de una jeringa esterilizada, una vez logrado hacer notar la vena con ayuda de una liga que se amarra no tan fuerte al brazo, solo de tal manera que sea visible para que de esta manera sepamos de donde tomar la muestra, luego colocamos un algodn en el lugar e hicimos que doblara el brazo por unos minutos, solo para evitar que siga saliendo sangre. Introducimos la sangre en el tubo de ensayo con anticoagulante y mezclamos con cuidado y destapamos el tubo para poder sacar una muestra. Realizamos un frotis muy delgado, fino de la muestra de sangre sobre el portaobjetos con ayuda de un cubreobjetos de manera que cubra un buen tramo del portaobjetos. Cubrimos el frotis completamente con colorante de wright. Esperamos 6 minutos de teido. Enjuagamos con agua destilada los portaobjetos durante 30 segundos, de manera que se retirara gran parte del colorante. Observamos a microscopio y anotamos las observaciones correspondientes.

OBSERVACIONES Y RESULTADOS Pudimos observar en la muestra de frotis de sangre, clulas sanguneas del tipo monocitos y segmentocitos. Los monocitos se tieron de color violeta o morado y se distinguieron por presentarse de un tamao un poco ms grande que de los globulos rojos y esta como hinchaditas las clulas. Los segmentocios como su nombre lo indica, eran clulas blancas que se estaban segmentando o separando para poder generar a s, ms globulos rojos, que son de vital importancia en el tejido sanguneo. Realizamos varios frotis en 3 portaobjetos para tener de respaldo, de los cuales en el tercero logramos apreciar de una mejor forma la distribucin de las clulas y la presencia de leucocitos.

Monocistos observados a 10x

Globulos rojos observados a 40x.

ANLISIS DE RESULTADOS Debido a que ayuda a distinguir fcilmente las clulas de la sangre se convirti en una tcnica muy usada para el conteo de los glbulos blancos, una tcnica rutinaria usada cuando hay sospecha de infecciones. Causas de error en las tinciones realizadas a frotis sanguneos. Si la tincin de una extensin sangunea es demasiado rosa, probablemente esto se deba a:

Un pH bajo del colorante. Un tiempo de coloracin insuficiente. Un lavado excesivamente prolongado. Si la tincin es demasiado azul, posiblemente, esto est causado por: un grosor excesivo de la extensin, o un pH alto del colorante. Una coloracin excesivamente prolongada. Un lavado insuficiente.

Si tras la tincin aparecen artefactos o/y precipitados en la extensin, probablemente esto se deba a:

Un empleo de portaobjetos sucios. Una falta de filtracin del colorante. Una coloracin excesivamente prolongada.

Un secado del colorante durante la tincin. Un lavado insuficiente.

Muchos de estos errores pueden obviarse utilizando teidores automticos de las extensiones sanguneas. Actualmente, no suelen emplearse en la prctica clnica.

RECOMENDACIONES Toma de sangre: Tomar el brazo del compaero, le colocar la ligadura haciendole un torniquete alrededor del brazo, posteriormente limpiar el rea a punzar con una torunda, elegir la vena indicada y con la jeringa sacar la cantidad de sangre necesaria, ya teniendo la muestra, desamarrar la ligadura, y colocar de nuevo la torunda retirando al mismo tiempo la jeringa de la vena. Finalmente colocar la muestra sangunea en un tubo de ensayo. Cuidados: Cuando se inserta la aguja para extraer la sangre, algunas personas sienten un dolor moderado, mientras que otras slo sienten un pinchazo o sensacin de picadura. Despus, puede haber una sensacin pulstil. El conteo plaquetario se puede ver afectado por muchos estados patolgicos. Igualmente, se puede medir para evaluar la causa de un sangrado excesivo. Entre los medicamentos que pueden disminuir el conteo de plaquetas estn: agentes quimioteraputicos, cloranfenicol, colchicina, agentes bloqueadores H2, heparina, hidralacina, indometacina, isoniacida, quinidina, estreptomicina, sulfonamida, diurticos tiazdicos y tolbutamina.

TRMINOS TCNICOS Objetivo de 10x Sirve para realizar observaciones a no tan grandes rasgos de nitidez o resolucin ms clara. Objetivo de 40x Ayuda a tener y mantener una visin mucho ms clara de lo que se desea observa en el microscopio a una escala mayor. Objetivo de 100x Sirve para realizar estudios con observaciones de muestras dentro de lquidos, por eso es tambin conocido como objetivo de inmersin, manteniendo un grado de resolucin superior y muy capaz. Leucocitos Los leucocitos (tambin llamados glbulos blancos) son un conjunto heterogneo de clulas sanguneas que son los efectores celulares de la respuesta inmunitaria, as intervienen en la defensa del organismo contra sustancias extraas o agentes infecciosos (antgenos). Se originan en la mdula sea y en el tejido linftico. Los leucocitos son clulas mviles que se encuentran en la sangre transitoriamente, as, forman la fraccin celular de los elementos figurados de la sangre. Son los representantes hemticos de la serie blanca. A diferencia de los eritrocitos (glbulos rojos), no contienen pigmentos, por lo que se les califica de glbulos blancos. Son clulas con ncleo, mitocondrias y otros orgnulos celulares. Son capaces de moverse libremente mediante seudpodos. Su tamao oscila entre los 8 y 20 m (micrmetro). Su tiempo de vida vara desde algunas horas, meses y hasta aos. Estas clulas pueden salir de los vasos sanguneos a travs de un mecanismo llamado diapdesis (prolongan su contenido citoplasmtico), esto les permite desplazarse fuera del vaso sanguneo y poder tener contacto con los tejidos al interior del cuerpo. Con ncleo: Monocitos Los monocitos son un tipo de glbulos blancos agranulocitos. Es el leucocito de mayor tamao, su tamao es de 18 m, y representa del 4 a 8% en la sangre. Presenta un ncleo arrionado (forma de rin), que se tie de color violetaazulado con una proporcin 2:1 con respecto al resto de la clula, y tiene una depresin profunda. El citoplasma es abundante y de color gris azulado pudiendo estar acompaado de vacuolas blanquecinas.

Los monocitos se generan en la mdula sea y despus viajan por la sangre, para luego emigrar a diferentes tejidos como hgado, bazo, pulmones, ganglios linfticos, huesos, cavidades serosas, etc. Despus de alrededor de 24 horas de permanecer en el torrente sanguneo, los monocitos lo abandonan y atraviesan el endotelio de los capilares o las vnulas poscapilares hacia el tejido conectivo, donde se diferencian rpidamente a macrfagos. Su principal funcin es la de fagocitar, es decir, comerse a diferentes microorganismos o restos celulares. Para fagocitar se tienen en cuenta diversos factores como la presencia de antgenos. Linfocitos Los linfocitos son un tipo de leucocito (glbulo blanco) comprendidos dentro de los agranulocitos. Son los leucocitos de menor tamao (entre 7 y 15 m), y representan del 24 a 32% del total en la sangre perifrica. Presentan un gran ncleo esfrico que se tie de violeta-azul y en su citoplasma frecuentemente se observa como un anillo perifrico de color azul. Poseen un borde delgado de citoplasma que contienen algunas mitocondrias, ribosomas libres y un pequeo aparato de Golgi. Los linfocitos son clulas de alta jerarqua en el sistema inmunitario, principalmente encargadas de la inmunidad especfica o adquirida. Estas clulas se localizan fundamentalmente en los rganos linfoides. Tienen receptores para antgenos especficos y, por tanto, pueden reconocer y responder al que se les presente.

Con ncleo lobulado: Neutrofilo Los neutrfilos, denominados tambin micrfagos o polimorfonucleares (PMN), son glbulos blancos de tipo granulocito. Miden de 12 a 18 m y es el tipo de leucocito ms abundante de la sangre en el ser humano. Se presenta del 60 al 75%. Su periodo de vida media es corto, durando horas o algunos das. Se llaman neutrfilos porque no se tien con colorantes cidos ni bsicos, por lo que su citoplasma se observa rosa suave. Se caracterizan por presentar un ncleo con cromatina compacta segmentada en 2 a 5 lbulos conectados por delgados puentes. En neutrfilos inmaduros el ncleo se presenta sin segmentar, como una banda fuertemente teida.

Basfilos Se denomina basfilo a cualquier clula que se tie fcilmente con colorantes basicos (Hematoxilina principalmente). Sin embargo, cuando se emplea este trmino sin ninguna aclaracin adicional, suele referirse a uno de los tipos de leucocitos (glbulos blancos de la sangre) de la familia de los granulocitos. Los grnulos de los basfilos son gruesos pero escasos. Son clulas de unas 10 m de dimetro y su ncleo tiene una forma que recuerda a una S, su ncleo es globulado y se divide de 1 a 3 clulas. Se originan en el mismo lugar que el resto de los granulocitos (mdula sea), y son los menos numerosos, ya que constituyen slo el 0,5% del total. Eosinfilo Un eosinfilo es un leucocito de tipo granulocito pequeo derivado de la mdula sea, que tiene una vida media en la circulacin sangunea de 3 a 4 das antes de migrar a los tejidos en donde permanecen durante varios das. Su desarrollo en la mdula sea es estimulado por diversas interleucinas, como la IL-5, la IL-3 y el factor estimulante de colonias granulocito-macrfago. Es caracterstico su ncleo bilobulado, al igual que sus distintivos grnulos citoplsmicos.

BIBLIOGRAFA http://articulosdemedicina.com/biometria-hematica/ http://html.rincondelvago.com/tinciones-hematologicas.html http://es.wikipedia.org/wiki/Tinci%C3%B3n_de_Wright http://www.bio-optic.com/introduccion/Teoria_de_la_Microscopia.pdf