Cuestiones en Nosema ceranae vs

Nosema apis Lic.Edgardo Gabriel Sarlo*

*Lab. de Entomología y AcarologíaFacultad de Ciencias Exactas Y NaturalesUniversidad Nacional de Mar del Plata

El ADN confirmo que hay Nosema Ceranae en Argentina

• Investigadores argentinos ya tienen la prueba positiva sobre que hay Nosema Ceranae en Argentina.

• Hace 4 meses www.noticiasapicolas.com.ar publico un video y una nota donde el Lic. Gabriel Sarlo de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales de Mar del Plata comentaba que estudios preliminares daban que existia esta cepa de Nosema en el pais.

• Durante estos meses tuvimos que soportar el desprestigio de colegas, de algunos apicultores y hasta de funcionarios.

• Rodrigo Gonzalez (director de www.noticiasapicolas.com.ar y de Apicultura sin Fronteras) tuvo la confirmación final sobre la existencia de este parasito unicelular en varias regiones del país. La misma fue comunicada por el mayor referente del mundo en el tema.

• Mariano Higes Pascual, investigador del Centro Apícola de Marchamalo (de España), confirmo a nuestro medio que “El resultado del análisis del ADN ha confirmado que ustedes tienen Nosema ceranae en Argentina y que es la responsable de muchas de las muertes de colmenas que están experimentando en los últimos años”

• La investigación que se viene realizando hace mucho tiempo en el país fue realizado por muchos investigadores. Algunos de ellos fueron el Lic. Gabriel Sarlo de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales de Mar del Plata, el Dr. Carlos Lange y el licenciado SantiagoPlischuk del CONICET.

• La muestra que dieron positivo en la secuencia genética de la cepa argentina de Nosema Ceranae fueron de la zona pampeana y los investigadores comentaron que se encontraba muy desiminada (no casos aislados) por esa región.

Al ser consultado Mariano Higes, por Rodrigo Gonzalez sobre este parasito en el mundo, comento que “Nosema Ceranae no se encuentra solamente en España, nosotros la aislamos en Francia, Alemania, Italia, Grecia, Suiza, Austria, Polonia, Eslovenia, Portugal, Taiwan, Holanda, Croacia y el grupo del Dr. Paxton en Brasil, Estados Unidos y el resto de países de Europa. Todos estos trabajos y detecciones de Nosema Ceranae vienen a confirmar lo que publicamos hace más de dos años. Estes, que Nosema ceranae proviene del mismo hospedador y zona de Varroa destructor. Que habría saltado de Apis cerana a Apis mellifera, como hizo Varroa, y desde allí, y siguiendo rutas epidemiológicas similares y otras algo diferentes debido a la globalización del comercio a nivel mundial. Nadie le prestó atención hasta nuestro descubrimiento. Aún hoy existen muchas opiniones muy escépticas y el parásito se

ha difundido durante más de una década a sus anchas” Al referirse sobre qué trabajo se realizo para confirmar el análisis preliminar que ya se tenia en Argentina comento que “las muestras nos las mandaron investigadores con los que colaboramos estrechamente. Nuestro trabajo ha sido en este caso analizar el ADN y la ultra-estructura de las esporas para confirmar la especie. Los investigadores argentinos fueron los que detectaron el parásito en el campo y sospecharon que podría ser Nosema ceranae. Ellos son los auténticos protagonistas de la película, nosotros les hemos ayudado dada nuestra experiencia y la moderna tecnología que tenemos en nuestro laboratorio y por haber sido el primer grupo que la descubrió en Apis mellifera. Desde luego, seguimos trabajando con ellos pues la investigación que están realizando en Argentina nos parece muy seria y rigurosa, de ahí que sigamos colaborando con ellos.”

Al referirse sobre qué trabajo se realizo para confirmar el analisis

prelimirar que ya se tenia en Argentina comento que “las muestras nos las mandaron investigadores con los que colaboramos estrechamente. Nuestro trabajo ha sido en este caso analizar el ADN y la ultra-estructura de las esporas para confirmar la especie. Los investigadores argentinos fueron los que detectaron el parásito en el campo y sospecharon que podría ser Nosema ceranae. Ellos son los auténticos protagonistas de la película, nosotros les hemos ayudado dada nuestra experiencia y la moderna tecnología que tenemos en nuestro laboratorio y por haber sido el primer grupo que la descubrió en Apis melífera. Desde luego, seguimos trabajando con ellos pues la investigación que están realizando en Argentina nos parece muy seria y rigurosa, de ahí que sigamos colaborando con ellos.”

El estudio que confirmo lo que nuestro medio publico hace 4 meses es el siguiente:

• • LOCUS EU025027 1171 bp DNA linear INV 04-AUG-2007• DEFINITION Nosema ceranae from Argentina 16S ribosomal RNA gene, partial• séquense.• ACCESSION EU025027• VERSION EU025027.1 GI:154163108• KEYWORDS .• SOURCE Nosema ceranae• ORGANISM Nosema ceranae• Eukaryota; Fungi; Microsporidia; Nosematidae; Nosema.• REFERENCE 1 (bases 1 to 1171)• AUTHORS Higes,M., Martin-Hernandez,R., Garrido-Bailon,E., Botias,C. and• Meana,A.• TITLE Direct Submission• JOURNAL Submitted (10-JUL-2007) Bee Pathology, Apicultural Research Center,• San Martin, Marchamalo, Gudalajara 19180, Spain• FEATURES Location/Qualifiers• source 1..1171• /organism="Nosema ceranae"• /mol_type="genomic DNA"• /specific_host="Apis mellifera"• /db_xref="taxon:40302"• /country="Argentina"• /note="sample supplied by Dr. Carlos Lange and Santiago• Pilschuk"• rRNA <1..>1171• /product="16S ribosomal RNA"• ORIGIN • 1 taacccatgc atgtttttga catttgaaaa atggactgct cagtaatact cactttattt• 61 tatgtaaatt tttaattaac taccttcaag tgtagataag atgtttacag taagagtgag• 121 acctatcagc tagttgttaa ggtaatggct taacaaggct gtgacgggta acggtattac• 181 tttgtaatat tccggagaag gagcctgaga gacggctact aagtctaagg attgcagcag• 241 gggcgaaact tgacctatgg attttatctg aggcagttat gggaagtaat attatattgt• 301 ttcatatttt aaaagtatat gaggtgatta attggagggc aaatcaagtg ccagcagccg• 361 cggtaatact tgttccaaga gtgtgtatga tgattgatgc agttaaaaag tccgtagttt• 421 atttttttaa gaagcaatat gaggggtact gtatagttgg gagaaagatg aaatgtgacg• 481 accctgactg gacgaacaga agcgaaagct gtacacttgt atgtattttt tgaacaagga• 541 cgtaagctgg aggagcgaag atgattagat accattgtag ttccagcagt aaactatgcc• 601 gacgatgtga tatggaaaat attaatttgt attacataat agaaatttga gttttttggc• 661 tctggggata gtatgatcgc aagattgaaa attaaagaaa ttgacggaag aataccacaa• 721 ggagtggatt gtgcggctta atttgactca acgcgaggta acttaccaat attttattat• 781 tttgagagaa cggttttttg tttgagaatg ataatagtgg tgcatggccg ttttcaatgg• 841 atgctgtgaa gttttgatta atttcaacaa gacgtgagac ccttattttt tattaaagac• 901 agacacaatc agtgtaggaa ggaaaggatt aaaacaggtc cgttatgccc tctgacattt• 961 tgggctgcac gcgcaataca atagatatat aatctttatg ggataatatt ttgtaagaga• 1021 tatttgaact tggaattgct agtaaatttt attaaataag tagaattgaa tgtgtccctg• 1081 ttctttgtac acaccgcccg tcgctatcta agatgatata tgttgtgaaa ttagtgaaaa• 1141 ctacttaaac aatatgtatt agatctgata t• • Fuente: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/viewer.fcgi?db=nuccore&id=154163108

OTROS ESTUDIOS • También se realizaron análisis ultra-estructuralmente de las esporas por microscopía electrónica y ambas pruebas confirman que Nosema ceranae

está en Argentina.• La secuencia antes descripta es de la secuencia prácticamente completa del gen 16S r RNA de Nosema ceranae aislada obtenida en Argentina.• Por ultimo Mariano Higes comento que “Efectivamente Nosema ceranae es un parásito sin fronteras actualmente y representa un peligro para el

sector apícola de la misma magnitud que Varroa.”• Al preguntarle Rodrigo González sobre los reacios al tema manifestó que “El tiempo nos acabará dando, desgraciadamente, la razón pues en estos

años, serán muchos los millones de colmenas que en todo el mundo morirán a causa de este parásito.”• • Seguir la investigación en el país• Para seguir esta investigación se esta esperando una subvención de la CIC Según fuentes cercanas a esta subvención comentaron a

www.noticiasapicolas.com.ar que en estas semanas se estaría otorgando y poder ayudar a los apicultores en detectar mas regiones• • Otras muestras• En estos días se tendrán los resultados de las muestras enviadas desde las provincias de Córdoba, San Luis y Mendoza• • El problema y los funcionarios:• Agradecemos a todos los apicultores que nos han enviado y nos envían cartas de apoyo, también a las asociaciones extranjeras por publicar nuestra

nota ( Nosema ceranae: parasito sin Fronteras) en sus revistas y ahora esperamos que funcionarios como Susana Bruno de Asuntos agrarios de la Provincia de Buenos Aires reconozcan que esto fue una investigación seria, que llevo tiempo y kilómetros recorriendo apiarios y observando.

• El ocultamiento de información o el no querer ver la realidad pudo llevar a que muchos apicultores perdieran su capital. El publicar ese informe era para que los funcionarios tomen conciencia, se hagan cargo del problema y que no lo oculten debajo de la alfombra. Siempre les comentamos que nuestro compromiso es con el apicultor y no queríamos que la información llegue demasiado tarde como pudo pasar en otros países que ahora están sufriendo las consecuencias.

ANTECEDENTES• En 1975 apariencia de Nosema apis en colmenas

ceranas.• En 1995 se comprueba Nosema apis a la colmena

cerana.• En 1996 en China se verifica que Nosema cerana

infecta a la colmena apis cerana.• En 2005 infecciones de Nosema cerana en

España con perdidas del 50%.• En 2007 Nosema ceranae en Argentina y en 15

dias mata a la abeja y en 3 semanas a la colmena.

Desarrollo del paracito

• Elimina las capas del ventrículo para la digestión de su comida.

• Altera el metabolismo: hay menor digestión de las proteínas (polen), disminuyen así las energías (sustancias de reserva) y se reduce su longevidad.

• Se produce atrofia de las glándulas hipo faríngeas, que degeneran y atrofian prematuramente.

• Sobre la reina: se atrofian las ovariolas hasta producir esterilidad (recambio frecuente de la reina).

• Anemia: se manifiesta como una parálisis, al no tener fuerza para mover las alas y volar.

Ciclo de vida

• Entra por la boca se dirige hasta el ventrículo y eliminan la digestión

• Se determina por la concentración de calcio• La reproducción de esporos esta determinada

en una función exponencial•

DESARROLLO DE LA PARASITOSIS NOSEMA APIS1. Semana infección parcial de la célula epitelial.2. Semana infección total de la célula epitelial.3. Semana destrucción del e cese del individuo.4. Semana muerte del individuo. NOSEMA CERANAE1. Todo el ciclo en dos semanas2. Se desarrolla con mas facilidad en 35°+-5°.3. En 9 días mata a la abeja no a al colonia .4. La humedad es la que enferma a la colonia y no al

parasito.

CONTROL NATURAL• La colonia naturalmente controla a la parasitosis durante el verano.• Se incrementa el espesor de la membrana peri trófica.• El epitelio ventricular se renueva con mayor intensidad.• Se reduce la longevidad de la obreras y el parasito no tiene tiempo

de multiplicarse .• La cantidad de abejas que emerge supera a al que

muere ,manteniendo una abundante población que diluye la masa infectada.

• Aumento superficientes de reservas proteicas extra en intracorporales

RESULTADO EQUILIBRIO NATURAL

EQUILIBRIO HUESPED-PARASITO ABEJA ABEJA NOSEMA

NOSEMA AMBIENTE FACTORCOCAUSAL AMBIENTE

CADENA EPIZOOTIOLOGICA

CAUSAS DE PARASITOSIS• Destrucción de células encargadas de la producción de

enzimas de la digestión.• Desnutrición .• Consumo de reservas de miel y polen.• Stress ,cambios de lugar al colmenar,nucleos de fin de

temporada, apiario a la sombra.• Esta demostrado que la masa infectada es directamente

proporcional al aumento de temperatura y al incremento de alimentación.

• Falta de desparasitar a tiempo y forma, sin conteo de esporos en la colonia en otoño -primavera.

• Se demostró que es mejor para la colonia permanecer sin postura en la invernada (9°).

EFECTOS EN LAS CASTAS

Consecuencias en %

• Vida 12%• Reducción de población 90%• Menor vida de la reina 22% al 44%• Mayor consumo de reservas 33% al 50%• Muerte invernal 30%• Expansión en 30% en provincia Buenos Aires

CONSUMO DE RESERVASEXPERIMENTO

FACTORES CONCAUSALES

• Factor climático

• Factor humano

• Huésped o parasitosis

FACTORES CLIMATICOS

FACTOR HUMANO• Alimentación inadecuado ejemplo: 1:1 en

invierno,miel fermentada,glucosa.• Mayor humedad ejemplo a la sombra,sin cortar el

pasto,apoyadas en el suelo.• Mal manejo interno de la colmena• Manipulación innesecesaria • Nucleada excesiva ej fin de temporada• Reinas viejas,decadentes y de mala calidad• No detección del patógeno• Falta de desinfección del material de colonia infectada • Equilibrar colmenas con panales de miel infectados

La presencia del parásito basta para causar la parasitosis?

• Para que se genere una enfermedad parasitaria (parasitosis) por N. apis, resulta claro que es condición necesaria la existencia del parásito en la abeja (huésped), pero esto solo no es suficiente, requiere que se le sume un factor predisponente (con-causal) que genere un desequilibrio.

• De esto se desprende que aplicar Fumagilina para matar al parásito no es la única opción y, de hecho, la colonia controla naturalmente la enfermedad durante el verano básicamente por:

• • 1. Se incrementa el espesor de la membrana peri trófica debido al abundante aporte

nutritivo disponible • 2. Al reducirse la longevidad de las obreras el parásito no tiene “tiempo” de multiplicarse. • 3. La cantidad de abeja emergente supera a la que muere manteniendo una abundante

población que “diluye” la masa infectante. • • Esto demuestra que pese a que se encuentre presente el parásito en la colonia (la intensidad

registrada bien es cercana, no es de 0) no se desarrolla la parasitosis. • • Al llegar al otoño nos encontramos con un frágil estado de equilibrio donde la ocurrencia de

cualquier factor con-causal genera la parasitosis.

El factor puede ser natural, pero resulta común que también sea un emergente del manejo.

• Fig. 1: Manejo del poncho (línea oscura). 1: posición de baja humedad. 2: posición de ventilación en presencia de humedad. 3: posición al suministrar jarabe. Las posiciones 2 y 3 pueden volver a la posición 1 al restablecerse las condiciones.

Cuales emergentes del manejo son los mas importantes?

• Los emergentes son muchos (es por esto que se describe esta enfermedad como multifactorial), sin embargo, existen ciertas pautas que dependen de cada zona en cuestión y que deben ser identificados.

• En el Sudeste de Provincia de Bs. As destacan: • La condición de alta humedad ambiente: es fundamental prestar atención a la ubicación de las colonias. Se debe

evitar asentar colmenas bajo los árboles, esquinas de potrero muy resguardadas, baja altura de las bases y pastos altos.

• El uso de “ponchos” en zonas frías, tiene como función disminuir el consumo de miel al aislar el bolo invernal de los espacios vacíos. Con este manejo, al comprimir la colonia se rompe el comportamiento natural de bolo, donde las abejas que componen la capa superficial sufren períodos de frío. Su uso anula esta situación y propicia tiempos de exposición y condiciones de temperatura óptimos para el desarrollo de la parasitosis. A esto le sumamos que la evaporación generada por la colonia puede no escapar y genere un microclima de altísima humedad interna. Lo mismo sucede cuando agregamos jarabes, pero en forma mas abrupta.

• Estos resultados no descartan el uso de poncho pero sí nos hacen notar que existe un manejo del mismo (Fig. 1). • • Situaciones de reservas desbalanceadas o ausentes: durante los bloqueos de cámara agregamos solo jarabes u

otro tipo de azúcares (HdC) para completar reservas y achicar nido. Los HdC son esenciales para las abejas tanto como las proteínas y vitaminas que aporta el polen, cuya carencia debe guardar particular atención puesto que es imposible mantener un estado nutricional óptimo solo con azúcares. Verificar siempre disponibilidad invernal y, en caso necesario, suplementar con productos aprobados sería la opción.

• • Estimulación desbalanceada nutricionalmente: Si no alcanza el polen almacenado (o es mayoritariamente mono

floral) y no hay floración, la demanda de la cría no es cubierta y es imprescindible aportarlo, ya sea en forma de polen comprado (cuidado con enfermedades) o suplementos comerciales. Sabemos que este manejo deficiente en nutrición se encuentra tan extendido como las severas parasitosis primaverales, casual no?

• De esta manera es posible anular uno de los factores que a nuestro parecer más influye en el pico primaveral

Evolución de la parasitosis en función del tiempo en la colonia. Modificado de Cornejo y Rossi (1974).

Escaso recambio de cuadros y desinfección de material inerte ausente:

• La masa infectante es la vía de contagio y re-infección más importante. La forma de solucionar esto radica en el recambio y desinfección del material inerte utilizado , se aconseja el 33% por temporada. Los panales labrados de colmenas infectadas se tratan pulverizando con 1 lts cloro y 9 lts de agua.

• Se debe tener presente que el esporo de N. apis no tiene la misma resistencia que el de Loque, por lo que su eliminación es menos radical. El solo hecho de someterlo a una temperatura estrictamente constante de 49°C durante 24 horas, soluciona el problema (Hornitzky, 2005).

• El ácido acético al 80% a razón de 150 cc/ alza estándar con cuadros, resulta un método efectivo y más accesible. Debido a su costo, lo utilizamos sólo para la desinfección de los cuadros con cera labrada, pero es aplicable a todo el material. Este procedimiento también protege del desarrollo de polillas.

• El flameado a los pisos , alzas , techos y entre tapas es el metodo aconsejado para el material infectado.

¿De que forma se pueden detectar los factores con-causales en el apiario?

• Desconocer el número promedio de parásitos por hospedador de nuestro apiario (abundancia) repercute negativamente en el manejo de esta parasitosis.

• El monitoreo resulta imprescindible tanto para detectar factores con-causales como para determinar el inicio del tratamiento medicamentoso.

• Para ello tomaremos una muestra de 100 abejas por colmena correspondientes a un mínimo del 10% del colmenar (25% sería ideal) durante un día de vuelo (tapando la piquera), pudiendo así enviar al laboratorio la población (clúster) que registra mayor intensidad en las colonias (se puede tomar también del interior, pero reconsiderando los valores expresados en este artículo).

• Si los resultados de este primer muestreo no superan los 300 mil esporos/ abeja es posible especular de forma segura con el tiempo (monitoreos por medio), de manera que, de ser necesario, con un solo tratamiento completo y la desinfección podamos evitar tanto un pico posterior.

¿Cuando debemos recurrir al tratamiento medicamentoso?

• En cuanto a la aplicación de medicamentos no necesitamos decidir cual es la droga de elección pues la Fumagilina es, por el momento, la única droga de reconocida eficacia, aunque el solo hecho de aplicarla, puede ser ineficaz .

• Sabemos indiscutiblemente dos cosas: que este medicamento no mata los esporos ya formados y que es extremadamente efectivo durante los 21 días que dura su aplicación. Si desconocemos el estado de la parasitosis, con certeza estaremos aplicando en un momento que puede ser tanto temprano como tarde e incluso innecesario.

• Si es temprana, el efecto del medicamento puede retardar pero no inhibir el desarrollo de la enfermedad a posteriori. Tras su aplicación, en un período de 3 semanas los recuentos caen a niveles basales (entre 0 y 10 mil esporos/abeja), solucionando aparentemente el problema pero, ¿que sucede con la masa infectante?

• La administración de fumagilina (figura 2), cubre durante un período aproximado de 30 días pero, pasada la cobertura, los esporos ingeridos generan la reinfección desencadenando nuevamente la enfermedad.

• Si la aplicación es tardía pues la muestra ya supera los 2.000.000 esporos/ abeja (imposible de visualizar en campo) el daño causado a la cría reduce su longevidad en un 22-44% y los adultos ya sufrieron daños irreversibles, por lo que las pérdidas igual ocurren.

• Estas situaciones generan desconcierto e incluso dudas sobre la efectividad del producto adquirido pues no actuó como se esperaba pero, en realidad, no se aplicó en el momento que se necesitaba.

• Basados en lo expuesto durante estas serie de dos artículos, sacamos como conclusión que si no nos imponemos un plan de control, mantenemos, pero no solucionamos.

• Elaborar un plan de control para una patología como Nosemosis beneficia cualquier explotación apícola, pero requiere de dedicación.

EFECTO DEL SUMINISTRO DE COMPLEMENTOS PROTEICOS EN EL NIVEL DE PROTEINAS TOTALES DE VENTRICULO DE APIS MELIFERA.

Grupos Fumagilina en mg totales en todas las aplicaciones

jarabe y complemento proteico ml/lts

Esporos

Grupo 1 102 7 17.143

Grupo 2 102 0 1.7143

Grupo 3 0 7 4.959.268

Grupo 4 0 0 4.959.268

Grupo 1 Mayor Proteínas incorporadas

Grupo 1 vs 2 No hay diferencias

medicando con fumagilina

En numero de esporos

Grupo 3 Tenían menos Proteínas que lo que incorporaron

Grupo 4 Se mantuvo Cte contundencia

A bajar

CLINICA• Deyección en los frentes ,sobre marcos sin limpiar y panales del tamaño de la abeja.• Mortandad por hambre (abeja muerta en celda de cabeza hacia adentro, en piqueras y entre tapas.• Solo queda la reina y pocas abejas.• Cría yesificada.• Falta de nodrizas al medio día al cuidado de la cría.• Reemplazo reiterado de reina.• Muerte prematura de abejas, incapacidad para el vuelo, temblores de alas, movimientos espasmódicos causados por la inanición. • Desarrollo deficiente de glándulas • Aumento del consumo, con una digestión disminuida. • Repleción de intestino y ampolla rectal, aumento de peso, compresión de sacos aéreos • Defecación en un período avanzado de la enfermedad. Heces claras en bordes externos de la celdas, marrón claro y amarillo en la piquera:

enfermedad avanzada. • No es signo patognomónico. • Disminución de vida media de las abejas, por disminución de reservas, carencia proteica • Escasa actividad de vuelo • Deficiente atención a la cría • Abejas volando aisladamente en invierno • Desarrollo atrasado de la colonia, principalmente en primavera. • Muerte de abejas adultas • Debilitamiento de la colmena • Como el intestino se "lastima", cambia su apariencia. Los intestinos de las abejas enfermas se ven blanquecinos, hinchados, flácidos, deformados;

mientras los intestinos de abejas sanas son de color verdoso amarillento y turgentes (podría utilizarse como diagnóstico a campo).La presencia de diarrea, no es única de esta enfermedad; por lo tanto no sirve como diagnóstico diferencial.

Como se expresa en el apiario

CONTEO DE ESPOROSControl n = 8 Esporos Medicar

Grupo 1 control a tiempo 1-2 x 10´6 Fumagilina-apiromotor 2 dosis

Grupo 2 control a tiempo 0-1 x 10´6 Fumagilina –apipromotor 2 dosis

Grupo 3 Queda masa infectada

2-3 x 10´6 Fumagilina –apipromotor 3 dosis

Grupo 4 Queda un 30% De masa infectada

3-4 x 10´6 Fumagilina –apipromotor 3 dosis

Grupo 5 Queda un 30% De masa infectada

4-5 x 10´6 Fumagilina –apipromotor 3 dosis

Grafico de esporos vs alimentación

Interpretación de grafico• Comienzo de floración en julio con aumento paulatino

de temperatura , (momento justo para el conteo y cura con fumagilina).

• En noviembre buena entra de néctar y mucha abeja y alto valor de esporos.

• Diciembre escasea la comida y se produce un desabeje importante hasta que disminuye la masa infectante y termina muriendo la colmena o vuelve a levantar como en este caso hasta febrero.

• Se produce una alta masa infectante en febrero y se produce mortandad hasta mayo con la respectiva baja de esporos.

Experimento Tres arrollos

Interpretación del experimento

• La floración de Acacio produjo un aumento acelerado de la masa infectante sin limite .

• La floración a campo si bien no fue una entrada excesiva tampoco desencadeno la gran masa infecta , por el contrario se mantuvo cte.

• Conclusión a mayor proteína se incrementa la masa infectada.