platina caliente
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obtención de preparaciones
permanentes.
Material
El instructor proporcionará microscopio,
pipetas Pasteur con bulbo y aplicadores de
madera solución salina fisiológica.
Solución salina fisiológica: Esta se emplea
para el examen microscópico de heces
blandas y acuosas, debido a que mantendrávivos y activos a los trofozoitos que
contienen. Se prepara de la siguiente
manera:
Cloruro de sodio 0.85 g
Agua destilada 100 ml
El alumno proporcionará:
Muestra de heces fecales positiva aparásitos. Portaobjetos y cubreobjetos,
papel absorbente.
Envases de plástico con tapa rosca
etiquetados, conteniendo formaldehído 10
% para material de desecho:
Las muestras de heces recolectadas por los
alumnos, se etiquetarán de la siguienteforma:
Fig. 15. Ejemplo de formato para etiqueta de los viales de las muestras de heces.
* Es importante que el alumno colabore con
el material por equipo, para la práctica. En
caso de no traerlo, la práctica no se podrá
recuperar posteriormente.
NOMBRE _______________________________________ TELÉFONO ________________
DIRECCIÓN _____________________________________ EDAD________SEXO (M/F)____
FECHA (DD/MM/AA)_____________________HORA DE EVACUACIÓN _________________
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A) Método para la recolección
Para la muestra del material fecal, seemplean recipientes de plástico o vidrio,
limpios y secos. Debe evacuarse sobre papel
limpio para luego trasferir 1 muestras del
tamaño de una o dos nueces al recipiente
tomándola con un abatelenguas o cuchara
desechable, después, cubrirlo con la tapa.
No son recomendables las muestras
recuperadas del suelo, pues en ocasiones secontaminan con larvas de parásitos de vida
libre que conducen a errores en el
diagnóstico. Tampoco se aconseja recoger
las muestras del sanitario, pues el agua
altera y destruye las formas de trofozoitos,
más aún, si se mezclan con la orina. En el
caso de personas adultas se recupera en el
frasco aprox. 5g de materia fecal, en niños
se utiliza una cucharilla rectal, la cual debeestar limpia y estéril; esta se introduce de 1-
1.5 cm y se gira suavemente depositando la
muestra en un tubo de ensaye cerrado, con
5 ml de solución salina fisiológica (0.85%).
Las muestras de personas que han ingerido
medicamentos antes de la recolección y las
muestras conservadas inadecuadamente o
que no sean recientes no son útiles para
diagnóstico.
Muestras seriadas o múltiples: Este tipo de
recolección de muestras se realiza cuando
existe la sospecha de parásitos intestinales
y el examen único ordinario resultanegativo. La colecta de muestras
consecutivas se debe a que los parásitos (E.
histolytica, E. coli, Diphyllobothrium latum,
Taenia sp. y Schistosoma) presentan
evacuación de huevecillos en periodos
irregulares, por lo cual el hallazgo en el
análisis de una sola muestra resulta difícil.
Los parásitos que emiten huevos en forma
más constante son Ascaris lumbricoides y Trichuris trichuria. Para los parásitos que
emiten huevos o quistes en forma irregular,
se recomienda recoger muestras con
intervalos de 2-3 días consecutivos
entregándolo diariamente en el laboratorio
para el CPS en fresco o depositándolo en un
envase limpio y seco con fijador (agregar un
volumen de conservador –al menos- igual
al tamaño de la muestra) y entregar altercer día.
B) Métodos de conservación
Para el examen de material fecal, lo ideal
es el análisis directo con solución salina o
lugol sin preservador. Estas son las
muestras útiles en el CPS inmediato directo.
Las muestras líquidas o blandas deben
analizarse primero, por la mañana, debido a
que los trofozoitos sobreviven pocas horas.
Las duras, como tienen quistes de
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protozoarios huevos de helmintos, resisten
más y pueden analizarse por la tarde.Debido a la acumulación de las muestras ó a
que el tiempo transcurrido entre la
recolección y la llegada de la muestra al
laboratorio es prolongada, es necesario
utilizar alguna solución preservadora como
MIF, PAF, etc. Las más comunes se detallan
a continuación:
Refrigeración.- (3-5°C): Preserva trofozoitosde heces disentéricas por varios días y los
quistes de heces normales permanecen más
de un mes viables. Para refrigerarse se
utiliza un recipiente hermético que
prevenga la deshidratación del material.
PVA: (alcohol polivinilico): Es excelente para
trofozoitos, útil en heces acuosas y
disentéricas y material aspirado por
sigmoidoscopía. Para 10 ml de fijador seutilizan 1-2ml de material. Las muestras así
fijadas, pueden teñirse con hematoxilina
férrica. Para prepararlo deposite 100 ml de
fijador Shaudinn a un vaso de precipitado
de 250 o 500 ml sobre una placa de
calentamiento y agite con la barra
magnética sin calentar la solución. Agregue
lentamente 5 g de PVA en polvo en el borde
exterior del remolino de la solución.Continúe la agitación por 30-60 min a
temperatura ambiente hasta obtener una
suspensión gelatinosa. Caliente la solución
lentamente y cheque la temperatura para
que aumente poco a poco. Cuando alcancelos 70 °C, todo el PVA debe estar disuelto en
la solución. Esta solución es estable por
varios meses y puede usarse a temperatura
ambiente o 50°C.
Formaldehído: Preserva quistes de
protozoos (no trofozoitos), huevos y larvas
de helmintos por muchos meses. Por cada
parte de la muestra se agregan 5 partes de
formalina al 10% (con este se puede realizarla técnica de sedimentación de formol-
éter). Para prepararlo se mezclan 9 partes
de agua destilada y una parte de
formaldehído comercial (37-40%) a
temperatura ambiente. Otra alternativa es
una parte de formol al 20 % y una parte de
muestra.
MIF: (Merthiolate-iodo-formol): Tiñe ypreserva todos los trofozoitos y estadios de
parásitos intestinales. La desventaja es que
el iodo es inestable. Se utiliza una parte de
heces y 10 partes de MIF. La muestra
preservada se emplea en frotis directos.
Para la preparación se prepara la solución A
(40 partes de tintura de merthiolate Lilly, 5
partes de formaldehído comercial y una
parte de glicerol) y la solución B (5% de iodoen 10% de ioduro de potasio acuoso). Pare
preparar el MIF se combinan 15 partes de
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solución A y 1 parte de solución B
inmediatamente antes de usarse.
PAF: (Fenol- alcohol- formol): Útil para
quistes y trofozoitos de protozoos, huevos y
larvas de helmintos. El material puede
examinarse solo en el fijador o en colorante
Azure A o tionina. El PAF se prepara con 20
g de cristales de fenol disueltos en 825 ml
de solución salina fisiológica. A este se le
añaden 125 ml de etanol al 95% y 50 ml deformaldehído y se mezcla bien. En caso de
contar con fenol líquido, se le añaden 23 ml
en lugar de los 20g de cristales.
Lo más recomendable es no utilizar
preservador, sino llevar a cabo la colecta en
un área cercana al laboratorio y examinarla
aún caliente, sobre todo en los casos donde
se sospecha de parasitosis por protozoariosen heces diarreicas o blandas, debido a que
estos no se multiplican ni se enquistan
fuera del organismo y se degradan en muy
poco tiempo. Tampoco es recomendable
almacenar las muestras en un lugar caliente
o mantener la temperatura cálida normal
de la muestra por medios artificiales.
Los trofozoitos de E. histolytica sobreviven2-5 horas a 37°C, 6-16 h a 20-25°C, 48-96 h
a 5°C. Los quistes sobreviven 1-2 días, 3-4
días y 14-40 días a la temperatura
respectiva.
Los huevos y larvas de helmintos son más
resistentes en la comparación a los
trofozoitos y quistes de protozoarios. Estos
son capaces de continuar su desarrollo, lo
cual puede dificultar su diagnóstico. La
administración de antibióticos o
tratamientos antiparásitos no es
recomendable en el examen CPS, por lo cualse debe dejar pasar 10 días mínimo, incluso,
interfieren también la leche de magnesia y
otros antiácidos, compuestos de caolina,
bismuto, bario y la contaminación con
orina.
C) Método de clasificación de tipos de
heces fecales
El primer paso en cuanto llega la muestrano preservada al laboratorio, es el examen
macroscópico para reconocer la presencia
de proglótides, sangre, moco, gusanos,
larvas de mosca, etc. y luego se procede a la
tipificación de la misma, pues de ello
depende la selección del método adecuado
para el análisis y la detección satisfactoria.
Las heces se clasifican en duras, pastosas,
blandas y acuosas.
Las muestras líquidas y blandas contienen
trofozoitos de protozoos y en las duras en
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su mayoría quistes, por ello se le dará
preferencia para examinar primero lasheces acuosas, seguido de las blandas, sin
exceder 2 horas después de que han sido
evacuadas. Al último se analizan las sólidas,
que pueden examinarse hasta 12 horas
después de haber sido evacuadas. Las heces
duras y pastosas no toman la forma del
recipiente que las contiene, pero las
segundas pueden atravesarse con un
aplicador. Las heces blandas y acuosastoman la forma del recipiente donde están
contenidas, pero las blandas al inclinar el
contenedor no tienden a derramarse,
mientras que las acuosas sí.
En la superficie de la muestra pueden
encontrarse oxiuros, pero para detectar
otros helmintos se remueve la materia fecal
con un aplicador. La presencia de mocosanguinolento en heces acuosas o blandas
indica la existencia de una úlcera de
probable origen amebiano, por lo cual se le
dará preferencia a esta zona para tomar la
muestra.
El número de muestras por paciente que
serán analizadas para un diagnóstico
satisfactorio es de 6, para conseguir unaefectividad estadística del 90% en el
análisis, pues cuando se examina una
muestra solamente, aunque se utilicen
varias técnicas se logrará el 50%. Este
porcentaje es el calculado para
evacuaciones emitidas de manera natural y
se mejorará administrando laxantes salinos.
Fig. 16. Aspecto general de las muestras para examen coproparasiitoscópico.
Dura Pastosa Blanda Acuosa
Tipos de heces fecales
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CPS cualitativo: De acuerdo con el tipo de
materia fecal y al tiempo transcurrido, losCPS se clasifican en
(a) CPS inmediato y directo.
(b) CPS mediato directo
(c) CPS mediato por centrifugación.
En esta sesión de laboratorio, llegaremos
hasta el CPS inmediato. El CPS mediato lo
veremos en la siguiente práctica.
D) Método de CPS inmediato y directo
(preparaciones húmedas).
Empleado en heces acuosas y blandas, las
cuales se mezclan con solución salina para
examinarlas al microscopio, pues con
seguridad contendrán trofozoitos si el
individuo está parasitado. (También
llamado IAPC, investigación de amibas por
platina caliente, ó preparacionestemporales de heces). Se llama “inmediato”
porque necesitan analizarse en cuanto
lleguen al laboratorio, pues los trofozoitos
se desintegran rápidamente.
Una vez efectuado el examen macroscópico
para buscar proglótides de céstodos,
nemátodos, etc. se prosigue con el examen
microscópico.
1. Colocar en un portaobjetos una gota desolución salina que permitirá que los
protozoarios o larvas de helmintos se
movilicen y por lo mismo, facilitará su
diagnóstico.
2. Resuspender en esta gota, una pequeña
muestra de heces. No depositar
demasiada muestra, pues se
enmascarará las formas parásitas con los
detritos o heces.3. Poner el cubreobjetos y dejar reposar 2
min. Observar al microscopio en 10X y
40X.
4. Esquematizar las formas observadas.
5. Al terminar de examinar, desecharlo en el
recipiente con formol, igual que los
aplicadores y demás material
contaminado para evitar infecciones en
el laboratorio. Si la muestra fue positivapara entoflagelados o amibas, en buena
cantidad, proceder a preparar frotis
extendidos y fijarlos en Schaudinn para la
siguiente técnica de tinción.
6. Guantes, gasas y otro material de mayor
tamaño, se deposita en bolsas plásticas,
sellarlas y desecharlas.
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Examen directo o inmediato
Fig. 17. Técnica para preparaciones en fresco o húmedas del CPS inmediato
Resultados y discusiones
Realice las actividades detalladas de recolección, conservación, clasificación y CPS inmediato
con las muestras de heces fecales blandas y acuosas, principalmente.
A) Indique si trabajó con una o varias muestras de heces. Si fueron muestras únicas o
seriadas.
B) ¿Cuál fue el método(s) de conservación empleado o fueron muestras sin conservador?
Lugol oSolución salina
Muestra de heces ymezclar con aplicador
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C) Describa los resultados de la clasificación de los tipos de heces con los que realizó la
práctica.
D) Esquematice los protozoarios o helmintos diagnosticados en las muestras.
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E) Investigue en la bibliografía, la morfología de los parásitos observados y compare con
otras técnicas de diagnóstico.
Literatura consultada (por el alumno)
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Marzo 27, 2010.
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