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Marzo 2006Dra. María José González MuñozDra. Isabel Meseguer Soler D. Antonio Peña Fernández
Posible efectoprotector del siliciocontenido en la cervezaen las enfermedadesneurodegenerativas
Departamento de Nutrición, Bromatología y Toxicología.Área de Toxicología, Facultad de Farmacia.
Universidad de Alcalá.
Posible efecto protector del silicio
contenido en la cerveza en las
enfermedades neurodegenerativas
Este trabajo ha sido dirigido por el siguiente grupo de investigación:
Dra. María José González Muñoz
Dra. Isabel Meseguer Soler
D. Antonio Peña Fernández
Departamento de Nutrición, Bromatología y Toxicología.
Área de Toxicología. Facultad de Farmacia. Universidad de Alcalá
A la memoria del Dr. Salvador Granero Ribelles
Título:
Posible efecto protector del silicio contenido en la cerveza en las enfermedades
neurodegenerativas.
Autores:
Este trabajo ha sido realizado por el siguiente grupo de investigación:
Dra. María José González Muñoz
Dra. Isabel Meseguer Soler
D. Antonio Peña Fernández
Departamento de Nutrición, Bromatología y Toxicología.
Área de Toxicología. Facultad de Farmacia. Universidad de Alcalá
SUMARIO
INTRODUCCIÓN ........................................................................................6
1.1. Aluminio .......................................................................................6
1.2. Silicio ...........................................................................................9
OBJETIVOS.............................................................................................12
MATERIALES Y MÉTODOS .........................................................................13
3.1. Animales y protocolo experimental .................................................13
3.2. Muestras ......................................................................................16
3.3. Pruebas bioquímicas .....................................................................16
3.4. Metodología para el análisis de elementos .......................................17
3.5. Tratamiento estadístico .................................................................19
RESULTADOS Y DISCUSIÓN ......................................................................20
4.1. Contenido de aluminio y silicio en muestras de cerveza.....................20
4.2. Estudio Agudo..............................................................................21
4.2.1. Excreción fecal ................................................................................21
4.2.2. Excreción urinaria ............................................................................23
4.2.3. Niveles sanguíneos...........................................................................25
4.2.4. Conclusiones ...................................................................................27
4.3. Estudio Crónico ............................................................................27
4.3.1. Control de animales .....................................................................27
4.3.2. Excreción fecal............................................................................29
4.3.3. Excreción urinaria ........................................................................30
4.3.4. Niveles sanguíneos.......................................................................31
4.3.5. Niveles en tejido cerebral ..............................................................33
CONCLUSIONES ......................................................................................35
ANEXO ..................................................................................................36
• BIBLIOGRAFÍA ...................................................................................40
1
2
3
4
5
6
u n o
INTRODUCCIÓN
La enfermedad de Alzheimer, descrita por primera vez por Alois Alzheimer en
1906 (Alzheimer, 1906 y 1907), es un trastorno neurodegenerativo que consti-
tuye la causa más común de demencia entre la población de edad avanzada.
Se caracteriza por un gradual deterioro funcional en varias partes del siste-
ma nervioso central, debido a la muerte progresiva de neuronas. Comienza con
una insidiosa disminución progresiva de la memoria, que posteriormente va a
afectar a las capacidades cognitiva, conductual y psicológica del enfermo.
Las características neuropatológicas, incluida la atrofia cortical y subcorti-
cal, son: la formación de ovillos neurofibrilares intraneuronales, deposición de
péptido β-amiloide en placas neuríticas o seniles, formación de hebras neuro-
nales, pérdida de función sináptica, estrés oxidativo y apoptosis, con una
importante pérdida neuronal. Estos efectos se observan mayoritariamente en el
hipocampo y en la región cortical en cerebros con enfermedad de Alzheimer
(Guimerà y cols., 2002; Gupta y cols., 2005).
Aunque la etiopatogénesis de la enfermedad de Alzheimer es desconocida,
los factores ambientales, sumados a la predisposición genética, van a partici-
par en el desarrollo de la enfermedad, pudiendo ser el aluminio uno de estos
factores (Domingo, 2000; Rondeau, 2002).
El aluminio (Al) es el tercer elemento más abundante y el metal más abundan-
te de la corteza terrestre, encontrándose en todos los compartimentos que
están en contacto con el ser humano: aire, agua, alimentos, drogas, cosméti-
cos, y materiales de hogar (papel de aluminio) (Reinke y cols, 2003).
Además, el Al se emplea en la industria farmacéutica como antiácido, y en
la alimentaria para producir emulsiones, modificar texturas, etc. (Pérez-
Granados y Vaquero, 2002).
6
1.1. ALUMINIO
7
En el medioambiente penetra a través de partículas en el aire formadas por
la erosión natural del suelo, minería o agricultura, erupciones volcánicas y uso
de combustibles fósiles.
Una de las fuentes de exposición más importante para el ser humano son las
aguas municipales de consumo, cuyos niveles van a variar dependiendo de varios
factores fisicoquímicos y mineralógicos, y por el uso de coagulantes de alumi-
nio durante el tratamiento del agua (Nieboer y cols., 1995; Rondeau, 2002). Por
tanto, la exposición a aluminio es inevitable.
Respecto a su posible esencialidad, hasta hoy no se han descrito ninguna
alteración fisiológica asociada a su deficiencia (Baydar y cols., 2003).
Sin embargo, la neurotoxicidad del Al en humanos sí está bien establecida
(Fattoretti y cols., 2003). En individuos sanos, la absorción de Al a través del
intestino es suficientemente lenta, y la eliminación a través de la orina sufi-
cientemente elevada, como para minimizar los efectos adversos que sobre la
salud tienen niveles normales de exposición (Popplewell y cols., 1998).
Prácticamente la totalidad del Al ingerido pasa a través del tracto digestivo
sin absorberse. La absorción intestinal depende del pH del tracto gastrointesti-
nal (Gräske y cols., 2000; Lote y Saunders, 1991).
Un exceso de citrato podría aumentar la absorción de Al, mientras que la
ingestión de ácido silícico la inhibiría (Deng y cols., 1998; Powell y Thompson,
1993).
Respecto a la distribución de este elemento en el organismo, se ha sugerido
que depende de la especie animal, de la vía de entrada, y de la forma química
del aluminio administrada (Sahin y cols., 1994).
El Al absorbido se acumula en una serie de órganos, entre los que se encuen-
tra el cerebro, ya que atraviesa la barrera hematoencefálica (Bellés y cols., 1998;
Yokel y cols., 1999). Parece que el aclaramiento del Al del cerebro es mucho más
lento que el de otros órganos, posiblemente debido a la escasa renovación neu-
u n o
u n o
ronal, de ahí que se acumule fácilmente en este órgano (Baydar y cols., 2003;
Becaria y cols., 2002).
En sangre, el aluminio se une a la transferrina, siendo eliminado rápidamente del
flujo sanguíneo por deposición en diversos tejidos o por excreción (Pérez-Granados
y Vaquero, 2002), la cual tiene lugar fundamentalmente a través de la orina (Yokel,
2000).
El Al puede afectar a la biodisponibilidad de elementos esenciales como calcio,
cobre, hierro, magnesio y zinc, por los que compite reduciendo su presencia
(Dlugaszek y cols., 2000; Williams, 1999).
La toxicidad del aluminio se puso de manifiesto en 1972, tras el síndrome neu-
rológico que aparecía en pacientes sometidos a diálisis prolongada (Winship, 1993).
Posteriormente, varios estudios establecieron una relación significativa entre
los niveles de Al de las aguas de bebida y una mayor incidencia de la enfermedad
de Alzheimer (Jacqmin-Gadda y cols., 1996; Martín y cols., 1997).
Por tanto, el Al fundamentalmente es un metal neurotóxico que, en grandes
cantidades, provoca en el hombre ataxia, dificultades en el habla y en la ingesta
de alimentos, convulsiones y encefalopatía. Sin embargo, el mecanismo molecular
de la neurotoxicidad del Al no se conoce en la actualidad (Domingo y cols., 2000).
Al parecer, puede atravesar la barrera hematoencefálica y, por tanto, penetrar
en el cerebro, induciendo una degeneración neurofibrilar y muerte neuronal
(Alfrey y cols., 1976). Por eso se le relaciona con la demencia y otros desórdenes,
como la enfermedad de Alzheimer, aunque esta hipótesis actualmente se encuen-
tra en debate (Flaten, 2001; Nayak, 2002; Rondeau, 2002; Zatta y cols., 2003).
Así pues, el Al ha sido propuesto como uno de los factores ambientales cau-
santes de la enfermedad de Alzheimer en base a las siguientes evidencias experi-
mentales:
n La inducción de cambios fibrilares en neuronas de animales de experimenta-
ción tras la inyección de sales de aluminio en tejido cerebral.
8
n Las concentraciones elevadas de Al en las placas neuríticas y marañas neuro-
fibrilares encontradas en cerebros de pacientes con esta enfermedad.
n Las correlaciones establecidas de Al, fundamentalmente en aguas de consu-
mo, y la prevalencia de la enfermedad en estas zonas.
n El descenso observado en la progresión de la enfermedad tras la administra-
ción de desferrioxamina (agente quelante del Al) en pacientes diagnostica-
dos clínicamente con enfermedad de Alzheimer (Domingo, 2000).
A pesar de que estas hipótesis se encuentran en estudio, los resultados hasta
la fecha no son suficientes como para intentar prevenir o reducir significativa-
mente la exposición a este metal en todas las fuentes.
Además del sistema nervioso, el Al afecta también al sistema óseo, ya que
como el calcio, se deposita en el hueso, inhibiendo la formación de la matriz y
la mineralización del hueso, tanto directamente como a través de la inhibición
de la función paratiroidea. Se ha observado el desarrollo de osteomalacia en los
enfermos con insuficiencia renal crónica en hemodiálisis (Cannata, 1996 y 1998;
Jarava y cols., 2001).
También provoca anemia microcítica, mediante un mecanismo desconocido,
en pacientes con serias alteraciones renales (Ganchev y cols., 1998; Pérez-
Granados y Vaquero, 2002).
El silicio (Si), es el segundo elemento más abundante en la corteza terrestre
(Parry y cols., 1998).
Es fundamental para el crecimiento y desarrollo del hueso y cartílago en
humanos, por lo que se considera un elemento mineral esencial. Estudios recien-
u n o
9
1.2. SILICIO
u n o
tes muestran que una suplementación de Si en la dieta reduce la pérdida de
masa ósea, y activa la remineralización en el hombre y mujer pre-menopáusica
(Reffitt y cols., 2003).
Por tanto, la deficiencia de este elemento, ocasiona fundamentalmente pro-
blemas en el crecimiento, deformaciones óseas y desarrollo anormal del esque-
leto y alteraciones en la flexibilidad, efectos descritos en animales, pero no cla-
rificados en el ser humano (Pérez-Granados y Vaquero, 2002).
Además, diversos trabajos muestran que la deficiencia de Si afecta al meta-
bolismo del tejido conectivo, así como a la formación de la matriz del hueso
(Hott y cols., 1993; Seaborn y Nielsen, 1993).
Sin embargo, no se encuentra establecido el requerimiento mínimo reco-
mendado de ingesta de Si en el ser humano, ya que la información disponible
se encuentra muy limitada, y el rango de datos es muy elevado (Nielsen, 1999;
Pérez-Granados y Vaquero, 2002).
Su relación con el Al y la enfermedad de Alzheimer radica en su capacidad
potencial para limitar la biodisponibilidad del Al, al prevenir su absorción a
nivel gastrointestinal (Doucet y cols., 2001; Perry y Keeling-Tucker, 2000) y dis-
minuir la reabsorción del Al a nivel renal, protegiendo así de los efectos neu-
rotóxicos de éste (Reffitt y cols., 1999). No obstante, estas hipótesis se
encuentran actualmente en debate.
Las fuentes principales de Si biodisponible son los alimentos ricos en fibra,
fundamentalmente los cereales con cáscara: azúcar de remolacha, salvado de
trigo, soja, preparados de pectina, alfalfa, arroz y avena con cáscara, etc.
(Pennington, 1991; Pérez-Granados y Vaquero, 2002; Sripanyakorn y cols.,
2004).
La cerveza, bebida obtenida por maceración de cáscaras de cereales, contie-
ne aproximadamente 36 mg/L de Si biodisponible procedente del ácido ortosi-
lícico de la malta que se extrae durante el proceso de maceración (Bellia y cols.,
10
1994; Jugdaohsingh y cols., 2002; Pennington, 1991; Sripanyakorn y cols.,
2004; Tucker y cols., 2001). Por tanto, la cerveza se ha propuesto como una de
las fuentes de Si más importante en la dieta occidental (Jugdaohsingh y cols.,
2002; Pennington, 1991).
El contenido en Si del agua de bebida, depende de la localización geográfi-
ca, y se considera una buena fuente de silicio cuando contiene alrededor de 10
mg/mL (Pérez-Granados y Vaquero, 2002).
La absorción de este elemento a través de la dieta es ineficaz, ya que apro-
ximadamente el 50% del Si presente en los alimentos es insoluble o práctica-
mente insoluble, al encontrarse en forma de aluminosilicatos y sílica. Además,
en los países desarrollados, la baja ingesta de fibra alimentaria y los procesos
de refinado, afectan a la biodisponibilidad de este elemento por parte de la
población en general (Broadhurst, 1999; Pérez-Granados y Vaquero, 2002; Van
Dyck y cols., 1999).
Sin embargo, el ácido silícico presente en alimentos y bebidas, es rápida-
mente absorbido (Pérez-Granados y Vaquero, 2002). Se ha comprobado que apro-
ximadamente el 50% del Si de la cerveza, es absorbido fácilmente por el hom-
bre (Sripanyakorn y cols., 2004).
Y la principal vía de excreción es la urinaria (Jugdaohsingh y cols., 2002).
u n o
11
d o s
OBJETIVOS
El presente trabajo pretende estudiar el efecto de la cerveza sobre la toxicoci-
nética del Al, es decir, sobre su absorción, distribución, acumulación y elimi-
nación de este metal, así como su posible relación en la prevención de su neu-
rotoxicidad.
En una primera etapa se ha realizado un estudio de intoxicación agudo con
Al de tres días de duración, evaluando este posible efecto protector de la cer-
veza. Para ello, se han utilizado dos tipos de cerveza, con y sin alcohol, y a dos
dosis diferentes, una equivalente a un consumo moderado-bajo en el hombre
(0,5 L/día), y otra a moderado-alto (1 L/día).
Una vez comprobada esta hipotética influencia y determinado el tipo y la
dosis de cerveza más efectivas, se ha procedido a realizar un estudio crónico de
tres meses de duración, con el fin de confirmar los resultados obtenidos en el
estudio agudo y determinar, además, el posible efecto sobre la acumulación de
este metal neurotóxico en el tejido cerebral.
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MATERIALES Y MÉTODOS
El estudio fue llevado a cabo con ratones de la cepa NMRI, en el Centro de
Experimentación Animal de la Universidad de Alcalá, homologado por el ministe-
rio de Agricultura Ref. 28005-22 A, Real Decreto 233-88.
Para ello se utilizan ratones machos de seis semanas de vida, con un peso alre-
dedor de los 30 g. Se distribuyen en jaulas Macrolon tipo III con rejillas metáli-
cas. Las condiciones de estabulación son las estándar en experimentación animal:
temperatura ambiente de 21º C ± 1º C, humedad relativa del 55% ± 10%, y con
un ciclo diario de doce horas de luz (8:00 – 20:00) y doce horas de oscuridad. Los
animales tienen acceso libre al agua y a la comida (Panlab AOH).
3.1.1. DISTRIBUCIÓN DE ANIMALES PARA EL ESTUDIO AGUDO
Se establecen once grupos de animales, de 12 ratones cada uno, que se someten
a un tratamiento y/o intoxicación agudo de tres días de duración. Para ello se uti-
liza una cánula esofágica, para asegurar la dosis exacta de ingesta del animal. El
tercer día de tratamiento, se introduce cada ratón en una jaula metabólica, du-
rante 24 horas, para posteriormente recoger heces y orina. A continuación se sa-
crifican por exanguinación mediante pinchazo intracardiaco, previamente narcoti-
zados con halotano. Este sacrificio se lleva a cabo según la Directiva 86/609/CEE
del 24 de Noviembre de 1986, relativa a la aproximación de las disposiciones le-
gales, reglamentarias y administrativas de los Estados miembros respecto a la pro-
tección de animales utilizados para la experimentación y otros fines científicos.
Las heces y orinas se guardan en tubos de polietileno previstos de tapón, pre-
viamente lavados con ácido nítrico diluido al 10%, y las sangres en tubos de vidrio
heparinizados y con tapón de silicona. Todas las muestras se almacenan a -20º C
hasta su determinación.
t r e s
13
3.1. ANIMALES Y PROTOCOLO EXPERIMENTAL
t r e s
Los diferentes grupos son:
n Grupo “Control negativo”: a los cuales se les administra sólo agua desioni-
zada, para utilizarlos como grupo de referencia, y así poder valorar las modi-
ficaciones que se producen en los otros grupos de animales.
n Grupo “Control positivo”: intoxicados con Al, en forma de nitrato de alu-
minio [Al(NO3)3.9H2O] (Aldrich, CAS 7784-27-2), a una concentración de
450 mg/kg/día en agua desionizada. Este grupo se utiliza para valorar el
efecto de la intoxicación.
n Grupo “Cerveza con alcohol dosis moderada-alta”: 0,5 mL/día de cerveza
con alcohol desgasificada, equivalente a 1 L/día en humano.
n Grupo “Cerveza sin alcohol dosis moderada-alta”: 0,5 mL/día de cerveza
sin alcohol desgasificada, equivalente a 1 L/día en humano.
n Grupo “Cerveza con alcohol dosis moderada-baja”: 0,25 mL/día de cerve-
za con alcohol desgasificada, equivalente a 0,5 L/día en humano.
n Grupo “Cerveza sin alcohol dosis moderada-baja”: 0,25 mL/día de cerve-
za sin alcohol desgasificada, equivalente a 0,5 L/día en humano.
n Grupo “Aluminio y cerveza con alcohol dosis moderada-alta”: 0,5 mL/día
de cerveza con alcohol desgasificada y 450 mg/kg/día de nitrato de aluminio.
n Grupo “Aluminio y cerveza sin alcohol dosis moderada-alta”: 0,5 mL/día
de cerveza sin alcohol desgasificada y 450 mg/kg/día de nitrato de aluminio.
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n Grupo “Aluminio y cerveza con alcohol dosis moderada-baja”: 0,25 mL/día
de cerveza con alcohol desgasificada y 450 mg/kg/día de nitrato de alumi-
nio.
n Grupo “Aluminio y cerveza sin alcohol dosis moderada-baja”: 0,25 mL/día
de cerveza sin alcohol desgasificada y 450 mg/kg/día de nitrato de aluminio.
n Grupo “Aluminio y ácido silícico”: se les administra 50 mg/L de ácido silí-
cico, SiO2 ó Si(OH)4, a razón de 0,5 mL/día, con nitrato de aluminio en agua
desionizada a una concentración de 450 mg/kg/día.
3.1.2. DISTRIBUCIÓN DE ANIMALES PARA EL ESTUDIO CRÓNICO
En esta segunda fase del estudio, ratones machos de la cepa NMRI, con un peso
inicial aproximado de 30 g, se dividen aleatoriamente en cuatro grupos (n = 12)
y se someten diariamente, durante tres meses, a los siguientes tratamientos:
n Grupo “Control negativo”
n Grupo “Control positivo”
n Grupo “Aluminio y ácido silícico”, grupos análogos a los descritos en el estu-
dio agudo y, por último:
n Grupo “Aluminio y cerveza”: a los que se les administra el tipo y la dosis de
la cerveza seleccionada en la primera etapa del proyecto, junto con una dosis
de 450 mg/Kg/día de nitrato de aluminio.
t r e s
15
t r e s
Para este ensayo, la administración de los diferentes compuestos y dosis se
realiza a través del agua de bebida, debido a que, la utilización de cánulas eso-
fágicas, durante un tiempo prolongado, provoca irritación en el esófago de los
ratones, produciendo heridas con la subsiguiente infección y muerte del animal.
Cada jaula posee un “biberón” que abastece de agua a los ratones de forma
libre. En el agua de bebida se disuelven las cantidades adecuadas (según la do-
sis y peso de los ratones de cada caja y grupo), y cada 2 días se repite el pro-
ceso, previo vaciado y limpiado de los biberones, para proporcionarles la dosis
adecuada y para evitar precipitación y/o aparición de hongos (sobretodo en los
biberones con cerveza). Además, se observan y pesan los ratones diariamente.
Al concluir los tres meses de tratamiento, el último día se introduce cada ra-
tón en una jaula metabólica, durante 24 horas, para permitir la recogida de he-
ces y orina. A continuación se sacrifican por exanguinación mediante pinchazo
intracardiaco, siguiendo el proceso anteriormente mencionado.
Además de heces y orinas, se recogen muestras de sangres y cerebros, que
se guardan a -20º C hasta su posterior análisis, siguiendo el mismo proceso que
en el estudio agudo.
Las muestras utilizadas para el presente estudio fueron: cerveza con alcohol
(5,5% Vol) y cerveza sin alcohol (menos de 1%Vol).
En las muestras de orinas recogidas al concluir el estudio agudo y al final de
cada mes en el estudio crónico, se realiza la determinación de creatinina. El mé-
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3.2. MUESTRAS
3.3. PRUEBAS BIOQUÍMICAS
todo empleado es el método de Jaffe modificado (Spierto y cols., 1979), méto-
do en el que se basa el kit comercial de Química Clínica Aplicada (QCA SA).
3.4.1. PREPARACIÓN DE LA MUESTRA
La destrucción de la materia orgánica se realiza con ácido nítrico concentrado,
HNO3 cc. (65% Suprapur, E. Merck, Darmstadt, Germany), utilizando digestores
de teflón herméticos, siguiendo la metodología previamente descrita por: Gra-
nero y cols., 2004; Granero y Domingo, 2002.
Se usa este tipo de material (teflón) debido a su gran resistencia al ataque
con ácidos, y también por ser fácilmente lavable y por su casi nula contamina-
ción de la muestra.
Se procede a pesar la cantidad de muestra disponible, máximo 0,2 mg, en los
digestores de teflón y se añaden 2 mL de HNO3 cc. para obtener la fracción so-
luble de la muestra. Se realiza una predigestión a temperatura ambiente duran-
te 8 horas y seguidamente una digestión a 96º C durante 12 horas en estufa.
Transcurrido este tiempo, se dejan enfriar los contenedores de teflón y se
abren en una campana de gases para evitar el NOx formado durante el trata-
miento de la muestra.
Con el fin de separar los silicatos no disueltos durante el ataque, el digerido
se filtra con filtros de papel Whatman 50 ó 52 (filter papers hardened, 90 mm
φ, 52 Whatman International Ltd., England) y se enrasa a 10 ml con H2O desti-
lada-desionizada (sistema Millipore, Milli-Q, resistividad >18,2 MΩ.cm).
Las disoluciones obtenidas se guardan por duplicado en tubos de polietileno
a –20º C.
t r e s
17
3.4. METODOLOGÍA PARA EL ANÁLISIS DE ELEMENTOS
t r e s
3.4.2. TÉCNICAS ANALÍTICAS USADAS
Las técnicas utilizadas son la espectrometría de masas de plasma acoplado in-
ductivamente (ICP-MS, Perkin Elmer modelo Elan-6000) para la determinación
del Al y la espectrometría de emisión atómica de plasma acoplado inductiva-
mente para el análisis del Si (ICP-OES, Thermo Jarrell Ash., modelo Poly Scan
G1E), técnicas de análisis elemental que se complementan con la técnica de ab-
sorción atómica.
Para la determinación bioquímica de creatinina en orina, se emplea la es-
pectroscopia ultravioleta-visible (UV-VIS, Espectrofotómetro Perkin Elmer
UV/VIS modelo lambda 12).
3.4.3. CONTROL DE CALIDAD
La fiabilidad de la técnica del ICP y la idoneidad del material empleado, se ha
comprobado mediante la obtención de duplicados de cada muestra, así como
por el uso de un material de referencia (NIST 1643c), el cual se pasaba cada 10
muestras para chequear la desviación de la sensibilidad del instrumento. Para
cada elemento, la cuantificación se ha basado en el isótopo más abundante li-
bre de interferencias analíticas, así como de la longitud de onda (Meneses y
cols., 1999; Schuhmacher y cols., 1997a y 1998a).
Como control de las determinaciones de creatinina, se utiliza Seriscann Nor-
mal de QCA.
18
Los resultados obtenidos han sido procesados utilizando el programa Excel XP, in-
tegrado dentro del programa Microsoft Office XP y como programa estadístico, el
Statgraphics 5.0. La normalidad de las variables se ha comprobado aplicando la
prueba de Kolmogorov-Smirnov, y la homogeneidad mediante la F Snedecor. Los da-
tos han sido analizados mediante el análisis de la varianza de una vía (1-way ANO-
VA), y las diferencias entre las diferentes medias han sido evaluadas con los tests
de comparaciones múltiples de LSD, con un intervalo de confianza del 95%, es de-
cir, una probabilidad de 0,05 o menor se consideró significativa.
t r e s
19
3.5. TRATAMIENTO ESTADÍSTICO
c u a t r o
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
El contenido de Al de las distintas cervezas utilizadas es muy similar: 0,40 ± 0,12
µg/g para la cerveza con alcohol, y 0,39 ± 0,04 µg/g para la cerveza sin alcohol
(Tabla 1).
Estos resultados se encuentran dentro del rango aportado por López y cols.
(1998) de 0,037-0,795 µg Al/mL, y concuerdan con los obtenidos por otros auto-
res: 0,49 ± 0,11 µg Al/mL (Granero y cols., 2004); 0,56 ± 0,10 µg Al/mL (Viñas y
cols., 2002), para cervezas embotelladas.
Según la Agencia para las Sustancias Tóxicas y el Registro de la Enfermedad,
ATSDR, de los EEUU, el mínimo nivel de riesgo (MRL) para el Al es de 2,0
mg/kg/día (ATSDR, 2001). Por tanto, el consumo diario de 1 L de cerveza para un
individuo de 70 kg aportaría el 0,29% de este MRL, no representando riesgo algu-
no para la salud.
En relación al contenido en Si, las concentraciones medias de la cerveza con al-
cohol y sin alcohol son de 24,56 ± 2,45 µg/g y 18,21 ± 2,48 µg/g respectiva-
mente, valores significativamente diferentes (p<0,001).
Aunque ambas concentraciones son inferiores a los datos previamente publica-
dos por Granero y cols. (2004) y Sendra y Carbonell (1999): 36,8 y 36,0 µg/mL, se
encuentran dentro del rango de valores aportados por Sripanyakorn y cols. (2004)
para cervezas embotelladas (10,1-35,0 mg Si/mL).
20
4.1. CONTENIDO DE ALUMINIO Y SILICIOEN MUESTRAS DE CERVEZA
4.2.1. EXCRECIÓN FECAL
4.2.1.1. NIVELES DE AL
La vía de excreción fundamental del Al es a través de la orina, por lo que los nive-
les de este metal en las heces son la suma del metal no absorbido y del excretado
a través de la bilis (DeVoto y Yokel, 1994).
La suplementación de cerveza parece influir sobre la toxicocinética del Al pre-
sente en la dieta. Así, al comparar los animales control negativo con los que han
recibido los diferentes tipos y dosis de cerveza, puede observarse un incremento en
los niveles fecales de Al, si bien las diferencias encontradas no son significativas
(Tabla 2). Por otra parte, los ratones que han recibido cerveza con alcohol, a ambas
dosis, excretan más Al (276,98 y 201,66 µg/g) que los suplementados con cerveza
sin alcohol (198,27 y 145,41 µg/g).
Estos efectos podrían ser atribuidos al Si contenido en esta bebida, ya que este
elemento es capaz de limitar la absorción del Al dietético en el tracto gastrointesti-
nal, incrementando su excreción por vía fecal (Bellia y cols., 1996). De los dos tipos
de cerveza estudiados, la que parece ejercer un efecto más acentuado es la cerveza
con alcohol, a la dosis moderada-alta, aunque sin alcanzar significancia. Hay que in-
dicar que la cerveza con alcohol presenta niveles de Si ligeramente superiores a la sin
alcohol (Tabla 1), por lo que en principio este resultado seria el esperado.
Cuando los animales son intoxicados con Al y tratados con ácido silícico, los ni-
veles fecales de Al aumentan de forma significativa (p<0,001) respecto a los rato-
nes intoxicados control positivo (2878,94 vs. 1633,94 µg/g) (Tabla 2). Ello indica-
ría una posible interacción del Si con el Al, dificultando la absorción de este último
a nivel gastrointestinal.
c u a t r o
21
4.2. ESTUDIO AGUDO
c u a t r o
Estos resultados concuerdan con los obtenidos por otros autores (Bellia y
cols., 1996; Gräske y cols., 2000). El posible mecanismo de esta interacción se-
ría la formación de especies de aluminosilicatos, como los hidroxi-aluminosilica-
tos (HAS) (Parry y cols., 1998; Perry y Keeling-Tucker, 1998). Estos compuestos
son una fase crítica secundaria mineral del ciclo biogeoquímico del Al, y se ha su-
gerido que se forman a pH fisiológico de 4,5 aproximadamente (Perry y Keeling-
Tucker, 1998).
Un efecto similar se observa cuando el ácido silícico es administrado a través
de la cerveza en los animales intoxicados con Al. Así, todos los grupos tratados
con cerveza presentan niveles fecales de Al superiores a los ratones intoxicados
control positivo, aunque sólo existen diferencias significativas (p<0,001) para el
grupo de los ratones tratados con cerveza con alcohol, a dosis moderada-alta (Ta-
bla 2). Por tanto, el Si contenido en la cerveza parece ejercer una interacción en
el mismo sentido que la observada tras la administración de ácido silícico.
Asimismo, la posible interacción de Al y Si a nivel gastrointestinal parece ser
dependiente de la dosis de Si presente en el lumen, ya que la cerveza con alco-
hol es la que contiene mayor concentración de ácido silícico, como se ha comen-
tado anteriormente. De hecho, Birchall y cols., en 1989, sugieren que la interac-
ción Al/Si tiene lugar cuando las concentraciones de ácido silícico sobrepasan un
umbral determinado.
A la vista de estos resultados podríamos sugerir que la cerveza podría ejercer
un papel protector frente a la intoxicación por Al a través de la dieta, al dificul-
tar la absorción de éste en el tracto gastrointestinal.
4.2.1.2. NIVELES DE SI
El Si contenido en la cerveza, ácido silícico en forma monomérica o ácido ortosicí-
lico (Jugdaohsingh y cols., 2000 y 2002), es rápidamente absorbido y excretado a
22
través de la orina (Yokel, 2000; Sripanyakorn y cols., 2004), de ahí que no se hayan
detectado niveles de Si en las heces de los animales estudiados (Tabla 2).
Estudios de cinética realizados con ácido silícico en humanos, muestran también
que la cinética de absorción/excreción es rápida para este elemento (Popplewell y
cols., 1998).
4.2.2. EXCRECIÓN URINARIA
4.2.2.1. NIVELES DE AL
A pesar de que el Al es poco biodisponible, una pequeña, pero suficiente cantidad, se
absorbe en el tracto gastrointestinal (Drueke, 2002; Gräske y cols., 2000), de ahí que
la excreción de Al en orina sea significativamente mayor (p<0,001) en el grupo de ra-
tones intoxicados con este metal, respecto al control negativo (1,03 vs. 0,73 µg/g).
Los niveles urinarios de Al de los ratones suplementados con los diferentes tipos de
cerveza son inferiores a los del grupo control negativo (Tabla 3). Esto podría atri-
buirse a que la absorción a nivel gastrointestinal del Al dietético estaría dificultada
en estos grupos, como se ha comentado anteriormente.
Por otro lado, se puede observar que los niveles urinarios de Al de estos grupos
son mayores conforme los niveles de Si aportados aumentan. Es decir, los grupos a
los que se les administra mayores niveles de Si, que fueron los suplementados con
cerveza con y sin alcohol a dosis moderada-alta, excretan más Al por orina (0,67 y
0,49 µg/g), que los suplementados con menos Si, cerveza con y sin alcohol a dosis
moderada-baja (0,44 y 0,47 µg/g).
Este hecho indicaría que el ácido silícico también podría actuar sobre el Al a ni-
vel renal, impidiendo la reabsorción del Al, lo cual facilitaría su excreción por orina
(Bellia y cols., 1996), siendo en nuestro caso dosis-dependiente. Bellia y cols.
(1996) sugieren la existencia de una interacción en el túbulo contorneado proximal
c u a t r o
23
c u a t r o
de las nefronas entre el Si y Al, lo que permitiría su co-deposición. Sin embargo,
para Reffitt y cols. (1999) esta hipótesis no está clara.
Respecto a los grupos de ratones que fueron intoxicados con Al, la suplementa-
ción con Si en forma de ácido silícico o a través de la cerveza, también produce una
disminución (p<0,001) de los niveles de Al en orina al compararlos con los anima-
les control positivo (Tabla 3). Además, se observa de igual modo que, en función
de la dosis administrada de Si, los niveles urinarios de Al mantienen también un
comportamiento dosis-dependiente.
Así, el grupo intoxicado y tratado con ácido silícico y, por tanto, el que recibe
la mayor concentración de Si, presenta niveles de Al urinario superiores a todos los
grupos de ratones suplementados con cerveza y Al, siendo significativa la diferen-
cia (p<0,001) con los suplementados con menores concentraciones de Si (cerveza
con y sin alcohol a dosis moderada-baja) (Tabla 3).
Estos resultados podrían avalar la hipótesis del posible efecto protector del áci-
do ortosilícico sobre el Al, que funcionaría, por tanto, a nivel gastrointestinal, di-
ficultando la absorción del Al (Bellia y cols., 1996; Gräske y cols., 2000; Parry y
cols., 1998) y a nivel renal, posiblemente disminuyendo la reabsorción del Al (Be-
llia y cols., 1996), de forma dosis-dependiente.
4.2.2.2. NIVELES DE SI
Al comparar los niveles urinarios de Si del grupo control positivo con los del con-
trol negativo (15,20 vs. 19,74 µg/g) se observa una disminución significativa
(p<0,001) de los niveles de éste en los ratones intoxicados con Al (Tabla 3). Ello
reforzaría la hipótesis de una interacción de ambos elementos a nivel del tracto gas-
trointestinal.
Este efecto también puede observarse al comparar los niveles urinarios de Si
de los grupos control suplementados con cerveza con alcohol a ambas dosis
24
(16,86 y 9,44 µg/g) con los correspondientes intoxicados con Al (12,82 y 4,72
µg/g), siendo la diferencia significativa (p<0,001). Sin embargo, no ocurre lo mis-
mo en los animales tratados con cerveza sin alcohol, cuyos niveles de Si son si-
milares a los de los respectivos controles (Tabla 3). La presencia de alcohol pare-
ce ser el factor discriminante. Así, Reffitt y cols. (1999) sugieren la posibilidad de
que el alcohol ejerce un efecto sinérgico con el Si en la excreción urinaria de Al,
por lo que, al eliminarse conjuntamente (Popplewell y cols., 1998), el sinergismo
sería recíproco.
Por otra parte, los niveles urinarios de Si de los animales control suplementa-
dos con cerveza son menores a los del control negativo (Tabla 3). Reffitt y cols.
(1999) atribuyen este hecho a la existencia de algún componente de la cerveza
que, de alguna manera, favorezca la distribución del Si en el organismo.
4.2.3. NIVELES SANGUÍNEOS
4.2.3.1. ALUMINIO
No se han encontrado diferencias significativas al comparar los niveles sanguíne-
os de Al de los ratones control positivo con los de los ratones control negativo
(1,09 vs. 0,95 µg/g) (Tabla 4). Este dato sería indicativo de la escasa absorción
del Al, y de su rápida distribución una vez ha penetrado en el organismo (Pérez-
Granados y Vaquero, 2002; Van Landeghem y cols., 1998; Yokel, 2000).
Los niveles sanguíneos de Al de los grupos suplementados con los diferentes
tipos de cerveza son menores, en todos los casos, que los del control negativo,
siendo la diferencia significativa (p<0,001) en aquéllos en los que se les admi-
nistra la dosis de cerveza moderada-baja (Tabla 4). Este hecho pondría también
de manifiesto la interacción del ácido silícico contenido en la cerveza sobre la ab-
sorción del Al dietético, como se ha comentado anteriormente.
c u a t r o
25
c u a t r o
Respecto a los diferentes grupos de ratones intoxicados con Al, se observa
también que los niveles de Al en sangre son menores en todos los grupos que han
tenido un aporte de ácido silícico, respecto al control positivo, siendo esta dife-
rencia significativa (p<0,001) en todos los grupos tratados con cerveza (Tabla 4).
Al comparar estos últimos resultados, se observa de nuevo que existe una re-
lación entre los niveles sanguíneos de Al y la concentración de Si administrada.
Es decir, a mayor concentración de Si aportado, mayor presencia de Al en san-
gre. Así, entre todos los grupos tratados con Si y Al, los animales que presentan
mayores niveles de Al plasmáticos son aquellos suplementados con ácido silíci-
co (0,90 µg/g), luego los tratados con cerveza con alcohol a dosis moderada-
alta (0,73 µg/g), y así sucesivamente, a medida que el aporte de Si disminuye
(Tabla 4).
Esto podría ser debido posiblemente a que el ácido silícico aportado favorece
de alguna forma la presencia del Al en sangre, para su posterior excreción a tra-
vés de la orina, hecho que se observaría en los niveles urinarios de aluminio, que
aumentarían con la dosis aportada de Si (Tabla 3), y/o a que el Si dificultaría de
algún modo la distribución tisular del Al, aumentando, por tanto, la presencia de
éste en sangre (Bellia y cols., 1996), aunque en este punto existen discrepancias,
ya que otros investigadores obtienen resultados contrarios (Reffitt y cols., 1999).
4.2.3.2. SILICIO
Hay que indicar que no se ha detectado Si en sangre, debido, posiblemente, a la
cinética de absorción/eliminación rápida del ácido silícico (Popplewell y cols.,
1998). Este elemento mineral posee un elevado aclaramiento renal, por lo que el
Si presente en suero es rápidamente filtrado por el riñón, siendo baja la reabsor-
ción en la nefrona (Reffitt y cols., 1999).
26
4.2.4. CONCLUSIONES
Los resultados obtenidos sugieren que el ácido silícico contenido en la cerveza, podría
interferir con el Al disminuyendo su biodisponibilidad a tres niveles diferentes: a ni-
vel gastrointestinal, dificultando su absorción (Bellia y cols., 1996; Gräske y cols.,
2000; Parry y cols., 1998), a nivel renal, disminuyendo su reabsorción (Bellia y cols.,
1996), y a nivel de distribución, impidiendo su distribución tisular (Belles y cols.,
1998; Dobranskyte y cols., 2004; Exley, 1999; Reffitt y cols., 1999; Yokel y cols., 1999).
Por tanto, y teniendo en cuenta las hipótesis anteriores, la cerveza podría ejercer
un papel protector frente a la toxicocinética del Al, siendo la CERVEZA CON ALCOHOL
y a la DOSIS MODERADA-ALTA, la que produce un mayor efecto. De ahí que ésta haya
sido el tipo y la dosis de cerveza elegida para la consecución del estudio crónico.
Según los resultados obtenidos en el estudio previo de intoxicación aguda, el tipo
y dosis de cerveza que parece ejercer un mayor efecto protector, es la cerveza con
alcohol a dosis moderadamente alta. Por tanto, al grupo de: “Aluminio y cerveza”:
se les administra 0,5 mL/día de cerveza con alcohol desgasificada y 450
mg/kg/día de nitrato de aluminio.
4.3.1. CONTROL DE ANIMALES
4.3.1.1. PESO DE RATONES
Las curvas de crecimiento obtenidas para los animales control (positivo y negati-
vo) y aquellos tratados con Al y/o cerveza/silicio quedan reflejadas en la Fig. 1.
(Anexo)
c u a t r o
27
4.3. ESTUDIO CRÓNICO
c u a t r o
Dichas curvas indican un ritmo de crecimiento similar para los cuatro grupos
de animales, no apareciendo diferencias significativas entre ellos.
En todos los grupos se aprecia un aumento de peso a medida que avanza el
ensayo, hasta las últimas semanas del mismo, donde se estabiliza. Los pesos de
los animales se corresponden con el rango de pesos dados por Charles Rives Com-
pany (IFFA CREDO).
Estos resultados concuerdan con los obtenidos por Fraga y col. (1990), quie-
nes encuentran que el Al no ejerce efecto sobre el peso de los ratones.
4.3.1.2. CREATININA URINARIA
La creatinina es el producto final en el catabolismo del fosfato de creatinina mus-
cular y su excreción, que ocurre exclusivamente por filtración glomerular, tiene
correlación con la masa muscular o con el peso corporal total.
Normalmente, su eliminación es constante en los mamíferos. Además la canti-
dad de creatinina excretada no depende de la actividad física, dieta o diuresis.
Para que se verifique una disminución en la excreción de la creatinina, la función
renal debe estar considerablemente alterada. Esta concentración es menor en el
período nocturno y aumenta gradualmente durante el día. De la misma manera, la
excreción parece variar con la edad y el ritmo circadiano. En individuos mayores
las concentraciones son menores (Elbert, 1997).
Por ello, se ha decidido utilizar el valor de creatinina, además de como factor
de corrección para la determinación de elementos en orina, como un parámetro
bioquímico de control del estado de salud de los roedores durante el experimento.
En líneas generales, y según los datos de creatinina obtenidos (Figura 2), no
se infiere el desarrollo de ninguna alteración fisiológica debida a la intoxicación
con aluminio, que pudiera interferir con los resultados obtenidos, en relación con
las hipótesis de este trabajo.
28
4.3.2. EXCRECIÓN FECAL
4.3.2.1. NIVELES DE AL
El posible efecto del ácido silícico sobre la biodisponibilidad del Al a nivel gas-
trointestinal (Bellia y cols., 1996; Granero y cols., 2004) se pone de manifiesto en
los niveles de Al determinados en las heces de los animales tras la intoxicación
crónica de tres meses de duración (Tabla 5).
Así, los ratones tratados con ácido silícico excretan significativamente
(p<0,001) más Al que los animales intoxicados control positivo (665,87 vs. 487,38
µg/g). El mismo efecto pero más atenuado se observa al comparar los niveles de
Al de los ratones tratados con cerveza con alcohol frente a los animales control
positivo (560,46 vs. 487,38 µg/g), si bien las diferencias resultaron ser significa-
tivas (p<0,05).
El “menor” efecto de la cerveza sobre la toxicocinética del Al, podría ser debi-
do a que, como se ha mencionado anteriormente, el posible mecanismo de esta
interacción (la formación de especies de aluminosilicatos) depende de la dosis de
Si presente en el lumen, por lo que al aportar una menor concentración de ácido
silícico en el grupo tratado con cerveza que en el tratado con ácido silícico, el
efecto observado será también menor.
Estos resultados concuerdan con los observados en el estudio agudo, y con los
encontrados por otros autores (Bellia y cols., 1996; Gräske y cols., 2000), así
como con los aportados por Granero y cols. (2004) en el proyecto anterior.
Por tanto, un consumo moderado-alto de cerveza con alcohol parece afectar a
la absorción del Al a nivel del tracto digestivo, dificultando la entrada de este me-
tal potencialmente tóxico al organismo.
c u a t r o
29
c u a t r o
4.3.2.2. NIVELES DE SI
Al contrario que en el estudio agudo, sí se observan niveles de Si fecales en los
animales tras el estudio crónico, aunque las diferencias no son significativas en-
tre los distintos grupos estudiados (Tabla 5).
Estos valores, son coincidentes con los obtenidos por Granero y col., 2004.
Las concentraciones de Si en heces de los animales intoxicados con Al son li-
geramente superiores a las del grupo control negativo (123,45 vs. 116,12 µg/g),
lo que podría indicar una posible interacción del Si con el Al presente en la dieta.
Los niveles fecales de Si son ligeramente más elevados en los grupos intoxica-
dos con Al y tratados con cerveza y ácido silícico, 131,06 µg/g y 140,56 µg/g,
respectivamente, respecto a los grupos control positivo y negativo (Tabla 5). Es-
tos datos avalarían la hipótesis de la formación de compuestos inabsorbibles en-
tre el Al y el Si.
4.3.3. EXCRECIÓN URINARIA
4.3.3.1. NIVELES DE AL
En términos generales, los grupos intoxicados con Al presentan niveles urinarios
de este metal ligeramente superiores a los ratones control negativo, aunque las
diferencias encontradas no son significativas. Asimismo, la excreción urinaria de
Al de los grupos tratados con Si y cerveza resultan ser similares a la de los gru-
pos controles (Tabla 6). Estos datos difieren de los obtenidos en el estudio agu-
do, donde las concentraciones urinarias de Al para todos los grupos intoxicados
pero tratados con Si fueron menores respecto al control positivo (Tabla 3).
Estas diferencias entre el estudio agudo y crónico pueden ser atribuidas a po-
sibles cambios en la homeostasis de estos elementos minerales como consecuen-
30
cia de la edad de los animales (Gómez y cols., 1997), que ha aumentado durante
la duración del estudio crónico (tres meses).
Otros investigadores (Domingo, 1999; Granero y cols. 2004), tampoco aprecian
un incremento en la excreción urinaria del Al en animales intoxicados con Al y tra-
tados con Si. Por tanto, la hipótesis apuntada a tenor de los datos obtenidos en
el estudio agudo, acerca de una interacción de estos elementos minerales a nivel
renal, parece no cristalizarse como válida.
4.3.3.2. NIVELES DE SI
Al comparar los niveles urinarios de Si del grupo control positivo con los del con-
trol negativo (0,19 vs. 0,24 µg/g) se observa una disminución de los niveles de
éste en los ratones intoxicados con Al, aunque sin alcanzar significancia (Tabla
6). Ello reforzaría la hipótesis de una interacción de ambos elementos a nivel del
tracto gastrointestinal.
Resultados similares fueron aportados por Granero y cols. (2004) en el proyec-
to anterior.
4.3.4. NIVELES SANGUÍNEOS
4.3.4.1. ALUMINIO
Al igual que en el estudio agudo, no se observan diferencias significativas al com-
parar los niveles sanguíneos de Al de los ratones control positivo con los de los
ratones control negativo (1,72 vs. 1,49 µg/g) (Tabla 7). Este dato sería indicati-
vo de la escasa absorción del Al, y de su rápida distribución una vez ha penetra-
do en el organismo (Pérez-Granados y Vaquero, 2002).
c u a t r o
31
c u a t r o
Respecto al tratamiento con Si, se puede observar que los niveles de Al en
sangre de los animales suplementados tanto con cerveza como con ácido silíci-
co son menores respecto al control positivo, siendo esta diferencia significativa
(p<0,001) (Tabla 7). Esto sería consecuencia de la interacción del Si con el Al a
nivel del tracto gastrointestinal.
Tampoco se encuentran diferencias al comparar los valores de Al en sangre de
los animales tratados con cerveza con alcohol (0,94 µg/g) con los tratados con
ácido silícico (0,82 µg/g), por lo que la cerveza con alcohol a esta dosis parece
ser efectiva en dificultar la entrada del Al al organismo.
4.3.4.2. SILICIO
Aunque los niveles de Si en sangre de los ratones control positivo y los anima-
les control negativo (23,78 vs. 29,63 mg/g) (Tabla 7) no resultaron ser signifi-
cativamente diferentes, los niveles de este elemento son ligeramente inferiores
en los animales intoxicados, indicando una posible interacción del Si y el Al die-
téticos.
Las concentraciones sanguíneas de Si de los animales tratados con cerveza o
ácido silícico son menores respecto a los ratones intoxicados control positivo,
siendo esta diferencia significativa (p<0,001) para el grupo tratado con ácido si-
lícico, hecho que pone de manifiesto la interacción del Si con el Al. Es decir, se
observa que, aquellos ratones tratados con Si (para ambos grupos), presentan
niveles mayores de excreción, tanto urinaria como fecal, para este elemento (Ta-
blas 5 y 6). Ello, junto con una posible distribución tisular favorecida, hace que
los niveles sanguíneos de Si estén disminuidos.
32
4.3.5. NIVELES EN TEJIDO CEREBRAL
4.3.5.1. ALUMINIO
Los resultados obtenidos confirman que el tejido cerebral es un órgano diana para
el Al, ya que este se acumula de forma significativa tras una intoxicación cróni-
ca. Así, los niveles de Al del tejido cerebral de los animales intoxicados son sig-
nificativamente mayores (p<0,01) con respecto a los ratones control negativo
(3,85 vs. 2,08 µg/g) (Tabla 8).
A pesar de que los menores niveles de Al en tejido cerebral corresponden a los
roedores del grupo control negativo, estos no muestran diferencias significativas
con los grupos tratados con Si, a través de la cerveza o del ácido silícico. Por tan-
to, podemos considerar que el tratamiento ha resultado totalmente satisfactorio.
Los niveles de Al son significativamente menores (p<0,01) en los cerebros de
los ratones tratados con ácido silícico que los correspondientes a los animales
control positivo (2,34 vs. 3,85 µg/g). Asimismo, se observa que la administra-
ción de Si a través de la cerveza, ocasiona también una disminución de los ni-
veles de Al del tejido cerebral, aunque no de forma significativa (2,34 vs. 3,85
µg/g).
Estos datos son concordantes con los obtenidos respecto a la eliminación del
Al por heces: la mayor excreción en animales tratados podría ser una de las cau-
sas de la menor acumulación del Al en el cerebro.
A tenor de estos resultados se puede decir que la administración de Si podría
ser efectiva frente a la acumulación de Al en el cerebro de los ratones, como tam-
bién observó en el estudio previo el Dr. Granero y cols., 2004.
c u a t r o
33
c u a t r o
4.3.5.2. SILICIO
Aunque no se hallan diferencias significativas, los niveles de Si cerebral de los
roedores intoxicados con Al son mayores que los controles negativos (25,83 vs.
13,64 µg/g) (Tabla 8).
El incremento en el contenido en Si se podría deber a que, por un lado, exis-
ten evidencias de que el Al produce radicales libres que inducen la peroxidación li-
pídica, produciendo un daño en las membranas neuronales y un incremento en la
permeabilidad de la barrera hemotoencefálica (Srivastava y cols., 2002; Tokutake,
1997) y, por tanto, un aumento en la entrada de Si dietético al tejido cerebral.
Por otro lado, Desouky y cols., 2002 y 2003, sugieren, a partir de varios estu-
dios en reptiles, que el Al interacciona con el Si, permitiendo la entrada conjunta
posiblemente a través de especies de aluminosilicatos, como posible mecanismo
de detoxificación de este metal neurotóxico.
Asimismo, numerosos estudios han demostrado que el Al y Si se encuentran pre-
sentes en el interior de gránulos de lipofuscina contenidos en placas seniles y ma-
rañas neurofibrilares, en cerebros (Candy y cols., 1992; Clauberg y Joshi, 1993; Ka-
neko y cols., 2004; Kohila y cols., 2004), así como en cerebros de pacientes con
EA (Tokutake, 1997; Tokutake y cols., 1995; Tokutake y Oyanagi, 1995). Los grá-
nulos de lipofuscina son lisosomas degradados, debido a la acumulación gradual
de compuestos inorgánicos.
Se observa también que los niveles de Si en tejido cerebral son mayores en los
grupos intoxicados con Al y tratados con Si, frente a los controles positivo (Tabla
8), resultado previsible ya que estos roedores son suplementados con Si.
34
CONCLUSIONES
Al ser el Al un metal potencialmente neurotóxico, presumiblemente asociado en la ac-
tualidad a la enfermedad de Alzheimer, y otras enfermedades degenerativas importan-
tes, sería conveniente reducir la exposición a este metal en todas las fuentes.
Debido a la posible interacción entre el Al y Si observada a nivel del tracto gas-
trointestinal, y a la disminución de la presencia de Al en plasma y tejido cerebral,
podríamos indicar que el Si, en forma de ácido silícico, puede reducir la biodisponi-
bilidad del Al y, por tanto, sería un elemento a considerar como factor de protec-
ción frente a este metal.
El tratamiento con cerveza con alcohol a una dosis moderada-alta, parece ejer-
cer el mismo efecto. Por tanto, un aporte moderado de cerveza podría ser tenido en
cuenta en los hábitos dietéticos de la población como un posible factor protector,
hecho que reafirma la reciente inclusión de esta bebida en la pirámide nutricional.
Sin embargo, el consumo de bebidas alcohólicas nunca se debe considerar como
un modo de incrementar ciertos nutrientes, que pueden encontrarse en otros ali-
mentos en la dieta, ya que su consumo debe estar dentro de unos límites, que de-
penden tanto del sexo como de la edad.
Además, un abuso de consumo de alcohol se asocia con un incremento en la mor-
bilidad y mortalidad (Yuan y cols., 2001), si bien un consumo moderado puede tener
efectos beneficiosos sobre la salud, como por ejemplo en enfermedades cardiovascu-
lares (De Loromier, 2000), así como en la prevención de la resorción y pérdida ósea en
el ser humano (Rapuri y cols., 2000; Tucker y cols., 2001; Tunner y Sibonga, 2001).
De ahí que, y dado que algunos de los efectos observados en el estudio agudo
entre la cerveza con y sin alcohol no resultaron significativos, sería interesante com-
pletar este trabajo realizando un estudio crónico con cerveza sin alcohol, con el ob-
jeto de comprobar si el efecto protector del Si se produce también en ausencia del
alcohol.
Así mismo, sería fundamental la determinación de biomarcadores de peroxidación li-
pídica en cerebros, debido a la capacidad del Al de inducir radicales libres, para com-
probar si el Si es capaz de interferir en este mecanismo de daño cerebral.
c i n c o
35
s e i s
ANEXO
Tabla 1. Contenido de Al y Si en cerveza (µg/g)
36
Cerveza con alcohol Cerveza sin alcohol
Aluminio 0,40 ± 0,12a 0,39 ± 0,04a
Silicio 24,56 ± 2,45a 18,21 ± 2,48b
Los valores de la misma fila con diferente letra son significativamente diferentes.
Tabla 2. Estudio agudo: Niveles fecales de Al y Si (µg/g)
Grupo
Control NegativoControl PositivoCerveza con alcohol dosis moderada-altaCerveza con alcohol dosis moderada-bajaCerveza sin alcohol dosis moderada-altaCerveza sin alcohol dosis moderada-bajaAluminio y Cervezacon alcohol dosis moderada-altaAluminio y Cervezacon alcohol dosis moderada-bajaAluminio y Cerveza sin alcoholdosis moderada-altaAluminio y Cervezasin alcohol dosis moderada-bajaAluminio y Ácido silícico
Aluminio
134,59 ± 35,00a
1633,94 ± 591,13b
276,98 ± 90,63a
201,66 ± 26,13a
198,27 ± 68,25a
145,41 ± 22,15a
2195,52 ± 561,56c
1889,73 ± 935,32bc
1918,17 ± 701,52bc
1757,74 ± 236,16bc
2878,94 ± 1109,35d
Silicio
n.d.n.d.n.d.n.d.n.d.n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.n.d.
Los valores de la misma columna con diferente letra son significativamente diferentes. N.d.: No detectado.
Tabla 3. Estudio agudo: Niveles urinarios de Al y Si (µg/g)
Grupo
Control NegativoControl PositivoCerveza con alcohol dosis moderada-altaCerveza con alcohol dosis moderada-bajaCerveza sin alcohol dosis moderada-altaCerveza sin alcohol dosis moderada-bajaAluminio y Cerveza con alcoholdosis moderada-altaAluminio y Cerveza con alcoholdosis moderada-bajaAluminio y Cerveza sin alcoholdosis moderada-altaAluminio y Cervezasin alcohol dosis moderada-bajaAluminio y Ácido silícico
Aluminio
0,73 ± 0,09a
1,03 ± 0,36b
0,67 ± 0,14aac
0,44 ± 0,12d
0,49 ± 0,17cd
0,47 ± 0,15cd
0,62 ± 0,17ac
0,51 ± 0,14cd
0,61 ± 0,16acd
0,48 ± 0,23cd
0,75 ± 0,18a
Silicio
19,74 ± 4,50a
15,20 ± 3,43bc
16,86 ± 4,52ab
9,44 ± 3,72de
12,96 ± 4,40bcd
4,32 ± 2,63f
12,82 ± 1,61cd
4,72 ± 3,10f
13,20 ± 4,24bcd
5,28 ± 3,20ef
14,75 ± 2,05bc
Los valores de la misma columna con diferente letra son significativamente diferentes.
s e i s
37
Tabla 4. Estudio agudo: Niveles sanguíneos de Al y Si (µg/g)
Figura 1. Curvas de crecimiento de los ratones. Estudio crónico.
Grupo
Control NegativoControl PositivoCerveza con alcohol dosis moderada-altaCerveza con alcohol dosis moderada-bajaCerveza sin alcohol dosis moderada-altaCerveza sin alcohol dosis moderada-bajaAluminio y Cerveza con alcoholdosis moderada-altaAluminio y Cerveza con alcoholdosis moderada-bajaAluminio y Cerveza sin alcoholdosis moderada-altaAluminio y Cerveza sin alcoholdosis moderada-bajaAluminio y Ácido silícico
Aluminio
0,95 ± 0,43ab
1,09 ± 0,28a
0,83 ± 0,33bc
0,62 ± 0,26cde
0,78 ± 0,21bcd
0,48 ± 0,24e
0,73 ± 0,10bcd
0,61 ± 0,17cde
0,72 ± 0,22bcde
0,56 ± 0,23de
0,90 ± 0,29ab
Silicio
n.d.n.d.n.d.n.d.n.d.n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.n.d.
Los valores de la misma columna con diferente letra son significativamente diferentes. N.d.: No detectado.
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
0
10
20
30
40
50
C. Negativo C. Positivo
Cerveza Silicio
Peso
(g)
Curvas de crecimiento
Semanas
s e i s
38
Figura 2. Niveles de creatinina en orina para cada grupo de animales en un es-
tudio crónico
1 2 3
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90m
icro
mol
/24
h
Creatinina en orina
MesC. Negativo C. Positivo
Cerveza Silicio
Tabla 5. Estudio crónico: Niveles fecales de Al y Si (µg/g)
Grupo
Ratones Control NegativoRatones Control PositivoRatones Intoxicados con Al y tratados concerveza con alcohol a dosis moderada-altaRatones Intoxicados con Al y tratados conácido silícico
Aluminio
279,72 ± 62,36a
487,38 ± 70,78b
581,03 ± 92,62c
665,87 ± 160,39c
Silicio
116,12 ± 25,19a
123,45 ± 16,53a
131,06 ± 29,40a
140,56 ± 80,02a
Los valores de la misma columna con diferente letra son significativamente diferentes.
s e i s
39
Tabla 6. Estudio crónico: Niveles urinarios de Al y Si (µg/g)
Grupo
Ratones Control NegativoRatones Control PositivoRatones Intoxicados con Al y tratados concerveza con alcohol a dosis moderada-altaRatones Intoxicados con Al y tratados conácido silícico
Aluminio
0,012 ± 0,0060,015 ± 0,006
0,017 ± 0,003
0,017 ± 0,004
Silicio
0,24 ± 0,070,19 ± 0,08
0,22 ± 0,10
0,27 ± 0,06
Tabla 7. Estudio crónico: Niveles sanguíneos de Al y Si (µg/g)
Grupo
Ratones Control NegativoRatones Control PositivoRatones Intoxicados con Al y tratados concerveza con alcohol a dosis moderada-altaRatones Intoxicados con Al y tratados conácido silícico
Aluminio
1,49 ± 0,29a
1,72 ± 0,50a
0,94 ± 0,45b
0,82 ± 0,23b
Silicio
29,63 ± 4,72a
23,78 ± 8,96ab
21,00 ± 5,84ab
11,64 ± 3,32c
Tabla 8. Estudio crónico: Niveles en tejido cerebral de Al y Si (µg/g)
Grupo
Ratones Control NegativoRatones Control PositivoRatones Intoxicados con Al y tratados concerveza con alcohol a dosis moderada-altaRatones Intoxicados con Al y tratados conácido silícico
Aluminio
2,08 ± 1,41a
3,85 ± 0,33b
2,45 ± 1,14ab
2,34 ± 1,12a
Silicio
13,64 ± 11,15a
25,83 ± 9,92ab
37,17 ± 7,76bc
45,26 ± 11,26c
Los valores de la misma columna con diferente letra son significativamente diferentes.
Los valores de la misma columna con diferente letra son significativamente diferentes.
b i b l i o g r a f í a
BIBLIOGRAFÍA
1 Alfrey AC., Legendre GR., Kaehny WD. The dialysis encephalophathy syndrome: possible aluminium
intoxication. New Engl J Med 1976; 294:184-188.
2 Alzheimer A. Übre einen eigenartigen schweren Krankheitsprozess der Hirnrinde. Neurologisches
Zentralblatt, Leipzig 1906; 25:1134.
3 Alzheimer A. Ueber eine eigenartige Erkrankung der Hirnrinde. Allgemeine Zeitschrift für Psychiatrie
und psychisch-gerichtliche Medizin, Berlin 1907; 64: 146-148.
4 Agency for Toxic Substances and Disease Control (ATSDR). Minimal Risk Levels (MRLs) for hazarday
substances, 2001. Disponible en internet: www.atsdr.cdc.gov/mrls.html.
5 Baydar T., Papp A., Aydin A., Nagymajtenyi L., Schulz H., Isimer A., Sahin G. Accumulation of alumi-
nium in rat brain: does it lead to behavioral and electrophysiological changes? Biol Trace Elem Res
2003; 92(3):231-244.
6 Becaria A., Campbell A., Bondy SC. Aluminium as a toxicant. Toxicol Ind Health 2002; 18(7):309-
320.
7 Bellés M., Sánchez DJ., Gómez M., Corbella J., Domingo JL. Silicon reduces aluminium accumulation
in rats: relevance to the aluminium hypothesis of Alzheimer’s disease. Alzheimer Dis Assoc Disord
1998; 12:83-87.
8 Bellia JP., Birchall JD., Roberts NB. Beer: a dietary source of silicon. Lancet 1994; 343:235.
9 Bellia JP., Birchall JD., Roberts NB. The role of silicic acid in the renal excretion of aluminium.
Annals Clin Lab Sci 1996; 26(3):227-233.
10 Birchall JD. y Chappell JS. Aluminium, water chemistry and Alzheimer’s disease. Lancet 1989; 1:953.
11 Broadhurst L. Silicon’s elemental benefits. Pholithic Sports. 800-969-6199. www.pholithic.com/hpa-
ges/ref_docs/orthosil.html.
12 Candy JM., McArthur FK., Oakley AE., Taylor GA., Chen CP., Mountfort SA., Thompson JE., Chalker PR.,
Bishop HE., Beyreuther K. Aluminium accumulation in relation to senile plaque and neurofibrillary
tangle formation in the brains of patients with renal failure. J Neurol Sci 1992; 107(2):210-218.
13 Cannata JB. Hypokinetic azotemic osteodystrophy. Kidney Int 1998; 54:1000-1016.
14 Cannata JB. Aluminum toxicity: its relationship with bone and iron metabolism. Nephrol Dial
Transplant 1996; 11 Supl. 3:69-73.
40
15 Charles River Company (IFFA CREDO). Catálogo de cepas animals.
16 Clauberg M. y Joshi JG. Regulation of serine protease activity by aluminium: implications for
Alzheimer disease. Proc Natl Acad Sci USA 1993; 90:1009-1012.
17 De Loromier AA. Alcohol, wine, and health. Am J Surg 2000; 180:357-361.
18 Deng Z., Coudray C., Gouzoux L., Mazur A., Rayssiguier Y., Pepin D. Effect of oral aluminium and alu-
minium citrate on blood level and short-term tissue distribution of aluminium in the rat. Biol Trace
Elem Res 1998; 63:139-147.
19 Desouky MM., Powell JJ., Jugdaohsingh R., White KN., McCrohan CR. Influence of oligomeric silicic
and humic acids on aluminium accumulation in a freshwater grazing invertebrate. Ecotox Environ Saf
2002; 53:382-387.
20 Desouky MM., McCrohan CR., Jugdaohsingh R., Powell JJ., White KN. Effect of orthosilicic acid on the
accumulation of trace metals by the pond snail Lymnaea stagnalis. Aquatic Tox 2003; 64:63-71.
21 DeVoto E. y Yokel RA. The biological speciation and toxicokinetics of aluminium. Environ Health
Perspect 1994; 102:940-951.
22 Directiva 86/609/EEC del Consejo, 24 de Noviembre de 1986. Relativa a la aproximación de las dispo-
siciones legales, reglamentarias y administrativas de los Estados Miembros respecto a la protección de
los animales utilizados para la experimentación y otros fines científicos (NºL358, ISSN 0378-6978).
23 Dlugaszek M., Fiejka MA., Graezyk A., Aleksandrowicz JC., Slowikowska M. Effects of various alumi-
nium compounds given orally to mice on Al tissue. Pharmacol Toxicol 2000; 86:135-139.
24 Dobranskyte A., Jugdaohsingh R., Stuchlik E., Powell JJ., White KN., McCrohan CR. Role of exogenous
and endogenous silicon in ameliorating behavioural responses to aluminium in a freshwater snail.
Environ Pollut 2004; 132(3):427-433.
25 Domingo JL. El aluminio como possible factor etiopatogénico en la enfermedad de Alzheimer. Rev
Toxicol 2000; 17:3-11.
26 Doucet FJ., Schneider C., Bones SJ., Kretchmer A., Moss I., Tekely P., Exley C. The formation of
hidroxyaluminosilicates of geochemical and biological significance. Geochim Cosmochim Acta 2001;
15:2461-2467.
27 Drueke TB. Intestinal absorption of aluminium in renal failure. Nephrol Dial Transplant 2002; 17 Suppl
2:13-16.
b i b l i o g r a f í a
41
b i b l i o g r a f í a
28 Elbert M. The Use of creatinine and specific gravity measurement to combat urine test dilution.
Federal Probation 1997; 61(4):3- 12.
29 Exley C. A molecular mechanism of aluminium-induced Alzheimer`s disease? J Inorg Biochem 1999;
76:133-140.
30 Fattoretti P., Bertoni-Freddari C., Balietti M., Mocchegiani E., Scancar J., Zambenedetti P., Zatta P.
The effect of chronic aluminium (III) administration on the nervous system of aged rats: clues to
understand its suggested role in Alzheimer`s disease. J Alzheimer`s Dis 2003; 5:437-444.
31 Flaten TP. Aluminum as a risk factor in Alzheimer’s disease, with emphasis on drinking water. Brain
Res Bull 2001; 55:187-196.
32 Fraga CG., Oteiza PI., Golub MS., Gershwin ME., Keen CL. Effects of aluminium on brain lipid peroxi-
dation. Toxicol Lett 1990; 213-219.
33 Ganchev T., Dyankov E., Zacharieva R., Pachalieva I., Velikova M., Kavaldjieva B. Influence of alumi-
nium on erythropoiesis, iron metabolism and some functional characteristics of erythrocytes in rats.
Acta Physiol Pharmacol Bulg 1998; 23:27-31.
34 Gómez M., Sánchez DJ., Llobet JM., Corbella J., Domingo JL. The effect of age on aluminium reten-
tion in rats. Toxicology 1997; 116:1-8.
35 Granero S., Domingo JL. Levels of metals in soils of Alcalá de Henares, Spain: human health risks.
Environ Int 2002; 28:159-64.
36 Granero S., Vicente M., Aguilar V., Martínez-Para MC., Domingo JL. Effects of beer as a source of die-
tary silicon on aluminium absorption and retention in mice. Trace Elem Electrol 2004; 21(1):28-32.
37 Gräske A., Thuvander A., Johannisson A., Gadhasson I., Schütz A., Festin R., Wicklund GA. Influence
of aluminium on the immune system, an experimental study on volunteers. Biometals 2000; 13:123-
133.
38 Guimerà A., Gironès X., Cruz-Sánchez FF. Actualización sobre la patología de la enfermedad de
Alzheimer. Rev Esp Patol 2002; 35(1):21-48.
39 Gupta VB., Anitha S., Hegde ML., Zecca L., Garruto RM., Ravid R., Shankar SK., Stein R.,
Shanmugavelu P., Jagannatha Rao KS. Aluminium in Alzheimer`s disease : are we still at a crossroad?
Cell Moll Life Sci 2005; 62:143-158.
42
40 Hott M., de Pollak C., Modrowski D., Marie PJ. Short-term effects of organic silicon on trabecular bone
in mature ovariectomised rats. Calcif Tissue Int 1993; 53:174-179.
41 Jacqmin-Gadda H., Commenges D., Letenneur L., Dartigues JF. Silica and aluminium in drinking water
and cognitive impairment in the elderly. Epidemiology 1996; 7:281-285.
42 Jarava C., Armas JR., Palma A. Aluminio y enfermedad ósea urémica. Utilidad diagnóstica del alumi-
nio sérico y del test de la deferoxamina (DFO). Nefrología 2001; 21(2):174-181.
43 Jugdaohsingh R., Reffitt DM., Oldham C., Day JP., Fifield LK., Thompson RP., Powell JJ. Oligomeric
but not monomeric silica prevents aluminium absorption in humans. Am J Clin Nutr 2000; 71(4):944-
949.
44 Jugdaohsingh R., Anderson SH., Tucker KL., Elliott H., Kiel DP., Thompson RP., Powell JJ. Dietary sili-
con intake and absorption. Am J Clin Nutr 2002; 75:887-893.
45 Kaneko N., Yasui H., Takada J., Suzuki K., Sakurai H. Orally administrated aluminum-maltolate com-
plex enhances oxidative stress in the organs of mice. J Inorg Biochem 2004; 98:2022-2031.
46 Kohila T., Parkkonen E., Tähti H. Evaluation of the effects of aluminium, ethanol and their combina-
tion on rat brain synaptosomal integral proteins in vitro and after 90-day oral exposure. Arch Toxicol
2004; 78:276-282.
47 López FF., Cabrera C., Lorenzo ML., López MC. Aluminium levels in wine, beer and other alcoholic
beverages consumed in Spain. Sci Total Environ 1998; 220(1):1-9.
48 Lote CJ. y Saunders H. Aluminium: gastrointestinal absorption and renal excretion. Clin Sci 1991;
81:289-295.
49 Martyn CN., Coggon DN., Inskip H., Lacey RF., Young WF. Aluminium concentrations in drinking water
and risk of Alzheimer`s disease. Epidemiology 1997; 8:281-286.
50 Meneses M., Llobet JM., Granero S., Schuhmacher M., Domingo JL. Monitoring metals in vicinity of a
municipal solid waste incinerator: temporal variations in soil and vegetation. Sci Total Environ
1999;226:157-64.
51 Nayak P. Aluminum: impacts and disease. Environ Res 2002; 89:101-115.
52 Nieboer E., Gibson BL., Oxman AD., Kramer JR. Health effects of aluminium: a critical review with
emphasis on aluminium in drinking water. Environ Rev 1995; 3:29-81.
b i b l i o g r a f í a
43
b i b l i o g r a f í a
53 Nielsen F. Ultratrace elements. En: Sadler MJ., Strain JJ., Caballero B., eds., Encyclopedia of Human
Nutrition, San Diego, CA, USA; Academic Press 1999; 1884-1897.
54 Parry R., Plowman D., Trevor Delves H., Roberts NB., Birchall JD., Bellia JP., Davenport A., Ahmad R.,
Fahal I., Altmann P. Silicon and aluminium interactions in haemodialysis patients. Nephrol Dial
Transplant 1998; 13:1759-1762.
55 Pennington JAT. Silicon in foods and diets. Food Addit Contam 1991; 8:97-118.
56 Pérez-Granados AM. y Vaquero MP. Silicon, aluminium, arsenic and lithium: essentiality and human
health implications. J Nutrition Health Aging 2002; 2:154-162.
57 Perry CC. y Keeling-Tucker T. Aspects of the bioinorganic chemistry of silicon in conjunction with the
biometals calcium, iron and aluminium. J Inorg Biochem 1998; 69:181-191.
58 Perry CC. y Keeling-Tucker T. Model studies of the precipitation of silica in the presence of alumi-
nium; implications for biology and industry. J Inorg Biochem 2000; 78:331-339.
59 Popplewell JF., King SJ., Day JP., Ackrill P., Fifield LK., Cresswell RG., di Tada ML., Liu K. Kinetics of
uptake and elimination of silicic acid by a human subject: a novel application of 32Si and accelera-
tor mass spectrometry. J Inorg Biochem 1998; 69:177-180.
60 Powell JJ. y Thompson RDH. The chemistry of aluminium in the intestinal lumen and its uptake and
absorption. Proceedings Nutrition Society 1993; 52:241-253.
61 Rapuri PB., Gallagher JC., Balhorn KE., Ryschon KL. Alcohol intake and metabolism in elderly women.
Am J Clin Nutr 2000; 72:1206-1213.
62 Reffitt DM., Jugdaohsingh R., Thompson RP., Powell JJ., Hampson GN. Silicic acid: its gastrointesti-
nal uptake and urinary excretion in men and effects on aluminium excretion. Inorganic Biochem
1999; 76(2):141-7.
63 Reffitt DM., Ogston N., Jugdaohsingh R., Cheung HF., Evans BA., Thompson RP., Powell JJ., Hampson
GN. Orthosilicic acid stimulates collagen type 1 synthesis and osteoblastic differentiation in human
osteoblast-like cells in vitro. Bone 2003; 32(2):127-35.
64 Reinke CM., Breitkreutz J., Leuenberger H. Aluminium in over-the-counter drugs: risks outweigh
benefits? Drug Saf 2003; 26(14):1011-1025.
65 Rondeau V. A review of epidemiologic studies on aluminium and silica in relation to Alzheimer`s
disease and associated disorders. Reviews Environ Health 2002; 17(2):107-121.
44
66 Sahin G., Varol I., Temizer A., Benli K., Demirdamar R., Duru S. Determination of aluminium levels in
the kidney, liver, and brain of mice treated with aluminium hydroxide. Biol Trace Elem Res 1994;
41(1-2):129-135.
67 Seaborn CD. y Nielsen FH. Silicon: a nutritional beneficence for bones, brains and blood vessels? Nutr
Today 1993; 28:13-18.
68 Sendra JM. y Carbonell JV. Evaluación de las propiedades nutritivas, funcionales y sanitarias de la cer-
veza, en comparación con otras bebidas. Ed. Centro Información Cerveza y Salud, 1999.
69 Schuhmacher M., Meneses M., Granero S., Llobet JM., Domingo JL. Trace element pollution of soils
collected near a municipal solid waste incinerator: human health risk. Bull Environ Contam Toxicol
1997a;59:861-867.
70 Schuhmacher M., Meneses M., Granero S., Llobet JM., Domingo JL. Trace metals in vegetation grown
near to an old municipal solid waste incinerator from Catalonia, Spain. Fres Environ Bull 1998a;7:42-
50.
71 Spierto FW., MacNeil ML., Burtis CA. The effect of temperature and wavelength on the measurement
of creatinine with the Jaffe procedure. Clin Biochem 1979; 12:18-21.
72 Sripanyakorn S.,Jugdaohsingh R., Elliott H., Walker C., Mehta P., Shoukru S., Thompson RP., Powell
JJ. The silicon content of beer and its bioavailability in healthy volunteers. B J Nutrition 2004;
91:403-409.
73 Srivastava RAK. y Jain JC. Scavenger receptor class B type I expression and elemental analysis in
cerebellum and parietal cortex regions of the Alzheimer`s disease brain. J Neurol Sci 2002; 196:45-
52.
74 Tokutake S., Nagase H., Morisaki S., Oyanagi S. Aluminium detected in senile plaques and neurofibri-
llary tangles is contained in lipofuscin granules with silicon, probably as aluminosilicate. Neurosci
Lett 1995; 185(2):99-102.
75 Tokutake S. y Oyanagi S. Accumulation of aluminium and silicon in lipofuscin granules. Gerontol
1995; 41:131-142.
76 Tokutake S. Accumulation of aluminium and silicon in lipofuscin granules suggests retardation of the
blood-brain barrier function by aging. Ann N Y Acad Sci 1997; 826:510-512.
b i b l i o g r a f í a
45
b i b l i o g r a f í a
77 Tucker KL., Kiel DP., Powell JJ., Qiao N., Hannan MT., Jugdaohsingh R. Dietary silicon and bone
mineral density: the Framingham Study. J Bone Miner Res 2001; 16(Suppl. 1): S510.
78 Tunner RT. y Sibonga JD. Effects of alcohol use and strogen on bone. Alcohol Res Health 2001;
25:276-281.
79 Van Dyck K., Van Cauwenbergh R., Robberecht H., Deelstra H. Bioavailability of silicon from food and
food supplements. Fresenius J Anal Chem 1999; 363:541-544.
80 Van Landeghem GF., de Broe ME., D`Haese PC. Al and Si: their speciation, distribution, and toxicity.
Clin Biochem 1998; 31(5): 385-397.
81 Viñas P., Aguinaga N., López-García I., Hernández-Córdoba M. Determination of cadmium, aluminium,
and copper in beer and products used in its manufacture by electrothermal atomic absorption spec-
trometry. J AOAC International 2002; 87(3):736-743.
82 Williams RJ. What is wrong with aluminium? The JD Birchall Memorial Lecture. Inorg Biochem 1999;
76:81-88.
83 Winship KA. Toxicity of aluminium: a historical review, part 2. Adverse Drug React Toxicol Rev 1993;
12(3):177-211.
84 Yokel RA. The toxicology of aluminium in the brain: a review. Neurotoxicology 2000; 21(5):813-828.
85 Yokel RA., Allen DD., Ackley DC. The distribution of aluminium into and out of the brain. J Inorg
Biochem 1999; 76:127-132.
86 Yuan Z., Dawdon N., Cooper GS., Einstadter D., Cebul R., Rimm AA. Effects of alcohol-related disease
on hip fracture and mortality: a retrospective cohort study of hospitalised Medicare beneficiaries. Am
J Public Health 2001; 91:1089-1093.
87 Zatta P., Lucchini R., van Rensburg SJ., Taylor A. The role of metals in neurodegenerative proceses:
aluminum, manganese, and zinc. Brain Res Bull 2003; 62:15-28.
46
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