mÉtodos especÍficos para el anÁlisis de los azÚcares …
TRANSCRIPT
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
1
RESOLUCIOacuteN OIV-OENO 419A-2011
MEacuteTODOS ESPECIacuteFICOS PARA EL ANAacuteLISIS DE LOS AZUacuteCARES DE UVA (MOSTO
CONCENTRADO RECTIFICADO)
LA ASAMBLEA GENERAL
CONSIDERANDO el articulo 2 paacuterrafo 2 iv del Acuerdo del 3 de abril de 2001 que
establece la Organizacioacuten Internacional de la Vintildea y el Vino
TOMANDO EN CUENTA los trabajos de la Subcomisioacuten de Meacutetodos de Anaacutelisis en la
puesta al diacutea del compendio con los meacutetodos especiacuteficos para el anaacutelisis de los azuacutecares
de uva
TOMANDO EN CUENTA la Resolucioacuten existente OENO 472000 sobre las especificaciones
del Azuacutecar de Uva y de los meacutetodos relacionados y la necesidad de poner al diacutea estos
meacutetodos especiacuteficos
DADO que los meacutetodos siguientes han sido reconocidos por organismos internacionales
de la autoridad
DECIDE crear un Anexo F titulado los ldquoMeacutetodos Especiacuteficos para el Anaacutelisis de los
Azuacutecares de Uvardquo
DECIDE insertar en el Anexo F del Compendio de Meacutetodos de Anaacutelisis Internacionales de
Vinos y Mostos los meacutetodos descritos en el apeacutendice siguiente
DECIDE en consecuencia adaptar la Resolucioacuten Oeno 472000 incluida en el Coacutedigo
Enoloacutegico Internacional
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
2
ANEXO B CONDUCTIVIDAD
Tipo IV
1 Fundamento del meacutetodo
Medida de la conductividad eleacutectrica de una columna de liacutequido delimitada por dos
electrodos de platino (mantenidos paralelos) que constituye una de las ramas de un
puente de Wheatstone
La conductividad variacutea con la temperatura y se expresa a 20 ordmC
2 Reactivos
Usar soacutelo reactivos de grado quiacutemico
21 Agua purificada para laboratorios de conductividad especiacutefica inferior a 2
microsiemens por cm a 20 degC por ejemplo agua EN ISO 3696 tipo II
22 Solucioacuten de cloruro de potasio de referencia
Disolver en agua desmineralizada (punto 21) 0581 g de cloruro de potasio KCl
previamente secado hasta obtener una masa constante a la temperatura de 105 degC
Completar hasta 1 litro con agua desmineralizada (punto 21) Esta solucioacuten tiene una
conductividad de 1 000 microsiemens por cm a 20 degC Su plazo de conservacioacuten se
limita a 3 meses
Se puede usar una preparacioacuten comercial
3 Material
31 Conductiacutemetro que permita efectuar medidas de conductividad en una banda
comprendida entre 1 y 1 000 microsiemens por cm (microS cm-1
)
32 Bantildeo Mariacutea que permita poner las muestras problema a una temperatura de
aproximadamente 20 degC (20 plusmn 2 degC)
4 Procedimiento
41 Preparacioacuten de la muestra problema
Utilizar una solucioacuten cuyo contenido en azuacutecares totales sea del 25 plusmn 05 (mm)
(25deg Brix) pesar una masa igual a 2500 P y completar hasta 100 g con agua (21) P
= porcentaje (mm) de azuacutecares totales del mosto concentrado rectificado
42 Determinacioacuten de la conductividad
Llevar la muestra problema a una temperatura de 20 ordmC mediante inmersioacuten en un
bantildeo Mariacutea Comprobar la temperatura con una aproximacioacuten de 01 ordmC
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
3
Lavar dos veces la ceacutelula de medida del conductiacutemetro con la solucioacuten que vaya a
analizarse
Medir la conductividad expresada en microsiemens por centiacutemetro
5 Expresioacuten de los resultados
La conductividad se expresa en microsiemens por centiacutemetro (microScmminus1
) a 20 ordmC sin
decimales para la solucioacuten al 25 (mm) (25 ordmC Brix) de mosto concentrado
rectificado
51 Caacutelculo
En caso de que el aparato no cuente con un compensador de temperatura corregir la
conductividad que se haya medido mediante la tabla I Si la temperatura es inferior a
20 ordmC antildeadir la correccioacuten si la temperatura es superior a 20 ordmC restar la correccioacuten
6 Caracteriacutesticas del meacutetodo
Repetibilidad (r)
r = 3 microScm
Reproducibilidad (R)
R = 16 microScm
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
4
TABLA I
Correcciones de conductividad para temperaturas distintas de 20 ordmC en microsiemens cmminus1
Conductividad
Temperaturas
202
198
204
196
206
194
208
192
210
190
212
188
214
186
216
184
218
182
220(1)
180(2)
0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
50 0 0 1 1 1 1 1 2 2 2
100 0 1 1 2 2 3 3 3 4 4
150 1 1 2 3 3 4 5 5 6 7
200 1 2 3 3 4 5 6 7 8 9
250 1 2 3 4 6 7 8 9 10 11
300 1 3 4 5 7 8 9 11 12 13
350 1 3 5 6 8 9 11 12 14 15
400 2 3 5 7 9 11 12 14 16 18
450 2 3 6 8 10 12 14 16 18 20
500 2 4 7 9 11 13 15 18 20 22
550 2 5 7 10 12 14 17 19 22 24
600 3 5 8 11 13 16 18 21 24 26
(1) Restar la correccioacuten
(2) Sumar la correccioacuten
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
5
ANEXO C
HIDROXIMETILFURFURAL (HMF) por cromatografiacutea liquida de alto rendimiento
Tipo IV
1 Fundamento del meacutetodo
Cromatografiacutea liquida de alto rendimiento (CLAR)
Separacioacuten a traveacutes de una columna por cromatografiacutea fase-inversa y determinacioacuten en
280 nanoacutemetros
2 Reactivos
21 Agua purificada para uso de laboratorio y de calidad corriente EN ISO 3696
22 Metanol CH3OH destilado o de calidad HPLC ndash Nuacutemero CAS 67-59-1
23 Aacutecido aceacutetico CH3COOH (ρ20 = 105 gml) ndash Nuacutemero CAS 64-19-7
24 Fase moacutevil agua (21) metanol (22) - aacutecido aceacutetico (23) previamente filtrados por
membrana (045 microm) (40 9 1 vv)
Esta fase moacutevil debe prepararse diariamente y desgasificarse antes de su uso
25 Solucioacuten de referencia de hidroximetilfurfural de 25 mgl (mv)
Introducir en un matraz aforado de 100 ml 25 mg exactamente pesados de
hidroximetilfurfural C6H3O6 y completar el volumen con metanol (22) Diluir esta
solucioacuten al 110 con metanol (punto 22) y filtrarla por una membrana (045 microm)
Esta solucioacuten se conserva de 2 a 3 meses si se introduce en un frasco de vidrio
topacio hermeacuteticamente cerrado y se mantiene refrigerada
(la concentracioacuten de la solucioacuten de referencia se da a tiacutetulo orientativo)
3 Material
31 Equipo
311 Cromatoacutegrafo de liacutequidos de alta resolucioacuten equipado con
ndash un inyector con loop de 5 o 10 μl (a tiacutetulo indicativo)
ndash un detector espectrofotomeacutetrico que permita efectuar mediciones a 280 nm
ndash una columna de siacutelice dopada con octadecilo (por ejemplo Bondapak C18 mdash
Corasil Waters Ass)
ndash un registrador y en su caso un integrador
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
6
Flujo de la fase moacutevil 15 mlmin (a tiacutetulo indicativo)
312 Equipo de filtracioacuten por membrana (045 microm)
4 Procedimiento
41 Preparacioacuten de la muestra
Utilizar la solucioacuten obtenida diluyendo el mosto concentrado rectificado al 40
(mv) (introducir 200 g de mosto concentrado rectificado pesado exactamente en un
matraz aforado de 500 ml enrasar con agua y homogeneizar) y filtrarla por
membrana (045 microm)
42 Determinacioacuten cromatograacutefica
Inyectar en el cromatoacutegrafo 5 (o 10) microl de la muestra preparada del modo indicado en
el punto 41 y 5 (o 10) microl de solucioacuten de referencia de hidroximetilfurfural (punto
325) Registrar el cromatograma
El periacuteodo de retencioacuten del hidroximetilfurfural es de aproximadamente 6 oacute 7
minutos
El volumen inyectado y la secuencia se dan a tiacutetulo orientativo La determinacioacuten
cromatograacutefica puede realizarse tambieacuten con una curva de calibracioacuten
5 Expresioacuten de los resultados
El contenido en hidroximetilfurfural del mosto concentrado rectificado se expresa en
miligramos por kilogramo de azuacutecares totales
51 Modo de caacutelculo
Sea C mgl el contenido en hidroximetilfurfural de la solucioacuten de mosto concentrado
rectificado al 40 (mv)
El contenido en hidroximetilfurfural en miligramos por kilogramo de azuacutecares totales
viene expresado por
250 CP
P = contenido (mm) en azuacutecares totales del mosto concentrado
rectificado
6 Caracteriacutesticas del meacutetodo
Repetibilidad (r)
r = 05 mgkg azuacutecares totales
Reproducibilidad (R)
R = 30 mgkg azuacutecares totales
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
7
ANEXO E DETERMINACIOacuteN DEL GRADO ALCOHOacuteLICO VOLUMEacuteTRICO
ADQUIRIDO (GAV) DE LOS MOSTOS CONCENTRADOS (O DE LOS MOSTOS
CONCENTRADOS RECTIFICADOS MCR) Tipo IV
1 Introduccioacuten
Los mostos concentrados y los azuacutecares de uva (MCR) son productos espesos con un bajo
contenido de alcohol la determinacioacuten de su GAV adquirido requiere el uso de un meacutetodo
cuyos resultados (linealidad repetibilidad reproducibilidad especificidad liacutemites de
deteccioacuten y de cuantificacioacuten) permitan medir contenidos de alcohol inferiores al 1vol
2 Campo de aplicacioacuten
Este meacutetodo se aplica a los mostos concentrados y a las azuacutecares de uva
3 Principio
A Una masa conocida de mosto concentrado (MC) o de azuacutecar de uva se alcaliniza
mediante suspensioacuten de hidroacutexido de calcio y luego se destila El grado alcohoacutelico
volumeacutetrico del destilado se determina mediante densimetriacutea electroacutenica o por
densimetriacutea usando una balanza hidrostaacutetica
4 Reactivos
- Suspensioacuten de hidroacutexido de calcio 2M de calidad analiacutetica obtenido vertiendo con
precaucioacuten un litro de agua caliente (60 a 70 degC) en aproximadamente 120 g de cal viva
(CaO)
- Solucioacuten antiespumante obtenida por dilucioacuten de 2 ml de antiespumante de silicona
concentrada en 100 ml de agua
- Agua purificada para laboratorio de calidad EN ISO 3696
5 Material
- Material corriente de laboratorio matraces de 200 ml
- Balanza analiacutetica para pesar hasta 01 g aproximadamente
- Cualquier tipo de equipo de destilacioacuten o destilacioacuten al vapor puede usarse si cumple la
siguiente prueba
Destilar una mezcla de etanol y agua con un grado alcohoacutelico de 10 vol cinco veces
consecutivas
El destilado debe tener un grado alcohoacutelico de al menos 99 vol despueacutes de la quinta
destilacioacuten esto es la peacuterdida de alcohol durante cada destilacioacuten no deberiacutea ser superior a
002 vol
- Densiacutemetro electroacutenico con un resonador de flexioacuten o densiacutemetro con balanza hidrostaacutetica
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
8
6 Procedimiento
- Homogeneizar la muestra dando vueltas al matraz
- En un matraz aforado de 500 ml pesar aproximadamente 200 g de mosto concentrado o
rectificado (con una precisioacuten de hasta 01 g aproximadamente) Anotar el peso (PE) de esta
muestra Completar hasta la raya de graduacioacuten con agua desionizada Esta solucioacuten es de
40 pv en mosto
Obtencioacuten del destilado
- Traspasar 250 ml de la solucioacuten al 40 al matraz de destilar Antildeadir en el matraz
aproximadamente 10 ml de suspensioacuten de hidroacutexido de calcio aproximadamente 5 ml de
solucioacuten antiespumante y llegado el caso un regulador de ebullicioacuten (fragmentos de
porcelana por ejemplo)
- Llevar al punto de ebullicioacuten con suavidad
- Recoger el destilado en un matraz aforado de 200 100 ml (aproximadamente 190 90 ml)
- Dejar que el destilado llegue a la temperatura ambiente y completar hasta la raya de la
graduacioacuten con agua desionizada
Medicioacuten del GAV
Se lleva a cabo mediante densimetriacutea electroacutenica o balanza hidrostaacutetica
7 Caacutelculo
Grado alcohoacutelico volumeacutetrico alcanzado = GAV medido X 200 X MV
PE
GAV medido = contenido de alcohol dado por el densiacutemetro como vol
PE = muestra de mosto concentrado o azuacutecar de uva en gramos
MV= densidad del mosto concentrado o del mosto concentrado rectificado en gml
Los resultados se expresan con dos decimales y se redondean hasta aproximadamente el
005vol
8 Caracteriacutesticas del meacutetodo
81 Linealidad de la respuesta
La linealidad del densiacutemetro para los valores de bajo GAV es uno de los paraacutemetros
criacuteticos de este meacutetodo Se preparoacute una gama patroacuten de 10 soluciones hidroalcohoacutelicas de
GAV comprendido entre 0 y 5 vol Cada solucioacuten se analizoacute tres veces
La respuesta del densiacutemetro es perfectamente lineal en este campo tal como lo
muestra la recta de calibracioacuten de la figura 1
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
9
Figura 1 Linealidad de la determinacioacuten del GAV por densimetriacutea electroacutenica entre 0 y
5vol
82 Especificidad del meacutetodo
El segundo punto criacutetico de este meacutetodo es la destilacioacuten de los mostos viscosos con pequentildeas
cantidades de alcohol Para comprobar la especificidad se antildeadieron cantidades conocidas de
etanol (de 025 vol a 5vol) a MC y a azuacutecares de uva Las muestras con esta adicioacuten se
destilaron en condiciones previamente definidas Los destilados se analizaron a continuacioacuten
mediante densimetriacutea electroacutenica y balanza electroacutenica
Los resultados aparecen en la tabla 1 siendo satisfactoria la tasa de recuperacioacuten
comprendida entre 88 y 99 Tal como se ve en la recta de la figura 2 el meacutetodo es
especiacutefico (pendiente cercana al 1 ordenada en el origen cercana al 0)
Muestra Contenido
inicial
(vol)
Contenido
antildeadido (vol)
Contenido
encontrado
(vol)
Tasa de
recuperacioacuten
()
MC 1 000 025 022 88
MC 1 000 100 098 98
Azuacutecar de uva
(MCR) 1
000 100 094 94
Azuacutecar de uva
(MCR) 1
000 200 197 99
MC 2 000 050 044 88
Azuacutecar de uva
(MCR) 2
000 500 494 99
Tabla 1 Tasa de recuperacioacuten de la determinacioacuten del GAV de los MC y de las azuacutecares de
uva
respuesta respuesta
Lineal (respuesta)
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
10
especificidad para Densimetriacutea electroacutenica
y = 09968x - 0039
000
100
200
300
400
500
600
000 100 200 300 400 500 600
contenido agregado (vol)
co
nte
nid
o r
ec
up
era
do
contenido agregado
contenido recuperado (medido - inicial)
Lineal (contenido recuperado (medido - inicial))
Figura 2 Especificidad de la determinacioacuten del GAV de los MC y de las azuacutecares de uva
83 Repetibilidad
La repetibilidad del meacutetodo se determinoacute a partir de 20 muestras de MC o de azuacutecar de uva
con y sin adicioacuten de alcohol Se analizoacute tres veces cada muestra para estar en condiciones
ideacutenticas Los liacutemites de repetibilidad obtenidos fueron los siguientes
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
11
Repetibilidad para densimetria electronica valor calculado
Desviacioacuten tiacutepica 0009
Coeficiente de variacioacuten o desviacioacuten tiacutepica
relativa en 09
liacutemite r 0024 vol
liacutemite r en 3
Repetibilidad para Balanza hidrostaacutetica Valor calculado
Desviacioacuten tiacutepica 0013
Coeficiente de variacioacuten o desviacioacuten tiacutepica
relativa en 17
Liacutemite r 0038 vol
Liacutemite r en 53
84 Reproducibilidad
La reproducibilidad de los resultados se determinoacute analizando el mismo mosto en doble en
diferentes fechas durante un periodo dado Los resultados aparecen en la tabla 3
Reproducibilidad para densimetria electronica valor calculado
Desviacioacuten tiacutepica 0043
Coeficiente de variacioacuten o desviacioacuten tiacutepica
relativa en 3
liacutemite R 012vol
liacutemite R en 9
Reproducibilidad para Balanza hidrostaacutetica Valor calculado
Desviacioacuten estaacutendar 0026
Coeficiente de variacioacuten o desviacioacuten tiacutepica relativa en
34
Liacutemite R 0076vol
Liacutemite R en 106
Tabla 3- Reproducibilidad de la determinacioacuten del GAV de los MC y de las azuacutecares de uva
85 Liacutemites de deteccioacuten y de cuantificacioacuten
Los liacutemites de deteccioacuten (LD) y de cuantificacioacuten (LQ) estimados a partir del estudio de
linealidad son los siguientes
LD = 001 vol LQ = 005vol
El liacutemite de cuantificacioacuten se verificoacute analizando los mostos cuyo GAV teniacutea un nivel de
concentracioacuten de 005vol
Tabla 2 Repetibilidad de la determinacioacuten del GAV de los MC y de las azuacutecares de uva
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
12
86 Incertidumbre
La incertidumbre se evaluoacute a partir de la desviacioacuten tiacutepica de la reproducibilidad y fue de
010vol
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
13
ANEXO G SACAROSA
(CROMATOGRAFIacuteA LIacuteQUIDA DE ALTO RENDIMIENTO) Tipo IV
1 Fundamento de los meacutetodos
Meacutetodo de deteccioacuten y determinacioacuten por cromatografiacutea liacutequida de alta resolucioacuten La
sacarosa se separa mediante una columna de siacutelice con alquilamina y se detecta por
refractometriacutea Para calcular la cantidad se establece una comparacioacuten con un patroacuten externo
analizado en las mismas condiciones
Notas
La autenticidad de un mosto o de un vino puede controlarse mediante el meacutetodo de RMN del
deuterio descrito para la deteccioacuten del enriquecimiento de mostos de mostos concentrados
rectificados y de vinos
Las condiciones de cromatografiacutea son presentadas a tiacutetulo orientativo
2 Reactivos
21 Agua purificada para uso de laboratorio de calidad corriente EN ISO 3696
22 Acetonitrilo (CH3CN) de calidad HPLC ndash Nuacutemero CAS 75-05-8
23 Sacarosa ndash Nuacutemero CAS 57-50-1
24 Fase moacutevil acetonitrilo-agua previamente filtrados por membrana (045 μm) (8020 vv)
(La composicioacuten de la fase moacutevil se da a tiacutetulo indicativo)
Antes de su utilizacioacuten se deberaacute desgasificar
25 Solucioacuten de referencia solucioacuten acuosa de sacarosa de 12 gl Filtrada por membrana
(045 μm) (La concentracioacuten de la solucioacuten de referencia se da a tiacutetulo indicativo)
3 Material
31 Cromatoacutegrafo de fase liacutequida de alta resolucioacuten dotado de
1) Inyector con loop de 10 μl (a tiacutetulo indicativo)
2) Un detector un refractoacutemetro diferencial o refractoacutemetro interferoacutemetro
3) Columna Alkylammina (25 cm de longitud por 4 mm de diaacutemetro interno) (a tiacutetulo
indicativo)
4) Precolumna de la misma fase (a tiacutetulo indicativo)
5) Un dispositivo para mantener aislado o a la misma temperatura (30 degC) el conjunto
formado por la precolumna y la columna
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
14
6) Un registrador o en su caso un integrador
7) Flujo de la fase moacutevil 1 mlmin (a tiacutetulo indicativo)
32 Dispositivo de filtracioacuten por membrana (045 μm)
4 Procedimiento
41 Preparacioacuten de la muestra
Utilizar la solucioacuten obtenida diluyendo el mosto concentrado rectificado al 40 (mv) tal
como se indica en el Anexo H del meacutetodo laquoAcidez totalraquo seccioacuten 51 y filtrarla por
membrana (045 μm)
42 Determinacioacuten cromatograacutefica
Inyectar sucesivamente en el cromatoacutegrafo 10 μl de la solucioacuten de referencia y 10 μl de la
muestra preparada como se indica en el punto 41
Repetir las inyecciones en el mismo orden
Registrar el cromatograma
El tiempo de retencioacuten de la sacarosa es de unos 10 minutos
El volumen de la muestra y la secuencia se dan a tiacutetulo orientativo La determinacioacuten
cromatograacutefica puede realizarse tambieacuten con una curva de calibracioacuten
5 Caacutelculo
Utilizar para el caacutelculo el promedio de 2 resultados de la solucioacuten de referencia y de la
muestra
Sea C gl el contenido en sacarosa de la solucioacuten de mosto concentrado rectificado al 40
(mv)
Contenido en sacarosa en gramos por kilogramo de mosto concentrado rectificado 25 ∙ C
6 Expresioacuten de resultados
La concentracioacuten de sacarosa se expresa en gramos por kilogramo con una cifra decimal
7 Caracteriacutesticas del meacutetodo
Repetibilidad (r)
r = 11 gkg mosto
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
15
ANEXO H ACIDEZ TOTAL Tipo IV
1 Definicioacuten
La acidez total de un mosto concentrado rectificado es la suma de los aacutecidos valorables
cuando se lleva el pH a 7 antildeadiendo una solucioacuten alcalina valorada El dioacutexido de carbono no
se incluye en la acidez total
2 Fundamento del meacutetodo
Valoracioacuten potenciomeacutetrica o valoracioacuten en presencia de azul de bromotimol como indicador
del final de reaccioacuten mediante comparacioacuten con un patroacuten de coloracioacuten
3 Reactivos
31 Soluciones tampones
311 pH 70
Fosfato monopotaacutesico (KH2PO4) 1073 g
Solucioacuten 1 M de hidroacutexido soacutedico (NaOH) 500 ml
Agua csp 1 000 ml
312 pH 40
Solucioacuten 005 M de ftalato aacutecido de potasio Solucioacuten con 10211 gl de ftalato aacutecido de
potasio (C8H5KO4) a 20 degC (duracioacuten maacutexima de la solucioacuten 2 meses)
Nota Tambieacuten pueden utilizarse soluciones tampones de referencia comerciales para las que
exista correspondencia con unidades del SI
Por ejemplo pH 1679 plusmn 001 a 25degC
pH 4005 plusmn 001 a 25degC
pH 7000 plusmn 001 a 25degC
32 Solucioacuten 01 M de hidroacutexido soacutedico (NaOH)
33 Solucioacuten de azul de bromotimol de 4 gl
Azul de bromotimol (C27H28Br2O5S)hellip 4 g
Alcohol neutro 96 vol hellip 200 ml
Una vez solubilizado antildeadir
Agua sin CO2 helliphelliphellip 200 ml
Solucioacuten 1 M de hidroacutexido soacutedico
csp coloracioacuten verdeazulada (pH 7) helliphelliphelliphellip75 ml
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
16
Agua csp helliphelliphellip 1000 ml
4 Equipo
41 Potencioacutemetro con escala graduada en unidades de pH y electrodos A tiacutetulo indicativo el
electrodo de vidrio debe conservarse en agua destilada El electrodo de calomelanos de
cloruro potaacutesico saturado debe conservarse en una solucioacuten saturada de cloruro potaacutesico
Generalmente se emplea un electrodo combinado que se conserva en agua destilada
42 Vasos de precipitados de 100 ml de capacidad
5 Procedimiento
51 Preparacioacuten de la muestra
Poner 200 g de mosto concentrado rectificado exactamente pesado en un matraz aforado de
500 ml Enrasar con agua Homogeneizar
52 Valoracioacuten potenciomeacutetrica
521 Puesta a cero del aparato
Se efectuaraacute antes de cada medida siguiendo las instrucciones dadas para el aparato utilizado
522 Calibrado del pH metro
El pH metro se debe calibrar a 20ordmC usando soluciones tampoacuten de referencia acopladas con el
SI Los valores de pH seleccionados deben abarcar la gama de valores que pueden encontrarse
en los mostos Si el pH metro usado no es compatible con la calibracioacuten a valores
suficientemente bajos se deberiacutea realizar una verificacioacuten usando una solucioacuten tampoacuten de
referenencia acoplada con el SI y que tenga un valor de pH cercano a los valores hallados en
los mostos
523 Teacutecnica de medicioacuten
En un vaso de precipitados (44) introducir 50 ml de la muestra preparada como se indica en
51 Antildeadir 10 ml de agua destilada aproximadamente y verter con una bureta la solucioacuten 01
M de hidroacutexido soacutedico (32) hasta que el pH sea igual a 7 a 20 degC La adicioacuten de la solucioacuten
alcalina debe realizarse lentamente agitando constantemente la solucioacuten Se denominara n el
nuacutemero de mililitros de NaOH 01 M utilizados
53 Valoracioacuten con indicador (azul de bromotimol)
531 Ensayo previo obtencioacuten del patroacuten de coloracioacuten
En un vaso de precipitados (44) echar 25 ml de agua destilada y hervida 1 ml de solucioacuten de
azul de bromotimol (33) y 50 ml de muestra preparada como se indica en (51) Antildeadir la
solucioacuten 01 M de hidroacutexido de sodio (32) hasta obtener una coloracioacuten verdeazulada Antildeadir
5 ml de la solucioacuten tampoacuten pH 7 (311)
532 Determinacioacuten
En un vaso de precipitados (44) echar 30 ml de agua destilada y hervida 1 ml de solucioacuten de
azul de bromotimol (33) y 50 ml de muestra preparada como se indica en (51) Antildeadir la
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
17
solucioacuten 01 M de hidroacutexido soacutedico (32) hasta obtener una coloracioacuten ideacutentica a la obtenida
en el ensayo previo (531) Se denominaraacute n al nuacutemero de mililitros de solucioacuten de hidroacutexido
soacutedico 01 M utilizados
6 Expresioacuten de los resultados
61 Meacutetodo de caacutelculo
Acidez total expresada en miliequivalentes por kilogramo de mosto concentrado rectificado
A = 5 n
Acidez total expresada en miliequivalentes por kilogramo de azuacutecares totales A = (500 n)P
P = contenido en (mm) de azuacutecares totales
Se daraacute con 1 decimal
7 Caracteriacutesticas del meacutetodo
Repetibilidad (r)
r = 04 meq kg azuacutecares totales
Reproducibilidad (R)
R = 24 meq kg azuacutecares totales
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
18
ANEXO I pH Tipo IV
1 Fundamento
Medida de la diferencia de potencial entre dos electrodos sumergidos en el liacutequido que se
estudia Uno de los dos electrodos tiene un potencial que es una funcioacuten definida del pH del
liacutequido el otro tiene un potencial fijo y conocido y constituye el electrodo de referencia
2 Reactivos
21 Soluciones tampoacuten
211 Solucioacuten saturada de tartrato aacutecido de potasio al menos de 57 gl de tartrato aacutecido de
potasio (C4H5KO6) a 20oC Esta solucioacuten puede conservarse hasta 2 meses en presencia de 01
g de timol por cada 200 ml)
pHtemperatura
357 a 20oC
356 a 25oC
355 a 30oC
212 Solucioacuten 005 M de ftalato aacutecido de potasio Solucioacuten con 10211 gl de ftalato aacutecido de
potasio (C8H5KO4) a 20 degC (duracioacuten maacutexima de la solucioacuten 2 meses)
pHtemperatura
3999 a 15oC
4003 a 20oC
4008 a 25oC
4015 a 30oC
213 Solucioacuten que contenga
Fosfato monopotaacutesico KH2PO4 hellip 3402 g
Fosfato bipotaacutesico K2HPO4 hellip 4354 g
Agua csp hellip 1 000 ml
(Duracioacuten maacutexima de la solucioacuten 2 meses)
pHtemperatura
690 a 15oC
688 a 20oC
686 a 25oC
685 a 30oC
Nota Tambieacuten pueden utilizarse soluciones tampones de referencia comerciales para las que
exista correspondencia con unidades del SI
Por ejemplo pH 1679 plusmn 001 a 25degC
pH 4005 plusmn 001 a 25degC
pH 7000 plusmn 001 a 25degC
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
19
3 Material
31 pH metro graduado en unidades de pH que permita efectuar medidas con una
aproximacioacuten de plusmn001 como miacutenimo
32 Electrodos
321 Electrodo de vidrio
322 Electrodo de referencia de calomelanos de cloruro potaacutesico saturado
323 O electrodo combinado
4 Procedimiento
41 Preparacioacuten de la muestra para anaacutelisis
Diluirlo con agua a fin de obtener una concentracioacuten de 25 plusmn 05 (mm) en azuacutecares totales
(25oBrix) Si P es el contenido en (mm) en azuacutecares totales del mosto concentrado
rectificado pesar una masa igual a 2 500 P y completar con agua hasta 100 g La
conductividad del agua utilizada deberaacute ser inferior a 2 microsiemens por centiacutemetro
42 Puesta a cero del aparato
Se efectuaraacute antes de cada medida siguiendo las instrucciones dadas para el aparato utilizado
43 Calibrado del pH metro
El pH metro se debe calibrar a 20ordmC usando soluciones tampoacuten de referencia acopladas con el
SI Los valores de pH seleccionados deben abarcar la gama de valores que pueden encontrarse
en los mostos Si el pH metro usado no es compatible con la calibracioacuten a valores
suficientemente bajos se deberiacutea realizar una verificacioacuten usando una solucioacuten tampoacuten de
referenencia acoplada con el SI y que tenga un valor de pH cercano a los valores hallados en
los mostos
44 Medida
Introducir el electrodo en la muestra a analizar cuya temperatura deberaacute estar comprendida
entre 20 y 25oC y tan proacutexima como sea posible a 20
oC Leer directamente el valor del pH
Efectuacuteense al menos 2 determinaciones de cada muestra Tomar como resultado la media
aritmeacutetica de ambas determinaciones
5 Expresioacuten de los resultados
El pH de la solucioacuten al 25 (mm) (25oBrix) del mosto concentrado rectificado se expresaraacuten
con 2 decimales
6 Caracteriacutesticas del meacutetodo
Repetibilidad (r)
r = 007
Reproducibilidad (R)
R = 007
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
20
ANEXO J DIOacuteXIDO DE AZUFRE Tipo IV
1 Definiciones
Se denomina dioacutexido de azufre al dioacutexido de azufre presente en el mosto en las formas
siguientes H2SO
3 H SO3
- cuyo equilibrio es funcioacuten del pH y de la temperatura
H2SO
3 H
+ + HSO
3
macr
H2SO
3 representa el dioacutexido de azufre molecular
Se denomina dioacutexido de azufre total al conjunto de las distintas formas de dioacutexido de azufre
presentes en el mosto en estado libre o combinado con sus componentes
2 Materiales
Se extrae el dioacutexido de azufre total por arrastre en caliente (aproximadamente 100oC) del
mosto concentrado rectificado previamente diluido
21 Reactivos
211 Aacutecido fosfoacuterico al 85 H3PO4 (ρ20 = 171 gml)
212 Solucioacuten de peroacutexido de hidroacutegeno de 91 gl H2O2 (3 voluacutemenes)
213 Reactivo indicador
rojo de metilo hellip 100 mg
azul de metileno hellip 50 mg
Alcohol de 50 vol hellip100 ml
214 Solucioacuten de hidroacutexido de sodio (NaOH) 001 M
22 Material
221 El material utilizado debe ajustarse al esquema que figura a continuacioacuten
principalmente en lo que se refiere al refrigerante
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
21
Figura 1
Las dimensiones estaacuten indicadas en miliacutemetros Los diaacutemetros internos de los 4 tubos
conceacutentricos que constituyen el refrigerante son 45 34 27 y 10 mm
El tubo de conduccioacuten de los gases al borboteador B termina en una pequentildea esfera de 1 cm
de diaacutemetro que lleva en su mayor ciacuterculo horizontal 20 agujeros de 02 mm de diaacutemetro
Tambieacuten puede terminar en una placa de vidrio fritado que garantice la formacioacuten de gran
nuacutemero de pequentildeas burbujas realizando asiacute un buen contacto entre las fases gaseosa y
liacutequida
El flujo de gas que debe recorrer el aparato debe ser de 40 lh aproximadamente El frasco
situado a la derecha del aparato de destina a limitar de 20 a 30 cm de agua la depresioacuten
producida por la trompa de agua Para poder regular dicha depresioacuten de forma que el caudal
sea el correcto conviene colocar un medidor de flujo de tubo semicapilar entre el borboteador
y el frasco
222 Una microbureta
3 Procedimiento
31 En el caso del mosto concentrado rectificado utilizar la solucioacuten obtenida diluyendo la
muestra para analizar al 40 (mv) tal y como se indica en el capiacutetulo laquoAcidez totalraquo en el
apartado 51 En el matraz A de 250 ml del aparato de arrastre introducir 50 ml de esta
solucioacuten y 5 ml de aacutecido fosfoacuterico (2 11) Acoplar el matraz al aparato
32 Introducir en el borboteador B de 2 a 3 ml de solucioacuten de peroacutexido de hidroacutegeno (212)
neutralizarla con la solucioacuten 001 M de hidroacutexido soacutedico (214) llevar a ebullicioacuten el mosto
contenido en el matraz A con una pequentildea llama de 4 a 5 cm de altura que debe tocar
ligeramente el fondo del matraz No colocar bajo el matraz ninguna tela metaacutelica sino
depositarlo sobre un disco perforado con un agujero de 30 mm de diaacutemetro Se evita asiacute la
pirogenacioacuten de las materias extractivas de la muestra sobre las paredes del matraz
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
22
Mantener la ebullicioacuten durante el paso de la corriente de aire (o de nitroacutegeno) En 15 minutos
el dioacutexido de azufre total habraacute sido arrastrado y oxidado Valorar el aacutecido sulfuacuterico formado
con la solucioacuten 001 M de hidroacutexido soacutedico (214) Sea n el nuacutemero de mililitros utilizados
4 Caacutelculo
Dioacutexido de azufre en miligramos por kilo de azuacutecares totales (muestra 50 ml de muestra
preparada (31))
(1600 n)P
P = contenido en (mm) de azuacutecares totales
5 Expresioacuten de los resultados
El dioacutexido de azufre total se expresa en miligramos por kilogramo (mgkg) de azuacutecares
totales
6 Caracteriacutesticas del meacutetodo
Repetibilidad (r)
muestra de 50 ml lt 50 mgl r = 1x 250P mgkg de azuacutecares totales
Reproducibilidad (R)
muestra de 50 ml lt 50 mgl R = 9x 250P mgkg de azuacutecares totales
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
23
ANEXO K CARACTERIacuteSTICAS CROMAacuteTICAS Tipo IV
1 Fundamento
Medida de la absorbancia a 425 nm en cubetas de 1 cm de espesor del mosto concentrado
rectificado cuya concentracioacuten en azuacutecares se haya reducido al 25 (mm) (25o Brix)
2 Material
21 Espectrofotoacutemetro que permita efectuar medidas entre 300 y 700 nm
22 Cubetas de vidrio con un trayecto oacuteptico de 1 cm
23 Filtro con membrana y de una porosidad de 045 μm
3 Procedimiento
31 Preparacioacuten de la muestra
Utilizar una solucioacuten cuyo valor en azuacutecares sea del 25 (mm) (25o
Brix) y que se habraacute
preparado del modo indicado en el capiacutetulo laquopHraquo (41) Filtrarla en un filtro con membrana
de una porosidad de 045 μm
32 Determinacioacuten de la absorbancia
Ajustar a cero para la longitud de onda 425 nm en una cubeta de 1 cm de trayecto oacuteptico que
contenga agua destilada
Determinar la absorbancia A a esta longitud de onda de la solucioacuten al 25 de
azuacutecares (25oBrix) obtenida en el apartado 31 y colocada en una cubeta de 1 cm de trayecto
oacuteptico
4 Expresioacuten de los resultados
La absorbancia a 425 nm del mosto concentrado rectificado en solucioacuten al 25 (mm) de
azuacutecares (25o Brix) se expresaraacute con 2 decimales
Repetibilidad (r)
r = 001 U Abs agrave 25degBrix
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
2
ANEXO B CONDUCTIVIDAD
Tipo IV
1 Fundamento del meacutetodo
Medida de la conductividad eleacutectrica de una columna de liacutequido delimitada por dos
electrodos de platino (mantenidos paralelos) que constituye una de las ramas de un
puente de Wheatstone
La conductividad variacutea con la temperatura y se expresa a 20 ordmC
2 Reactivos
Usar soacutelo reactivos de grado quiacutemico
21 Agua purificada para laboratorios de conductividad especiacutefica inferior a 2
microsiemens por cm a 20 degC por ejemplo agua EN ISO 3696 tipo II
22 Solucioacuten de cloruro de potasio de referencia
Disolver en agua desmineralizada (punto 21) 0581 g de cloruro de potasio KCl
previamente secado hasta obtener una masa constante a la temperatura de 105 degC
Completar hasta 1 litro con agua desmineralizada (punto 21) Esta solucioacuten tiene una
conductividad de 1 000 microsiemens por cm a 20 degC Su plazo de conservacioacuten se
limita a 3 meses
Se puede usar una preparacioacuten comercial
3 Material
31 Conductiacutemetro que permita efectuar medidas de conductividad en una banda
comprendida entre 1 y 1 000 microsiemens por cm (microS cm-1
)
32 Bantildeo Mariacutea que permita poner las muestras problema a una temperatura de
aproximadamente 20 degC (20 plusmn 2 degC)
4 Procedimiento
41 Preparacioacuten de la muestra problema
Utilizar una solucioacuten cuyo contenido en azuacutecares totales sea del 25 plusmn 05 (mm)
(25deg Brix) pesar una masa igual a 2500 P y completar hasta 100 g con agua (21) P
= porcentaje (mm) de azuacutecares totales del mosto concentrado rectificado
42 Determinacioacuten de la conductividad
Llevar la muestra problema a una temperatura de 20 ordmC mediante inmersioacuten en un
bantildeo Mariacutea Comprobar la temperatura con una aproximacioacuten de 01 ordmC
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
3
Lavar dos veces la ceacutelula de medida del conductiacutemetro con la solucioacuten que vaya a
analizarse
Medir la conductividad expresada en microsiemens por centiacutemetro
5 Expresioacuten de los resultados
La conductividad se expresa en microsiemens por centiacutemetro (microScmminus1
) a 20 ordmC sin
decimales para la solucioacuten al 25 (mm) (25 ordmC Brix) de mosto concentrado
rectificado
51 Caacutelculo
En caso de que el aparato no cuente con un compensador de temperatura corregir la
conductividad que se haya medido mediante la tabla I Si la temperatura es inferior a
20 ordmC antildeadir la correccioacuten si la temperatura es superior a 20 ordmC restar la correccioacuten
6 Caracteriacutesticas del meacutetodo
Repetibilidad (r)
r = 3 microScm
Reproducibilidad (R)
R = 16 microScm
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
4
TABLA I
Correcciones de conductividad para temperaturas distintas de 20 ordmC en microsiemens cmminus1
Conductividad
Temperaturas
202
198
204
196
206
194
208
192
210
190
212
188
214
186
216
184
218
182
220(1)
180(2)
0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
50 0 0 1 1 1 1 1 2 2 2
100 0 1 1 2 2 3 3 3 4 4
150 1 1 2 3 3 4 5 5 6 7
200 1 2 3 3 4 5 6 7 8 9
250 1 2 3 4 6 7 8 9 10 11
300 1 3 4 5 7 8 9 11 12 13
350 1 3 5 6 8 9 11 12 14 15
400 2 3 5 7 9 11 12 14 16 18
450 2 3 6 8 10 12 14 16 18 20
500 2 4 7 9 11 13 15 18 20 22
550 2 5 7 10 12 14 17 19 22 24
600 3 5 8 11 13 16 18 21 24 26
(1) Restar la correccioacuten
(2) Sumar la correccioacuten
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
5
ANEXO C
HIDROXIMETILFURFURAL (HMF) por cromatografiacutea liquida de alto rendimiento
Tipo IV
1 Fundamento del meacutetodo
Cromatografiacutea liquida de alto rendimiento (CLAR)
Separacioacuten a traveacutes de una columna por cromatografiacutea fase-inversa y determinacioacuten en
280 nanoacutemetros
2 Reactivos
21 Agua purificada para uso de laboratorio y de calidad corriente EN ISO 3696
22 Metanol CH3OH destilado o de calidad HPLC ndash Nuacutemero CAS 67-59-1
23 Aacutecido aceacutetico CH3COOH (ρ20 = 105 gml) ndash Nuacutemero CAS 64-19-7
24 Fase moacutevil agua (21) metanol (22) - aacutecido aceacutetico (23) previamente filtrados por
membrana (045 microm) (40 9 1 vv)
Esta fase moacutevil debe prepararse diariamente y desgasificarse antes de su uso
25 Solucioacuten de referencia de hidroximetilfurfural de 25 mgl (mv)
Introducir en un matraz aforado de 100 ml 25 mg exactamente pesados de
hidroximetilfurfural C6H3O6 y completar el volumen con metanol (22) Diluir esta
solucioacuten al 110 con metanol (punto 22) y filtrarla por una membrana (045 microm)
Esta solucioacuten se conserva de 2 a 3 meses si se introduce en un frasco de vidrio
topacio hermeacuteticamente cerrado y se mantiene refrigerada
(la concentracioacuten de la solucioacuten de referencia se da a tiacutetulo orientativo)
3 Material
31 Equipo
311 Cromatoacutegrafo de liacutequidos de alta resolucioacuten equipado con
ndash un inyector con loop de 5 o 10 μl (a tiacutetulo indicativo)
ndash un detector espectrofotomeacutetrico que permita efectuar mediciones a 280 nm
ndash una columna de siacutelice dopada con octadecilo (por ejemplo Bondapak C18 mdash
Corasil Waters Ass)
ndash un registrador y en su caso un integrador
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
6
Flujo de la fase moacutevil 15 mlmin (a tiacutetulo indicativo)
312 Equipo de filtracioacuten por membrana (045 microm)
4 Procedimiento
41 Preparacioacuten de la muestra
Utilizar la solucioacuten obtenida diluyendo el mosto concentrado rectificado al 40
(mv) (introducir 200 g de mosto concentrado rectificado pesado exactamente en un
matraz aforado de 500 ml enrasar con agua y homogeneizar) y filtrarla por
membrana (045 microm)
42 Determinacioacuten cromatograacutefica
Inyectar en el cromatoacutegrafo 5 (o 10) microl de la muestra preparada del modo indicado en
el punto 41 y 5 (o 10) microl de solucioacuten de referencia de hidroximetilfurfural (punto
325) Registrar el cromatograma
El periacuteodo de retencioacuten del hidroximetilfurfural es de aproximadamente 6 oacute 7
minutos
El volumen inyectado y la secuencia se dan a tiacutetulo orientativo La determinacioacuten
cromatograacutefica puede realizarse tambieacuten con una curva de calibracioacuten
5 Expresioacuten de los resultados
El contenido en hidroximetilfurfural del mosto concentrado rectificado se expresa en
miligramos por kilogramo de azuacutecares totales
51 Modo de caacutelculo
Sea C mgl el contenido en hidroximetilfurfural de la solucioacuten de mosto concentrado
rectificado al 40 (mv)
El contenido en hidroximetilfurfural en miligramos por kilogramo de azuacutecares totales
viene expresado por
250 CP
P = contenido (mm) en azuacutecares totales del mosto concentrado
rectificado
6 Caracteriacutesticas del meacutetodo
Repetibilidad (r)
r = 05 mgkg azuacutecares totales
Reproducibilidad (R)
R = 30 mgkg azuacutecares totales
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
7
ANEXO E DETERMINACIOacuteN DEL GRADO ALCOHOacuteLICO VOLUMEacuteTRICO
ADQUIRIDO (GAV) DE LOS MOSTOS CONCENTRADOS (O DE LOS MOSTOS
CONCENTRADOS RECTIFICADOS MCR) Tipo IV
1 Introduccioacuten
Los mostos concentrados y los azuacutecares de uva (MCR) son productos espesos con un bajo
contenido de alcohol la determinacioacuten de su GAV adquirido requiere el uso de un meacutetodo
cuyos resultados (linealidad repetibilidad reproducibilidad especificidad liacutemites de
deteccioacuten y de cuantificacioacuten) permitan medir contenidos de alcohol inferiores al 1vol
2 Campo de aplicacioacuten
Este meacutetodo se aplica a los mostos concentrados y a las azuacutecares de uva
3 Principio
A Una masa conocida de mosto concentrado (MC) o de azuacutecar de uva se alcaliniza
mediante suspensioacuten de hidroacutexido de calcio y luego se destila El grado alcohoacutelico
volumeacutetrico del destilado se determina mediante densimetriacutea electroacutenica o por
densimetriacutea usando una balanza hidrostaacutetica
4 Reactivos
- Suspensioacuten de hidroacutexido de calcio 2M de calidad analiacutetica obtenido vertiendo con
precaucioacuten un litro de agua caliente (60 a 70 degC) en aproximadamente 120 g de cal viva
(CaO)
- Solucioacuten antiespumante obtenida por dilucioacuten de 2 ml de antiespumante de silicona
concentrada en 100 ml de agua
- Agua purificada para laboratorio de calidad EN ISO 3696
5 Material
- Material corriente de laboratorio matraces de 200 ml
- Balanza analiacutetica para pesar hasta 01 g aproximadamente
- Cualquier tipo de equipo de destilacioacuten o destilacioacuten al vapor puede usarse si cumple la
siguiente prueba
Destilar una mezcla de etanol y agua con un grado alcohoacutelico de 10 vol cinco veces
consecutivas
El destilado debe tener un grado alcohoacutelico de al menos 99 vol despueacutes de la quinta
destilacioacuten esto es la peacuterdida de alcohol durante cada destilacioacuten no deberiacutea ser superior a
002 vol
- Densiacutemetro electroacutenico con un resonador de flexioacuten o densiacutemetro con balanza hidrostaacutetica
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
8
6 Procedimiento
- Homogeneizar la muestra dando vueltas al matraz
- En un matraz aforado de 500 ml pesar aproximadamente 200 g de mosto concentrado o
rectificado (con una precisioacuten de hasta 01 g aproximadamente) Anotar el peso (PE) de esta
muestra Completar hasta la raya de graduacioacuten con agua desionizada Esta solucioacuten es de
40 pv en mosto
Obtencioacuten del destilado
- Traspasar 250 ml de la solucioacuten al 40 al matraz de destilar Antildeadir en el matraz
aproximadamente 10 ml de suspensioacuten de hidroacutexido de calcio aproximadamente 5 ml de
solucioacuten antiespumante y llegado el caso un regulador de ebullicioacuten (fragmentos de
porcelana por ejemplo)
- Llevar al punto de ebullicioacuten con suavidad
- Recoger el destilado en un matraz aforado de 200 100 ml (aproximadamente 190 90 ml)
- Dejar que el destilado llegue a la temperatura ambiente y completar hasta la raya de la
graduacioacuten con agua desionizada
Medicioacuten del GAV
Se lleva a cabo mediante densimetriacutea electroacutenica o balanza hidrostaacutetica
7 Caacutelculo
Grado alcohoacutelico volumeacutetrico alcanzado = GAV medido X 200 X MV
PE
GAV medido = contenido de alcohol dado por el densiacutemetro como vol
PE = muestra de mosto concentrado o azuacutecar de uva en gramos
MV= densidad del mosto concentrado o del mosto concentrado rectificado en gml
Los resultados se expresan con dos decimales y se redondean hasta aproximadamente el
005vol
8 Caracteriacutesticas del meacutetodo
81 Linealidad de la respuesta
La linealidad del densiacutemetro para los valores de bajo GAV es uno de los paraacutemetros
criacuteticos de este meacutetodo Se preparoacute una gama patroacuten de 10 soluciones hidroalcohoacutelicas de
GAV comprendido entre 0 y 5 vol Cada solucioacuten se analizoacute tres veces
La respuesta del densiacutemetro es perfectamente lineal en este campo tal como lo
muestra la recta de calibracioacuten de la figura 1
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
9
Figura 1 Linealidad de la determinacioacuten del GAV por densimetriacutea electroacutenica entre 0 y
5vol
82 Especificidad del meacutetodo
El segundo punto criacutetico de este meacutetodo es la destilacioacuten de los mostos viscosos con pequentildeas
cantidades de alcohol Para comprobar la especificidad se antildeadieron cantidades conocidas de
etanol (de 025 vol a 5vol) a MC y a azuacutecares de uva Las muestras con esta adicioacuten se
destilaron en condiciones previamente definidas Los destilados se analizaron a continuacioacuten
mediante densimetriacutea electroacutenica y balanza electroacutenica
Los resultados aparecen en la tabla 1 siendo satisfactoria la tasa de recuperacioacuten
comprendida entre 88 y 99 Tal como se ve en la recta de la figura 2 el meacutetodo es
especiacutefico (pendiente cercana al 1 ordenada en el origen cercana al 0)
Muestra Contenido
inicial
(vol)
Contenido
antildeadido (vol)
Contenido
encontrado
(vol)
Tasa de
recuperacioacuten
()
MC 1 000 025 022 88
MC 1 000 100 098 98
Azuacutecar de uva
(MCR) 1
000 100 094 94
Azuacutecar de uva
(MCR) 1
000 200 197 99
MC 2 000 050 044 88
Azuacutecar de uva
(MCR) 2
000 500 494 99
Tabla 1 Tasa de recuperacioacuten de la determinacioacuten del GAV de los MC y de las azuacutecares de
uva
respuesta respuesta
Lineal (respuesta)
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
10
especificidad para Densimetriacutea electroacutenica
y = 09968x - 0039
000
100
200
300
400
500
600
000 100 200 300 400 500 600
contenido agregado (vol)
co
nte
nid
o r
ec
up
era
do
contenido agregado
contenido recuperado (medido - inicial)
Lineal (contenido recuperado (medido - inicial))
Figura 2 Especificidad de la determinacioacuten del GAV de los MC y de las azuacutecares de uva
83 Repetibilidad
La repetibilidad del meacutetodo se determinoacute a partir de 20 muestras de MC o de azuacutecar de uva
con y sin adicioacuten de alcohol Se analizoacute tres veces cada muestra para estar en condiciones
ideacutenticas Los liacutemites de repetibilidad obtenidos fueron los siguientes
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
11
Repetibilidad para densimetria electronica valor calculado
Desviacioacuten tiacutepica 0009
Coeficiente de variacioacuten o desviacioacuten tiacutepica
relativa en 09
liacutemite r 0024 vol
liacutemite r en 3
Repetibilidad para Balanza hidrostaacutetica Valor calculado
Desviacioacuten tiacutepica 0013
Coeficiente de variacioacuten o desviacioacuten tiacutepica
relativa en 17
Liacutemite r 0038 vol
Liacutemite r en 53
84 Reproducibilidad
La reproducibilidad de los resultados se determinoacute analizando el mismo mosto en doble en
diferentes fechas durante un periodo dado Los resultados aparecen en la tabla 3
Reproducibilidad para densimetria electronica valor calculado
Desviacioacuten tiacutepica 0043
Coeficiente de variacioacuten o desviacioacuten tiacutepica
relativa en 3
liacutemite R 012vol
liacutemite R en 9
Reproducibilidad para Balanza hidrostaacutetica Valor calculado
Desviacioacuten estaacutendar 0026
Coeficiente de variacioacuten o desviacioacuten tiacutepica relativa en
34
Liacutemite R 0076vol
Liacutemite R en 106
Tabla 3- Reproducibilidad de la determinacioacuten del GAV de los MC y de las azuacutecares de uva
85 Liacutemites de deteccioacuten y de cuantificacioacuten
Los liacutemites de deteccioacuten (LD) y de cuantificacioacuten (LQ) estimados a partir del estudio de
linealidad son los siguientes
LD = 001 vol LQ = 005vol
El liacutemite de cuantificacioacuten se verificoacute analizando los mostos cuyo GAV teniacutea un nivel de
concentracioacuten de 005vol
Tabla 2 Repetibilidad de la determinacioacuten del GAV de los MC y de las azuacutecares de uva
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
12
86 Incertidumbre
La incertidumbre se evaluoacute a partir de la desviacioacuten tiacutepica de la reproducibilidad y fue de
010vol
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
13
ANEXO G SACAROSA
(CROMATOGRAFIacuteA LIacuteQUIDA DE ALTO RENDIMIENTO) Tipo IV
1 Fundamento de los meacutetodos
Meacutetodo de deteccioacuten y determinacioacuten por cromatografiacutea liacutequida de alta resolucioacuten La
sacarosa se separa mediante una columna de siacutelice con alquilamina y se detecta por
refractometriacutea Para calcular la cantidad se establece una comparacioacuten con un patroacuten externo
analizado en las mismas condiciones
Notas
La autenticidad de un mosto o de un vino puede controlarse mediante el meacutetodo de RMN del
deuterio descrito para la deteccioacuten del enriquecimiento de mostos de mostos concentrados
rectificados y de vinos
Las condiciones de cromatografiacutea son presentadas a tiacutetulo orientativo
2 Reactivos
21 Agua purificada para uso de laboratorio de calidad corriente EN ISO 3696
22 Acetonitrilo (CH3CN) de calidad HPLC ndash Nuacutemero CAS 75-05-8
23 Sacarosa ndash Nuacutemero CAS 57-50-1
24 Fase moacutevil acetonitrilo-agua previamente filtrados por membrana (045 μm) (8020 vv)
(La composicioacuten de la fase moacutevil se da a tiacutetulo indicativo)
Antes de su utilizacioacuten se deberaacute desgasificar
25 Solucioacuten de referencia solucioacuten acuosa de sacarosa de 12 gl Filtrada por membrana
(045 μm) (La concentracioacuten de la solucioacuten de referencia se da a tiacutetulo indicativo)
3 Material
31 Cromatoacutegrafo de fase liacutequida de alta resolucioacuten dotado de
1) Inyector con loop de 10 μl (a tiacutetulo indicativo)
2) Un detector un refractoacutemetro diferencial o refractoacutemetro interferoacutemetro
3) Columna Alkylammina (25 cm de longitud por 4 mm de diaacutemetro interno) (a tiacutetulo
indicativo)
4) Precolumna de la misma fase (a tiacutetulo indicativo)
5) Un dispositivo para mantener aislado o a la misma temperatura (30 degC) el conjunto
formado por la precolumna y la columna
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
14
6) Un registrador o en su caso un integrador
7) Flujo de la fase moacutevil 1 mlmin (a tiacutetulo indicativo)
32 Dispositivo de filtracioacuten por membrana (045 μm)
4 Procedimiento
41 Preparacioacuten de la muestra
Utilizar la solucioacuten obtenida diluyendo el mosto concentrado rectificado al 40 (mv) tal
como se indica en el Anexo H del meacutetodo laquoAcidez totalraquo seccioacuten 51 y filtrarla por
membrana (045 μm)
42 Determinacioacuten cromatograacutefica
Inyectar sucesivamente en el cromatoacutegrafo 10 μl de la solucioacuten de referencia y 10 μl de la
muestra preparada como se indica en el punto 41
Repetir las inyecciones en el mismo orden
Registrar el cromatograma
El tiempo de retencioacuten de la sacarosa es de unos 10 minutos
El volumen de la muestra y la secuencia se dan a tiacutetulo orientativo La determinacioacuten
cromatograacutefica puede realizarse tambieacuten con una curva de calibracioacuten
5 Caacutelculo
Utilizar para el caacutelculo el promedio de 2 resultados de la solucioacuten de referencia y de la
muestra
Sea C gl el contenido en sacarosa de la solucioacuten de mosto concentrado rectificado al 40
(mv)
Contenido en sacarosa en gramos por kilogramo de mosto concentrado rectificado 25 ∙ C
6 Expresioacuten de resultados
La concentracioacuten de sacarosa se expresa en gramos por kilogramo con una cifra decimal
7 Caracteriacutesticas del meacutetodo
Repetibilidad (r)
r = 11 gkg mosto
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
15
ANEXO H ACIDEZ TOTAL Tipo IV
1 Definicioacuten
La acidez total de un mosto concentrado rectificado es la suma de los aacutecidos valorables
cuando se lleva el pH a 7 antildeadiendo una solucioacuten alcalina valorada El dioacutexido de carbono no
se incluye en la acidez total
2 Fundamento del meacutetodo
Valoracioacuten potenciomeacutetrica o valoracioacuten en presencia de azul de bromotimol como indicador
del final de reaccioacuten mediante comparacioacuten con un patroacuten de coloracioacuten
3 Reactivos
31 Soluciones tampones
311 pH 70
Fosfato monopotaacutesico (KH2PO4) 1073 g
Solucioacuten 1 M de hidroacutexido soacutedico (NaOH) 500 ml
Agua csp 1 000 ml
312 pH 40
Solucioacuten 005 M de ftalato aacutecido de potasio Solucioacuten con 10211 gl de ftalato aacutecido de
potasio (C8H5KO4) a 20 degC (duracioacuten maacutexima de la solucioacuten 2 meses)
Nota Tambieacuten pueden utilizarse soluciones tampones de referencia comerciales para las que
exista correspondencia con unidades del SI
Por ejemplo pH 1679 plusmn 001 a 25degC
pH 4005 plusmn 001 a 25degC
pH 7000 plusmn 001 a 25degC
32 Solucioacuten 01 M de hidroacutexido soacutedico (NaOH)
33 Solucioacuten de azul de bromotimol de 4 gl
Azul de bromotimol (C27H28Br2O5S)hellip 4 g
Alcohol neutro 96 vol hellip 200 ml
Una vez solubilizado antildeadir
Agua sin CO2 helliphelliphellip 200 ml
Solucioacuten 1 M de hidroacutexido soacutedico
csp coloracioacuten verdeazulada (pH 7) helliphelliphelliphellip75 ml
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
16
Agua csp helliphelliphellip 1000 ml
4 Equipo
41 Potencioacutemetro con escala graduada en unidades de pH y electrodos A tiacutetulo indicativo el
electrodo de vidrio debe conservarse en agua destilada El electrodo de calomelanos de
cloruro potaacutesico saturado debe conservarse en una solucioacuten saturada de cloruro potaacutesico
Generalmente se emplea un electrodo combinado que se conserva en agua destilada
42 Vasos de precipitados de 100 ml de capacidad
5 Procedimiento
51 Preparacioacuten de la muestra
Poner 200 g de mosto concentrado rectificado exactamente pesado en un matraz aforado de
500 ml Enrasar con agua Homogeneizar
52 Valoracioacuten potenciomeacutetrica
521 Puesta a cero del aparato
Se efectuaraacute antes de cada medida siguiendo las instrucciones dadas para el aparato utilizado
522 Calibrado del pH metro
El pH metro se debe calibrar a 20ordmC usando soluciones tampoacuten de referencia acopladas con el
SI Los valores de pH seleccionados deben abarcar la gama de valores que pueden encontrarse
en los mostos Si el pH metro usado no es compatible con la calibracioacuten a valores
suficientemente bajos se deberiacutea realizar una verificacioacuten usando una solucioacuten tampoacuten de
referenencia acoplada con el SI y que tenga un valor de pH cercano a los valores hallados en
los mostos
523 Teacutecnica de medicioacuten
En un vaso de precipitados (44) introducir 50 ml de la muestra preparada como se indica en
51 Antildeadir 10 ml de agua destilada aproximadamente y verter con una bureta la solucioacuten 01
M de hidroacutexido soacutedico (32) hasta que el pH sea igual a 7 a 20 degC La adicioacuten de la solucioacuten
alcalina debe realizarse lentamente agitando constantemente la solucioacuten Se denominara n el
nuacutemero de mililitros de NaOH 01 M utilizados
53 Valoracioacuten con indicador (azul de bromotimol)
531 Ensayo previo obtencioacuten del patroacuten de coloracioacuten
En un vaso de precipitados (44) echar 25 ml de agua destilada y hervida 1 ml de solucioacuten de
azul de bromotimol (33) y 50 ml de muestra preparada como se indica en (51) Antildeadir la
solucioacuten 01 M de hidroacutexido de sodio (32) hasta obtener una coloracioacuten verdeazulada Antildeadir
5 ml de la solucioacuten tampoacuten pH 7 (311)
532 Determinacioacuten
En un vaso de precipitados (44) echar 30 ml de agua destilada y hervida 1 ml de solucioacuten de
azul de bromotimol (33) y 50 ml de muestra preparada como se indica en (51) Antildeadir la
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
17
solucioacuten 01 M de hidroacutexido soacutedico (32) hasta obtener una coloracioacuten ideacutentica a la obtenida
en el ensayo previo (531) Se denominaraacute n al nuacutemero de mililitros de solucioacuten de hidroacutexido
soacutedico 01 M utilizados
6 Expresioacuten de los resultados
61 Meacutetodo de caacutelculo
Acidez total expresada en miliequivalentes por kilogramo de mosto concentrado rectificado
A = 5 n
Acidez total expresada en miliequivalentes por kilogramo de azuacutecares totales A = (500 n)P
P = contenido en (mm) de azuacutecares totales
Se daraacute con 1 decimal
7 Caracteriacutesticas del meacutetodo
Repetibilidad (r)
r = 04 meq kg azuacutecares totales
Reproducibilidad (R)
R = 24 meq kg azuacutecares totales
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
18
ANEXO I pH Tipo IV
1 Fundamento
Medida de la diferencia de potencial entre dos electrodos sumergidos en el liacutequido que se
estudia Uno de los dos electrodos tiene un potencial que es una funcioacuten definida del pH del
liacutequido el otro tiene un potencial fijo y conocido y constituye el electrodo de referencia
2 Reactivos
21 Soluciones tampoacuten
211 Solucioacuten saturada de tartrato aacutecido de potasio al menos de 57 gl de tartrato aacutecido de
potasio (C4H5KO6) a 20oC Esta solucioacuten puede conservarse hasta 2 meses en presencia de 01
g de timol por cada 200 ml)
pHtemperatura
357 a 20oC
356 a 25oC
355 a 30oC
212 Solucioacuten 005 M de ftalato aacutecido de potasio Solucioacuten con 10211 gl de ftalato aacutecido de
potasio (C8H5KO4) a 20 degC (duracioacuten maacutexima de la solucioacuten 2 meses)
pHtemperatura
3999 a 15oC
4003 a 20oC
4008 a 25oC
4015 a 30oC
213 Solucioacuten que contenga
Fosfato monopotaacutesico KH2PO4 hellip 3402 g
Fosfato bipotaacutesico K2HPO4 hellip 4354 g
Agua csp hellip 1 000 ml
(Duracioacuten maacutexima de la solucioacuten 2 meses)
pHtemperatura
690 a 15oC
688 a 20oC
686 a 25oC
685 a 30oC
Nota Tambieacuten pueden utilizarse soluciones tampones de referencia comerciales para las que
exista correspondencia con unidades del SI
Por ejemplo pH 1679 plusmn 001 a 25degC
pH 4005 plusmn 001 a 25degC
pH 7000 plusmn 001 a 25degC
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
19
3 Material
31 pH metro graduado en unidades de pH que permita efectuar medidas con una
aproximacioacuten de plusmn001 como miacutenimo
32 Electrodos
321 Electrodo de vidrio
322 Electrodo de referencia de calomelanos de cloruro potaacutesico saturado
323 O electrodo combinado
4 Procedimiento
41 Preparacioacuten de la muestra para anaacutelisis
Diluirlo con agua a fin de obtener una concentracioacuten de 25 plusmn 05 (mm) en azuacutecares totales
(25oBrix) Si P es el contenido en (mm) en azuacutecares totales del mosto concentrado
rectificado pesar una masa igual a 2 500 P y completar con agua hasta 100 g La
conductividad del agua utilizada deberaacute ser inferior a 2 microsiemens por centiacutemetro
42 Puesta a cero del aparato
Se efectuaraacute antes de cada medida siguiendo las instrucciones dadas para el aparato utilizado
43 Calibrado del pH metro
El pH metro se debe calibrar a 20ordmC usando soluciones tampoacuten de referencia acopladas con el
SI Los valores de pH seleccionados deben abarcar la gama de valores que pueden encontrarse
en los mostos Si el pH metro usado no es compatible con la calibracioacuten a valores
suficientemente bajos se deberiacutea realizar una verificacioacuten usando una solucioacuten tampoacuten de
referenencia acoplada con el SI y que tenga un valor de pH cercano a los valores hallados en
los mostos
44 Medida
Introducir el electrodo en la muestra a analizar cuya temperatura deberaacute estar comprendida
entre 20 y 25oC y tan proacutexima como sea posible a 20
oC Leer directamente el valor del pH
Efectuacuteense al menos 2 determinaciones de cada muestra Tomar como resultado la media
aritmeacutetica de ambas determinaciones
5 Expresioacuten de los resultados
El pH de la solucioacuten al 25 (mm) (25oBrix) del mosto concentrado rectificado se expresaraacuten
con 2 decimales
6 Caracteriacutesticas del meacutetodo
Repetibilidad (r)
r = 007
Reproducibilidad (R)
R = 007
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
20
ANEXO J DIOacuteXIDO DE AZUFRE Tipo IV
1 Definiciones
Se denomina dioacutexido de azufre al dioacutexido de azufre presente en el mosto en las formas
siguientes H2SO
3 H SO3
- cuyo equilibrio es funcioacuten del pH y de la temperatura
H2SO
3 H
+ + HSO
3
macr
H2SO
3 representa el dioacutexido de azufre molecular
Se denomina dioacutexido de azufre total al conjunto de las distintas formas de dioacutexido de azufre
presentes en el mosto en estado libre o combinado con sus componentes
2 Materiales
Se extrae el dioacutexido de azufre total por arrastre en caliente (aproximadamente 100oC) del
mosto concentrado rectificado previamente diluido
21 Reactivos
211 Aacutecido fosfoacuterico al 85 H3PO4 (ρ20 = 171 gml)
212 Solucioacuten de peroacutexido de hidroacutegeno de 91 gl H2O2 (3 voluacutemenes)
213 Reactivo indicador
rojo de metilo hellip 100 mg
azul de metileno hellip 50 mg
Alcohol de 50 vol hellip100 ml
214 Solucioacuten de hidroacutexido de sodio (NaOH) 001 M
22 Material
221 El material utilizado debe ajustarse al esquema que figura a continuacioacuten
principalmente en lo que se refiere al refrigerante
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
21
Figura 1
Las dimensiones estaacuten indicadas en miliacutemetros Los diaacutemetros internos de los 4 tubos
conceacutentricos que constituyen el refrigerante son 45 34 27 y 10 mm
El tubo de conduccioacuten de los gases al borboteador B termina en una pequentildea esfera de 1 cm
de diaacutemetro que lleva en su mayor ciacuterculo horizontal 20 agujeros de 02 mm de diaacutemetro
Tambieacuten puede terminar en una placa de vidrio fritado que garantice la formacioacuten de gran
nuacutemero de pequentildeas burbujas realizando asiacute un buen contacto entre las fases gaseosa y
liacutequida
El flujo de gas que debe recorrer el aparato debe ser de 40 lh aproximadamente El frasco
situado a la derecha del aparato de destina a limitar de 20 a 30 cm de agua la depresioacuten
producida por la trompa de agua Para poder regular dicha depresioacuten de forma que el caudal
sea el correcto conviene colocar un medidor de flujo de tubo semicapilar entre el borboteador
y el frasco
222 Una microbureta
3 Procedimiento
31 En el caso del mosto concentrado rectificado utilizar la solucioacuten obtenida diluyendo la
muestra para analizar al 40 (mv) tal y como se indica en el capiacutetulo laquoAcidez totalraquo en el
apartado 51 En el matraz A de 250 ml del aparato de arrastre introducir 50 ml de esta
solucioacuten y 5 ml de aacutecido fosfoacuterico (2 11) Acoplar el matraz al aparato
32 Introducir en el borboteador B de 2 a 3 ml de solucioacuten de peroacutexido de hidroacutegeno (212)
neutralizarla con la solucioacuten 001 M de hidroacutexido soacutedico (214) llevar a ebullicioacuten el mosto
contenido en el matraz A con una pequentildea llama de 4 a 5 cm de altura que debe tocar
ligeramente el fondo del matraz No colocar bajo el matraz ninguna tela metaacutelica sino
depositarlo sobre un disco perforado con un agujero de 30 mm de diaacutemetro Se evita asiacute la
pirogenacioacuten de las materias extractivas de la muestra sobre las paredes del matraz
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
22
Mantener la ebullicioacuten durante el paso de la corriente de aire (o de nitroacutegeno) En 15 minutos
el dioacutexido de azufre total habraacute sido arrastrado y oxidado Valorar el aacutecido sulfuacuterico formado
con la solucioacuten 001 M de hidroacutexido soacutedico (214) Sea n el nuacutemero de mililitros utilizados
4 Caacutelculo
Dioacutexido de azufre en miligramos por kilo de azuacutecares totales (muestra 50 ml de muestra
preparada (31))
(1600 n)P
P = contenido en (mm) de azuacutecares totales
5 Expresioacuten de los resultados
El dioacutexido de azufre total se expresa en miligramos por kilogramo (mgkg) de azuacutecares
totales
6 Caracteriacutesticas del meacutetodo
Repetibilidad (r)
muestra de 50 ml lt 50 mgl r = 1x 250P mgkg de azuacutecares totales
Reproducibilidad (R)
muestra de 50 ml lt 50 mgl R = 9x 250P mgkg de azuacutecares totales
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
23
ANEXO K CARACTERIacuteSTICAS CROMAacuteTICAS Tipo IV
1 Fundamento
Medida de la absorbancia a 425 nm en cubetas de 1 cm de espesor del mosto concentrado
rectificado cuya concentracioacuten en azuacutecares se haya reducido al 25 (mm) (25o Brix)
2 Material
21 Espectrofotoacutemetro que permita efectuar medidas entre 300 y 700 nm
22 Cubetas de vidrio con un trayecto oacuteptico de 1 cm
23 Filtro con membrana y de una porosidad de 045 μm
3 Procedimiento
31 Preparacioacuten de la muestra
Utilizar una solucioacuten cuyo valor en azuacutecares sea del 25 (mm) (25o
Brix) y que se habraacute
preparado del modo indicado en el capiacutetulo laquopHraquo (41) Filtrarla en un filtro con membrana
de una porosidad de 045 μm
32 Determinacioacuten de la absorbancia
Ajustar a cero para la longitud de onda 425 nm en una cubeta de 1 cm de trayecto oacuteptico que
contenga agua destilada
Determinar la absorbancia A a esta longitud de onda de la solucioacuten al 25 de
azuacutecares (25oBrix) obtenida en el apartado 31 y colocada en una cubeta de 1 cm de trayecto
oacuteptico
4 Expresioacuten de los resultados
La absorbancia a 425 nm del mosto concentrado rectificado en solucioacuten al 25 (mm) de
azuacutecares (25o Brix) se expresaraacute con 2 decimales
Repetibilidad (r)
r = 001 U Abs agrave 25degBrix
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
3
Lavar dos veces la ceacutelula de medida del conductiacutemetro con la solucioacuten que vaya a
analizarse
Medir la conductividad expresada en microsiemens por centiacutemetro
5 Expresioacuten de los resultados
La conductividad se expresa en microsiemens por centiacutemetro (microScmminus1
) a 20 ordmC sin
decimales para la solucioacuten al 25 (mm) (25 ordmC Brix) de mosto concentrado
rectificado
51 Caacutelculo
En caso de que el aparato no cuente con un compensador de temperatura corregir la
conductividad que se haya medido mediante la tabla I Si la temperatura es inferior a
20 ordmC antildeadir la correccioacuten si la temperatura es superior a 20 ordmC restar la correccioacuten
6 Caracteriacutesticas del meacutetodo
Repetibilidad (r)
r = 3 microScm
Reproducibilidad (R)
R = 16 microScm
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
4
TABLA I
Correcciones de conductividad para temperaturas distintas de 20 ordmC en microsiemens cmminus1
Conductividad
Temperaturas
202
198
204
196
206
194
208
192
210
190
212
188
214
186
216
184
218
182
220(1)
180(2)
0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
50 0 0 1 1 1 1 1 2 2 2
100 0 1 1 2 2 3 3 3 4 4
150 1 1 2 3 3 4 5 5 6 7
200 1 2 3 3 4 5 6 7 8 9
250 1 2 3 4 6 7 8 9 10 11
300 1 3 4 5 7 8 9 11 12 13
350 1 3 5 6 8 9 11 12 14 15
400 2 3 5 7 9 11 12 14 16 18
450 2 3 6 8 10 12 14 16 18 20
500 2 4 7 9 11 13 15 18 20 22
550 2 5 7 10 12 14 17 19 22 24
600 3 5 8 11 13 16 18 21 24 26
(1) Restar la correccioacuten
(2) Sumar la correccioacuten
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
5
ANEXO C
HIDROXIMETILFURFURAL (HMF) por cromatografiacutea liquida de alto rendimiento
Tipo IV
1 Fundamento del meacutetodo
Cromatografiacutea liquida de alto rendimiento (CLAR)
Separacioacuten a traveacutes de una columna por cromatografiacutea fase-inversa y determinacioacuten en
280 nanoacutemetros
2 Reactivos
21 Agua purificada para uso de laboratorio y de calidad corriente EN ISO 3696
22 Metanol CH3OH destilado o de calidad HPLC ndash Nuacutemero CAS 67-59-1
23 Aacutecido aceacutetico CH3COOH (ρ20 = 105 gml) ndash Nuacutemero CAS 64-19-7
24 Fase moacutevil agua (21) metanol (22) - aacutecido aceacutetico (23) previamente filtrados por
membrana (045 microm) (40 9 1 vv)
Esta fase moacutevil debe prepararse diariamente y desgasificarse antes de su uso
25 Solucioacuten de referencia de hidroximetilfurfural de 25 mgl (mv)
Introducir en un matraz aforado de 100 ml 25 mg exactamente pesados de
hidroximetilfurfural C6H3O6 y completar el volumen con metanol (22) Diluir esta
solucioacuten al 110 con metanol (punto 22) y filtrarla por una membrana (045 microm)
Esta solucioacuten se conserva de 2 a 3 meses si se introduce en un frasco de vidrio
topacio hermeacuteticamente cerrado y se mantiene refrigerada
(la concentracioacuten de la solucioacuten de referencia se da a tiacutetulo orientativo)
3 Material
31 Equipo
311 Cromatoacutegrafo de liacutequidos de alta resolucioacuten equipado con
ndash un inyector con loop de 5 o 10 μl (a tiacutetulo indicativo)
ndash un detector espectrofotomeacutetrico que permita efectuar mediciones a 280 nm
ndash una columna de siacutelice dopada con octadecilo (por ejemplo Bondapak C18 mdash
Corasil Waters Ass)
ndash un registrador y en su caso un integrador
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
6
Flujo de la fase moacutevil 15 mlmin (a tiacutetulo indicativo)
312 Equipo de filtracioacuten por membrana (045 microm)
4 Procedimiento
41 Preparacioacuten de la muestra
Utilizar la solucioacuten obtenida diluyendo el mosto concentrado rectificado al 40
(mv) (introducir 200 g de mosto concentrado rectificado pesado exactamente en un
matraz aforado de 500 ml enrasar con agua y homogeneizar) y filtrarla por
membrana (045 microm)
42 Determinacioacuten cromatograacutefica
Inyectar en el cromatoacutegrafo 5 (o 10) microl de la muestra preparada del modo indicado en
el punto 41 y 5 (o 10) microl de solucioacuten de referencia de hidroximetilfurfural (punto
325) Registrar el cromatograma
El periacuteodo de retencioacuten del hidroximetilfurfural es de aproximadamente 6 oacute 7
minutos
El volumen inyectado y la secuencia se dan a tiacutetulo orientativo La determinacioacuten
cromatograacutefica puede realizarse tambieacuten con una curva de calibracioacuten
5 Expresioacuten de los resultados
El contenido en hidroximetilfurfural del mosto concentrado rectificado se expresa en
miligramos por kilogramo de azuacutecares totales
51 Modo de caacutelculo
Sea C mgl el contenido en hidroximetilfurfural de la solucioacuten de mosto concentrado
rectificado al 40 (mv)
El contenido en hidroximetilfurfural en miligramos por kilogramo de azuacutecares totales
viene expresado por
250 CP
P = contenido (mm) en azuacutecares totales del mosto concentrado
rectificado
6 Caracteriacutesticas del meacutetodo
Repetibilidad (r)
r = 05 mgkg azuacutecares totales
Reproducibilidad (R)
R = 30 mgkg azuacutecares totales
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
7
ANEXO E DETERMINACIOacuteN DEL GRADO ALCOHOacuteLICO VOLUMEacuteTRICO
ADQUIRIDO (GAV) DE LOS MOSTOS CONCENTRADOS (O DE LOS MOSTOS
CONCENTRADOS RECTIFICADOS MCR) Tipo IV
1 Introduccioacuten
Los mostos concentrados y los azuacutecares de uva (MCR) son productos espesos con un bajo
contenido de alcohol la determinacioacuten de su GAV adquirido requiere el uso de un meacutetodo
cuyos resultados (linealidad repetibilidad reproducibilidad especificidad liacutemites de
deteccioacuten y de cuantificacioacuten) permitan medir contenidos de alcohol inferiores al 1vol
2 Campo de aplicacioacuten
Este meacutetodo se aplica a los mostos concentrados y a las azuacutecares de uva
3 Principio
A Una masa conocida de mosto concentrado (MC) o de azuacutecar de uva se alcaliniza
mediante suspensioacuten de hidroacutexido de calcio y luego se destila El grado alcohoacutelico
volumeacutetrico del destilado se determina mediante densimetriacutea electroacutenica o por
densimetriacutea usando una balanza hidrostaacutetica
4 Reactivos
- Suspensioacuten de hidroacutexido de calcio 2M de calidad analiacutetica obtenido vertiendo con
precaucioacuten un litro de agua caliente (60 a 70 degC) en aproximadamente 120 g de cal viva
(CaO)
- Solucioacuten antiespumante obtenida por dilucioacuten de 2 ml de antiespumante de silicona
concentrada en 100 ml de agua
- Agua purificada para laboratorio de calidad EN ISO 3696
5 Material
- Material corriente de laboratorio matraces de 200 ml
- Balanza analiacutetica para pesar hasta 01 g aproximadamente
- Cualquier tipo de equipo de destilacioacuten o destilacioacuten al vapor puede usarse si cumple la
siguiente prueba
Destilar una mezcla de etanol y agua con un grado alcohoacutelico de 10 vol cinco veces
consecutivas
El destilado debe tener un grado alcohoacutelico de al menos 99 vol despueacutes de la quinta
destilacioacuten esto es la peacuterdida de alcohol durante cada destilacioacuten no deberiacutea ser superior a
002 vol
- Densiacutemetro electroacutenico con un resonador de flexioacuten o densiacutemetro con balanza hidrostaacutetica
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
8
6 Procedimiento
- Homogeneizar la muestra dando vueltas al matraz
- En un matraz aforado de 500 ml pesar aproximadamente 200 g de mosto concentrado o
rectificado (con una precisioacuten de hasta 01 g aproximadamente) Anotar el peso (PE) de esta
muestra Completar hasta la raya de graduacioacuten con agua desionizada Esta solucioacuten es de
40 pv en mosto
Obtencioacuten del destilado
- Traspasar 250 ml de la solucioacuten al 40 al matraz de destilar Antildeadir en el matraz
aproximadamente 10 ml de suspensioacuten de hidroacutexido de calcio aproximadamente 5 ml de
solucioacuten antiespumante y llegado el caso un regulador de ebullicioacuten (fragmentos de
porcelana por ejemplo)
- Llevar al punto de ebullicioacuten con suavidad
- Recoger el destilado en un matraz aforado de 200 100 ml (aproximadamente 190 90 ml)
- Dejar que el destilado llegue a la temperatura ambiente y completar hasta la raya de la
graduacioacuten con agua desionizada
Medicioacuten del GAV
Se lleva a cabo mediante densimetriacutea electroacutenica o balanza hidrostaacutetica
7 Caacutelculo
Grado alcohoacutelico volumeacutetrico alcanzado = GAV medido X 200 X MV
PE
GAV medido = contenido de alcohol dado por el densiacutemetro como vol
PE = muestra de mosto concentrado o azuacutecar de uva en gramos
MV= densidad del mosto concentrado o del mosto concentrado rectificado en gml
Los resultados se expresan con dos decimales y se redondean hasta aproximadamente el
005vol
8 Caracteriacutesticas del meacutetodo
81 Linealidad de la respuesta
La linealidad del densiacutemetro para los valores de bajo GAV es uno de los paraacutemetros
criacuteticos de este meacutetodo Se preparoacute una gama patroacuten de 10 soluciones hidroalcohoacutelicas de
GAV comprendido entre 0 y 5 vol Cada solucioacuten se analizoacute tres veces
La respuesta del densiacutemetro es perfectamente lineal en este campo tal como lo
muestra la recta de calibracioacuten de la figura 1
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
9
Figura 1 Linealidad de la determinacioacuten del GAV por densimetriacutea electroacutenica entre 0 y
5vol
82 Especificidad del meacutetodo
El segundo punto criacutetico de este meacutetodo es la destilacioacuten de los mostos viscosos con pequentildeas
cantidades de alcohol Para comprobar la especificidad se antildeadieron cantidades conocidas de
etanol (de 025 vol a 5vol) a MC y a azuacutecares de uva Las muestras con esta adicioacuten se
destilaron en condiciones previamente definidas Los destilados se analizaron a continuacioacuten
mediante densimetriacutea electroacutenica y balanza electroacutenica
Los resultados aparecen en la tabla 1 siendo satisfactoria la tasa de recuperacioacuten
comprendida entre 88 y 99 Tal como se ve en la recta de la figura 2 el meacutetodo es
especiacutefico (pendiente cercana al 1 ordenada en el origen cercana al 0)
Muestra Contenido
inicial
(vol)
Contenido
antildeadido (vol)
Contenido
encontrado
(vol)
Tasa de
recuperacioacuten
()
MC 1 000 025 022 88
MC 1 000 100 098 98
Azuacutecar de uva
(MCR) 1
000 100 094 94
Azuacutecar de uva
(MCR) 1
000 200 197 99
MC 2 000 050 044 88
Azuacutecar de uva
(MCR) 2
000 500 494 99
Tabla 1 Tasa de recuperacioacuten de la determinacioacuten del GAV de los MC y de las azuacutecares de
uva
respuesta respuesta
Lineal (respuesta)
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
10
especificidad para Densimetriacutea electroacutenica
y = 09968x - 0039
000
100
200
300
400
500
600
000 100 200 300 400 500 600
contenido agregado (vol)
co
nte
nid
o r
ec
up
era
do
contenido agregado
contenido recuperado (medido - inicial)
Lineal (contenido recuperado (medido - inicial))
Figura 2 Especificidad de la determinacioacuten del GAV de los MC y de las azuacutecares de uva
83 Repetibilidad
La repetibilidad del meacutetodo se determinoacute a partir de 20 muestras de MC o de azuacutecar de uva
con y sin adicioacuten de alcohol Se analizoacute tres veces cada muestra para estar en condiciones
ideacutenticas Los liacutemites de repetibilidad obtenidos fueron los siguientes
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
11
Repetibilidad para densimetria electronica valor calculado
Desviacioacuten tiacutepica 0009
Coeficiente de variacioacuten o desviacioacuten tiacutepica
relativa en 09
liacutemite r 0024 vol
liacutemite r en 3
Repetibilidad para Balanza hidrostaacutetica Valor calculado
Desviacioacuten tiacutepica 0013
Coeficiente de variacioacuten o desviacioacuten tiacutepica
relativa en 17
Liacutemite r 0038 vol
Liacutemite r en 53
84 Reproducibilidad
La reproducibilidad de los resultados se determinoacute analizando el mismo mosto en doble en
diferentes fechas durante un periodo dado Los resultados aparecen en la tabla 3
Reproducibilidad para densimetria electronica valor calculado
Desviacioacuten tiacutepica 0043
Coeficiente de variacioacuten o desviacioacuten tiacutepica
relativa en 3
liacutemite R 012vol
liacutemite R en 9
Reproducibilidad para Balanza hidrostaacutetica Valor calculado
Desviacioacuten estaacutendar 0026
Coeficiente de variacioacuten o desviacioacuten tiacutepica relativa en
34
Liacutemite R 0076vol
Liacutemite R en 106
Tabla 3- Reproducibilidad de la determinacioacuten del GAV de los MC y de las azuacutecares de uva
85 Liacutemites de deteccioacuten y de cuantificacioacuten
Los liacutemites de deteccioacuten (LD) y de cuantificacioacuten (LQ) estimados a partir del estudio de
linealidad son los siguientes
LD = 001 vol LQ = 005vol
El liacutemite de cuantificacioacuten se verificoacute analizando los mostos cuyo GAV teniacutea un nivel de
concentracioacuten de 005vol
Tabla 2 Repetibilidad de la determinacioacuten del GAV de los MC y de las azuacutecares de uva
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
12
86 Incertidumbre
La incertidumbre se evaluoacute a partir de la desviacioacuten tiacutepica de la reproducibilidad y fue de
010vol
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
13
ANEXO G SACAROSA
(CROMATOGRAFIacuteA LIacuteQUIDA DE ALTO RENDIMIENTO) Tipo IV
1 Fundamento de los meacutetodos
Meacutetodo de deteccioacuten y determinacioacuten por cromatografiacutea liacutequida de alta resolucioacuten La
sacarosa se separa mediante una columna de siacutelice con alquilamina y se detecta por
refractometriacutea Para calcular la cantidad se establece una comparacioacuten con un patroacuten externo
analizado en las mismas condiciones
Notas
La autenticidad de un mosto o de un vino puede controlarse mediante el meacutetodo de RMN del
deuterio descrito para la deteccioacuten del enriquecimiento de mostos de mostos concentrados
rectificados y de vinos
Las condiciones de cromatografiacutea son presentadas a tiacutetulo orientativo
2 Reactivos
21 Agua purificada para uso de laboratorio de calidad corriente EN ISO 3696
22 Acetonitrilo (CH3CN) de calidad HPLC ndash Nuacutemero CAS 75-05-8
23 Sacarosa ndash Nuacutemero CAS 57-50-1
24 Fase moacutevil acetonitrilo-agua previamente filtrados por membrana (045 μm) (8020 vv)
(La composicioacuten de la fase moacutevil se da a tiacutetulo indicativo)
Antes de su utilizacioacuten se deberaacute desgasificar
25 Solucioacuten de referencia solucioacuten acuosa de sacarosa de 12 gl Filtrada por membrana
(045 μm) (La concentracioacuten de la solucioacuten de referencia se da a tiacutetulo indicativo)
3 Material
31 Cromatoacutegrafo de fase liacutequida de alta resolucioacuten dotado de
1) Inyector con loop de 10 μl (a tiacutetulo indicativo)
2) Un detector un refractoacutemetro diferencial o refractoacutemetro interferoacutemetro
3) Columna Alkylammina (25 cm de longitud por 4 mm de diaacutemetro interno) (a tiacutetulo
indicativo)
4) Precolumna de la misma fase (a tiacutetulo indicativo)
5) Un dispositivo para mantener aislado o a la misma temperatura (30 degC) el conjunto
formado por la precolumna y la columna
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
14
6) Un registrador o en su caso un integrador
7) Flujo de la fase moacutevil 1 mlmin (a tiacutetulo indicativo)
32 Dispositivo de filtracioacuten por membrana (045 μm)
4 Procedimiento
41 Preparacioacuten de la muestra
Utilizar la solucioacuten obtenida diluyendo el mosto concentrado rectificado al 40 (mv) tal
como se indica en el Anexo H del meacutetodo laquoAcidez totalraquo seccioacuten 51 y filtrarla por
membrana (045 μm)
42 Determinacioacuten cromatograacutefica
Inyectar sucesivamente en el cromatoacutegrafo 10 μl de la solucioacuten de referencia y 10 μl de la
muestra preparada como se indica en el punto 41
Repetir las inyecciones en el mismo orden
Registrar el cromatograma
El tiempo de retencioacuten de la sacarosa es de unos 10 minutos
El volumen de la muestra y la secuencia se dan a tiacutetulo orientativo La determinacioacuten
cromatograacutefica puede realizarse tambieacuten con una curva de calibracioacuten
5 Caacutelculo
Utilizar para el caacutelculo el promedio de 2 resultados de la solucioacuten de referencia y de la
muestra
Sea C gl el contenido en sacarosa de la solucioacuten de mosto concentrado rectificado al 40
(mv)
Contenido en sacarosa en gramos por kilogramo de mosto concentrado rectificado 25 ∙ C
6 Expresioacuten de resultados
La concentracioacuten de sacarosa se expresa en gramos por kilogramo con una cifra decimal
7 Caracteriacutesticas del meacutetodo
Repetibilidad (r)
r = 11 gkg mosto
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
15
ANEXO H ACIDEZ TOTAL Tipo IV
1 Definicioacuten
La acidez total de un mosto concentrado rectificado es la suma de los aacutecidos valorables
cuando se lleva el pH a 7 antildeadiendo una solucioacuten alcalina valorada El dioacutexido de carbono no
se incluye en la acidez total
2 Fundamento del meacutetodo
Valoracioacuten potenciomeacutetrica o valoracioacuten en presencia de azul de bromotimol como indicador
del final de reaccioacuten mediante comparacioacuten con un patroacuten de coloracioacuten
3 Reactivos
31 Soluciones tampones
311 pH 70
Fosfato monopotaacutesico (KH2PO4) 1073 g
Solucioacuten 1 M de hidroacutexido soacutedico (NaOH) 500 ml
Agua csp 1 000 ml
312 pH 40
Solucioacuten 005 M de ftalato aacutecido de potasio Solucioacuten con 10211 gl de ftalato aacutecido de
potasio (C8H5KO4) a 20 degC (duracioacuten maacutexima de la solucioacuten 2 meses)
Nota Tambieacuten pueden utilizarse soluciones tampones de referencia comerciales para las que
exista correspondencia con unidades del SI
Por ejemplo pH 1679 plusmn 001 a 25degC
pH 4005 plusmn 001 a 25degC
pH 7000 plusmn 001 a 25degC
32 Solucioacuten 01 M de hidroacutexido soacutedico (NaOH)
33 Solucioacuten de azul de bromotimol de 4 gl
Azul de bromotimol (C27H28Br2O5S)hellip 4 g
Alcohol neutro 96 vol hellip 200 ml
Una vez solubilizado antildeadir
Agua sin CO2 helliphelliphellip 200 ml
Solucioacuten 1 M de hidroacutexido soacutedico
csp coloracioacuten verdeazulada (pH 7) helliphelliphelliphellip75 ml
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
16
Agua csp helliphelliphellip 1000 ml
4 Equipo
41 Potencioacutemetro con escala graduada en unidades de pH y electrodos A tiacutetulo indicativo el
electrodo de vidrio debe conservarse en agua destilada El electrodo de calomelanos de
cloruro potaacutesico saturado debe conservarse en una solucioacuten saturada de cloruro potaacutesico
Generalmente se emplea un electrodo combinado que se conserva en agua destilada
42 Vasos de precipitados de 100 ml de capacidad
5 Procedimiento
51 Preparacioacuten de la muestra
Poner 200 g de mosto concentrado rectificado exactamente pesado en un matraz aforado de
500 ml Enrasar con agua Homogeneizar
52 Valoracioacuten potenciomeacutetrica
521 Puesta a cero del aparato
Se efectuaraacute antes de cada medida siguiendo las instrucciones dadas para el aparato utilizado
522 Calibrado del pH metro
El pH metro se debe calibrar a 20ordmC usando soluciones tampoacuten de referencia acopladas con el
SI Los valores de pH seleccionados deben abarcar la gama de valores que pueden encontrarse
en los mostos Si el pH metro usado no es compatible con la calibracioacuten a valores
suficientemente bajos se deberiacutea realizar una verificacioacuten usando una solucioacuten tampoacuten de
referenencia acoplada con el SI y que tenga un valor de pH cercano a los valores hallados en
los mostos
523 Teacutecnica de medicioacuten
En un vaso de precipitados (44) introducir 50 ml de la muestra preparada como se indica en
51 Antildeadir 10 ml de agua destilada aproximadamente y verter con una bureta la solucioacuten 01
M de hidroacutexido soacutedico (32) hasta que el pH sea igual a 7 a 20 degC La adicioacuten de la solucioacuten
alcalina debe realizarse lentamente agitando constantemente la solucioacuten Se denominara n el
nuacutemero de mililitros de NaOH 01 M utilizados
53 Valoracioacuten con indicador (azul de bromotimol)
531 Ensayo previo obtencioacuten del patroacuten de coloracioacuten
En un vaso de precipitados (44) echar 25 ml de agua destilada y hervida 1 ml de solucioacuten de
azul de bromotimol (33) y 50 ml de muestra preparada como se indica en (51) Antildeadir la
solucioacuten 01 M de hidroacutexido de sodio (32) hasta obtener una coloracioacuten verdeazulada Antildeadir
5 ml de la solucioacuten tampoacuten pH 7 (311)
532 Determinacioacuten
En un vaso de precipitados (44) echar 30 ml de agua destilada y hervida 1 ml de solucioacuten de
azul de bromotimol (33) y 50 ml de muestra preparada como se indica en (51) Antildeadir la
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
17
solucioacuten 01 M de hidroacutexido soacutedico (32) hasta obtener una coloracioacuten ideacutentica a la obtenida
en el ensayo previo (531) Se denominaraacute n al nuacutemero de mililitros de solucioacuten de hidroacutexido
soacutedico 01 M utilizados
6 Expresioacuten de los resultados
61 Meacutetodo de caacutelculo
Acidez total expresada en miliequivalentes por kilogramo de mosto concentrado rectificado
A = 5 n
Acidez total expresada en miliequivalentes por kilogramo de azuacutecares totales A = (500 n)P
P = contenido en (mm) de azuacutecares totales
Se daraacute con 1 decimal
7 Caracteriacutesticas del meacutetodo
Repetibilidad (r)
r = 04 meq kg azuacutecares totales
Reproducibilidad (R)
R = 24 meq kg azuacutecares totales
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
18
ANEXO I pH Tipo IV
1 Fundamento
Medida de la diferencia de potencial entre dos electrodos sumergidos en el liacutequido que se
estudia Uno de los dos electrodos tiene un potencial que es una funcioacuten definida del pH del
liacutequido el otro tiene un potencial fijo y conocido y constituye el electrodo de referencia
2 Reactivos
21 Soluciones tampoacuten
211 Solucioacuten saturada de tartrato aacutecido de potasio al menos de 57 gl de tartrato aacutecido de
potasio (C4H5KO6) a 20oC Esta solucioacuten puede conservarse hasta 2 meses en presencia de 01
g de timol por cada 200 ml)
pHtemperatura
357 a 20oC
356 a 25oC
355 a 30oC
212 Solucioacuten 005 M de ftalato aacutecido de potasio Solucioacuten con 10211 gl de ftalato aacutecido de
potasio (C8H5KO4) a 20 degC (duracioacuten maacutexima de la solucioacuten 2 meses)
pHtemperatura
3999 a 15oC
4003 a 20oC
4008 a 25oC
4015 a 30oC
213 Solucioacuten que contenga
Fosfato monopotaacutesico KH2PO4 hellip 3402 g
Fosfato bipotaacutesico K2HPO4 hellip 4354 g
Agua csp hellip 1 000 ml
(Duracioacuten maacutexima de la solucioacuten 2 meses)
pHtemperatura
690 a 15oC
688 a 20oC
686 a 25oC
685 a 30oC
Nota Tambieacuten pueden utilizarse soluciones tampones de referencia comerciales para las que
exista correspondencia con unidades del SI
Por ejemplo pH 1679 plusmn 001 a 25degC
pH 4005 plusmn 001 a 25degC
pH 7000 plusmn 001 a 25degC
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
19
3 Material
31 pH metro graduado en unidades de pH que permita efectuar medidas con una
aproximacioacuten de plusmn001 como miacutenimo
32 Electrodos
321 Electrodo de vidrio
322 Electrodo de referencia de calomelanos de cloruro potaacutesico saturado
323 O electrodo combinado
4 Procedimiento
41 Preparacioacuten de la muestra para anaacutelisis
Diluirlo con agua a fin de obtener una concentracioacuten de 25 plusmn 05 (mm) en azuacutecares totales
(25oBrix) Si P es el contenido en (mm) en azuacutecares totales del mosto concentrado
rectificado pesar una masa igual a 2 500 P y completar con agua hasta 100 g La
conductividad del agua utilizada deberaacute ser inferior a 2 microsiemens por centiacutemetro
42 Puesta a cero del aparato
Se efectuaraacute antes de cada medida siguiendo las instrucciones dadas para el aparato utilizado
43 Calibrado del pH metro
El pH metro se debe calibrar a 20ordmC usando soluciones tampoacuten de referencia acopladas con el
SI Los valores de pH seleccionados deben abarcar la gama de valores que pueden encontrarse
en los mostos Si el pH metro usado no es compatible con la calibracioacuten a valores
suficientemente bajos se deberiacutea realizar una verificacioacuten usando una solucioacuten tampoacuten de
referenencia acoplada con el SI y que tenga un valor de pH cercano a los valores hallados en
los mostos
44 Medida
Introducir el electrodo en la muestra a analizar cuya temperatura deberaacute estar comprendida
entre 20 y 25oC y tan proacutexima como sea posible a 20
oC Leer directamente el valor del pH
Efectuacuteense al menos 2 determinaciones de cada muestra Tomar como resultado la media
aritmeacutetica de ambas determinaciones
5 Expresioacuten de los resultados
El pH de la solucioacuten al 25 (mm) (25oBrix) del mosto concentrado rectificado se expresaraacuten
con 2 decimales
6 Caracteriacutesticas del meacutetodo
Repetibilidad (r)
r = 007
Reproducibilidad (R)
R = 007
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
20
ANEXO J DIOacuteXIDO DE AZUFRE Tipo IV
1 Definiciones
Se denomina dioacutexido de azufre al dioacutexido de azufre presente en el mosto en las formas
siguientes H2SO
3 H SO3
- cuyo equilibrio es funcioacuten del pH y de la temperatura
H2SO
3 H
+ + HSO
3
macr
H2SO
3 representa el dioacutexido de azufre molecular
Se denomina dioacutexido de azufre total al conjunto de las distintas formas de dioacutexido de azufre
presentes en el mosto en estado libre o combinado con sus componentes
2 Materiales
Se extrae el dioacutexido de azufre total por arrastre en caliente (aproximadamente 100oC) del
mosto concentrado rectificado previamente diluido
21 Reactivos
211 Aacutecido fosfoacuterico al 85 H3PO4 (ρ20 = 171 gml)
212 Solucioacuten de peroacutexido de hidroacutegeno de 91 gl H2O2 (3 voluacutemenes)
213 Reactivo indicador
rojo de metilo hellip 100 mg
azul de metileno hellip 50 mg
Alcohol de 50 vol hellip100 ml
214 Solucioacuten de hidroacutexido de sodio (NaOH) 001 M
22 Material
221 El material utilizado debe ajustarse al esquema que figura a continuacioacuten
principalmente en lo que se refiere al refrigerante
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
21
Figura 1
Las dimensiones estaacuten indicadas en miliacutemetros Los diaacutemetros internos de los 4 tubos
conceacutentricos que constituyen el refrigerante son 45 34 27 y 10 mm
El tubo de conduccioacuten de los gases al borboteador B termina en una pequentildea esfera de 1 cm
de diaacutemetro que lleva en su mayor ciacuterculo horizontal 20 agujeros de 02 mm de diaacutemetro
Tambieacuten puede terminar en una placa de vidrio fritado que garantice la formacioacuten de gran
nuacutemero de pequentildeas burbujas realizando asiacute un buen contacto entre las fases gaseosa y
liacutequida
El flujo de gas que debe recorrer el aparato debe ser de 40 lh aproximadamente El frasco
situado a la derecha del aparato de destina a limitar de 20 a 30 cm de agua la depresioacuten
producida por la trompa de agua Para poder regular dicha depresioacuten de forma que el caudal
sea el correcto conviene colocar un medidor de flujo de tubo semicapilar entre el borboteador
y el frasco
222 Una microbureta
3 Procedimiento
31 En el caso del mosto concentrado rectificado utilizar la solucioacuten obtenida diluyendo la
muestra para analizar al 40 (mv) tal y como se indica en el capiacutetulo laquoAcidez totalraquo en el
apartado 51 En el matraz A de 250 ml del aparato de arrastre introducir 50 ml de esta
solucioacuten y 5 ml de aacutecido fosfoacuterico (2 11) Acoplar el matraz al aparato
32 Introducir en el borboteador B de 2 a 3 ml de solucioacuten de peroacutexido de hidroacutegeno (212)
neutralizarla con la solucioacuten 001 M de hidroacutexido soacutedico (214) llevar a ebullicioacuten el mosto
contenido en el matraz A con una pequentildea llama de 4 a 5 cm de altura que debe tocar
ligeramente el fondo del matraz No colocar bajo el matraz ninguna tela metaacutelica sino
depositarlo sobre un disco perforado con un agujero de 30 mm de diaacutemetro Se evita asiacute la
pirogenacioacuten de las materias extractivas de la muestra sobre las paredes del matraz
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
22
Mantener la ebullicioacuten durante el paso de la corriente de aire (o de nitroacutegeno) En 15 minutos
el dioacutexido de azufre total habraacute sido arrastrado y oxidado Valorar el aacutecido sulfuacuterico formado
con la solucioacuten 001 M de hidroacutexido soacutedico (214) Sea n el nuacutemero de mililitros utilizados
4 Caacutelculo
Dioacutexido de azufre en miligramos por kilo de azuacutecares totales (muestra 50 ml de muestra
preparada (31))
(1600 n)P
P = contenido en (mm) de azuacutecares totales
5 Expresioacuten de los resultados
El dioacutexido de azufre total se expresa en miligramos por kilogramo (mgkg) de azuacutecares
totales
6 Caracteriacutesticas del meacutetodo
Repetibilidad (r)
muestra de 50 ml lt 50 mgl r = 1x 250P mgkg de azuacutecares totales
Reproducibilidad (R)
muestra de 50 ml lt 50 mgl R = 9x 250P mgkg de azuacutecares totales
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
23
ANEXO K CARACTERIacuteSTICAS CROMAacuteTICAS Tipo IV
1 Fundamento
Medida de la absorbancia a 425 nm en cubetas de 1 cm de espesor del mosto concentrado
rectificado cuya concentracioacuten en azuacutecares se haya reducido al 25 (mm) (25o Brix)
2 Material
21 Espectrofotoacutemetro que permita efectuar medidas entre 300 y 700 nm
22 Cubetas de vidrio con un trayecto oacuteptico de 1 cm
23 Filtro con membrana y de una porosidad de 045 μm
3 Procedimiento
31 Preparacioacuten de la muestra
Utilizar una solucioacuten cuyo valor en azuacutecares sea del 25 (mm) (25o
Brix) y que se habraacute
preparado del modo indicado en el capiacutetulo laquopHraquo (41) Filtrarla en un filtro con membrana
de una porosidad de 045 μm
32 Determinacioacuten de la absorbancia
Ajustar a cero para la longitud de onda 425 nm en una cubeta de 1 cm de trayecto oacuteptico que
contenga agua destilada
Determinar la absorbancia A a esta longitud de onda de la solucioacuten al 25 de
azuacutecares (25oBrix) obtenida en el apartado 31 y colocada en una cubeta de 1 cm de trayecto
oacuteptico
4 Expresioacuten de los resultados
La absorbancia a 425 nm del mosto concentrado rectificado en solucioacuten al 25 (mm) de
azuacutecares (25o Brix) se expresaraacute con 2 decimales
Repetibilidad (r)
r = 001 U Abs agrave 25degBrix
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
4
TABLA I
Correcciones de conductividad para temperaturas distintas de 20 ordmC en microsiemens cmminus1
Conductividad
Temperaturas
202
198
204
196
206
194
208
192
210
190
212
188
214
186
216
184
218
182
220(1)
180(2)
0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
50 0 0 1 1 1 1 1 2 2 2
100 0 1 1 2 2 3 3 3 4 4
150 1 1 2 3 3 4 5 5 6 7
200 1 2 3 3 4 5 6 7 8 9
250 1 2 3 4 6 7 8 9 10 11
300 1 3 4 5 7 8 9 11 12 13
350 1 3 5 6 8 9 11 12 14 15
400 2 3 5 7 9 11 12 14 16 18
450 2 3 6 8 10 12 14 16 18 20
500 2 4 7 9 11 13 15 18 20 22
550 2 5 7 10 12 14 17 19 22 24
600 3 5 8 11 13 16 18 21 24 26
(1) Restar la correccioacuten
(2) Sumar la correccioacuten
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
5
ANEXO C
HIDROXIMETILFURFURAL (HMF) por cromatografiacutea liquida de alto rendimiento
Tipo IV
1 Fundamento del meacutetodo
Cromatografiacutea liquida de alto rendimiento (CLAR)
Separacioacuten a traveacutes de una columna por cromatografiacutea fase-inversa y determinacioacuten en
280 nanoacutemetros
2 Reactivos
21 Agua purificada para uso de laboratorio y de calidad corriente EN ISO 3696
22 Metanol CH3OH destilado o de calidad HPLC ndash Nuacutemero CAS 67-59-1
23 Aacutecido aceacutetico CH3COOH (ρ20 = 105 gml) ndash Nuacutemero CAS 64-19-7
24 Fase moacutevil agua (21) metanol (22) - aacutecido aceacutetico (23) previamente filtrados por
membrana (045 microm) (40 9 1 vv)
Esta fase moacutevil debe prepararse diariamente y desgasificarse antes de su uso
25 Solucioacuten de referencia de hidroximetilfurfural de 25 mgl (mv)
Introducir en un matraz aforado de 100 ml 25 mg exactamente pesados de
hidroximetilfurfural C6H3O6 y completar el volumen con metanol (22) Diluir esta
solucioacuten al 110 con metanol (punto 22) y filtrarla por una membrana (045 microm)
Esta solucioacuten se conserva de 2 a 3 meses si se introduce en un frasco de vidrio
topacio hermeacuteticamente cerrado y se mantiene refrigerada
(la concentracioacuten de la solucioacuten de referencia se da a tiacutetulo orientativo)
3 Material
31 Equipo
311 Cromatoacutegrafo de liacutequidos de alta resolucioacuten equipado con
ndash un inyector con loop de 5 o 10 μl (a tiacutetulo indicativo)
ndash un detector espectrofotomeacutetrico que permita efectuar mediciones a 280 nm
ndash una columna de siacutelice dopada con octadecilo (por ejemplo Bondapak C18 mdash
Corasil Waters Ass)
ndash un registrador y en su caso un integrador
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
6
Flujo de la fase moacutevil 15 mlmin (a tiacutetulo indicativo)
312 Equipo de filtracioacuten por membrana (045 microm)
4 Procedimiento
41 Preparacioacuten de la muestra
Utilizar la solucioacuten obtenida diluyendo el mosto concentrado rectificado al 40
(mv) (introducir 200 g de mosto concentrado rectificado pesado exactamente en un
matraz aforado de 500 ml enrasar con agua y homogeneizar) y filtrarla por
membrana (045 microm)
42 Determinacioacuten cromatograacutefica
Inyectar en el cromatoacutegrafo 5 (o 10) microl de la muestra preparada del modo indicado en
el punto 41 y 5 (o 10) microl de solucioacuten de referencia de hidroximetilfurfural (punto
325) Registrar el cromatograma
El periacuteodo de retencioacuten del hidroximetilfurfural es de aproximadamente 6 oacute 7
minutos
El volumen inyectado y la secuencia se dan a tiacutetulo orientativo La determinacioacuten
cromatograacutefica puede realizarse tambieacuten con una curva de calibracioacuten
5 Expresioacuten de los resultados
El contenido en hidroximetilfurfural del mosto concentrado rectificado se expresa en
miligramos por kilogramo de azuacutecares totales
51 Modo de caacutelculo
Sea C mgl el contenido en hidroximetilfurfural de la solucioacuten de mosto concentrado
rectificado al 40 (mv)
El contenido en hidroximetilfurfural en miligramos por kilogramo de azuacutecares totales
viene expresado por
250 CP
P = contenido (mm) en azuacutecares totales del mosto concentrado
rectificado
6 Caracteriacutesticas del meacutetodo
Repetibilidad (r)
r = 05 mgkg azuacutecares totales
Reproducibilidad (R)
R = 30 mgkg azuacutecares totales
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
7
ANEXO E DETERMINACIOacuteN DEL GRADO ALCOHOacuteLICO VOLUMEacuteTRICO
ADQUIRIDO (GAV) DE LOS MOSTOS CONCENTRADOS (O DE LOS MOSTOS
CONCENTRADOS RECTIFICADOS MCR) Tipo IV
1 Introduccioacuten
Los mostos concentrados y los azuacutecares de uva (MCR) son productos espesos con un bajo
contenido de alcohol la determinacioacuten de su GAV adquirido requiere el uso de un meacutetodo
cuyos resultados (linealidad repetibilidad reproducibilidad especificidad liacutemites de
deteccioacuten y de cuantificacioacuten) permitan medir contenidos de alcohol inferiores al 1vol
2 Campo de aplicacioacuten
Este meacutetodo se aplica a los mostos concentrados y a las azuacutecares de uva
3 Principio
A Una masa conocida de mosto concentrado (MC) o de azuacutecar de uva se alcaliniza
mediante suspensioacuten de hidroacutexido de calcio y luego se destila El grado alcohoacutelico
volumeacutetrico del destilado se determina mediante densimetriacutea electroacutenica o por
densimetriacutea usando una balanza hidrostaacutetica
4 Reactivos
- Suspensioacuten de hidroacutexido de calcio 2M de calidad analiacutetica obtenido vertiendo con
precaucioacuten un litro de agua caliente (60 a 70 degC) en aproximadamente 120 g de cal viva
(CaO)
- Solucioacuten antiespumante obtenida por dilucioacuten de 2 ml de antiespumante de silicona
concentrada en 100 ml de agua
- Agua purificada para laboratorio de calidad EN ISO 3696
5 Material
- Material corriente de laboratorio matraces de 200 ml
- Balanza analiacutetica para pesar hasta 01 g aproximadamente
- Cualquier tipo de equipo de destilacioacuten o destilacioacuten al vapor puede usarse si cumple la
siguiente prueba
Destilar una mezcla de etanol y agua con un grado alcohoacutelico de 10 vol cinco veces
consecutivas
El destilado debe tener un grado alcohoacutelico de al menos 99 vol despueacutes de la quinta
destilacioacuten esto es la peacuterdida de alcohol durante cada destilacioacuten no deberiacutea ser superior a
002 vol
- Densiacutemetro electroacutenico con un resonador de flexioacuten o densiacutemetro con balanza hidrostaacutetica
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
8
6 Procedimiento
- Homogeneizar la muestra dando vueltas al matraz
- En un matraz aforado de 500 ml pesar aproximadamente 200 g de mosto concentrado o
rectificado (con una precisioacuten de hasta 01 g aproximadamente) Anotar el peso (PE) de esta
muestra Completar hasta la raya de graduacioacuten con agua desionizada Esta solucioacuten es de
40 pv en mosto
Obtencioacuten del destilado
- Traspasar 250 ml de la solucioacuten al 40 al matraz de destilar Antildeadir en el matraz
aproximadamente 10 ml de suspensioacuten de hidroacutexido de calcio aproximadamente 5 ml de
solucioacuten antiespumante y llegado el caso un regulador de ebullicioacuten (fragmentos de
porcelana por ejemplo)
- Llevar al punto de ebullicioacuten con suavidad
- Recoger el destilado en un matraz aforado de 200 100 ml (aproximadamente 190 90 ml)
- Dejar que el destilado llegue a la temperatura ambiente y completar hasta la raya de la
graduacioacuten con agua desionizada
Medicioacuten del GAV
Se lleva a cabo mediante densimetriacutea electroacutenica o balanza hidrostaacutetica
7 Caacutelculo
Grado alcohoacutelico volumeacutetrico alcanzado = GAV medido X 200 X MV
PE
GAV medido = contenido de alcohol dado por el densiacutemetro como vol
PE = muestra de mosto concentrado o azuacutecar de uva en gramos
MV= densidad del mosto concentrado o del mosto concentrado rectificado en gml
Los resultados se expresan con dos decimales y se redondean hasta aproximadamente el
005vol
8 Caracteriacutesticas del meacutetodo
81 Linealidad de la respuesta
La linealidad del densiacutemetro para los valores de bajo GAV es uno de los paraacutemetros
criacuteticos de este meacutetodo Se preparoacute una gama patroacuten de 10 soluciones hidroalcohoacutelicas de
GAV comprendido entre 0 y 5 vol Cada solucioacuten se analizoacute tres veces
La respuesta del densiacutemetro es perfectamente lineal en este campo tal como lo
muestra la recta de calibracioacuten de la figura 1
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
9
Figura 1 Linealidad de la determinacioacuten del GAV por densimetriacutea electroacutenica entre 0 y
5vol
82 Especificidad del meacutetodo
El segundo punto criacutetico de este meacutetodo es la destilacioacuten de los mostos viscosos con pequentildeas
cantidades de alcohol Para comprobar la especificidad se antildeadieron cantidades conocidas de
etanol (de 025 vol a 5vol) a MC y a azuacutecares de uva Las muestras con esta adicioacuten se
destilaron en condiciones previamente definidas Los destilados se analizaron a continuacioacuten
mediante densimetriacutea electroacutenica y balanza electroacutenica
Los resultados aparecen en la tabla 1 siendo satisfactoria la tasa de recuperacioacuten
comprendida entre 88 y 99 Tal como se ve en la recta de la figura 2 el meacutetodo es
especiacutefico (pendiente cercana al 1 ordenada en el origen cercana al 0)
Muestra Contenido
inicial
(vol)
Contenido
antildeadido (vol)
Contenido
encontrado
(vol)
Tasa de
recuperacioacuten
()
MC 1 000 025 022 88
MC 1 000 100 098 98
Azuacutecar de uva
(MCR) 1
000 100 094 94
Azuacutecar de uva
(MCR) 1
000 200 197 99
MC 2 000 050 044 88
Azuacutecar de uva
(MCR) 2
000 500 494 99
Tabla 1 Tasa de recuperacioacuten de la determinacioacuten del GAV de los MC y de las azuacutecares de
uva
respuesta respuesta
Lineal (respuesta)
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
10
especificidad para Densimetriacutea electroacutenica
y = 09968x - 0039
000
100
200
300
400
500
600
000 100 200 300 400 500 600
contenido agregado (vol)
co
nte
nid
o r
ec
up
era
do
contenido agregado
contenido recuperado (medido - inicial)
Lineal (contenido recuperado (medido - inicial))
Figura 2 Especificidad de la determinacioacuten del GAV de los MC y de las azuacutecares de uva
83 Repetibilidad
La repetibilidad del meacutetodo se determinoacute a partir de 20 muestras de MC o de azuacutecar de uva
con y sin adicioacuten de alcohol Se analizoacute tres veces cada muestra para estar en condiciones
ideacutenticas Los liacutemites de repetibilidad obtenidos fueron los siguientes
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
11
Repetibilidad para densimetria electronica valor calculado
Desviacioacuten tiacutepica 0009
Coeficiente de variacioacuten o desviacioacuten tiacutepica
relativa en 09
liacutemite r 0024 vol
liacutemite r en 3
Repetibilidad para Balanza hidrostaacutetica Valor calculado
Desviacioacuten tiacutepica 0013
Coeficiente de variacioacuten o desviacioacuten tiacutepica
relativa en 17
Liacutemite r 0038 vol
Liacutemite r en 53
84 Reproducibilidad
La reproducibilidad de los resultados se determinoacute analizando el mismo mosto en doble en
diferentes fechas durante un periodo dado Los resultados aparecen en la tabla 3
Reproducibilidad para densimetria electronica valor calculado
Desviacioacuten tiacutepica 0043
Coeficiente de variacioacuten o desviacioacuten tiacutepica
relativa en 3
liacutemite R 012vol
liacutemite R en 9
Reproducibilidad para Balanza hidrostaacutetica Valor calculado
Desviacioacuten estaacutendar 0026
Coeficiente de variacioacuten o desviacioacuten tiacutepica relativa en
34
Liacutemite R 0076vol
Liacutemite R en 106
Tabla 3- Reproducibilidad de la determinacioacuten del GAV de los MC y de las azuacutecares de uva
85 Liacutemites de deteccioacuten y de cuantificacioacuten
Los liacutemites de deteccioacuten (LD) y de cuantificacioacuten (LQ) estimados a partir del estudio de
linealidad son los siguientes
LD = 001 vol LQ = 005vol
El liacutemite de cuantificacioacuten se verificoacute analizando los mostos cuyo GAV teniacutea un nivel de
concentracioacuten de 005vol
Tabla 2 Repetibilidad de la determinacioacuten del GAV de los MC y de las azuacutecares de uva
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
12
86 Incertidumbre
La incertidumbre se evaluoacute a partir de la desviacioacuten tiacutepica de la reproducibilidad y fue de
010vol
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
13
ANEXO G SACAROSA
(CROMATOGRAFIacuteA LIacuteQUIDA DE ALTO RENDIMIENTO) Tipo IV
1 Fundamento de los meacutetodos
Meacutetodo de deteccioacuten y determinacioacuten por cromatografiacutea liacutequida de alta resolucioacuten La
sacarosa se separa mediante una columna de siacutelice con alquilamina y se detecta por
refractometriacutea Para calcular la cantidad se establece una comparacioacuten con un patroacuten externo
analizado en las mismas condiciones
Notas
La autenticidad de un mosto o de un vino puede controlarse mediante el meacutetodo de RMN del
deuterio descrito para la deteccioacuten del enriquecimiento de mostos de mostos concentrados
rectificados y de vinos
Las condiciones de cromatografiacutea son presentadas a tiacutetulo orientativo
2 Reactivos
21 Agua purificada para uso de laboratorio de calidad corriente EN ISO 3696
22 Acetonitrilo (CH3CN) de calidad HPLC ndash Nuacutemero CAS 75-05-8
23 Sacarosa ndash Nuacutemero CAS 57-50-1
24 Fase moacutevil acetonitrilo-agua previamente filtrados por membrana (045 μm) (8020 vv)
(La composicioacuten de la fase moacutevil se da a tiacutetulo indicativo)
Antes de su utilizacioacuten se deberaacute desgasificar
25 Solucioacuten de referencia solucioacuten acuosa de sacarosa de 12 gl Filtrada por membrana
(045 μm) (La concentracioacuten de la solucioacuten de referencia se da a tiacutetulo indicativo)
3 Material
31 Cromatoacutegrafo de fase liacutequida de alta resolucioacuten dotado de
1) Inyector con loop de 10 μl (a tiacutetulo indicativo)
2) Un detector un refractoacutemetro diferencial o refractoacutemetro interferoacutemetro
3) Columna Alkylammina (25 cm de longitud por 4 mm de diaacutemetro interno) (a tiacutetulo
indicativo)
4) Precolumna de la misma fase (a tiacutetulo indicativo)
5) Un dispositivo para mantener aislado o a la misma temperatura (30 degC) el conjunto
formado por la precolumna y la columna
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
14
6) Un registrador o en su caso un integrador
7) Flujo de la fase moacutevil 1 mlmin (a tiacutetulo indicativo)
32 Dispositivo de filtracioacuten por membrana (045 μm)
4 Procedimiento
41 Preparacioacuten de la muestra
Utilizar la solucioacuten obtenida diluyendo el mosto concentrado rectificado al 40 (mv) tal
como se indica en el Anexo H del meacutetodo laquoAcidez totalraquo seccioacuten 51 y filtrarla por
membrana (045 μm)
42 Determinacioacuten cromatograacutefica
Inyectar sucesivamente en el cromatoacutegrafo 10 μl de la solucioacuten de referencia y 10 μl de la
muestra preparada como se indica en el punto 41
Repetir las inyecciones en el mismo orden
Registrar el cromatograma
El tiempo de retencioacuten de la sacarosa es de unos 10 minutos
El volumen de la muestra y la secuencia se dan a tiacutetulo orientativo La determinacioacuten
cromatograacutefica puede realizarse tambieacuten con una curva de calibracioacuten
5 Caacutelculo
Utilizar para el caacutelculo el promedio de 2 resultados de la solucioacuten de referencia y de la
muestra
Sea C gl el contenido en sacarosa de la solucioacuten de mosto concentrado rectificado al 40
(mv)
Contenido en sacarosa en gramos por kilogramo de mosto concentrado rectificado 25 ∙ C
6 Expresioacuten de resultados
La concentracioacuten de sacarosa se expresa en gramos por kilogramo con una cifra decimal
7 Caracteriacutesticas del meacutetodo
Repetibilidad (r)
r = 11 gkg mosto
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
15
ANEXO H ACIDEZ TOTAL Tipo IV
1 Definicioacuten
La acidez total de un mosto concentrado rectificado es la suma de los aacutecidos valorables
cuando se lleva el pH a 7 antildeadiendo una solucioacuten alcalina valorada El dioacutexido de carbono no
se incluye en la acidez total
2 Fundamento del meacutetodo
Valoracioacuten potenciomeacutetrica o valoracioacuten en presencia de azul de bromotimol como indicador
del final de reaccioacuten mediante comparacioacuten con un patroacuten de coloracioacuten
3 Reactivos
31 Soluciones tampones
311 pH 70
Fosfato monopotaacutesico (KH2PO4) 1073 g
Solucioacuten 1 M de hidroacutexido soacutedico (NaOH) 500 ml
Agua csp 1 000 ml
312 pH 40
Solucioacuten 005 M de ftalato aacutecido de potasio Solucioacuten con 10211 gl de ftalato aacutecido de
potasio (C8H5KO4) a 20 degC (duracioacuten maacutexima de la solucioacuten 2 meses)
Nota Tambieacuten pueden utilizarse soluciones tampones de referencia comerciales para las que
exista correspondencia con unidades del SI
Por ejemplo pH 1679 plusmn 001 a 25degC
pH 4005 plusmn 001 a 25degC
pH 7000 plusmn 001 a 25degC
32 Solucioacuten 01 M de hidroacutexido soacutedico (NaOH)
33 Solucioacuten de azul de bromotimol de 4 gl
Azul de bromotimol (C27H28Br2O5S)hellip 4 g
Alcohol neutro 96 vol hellip 200 ml
Una vez solubilizado antildeadir
Agua sin CO2 helliphelliphellip 200 ml
Solucioacuten 1 M de hidroacutexido soacutedico
csp coloracioacuten verdeazulada (pH 7) helliphelliphelliphellip75 ml
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
16
Agua csp helliphelliphellip 1000 ml
4 Equipo
41 Potencioacutemetro con escala graduada en unidades de pH y electrodos A tiacutetulo indicativo el
electrodo de vidrio debe conservarse en agua destilada El electrodo de calomelanos de
cloruro potaacutesico saturado debe conservarse en una solucioacuten saturada de cloruro potaacutesico
Generalmente se emplea un electrodo combinado que se conserva en agua destilada
42 Vasos de precipitados de 100 ml de capacidad
5 Procedimiento
51 Preparacioacuten de la muestra
Poner 200 g de mosto concentrado rectificado exactamente pesado en un matraz aforado de
500 ml Enrasar con agua Homogeneizar
52 Valoracioacuten potenciomeacutetrica
521 Puesta a cero del aparato
Se efectuaraacute antes de cada medida siguiendo las instrucciones dadas para el aparato utilizado
522 Calibrado del pH metro
El pH metro se debe calibrar a 20ordmC usando soluciones tampoacuten de referencia acopladas con el
SI Los valores de pH seleccionados deben abarcar la gama de valores que pueden encontrarse
en los mostos Si el pH metro usado no es compatible con la calibracioacuten a valores
suficientemente bajos se deberiacutea realizar una verificacioacuten usando una solucioacuten tampoacuten de
referenencia acoplada con el SI y que tenga un valor de pH cercano a los valores hallados en
los mostos
523 Teacutecnica de medicioacuten
En un vaso de precipitados (44) introducir 50 ml de la muestra preparada como se indica en
51 Antildeadir 10 ml de agua destilada aproximadamente y verter con una bureta la solucioacuten 01
M de hidroacutexido soacutedico (32) hasta que el pH sea igual a 7 a 20 degC La adicioacuten de la solucioacuten
alcalina debe realizarse lentamente agitando constantemente la solucioacuten Se denominara n el
nuacutemero de mililitros de NaOH 01 M utilizados
53 Valoracioacuten con indicador (azul de bromotimol)
531 Ensayo previo obtencioacuten del patroacuten de coloracioacuten
En un vaso de precipitados (44) echar 25 ml de agua destilada y hervida 1 ml de solucioacuten de
azul de bromotimol (33) y 50 ml de muestra preparada como se indica en (51) Antildeadir la
solucioacuten 01 M de hidroacutexido de sodio (32) hasta obtener una coloracioacuten verdeazulada Antildeadir
5 ml de la solucioacuten tampoacuten pH 7 (311)
532 Determinacioacuten
En un vaso de precipitados (44) echar 30 ml de agua destilada y hervida 1 ml de solucioacuten de
azul de bromotimol (33) y 50 ml de muestra preparada como se indica en (51) Antildeadir la
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
17
solucioacuten 01 M de hidroacutexido soacutedico (32) hasta obtener una coloracioacuten ideacutentica a la obtenida
en el ensayo previo (531) Se denominaraacute n al nuacutemero de mililitros de solucioacuten de hidroacutexido
soacutedico 01 M utilizados
6 Expresioacuten de los resultados
61 Meacutetodo de caacutelculo
Acidez total expresada en miliequivalentes por kilogramo de mosto concentrado rectificado
A = 5 n
Acidez total expresada en miliequivalentes por kilogramo de azuacutecares totales A = (500 n)P
P = contenido en (mm) de azuacutecares totales
Se daraacute con 1 decimal
7 Caracteriacutesticas del meacutetodo
Repetibilidad (r)
r = 04 meq kg azuacutecares totales
Reproducibilidad (R)
R = 24 meq kg azuacutecares totales
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
18
ANEXO I pH Tipo IV
1 Fundamento
Medida de la diferencia de potencial entre dos electrodos sumergidos en el liacutequido que se
estudia Uno de los dos electrodos tiene un potencial que es una funcioacuten definida del pH del
liacutequido el otro tiene un potencial fijo y conocido y constituye el electrodo de referencia
2 Reactivos
21 Soluciones tampoacuten
211 Solucioacuten saturada de tartrato aacutecido de potasio al menos de 57 gl de tartrato aacutecido de
potasio (C4H5KO6) a 20oC Esta solucioacuten puede conservarse hasta 2 meses en presencia de 01
g de timol por cada 200 ml)
pHtemperatura
357 a 20oC
356 a 25oC
355 a 30oC
212 Solucioacuten 005 M de ftalato aacutecido de potasio Solucioacuten con 10211 gl de ftalato aacutecido de
potasio (C8H5KO4) a 20 degC (duracioacuten maacutexima de la solucioacuten 2 meses)
pHtemperatura
3999 a 15oC
4003 a 20oC
4008 a 25oC
4015 a 30oC
213 Solucioacuten que contenga
Fosfato monopotaacutesico KH2PO4 hellip 3402 g
Fosfato bipotaacutesico K2HPO4 hellip 4354 g
Agua csp hellip 1 000 ml
(Duracioacuten maacutexima de la solucioacuten 2 meses)
pHtemperatura
690 a 15oC
688 a 20oC
686 a 25oC
685 a 30oC
Nota Tambieacuten pueden utilizarse soluciones tampones de referencia comerciales para las que
exista correspondencia con unidades del SI
Por ejemplo pH 1679 plusmn 001 a 25degC
pH 4005 plusmn 001 a 25degC
pH 7000 plusmn 001 a 25degC
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
19
3 Material
31 pH metro graduado en unidades de pH que permita efectuar medidas con una
aproximacioacuten de plusmn001 como miacutenimo
32 Electrodos
321 Electrodo de vidrio
322 Electrodo de referencia de calomelanos de cloruro potaacutesico saturado
323 O electrodo combinado
4 Procedimiento
41 Preparacioacuten de la muestra para anaacutelisis
Diluirlo con agua a fin de obtener una concentracioacuten de 25 plusmn 05 (mm) en azuacutecares totales
(25oBrix) Si P es el contenido en (mm) en azuacutecares totales del mosto concentrado
rectificado pesar una masa igual a 2 500 P y completar con agua hasta 100 g La
conductividad del agua utilizada deberaacute ser inferior a 2 microsiemens por centiacutemetro
42 Puesta a cero del aparato
Se efectuaraacute antes de cada medida siguiendo las instrucciones dadas para el aparato utilizado
43 Calibrado del pH metro
El pH metro se debe calibrar a 20ordmC usando soluciones tampoacuten de referencia acopladas con el
SI Los valores de pH seleccionados deben abarcar la gama de valores que pueden encontrarse
en los mostos Si el pH metro usado no es compatible con la calibracioacuten a valores
suficientemente bajos se deberiacutea realizar una verificacioacuten usando una solucioacuten tampoacuten de
referenencia acoplada con el SI y que tenga un valor de pH cercano a los valores hallados en
los mostos
44 Medida
Introducir el electrodo en la muestra a analizar cuya temperatura deberaacute estar comprendida
entre 20 y 25oC y tan proacutexima como sea posible a 20
oC Leer directamente el valor del pH
Efectuacuteense al menos 2 determinaciones de cada muestra Tomar como resultado la media
aritmeacutetica de ambas determinaciones
5 Expresioacuten de los resultados
El pH de la solucioacuten al 25 (mm) (25oBrix) del mosto concentrado rectificado se expresaraacuten
con 2 decimales
6 Caracteriacutesticas del meacutetodo
Repetibilidad (r)
r = 007
Reproducibilidad (R)
R = 007
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
20
ANEXO J DIOacuteXIDO DE AZUFRE Tipo IV
1 Definiciones
Se denomina dioacutexido de azufre al dioacutexido de azufre presente en el mosto en las formas
siguientes H2SO
3 H SO3
- cuyo equilibrio es funcioacuten del pH y de la temperatura
H2SO
3 H
+ + HSO
3
macr
H2SO
3 representa el dioacutexido de azufre molecular
Se denomina dioacutexido de azufre total al conjunto de las distintas formas de dioacutexido de azufre
presentes en el mosto en estado libre o combinado con sus componentes
2 Materiales
Se extrae el dioacutexido de azufre total por arrastre en caliente (aproximadamente 100oC) del
mosto concentrado rectificado previamente diluido
21 Reactivos
211 Aacutecido fosfoacuterico al 85 H3PO4 (ρ20 = 171 gml)
212 Solucioacuten de peroacutexido de hidroacutegeno de 91 gl H2O2 (3 voluacutemenes)
213 Reactivo indicador
rojo de metilo hellip 100 mg
azul de metileno hellip 50 mg
Alcohol de 50 vol hellip100 ml
214 Solucioacuten de hidroacutexido de sodio (NaOH) 001 M
22 Material
221 El material utilizado debe ajustarse al esquema que figura a continuacioacuten
principalmente en lo que se refiere al refrigerante
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
21
Figura 1
Las dimensiones estaacuten indicadas en miliacutemetros Los diaacutemetros internos de los 4 tubos
conceacutentricos que constituyen el refrigerante son 45 34 27 y 10 mm
El tubo de conduccioacuten de los gases al borboteador B termina en una pequentildea esfera de 1 cm
de diaacutemetro que lleva en su mayor ciacuterculo horizontal 20 agujeros de 02 mm de diaacutemetro
Tambieacuten puede terminar en una placa de vidrio fritado que garantice la formacioacuten de gran
nuacutemero de pequentildeas burbujas realizando asiacute un buen contacto entre las fases gaseosa y
liacutequida
El flujo de gas que debe recorrer el aparato debe ser de 40 lh aproximadamente El frasco
situado a la derecha del aparato de destina a limitar de 20 a 30 cm de agua la depresioacuten
producida por la trompa de agua Para poder regular dicha depresioacuten de forma que el caudal
sea el correcto conviene colocar un medidor de flujo de tubo semicapilar entre el borboteador
y el frasco
222 Una microbureta
3 Procedimiento
31 En el caso del mosto concentrado rectificado utilizar la solucioacuten obtenida diluyendo la
muestra para analizar al 40 (mv) tal y como se indica en el capiacutetulo laquoAcidez totalraquo en el
apartado 51 En el matraz A de 250 ml del aparato de arrastre introducir 50 ml de esta
solucioacuten y 5 ml de aacutecido fosfoacuterico (2 11) Acoplar el matraz al aparato
32 Introducir en el borboteador B de 2 a 3 ml de solucioacuten de peroacutexido de hidroacutegeno (212)
neutralizarla con la solucioacuten 001 M de hidroacutexido soacutedico (214) llevar a ebullicioacuten el mosto
contenido en el matraz A con una pequentildea llama de 4 a 5 cm de altura que debe tocar
ligeramente el fondo del matraz No colocar bajo el matraz ninguna tela metaacutelica sino
depositarlo sobre un disco perforado con un agujero de 30 mm de diaacutemetro Se evita asiacute la
pirogenacioacuten de las materias extractivas de la muestra sobre las paredes del matraz
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
22
Mantener la ebullicioacuten durante el paso de la corriente de aire (o de nitroacutegeno) En 15 minutos
el dioacutexido de azufre total habraacute sido arrastrado y oxidado Valorar el aacutecido sulfuacuterico formado
con la solucioacuten 001 M de hidroacutexido soacutedico (214) Sea n el nuacutemero de mililitros utilizados
4 Caacutelculo
Dioacutexido de azufre en miligramos por kilo de azuacutecares totales (muestra 50 ml de muestra
preparada (31))
(1600 n)P
P = contenido en (mm) de azuacutecares totales
5 Expresioacuten de los resultados
El dioacutexido de azufre total se expresa en miligramos por kilogramo (mgkg) de azuacutecares
totales
6 Caracteriacutesticas del meacutetodo
Repetibilidad (r)
muestra de 50 ml lt 50 mgl r = 1x 250P mgkg de azuacutecares totales
Reproducibilidad (R)
muestra de 50 ml lt 50 mgl R = 9x 250P mgkg de azuacutecares totales
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
23
ANEXO K CARACTERIacuteSTICAS CROMAacuteTICAS Tipo IV
1 Fundamento
Medida de la absorbancia a 425 nm en cubetas de 1 cm de espesor del mosto concentrado
rectificado cuya concentracioacuten en azuacutecares se haya reducido al 25 (mm) (25o Brix)
2 Material
21 Espectrofotoacutemetro que permita efectuar medidas entre 300 y 700 nm
22 Cubetas de vidrio con un trayecto oacuteptico de 1 cm
23 Filtro con membrana y de una porosidad de 045 μm
3 Procedimiento
31 Preparacioacuten de la muestra
Utilizar una solucioacuten cuyo valor en azuacutecares sea del 25 (mm) (25o
Brix) y que se habraacute
preparado del modo indicado en el capiacutetulo laquopHraquo (41) Filtrarla en un filtro con membrana
de una porosidad de 045 μm
32 Determinacioacuten de la absorbancia
Ajustar a cero para la longitud de onda 425 nm en una cubeta de 1 cm de trayecto oacuteptico que
contenga agua destilada
Determinar la absorbancia A a esta longitud de onda de la solucioacuten al 25 de
azuacutecares (25oBrix) obtenida en el apartado 31 y colocada en una cubeta de 1 cm de trayecto
oacuteptico
4 Expresioacuten de los resultados
La absorbancia a 425 nm del mosto concentrado rectificado en solucioacuten al 25 (mm) de
azuacutecares (25o Brix) se expresaraacute con 2 decimales
Repetibilidad (r)
r = 001 U Abs agrave 25degBrix
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
5
ANEXO C
HIDROXIMETILFURFURAL (HMF) por cromatografiacutea liquida de alto rendimiento
Tipo IV
1 Fundamento del meacutetodo
Cromatografiacutea liquida de alto rendimiento (CLAR)
Separacioacuten a traveacutes de una columna por cromatografiacutea fase-inversa y determinacioacuten en
280 nanoacutemetros
2 Reactivos
21 Agua purificada para uso de laboratorio y de calidad corriente EN ISO 3696
22 Metanol CH3OH destilado o de calidad HPLC ndash Nuacutemero CAS 67-59-1
23 Aacutecido aceacutetico CH3COOH (ρ20 = 105 gml) ndash Nuacutemero CAS 64-19-7
24 Fase moacutevil agua (21) metanol (22) - aacutecido aceacutetico (23) previamente filtrados por
membrana (045 microm) (40 9 1 vv)
Esta fase moacutevil debe prepararse diariamente y desgasificarse antes de su uso
25 Solucioacuten de referencia de hidroximetilfurfural de 25 mgl (mv)
Introducir en un matraz aforado de 100 ml 25 mg exactamente pesados de
hidroximetilfurfural C6H3O6 y completar el volumen con metanol (22) Diluir esta
solucioacuten al 110 con metanol (punto 22) y filtrarla por una membrana (045 microm)
Esta solucioacuten se conserva de 2 a 3 meses si se introduce en un frasco de vidrio
topacio hermeacuteticamente cerrado y se mantiene refrigerada
(la concentracioacuten de la solucioacuten de referencia se da a tiacutetulo orientativo)
3 Material
31 Equipo
311 Cromatoacutegrafo de liacutequidos de alta resolucioacuten equipado con
ndash un inyector con loop de 5 o 10 μl (a tiacutetulo indicativo)
ndash un detector espectrofotomeacutetrico que permita efectuar mediciones a 280 nm
ndash una columna de siacutelice dopada con octadecilo (por ejemplo Bondapak C18 mdash
Corasil Waters Ass)
ndash un registrador y en su caso un integrador
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
6
Flujo de la fase moacutevil 15 mlmin (a tiacutetulo indicativo)
312 Equipo de filtracioacuten por membrana (045 microm)
4 Procedimiento
41 Preparacioacuten de la muestra
Utilizar la solucioacuten obtenida diluyendo el mosto concentrado rectificado al 40
(mv) (introducir 200 g de mosto concentrado rectificado pesado exactamente en un
matraz aforado de 500 ml enrasar con agua y homogeneizar) y filtrarla por
membrana (045 microm)
42 Determinacioacuten cromatograacutefica
Inyectar en el cromatoacutegrafo 5 (o 10) microl de la muestra preparada del modo indicado en
el punto 41 y 5 (o 10) microl de solucioacuten de referencia de hidroximetilfurfural (punto
325) Registrar el cromatograma
El periacuteodo de retencioacuten del hidroximetilfurfural es de aproximadamente 6 oacute 7
minutos
El volumen inyectado y la secuencia se dan a tiacutetulo orientativo La determinacioacuten
cromatograacutefica puede realizarse tambieacuten con una curva de calibracioacuten
5 Expresioacuten de los resultados
El contenido en hidroximetilfurfural del mosto concentrado rectificado se expresa en
miligramos por kilogramo de azuacutecares totales
51 Modo de caacutelculo
Sea C mgl el contenido en hidroximetilfurfural de la solucioacuten de mosto concentrado
rectificado al 40 (mv)
El contenido en hidroximetilfurfural en miligramos por kilogramo de azuacutecares totales
viene expresado por
250 CP
P = contenido (mm) en azuacutecares totales del mosto concentrado
rectificado
6 Caracteriacutesticas del meacutetodo
Repetibilidad (r)
r = 05 mgkg azuacutecares totales
Reproducibilidad (R)
R = 30 mgkg azuacutecares totales
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
7
ANEXO E DETERMINACIOacuteN DEL GRADO ALCOHOacuteLICO VOLUMEacuteTRICO
ADQUIRIDO (GAV) DE LOS MOSTOS CONCENTRADOS (O DE LOS MOSTOS
CONCENTRADOS RECTIFICADOS MCR) Tipo IV
1 Introduccioacuten
Los mostos concentrados y los azuacutecares de uva (MCR) son productos espesos con un bajo
contenido de alcohol la determinacioacuten de su GAV adquirido requiere el uso de un meacutetodo
cuyos resultados (linealidad repetibilidad reproducibilidad especificidad liacutemites de
deteccioacuten y de cuantificacioacuten) permitan medir contenidos de alcohol inferiores al 1vol
2 Campo de aplicacioacuten
Este meacutetodo se aplica a los mostos concentrados y a las azuacutecares de uva
3 Principio
A Una masa conocida de mosto concentrado (MC) o de azuacutecar de uva se alcaliniza
mediante suspensioacuten de hidroacutexido de calcio y luego se destila El grado alcohoacutelico
volumeacutetrico del destilado se determina mediante densimetriacutea electroacutenica o por
densimetriacutea usando una balanza hidrostaacutetica
4 Reactivos
- Suspensioacuten de hidroacutexido de calcio 2M de calidad analiacutetica obtenido vertiendo con
precaucioacuten un litro de agua caliente (60 a 70 degC) en aproximadamente 120 g de cal viva
(CaO)
- Solucioacuten antiespumante obtenida por dilucioacuten de 2 ml de antiespumante de silicona
concentrada en 100 ml de agua
- Agua purificada para laboratorio de calidad EN ISO 3696
5 Material
- Material corriente de laboratorio matraces de 200 ml
- Balanza analiacutetica para pesar hasta 01 g aproximadamente
- Cualquier tipo de equipo de destilacioacuten o destilacioacuten al vapor puede usarse si cumple la
siguiente prueba
Destilar una mezcla de etanol y agua con un grado alcohoacutelico de 10 vol cinco veces
consecutivas
El destilado debe tener un grado alcohoacutelico de al menos 99 vol despueacutes de la quinta
destilacioacuten esto es la peacuterdida de alcohol durante cada destilacioacuten no deberiacutea ser superior a
002 vol
- Densiacutemetro electroacutenico con un resonador de flexioacuten o densiacutemetro con balanza hidrostaacutetica
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
8
6 Procedimiento
- Homogeneizar la muestra dando vueltas al matraz
- En un matraz aforado de 500 ml pesar aproximadamente 200 g de mosto concentrado o
rectificado (con una precisioacuten de hasta 01 g aproximadamente) Anotar el peso (PE) de esta
muestra Completar hasta la raya de graduacioacuten con agua desionizada Esta solucioacuten es de
40 pv en mosto
Obtencioacuten del destilado
- Traspasar 250 ml de la solucioacuten al 40 al matraz de destilar Antildeadir en el matraz
aproximadamente 10 ml de suspensioacuten de hidroacutexido de calcio aproximadamente 5 ml de
solucioacuten antiespumante y llegado el caso un regulador de ebullicioacuten (fragmentos de
porcelana por ejemplo)
- Llevar al punto de ebullicioacuten con suavidad
- Recoger el destilado en un matraz aforado de 200 100 ml (aproximadamente 190 90 ml)
- Dejar que el destilado llegue a la temperatura ambiente y completar hasta la raya de la
graduacioacuten con agua desionizada
Medicioacuten del GAV
Se lleva a cabo mediante densimetriacutea electroacutenica o balanza hidrostaacutetica
7 Caacutelculo
Grado alcohoacutelico volumeacutetrico alcanzado = GAV medido X 200 X MV
PE
GAV medido = contenido de alcohol dado por el densiacutemetro como vol
PE = muestra de mosto concentrado o azuacutecar de uva en gramos
MV= densidad del mosto concentrado o del mosto concentrado rectificado en gml
Los resultados se expresan con dos decimales y se redondean hasta aproximadamente el
005vol
8 Caracteriacutesticas del meacutetodo
81 Linealidad de la respuesta
La linealidad del densiacutemetro para los valores de bajo GAV es uno de los paraacutemetros
criacuteticos de este meacutetodo Se preparoacute una gama patroacuten de 10 soluciones hidroalcohoacutelicas de
GAV comprendido entre 0 y 5 vol Cada solucioacuten se analizoacute tres veces
La respuesta del densiacutemetro es perfectamente lineal en este campo tal como lo
muestra la recta de calibracioacuten de la figura 1
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
9
Figura 1 Linealidad de la determinacioacuten del GAV por densimetriacutea electroacutenica entre 0 y
5vol
82 Especificidad del meacutetodo
El segundo punto criacutetico de este meacutetodo es la destilacioacuten de los mostos viscosos con pequentildeas
cantidades de alcohol Para comprobar la especificidad se antildeadieron cantidades conocidas de
etanol (de 025 vol a 5vol) a MC y a azuacutecares de uva Las muestras con esta adicioacuten se
destilaron en condiciones previamente definidas Los destilados se analizaron a continuacioacuten
mediante densimetriacutea electroacutenica y balanza electroacutenica
Los resultados aparecen en la tabla 1 siendo satisfactoria la tasa de recuperacioacuten
comprendida entre 88 y 99 Tal como se ve en la recta de la figura 2 el meacutetodo es
especiacutefico (pendiente cercana al 1 ordenada en el origen cercana al 0)
Muestra Contenido
inicial
(vol)
Contenido
antildeadido (vol)
Contenido
encontrado
(vol)
Tasa de
recuperacioacuten
()
MC 1 000 025 022 88
MC 1 000 100 098 98
Azuacutecar de uva
(MCR) 1
000 100 094 94
Azuacutecar de uva
(MCR) 1
000 200 197 99
MC 2 000 050 044 88
Azuacutecar de uva
(MCR) 2
000 500 494 99
Tabla 1 Tasa de recuperacioacuten de la determinacioacuten del GAV de los MC y de las azuacutecares de
uva
respuesta respuesta
Lineal (respuesta)
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
10
especificidad para Densimetriacutea electroacutenica
y = 09968x - 0039
000
100
200
300
400
500
600
000 100 200 300 400 500 600
contenido agregado (vol)
co
nte
nid
o r
ec
up
era
do
contenido agregado
contenido recuperado (medido - inicial)
Lineal (contenido recuperado (medido - inicial))
Figura 2 Especificidad de la determinacioacuten del GAV de los MC y de las azuacutecares de uva
83 Repetibilidad
La repetibilidad del meacutetodo se determinoacute a partir de 20 muestras de MC o de azuacutecar de uva
con y sin adicioacuten de alcohol Se analizoacute tres veces cada muestra para estar en condiciones
ideacutenticas Los liacutemites de repetibilidad obtenidos fueron los siguientes
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
11
Repetibilidad para densimetria electronica valor calculado
Desviacioacuten tiacutepica 0009
Coeficiente de variacioacuten o desviacioacuten tiacutepica
relativa en 09
liacutemite r 0024 vol
liacutemite r en 3
Repetibilidad para Balanza hidrostaacutetica Valor calculado
Desviacioacuten tiacutepica 0013
Coeficiente de variacioacuten o desviacioacuten tiacutepica
relativa en 17
Liacutemite r 0038 vol
Liacutemite r en 53
84 Reproducibilidad
La reproducibilidad de los resultados se determinoacute analizando el mismo mosto en doble en
diferentes fechas durante un periodo dado Los resultados aparecen en la tabla 3
Reproducibilidad para densimetria electronica valor calculado
Desviacioacuten tiacutepica 0043
Coeficiente de variacioacuten o desviacioacuten tiacutepica
relativa en 3
liacutemite R 012vol
liacutemite R en 9
Reproducibilidad para Balanza hidrostaacutetica Valor calculado
Desviacioacuten estaacutendar 0026
Coeficiente de variacioacuten o desviacioacuten tiacutepica relativa en
34
Liacutemite R 0076vol
Liacutemite R en 106
Tabla 3- Reproducibilidad de la determinacioacuten del GAV de los MC y de las azuacutecares de uva
85 Liacutemites de deteccioacuten y de cuantificacioacuten
Los liacutemites de deteccioacuten (LD) y de cuantificacioacuten (LQ) estimados a partir del estudio de
linealidad son los siguientes
LD = 001 vol LQ = 005vol
El liacutemite de cuantificacioacuten se verificoacute analizando los mostos cuyo GAV teniacutea un nivel de
concentracioacuten de 005vol
Tabla 2 Repetibilidad de la determinacioacuten del GAV de los MC y de las azuacutecares de uva
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
12
86 Incertidumbre
La incertidumbre se evaluoacute a partir de la desviacioacuten tiacutepica de la reproducibilidad y fue de
010vol
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
13
ANEXO G SACAROSA
(CROMATOGRAFIacuteA LIacuteQUIDA DE ALTO RENDIMIENTO) Tipo IV
1 Fundamento de los meacutetodos
Meacutetodo de deteccioacuten y determinacioacuten por cromatografiacutea liacutequida de alta resolucioacuten La
sacarosa se separa mediante una columna de siacutelice con alquilamina y se detecta por
refractometriacutea Para calcular la cantidad se establece una comparacioacuten con un patroacuten externo
analizado en las mismas condiciones
Notas
La autenticidad de un mosto o de un vino puede controlarse mediante el meacutetodo de RMN del
deuterio descrito para la deteccioacuten del enriquecimiento de mostos de mostos concentrados
rectificados y de vinos
Las condiciones de cromatografiacutea son presentadas a tiacutetulo orientativo
2 Reactivos
21 Agua purificada para uso de laboratorio de calidad corriente EN ISO 3696
22 Acetonitrilo (CH3CN) de calidad HPLC ndash Nuacutemero CAS 75-05-8
23 Sacarosa ndash Nuacutemero CAS 57-50-1
24 Fase moacutevil acetonitrilo-agua previamente filtrados por membrana (045 μm) (8020 vv)
(La composicioacuten de la fase moacutevil se da a tiacutetulo indicativo)
Antes de su utilizacioacuten se deberaacute desgasificar
25 Solucioacuten de referencia solucioacuten acuosa de sacarosa de 12 gl Filtrada por membrana
(045 μm) (La concentracioacuten de la solucioacuten de referencia se da a tiacutetulo indicativo)
3 Material
31 Cromatoacutegrafo de fase liacutequida de alta resolucioacuten dotado de
1) Inyector con loop de 10 μl (a tiacutetulo indicativo)
2) Un detector un refractoacutemetro diferencial o refractoacutemetro interferoacutemetro
3) Columna Alkylammina (25 cm de longitud por 4 mm de diaacutemetro interno) (a tiacutetulo
indicativo)
4) Precolumna de la misma fase (a tiacutetulo indicativo)
5) Un dispositivo para mantener aislado o a la misma temperatura (30 degC) el conjunto
formado por la precolumna y la columna
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
14
6) Un registrador o en su caso un integrador
7) Flujo de la fase moacutevil 1 mlmin (a tiacutetulo indicativo)
32 Dispositivo de filtracioacuten por membrana (045 μm)
4 Procedimiento
41 Preparacioacuten de la muestra
Utilizar la solucioacuten obtenida diluyendo el mosto concentrado rectificado al 40 (mv) tal
como se indica en el Anexo H del meacutetodo laquoAcidez totalraquo seccioacuten 51 y filtrarla por
membrana (045 μm)
42 Determinacioacuten cromatograacutefica
Inyectar sucesivamente en el cromatoacutegrafo 10 μl de la solucioacuten de referencia y 10 μl de la
muestra preparada como se indica en el punto 41
Repetir las inyecciones en el mismo orden
Registrar el cromatograma
El tiempo de retencioacuten de la sacarosa es de unos 10 minutos
El volumen de la muestra y la secuencia se dan a tiacutetulo orientativo La determinacioacuten
cromatograacutefica puede realizarse tambieacuten con una curva de calibracioacuten
5 Caacutelculo
Utilizar para el caacutelculo el promedio de 2 resultados de la solucioacuten de referencia y de la
muestra
Sea C gl el contenido en sacarosa de la solucioacuten de mosto concentrado rectificado al 40
(mv)
Contenido en sacarosa en gramos por kilogramo de mosto concentrado rectificado 25 ∙ C
6 Expresioacuten de resultados
La concentracioacuten de sacarosa se expresa en gramos por kilogramo con una cifra decimal
7 Caracteriacutesticas del meacutetodo
Repetibilidad (r)
r = 11 gkg mosto
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
15
ANEXO H ACIDEZ TOTAL Tipo IV
1 Definicioacuten
La acidez total de un mosto concentrado rectificado es la suma de los aacutecidos valorables
cuando se lleva el pH a 7 antildeadiendo una solucioacuten alcalina valorada El dioacutexido de carbono no
se incluye en la acidez total
2 Fundamento del meacutetodo
Valoracioacuten potenciomeacutetrica o valoracioacuten en presencia de azul de bromotimol como indicador
del final de reaccioacuten mediante comparacioacuten con un patroacuten de coloracioacuten
3 Reactivos
31 Soluciones tampones
311 pH 70
Fosfato monopotaacutesico (KH2PO4) 1073 g
Solucioacuten 1 M de hidroacutexido soacutedico (NaOH) 500 ml
Agua csp 1 000 ml
312 pH 40
Solucioacuten 005 M de ftalato aacutecido de potasio Solucioacuten con 10211 gl de ftalato aacutecido de
potasio (C8H5KO4) a 20 degC (duracioacuten maacutexima de la solucioacuten 2 meses)
Nota Tambieacuten pueden utilizarse soluciones tampones de referencia comerciales para las que
exista correspondencia con unidades del SI
Por ejemplo pH 1679 plusmn 001 a 25degC
pH 4005 plusmn 001 a 25degC
pH 7000 plusmn 001 a 25degC
32 Solucioacuten 01 M de hidroacutexido soacutedico (NaOH)
33 Solucioacuten de azul de bromotimol de 4 gl
Azul de bromotimol (C27H28Br2O5S)hellip 4 g
Alcohol neutro 96 vol hellip 200 ml
Una vez solubilizado antildeadir
Agua sin CO2 helliphelliphellip 200 ml
Solucioacuten 1 M de hidroacutexido soacutedico
csp coloracioacuten verdeazulada (pH 7) helliphelliphelliphellip75 ml
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
16
Agua csp helliphelliphellip 1000 ml
4 Equipo
41 Potencioacutemetro con escala graduada en unidades de pH y electrodos A tiacutetulo indicativo el
electrodo de vidrio debe conservarse en agua destilada El electrodo de calomelanos de
cloruro potaacutesico saturado debe conservarse en una solucioacuten saturada de cloruro potaacutesico
Generalmente se emplea un electrodo combinado que se conserva en agua destilada
42 Vasos de precipitados de 100 ml de capacidad
5 Procedimiento
51 Preparacioacuten de la muestra
Poner 200 g de mosto concentrado rectificado exactamente pesado en un matraz aforado de
500 ml Enrasar con agua Homogeneizar
52 Valoracioacuten potenciomeacutetrica
521 Puesta a cero del aparato
Se efectuaraacute antes de cada medida siguiendo las instrucciones dadas para el aparato utilizado
522 Calibrado del pH metro
El pH metro se debe calibrar a 20ordmC usando soluciones tampoacuten de referencia acopladas con el
SI Los valores de pH seleccionados deben abarcar la gama de valores que pueden encontrarse
en los mostos Si el pH metro usado no es compatible con la calibracioacuten a valores
suficientemente bajos se deberiacutea realizar una verificacioacuten usando una solucioacuten tampoacuten de
referenencia acoplada con el SI y que tenga un valor de pH cercano a los valores hallados en
los mostos
523 Teacutecnica de medicioacuten
En un vaso de precipitados (44) introducir 50 ml de la muestra preparada como se indica en
51 Antildeadir 10 ml de agua destilada aproximadamente y verter con una bureta la solucioacuten 01
M de hidroacutexido soacutedico (32) hasta que el pH sea igual a 7 a 20 degC La adicioacuten de la solucioacuten
alcalina debe realizarse lentamente agitando constantemente la solucioacuten Se denominara n el
nuacutemero de mililitros de NaOH 01 M utilizados
53 Valoracioacuten con indicador (azul de bromotimol)
531 Ensayo previo obtencioacuten del patroacuten de coloracioacuten
En un vaso de precipitados (44) echar 25 ml de agua destilada y hervida 1 ml de solucioacuten de
azul de bromotimol (33) y 50 ml de muestra preparada como se indica en (51) Antildeadir la
solucioacuten 01 M de hidroacutexido de sodio (32) hasta obtener una coloracioacuten verdeazulada Antildeadir
5 ml de la solucioacuten tampoacuten pH 7 (311)
532 Determinacioacuten
En un vaso de precipitados (44) echar 30 ml de agua destilada y hervida 1 ml de solucioacuten de
azul de bromotimol (33) y 50 ml de muestra preparada como se indica en (51) Antildeadir la
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
17
solucioacuten 01 M de hidroacutexido soacutedico (32) hasta obtener una coloracioacuten ideacutentica a la obtenida
en el ensayo previo (531) Se denominaraacute n al nuacutemero de mililitros de solucioacuten de hidroacutexido
soacutedico 01 M utilizados
6 Expresioacuten de los resultados
61 Meacutetodo de caacutelculo
Acidez total expresada en miliequivalentes por kilogramo de mosto concentrado rectificado
A = 5 n
Acidez total expresada en miliequivalentes por kilogramo de azuacutecares totales A = (500 n)P
P = contenido en (mm) de azuacutecares totales
Se daraacute con 1 decimal
7 Caracteriacutesticas del meacutetodo
Repetibilidad (r)
r = 04 meq kg azuacutecares totales
Reproducibilidad (R)
R = 24 meq kg azuacutecares totales
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
18
ANEXO I pH Tipo IV
1 Fundamento
Medida de la diferencia de potencial entre dos electrodos sumergidos en el liacutequido que se
estudia Uno de los dos electrodos tiene un potencial que es una funcioacuten definida del pH del
liacutequido el otro tiene un potencial fijo y conocido y constituye el electrodo de referencia
2 Reactivos
21 Soluciones tampoacuten
211 Solucioacuten saturada de tartrato aacutecido de potasio al menos de 57 gl de tartrato aacutecido de
potasio (C4H5KO6) a 20oC Esta solucioacuten puede conservarse hasta 2 meses en presencia de 01
g de timol por cada 200 ml)
pHtemperatura
357 a 20oC
356 a 25oC
355 a 30oC
212 Solucioacuten 005 M de ftalato aacutecido de potasio Solucioacuten con 10211 gl de ftalato aacutecido de
potasio (C8H5KO4) a 20 degC (duracioacuten maacutexima de la solucioacuten 2 meses)
pHtemperatura
3999 a 15oC
4003 a 20oC
4008 a 25oC
4015 a 30oC
213 Solucioacuten que contenga
Fosfato monopotaacutesico KH2PO4 hellip 3402 g
Fosfato bipotaacutesico K2HPO4 hellip 4354 g
Agua csp hellip 1 000 ml
(Duracioacuten maacutexima de la solucioacuten 2 meses)
pHtemperatura
690 a 15oC
688 a 20oC
686 a 25oC
685 a 30oC
Nota Tambieacuten pueden utilizarse soluciones tampones de referencia comerciales para las que
exista correspondencia con unidades del SI
Por ejemplo pH 1679 plusmn 001 a 25degC
pH 4005 plusmn 001 a 25degC
pH 7000 plusmn 001 a 25degC
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
19
3 Material
31 pH metro graduado en unidades de pH que permita efectuar medidas con una
aproximacioacuten de plusmn001 como miacutenimo
32 Electrodos
321 Electrodo de vidrio
322 Electrodo de referencia de calomelanos de cloruro potaacutesico saturado
323 O electrodo combinado
4 Procedimiento
41 Preparacioacuten de la muestra para anaacutelisis
Diluirlo con agua a fin de obtener una concentracioacuten de 25 plusmn 05 (mm) en azuacutecares totales
(25oBrix) Si P es el contenido en (mm) en azuacutecares totales del mosto concentrado
rectificado pesar una masa igual a 2 500 P y completar con agua hasta 100 g La
conductividad del agua utilizada deberaacute ser inferior a 2 microsiemens por centiacutemetro
42 Puesta a cero del aparato
Se efectuaraacute antes de cada medida siguiendo las instrucciones dadas para el aparato utilizado
43 Calibrado del pH metro
El pH metro se debe calibrar a 20ordmC usando soluciones tampoacuten de referencia acopladas con el
SI Los valores de pH seleccionados deben abarcar la gama de valores que pueden encontrarse
en los mostos Si el pH metro usado no es compatible con la calibracioacuten a valores
suficientemente bajos se deberiacutea realizar una verificacioacuten usando una solucioacuten tampoacuten de
referenencia acoplada con el SI y que tenga un valor de pH cercano a los valores hallados en
los mostos
44 Medida
Introducir el electrodo en la muestra a analizar cuya temperatura deberaacute estar comprendida
entre 20 y 25oC y tan proacutexima como sea posible a 20
oC Leer directamente el valor del pH
Efectuacuteense al menos 2 determinaciones de cada muestra Tomar como resultado la media
aritmeacutetica de ambas determinaciones
5 Expresioacuten de los resultados
El pH de la solucioacuten al 25 (mm) (25oBrix) del mosto concentrado rectificado se expresaraacuten
con 2 decimales
6 Caracteriacutesticas del meacutetodo
Repetibilidad (r)
r = 007
Reproducibilidad (R)
R = 007
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
20
ANEXO J DIOacuteXIDO DE AZUFRE Tipo IV
1 Definiciones
Se denomina dioacutexido de azufre al dioacutexido de azufre presente en el mosto en las formas
siguientes H2SO
3 H SO3
- cuyo equilibrio es funcioacuten del pH y de la temperatura
H2SO
3 H
+ + HSO
3
macr
H2SO
3 representa el dioacutexido de azufre molecular
Se denomina dioacutexido de azufre total al conjunto de las distintas formas de dioacutexido de azufre
presentes en el mosto en estado libre o combinado con sus componentes
2 Materiales
Se extrae el dioacutexido de azufre total por arrastre en caliente (aproximadamente 100oC) del
mosto concentrado rectificado previamente diluido
21 Reactivos
211 Aacutecido fosfoacuterico al 85 H3PO4 (ρ20 = 171 gml)
212 Solucioacuten de peroacutexido de hidroacutegeno de 91 gl H2O2 (3 voluacutemenes)
213 Reactivo indicador
rojo de metilo hellip 100 mg
azul de metileno hellip 50 mg
Alcohol de 50 vol hellip100 ml
214 Solucioacuten de hidroacutexido de sodio (NaOH) 001 M
22 Material
221 El material utilizado debe ajustarse al esquema que figura a continuacioacuten
principalmente en lo que se refiere al refrigerante
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
21
Figura 1
Las dimensiones estaacuten indicadas en miliacutemetros Los diaacutemetros internos de los 4 tubos
conceacutentricos que constituyen el refrigerante son 45 34 27 y 10 mm
El tubo de conduccioacuten de los gases al borboteador B termina en una pequentildea esfera de 1 cm
de diaacutemetro que lleva en su mayor ciacuterculo horizontal 20 agujeros de 02 mm de diaacutemetro
Tambieacuten puede terminar en una placa de vidrio fritado que garantice la formacioacuten de gran
nuacutemero de pequentildeas burbujas realizando asiacute un buen contacto entre las fases gaseosa y
liacutequida
El flujo de gas que debe recorrer el aparato debe ser de 40 lh aproximadamente El frasco
situado a la derecha del aparato de destina a limitar de 20 a 30 cm de agua la depresioacuten
producida por la trompa de agua Para poder regular dicha depresioacuten de forma que el caudal
sea el correcto conviene colocar un medidor de flujo de tubo semicapilar entre el borboteador
y el frasco
222 Una microbureta
3 Procedimiento
31 En el caso del mosto concentrado rectificado utilizar la solucioacuten obtenida diluyendo la
muestra para analizar al 40 (mv) tal y como se indica en el capiacutetulo laquoAcidez totalraquo en el
apartado 51 En el matraz A de 250 ml del aparato de arrastre introducir 50 ml de esta
solucioacuten y 5 ml de aacutecido fosfoacuterico (2 11) Acoplar el matraz al aparato
32 Introducir en el borboteador B de 2 a 3 ml de solucioacuten de peroacutexido de hidroacutegeno (212)
neutralizarla con la solucioacuten 001 M de hidroacutexido soacutedico (214) llevar a ebullicioacuten el mosto
contenido en el matraz A con una pequentildea llama de 4 a 5 cm de altura que debe tocar
ligeramente el fondo del matraz No colocar bajo el matraz ninguna tela metaacutelica sino
depositarlo sobre un disco perforado con un agujero de 30 mm de diaacutemetro Se evita asiacute la
pirogenacioacuten de las materias extractivas de la muestra sobre las paredes del matraz
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
22
Mantener la ebullicioacuten durante el paso de la corriente de aire (o de nitroacutegeno) En 15 minutos
el dioacutexido de azufre total habraacute sido arrastrado y oxidado Valorar el aacutecido sulfuacuterico formado
con la solucioacuten 001 M de hidroacutexido soacutedico (214) Sea n el nuacutemero de mililitros utilizados
4 Caacutelculo
Dioacutexido de azufre en miligramos por kilo de azuacutecares totales (muestra 50 ml de muestra
preparada (31))
(1600 n)P
P = contenido en (mm) de azuacutecares totales
5 Expresioacuten de los resultados
El dioacutexido de azufre total se expresa en miligramos por kilogramo (mgkg) de azuacutecares
totales
6 Caracteriacutesticas del meacutetodo
Repetibilidad (r)
muestra de 50 ml lt 50 mgl r = 1x 250P mgkg de azuacutecares totales
Reproducibilidad (R)
muestra de 50 ml lt 50 mgl R = 9x 250P mgkg de azuacutecares totales
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
23
ANEXO K CARACTERIacuteSTICAS CROMAacuteTICAS Tipo IV
1 Fundamento
Medida de la absorbancia a 425 nm en cubetas de 1 cm de espesor del mosto concentrado
rectificado cuya concentracioacuten en azuacutecares se haya reducido al 25 (mm) (25o Brix)
2 Material
21 Espectrofotoacutemetro que permita efectuar medidas entre 300 y 700 nm
22 Cubetas de vidrio con un trayecto oacuteptico de 1 cm
23 Filtro con membrana y de una porosidad de 045 μm
3 Procedimiento
31 Preparacioacuten de la muestra
Utilizar una solucioacuten cuyo valor en azuacutecares sea del 25 (mm) (25o
Brix) y que se habraacute
preparado del modo indicado en el capiacutetulo laquopHraquo (41) Filtrarla en un filtro con membrana
de una porosidad de 045 μm
32 Determinacioacuten de la absorbancia
Ajustar a cero para la longitud de onda 425 nm en una cubeta de 1 cm de trayecto oacuteptico que
contenga agua destilada
Determinar la absorbancia A a esta longitud de onda de la solucioacuten al 25 de
azuacutecares (25oBrix) obtenida en el apartado 31 y colocada en una cubeta de 1 cm de trayecto
oacuteptico
4 Expresioacuten de los resultados
La absorbancia a 425 nm del mosto concentrado rectificado en solucioacuten al 25 (mm) de
azuacutecares (25o Brix) se expresaraacute con 2 decimales
Repetibilidad (r)
r = 001 U Abs agrave 25degBrix
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
6
Flujo de la fase moacutevil 15 mlmin (a tiacutetulo indicativo)
312 Equipo de filtracioacuten por membrana (045 microm)
4 Procedimiento
41 Preparacioacuten de la muestra
Utilizar la solucioacuten obtenida diluyendo el mosto concentrado rectificado al 40
(mv) (introducir 200 g de mosto concentrado rectificado pesado exactamente en un
matraz aforado de 500 ml enrasar con agua y homogeneizar) y filtrarla por
membrana (045 microm)
42 Determinacioacuten cromatograacutefica
Inyectar en el cromatoacutegrafo 5 (o 10) microl de la muestra preparada del modo indicado en
el punto 41 y 5 (o 10) microl de solucioacuten de referencia de hidroximetilfurfural (punto
325) Registrar el cromatograma
El periacuteodo de retencioacuten del hidroximetilfurfural es de aproximadamente 6 oacute 7
minutos
El volumen inyectado y la secuencia se dan a tiacutetulo orientativo La determinacioacuten
cromatograacutefica puede realizarse tambieacuten con una curva de calibracioacuten
5 Expresioacuten de los resultados
El contenido en hidroximetilfurfural del mosto concentrado rectificado se expresa en
miligramos por kilogramo de azuacutecares totales
51 Modo de caacutelculo
Sea C mgl el contenido en hidroximetilfurfural de la solucioacuten de mosto concentrado
rectificado al 40 (mv)
El contenido en hidroximetilfurfural en miligramos por kilogramo de azuacutecares totales
viene expresado por
250 CP
P = contenido (mm) en azuacutecares totales del mosto concentrado
rectificado
6 Caracteriacutesticas del meacutetodo
Repetibilidad (r)
r = 05 mgkg azuacutecares totales
Reproducibilidad (R)
R = 30 mgkg azuacutecares totales
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
7
ANEXO E DETERMINACIOacuteN DEL GRADO ALCOHOacuteLICO VOLUMEacuteTRICO
ADQUIRIDO (GAV) DE LOS MOSTOS CONCENTRADOS (O DE LOS MOSTOS
CONCENTRADOS RECTIFICADOS MCR) Tipo IV
1 Introduccioacuten
Los mostos concentrados y los azuacutecares de uva (MCR) son productos espesos con un bajo
contenido de alcohol la determinacioacuten de su GAV adquirido requiere el uso de un meacutetodo
cuyos resultados (linealidad repetibilidad reproducibilidad especificidad liacutemites de
deteccioacuten y de cuantificacioacuten) permitan medir contenidos de alcohol inferiores al 1vol
2 Campo de aplicacioacuten
Este meacutetodo se aplica a los mostos concentrados y a las azuacutecares de uva
3 Principio
A Una masa conocida de mosto concentrado (MC) o de azuacutecar de uva se alcaliniza
mediante suspensioacuten de hidroacutexido de calcio y luego se destila El grado alcohoacutelico
volumeacutetrico del destilado se determina mediante densimetriacutea electroacutenica o por
densimetriacutea usando una balanza hidrostaacutetica
4 Reactivos
- Suspensioacuten de hidroacutexido de calcio 2M de calidad analiacutetica obtenido vertiendo con
precaucioacuten un litro de agua caliente (60 a 70 degC) en aproximadamente 120 g de cal viva
(CaO)
- Solucioacuten antiespumante obtenida por dilucioacuten de 2 ml de antiespumante de silicona
concentrada en 100 ml de agua
- Agua purificada para laboratorio de calidad EN ISO 3696
5 Material
- Material corriente de laboratorio matraces de 200 ml
- Balanza analiacutetica para pesar hasta 01 g aproximadamente
- Cualquier tipo de equipo de destilacioacuten o destilacioacuten al vapor puede usarse si cumple la
siguiente prueba
Destilar una mezcla de etanol y agua con un grado alcohoacutelico de 10 vol cinco veces
consecutivas
El destilado debe tener un grado alcohoacutelico de al menos 99 vol despueacutes de la quinta
destilacioacuten esto es la peacuterdida de alcohol durante cada destilacioacuten no deberiacutea ser superior a
002 vol
- Densiacutemetro electroacutenico con un resonador de flexioacuten o densiacutemetro con balanza hidrostaacutetica
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
8
6 Procedimiento
- Homogeneizar la muestra dando vueltas al matraz
- En un matraz aforado de 500 ml pesar aproximadamente 200 g de mosto concentrado o
rectificado (con una precisioacuten de hasta 01 g aproximadamente) Anotar el peso (PE) de esta
muestra Completar hasta la raya de graduacioacuten con agua desionizada Esta solucioacuten es de
40 pv en mosto
Obtencioacuten del destilado
- Traspasar 250 ml de la solucioacuten al 40 al matraz de destilar Antildeadir en el matraz
aproximadamente 10 ml de suspensioacuten de hidroacutexido de calcio aproximadamente 5 ml de
solucioacuten antiespumante y llegado el caso un regulador de ebullicioacuten (fragmentos de
porcelana por ejemplo)
- Llevar al punto de ebullicioacuten con suavidad
- Recoger el destilado en un matraz aforado de 200 100 ml (aproximadamente 190 90 ml)
- Dejar que el destilado llegue a la temperatura ambiente y completar hasta la raya de la
graduacioacuten con agua desionizada
Medicioacuten del GAV
Se lleva a cabo mediante densimetriacutea electroacutenica o balanza hidrostaacutetica
7 Caacutelculo
Grado alcohoacutelico volumeacutetrico alcanzado = GAV medido X 200 X MV
PE
GAV medido = contenido de alcohol dado por el densiacutemetro como vol
PE = muestra de mosto concentrado o azuacutecar de uva en gramos
MV= densidad del mosto concentrado o del mosto concentrado rectificado en gml
Los resultados se expresan con dos decimales y se redondean hasta aproximadamente el
005vol
8 Caracteriacutesticas del meacutetodo
81 Linealidad de la respuesta
La linealidad del densiacutemetro para los valores de bajo GAV es uno de los paraacutemetros
criacuteticos de este meacutetodo Se preparoacute una gama patroacuten de 10 soluciones hidroalcohoacutelicas de
GAV comprendido entre 0 y 5 vol Cada solucioacuten se analizoacute tres veces
La respuesta del densiacutemetro es perfectamente lineal en este campo tal como lo
muestra la recta de calibracioacuten de la figura 1
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
9
Figura 1 Linealidad de la determinacioacuten del GAV por densimetriacutea electroacutenica entre 0 y
5vol
82 Especificidad del meacutetodo
El segundo punto criacutetico de este meacutetodo es la destilacioacuten de los mostos viscosos con pequentildeas
cantidades de alcohol Para comprobar la especificidad se antildeadieron cantidades conocidas de
etanol (de 025 vol a 5vol) a MC y a azuacutecares de uva Las muestras con esta adicioacuten se
destilaron en condiciones previamente definidas Los destilados se analizaron a continuacioacuten
mediante densimetriacutea electroacutenica y balanza electroacutenica
Los resultados aparecen en la tabla 1 siendo satisfactoria la tasa de recuperacioacuten
comprendida entre 88 y 99 Tal como se ve en la recta de la figura 2 el meacutetodo es
especiacutefico (pendiente cercana al 1 ordenada en el origen cercana al 0)
Muestra Contenido
inicial
(vol)
Contenido
antildeadido (vol)
Contenido
encontrado
(vol)
Tasa de
recuperacioacuten
()
MC 1 000 025 022 88
MC 1 000 100 098 98
Azuacutecar de uva
(MCR) 1
000 100 094 94
Azuacutecar de uva
(MCR) 1
000 200 197 99
MC 2 000 050 044 88
Azuacutecar de uva
(MCR) 2
000 500 494 99
Tabla 1 Tasa de recuperacioacuten de la determinacioacuten del GAV de los MC y de las azuacutecares de
uva
respuesta respuesta
Lineal (respuesta)
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
10
especificidad para Densimetriacutea electroacutenica
y = 09968x - 0039
000
100
200
300
400
500
600
000 100 200 300 400 500 600
contenido agregado (vol)
co
nte
nid
o r
ec
up
era
do
contenido agregado
contenido recuperado (medido - inicial)
Lineal (contenido recuperado (medido - inicial))
Figura 2 Especificidad de la determinacioacuten del GAV de los MC y de las azuacutecares de uva
83 Repetibilidad
La repetibilidad del meacutetodo se determinoacute a partir de 20 muestras de MC o de azuacutecar de uva
con y sin adicioacuten de alcohol Se analizoacute tres veces cada muestra para estar en condiciones
ideacutenticas Los liacutemites de repetibilidad obtenidos fueron los siguientes
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
11
Repetibilidad para densimetria electronica valor calculado
Desviacioacuten tiacutepica 0009
Coeficiente de variacioacuten o desviacioacuten tiacutepica
relativa en 09
liacutemite r 0024 vol
liacutemite r en 3
Repetibilidad para Balanza hidrostaacutetica Valor calculado
Desviacioacuten tiacutepica 0013
Coeficiente de variacioacuten o desviacioacuten tiacutepica
relativa en 17
Liacutemite r 0038 vol
Liacutemite r en 53
84 Reproducibilidad
La reproducibilidad de los resultados se determinoacute analizando el mismo mosto en doble en
diferentes fechas durante un periodo dado Los resultados aparecen en la tabla 3
Reproducibilidad para densimetria electronica valor calculado
Desviacioacuten tiacutepica 0043
Coeficiente de variacioacuten o desviacioacuten tiacutepica
relativa en 3
liacutemite R 012vol
liacutemite R en 9
Reproducibilidad para Balanza hidrostaacutetica Valor calculado
Desviacioacuten estaacutendar 0026
Coeficiente de variacioacuten o desviacioacuten tiacutepica relativa en
34
Liacutemite R 0076vol
Liacutemite R en 106
Tabla 3- Reproducibilidad de la determinacioacuten del GAV de los MC y de las azuacutecares de uva
85 Liacutemites de deteccioacuten y de cuantificacioacuten
Los liacutemites de deteccioacuten (LD) y de cuantificacioacuten (LQ) estimados a partir del estudio de
linealidad son los siguientes
LD = 001 vol LQ = 005vol
El liacutemite de cuantificacioacuten se verificoacute analizando los mostos cuyo GAV teniacutea un nivel de
concentracioacuten de 005vol
Tabla 2 Repetibilidad de la determinacioacuten del GAV de los MC y de las azuacutecares de uva
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
12
86 Incertidumbre
La incertidumbre se evaluoacute a partir de la desviacioacuten tiacutepica de la reproducibilidad y fue de
010vol
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
13
ANEXO G SACAROSA
(CROMATOGRAFIacuteA LIacuteQUIDA DE ALTO RENDIMIENTO) Tipo IV
1 Fundamento de los meacutetodos
Meacutetodo de deteccioacuten y determinacioacuten por cromatografiacutea liacutequida de alta resolucioacuten La
sacarosa se separa mediante una columna de siacutelice con alquilamina y se detecta por
refractometriacutea Para calcular la cantidad se establece una comparacioacuten con un patroacuten externo
analizado en las mismas condiciones
Notas
La autenticidad de un mosto o de un vino puede controlarse mediante el meacutetodo de RMN del
deuterio descrito para la deteccioacuten del enriquecimiento de mostos de mostos concentrados
rectificados y de vinos
Las condiciones de cromatografiacutea son presentadas a tiacutetulo orientativo
2 Reactivos
21 Agua purificada para uso de laboratorio de calidad corriente EN ISO 3696
22 Acetonitrilo (CH3CN) de calidad HPLC ndash Nuacutemero CAS 75-05-8
23 Sacarosa ndash Nuacutemero CAS 57-50-1
24 Fase moacutevil acetonitrilo-agua previamente filtrados por membrana (045 μm) (8020 vv)
(La composicioacuten de la fase moacutevil se da a tiacutetulo indicativo)
Antes de su utilizacioacuten se deberaacute desgasificar
25 Solucioacuten de referencia solucioacuten acuosa de sacarosa de 12 gl Filtrada por membrana
(045 μm) (La concentracioacuten de la solucioacuten de referencia se da a tiacutetulo indicativo)
3 Material
31 Cromatoacutegrafo de fase liacutequida de alta resolucioacuten dotado de
1) Inyector con loop de 10 μl (a tiacutetulo indicativo)
2) Un detector un refractoacutemetro diferencial o refractoacutemetro interferoacutemetro
3) Columna Alkylammina (25 cm de longitud por 4 mm de diaacutemetro interno) (a tiacutetulo
indicativo)
4) Precolumna de la misma fase (a tiacutetulo indicativo)
5) Un dispositivo para mantener aislado o a la misma temperatura (30 degC) el conjunto
formado por la precolumna y la columna
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
14
6) Un registrador o en su caso un integrador
7) Flujo de la fase moacutevil 1 mlmin (a tiacutetulo indicativo)
32 Dispositivo de filtracioacuten por membrana (045 μm)
4 Procedimiento
41 Preparacioacuten de la muestra
Utilizar la solucioacuten obtenida diluyendo el mosto concentrado rectificado al 40 (mv) tal
como se indica en el Anexo H del meacutetodo laquoAcidez totalraquo seccioacuten 51 y filtrarla por
membrana (045 μm)
42 Determinacioacuten cromatograacutefica
Inyectar sucesivamente en el cromatoacutegrafo 10 μl de la solucioacuten de referencia y 10 μl de la
muestra preparada como se indica en el punto 41
Repetir las inyecciones en el mismo orden
Registrar el cromatograma
El tiempo de retencioacuten de la sacarosa es de unos 10 minutos
El volumen de la muestra y la secuencia se dan a tiacutetulo orientativo La determinacioacuten
cromatograacutefica puede realizarse tambieacuten con una curva de calibracioacuten
5 Caacutelculo
Utilizar para el caacutelculo el promedio de 2 resultados de la solucioacuten de referencia y de la
muestra
Sea C gl el contenido en sacarosa de la solucioacuten de mosto concentrado rectificado al 40
(mv)
Contenido en sacarosa en gramos por kilogramo de mosto concentrado rectificado 25 ∙ C
6 Expresioacuten de resultados
La concentracioacuten de sacarosa se expresa en gramos por kilogramo con una cifra decimal
7 Caracteriacutesticas del meacutetodo
Repetibilidad (r)
r = 11 gkg mosto
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
15
ANEXO H ACIDEZ TOTAL Tipo IV
1 Definicioacuten
La acidez total de un mosto concentrado rectificado es la suma de los aacutecidos valorables
cuando se lleva el pH a 7 antildeadiendo una solucioacuten alcalina valorada El dioacutexido de carbono no
se incluye en la acidez total
2 Fundamento del meacutetodo
Valoracioacuten potenciomeacutetrica o valoracioacuten en presencia de azul de bromotimol como indicador
del final de reaccioacuten mediante comparacioacuten con un patroacuten de coloracioacuten
3 Reactivos
31 Soluciones tampones
311 pH 70
Fosfato monopotaacutesico (KH2PO4) 1073 g
Solucioacuten 1 M de hidroacutexido soacutedico (NaOH) 500 ml
Agua csp 1 000 ml
312 pH 40
Solucioacuten 005 M de ftalato aacutecido de potasio Solucioacuten con 10211 gl de ftalato aacutecido de
potasio (C8H5KO4) a 20 degC (duracioacuten maacutexima de la solucioacuten 2 meses)
Nota Tambieacuten pueden utilizarse soluciones tampones de referencia comerciales para las que
exista correspondencia con unidades del SI
Por ejemplo pH 1679 plusmn 001 a 25degC
pH 4005 plusmn 001 a 25degC
pH 7000 plusmn 001 a 25degC
32 Solucioacuten 01 M de hidroacutexido soacutedico (NaOH)
33 Solucioacuten de azul de bromotimol de 4 gl
Azul de bromotimol (C27H28Br2O5S)hellip 4 g
Alcohol neutro 96 vol hellip 200 ml
Una vez solubilizado antildeadir
Agua sin CO2 helliphelliphellip 200 ml
Solucioacuten 1 M de hidroacutexido soacutedico
csp coloracioacuten verdeazulada (pH 7) helliphelliphelliphellip75 ml
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
16
Agua csp helliphelliphellip 1000 ml
4 Equipo
41 Potencioacutemetro con escala graduada en unidades de pH y electrodos A tiacutetulo indicativo el
electrodo de vidrio debe conservarse en agua destilada El electrodo de calomelanos de
cloruro potaacutesico saturado debe conservarse en una solucioacuten saturada de cloruro potaacutesico
Generalmente se emplea un electrodo combinado que se conserva en agua destilada
42 Vasos de precipitados de 100 ml de capacidad
5 Procedimiento
51 Preparacioacuten de la muestra
Poner 200 g de mosto concentrado rectificado exactamente pesado en un matraz aforado de
500 ml Enrasar con agua Homogeneizar
52 Valoracioacuten potenciomeacutetrica
521 Puesta a cero del aparato
Se efectuaraacute antes de cada medida siguiendo las instrucciones dadas para el aparato utilizado
522 Calibrado del pH metro
El pH metro se debe calibrar a 20ordmC usando soluciones tampoacuten de referencia acopladas con el
SI Los valores de pH seleccionados deben abarcar la gama de valores que pueden encontrarse
en los mostos Si el pH metro usado no es compatible con la calibracioacuten a valores
suficientemente bajos se deberiacutea realizar una verificacioacuten usando una solucioacuten tampoacuten de
referenencia acoplada con el SI y que tenga un valor de pH cercano a los valores hallados en
los mostos
523 Teacutecnica de medicioacuten
En un vaso de precipitados (44) introducir 50 ml de la muestra preparada como se indica en
51 Antildeadir 10 ml de agua destilada aproximadamente y verter con una bureta la solucioacuten 01
M de hidroacutexido soacutedico (32) hasta que el pH sea igual a 7 a 20 degC La adicioacuten de la solucioacuten
alcalina debe realizarse lentamente agitando constantemente la solucioacuten Se denominara n el
nuacutemero de mililitros de NaOH 01 M utilizados
53 Valoracioacuten con indicador (azul de bromotimol)
531 Ensayo previo obtencioacuten del patroacuten de coloracioacuten
En un vaso de precipitados (44) echar 25 ml de agua destilada y hervida 1 ml de solucioacuten de
azul de bromotimol (33) y 50 ml de muestra preparada como se indica en (51) Antildeadir la
solucioacuten 01 M de hidroacutexido de sodio (32) hasta obtener una coloracioacuten verdeazulada Antildeadir
5 ml de la solucioacuten tampoacuten pH 7 (311)
532 Determinacioacuten
En un vaso de precipitados (44) echar 30 ml de agua destilada y hervida 1 ml de solucioacuten de
azul de bromotimol (33) y 50 ml de muestra preparada como se indica en (51) Antildeadir la
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
17
solucioacuten 01 M de hidroacutexido soacutedico (32) hasta obtener una coloracioacuten ideacutentica a la obtenida
en el ensayo previo (531) Se denominaraacute n al nuacutemero de mililitros de solucioacuten de hidroacutexido
soacutedico 01 M utilizados
6 Expresioacuten de los resultados
61 Meacutetodo de caacutelculo
Acidez total expresada en miliequivalentes por kilogramo de mosto concentrado rectificado
A = 5 n
Acidez total expresada en miliequivalentes por kilogramo de azuacutecares totales A = (500 n)P
P = contenido en (mm) de azuacutecares totales
Se daraacute con 1 decimal
7 Caracteriacutesticas del meacutetodo
Repetibilidad (r)
r = 04 meq kg azuacutecares totales
Reproducibilidad (R)
R = 24 meq kg azuacutecares totales
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
18
ANEXO I pH Tipo IV
1 Fundamento
Medida de la diferencia de potencial entre dos electrodos sumergidos en el liacutequido que se
estudia Uno de los dos electrodos tiene un potencial que es una funcioacuten definida del pH del
liacutequido el otro tiene un potencial fijo y conocido y constituye el electrodo de referencia
2 Reactivos
21 Soluciones tampoacuten
211 Solucioacuten saturada de tartrato aacutecido de potasio al menos de 57 gl de tartrato aacutecido de
potasio (C4H5KO6) a 20oC Esta solucioacuten puede conservarse hasta 2 meses en presencia de 01
g de timol por cada 200 ml)
pHtemperatura
357 a 20oC
356 a 25oC
355 a 30oC
212 Solucioacuten 005 M de ftalato aacutecido de potasio Solucioacuten con 10211 gl de ftalato aacutecido de
potasio (C8H5KO4) a 20 degC (duracioacuten maacutexima de la solucioacuten 2 meses)
pHtemperatura
3999 a 15oC
4003 a 20oC
4008 a 25oC
4015 a 30oC
213 Solucioacuten que contenga
Fosfato monopotaacutesico KH2PO4 hellip 3402 g
Fosfato bipotaacutesico K2HPO4 hellip 4354 g
Agua csp hellip 1 000 ml
(Duracioacuten maacutexima de la solucioacuten 2 meses)
pHtemperatura
690 a 15oC
688 a 20oC
686 a 25oC
685 a 30oC
Nota Tambieacuten pueden utilizarse soluciones tampones de referencia comerciales para las que
exista correspondencia con unidades del SI
Por ejemplo pH 1679 plusmn 001 a 25degC
pH 4005 plusmn 001 a 25degC
pH 7000 plusmn 001 a 25degC
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
19
3 Material
31 pH metro graduado en unidades de pH que permita efectuar medidas con una
aproximacioacuten de plusmn001 como miacutenimo
32 Electrodos
321 Electrodo de vidrio
322 Electrodo de referencia de calomelanos de cloruro potaacutesico saturado
323 O electrodo combinado
4 Procedimiento
41 Preparacioacuten de la muestra para anaacutelisis
Diluirlo con agua a fin de obtener una concentracioacuten de 25 plusmn 05 (mm) en azuacutecares totales
(25oBrix) Si P es el contenido en (mm) en azuacutecares totales del mosto concentrado
rectificado pesar una masa igual a 2 500 P y completar con agua hasta 100 g La
conductividad del agua utilizada deberaacute ser inferior a 2 microsiemens por centiacutemetro
42 Puesta a cero del aparato
Se efectuaraacute antes de cada medida siguiendo las instrucciones dadas para el aparato utilizado
43 Calibrado del pH metro
El pH metro se debe calibrar a 20ordmC usando soluciones tampoacuten de referencia acopladas con el
SI Los valores de pH seleccionados deben abarcar la gama de valores que pueden encontrarse
en los mostos Si el pH metro usado no es compatible con la calibracioacuten a valores
suficientemente bajos se deberiacutea realizar una verificacioacuten usando una solucioacuten tampoacuten de
referenencia acoplada con el SI y que tenga un valor de pH cercano a los valores hallados en
los mostos
44 Medida
Introducir el electrodo en la muestra a analizar cuya temperatura deberaacute estar comprendida
entre 20 y 25oC y tan proacutexima como sea posible a 20
oC Leer directamente el valor del pH
Efectuacuteense al menos 2 determinaciones de cada muestra Tomar como resultado la media
aritmeacutetica de ambas determinaciones
5 Expresioacuten de los resultados
El pH de la solucioacuten al 25 (mm) (25oBrix) del mosto concentrado rectificado se expresaraacuten
con 2 decimales
6 Caracteriacutesticas del meacutetodo
Repetibilidad (r)
r = 007
Reproducibilidad (R)
R = 007
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
20
ANEXO J DIOacuteXIDO DE AZUFRE Tipo IV
1 Definiciones
Se denomina dioacutexido de azufre al dioacutexido de azufre presente en el mosto en las formas
siguientes H2SO
3 H SO3
- cuyo equilibrio es funcioacuten del pH y de la temperatura
H2SO
3 H
+ + HSO
3
macr
H2SO
3 representa el dioacutexido de azufre molecular
Se denomina dioacutexido de azufre total al conjunto de las distintas formas de dioacutexido de azufre
presentes en el mosto en estado libre o combinado con sus componentes
2 Materiales
Se extrae el dioacutexido de azufre total por arrastre en caliente (aproximadamente 100oC) del
mosto concentrado rectificado previamente diluido
21 Reactivos
211 Aacutecido fosfoacuterico al 85 H3PO4 (ρ20 = 171 gml)
212 Solucioacuten de peroacutexido de hidroacutegeno de 91 gl H2O2 (3 voluacutemenes)
213 Reactivo indicador
rojo de metilo hellip 100 mg
azul de metileno hellip 50 mg
Alcohol de 50 vol hellip100 ml
214 Solucioacuten de hidroacutexido de sodio (NaOH) 001 M
22 Material
221 El material utilizado debe ajustarse al esquema que figura a continuacioacuten
principalmente en lo que se refiere al refrigerante
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
21
Figura 1
Las dimensiones estaacuten indicadas en miliacutemetros Los diaacutemetros internos de los 4 tubos
conceacutentricos que constituyen el refrigerante son 45 34 27 y 10 mm
El tubo de conduccioacuten de los gases al borboteador B termina en una pequentildea esfera de 1 cm
de diaacutemetro que lleva en su mayor ciacuterculo horizontal 20 agujeros de 02 mm de diaacutemetro
Tambieacuten puede terminar en una placa de vidrio fritado que garantice la formacioacuten de gran
nuacutemero de pequentildeas burbujas realizando asiacute un buen contacto entre las fases gaseosa y
liacutequida
El flujo de gas que debe recorrer el aparato debe ser de 40 lh aproximadamente El frasco
situado a la derecha del aparato de destina a limitar de 20 a 30 cm de agua la depresioacuten
producida por la trompa de agua Para poder regular dicha depresioacuten de forma que el caudal
sea el correcto conviene colocar un medidor de flujo de tubo semicapilar entre el borboteador
y el frasco
222 Una microbureta
3 Procedimiento
31 En el caso del mosto concentrado rectificado utilizar la solucioacuten obtenida diluyendo la
muestra para analizar al 40 (mv) tal y como se indica en el capiacutetulo laquoAcidez totalraquo en el
apartado 51 En el matraz A de 250 ml del aparato de arrastre introducir 50 ml de esta
solucioacuten y 5 ml de aacutecido fosfoacuterico (2 11) Acoplar el matraz al aparato
32 Introducir en el borboteador B de 2 a 3 ml de solucioacuten de peroacutexido de hidroacutegeno (212)
neutralizarla con la solucioacuten 001 M de hidroacutexido soacutedico (214) llevar a ebullicioacuten el mosto
contenido en el matraz A con una pequentildea llama de 4 a 5 cm de altura que debe tocar
ligeramente el fondo del matraz No colocar bajo el matraz ninguna tela metaacutelica sino
depositarlo sobre un disco perforado con un agujero de 30 mm de diaacutemetro Se evita asiacute la
pirogenacioacuten de las materias extractivas de la muestra sobre las paredes del matraz
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
22
Mantener la ebullicioacuten durante el paso de la corriente de aire (o de nitroacutegeno) En 15 minutos
el dioacutexido de azufre total habraacute sido arrastrado y oxidado Valorar el aacutecido sulfuacuterico formado
con la solucioacuten 001 M de hidroacutexido soacutedico (214) Sea n el nuacutemero de mililitros utilizados
4 Caacutelculo
Dioacutexido de azufre en miligramos por kilo de azuacutecares totales (muestra 50 ml de muestra
preparada (31))
(1600 n)P
P = contenido en (mm) de azuacutecares totales
5 Expresioacuten de los resultados
El dioacutexido de azufre total se expresa en miligramos por kilogramo (mgkg) de azuacutecares
totales
6 Caracteriacutesticas del meacutetodo
Repetibilidad (r)
muestra de 50 ml lt 50 mgl r = 1x 250P mgkg de azuacutecares totales
Reproducibilidad (R)
muestra de 50 ml lt 50 mgl R = 9x 250P mgkg de azuacutecares totales
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
23
ANEXO K CARACTERIacuteSTICAS CROMAacuteTICAS Tipo IV
1 Fundamento
Medida de la absorbancia a 425 nm en cubetas de 1 cm de espesor del mosto concentrado
rectificado cuya concentracioacuten en azuacutecares se haya reducido al 25 (mm) (25o Brix)
2 Material
21 Espectrofotoacutemetro que permita efectuar medidas entre 300 y 700 nm
22 Cubetas de vidrio con un trayecto oacuteptico de 1 cm
23 Filtro con membrana y de una porosidad de 045 μm
3 Procedimiento
31 Preparacioacuten de la muestra
Utilizar una solucioacuten cuyo valor en azuacutecares sea del 25 (mm) (25o
Brix) y que se habraacute
preparado del modo indicado en el capiacutetulo laquopHraquo (41) Filtrarla en un filtro con membrana
de una porosidad de 045 μm
32 Determinacioacuten de la absorbancia
Ajustar a cero para la longitud de onda 425 nm en una cubeta de 1 cm de trayecto oacuteptico que
contenga agua destilada
Determinar la absorbancia A a esta longitud de onda de la solucioacuten al 25 de
azuacutecares (25oBrix) obtenida en el apartado 31 y colocada en una cubeta de 1 cm de trayecto
oacuteptico
4 Expresioacuten de los resultados
La absorbancia a 425 nm del mosto concentrado rectificado en solucioacuten al 25 (mm) de
azuacutecares (25o Brix) se expresaraacute con 2 decimales
Repetibilidad (r)
r = 001 U Abs agrave 25degBrix
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
7
ANEXO E DETERMINACIOacuteN DEL GRADO ALCOHOacuteLICO VOLUMEacuteTRICO
ADQUIRIDO (GAV) DE LOS MOSTOS CONCENTRADOS (O DE LOS MOSTOS
CONCENTRADOS RECTIFICADOS MCR) Tipo IV
1 Introduccioacuten
Los mostos concentrados y los azuacutecares de uva (MCR) son productos espesos con un bajo
contenido de alcohol la determinacioacuten de su GAV adquirido requiere el uso de un meacutetodo
cuyos resultados (linealidad repetibilidad reproducibilidad especificidad liacutemites de
deteccioacuten y de cuantificacioacuten) permitan medir contenidos de alcohol inferiores al 1vol
2 Campo de aplicacioacuten
Este meacutetodo se aplica a los mostos concentrados y a las azuacutecares de uva
3 Principio
A Una masa conocida de mosto concentrado (MC) o de azuacutecar de uva se alcaliniza
mediante suspensioacuten de hidroacutexido de calcio y luego se destila El grado alcohoacutelico
volumeacutetrico del destilado se determina mediante densimetriacutea electroacutenica o por
densimetriacutea usando una balanza hidrostaacutetica
4 Reactivos
- Suspensioacuten de hidroacutexido de calcio 2M de calidad analiacutetica obtenido vertiendo con
precaucioacuten un litro de agua caliente (60 a 70 degC) en aproximadamente 120 g de cal viva
(CaO)
- Solucioacuten antiespumante obtenida por dilucioacuten de 2 ml de antiespumante de silicona
concentrada en 100 ml de agua
- Agua purificada para laboratorio de calidad EN ISO 3696
5 Material
- Material corriente de laboratorio matraces de 200 ml
- Balanza analiacutetica para pesar hasta 01 g aproximadamente
- Cualquier tipo de equipo de destilacioacuten o destilacioacuten al vapor puede usarse si cumple la
siguiente prueba
Destilar una mezcla de etanol y agua con un grado alcohoacutelico de 10 vol cinco veces
consecutivas
El destilado debe tener un grado alcohoacutelico de al menos 99 vol despueacutes de la quinta
destilacioacuten esto es la peacuterdida de alcohol durante cada destilacioacuten no deberiacutea ser superior a
002 vol
- Densiacutemetro electroacutenico con un resonador de flexioacuten o densiacutemetro con balanza hidrostaacutetica
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
8
6 Procedimiento
- Homogeneizar la muestra dando vueltas al matraz
- En un matraz aforado de 500 ml pesar aproximadamente 200 g de mosto concentrado o
rectificado (con una precisioacuten de hasta 01 g aproximadamente) Anotar el peso (PE) de esta
muestra Completar hasta la raya de graduacioacuten con agua desionizada Esta solucioacuten es de
40 pv en mosto
Obtencioacuten del destilado
- Traspasar 250 ml de la solucioacuten al 40 al matraz de destilar Antildeadir en el matraz
aproximadamente 10 ml de suspensioacuten de hidroacutexido de calcio aproximadamente 5 ml de
solucioacuten antiespumante y llegado el caso un regulador de ebullicioacuten (fragmentos de
porcelana por ejemplo)
- Llevar al punto de ebullicioacuten con suavidad
- Recoger el destilado en un matraz aforado de 200 100 ml (aproximadamente 190 90 ml)
- Dejar que el destilado llegue a la temperatura ambiente y completar hasta la raya de la
graduacioacuten con agua desionizada
Medicioacuten del GAV
Se lleva a cabo mediante densimetriacutea electroacutenica o balanza hidrostaacutetica
7 Caacutelculo
Grado alcohoacutelico volumeacutetrico alcanzado = GAV medido X 200 X MV
PE
GAV medido = contenido de alcohol dado por el densiacutemetro como vol
PE = muestra de mosto concentrado o azuacutecar de uva en gramos
MV= densidad del mosto concentrado o del mosto concentrado rectificado en gml
Los resultados se expresan con dos decimales y se redondean hasta aproximadamente el
005vol
8 Caracteriacutesticas del meacutetodo
81 Linealidad de la respuesta
La linealidad del densiacutemetro para los valores de bajo GAV es uno de los paraacutemetros
criacuteticos de este meacutetodo Se preparoacute una gama patroacuten de 10 soluciones hidroalcohoacutelicas de
GAV comprendido entre 0 y 5 vol Cada solucioacuten se analizoacute tres veces
La respuesta del densiacutemetro es perfectamente lineal en este campo tal como lo
muestra la recta de calibracioacuten de la figura 1
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
9
Figura 1 Linealidad de la determinacioacuten del GAV por densimetriacutea electroacutenica entre 0 y
5vol
82 Especificidad del meacutetodo
El segundo punto criacutetico de este meacutetodo es la destilacioacuten de los mostos viscosos con pequentildeas
cantidades de alcohol Para comprobar la especificidad se antildeadieron cantidades conocidas de
etanol (de 025 vol a 5vol) a MC y a azuacutecares de uva Las muestras con esta adicioacuten se
destilaron en condiciones previamente definidas Los destilados se analizaron a continuacioacuten
mediante densimetriacutea electroacutenica y balanza electroacutenica
Los resultados aparecen en la tabla 1 siendo satisfactoria la tasa de recuperacioacuten
comprendida entre 88 y 99 Tal como se ve en la recta de la figura 2 el meacutetodo es
especiacutefico (pendiente cercana al 1 ordenada en el origen cercana al 0)
Muestra Contenido
inicial
(vol)
Contenido
antildeadido (vol)
Contenido
encontrado
(vol)
Tasa de
recuperacioacuten
()
MC 1 000 025 022 88
MC 1 000 100 098 98
Azuacutecar de uva
(MCR) 1
000 100 094 94
Azuacutecar de uva
(MCR) 1
000 200 197 99
MC 2 000 050 044 88
Azuacutecar de uva
(MCR) 2
000 500 494 99
Tabla 1 Tasa de recuperacioacuten de la determinacioacuten del GAV de los MC y de las azuacutecares de
uva
respuesta respuesta
Lineal (respuesta)
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
10
especificidad para Densimetriacutea electroacutenica
y = 09968x - 0039
000
100
200
300
400
500
600
000 100 200 300 400 500 600
contenido agregado (vol)
co
nte
nid
o r
ec
up
era
do
contenido agregado
contenido recuperado (medido - inicial)
Lineal (contenido recuperado (medido - inicial))
Figura 2 Especificidad de la determinacioacuten del GAV de los MC y de las azuacutecares de uva
83 Repetibilidad
La repetibilidad del meacutetodo se determinoacute a partir de 20 muestras de MC o de azuacutecar de uva
con y sin adicioacuten de alcohol Se analizoacute tres veces cada muestra para estar en condiciones
ideacutenticas Los liacutemites de repetibilidad obtenidos fueron los siguientes
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
11
Repetibilidad para densimetria electronica valor calculado
Desviacioacuten tiacutepica 0009
Coeficiente de variacioacuten o desviacioacuten tiacutepica
relativa en 09
liacutemite r 0024 vol
liacutemite r en 3
Repetibilidad para Balanza hidrostaacutetica Valor calculado
Desviacioacuten tiacutepica 0013
Coeficiente de variacioacuten o desviacioacuten tiacutepica
relativa en 17
Liacutemite r 0038 vol
Liacutemite r en 53
84 Reproducibilidad
La reproducibilidad de los resultados se determinoacute analizando el mismo mosto en doble en
diferentes fechas durante un periodo dado Los resultados aparecen en la tabla 3
Reproducibilidad para densimetria electronica valor calculado
Desviacioacuten tiacutepica 0043
Coeficiente de variacioacuten o desviacioacuten tiacutepica
relativa en 3
liacutemite R 012vol
liacutemite R en 9
Reproducibilidad para Balanza hidrostaacutetica Valor calculado
Desviacioacuten estaacutendar 0026
Coeficiente de variacioacuten o desviacioacuten tiacutepica relativa en
34
Liacutemite R 0076vol
Liacutemite R en 106
Tabla 3- Reproducibilidad de la determinacioacuten del GAV de los MC y de las azuacutecares de uva
85 Liacutemites de deteccioacuten y de cuantificacioacuten
Los liacutemites de deteccioacuten (LD) y de cuantificacioacuten (LQ) estimados a partir del estudio de
linealidad son los siguientes
LD = 001 vol LQ = 005vol
El liacutemite de cuantificacioacuten se verificoacute analizando los mostos cuyo GAV teniacutea un nivel de
concentracioacuten de 005vol
Tabla 2 Repetibilidad de la determinacioacuten del GAV de los MC y de las azuacutecares de uva
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
12
86 Incertidumbre
La incertidumbre se evaluoacute a partir de la desviacioacuten tiacutepica de la reproducibilidad y fue de
010vol
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
13
ANEXO G SACAROSA
(CROMATOGRAFIacuteA LIacuteQUIDA DE ALTO RENDIMIENTO) Tipo IV
1 Fundamento de los meacutetodos
Meacutetodo de deteccioacuten y determinacioacuten por cromatografiacutea liacutequida de alta resolucioacuten La
sacarosa se separa mediante una columna de siacutelice con alquilamina y se detecta por
refractometriacutea Para calcular la cantidad se establece una comparacioacuten con un patroacuten externo
analizado en las mismas condiciones
Notas
La autenticidad de un mosto o de un vino puede controlarse mediante el meacutetodo de RMN del
deuterio descrito para la deteccioacuten del enriquecimiento de mostos de mostos concentrados
rectificados y de vinos
Las condiciones de cromatografiacutea son presentadas a tiacutetulo orientativo
2 Reactivos
21 Agua purificada para uso de laboratorio de calidad corriente EN ISO 3696
22 Acetonitrilo (CH3CN) de calidad HPLC ndash Nuacutemero CAS 75-05-8
23 Sacarosa ndash Nuacutemero CAS 57-50-1
24 Fase moacutevil acetonitrilo-agua previamente filtrados por membrana (045 μm) (8020 vv)
(La composicioacuten de la fase moacutevil se da a tiacutetulo indicativo)
Antes de su utilizacioacuten se deberaacute desgasificar
25 Solucioacuten de referencia solucioacuten acuosa de sacarosa de 12 gl Filtrada por membrana
(045 μm) (La concentracioacuten de la solucioacuten de referencia se da a tiacutetulo indicativo)
3 Material
31 Cromatoacutegrafo de fase liacutequida de alta resolucioacuten dotado de
1) Inyector con loop de 10 μl (a tiacutetulo indicativo)
2) Un detector un refractoacutemetro diferencial o refractoacutemetro interferoacutemetro
3) Columna Alkylammina (25 cm de longitud por 4 mm de diaacutemetro interno) (a tiacutetulo
indicativo)
4) Precolumna de la misma fase (a tiacutetulo indicativo)
5) Un dispositivo para mantener aislado o a la misma temperatura (30 degC) el conjunto
formado por la precolumna y la columna
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
14
6) Un registrador o en su caso un integrador
7) Flujo de la fase moacutevil 1 mlmin (a tiacutetulo indicativo)
32 Dispositivo de filtracioacuten por membrana (045 μm)
4 Procedimiento
41 Preparacioacuten de la muestra
Utilizar la solucioacuten obtenida diluyendo el mosto concentrado rectificado al 40 (mv) tal
como se indica en el Anexo H del meacutetodo laquoAcidez totalraquo seccioacuten 51 y filtrarla por
membrana (045 μm)
42 Determinacioacuten cromatograacutefica
Inyectar sucesivamente en el cromatoacutegrafo 10 μl de la solucioacuten de referencia y 10 μl de la
muestra preparada como se indica en el punto 41
Repetir las inyecciones en el mismo orden
Registrar el cromatograma
El tiempo de retencioacuten de la sacarosa es de unos 10 minutos
El volumen de la muestra y la secuencia se dan a tiacutetulo orientativo La determinacioacuten
cromatograacutefica puede realizarse tambieacuten con una curva de calibracioacuten
5 Caacutelculo
Utilizar para el caacutelculo el promedio de 2 resultados de la solucioacuten de referencia y de la
muestra
Sea C gl el contenido en sacarosa de la solucioacuten de mosto concentrado rectificado al 40
(mv)
Contenido en sacarosa en gramos por kilogramo de mosto concentrado rectificado 25 ∙ C
6 Expresioacuten de resultados
La concentracioacuten de sacarosa se expresa en gramos por kilogramo con una cifra decimal
7 Caracteriacutesticas del meacutetodo
Repetibilidad (r)
r = 11 gkg mosto
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
15
ANEXO H ACIDEZ TOTAL Tipo IV
1 Definicioacuten
La acidez total de un mosto concentrado rectificado es la suma de los aacutecidos valorables
cuando se lleva el pH a 7 antildeadiendo una solucioacuten alcalina valorada El dioacutexido de carbono no
se incluye en la acidez total
2 Fundamento del meacutetodo
Valoracioacuten potenciomeacutetrica o valoracioacuten en presencia de azul de bromotimol como indicador
del final de reaccioacuten mediante comparacioacuten con un patroacuten de coloracioacuten
3 Reactivos
31 Soluciones tampones
311 pH 70
Fosfato monopotaacutesico (KH2PO4) 1073 g
Solucioacuten 1 M de hidroacutexido soacutedico (NaOH) 500 ml
Agua csp 1 000 ml
312 pH 40
Solucioacuten 005 M de ftalato aacutecido de potasio Solucioacuten con 10211 gl de ftalato aacutecido de
potasio (C8H5KO4) a 20 degC (duracioacuten maacutexima de la solucioacuten 2 meses)
Nota Tambieacuten pueden utilizarse soluciones tampones de referencia comerciales para las que
exista correspondencia con unidades del SI
Por ejemplo pH 1679 plusmn 001 a 25degC
pH 4005 plusmn 001 a 25degC
pH 7000 plusmn 001 a 25degC
32 Solucioacuten 01 M de hidroacutexido soacutedico (NaOH)
33 Solucioacuten de azul de bromotimol de 4 gl
Azul de bromotimol (C27H28Br2O5S)hellip 4 g
Alcohol neutro 96 vol hellip 200 ml
Una vez solubilizado antildeadir
Agua sin CO2 helliphelliphellip 200 ml
Solucioacuten 1 M de hidroacutexido soacutedico
csp coloracioacuten verdeazulada (pH 7) helliphelliphelliphellip75 ml
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
16
Agua csp helliphelliphellip 1000 ml
4 Equipo
41 Potencioacutemetro con escala graduada en unidades de pH y electrodos A tiacutetulo indicativo el
electrodo de vidrio debe conservarse en agua destilada El electrodo de calomelanos de
cloruro potaacutesico saturado debe conservarse en una solucioacuten saturada de cloruro potaacutesico
Generalmente se emplea un electrodo combinado que se conserva en agua destilada
42 Vasos de precipitados de 100 ml de capacidad
5 Procedimiento
51 Preparacioacuten de la muestra
Poner 200 g de mosto concentrado rectificado exactamente pesado en un matraz aforado de
500 ml Enrasar con agua Homogeneizar
52 Valoracioacuten potenciomeacutetrica
521 Puesta a cero del aparato
Se efectuaraacute antes de cada medida siguiendo las instrucciones dadas para el aparato utilizado
522 Calibrado del pH metro
El pH metro se debe calibrar a 20ordmC usando soluciones tampoacuten de referencia acopladas con el
SI Los valores de pH seleccionados deben abarcar la gama de valores que pueden encontrarse
en los mostos Si el pH metro usado no es compatible con la calibracioacuten a valores
suficientemente bajos se deberiacutea realizar una verificacioacuten usando una solucioacuten tampoacuten de
referenencia acoplada con el SI y que tenga un valor de pH cercano a los valores hallados en
los mostos
523 Teacutecnica de medicioacuten
En un vaso de precipitados (44) introducir 50 ml de la muestra preparada como se indica en
51 Antildeadir 10 ml de agua destilada aproximadamente y verter con una bureta la solucioacuten 01
M de hidroacutexido soacutedico (32) hasta que el pH sea igual a 7 a 20 degC La adicioacuten de la solucioacuten
alcalina debe realizarse lentamente agitando constantemente la solucioacuten Se denominara n el
nuacutemero de mililitros de NaOH 01 M utilizados
53 Valoracioacuten con indicador (azul de bromotimol)
531 Ensayo previo obtencioacuten del patroacuten de coloracioacuten
En un vaso de precipitados (44) echar 25 ml de agua destilada y hervida 1 ml de solucioacuten de
azul de bromotimol (33) y 50 ml de muestra preparada como se indica en (51) Antildeadir la
solucioacuten 01 M de hidroacutexido de sodio (32) hasta obtener una coloracioacuten verdeazulada Antildeadir
5 ml de la solucioacuten tampoacuten pH 7 (311)
532 Determinacioacuten
En un vaso de precipitados (44) echar 30 ml de agua destilada y hervida 1 ml de solucioacuten de
azul de bromotimol (33) y 50 ml de muestra preparada como se indica en (51) Antildeadir la
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
17
solucioacuten 01 M de hidroacutexido soacutedico (32) hasta obtener una coloracioacuten ideacutentica a la obtenida
en el ensayo previo (531) Se denominaraacute n al nuacutemero de mililitros de solucioacuten de hidroacutexido
soacutedico 01 M utilizados
6 Expresioacuten de los resultados
61 Meacutetodo de caacutelculo
Acidez total expresada en miliequivalentes por kilogramo de mosto concentrado rectificado
A = 5 n
Acidez total expresada en miliequivalentes por kilogramo de azuacutecares totales A = (500 n)P
P = contenido en (mm) de azuacutecares totales
Se daraacute con 1 decimal
7 Caracteriacutesticas del meacutetodo
Repetibilidad (r)
r = 04 meq kg azuacutecares totales
Reproducibilidad (R)
R = 24 meq kg azuacutecares totales
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
18
ANEXO I pH Tipo IV
1 Fundamento
Medida de la diferencia de potencial entre dos electrodos sumergidos en el liacutequido que se
estudia Uno de los dos electrodos tiene un potencial que es una funcioacuten definida del pH del
liacutequido el otro tiene un potencial fijo y conocido y constituye el electrodo de referencia
2 Reactivos
21 Soluciones tampoacuten
211 Solucioacuten saturada de tartrato aacutecido de potasio al menos de 57 gl de tartrato aacutecido de
potasio (C4H5KO6) a 20oC Esta solucioacuten puede conservarse hasta 2 meses en presencia de 01
g de timol por cada 200 ml)
pHtemperatura
357 a 20oC
356 a 25oC
355 a 30oC
212 Solucioacuten 005 M de ftalato aacutecido de potasio Solucioacuten con 10211 gl de ftalato aacutecido de
potasio (C8H5KO4) a 20 degC (duracioacuten maacutexima de la solucioacuten 2 meses)
pHtemperatura
3999 a 15oC
4003 a 20oC
4008 a 25oC
4015 a 30oC
213 Solucioacuten que contenga
Fosfato monopotaacutesico KH2PO4 hellip 3402 g
Fosfato bipotaacutesico K2HPO4 hellip 4354 g
Agua csp hellip 1 000 ml
(Duracioacuten maacutexima de la solucioacuten 2 meses)
pHtemperatura
690 a 15oC
688 a 20oC
686 a 25oC
685 a 30oC
Nota Tambieacuten pueden utilizarse soluciones tampones de referencia comerciales para las que
exista correspondencia con unidades del SI
Por ejemplo pH 1679 plusmn 001 a 25degC
pH 4005 plusmn 001 a 25degC
pH 7000 plusmn 001 a 25degC
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
19
3 Material
31 pH metro graduado en unidades de pH que permita efectuar medidas con una
aproximacioacuten de plusmn001 como miacutenimo
32 Electrodos
321 Electrodo de vidrio
322 Electrodo de referencia de calomelanos de cloruro potaacutesico saturado
323 O electrodo combinado
4 Procedimiento
41 Preparacioacuten de la muestra para anaacutelisis
Diluirlo con agua a fin de obtener una concentracioacuten de 25 plusmn 05 (mm) en azuacutecares totales
(25oBrix) Si P es el contenido en (mm) en azuacutecares totales del mosto concentrado
rectificado pesar una masa igual a 2 500 P y completar con agua hasta 100 g La
conductividad del agua utilizada deberaacute ser inferior a 2 microsiemens por centiacutemetro
42 Puesta a cero del aparato
Se efectuaraacute antes de cada medida siguiendo las instrucciones dadas para el aparato utilizado
43 Calibrado del pH metro
El pH metro se debe calibrar a 20ordmC usando soluciones tampoacuten de referencia acopladas con el
SI Los valores de pH seleccionados deben abarcar la gama de valores que pueden encontrarse
en los mostos Si el pH metro usado no es compatible con la calibracioacuten a valores
suficientemente bajos se deberiacutea realizar una verificacioacuten usando una solucioacuten tampoacuten de
referenencia acoplada con el SI y que tenga un valor de pH cercano a los valores hallados en
los mostos
44 Medida
Introducir el electrodo en la muestra a analizar cuya temperatura deberaacute estar comprendida
entre 20 y 25oC y tan proacutexima como sea posible a 20
oC Leer directamente el valor del pH
Efectuacuteense al menos 2 determinaciones de cada muestra Tomar como resultado la media
aritmeacutetica de ambas determinaciones
5 Expresioacuten de los resultados
El pH de la solucioacuten al 25 (mm) (25oBrix) del mosto concentrado rectificado se expresaraacuten
con 2 decimales
6 Caracteriacutesticas del meacutetodo
Repetibilidad (r)
r = 007
Reproducibilidad (R)
R = 007
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
20
ANEXO J DIOacuteXIDO DE AZUFRE Tipo IV
1 Definiciones
Se denomina dioacutexido de azufre al dioacutexido de azufre presente en el mosto en las formas
siguientes H2SO
3 H SO3
- cuyo equilibrio es funcioacuten del pH y de la temperatura
H2SO
3 H
+ + HSO
3
macr
H2SO
3 representa el dioacutexido de azufre molecular
Se denomina dioacutexido de azufre total al conjunto de las distintas formas de dioacutexido de azufre
presentes en el mosto en estado libre o combinado con sus componentes
2 Materiales
Se extrae el dioacutexido de azufre total por arrastre en caliente (aproximadamente 100oC) del
mosto concentrado rectificado previamente diluido
21 Reactivos
211 Aacutecido fosfoacuterico al 85 H3PO4 (ρ20 = 171 gml)
212 Solucioacuten de peroacutexido de hidroacutegeno de 91 gl H2O2 (3 voluacutemenes)
213 Reactivo indicador
rojo de metilo hellip 100 mg
azul de metileno hellip 50 mg
Alcohol de 50 vol hellip100 ml
214 Solucioacuten de hidroacutexido de sodio (NaOH) 001 M
22 Material
221 El material utilizado debe ajustarse al esquema que figura a continuacioacuten
principalmente en lo que se refiere al refrigerante
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
21
Figura 1
Las dimensiones estaacuten indicadas en miliacutemetros Los diaacutemetros internos de los 4 tubos
conceacutentricos que constituyen el refrigerante son 45 34 27 y 10 mm
El tubo de conduccioacuten de los gases al borboteador B termina en una pequentildea esfera de 1 cm
de diaacutemetro que lleva en su mayor ciacuterculo horizontal 20 agujeros de 02 mm de diaacutemetro
Tambieacuten puede terminar en una placa de vidrio fritado que garantice la formacioacuten de gran
nuacutemero de pequentildeas burbujas realizando asiacute un buen contacto entre las fases gaseosa y
liacutequida
El flujo de gas que debe recorrer el aparato debe ser de 40 lh aproximadamente El frasco
situado a la derecha del aparato de destina a limitar de 20 a 30 cm de agua la depresioacuten
producida por la trompa de agua Para poder regular dicha depresioacuten de forma que el caudal
sea el correcto conviene colocar un medidor de flujo de tubo semicapilar entre el borboteador
y el frasco
222 Una microbureta
3 Procedimiento
31 En el caso del mosto concentrado rectificado utilizar la solucioacuten obtenida diluyendo la
muestra para analizar al 40 (mv) tal y como se indica en el capiacutetulo laquoAcidez totalraquo en el
apartado 51 En el matraz A de 250 ml del aparato de arrastre introducir 50 ml de esta
solucioacuten y 5 ml de aacutecido fosfoacuterico (2 11) Acoplar el matraz al aparato
32 Introducir en el borboteador B de 2 a 3 ml de solucioacuten de peroacutexido de hidroacutegeno (212)
neutralizarla con la solucioacuten 001 M de hidroacutexido soacutedico (214) llevar a ebullicioacuten el mosto
contenido en el matraz A con una pequentildea llama de 4 a 5 cm de altura que debe tocar
ligeramente el fondo del matraz No colocar bajo el matraz ninguna tela metaacutelica sino
depositarlo sobre un disco perforado con un agujero de 30 mm de diaacutemetro Se evita asiacute la
pirogenacioacuten de las materias extractivas de la muestra sobre las paredes del matraz
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
22
Mantener la ebullicioacuten durante el paso de la corriente de aire (o de nitroacutegeno) En 15 minutos
el dioacutexido de azufre total habraacute sido arrastrado y oxidado Valorar el aacutecido sulfuacuterico formado
con la solucioacuten 001 M de hidroacutexido soacutedico (214) Sea n el nuacutemero de mililitros utilizados
4 Caacutelculo
Dioacutexido de azufre en miligramos por kilo de azuacutecares totales (muestra 50 ml de muestra
preparada (31))
(1600 n)P
P = contenido en (mm) de azuacutecares totales
5 Expresioacuten de los resultados
El dioacutexido de azufre total se expresa en miligramos por kilogramo (mgkg) de azuacutecares
totales
6 Caracteriacutesticas del meacutetodo
Repetibilidad (r)
muestra de 50 ml lt 50 mgl r = 1x 250P mgkg de azuacutecares totales
Reproducibilidad (R)
muestra de 50 ml lt 50 mgl R = 9x 250P mgkg de azuacutecares totales
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
23
ANEXO K CARACTERIacuteSTICAS CROMAacuteTICAS Tipo IV
1 Fundamento
Medida de la absorbancia a 425 nm en cubetas de 1 cm de espesor del mosto concentrado
rectificado cuya concentracioacuten en azuacutecares se haya reducido al 25 (mm) (25o Brix)
2 Material
21 Espectrofotoacutemetro que permita efectuar medidas entre 300 y 700 nm
22 Cubetas de vidrio con un trayecto oacuteptico de 1 cm
23 Filtro con membrana y de una porosidad de 045 μm
3 Procedimiento
31 Preparacioacuten de la muestra
Utilizar una solucioacuten cuyo valor en azuacutecares sea del 25 (mm) (25o
Brix) y que se habraacute
preparado del modo indicado en el capiacutetulo laquopHraquo (41) Filtrarla en un filtro con membrana
de una porosidad de 045 μm
32 Determinacioacuten de la absorbancia
Ajustar a cero para la longitud de onda 425 nm en una cubeta de 1 cm de trayecto oacuteptico que
contenga agua destilada
Determinar la absorbancia A a esta longitud de onda de la solucioacuten al 25 de
azuacutecares (25oBrix) obtenida en el apartado 31 y colocada en una cubeta de 1 cm de trayecto
oacuteptico
4 Expresioacuten de los resultados
La absorbancia a 425 nm del mosto concentrado rectificado en solucioacuten al 25 (mm) de
azuacutecares (25o Brix) se expresaraacute con 2 decimales
Repetibilidad (r)
r = 001 U Abs agrave 25degBrix
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
8
6 Procedimiento
- Homogeneizar la muestra dando vueltas al matraz
- En un matraz aforado de 500 ml pesar aproximadamente 200 g de mosto concentrado o
rectificado (con una precisioacuten de hasta 01 g aproximadamente) Anotar el peso (PE) de esta
muestra Completar hasta la raya de graduacioacuten con agua desionizada Esta solucioacuten es de
40 pv en mosto
Obtencioacuten del destilado
- Traspasar 250 ml de la solucioacuten al 40 al matraz de destilar Antildeadir en el matraz
aproximadamente 10 ml de suspensioacuten de hidroacutexido de calcio aproximadamente 5 ml de
solucioacuten antiespumante y llegado el caso un regulador de ebullicioacuten (fragmentos de
porcelana por ejemplo)
- Llevar al punto de ebullicioacuten con suavidad
- Recoger el destilado en un matraz aforado de 200 100 ml (aproximadamente 190 90 ml)
- Dejar que el destilado llegue a la temperatura ambiente y completar hasta la raya de la
graduacioacuten con agua desionizada
Medicioacuten del GAV
Se lleva a cabo mediante densimetriacutea electroacutenica o balanza hidrostaacutetica
7 Caacutelculo
Grado alcohoacutelico volumeacutetrico alcanzado = GAV medido X 200 X MV
PE
GAV medido = contenido de alcohol dado por el densiacutemetro como vol
PE = muestra de mosto concentrado o azuacutecar de uva en gramos
MV= densidad del mosto concentrado o del mosto concentrado rectificado en gml
Los resultados se expresan con dos decimales y se redondean hasta aproximadamente el
005vol
8 Caracteriacutesticas del meacutetodo
81 Linealidad de la respuesta
La linealidad del densiacutemetro para los valores de bajo GAV es uno de los paraacutemetros
criacuteticos de este meacutetodo Se preparoacute una gama patroacuten de 10 soluciones hidroalcohoacutelicas de
GAV comprendido entre 0 y 5 vol Cada solucioacuten se analizoacute tres veces
La respuesta del densiacutemetro es perfectamente lineal en este campo tal como lo
muestra la recta de calibracioacuten de la figura 1
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
9
Figura 1 Linealidad de la determinacioacuten del GAV por densimetriacutea electroacutenica entre 0 y
5vol
82 Especificidad del meacutetodo
El segundo punto criacutetico de este meacutetodo es la destilacioacuten de los mostos viscosos con pequentildeas
cantidades de alcohol Para comprobar la especificidad se antildeadieron cantidades conocidas de
etanol (de 025 vol a 5vol) a MC y a azuacutecares de uva Las muestras con esta adicioacuten se
destilaron en condiciones previamente definidas Los destilados se analizaron a continuacioacuten
mediante densimetriacutea electroacutenica y balanza electroacutenica
Los resultados aparecen en la tabla 1 siendo satisfactoria la tasa de recuperacioacuten
comprendida entre 88 y 99 Tal como se ve en la recta de la figura 2 el meacutetodo es
especiacutefico (pendiente cercana al 1 ordenada en el origen cercana al 0)
Muestra Contenido
inicial
(vol)
Contenido
antildeadido (vol)
Contenido
encontrado
(vol)
Tasa de
recuperacioacuten
()
MC 1 000 025 022 88
MC 1 000 100 098 98
Azuacutecar de uva
(MCR) 1
000 100 094 94
Azuacutecar de uva
(MCR) 1
000 200 197 99
MC 2 000 050 044 88
Azuacutecar de uva
(MCR) 2
000 500 494 99
Tabla 1 Tasa de recuperacioacuten de la determinacioacuten del GAV de los MC y de las azuacutecares de
uva
respuesta respuesta
Lineal (respuesta)
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
10
especificidad para Densimetriacutea electroacutenica
y = 09968x - 0039
000
100
200
300
400
500
600
000 100 200 300 400 500 600
contenido agregado (vol)
co
nte
nid
o r
ec
up
era
do
contenido agregado
contenido recuperado (medido - inicial)
Lineal (contenido recuperado (medido - inicial))
Figura 2 Especificidad de la determinacioacuten del GAV de los MC y de las azuacutecares de uva
83 Repetibilidad
La repetibilidad del meacutetodo se determinoacute a partir de 20 muestras de MC o de azuacutecar de uva
con y sin adicioacuten de alcohol Se analizoacute tres veces cada muestra para estar en condiciones
ideacutenticas Los liacutemites de repetibilidad obtenidos fueron los siguientes
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
11
Repetibilidad para densimetria electronica valor calculado
Desviacioacuten tiacutepica 0009
Coeficiente de variacioacuten o desviacioacuten tiacutepica
relativa en 09
liacutemite r 0024 vol
liacutemite r en 3
Repetibilidad para Balanza hidrostaacutetica Valor calculado
Desviacioacuten tiacutepica 0013
Coeficiente de variacioacuten o desviacioacuten tiacutepica
relativa en 17
Liacutemite r 0038 vol
Liacutemite r en 53
84 Reproducibilidad
La reproducibilidad de los resultados se determinoacute analizando el mismo mosto en doble en
diferentes fechas durante un periodo dado Los resultados aparecen en la tabla 3
Reproducibilidad para densimetria electronica valor calculado
Desviacioacuten tiacutepica 0043
Coeficiente de variacioacuten o desviacioacuten tiacutepica
relativa en 3
liacutemite R 012vol
liacutemite R en 9
Reproducibilidad para Balanza hidrostaacutetica Valor calculado
Desviacioacuten estaacutendar 0026
Coeficiente de variacioacuten o desviacioacuten tiacutepica relativa en
34
Liacutemite R 0076vol
Liacutemite R en 106
Tabla 3- Reproducibilidad de la determinacioacuten del GAV de los MC y de las azuacutecares de uva
85 Liacutemites de deteccioacuten y de cuantificacioacuten
Los liacutemites de deteccioacuten (LD) y de cuantificacioacuten (LQ) estimados a partir del estudio de
linealidad son los siguientes
LD = 001 vol LQ = 005vol
El liacutemite de cuantificacioacuten se verificoacute analizando los mostos cuyo GAV teniacutea un nivel de
concentracioacuten de 005vol
Tabla 2 Repetibilidad de la determinacioacuten del GAV de los MC y de las azuacutecares de uva
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
12
86 Incertidumbre
La incertidumbre se evaluoacute a partir de la desviacioacuten tiacutepica de la reproducibilidad y fue de
010vol
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
13
ANEXO G SACAROSA
(CROMATOGRAFIacuteA LIacuteQUIDA DE ALTO RENDIMIENTO) Tipo IV
1 Fundamento de los meacutetodos
Meacutetodo de deteccioacuten y determinacioacuten por cromatografiacutea liacutequida de alta resolucioacuten La
sacarosa se separa mediante una columna de siacutelice con alquilamina y se detecta por
refractometriacutea Para calcular la cantidad se establece una comparacioacuten con un patroacuten externo
analizado en las mismas condiciones
Notas
La autenticidad de un mosto o de un vino puede controlarse mediante el meacutetodo de RMN del
deuterio descrito para la deteccioacuten del enriquecimiento de mostos de mostos concentrados
rectificados y de vinos
Las condiciones de cromatografiacutea son presentadas a tiacutetulo orientativo
2 Reactivos
21 Agua purificada para uso de laboratorio de calidad corriente EN ISO 3696
22 Acetonitrilo (CH3CN) de calidad HPLC ndash Nuacutemero CAS 75-05-8
23 Sacarosa ndash Nuacutemero CAS 57-50-1
24 Fase moacutevil acetonitrilo-agua previamente filtrados por membrana (045 μm) (8020 vv)
(La composicioacuten de la fase moacutevil se da a tiacutetulo indicativo)
Antes de su utilizacioacuten se deberaacute desgasificar
25 Solucioacuten de referencia solucioacuten acuosa de sacarosa de 12 gl Filtrada por membrana
(045 μm) (La concentracioacuten de la solucioacuten de referencia se da a tiacutetulo indicativo)
3 Material
31 Cromatoacutegrafo de fase liacutequida de alta resolucioacuten dotado de
1) Inyector con loop de 10 μl (a tiacutetulo indicativo)
2) Un detector un refractoacutemetro diferencial o refractoacutemetro interferoacutemetro
3) Columna Alkylammina (25 cm de longitud por 4 mm de diaacutemetro interno) (a tiacutetulo
indicativo)
4) Precolumna de la misma fase (a tiacutetulo indicativo)
5) Un dispositivo para mantener aislado o a la misma temperatura (30 degC) el conjunto
formado por la precolumna y la columna
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
14
6) Un registrador o en su caso un integrador
7) Flujo de la fase moacutevil 1 mlmin (a tiacutetulo indicativo)
32 Dispositivo de filtracioacuten por membrana (045 μm)
4 Procedimiento
41 Preparacioacuten de la muestra
Utilizar la solucioacuten obtenida diluyendo el mosto concentrado rectificado al 40 (mv) tal
como se indica en el Anexo H del meacutetodo laquoAcidez totalraquo seccioacuten 51 y filtrarla por
membrana (045 μm)
42 Determinacioacuten cromatograacutefica
Inyectar sucesivamente en el cromatoacutegrafo 10 μl de la solucioacuten de referencia y 10 μl de la
muestra preparada como se indica en el punto 41
Repetir las inyecciones en el mismo orden
Registrar el cromatograma
El tiempo de retencioacuten de la sacarosa es de unos 10 minutos
El volumen de la muestra y la secuencia se dan a tiacutetulo orientativo La determinacioacuten
cromatograacutefica puede realizarse tambieacuten con una curva de calibracioacuten
5 Caacutelculo
Utilizar para el caacutelculo el promedio de 2 resultados de la solucioacuten de referencia y de la
muestra
Sea C gl el contenido en sacarosa de la solucioacuten de mosto concentrado rectificado al 40
(mv)
Contenido en sacarosa en gramos por kilogramo de mosto concentrado rectificado 25 ∙ C
6 Expresioacuten de resultados
La concentracioacuten de sacarosa se expresa en gramos por kilogramo con una cifra decimal
7 Caracteriacutesticas del meacutetodo
Repetibilidad (r)
r = 11 gkg mosto
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
15
ANEXO H ACIDEZ TOTAL Tipo IV
1 Definicioacuten
La acidez total de un mosto concentrado rectificado es la suma de los aacutecidos valorables
cuando se lleva el pH a 7 antildeadiendo una solucioacuten alcalina valorada El dioacutexido de carbono no
se incluye en la acidez total
2 Fundamento del meacutetodo
Valoracioacuten potenciomeacutetrica o valoracioacuten en presencia de azul de bromotimol como indicador
del final de reaccioacuten mediante comparacioacuten con un patroacuten de coloracioacuten
3 Reactivos
31 Soluciones tampones
311 pH 70
Fosfato monopotaacutesico (KH2PO4) 1073 g
Solucioacuten 1 M de hidroacutexido soacutedico (NaOH) 500 ml
Agua csp 1 000 ml
312 pH 40
Solucioacuten 005 M de ftalato aacutecido de potasio Solucioacuten con 10211 gl de ftalato aacutecido de
potasio (C8H5KO4) a 20 degC (duracioacuten maacutexima de la solucioacuten 2 meses)
Nota Tambieacuten pueden utilizarse soluciones tampones de referencia comerciales para las que
exista correspondencia con unidades del SI
Por ejemplo pH 1679 plusmn 001 a 25degC
pH 4005 plusmn 001 a 25degC
pH 7000 plusmn 001 a 25degC
32 Solucioacuten 01 M de hidroacutexido soacutedico (NaOH)
33 Solucioacuten de azul de bromotimol de 4 gl
Azul de bromotimol (C27H28Br2O5S)hellip 4 g
Alcohol neutro 96 vol hellip 200 ml
Una vez solubilizado antildeadir
Agua sin CO2 helliphelliphellip 200 ml
Solucioacuten 1 M de hidroacutexido soacutedico
csp coloracioacuten verdeazulada (pH 7) helliphelliphelliphellip75 ml
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
16
Agua csp helliphelliphellip 1000 ml
4 Equipo
41 Potencioacutemetro con escala graduada en unidades de pH y electrodos A tiacutetulo indicativo el
electrodo de vidrio debe conservarse en agua destilada El electrodo de calomelanos de
cloruro potaacutesico saturado debe conservarse en una solucioacuten saturada de cloruro potaacutesico
Generalmente se emplea un electrodo combinado que se conserva en agua destilada
42 Vasos de precipitados de 100 ml de capacidad
5 Procedimiento
51 Preparacioacuten de la muestra
Poner 200 g de mosto concentrado rectificado exactamente pesado en un matraz aforado de
500 ml Enrasar con agua Homogeneizar
52 Valoracioacuten potenciomeacutetrica
521 Puesta a cero del aparato
Se efectuaraacute antes de cada medida siguiendo las instrucciones dadas para el aparato utilizado
522 Calibrado del pH metro
El pH metro se debe calibrar a 20ordmC usando soluciones tampoacuten de referencia acopladas con el
SI Los valores de pH seleccionados deben abarcar la gama de valores que pueden encontrarse
en los mostos Si el pH metro usado no es compatible con la calibracioacuten a valores
suficientemente bajos se deberiacutea realizar una verificacioacuten usando una solucioacuten tampoacuten de
referenencia acoplada con el SI y que tenga un valor de pH cercano a los valores hallados en
los mostos
523 Teacutecnica de medicioacuten
En un vaso de precipitados (44) introducir 50 ml de la muestra preparada como se indica en
51 Antildeadir 10 ml de agua destilada aproximadamente y verter con una bureta la solucioacuten 01
M de hidroacutexido soacutedico (32) hasta que el pH sea igual a 7 a 20 degC La adicioacuten de la solucioacuten
alcalina debe realizarse lentamente agitando constantemente la solucioacuten Se denominara n el
nuacutemero de mililitros de NaOH 01 M utilizados
53 Valoracioacuten con indicador (azul de bromotimol)
531 Ensayo previo obtencioacuten del patroacuten de coloracioacuten
En un vaso de precipitados (44) echar 25 ml de agua destilada y hervida 1 ml de solucioacuten de
azul de bromotimol (33) y 50 ml de muestra preparada como se indica en (51) Antildeadir la
solucioacuten 01 M de hidroacutexido de sodio (32) hasta obtener una coloracioacuten verdeazulada Antildeadir
5 ml de la solucioacuten tampoacuten pH 7 (311)
532 Determinacioacuten
En un vaso de precipitados (44) echar 30 ml de agua destilada y hervida 1 ml de solucioacuten de
azul de bromotimol (33) y 50 ml de muestra preparada como se indica en (51) Antildeadir la
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
17
solucioacuten 01 M de hidroacutexido soacutedico (32) hasta obtener una coloracioacuten ideacutentica a la obtenida
en el ensayo previo (531) Se denominaraacute n al nuacutemero de mililitros de solucioacuten de hidroacutexido
soacutedico 01 M utilizados
6 Expresioacuten de los resultados
61 Meacutetodo de caacutelculo
Acidez total expresada en miliequivalentes por kilogramo de mosto concentrado rectificado
A = 5 n
Acidez total expresada en miliequivalentes por kilogramo de azuacutecares totales A = (500 n)P
P = contenido en (mm) de azuacutecares totales
Se daraacute con 1 decimal
7 Caracteriacutesticas del meacutetodo
Repetibilidad (r)
r = 04 meq kg azuacutecares totales
Reproducibilidad (R)
R = 24 meq kg azuacutecares totales
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
18
ANEXO I pH Tipo IV
1 Fundamento
Medida de la diferencia de potencial entre dos electrodos sumergidos en el liacutequido que se
estudia Uno de los dos electrodos tiene un potencial que es una funcioacuten definida del pH del
liacutequido el otro tiene un potencial fijo y conocido y constituye el electrodo de referencia
2 Reactivos
21 Soluciones tampoacuten
211 Solucioacuten saturada de tartrato aacutecido de potasio al menos de 57 gl de tartrato aacutecido de
potasio (C4H5KO6) a 20oC Esta solucioacuten puede conservarse hasta 2 meses en presencia de 01
g de timol por cada 200 ml)
pHtemperatura
357 a 20oC
356 a 25oC
355 a 30oC
212 Solucioacuten 005 M de ftalato aacutecido de potasio Solucioacuten con 10211 gl de ftalato aacutecido de
potasio (C8H5KO4) a 20 degC (duracioacuten maacutexima de la solucioacuten 2 meses)
pHtemperatura
3999 a 15oC
4003 a 20oC
4008 a 25oC
4015 a 30oC
213 Solucioacuten que contenga
Fosfato monopotaacutesico KH2PO4 hellip 3402 g
Fosfato bipotaacutesico K2HPO4 hellip 4354 g
Agua csp hellip 1 000 ml
(Duracioacuten maacutexima de la solucioacuten 2 meses)
pHtemperatura
690 a 15oC
688 a 20oC
686 a 25oC
685 a 30oC
Nota Tambieacuten pueden utilizarse soluciones tampones de referencia comerciales para las que
exista correspondencia con unidades del SI
Por ejemplo pH 1679 plusmn 001 a 25degC
pH 4005 plusmn 001 a 25degC
pH 7000 plusmn 001 a 25degC
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
19
3 Material
31 pH metro graduado en unidades de pH que permita efectuar medidas con una
aproximacioacuten de plusmn001 como miacutenimo
32 Electrodos
321 Electrodo de vidrio
322 Electrodo de referencia de calomelanos de cloruro potaacutesico saturado
323 O electrodo combinado
4 Procedimiento
41 Preparacioacuten de la muestra para anaacutelisis
Diluirlo con agua a fin de obtener una concentracioacuten de 25 plusmn 05 (mm) en azuacutecares totales
(25oBrix) Si P es el contenido en (mm) en azuacutecares totales del mosto concentrado
rectificado pesar una masa igual a 2 500 P y completar con agua hasta 100 g La
conductividad del agua utilizada deberaacute ser inferior a 2 microsiemens por centiacutemetro
42 Puesta a cero del aparato
Se efectuaraacute antes de cada medida siguiendo las instrucciones dadas para el aparato utilizado
43 Calibrado del pH metro
El pH metro se debe calibrar a 20ordmC usando soluciones tampoacuten de referencia acopladas con el
SI Los valores de pH seleccionados deben abarcar la gama de valores que pueden encontrarse
en los mostos Si el pH metro usado no es compatible con la calibracioacuten a valores
suficientemente bajos se deberiacutea realizar una verificacioacuten usando una solucioacuten tampoacuten de
referenencia acoplada con el SI y que tenga un valor de pH cercano a los valores hallados en
los mostos
44 Medida
Introducir el electrodo en la muestra a analizar cuya temperatura deberaacute estar comprendida
entre 20 y 25oC y tan proacutexima como sea posible a 20
oC Leer directamente el valor del pH
Efectuacuteense al menos 2 determinaciones de cada muestra Tomar como resultado la media
aritmeacutetica de ambas determinaciones
5 Expresioacuten de los resultados
El pH de la solucioacuten al 25 (mm) (25oBrix) del mosto concentrado rectificado se expresaraacuten
con 2 decimales
6 Caracteriacutesticas del meacutetodo
Repetibilidad (r)
r = 007
Reproducibilidad (R)
R = 007
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
20
ANEXO J DIOacuteXIDO DE AZUFRE Tipo IV
1 Definiciones
Se denomina dioacutexido de azufre al dioacutexido de azufre presente en el mosto en las formas
siguientes H2SO
3 H SO3
- cuyo equilibrio es funcioacuten del pH y de la temperatura
H2SO
3 H
+ + HSO
3
macr
H2SO
3 representa el dioacutexido de azufre molecular
Se denomina dioacutexido de azufre total al conjunto de las distintas formas de dioacutexido de azufre
presentes en el mosto en estado libre o combinado con sus componentes
2 Materiales
Se extrae el dioacutexido de azufre total por arrastre en caliente (aproximadamente 100oC) del
mosto concentrado rectificado previamente diluido
21 Reactivos
211 Aacutecido fosfoacuterico al 85 H3PO4 (ρ20 = 171 gml)
212 Solucioacuten de peroacutexido de hidroacutegeno de 91 gl H2O2 (3 voluacutemenes)
213 Reactivo indicador
rojo de metilo hellip 100 mg
azul de metileno hellip 50 mg
Alcohol de 50 vol hellip100 ml
214 Solucioacuten de hidroacutexido de sodio (NaOH) 001 M
22 Material
221 El material utilizado debe ajustarse al esquema que figura a continuacioacuten
principalmente en lo que se refiere al refrigerante
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
21
Figura 1
Las dimensiones estaacuten indicadas en miliacutemetros Los diaacutemetros internos de los 4 tubos
conceacutentricos que constituyen el refrigerante son 45 34 27 y 10 mm
El tubo de conduccioacuten de los gases al borboteador B termina en una pequentildea esfera de 1 cm
de diaacutemetro que lleva en su mayor ciacuterculo horizontal 20 agujeros de 02 mm de diaacutemetro
Tambieacuten puede terminar en una placa de vidrio fritado que garantice la formacioacuten de gran
nuacutemero de pequentildeas burbujas realizando asiacute un buen contacto entre las fases gaseosa y
liacutequida
El flujo de gas que debe recorrer el aparato debe ser de 40 lh aproximadamente El frasco
situado a la derecha del aparato de destina a limitar de 20 a 30 cm de agua la depresioacuten
producida por la trompa de agua Para poder regular dicha depresioacuten de forma que el caudal
sea el correcto conviene colocar un medidor de flujo de tubo semicapilar entre el borboteador
y el frasco
222 Una microbureta
3 Procedimiento
31 En el caso del mosto concentrado rectificado utilizar la solucioacuten obtenida diluyendo la
muestra para analizar al 40 (mv) tal y como se indica en el capiacutetulo laquoAcidez totalraquo en el
apartado 51 En el matraz A de 250 ml del aparato de arrastre introducir 50 ml de esta
solucioacuten y 5 ml de aacutecido fosfoacuterico (2 11) Acoplar el matraz al aparato
32 Introducir en el borboteador B de 2 a 3 ml de solucioacuten de peroacutexido de hidroacutegeno (212)
neutralizarla con la solucioacuten 001 M de hidroacutexido soacutedico (214) llevar a ebullicioacuten el mosto
contenido en el matraz A con una pequentildea llama de 4 a 5 cm de altura que debe tocar
ligeramente el fondo del matraz No colocar bajo el matraz ninguna tela metaacutelica sino
depositarlo sobre un disco perforado con un agujero de 30 mm de diaacutemetro Se evita asiacute la
pirogenacioacuten de las materias extractivas de la muestra sobre las paredes del matraz
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
22
Mantener la ebullicioacuten durante el paso de la corriente de aire (o de nitroacutegeno) En 15 minutos
el dioacutexido de azufre total habraacute sido arrastrado y oxidado Valorar el aacutecido sulfuacuterico formado
con la solucioacuten 001 M de hidroacutexido soacutedico (214) Sea n el nuacutemero de mililitros utilizados
4 Caacutelculo
Dioacutexido de azufre en miligramos por kilo de azuacutecares totales (muestra 50 ml de muestra
preparada (31))
(1600 n)P
P = contenido en (mm) de azuacutecares totales
5 Expresioacuten de los resultados
El dioacutexido de azufre total se expresa en miligramos por kilogramo (mgkg) de azuacutecares
totales
6 Caracteriacutesticas del meacutetodo
Repetibilidad (r)
muestra de 50 ml lt 50 mgl r = 1x 250P mgkg de azuacutecares totales
Reproducibilidad (R)
muestra de 50 ml lt 50 mgl R = 9x 250P mgkg de azuacutecares totales
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
23
ANEXO K CARACTERIacuteSTICAS CROMAacuteTICAS Tipo IV
1 Fundamento
Medida de la absorbancia a 425 nm en cubetas de 1 cm de espesor del mosto concentrado
rectificado cuya concentracioacuten en azuacutecares se haya reducido al 25 (mm) (25o Brix)
2 Material
21 Espectrofotoacutemetro que permita efectuar medidas entre 300 y 700 nm
22 Cubetas de vidrio con un trayecto oacuteptico de 1 cm
23 Filtro con membrana y de una porosidad de 045 μm
3 Procedimiento
31 Preparacioacuten de la muestra
Utilizar una solucioacuten cuyo valor en azuacutecares sea del 25 (mm) (25o
Brix) y que se habraacute
preparado del modo indicado en el capiacutetulo laquopHraquo (41) Filtrarla en un filtro con membrana
de una porosidad de 045 μm
32 Determinacioacuten de la absorbancia
Ajustar a cero para la longitud de onda 425 nm en una cubeta de 1 cm de trayecto oacuteptico que
contenga agua destilada
Determinar la absorbancia A a esta longitud de onda de la solucioacuten al 25 de
azuacutecares (25oBrix) obtenida en el apartado 31 y colocada en una cubeta de 1 cm de trayecto
oacuteptico
4 Expresioacuten de los resultados
La absorbancia a 425 nm del mosto concentrado rectificado en solucioacuten al 25 (mm) de
azuacutecares (25o Brix) se expresaraacute con 2 decimales
Repetibilidad (r)
r = 001 U Abs agrave 25degBrix
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
9
Figura 1 Linealidad de la determinacioacuten del GAV por densimetriacutea electroacutenica entre 0 y
5vol
82 Especificidad del meacutetodo
El segundo punto criacutetico de este meacutetodo es la destilacioacuten de los mostos viscosos con pequentildeas
cantidades de alcohol Para comprobar la especificidad se antildeadieron cantidades conocidas de
etanol (de 025 vol a 5vol) a MC y a azuacutecares de uva Las muestras con esta adicioacuten se
destilaron en condiciones previamente definidas Los destilados se analizaron a continuacioacuten
mediante densimetriacutea electroacutenica y balanza electroacutenica
Los resultados aparecen en la tabla 1 siendo satisfactoria la tasa de recuperacioacuten
comprendida entre 88 y 99 Tal como se ve en la recta de la figura 2 el meacutetodo es
especiacutefico (pendiente cercana al 1 ordenada en el origen cercana al 0)
Muestra Contenido
inicial
(vol)
Contenido
antildeadido (vol)
Contenido
encontrado
(vol)
Tasa de
recuperacioacuten
()
MC 1 000 025 022 88
MC 1 000 100 098 98
Azuacutecar de uva
(MCR) 1
000 100 094 94
Azuacutecar de uva
(MCR) 1
000 200 197 99
MC 2 000 050 044 88
Azuacutecar de uva
(MCR) 2
000 500 494 99
Tabla 1 Tasa de recuperacioacuten de la determinacioacuten del GAV de los MC y de las azuacutecares de
uva
respuesta respuesta
Lineal (respuesta)
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
10
especificidad para Densimetriacutea electroacutenica
y = 09968x - 0039
000
100
200
300
400
500
600
000 100 200 300 400 500 600
contenido agregado (vol)
co
nte
nid
o r
ec
up
era
do
contenido agregado
contenido recuperado (medido - inicial)
Lineal (contenido recuperado (medido - inicial))
Figura 2 Especificidad de la determinacioacuten del GAV de los MC y de las azuacutecares de uva
83 Repetibilidad
La repetibilidad del meacutetodo se determinoacute a partir de 20 muestras de MC o de azuacutecar de uva
con y sin adicioacuten de alcohol Se analizoacute tres veces cada muestra para estar en condiciones
ideacutenticas Los liacutemites de repetibilidad obtenidos fueron los siguientes
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
11
Repetibilidad para densimetria electronica valor calculado
Desviacioacuten tiacutepica 0009
Coeficiente de variacioacuten o desviacioacuten tiacutepica
relativa en 09
liacutemite r 0024 vol
liacutemite r en 3
Repetibilidad para Balanza hidrostaacutetica Valor calculado
Desviacioacuten tiacutepica 0013
Coeficiente de variacioacuten o desviacioacuten tiacutepica
relativa en 17
Liacutemite r 0038 vol
Liacutemite r en 53
84 Reproducibilidad
La reproducibilidad de los resultados se determinoacute analizando el mismo mosto en doble en
diferentes fechas durante un periodo dado Los resultados aparecen en la tabla 3
Reproducibilidad para densimetria electronica valor calculado
Desviacioacuten tiacutepica 0043
Coeficiente de variacioacuten o desviacioacuten tiacutepica
relativa en 3
liacutemite R 012vol
liacutemite R en 9
Reproducibilidad para Balanza hidrostaacutetica Valor calculado
Desviacioacuten estaacutendar 0026
Coeficiente de variacioacuten o desviacioacuten tiacutepica relativa en
34
Liacutemite R 0076vol
Liacutemite R en 106
Tabla 3- Reproducibilidad de la determinacioacuten del GAV de los MC y de las azuacutecares de uva
85 Liacutemites de deteccioacuten y de cuantificacioacuten
Los liacutemites de deteccioacuten (LD) y de cuantificacioacuten (LQ) estimados a partir del estudio de
linealidad son los siguientes
LD = 001 vol LQ = 005vol
El liacutemite de cuantificacioacuten se verificoacute analizando los mostos cuyo GAV teniacutea un nivel de
concentracioacuten de 005vol
Tabla 2 Repetibilidad de la determinacioacuten del GAV de los MC y de las azuacutecares de uva
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
12
86 Incertidumbre
La incertidumbre se evaluoacute a partir de la desviacioacuten tiacutepica de la reproducibilidad y fue de
010vol
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
13
ANEXO G SACAROSA
(CROMATOGRAFIacuteA LIacuteQUIDA DE ALTO RENDIMIENTO) Tipo IV
1 Fundamento de los meacutetodos
Meacutetodo de deteccioacuten y determinacioacuten por cromatografiacutea liacutequida de alta resolucioacuten La
sacarosa se separa mediante una columna de siacutelice con alquilamina y se detecta por
refractometriacutea Para calcular la cantidad se establece una comparacioacuten con un patroacuten externo
analizado en las mismas condiciones
Notas
La autenticidad de un mosto o de un vino puede controlarse mediante el meacutetodo de RMN del
deuterio descrito para la deteccioacuten del enriquecimiento de mostos de mostos concentrados
rectificados y de vinos
Las condiciones de cromatografiacutea son presentadas a tiacutetulo orientativo
2 Reactivos
21 Agua purificada para uso de laboratorio de calidad corriente EN ISO 3696
22 Acetonitrilo (CH3CN) de calidad HPLC ndash Nuacutemero CAS 75-05-8
23 Sacarosa ndash Nuacutemero CAS 57-50-1
24 Fase moacutevil acetonitrilo-agua previamente filtrados por membrana (045 μm) (8020 vv)
(La composicioacuten de la fase moacutevil se da a tiacutetulo indicativo)
Antes de su utilizacioacuten se deberaacute desgasificar
25 Solucioacuten de referencia solucioacuten acuosa de sacarosa de 12 gl Filtrada por membrana
(045 μm) (La concentracioacuten de la solucioacuten de referencia se da a tiacutetulo indicativo)
3 Material
31 Cromatoacutegrafo de fase liacutequida de alta resolucioacuten dotado de
1) Inyector con loop de 10 μl (a tiacutetulo indicativo)
2) Un detector un refractoacutemetro diferencial o refractoacutemetro interferoacutemetro
3) Columna Alkylammina (25 cm de longitud por 4 mm de diaacutemetro interno) (a tiacutetulo
indicativo)
4) Precolumna de la misma fase (a tiacutetulo indicativo)
5) Un dispositivo para mantener aislado o a la misma temperatura (30 degC) el conjunto
formado por la precolumna y la columna
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
14
6) Un registrador o en su caso un integrador
7) Flujo de la fase moacutevil 1 mlmin (a tiacutetulo indicativo)
32 Dispositivo de filtracioacuten por membrana (045 μm)
4 Procedimiento
41 Preparacioacuten de la muestra
Utilizar la solucioacuten obtenida diluyendo el mosto concentrado rectificado al 40 (mv) tal
como se indica en el Anexo H del meacutetodo laquoAcidez totalraquo seccioacuten 51 y filtrarla por
membrana (045 μm)
42 Determinacioacuten cromatograacutefica
Inyectar sucesivamente en el cromatoacutegrafo 10 μl de la solucioacuten de referencia y 10 μl de la
muestra preparada como se indica en el punto 41
Repetir las inyecciones en el mismo orden
Registrar el cromatograma
El tiempo de retencioacuten de la sacarosa es de unos 10 minutos
El volumen de la muestra y la secuencia se dan a tiacutetulo orientativo La determinacioacuten
cromatograacutefica puede realizarse tambieacuten con una curva de calibracioacuten
5 Caacutelculo
Utilizar para el caacutelculo el promedio de 2 resultados de la solucioacuten de referencia y de la
muestra
Sea C gl el contenido en sacarosa de la solucioacuten de mosto concentrado rectificado al 40
(mv)
Contenido en sacarosa en gramos por kilogramo de mosto concentrado rectificado 25 ∙ C
6 Expresioacuten de resultados
La concentracioacuten de sacarosa se expresa en gramos por kilogramo con una cifra decimal
7 Caracteriacutesticas del meacutetodo
Repetibilidad (r)
r = 11 gkg mosto
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
15
ANEXO H ACIDEZ TOTAL Tipo IV
1 Definicioacuten
La acidez total de un mosto concentrado rectificado es la suma de los aacutecidos valorables
cuando se lleva el pH a 7 antildeadiendo una solucioacuten alcalina valorada El dioacutexido de carbono no
se incluye en la acidez total
2 Fundamento del meacutetodo
Valoracioacuten potenciomeacutetrica o valoracioacuten en presencia de azul de bromotimol como indicador
del final de reaccioacuten mediante comparacioacuten con un patroacuten de coloracioacuten
3 Reactivos
31 Soluciones tampones
311 pH 70
Fosfato monopotaacutesico (KH2PO4) 1073 g
Solucioacuten 1 M de hidroacutexido soacutedico (NaOH) 500 ml
Agua csp 1 000 ml
312 pH 40
Solucioacuten 005 M de ftalato aacutecido de potasio Solucioacuten con 10211 gl de ftalato aacutecido de
potasio (C8H5KO4) a 20 degC (duracioacuten maacutexima de la solucioacuten 2 meses)
Nota Tambieacuten pueden utilizarse soluciones tampones de referencia comerciales para las que
exista correspondencia con unidades del SI
Por ejemplo pH 1679 plusmn 001 a 25degC
pH 4005 plusmn 001 a 25degC
pH 7000 plusmn 001 a 25degC
32 Solucioacuten 01 M de hidroacutexido soacutedico (NaOH)
33 Solucioacuten de azul de bromotimol de 4 gl
Azul de bromotimol (C27H28Br2O5S)hellip 4 g
Alcohol neutro 96 vol hellip 200 ml
Una vez solubilizado antildeadir
Agua sin CO2 helliphelliphellip 200 ml
Solucioacuten 1 M de hidroacutexido soacutedico
csp coloracioacuten verdeazulada (pH 7) helliphelliphelliphellip75 ml
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
16
Agua csp helliphelliphellip 1000 ml
4 Equipo
41 Potencioacutemetro con escala graduada en unidades de pH y electrodos A tiacutetulo indicativo el
electrodo de vidrio debe conservarse en agua destilada El electrodo de calomelanos de
cloruro potaacutesico saturado debe conservarse en una solucioacuten saturada de cloruro potaacutesico
Generalmente se emplea un electrodo combinado que se conserva en agua destilada
42 Vasos de precipitados de 100 ml de capacidad
5 Procedimiento
51 Preparacioacuten de la muestra
Poner 200 g de mosto concentrado rectificado exactamente pesado en un matraz aforado de
500 ml Enrasar con agua Homogeneizar
52 Valoracioacuten potenciomeacutetrica
521 Puesta a cero del aparato
Se efectuaraacute antes de cada medida siguiendo las instrucciones dadas para el aparato utilizado
522 Calibrado del pH metro
El pH metro se debe calibrar a 20ordmC usando soluciones tampoacuten de referencia acopladas con el
SI Los valores de pH seleccionados deben abarcar la gama de valores que pueden encontrarse
en los mostos Si el pH metro usado no es compatible con la calibracioacuten a valores
suficientemente bajos se deberiacutea realizar una verificacioacuten usando una solucioacuten tampoacuten de
referenencia acoplada con el SI y que tenga un valor de pH cercano a los valores hallados en
los mostos
523 Teacutecnica de medicioacuten
En un vaso de precipitados (44) introducir 50 ml de la muestra preparada como se indica en
51 Antildeadir 10 ml de agua destilada aproximadamente y verter con una bureta la solucioacuten 01
M de hidroacutexido soacutedico (32) hasta que el pH sea igual a 7 a 20 degC La adicioacuten de la solucioacuten
alcalina debe realizarse lentamente agitando constantemente la solucioacuten Se denominara n el
nuacutemero de mililitros de NaOH 01 M utilizados
53 Valoracioacuten con indicador (azul de bromotimol)
531 Ensayo previo obtencioacuten del patroacuten de coloracioacuten
En un vaso de precipitados (44) echar 25 ml de agua destilada y hervida 1 ml de solucioacuten de
azul de bromotimol (33) y 50 ml de muestra preparada como se indica en (51) Antildeadir la
solucioacuten 01 M de hidroacutexido de sodio (32) hasta obtener una coloracioacuten verdeazulada Antildeadir
5 ml de la solucioacuten tampoacuten pH 7 (311)
532 Determinacioacuten
En un vaso de precipitados (44) echar 30 ml de agua destilada y hervida 1 ml de solucioacuten de
azul de bromotimol (33) y 50 ml de muestra preparada como se indica en (51) Antildeadir la
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
17
solucioacuten 01 M de hidroacutexido soacutedico (32) hasta obtener una coloracioacuten ideacutentica a la obtenida
en el ensayo previo (531) Se denominaraacute n al nuacutemero de mililitros de solucioacuten de hidroacutexido
soacutedico 01 M utilizados
6 Expresioacuten de los resultados
61 Meacutetodo de caacutelculo
Acidez total expresada en miliequivalentes por kilogramo de mosto concentrado rectificado
A = 5 n
Acidez total expresada en miliequivalentes por kilogramo de azuacutecares totales A = (500 n)P
P = contenido en (mm) de azuacutecares totales
Se daraacute con 1 decimal
7 Caracteriacutesticas del meacutetodo
Repetibilidad (r)
r = 04 meq kg azuacutecares totales
Reproducibilidad (R)
R = 24 meq kg azuacutecares totales
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
18
ANEXO I pH Tipo IV
1 Fundamento
Medida de la diferencia de potencial entre dos electrodos sumergidos en el liacutequido que se
estudia Uno de los dos electrodos tiene un potencial que es una funcioacuten definida del pH del
liacutequido el otro tiene un potencial fijo y conocido y constituye el electrodo de referencia
2 Reactivos
21 Soluciones tampoacuten
211 Solucioacuten saturada de tartrato aacutecido de potasio al menos de 57 gl de tartrato aacutecido de
potasio (C4H5KO6) a 20oC Esta solucioacuten puede conservarse hasta 2 meses en presencia de 01
g de timol por cada 200 ml)
pHtemperatura
357 a 20oC
356 a 25oC
355 a 30oC
212 Solucioacuten 005 M de ftalato aacutecido de potasio Solucioacuten con 10211 gl de ftalato aacutecido de
potasio (C8H5KO4) a 20 degC (duracioacuten maacutexima de la solucioacuten 2 meses)
pHtemperatura
3999 a 15oC
4003 a 20oC
4008 a 25oC
4015 a 30oC
213 Solucioacuten que contenga
Fosfato monopotaacutesico KH2PO4 hellip 3402 g
Fosfato bipotaacutesico K2HPO4 hellip 4354 g
Agua csp hellip 1 000 ml
(Duracioacuten maacutexima de la solucioacuten 2 meses)
pHtemperatura
690 a 15oC
688 a 20oC
686 a 25oC
685 a 30oC
Nota Tambieacuten pueden utilizarse soluciones tampones de referencia comerciales para las que
exista correspondencia con unidades del SI
Por ejemplo pH 1679 plusmn 001 a 25degC
pH 4005 plusmn 001 a 25degC
pH 7000 plusmn 001 a 25degC
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
19
3 Material
31 pH metro graduado en unidades de pH que permita efectuar medidas con una
aproximacioacuten de plusmn001 como miacutenimo
32 Electrodos
321 Electrodo de vidrio
322 Electrodo de referencia de calomelanos de cloruro potaacutesico saturado
323 O electrodo combinado
4 Procedimiento
41 Preparacioacuten de la muestra para anaacutelisis
Diluirlo con agua a fin de obtener una concentracioacuten de 25 plusmn 05 (mm) en azuacutecares totales
(25oBrix) Si P es el contenido en (mm) en azuacutecares totales del mosto concentrado
rectificado pesar una masa igual a 2 500 P y completar con agua hasta 100 g La
conductividad del agua utilizada deberaacute ser inferior a 2 microsiemens por centiacutemetro
42 Puesta a cero del aparato
Se efectuaraacute antes de cada medida siguiendo las instrucciones dadas para el aparato utilizado
43 Calibrado del pH metro
El pH metro se debe calibrar a 20ordmC usando soluciones tampoacuten de referencia acopladas con el
SI Los valores de pH seleccionados deben abarcar la gama de valores que pueden encontrarse
en los mostos Si el pH metro usado no es compatible con la calibracioacuten a valores
suficientemente bajos se deberiacutea realizar una verificacioacuten usando una solucioacuten tampoacuten de
referenencia acoplada con el SI y que tenga un valor de pH cercano a los valores hallados en
los mostos
44 Medida
Introducir el electrodo en la muestra a analizar cuya temperatura deberaacute estar comprendida
entre 20 y 25oC y tan proacutexima como sea posible a 20
oC Leer directamente el valor del pH
Efectuacuteense al menos 2 determinaciones de cada muestra Tomar como resultado la media
aritmeacutetica de ambas determinaciones
5 Expresioacuten de los resultados
El pH de la solucioacuten al 25 (mm) (25oBrix) del mosto concentrado rectificado se expresaraacuten
con 2 decimales
6 Caracteriacutesticas del meacutetodo
Repetibilidad (r)
r = 007
Reproducibilidad (R)
R = 007
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
20
ANEXO J DIOacuteXIDO DE AZUFRE Tipo IV
1 Definiciones
Se denomina dioacutexido de azufre al dioacutexido de azufre presente en el mosto en las formas
siguientes H2SO
3 H SO3
- cuyo equilibrio es funcioacuten del pH y de la temperatura
H2SO
3 H
+ + HSO
3
macr
H2SO
3 representa el dioacutexido de azufre molecular
Se denomina dioacutexido de azufre total al conjunto de las distintas formas de dioacutexido de azufre
presentes en el mosto en estado libre o combinado con sus componentes
2 Materiales
Se extrae el dioacutexido de azufre total por arrastre en caliente (aproximadamente 100oC) del
mosto concentrado rectificado previamente diluido
21 Reactivos
211 Aacutecido fosfoacuterico al 85 H3PO4 (ρ20 = 171 gml)
212 Solucioacuten de peroacutexido de hidroacutegeno de 91 gl H2O2 (3 voluacutemenes)
213 Reactivo indicador
rojo de metilo hellip 100 mg
azul de metileno hellip 50 mg
Alcohol de 50 vol hellip100 ml
214 Solucioacuten de hidroacutexido de sodio (NaOH) 001 M
22 Material
221 El material utilizado debe ajustarse al esquema que figura a continuacioacuten
principalmente en lo que se refiere al refrigerante
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
21
Figura 1
Las dimensiones estaacuten indicadas en miliacutemetros Los diaacutemetros internos de los 4 tubos
conceacutentricos que constituyen el refrigerante son 45 34 27 y 10 mm
El tubo de conduccioacuten de los gases al borboteador B termina en una pequentildea esfera de 1 cm
de diaacutemetro que lleva en su mayor ciacuterculo horizontal 20 agujeros de 02 mm de diaacutemetro
Tambieacuten puede terminar en una placa de vidrio fritado que garantice la formacioacuten de gran
nuacutemero de pequentildeas burbujas realizando asiacute un buen contacto entre las fases gaseosa y
liacutequida
El flujo de gas que debe recorrer el aparato debe ser de 40 lh aproximadamente El frasco
situado a la derecha del aparato de destina a limitar de 20 a 30 cm de agua la depresioacuten
producida por la trompa de agua Para poder regular dicha depresioacuten de forma que el caudal
sea el correcto conviene colocar un medidor de flujo de tubo semicapilar entre el borboteador
y el frasco
222 Una microbureta
3 Procedimiento
31 En el caso del mosto concentrado rectificado utilizar la solucioacuten obtenida diluyendo la
muestra para analizar al 40 (mv) tal y como se indica en el capiacutetulo laquoAcidez totalraquo en el
apartado 51 En el matraz A de 250 ml del aparato de arrastre introducir 50 ml de esta
solucioacuten y 5 ml de aacutecido fosfoacuterico (2 11) Acoplar el matraz al aparato
32 Introducir en el borboteador B de 2 a 3 ml de solucioacuten de peroacutexido de hidroacutegeno (212)
neutralizarla con la solucioacuten 001 M de hidroacutexido soacutedico (214) llevar a ebullicioacuten el mosto
contenido en el matraz A con una pequentildea llama de 4 a 5 cm de altura que debe tocar
ligeramente el fondo del matraz No colocar bajo el matraz ninguna tela metaacutelica sino
depositarlo sobre un disco perforado con un agujero de 30 mm de diaacutemetro Se evita asiacute la
pirogenacioacuten de las materias extractivas de la muestra sobre las paredes del matraz
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
22
Mantener la ebullicioacuten durante el paso de la corriente de aire (o de nitroacutegeno) En 15 minutos
el dioacutexido de azufre total habraacute sido arrastrado y oxidado Valorar el aacutecido sulfuacuterico formado
con la solucioacuten 001 M de hidroacutexido soacutedico (214) Sea n el nuacutemero de mililitros utilizados
4 Caacutelculo
Dioacutexido de azufre en miligramos por kilo de azuacutecares totales (muestra 50 ml de muestra
preparada (31))
(1600 n)P
P = contenido en (mm) de azuacutecares totales
5 Expresioacuten de los resultados
El dioacutexido de azufre total se expresa en miligramos por kilogramo (mgkg) de azuacutecares
totales
6 Caracteriacutesticas del meacutetodo
Repetibilidad (r)
muestra de 50 ml lt 50 mgl r = 1x 250P mgkg de azuacutecares totales
Reproducibilidad (R)
muestra de 50 ml lt 50 mgl R = 9x 250P mgkg de azuacutecares totales
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
23
ANEXO K CARACTERIacuteSTICAS CROMAacuteTICAS Tipo IV
1 Fundamento
Medida de la absorbancia a 425 nm en cubetas de 1 cm de espesor del mosto concentrado
rectificado cuya concentracioacuten en azuacutecares se haya reducido al 25 (mm) (25o Brix)
2 Material
21 Espectrofotoacutemetro que permita efectuar medidas entre 300 y 700 nm
22 Cubetas de vidrio con un trayecto oacuteptico de 1 cm
23 Filtro con membrana y de una porosidad de 045 μm
3 Procedimiento
31 Preparacioacuten de la muestra
Utilizar una solucioacuten cuyo valor en azuacutecares sea del 25 (mm) (25o
Brix) y que se habraacute
preparado del modo indicado en el capiacutetulo laquopHraquo (41) Filtrarla en un filtro con membrana
de una porosidad de 045 μm
32 Determinacioacuten de la absorbancia
Ajustar a cero para la longitud de onda 425 nm en una cubeta de 1 cm de trayecto oacuteptico que
contenga agua destilada
Determinar la absorbancia A a esta longitud de onda de la solucioacuten al 25 de
azuacutecares (25oBrix) obtenida en el apartado 31 y colocada en una cubeta de 1 cm de trayecto
oacuteptico
4 Expresioacuten de los resultados
La absorbancia a 425 nm del mosto concentrado rectificado en solucioacuten al 25 (mm) de
azuacutecares (25o Brix) se expresaraacute con 2 decimales
Repetibilidad (r)
r = 001 U Abs agrave 25degBrix
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
10
especificidad para Densimetriacutea electroacutenica
y = 09968x - 0039
000
100
200
300
400
500
600
000 100 200 300 400 500 600
contenido agregado (vol)
co
nte
nid
o r
ec
up
era
do
contenido agregado
contenido recuperado (medido - inicial)
Lineal (contenido recuperado (medido - inicial))
Figura 2 Especificidad de la determinacioacuten del GAV de los MC y de las azuacutecares de uva
83 Repetibilidad
La repetibilidad del meacutetodo se determinoacute a partir de 20 muestras de MC o de azuacutecar de uva
con y sin adicioacuten de alcohol Se analizoacute tres veces cada muestra para estar en condiciones
ideacutenticas Los liacutemites de repetibilidad obtenidos fueron los siguientes
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
11
Repetibilidad para densimetria electronica valor calculado
Desviacioacuten tiacutepica 0009
Coeficiente de variacioacuten o desviacioacuten tiacutepica
relativa en 09
liacutemite r 0024 vol
liacutemite r en 3
Repetibilidad para Balanza hidrostaacutetica Valor calculado
Desviacioacuten tiacutepica 0013
Coeficiente de variacioacuten o desviacioacuten tiacutepica
relativa en 17
Liacutemite r 0038 vol
Liacutemite r en 53
84 Reproducibilidad
La reproducibilidad de los resultados se determinoacute analizando el mismo mosto en doble en
diferentes fechas durante un periodo dado Los resultados aparecen en la tabla 3
Reproducibilidad para densimetria electronica valor calculado
Desviacioacuten tiacutepica 0043
Coeficiente de variacioacuten o desviacioacuten tiacutepica
relativa en 3
liacutemite R 012vol
liacutemite R en 9
Reproducibilidad para Balanza hidrostaacutetica Valor calculado
Desviacioacuten estaacutendar 0026
Coeficiente de variacioacuten o desviacioacuten tiacutepica relativa en
34
Liacutemite R 0076vol
Liacutemite R en 106
Tabla 3- Reproducibilidad de la determinacioacuten del GAV de los MC y de las azuacutecares de uva
85 Liacutemites de deteccioacuten y de cuantificacioacuten
Los liacutemites de deteccioacuten (LD) y de cuantificacioacuten (LQ) estimados a partir del estudio de
linealidad son los siguientes
LD = 001 vol LQ = 005vol
El liacutemite de cuantificacioacuten se verificoacute analizando los mostos cuyo GAV teniacutea un nivel de
concentracioacuten de 005vol
Tabla 2 Repetibilidad de la determinacioacuten del GAV de los MC y de las azuacutecares de uva
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
12
86 Incertidumbre
La incertidumbre se evaluoacute a partir de la desviacioacuten tiacutepica de la reproducibilidad y fue de
010vol
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
13
ANEXO G SACAROSA
(CROMATOGRAFIacuteA LIacuteQUIDA DE ALTO RENDIMIENTO) Tipo IV
1 Fundamento de los meacutetodos
Meacutetodo de deteccioacuten y determinacioacuten por cromatografiacutea liacutequida de alta resolucioacuten La
sacarosa se separa mediante una columna de siacutelice con alquilamina y se detecta por
refractometriacutea Para calcular la cantidad se establece una comparacioacuten con un patroacuten externo
analizado en las mismas condiciones
Notas
La autenticidad de un mosto o de un vino puede controlarse mediante el meacutetodo de RMN del
deuterio descrito para la deteccioacuten del enriquecimiento de mostos de mostos concentrados
rectificados y de vinos
Las condiciones de cromatografiacutea son presentadas a tiacutetulo orientativo
2 Reactivos
21 Agua purificada para uso de laboratorio de calidad corriente EN ISO 3696
22 Acetonitrilo (CH3CN) de calidad HPLC ndash Nuacutemero CAS 75-05-8
23 Sacarosa ndash Nuacutemero CAS 57-50-1
24 Fase moacutevil acetonitrilo-agua previamente filtrados por membrana (045 μm) (8020 vv)
(La composicioacuten de la fase moacutevil se da a tiacutetulo indicativo)
Antes de su utilizacioacuten se deberaacute desgasificar
25 Solucioacuten de referencia solucioacuten acuosa de sacarosa de 12 gl Filtrada por membrana
(045 μm) (La concentracioacuten de la solucioacuten de referencia se da a tiacutetulo indicativo)
3 Material
31 Cromatoacutegrafo de fase liacutequida de alta resolucioacuten dotado de
1) Inyector con loop de 10 μl (a tiacutetulo indicativo)
2) Un detector un refractoacutemetro diferencial o refractoacutemetro interferoacutemetro
3) Columna Alkylammina (25 cm de longitud por 4 mm de diaacutemetro interno) (a tiacutetulo
indicativo)
4) Precolumna de la misma fase (a tiacutetulo indicativo)
5) Un dispositivo para mantener aislado o a la misma temperatura (30 degC) el conjunto
formado por la precolumna y la columna
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
14
6) Un registrador o en su caso un integrador
7) Flujo de la fase moacutevil 1 mlmin (a tiacutetulo indicativo)
32 Dispositivo de filtracioacuten por membrana (045 μm)
4 Procedimiento
41 Preparacioacuten de la muestra
Utilizar la solucioacuten obtenida diluyendo el mosto concentrado rectificado al 40 (mv) tal
como se indica en el Anexo H del meacutetodo laquoAcidez totalraquo seccioacuten 51 y filtrarla por
membrana (045 μm)
42 Determinacioacuten cromatograacutefica
Inyectar sucesivamente en el cromatoacutegrafo 10 μl de la solucioacuten de referencia y 10 μl de la
muestra preparada como se indica en el punto 41
Repetir las inyecciones en el mismo orden
Registrar el cromatograma
El tiempo de retencioacuten de la sacarosa es de unos 10 minutos
El volumen de la muestra y la secuencia se dan a tiacutetulo orientativo La determinacioacuten
cromatograacutefica puede realizarse tambieacuten con una curva de calibracioacuten
5 Caacutelculo
Utilizar para el caacutelculo el promedio de 2 resultados de la solucioacuten de referencia y de la
muestra
Sea C gl el contenido en sacarosa de la solucioacuten de mosto concentrado rectificado al 40
(mv)
Contenido en sacarosa en gramos por kilogramo de mosto concentrado rectificado 25 ∙ C
6 Expresioacuten de resultados
La concentracioacuten de sacarosa se expresa en gramos por kilogramo con una cifra decimal
7 Caracteriacutesticas del meacutetodo
Repetibilidad (r)
r = 11 gkg mosto
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
15
ANEXO H ACIDEZ TOTAL Tipo IV
1 Definicioacuten
La acidez total de un mosto concentrado rectificado es la suma de los aacutecidos valorables
cuando se lleva el pH a 7 antildeadiendo una solucioacuten alcalina valorada El dioacutexido de carbono no
se incluye en la acidez total
2 Fundamento del meacutetodo
Valoracioacuten potenciomeacutetrica o valoracioacuten en presencia de azul de bromotimol como indicador
del final de reaccioacuten mediante comparacioacuten con un patroacuten de coloracioacuten
3 Reactivos
31 Soluciones tampones
311 pH 70
Fosfato monopotaacutesico (KH2PO4) 1073 g
Solucioacuten 1 M de hidroacutexido soacutedico (NaOH) 500 ml
Agua csp 1 000 ml
312 pH 40
Solucioacuten 005 M de ftalato aacutecido de potasio Solucioacuten con 10211 gl de ftalato aacutecido de
potasio (C8H5KO4) a 20 degC (duracioacuten maacutexima de la solucioacuten 2 meses)
Nota Tambieacuten pueden utilizarse soluciones tampones de referencia comerciales para las que
exista correspondencia con unidades del SI
Por ejemplo pH 1679 plusmn 001 a 25degC
pH 4005 plusmn 001 a 25degC
pH 7000 plusmn 001 a 25degC
32 Solucioacuten 01 M de hidroacutexido soacutedico (NaOH)
33 Solucioacuten de azul de bromotimol de 4 gl
Azul de bromotimol (C27H28Br2O5S)hellip 4 g
Alcohol neutro 96 vol hellip 200 ml
Una vez solubilizado antildeadir
Agua sin CO2 helliphelliphellip 200 ml
Solucioacuten 1 M de hidroacutexido soacutedico
csp coloracioacuten verdeazulada (pH 7) helliphelliphelliphellip75 ml
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
16
Agua csp helliphelliphellip 1000 ml
4 Equipo
41 Potencioacutemetro con escala graduada en unidades de pH y electrodos A tiacutetulo indicativo el
electrodo de vidrio debe conservarse en agua destilada El electrodo de calomelanos de
cloruro potaacutesico saturado debe conservarse en una solucioacuten saturada de cloruro potaacutesico
Generalmente se emplea un electrodo combinado que se conserva en agua destilada
42 Vasos de precipitados de 100 ml de capacidad
5 Procedimiento
51 Preparacioacuten de la muestra
Poner 200 g de mosto concentrado rectificado exactamente pesado en un matraz aforado de
500 ml Enrasar con agua Homogeneizar
52 Valoracioacuten potenciomeacutetrica
521 Puesta a cero del aparato
Se efectuaraacute antes de cada medida siguiendo las instrucciones dadas para el aparato utilizado
522 Calibrado del pH metro
El pH metro se debe calibrar a 20ordmC usando soluciones tampoacuten de referencia acopladas con el
SI Los valores de pH seleccionados deben abarcar la gama de valores que pueden encontrarse
en los mostos Si el pH metro usado no es compatible con la calibracioacuten a valores
suficientemente bajos se deberiacutea realizar una verificacioacuten usando una solucioacuten tampoacuten de
referenencia acoplada con el SI y que tenga un valor de pH cercano a los valores hallados en
los mostos
523 Teacutecnica de medicioacuten
En un vaso de precipitados (44) introducir 50 ml de la muestra preparada como se indica en
51 Antildeadir 10 ml de agua destilada aproximadamente y verter con una bureta la solucioacuten 01
M de hidroacutexido soacutedico (32) hasta que el pH sea igual a 7 a 20 degC La adicioacuten de la solucioacuten
alcalina debe realizarse lentamente agitando constantemente la solucioacuten Se denominara n el
nuacutemero de mililitros de NaOH 01 M utilizados
53 Valoracioacuten con indicador (azul de bromotimol)
531 Ensayo previo obtencioacuten del patroacuten de coloracioacuten
En un vaso de precipitados (44) echar 25 ml de agua destilada y hervida 1 ml de solucioacuten de
azul de bromotimol (33) y 50 ml de muestra preparada como se indica en (51) Antildeadir la
solucioacuten 01 M de hidroacutexido de sodio (32) hasta obtener una coloracioacuten verdeazulada Antildeadir
5 ml de la solucioacuten tampoacuten pH 7 (311)
532 Determinacioacuten
En un vaso de precipitados (44) echar 30 ml de agua destilada y hervida 1 ml de solucioacuten de
azul de bromotimol (33) y 50 ml de muestra preparada como se indica en (51) Antildeadir la
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
17
solucioacuten 01 M de hidroacutexido soacutedico (32) hasta obtener una coloracioacuten ideacutentica a la obtenida
en el ensayo previo (531) Se denominaraacute n al nuacutemero de mililitros de solucioacuten de hidroacutexido
soacutedico 01 M utilizados
6 Expresioacuten de los resultados
61 Meacutetodo de caacutelculo
Acidez total expresada en miliequivalentes por kilogramo de mosto concentrado rectificado
A = 5 n
Acidez total expresada en miliequivalentes por kilogramo de azuacutecares totales A = (500 n)P
P = contenido en (mm) de azuacutecares totales
Se daraacute con 1 decimal
7 Caracteriacutesticas del meacutetodo
Repetibilidad (r)
r = 04 meq kg azuacutecares totales
Reproducibilidad (R)
R = 24 meq kg azuacutecares totales
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
18
ANEXO I pH Tipo IV
1 Fundamento
Medida de la diferencia de potencial entre dos electrodos sumergidos en el liacutequido que se
estudia Uno de los dos electrodos tiene un potencial que es una funcioacuten definida del pH del
liacutequido el otro tiene un potencial fijo y conocido y constituye el electrodo de referencia
2 Reactivos
21 Soluciones tampoacuten
211 Solucioacuten saturada de tartrato aacutecido de potasio al menos de 57 gl de tartrato aacutecido de
potasio (C4H5KO6) a 20oC Esta solucioacuten puede conservarse hasta 2 meses en presencia de 01
g de timol por cada 200 ml)
pHtemperatura
357 a 20oC
356 a 25oC
355 a 30oC
212 Solucioacuten 005 M de ftalato aacutecido de potasio Solucioacuten con 10211 gl de ftalato aacutecido de
potasio (C8H5KO4) a 20 degC (duracioacuten maacutexima de la solucioacuten 2 meses)
pHtemperatura
3999 a 15oC
4003 a 20oC
4008 a 25oC
4015 a 30oC
213 Solucioacuten que contenga
Fosfato monopotaacutesico KH2PO4 hellip 3402 g
Fosfato bipotaacutesico K2HPO4 hellip 4354 g
Agua csp hellip 1 000 ml
(Duracioacuten maacutexima de la solucioacuten 2 meses)
pHtemperatura
690 a 15oC
688 a 20oC
686 a 25oC
685 a 30oC
Nota Tambieacuten pueden utilizarse soluciones tampones de referencia comerciales para las que
exista correspondencia con unidades del SI
Por ejemplo pH 1679 plusmn 001 a 25degC
pH 4005 plusmn 001 a 25degC
pH 7000 plusmn 001 a 25degC
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
19
3 Material
31 pH metro graduado en unidades de pH que permita efectuar medidas con una
aproximacioacuten de plusmn001 como miacutenimo
32 Electrodos
321 Electrodo de vidrio
322 Electrodo de referencia de calomelanos de cloruro potaacutesico saturado
323 O electrodo combinado
4 Procedimiento
41 Preparacioacuten de la muestra para anaacutelisis
Diluirlo con agua a fin de obtener una concentracioacuten de 25 plusmn 05 (mm) en azuacutecares totales
(25oBrix) Si P es el contenido en (mm) en azuacutecares totales del mosto concentrado
rectificado pesar una masa igual a 2 500 P y completar con agua hasta 100 g La
conductividad del agua utilizada deberaacute ser inferior a 2 microsiemens por centiacutemetro
42 Puesta a cero del aparato
Se efectuaraacute antes de cada medida siguiendo las instrucciones dadas para el aparato utilizado
43 Calibrado del pH metro
El pH metro se debe calibrar a 20ordmC usando soluciones tampoacuten de referencia acopladas con el
SI Los valores de pH seleccionados deben abarcar la gama de valores que pueden encontrarse
en los mostos Si el pH metro usado no es compatible con la calibracioacuten a valores
suficientemente bajos se deberiacutea realizar una verificacioacuten usando una solucioacuten tampoacuten de
referenencia acoplada con el SI y que tenga un valor de pH cercano a los valores hallados en
los mostos
44 Medida
Introducir el electrodo en la muestra a analizar cuya temperatura deberaacute estar comprendida
entre 20 y 25oC y tan proacutexima como sea posible a 20
oC Leer directamente el valor del pH
Efectuacuteense al menos 2 determinaciones de cada muestra Tomar como resultado la media
aritmeacutetica de ambas determinaciones
5 Expresioacuten de los resultados
El pH de la solucioacuten al 25 (mm) (25oBrix) del mosto concentrado rectificado se expresaraacuten
con 2 decimales
6 Caracteriacutesticas del meacutetodo
Repetibilidad (r)
r = 007
Reproducibilidad (R)
R = 007
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
20
ANEXO J DIOacuteXIDO DE AZUFRE Tipo IV
1 Definiciones
Se denomina dioacutexido de azufre al dioacutexido de azufre presente en el mosto en las formas
siguientes H2SO
3 H SO3
- cuyo equilibrio es funcioacuten del pH y de la temperatura
H2SO
3 H
+ + HSO
3
macr
H2SO
3 representa el dioacutexido de azufre molecular
Se denomina dioacutexido de azufre total al conjunto de las distintas formas de dioacutexido de azufre
presentes en el mosto en estado libre o combinado con sus componentes
2 Materiales
Se extrae el dioacutexido de azufre total por arrastre en caliente (aproximadamente 100oC) del
mosto concentrado rectificado previamente diluido
21 Reactivos
211 Aacutecido fosfoacuterico al 85 H3PO4 (ρ20 = 171 gml)
212 Solucioacuten de peroacutexido de hidroacutegeno de 91 gl H2O2 (3 voluacutemenes)
213 Reactivo indicador
rojo de metilo hellip 100 mg
azul de metileno hellip 50 mg
Alcohol de 50 vol hellip100 ml
214 Solucioacuten de hidroacutexido de sodio (NaOH) 001 M
22 Material
221 El material utilizado debe ajustarse al esquema que figura a continuacioacuten
principalmente en lo que se refiere al refrigerante
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
21
Figura 1
Las dimensiones estaacuten indicadas en miliacutemetros Los diaacutemetros internos de los 4 tubos
conceacutentricos que constituyen el refrigerante son 45 34 27 y 10 mm
El tubo de conduccioacuten de los gases al borboteador B termina en una pequentildea esfera de 1 cm
de diaacutemetro que lleva en su mayor ciacuterculo horizontal 20 agujeros de 02 mm de diaacutemetro
Tambieacuten puede terminar en una placa de vidrio fritado que garantice la formacioacuten de gran
nuacutemero de pequentildeas burbujas realizando asiacute un buen contacto entre las fases gaseosa y
liacutequida
El flujo de gas que debe recorrer el aparato debe ser de 40 lh aproximadamente El frasco
situado a la derecha del aparato de destina a limitar de 20 a 30 cm de agua la depresioacuten
producida por la trompa de agua Para poder regular dicha depresioacuten de forma que el caudal
sea el correcto conviene colocar un medidor de flujo de tubo semicapilar entre el borboteador
y el frasco
222 Una microbureta
3 Procedimiento
31 En el caso del mosto concentrado rectificado utilizar la solucioacuten obtenida diluyendo la
muestra para analizar al 40 (mv) tal y como se indica en el capiacutetulo laquoAcidez totalraquo en el
apartado 51 En el matraz A de 250 ml del aparato de arrastre introducir 50 ml de esta
solucioacuten y 5 ml de aacutecido fosfoacuterico (2 11) Acoplar el matraz al aparato
32 Introducir en el borboteador B de 2 a 3 ml de solucioacuten de peroacutexido de hidroacutegeno (212)
neutralizarla con la solucioacuten 001 M de hidroacutexido soacutedico (214) llevar a ebullicioacuten el mosto
contenido en el matraz A con una pequentildea llama de 4 a 5 cm de altura que debe tocar
ligeramente el fondo del matraz No colocar bajo el matraz ninguna tela metaacutelica sino
depositarlo sobre un disco perforado con un agujero de 30 mm de diaacutemetro Se evita asiacute la
pirogenacioacuten de las materias extractivas de la muestra sobre las paredes del matraz
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
22
Mantener la ebullicioacuten durante el paso de la corriente de aire (o de nitroacutegeno) En 15 minutos
el dioacutexido de azufre total habraacute sido arrastrado y oxidado Valorar el aacutecido sulfuacuterico formado
con la solucioacuten 001 M de hidroacutexido soacutedico (214) Sea n el nuacutemero de mililitros utilizados
4 Caacutelculo
Dioacutexido de azufre en miligramos por kilo de azuacutecares totales (muestra 50 ml de muestra
preparada (31))
(1600 n)P
P = contenido en (mm) de azuacutecares totales
5 Expresioacuten de los resultados
El dioacutexido de azufre total se expresa en miligramos por kilogramo (mgkg) de azuacutecares
totales
6 Caracteriacutesticas del meacutetodo
Repetibilidad (r)
muestra de 50 ml lt 50 mgl r = 1x 250P mgkg de azuacutecares totales
Reproducibilidad (R)
muestra de 50 ml lt 50 mgl R = 9x 250P mgkg de azuacutecares totales
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
23
ANEXO K CARACTERIacuteSTICAS CROMAacuteTICAS Tipo IV
1 Fundamento
Medida de la absorbancia a 425 nm en cubetas de 1 cm de espesor del mosto concentrado
rectificado cuya concentracioacuten en azuacutecares se haya reducido al 25 (mm) (25o Brix)
2 Material
21 Espectrofotoacutemetro que permita efectuar medidas entre 300 y 700 nm
22 Cubetas de vidrio con un trayecto oacuteptico de 1 cm
23 Filtro con membrana y de una porosidad de 045 μm
3 Procedimiento
31 Preparacioacuten de la muestra
Utilizar una solucioacuten cuyo valor en azuacutecares sea del 25 (mm) (25o
Brix) y que se habraacute
preparado del modo indicado en el capiacutetulo laquopHraquo (41) Filtrarla en un filtro con membrana
de una porosidad de 045 μm
32 Determinacioacuten de la absorbancia
Ajustar a cero para la longitud de onda 425 nm en una cubeta de 1 cm de trayecto oacuteptico que
contenga agua destilada
Determinar la absorbancia A a esta longitud de onda de la solucioacuten al 25 de
azuacutecares (25oBrix) obtenida en el apartado 31 y colocada en una cubeta de 1 cm de trayecto
oacuteptico
4 Expresioacuten de los resultados
La absorbancia a 425 nm del mosto concentrado rectificado en solucioacuten al 25 (mm) de
azuacutecares (25o Brix) se expresaraacute con 2 decimales
Repetibilidad (r)
r = 001 U Abs agrave 25degBrix
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
11
Repetibilidad para densimetria electronica valor calculado
Desviacioacuten tiacutepica 0009
Coeficiente de variacioacuten o desviacioacuten tiacutepica
relativa en 09
liacutemite r 0024 vol
liacutemite r en 3
Repetibilidad para Balanza hidrostaacutetica Valor calculado
Desviacioacuten tiacutepica 0013
Coeficiente de variacioacuten o desviacioacuten tiacutepica
relativa en 17
Liacutemite r 0038 vol
Liacutemite r en 53
84 Reproducibilidad
La reproducibilidad de los resultados se determinoacute analizando el mismo mosto en doble en
diferentes fechas durante un periodo dado Los resultados aparecen en la tabla 3
Reproducibilidad para densimetria electronica valor calculado
Desviacioacuten tiacutepica 0043
Coeficiente de variacioacuten o desviacioacuten tiacutepica
relativa en 3
liacutemite R 012vol
liacutemite R en 9
Reproducibilidad para Balanza hidrostaacutetica Valor calculado
Desviacioacuten estaacutendar 0026
Coeficiente de variacioacuten o desviacioacuten tiacutepica relativa en
34
Liacutemite R 0076vol
Liacutemite R en 106
Tabla 3- Reproducibilidad de la determinacioacuten del GAV de los MC y de las azuacutecares de uva
85 Liacutemites de deteccioacuten y de cuantificacioacuten
Los liacutemites de deteccioacuten (LD) y de cuantificacioacuten (LQ) estimados a partir del estudio de
linealidad son los siguientes
LD = 001 vol LQ = 005vol
El liacutemite de cuantificacioacuten se verificoacute analizando los mostos cuyo GAV teniacutea un nivel de
concentracioacuten de 005vol
Tabla 2 Repetibilidad de la determinacioacuten del GAV de los MC y de las azuacutecares de uva
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
12
86 Incertidumbre
La incertidumbre se evaluoacute a partir de la desviacioacuten tiacutepica de la reproducibilidad y fue de
010vol
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
13
ANEXO G SACAROSA
(CROMATOGRAFIacuteA LIacuteQUIDA DE ALTO RENDIMIENTO) Tipo IV
1 Fundamento de los meacutetodos
Meacutetodo de deteccioacuten y determinacioacuten por cromatografiacutea liacutequida de alta resolucioacuten La
sacarosa se separa mediante una columna de siacutelice con alquilamina y se detecta por
refractometriacutea Para calcular la cantidad se establece una comparacioacuten con un patroacuten externo
analizado en las mismas condiciones
Notas
La autenticidad de un mosto o de un vino puede controlarse mediante el meacutetodo de RMN del
deuterio descrito para la deteccioacuten del enriquecimiento de mostos de mostos concentrados
rectificados y de vinos
Las condiciones de cromatografiacutea son presentadas a tiacutetulo orientativo
2 Reactivos
21 Agua purificada para uso de laboratorio de calidad corriente EN ISO 3696
22 Acetonitrilo (CH3CN) de calidad HPLC ndash Nuacutemero CAS 75-05-8
23 Sacarosa ndash Nuacutemero CAS 57-50-1
24 Fase moacutevil acetonitrilo-agua previamente filtrados por membrana (045 μm) (8020 vv)
(La composicioacuten de la fase moacutevil se da a tiacutetulo indicativo)
Antes de su utilizacioacuten se deberaacute desgasificar
25 Solucioacuten de referencia solucioacuten acuosa de sacarosa de 12 gl Filtrada por membrana
(045 μm) (La concentracioacuten de la solucioacuten de referencia se da a tiacutetulo indicativo)
3 Material
31 Cromatoacutegrafo de fase liacutequida de alta resolucioacuten dotado de
1) Inyector con loop de 10 μl (a tiacutetulo indicativo)
2) Un detector un refractoacutemetro diferencial o refractoacutemetro interferoacutemetro
3) Columna Alkylammina (25 cm de longitud por 4 mm de diaacutemetro interno) (a tiacutetulo
indicativo)
4) Precolumna de la misma fase (a tiacutetulo indicativo)
5) Un dispositivo para mantener aislado o a la misma temperatura (30 degC) el conjunto
formado por la precolumna y la columna
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
14
6) Un registrador o en su caso un integrador
7) Flujo de la fase moacutevil 1 mlmin (a tiacutetulo indicativo)
32 Dispositivo de filtracioacuten por membrana (045 μm)
4 Procedimiento
41 Preparacioacuten de la muestra
Utilizar la solucioacuten obtenida diluyendo el mosto concentrado rectificado al 40 (mv) tal
como se indica en el Anexo H del meacutetodo laquoAcidez totalraquo seccioacuten 51 y filtrarla por
membrana (045 μm)
42 Determinacioacuten cromatograacutefica
Inyectar sucesivamente en el cromatoacutegrafo 10 μl de la solucioacuten de referencia y 10 μl de la
muestra preparada como se indica en el punto 41
Repetir las inyecciones en el mismo orden
Registrar el cromatograma
El tiempo de retencioacuten de la sacarosa es de unos 10 minutos
El volumen de la muestra y la secuencia se dan a tiacutetulo orientativo La determinacioacuten
cromatograacutefica puede realizarse tambieacuten con una curva de calibracioacuten
5 Caacutelculo
Utilizar para el caacutelculo el promedio de 2 resultados de la solucioacuten de referencia y de la
muestra
Sea C gl el contenido en sacarosa de la solucioacuten de mosto concentrado rectificado al 40
(mv)
Contenido en sacarosa en gramos por kilogramo de mosto concentrado rectificado 25 ∙ C
6 Expresioacuten de resultados
La concentracioacuten de sacarosa se expresa en gramos por kilogramo con una cifra decimal
7 Caracteriacutesticas del meacutetodo
Repetibilidad (r)
r = 11 gkg mosto
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
15
ANEXO H ACIDEZ TOTAL Tipo IV
1 Definicioacuten
La acidez total de un mosto concentrado rectificado es la suma de los aacutecidos valorables
cuando se lleva el pH a 7 antildeadiendo una solucioacuten alcalina valorada El dioacutexido de carbono no
se incluye en la acidez total
2 Fundamento del meacutetodo
Valoracioacuten potenciomeacutetrica o valoracioacuten en presencia de azul de bromotimol como indicador
del final de reaccioacuten mediante comparacioacuten con un patroacuten de coloracioacuten
3 Reactivos
31 Soluciones tampones
311 pH 70
Fosfato monopotaacutesico (KH2PO4) 1073 g
Solucioacuten 1 M de hidroacutexido soacutedico (NaOH) 500 ml
Agua csp 1 000 ml
312 pH 40
Solucioacuten 005 M de ftalato aacutecido de potasio Solucioacuten con 10211 gl de ftalato aacutecido de
potasio (C8H5KO4) a 20 degC (duracioacuten maacutexima de la solucioacuten 2 meses)
Nota Tambieacuten pueden utilizarse soluciones tampones de referencia comerciales para las que
exista correspondencia con unidades del SI
Por ejemplo pH 1679 plusmn 001 a 25degC
pH 4005 plusmn 001 a 25degC
pH 7000 plusmn 001 a 25degC
32 Solucioacuten 01 M de hidroacutexido soacutedico (NaOH)
33 Solucioacuten de azul de bromotimol de 4 gl
Azul de bromotimol (C27H28Br2O5S)hellip 4 g
Alcohol neutro 96 vol hellip 200 ml
Una vez solubilizado antildeadir
Agua sin CO2 helliphelliphellip 200 ml
Solucioacuten 1 M de hidroacutexido soacutedico
csp coloracioacuten verdeazulada (pH 7) helliphelliphelliphellip75 ml
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
16
Agua csp helliphelliphellip 1000 ml
4 Equipo
41 Potencioacutemetro con escala graduada en unidades de pH y electrodos A tiacutetulo indicativo el
electrodo de vidrio debe conservarse en agua destilada El electrodo de calomelanos de
cloruro potaacutesico saturado debe conservarse en una solucioacuten saturada de cloruro potaacutesico
Generalmente se emplea un electrodo combinado que se conserva en agua destilada
42 Vasos de precipitados de 100 ml de capacidad
5 Procedimiento
51 Preparacioacuten de la muestra
Poner 200 g de mosto concentrado rectificado exactamente pesado en un matraz aforado de
500 ml Enrasar con agua Homogeneizar
52 Valoracioacuten potenciomeacutetrica
521 Puesta a cero del aparato
Se efectuaraacute antes de cada medida siguiendo las instrucciones dadas para el aparato utilizado
522 Calibrado del pH metro
El pH metro se debe calibrar a 20ordmC usando soluciones tampoacuten de referencia acopladas con el
SI Los valores de pH seleccionados deben abarcar la gama de valores que pueden encontrarse
en los mostos Si el pH metro usado no es compatible con la calibracioacuten a valores
suficientemente bajos se deberiacutea realizar una verificacioacuten usando una solucioacuten tampoacuten de
referenencia acoplada con el SI y que tenga un valor de pH cercano a los valores hallados en
los mostos
523 Teacutecnica de medicioacuten
En un vaso de precipitados (44) introducir 50 ml de la muestra preparada como se indica en
51 Antildeadir 10 ml de agua destilada aproximadamente y verter con una bureta la solucioacuten 01
M de hidroacutexido soacutedico (32) hasta que el pH sea igual a 7 a 20 degC La adicioacuten de la solucioacuten
alcalina debe realizarse lentamente agitando constantemente la solucioacuten Se denominara n el
nuacutemero de mililitros de NaOH 01 M utilizados
53 Valoracioacuten con indicador (azul de bromotimol)
531 Ensayo previo obtencioacuten del patroacuten de coloracioacuten
En un vaso de precipitados (44) echar 25 ml de agua destilada y hervida 1 ml de solucioacuten de
azul de bromotimol (33) y 50 ml de muestra preparada como se indica en (51) Antildeadir la
solucioacuten 01 M de hidroacutexido de sodio (32) hasta obtener una coloracioacuten verdeazulada Antildeadir
5 ml de la solucioacuten tampoacuten pH 7 (311)
532 Determinacioacuten
En un vaso de precipitados (44) echar 30 ml de agua destilada y hervida 1 ml de solucioacuten de
azul de bromotimol (33) y 50 ml de muestra preparada como se indica en (51) Antildeadir la
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
17
solucioacuten 01 M de hidroacutexido soacutedico (32) hasta obtener una coloracioacuten ideacutentica a la obtenida
en el ensayo previo (531) Se denominaraacute n al nuacutemero de mililitros de solucioacuten de hidroacutexido
soacutedico 01 M utilizados
6 Expresioacuten de los resultados
61 Meacutetodo de caacutelculo
Acidez total expresada en miliequivalentes por kilogramo de mosto concentrado rectificado
A = 5 n
Acidez total expresada en miliequivalentes por kilogramo de azuacutecares totales A = (500 n)P
P = contenido en (mm) de azuacutecares totales
Se daraacute con 1 decimal
7 Caracteriacutesticas del meacutetodo
Repetibilidad (r)
r = 04 meq kg azuacutecares totales
Reproducibilidad (R)
R = 24 meq kg azuacutecares totales
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
18
ANEXO I pH Tipo IV
1 Fundamento
Medida de la diferencia de potencial entre dos electrodos sumergidos en el liacutequido que se
estudia Uno de los dos electrodos tiene un potencial que es una funcioacuten definida del pH del
liacutequido el otro tiene un potencial fijo y conocido y constituye el electrodo de referencia
2 Reactivos
21 Soluciones tampoacuten
211 Solucioacuten saturada de tartrato aacutecido de potasio al menos de 57 gl de tartrato aacutecido de
potasio (C4H5KO6) a 20oC Esta solucioacuten puede conservarse hasta 2 meses en presencia de 01
g de timol por cada 200 ml)
pHtemperatura
357 a 20oC
356 a 25oC
355 a 30oC
212 Solucioacuten 005 M de ftalato aacutecido de potasio Solucioacuten con 10211 gl de ftalato aacutecido de
potasio (C8H5KO4) a 20 degC (duracioacuten maacutexima de la solucioacuten 2 meses)
pHtemperatura
3999 a 15oC
4003 a 20oC
4008 a 25oC
4015 a 30oC
213 Solucioacuten que contenga
Fosfato monopotaacutesico KH2PO4 hellip 3402 g
Fosfato bipotaacutesico K2HPO4 hellip 4354 g
Agua csp hellip 1 000 ml
(Duracioacuten maacutexima de la solucioacuten 2 meses)
pHtemperatura
690 a 15oC
688 a 20oC
686 a 25oC
685 a 30oC
Nota Tambieacuten pueden utilizarse soluciones tampones de referencia comerciales para las que
exista correspondencia con unidades del SI
Por ejemplo pH 1679 plusmn 001 a 25degC
pH 4005 plusmn 001 a 25degC
pH 7000 plusmn 001 a 25degC
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
19
3 Material
31 pH metro graduado en unidades de pH que permita efectuar medidas con una
aproximacioacuten de plusmn001 como miacutenimo
32 Electrodos
321 Electrodo de vidrio
322 Electrodo de referencia de calomelanos de cloruro potaacutesico saturado
323 O electrodo combinado
4 Procedimiento
41 Preparacioacuten de la muestra para anaacutelisis
Diluirlo con agua a fin de obtener una concentracioacuten de 25 plusmn 05 (mm) en azuacutecares totales
(25oBrix) Si P es el contenido en (mm) en azuacutecares totales del mosto concentrado
rectificado pesar una masa igual a 2 500 P y completar con agua hasta 100 g La
conductividad del agua utilizada deberaacute ser inferior a 2 microsiemens por centiacutemetro
42 Puesta a cero del aparato
Se efectuaraacute antes de cada medida siguiendo las instrucciones dadas para el aparato utilizado
43 Calibrado del pH metro
El pH metro se debe calibrar a 20ordmC usando soluciones tampoacuten de referencia acopladas con el
SI Los valores de pH seleccionados deben abarcar la gama de valores que pueden encontrarse
en los mostos Si el pH metro usado no es compatible con la calibracioacuten a valores
suficientemente bajos se deberiacutea realizar una verificacioacuten usando una solucioacuten tampoacuten de
referenencia acoplada con el SI y que tenga un valor de pH cercano a los valores hallados en
los mostos
44 Medida
Introducir el electrodo en la muestra a analizar cuya temperatura deberaacute estar comprendida
entre 20 y 25oC y tan proacutexima como sea posible a 20
oC Leer directamente el valor del pH
Efectuacuteense al menos 2 determinaciones de cada muestra Tomar como resultado la media
aritmeacutetica de ambas determinaciones
5 Expresioacuten de los resultados
El pH de la solucioacuten al 25 (mm) (25oBrix) del mosto concentrado rectificado se expresaraacuten
con 2 decimales
6 Caracteriacutesticas del meacutetodo
Repetibilidad (r)
r = 007
Reproducibilidad (R)
R = 007
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
20
ANEXO J DIOacuteXIDO DE AZUFRE Tipo IV
1 Definiciones
Se denomina dioacutexido de azufre al dioacutexido de azufre presente en el mosto en las formas
siguientes H2SO
3 H SO3
- cuyo equilibrio es funcioacuten del pH y de la temperatura
H2SO
3 H
+ + HSO
3
macr
H2SO
3 representa el dioacutexido de azufre molecular
Se denomina dioacutexido de azufre total al conjunto de las distintas formas de dioacutexido de azufre
presentes en el mosto en estado libre o combinado con sus componentes
2 Materiales
Se extrae el dioacutexido de azufre total por arrastre en caliente (aproximadamente 100oC) del
mosto concentrado rectificado previamente diluido
21 Reactivos
211 Aacutecido fosfoacuterico al 85 H3PO4 (ρ20 = 171 gml)
212 Solucioacuten de peroacutexido de hidroacutegeno de 91 gl H2O2 (3 voluacutemenes)
213 Reactivo indicador
rojo de metilo hellip 100 mg
azul de metileno hellip 50 mg
Alcohol de 50 vol hellip100 ml
214 Solucioacuten de hidroacutexido de sodio (NaOH) 001 M
22 Material
221 El material utilizado debe ajustarse al esquema que figura a continuacioacuten
principalmente en lo que se refiere al refrigerante
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
21
Figura 1
Las dimensiones estaacuten indicadas en miliacutemetros Los diaacutemetros internos de los 4 tubos
conceacutentricos que constituyen el refrigerante son 45 34 27 y 10 mm
El tubo de conduccioacuten de los gases al borboteador B termina en una pequentildea esfera de 1 cm
de diaacutemetro que lleva en su mayor ciacuterculo horizontal 20 agujeros de 02 mm de diaacutemetro
Tambieacuten puede terminar en una placa de vidrio fritado que garantice la formacioacuten de gran
nuacutemero de pequentildeas burbujas realizando asiacute un buen contacto entre las fases gaseosa y
liacutequida
El flujo de gas que debe recorrer el aparato debe ser de 40 lh aproximadamente El frasco
situado a la derecha del aparato de destina a limitar de 20 a 30 cm de agua la depresioacuten
producida por la trompa de agua Para poder regular dicha depresioacuten de forma que el caudal
sea el correcto conviene colocar un medidor de flujo de tubo semicapilar entre el borboteador
y el frasco
222 Una microbureta
3 Procedimiento
31 En el caso del mosto concentrado rectificado utilizar la solucioacuten obtenida diluyendo la
muestra para analizar al 40 (mv) tal y como se indica en el capiacutetulo laquoAcidez totalraquo en el
apartado 51 En el matraz A de 250 ml del aparato de arrastre introducir 50 ml de esta
solucioacuten y 5 ml de aacutecido fosfoacuterico (2 11) Acoplar el matraz al aparato
32 Introducir en el borboteador B de 2 a 3 ml de solucioacuten de peroacutexido de hidroacutegeno (212)
neutralizarla con la solucioacuten 001 M de hidroacutexido soacutedico (214) llevar a ebullicioacuten el mosto
contenido en el matraz A con una pequentildea llama de 4 a 5 cm de altura que debe tocar
ligeramente el fondo del matraz No colocar bajo el matraz ninguna tela metaacutelica sino
depositarlo sobre un disco perforado con un agujero de 30 mm de diaacutemetro Se evita asiacute la
pirogenacioacuten de las materias extractivas de la muestra sobre las paredes del matraz
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
22
Mantener la ebullicioacuten durante el paso de la corriente de aire (o de nitroacutegeno) En 15 minutos
el dioacutexido de azufre total habraacute sido arrastrado y oxidado Valorar el aacutecido sulfuacuterico formado
con la solucioacuten 001 M de hidroacutexido soacutedico (214) Sea n el nuacutemero de mililitros utilizados
4 Caacutelculo
Dioacutexido de azufre en miligramos por kilo de azuacutecares totales (muestra 50 ml de muestra
preparada (31))
(1600 n)P
P = contenido en (mm) de azuacutecares totales
5 Expresioacuten de los resultados
El dioacutexido de azufre total se expresa en miligramos por kilogramo (mgkg) de azuacutecares
totales
6 Caracteriacutesticas del meacutetodo
Repetibilidad (r)
muestra de 50 ml lt 50 mgl r = 1x 250P mgkg de azuacutecares totales
Reproducibilidad (R)
muestra de 50 ml lt 50 mgl R = 9x 250P mgkg de azuacutecares totales
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
23
ANEXO K CARACTERIacuteSTICAS CROMAacuteTICAS Tipo IV
1 Fundamento
Medida de la absorbancia a 425 nm en cubetas de 1 cm de espesor del mosto concentrado
rectificado cuya concentracioacuten en azuacutecares se haya reducido al 25 (mm) (25o Brix)
2 Material
21 Espectrofotoacutemetro que permita efectuar medidas entre 300 y 700 nm
22 Cubetas de vidrio con un trayecto oacuteptico de 1 cm
23 Filtro con membrana y de una porosidad de 045 μm
3 Procedimiento
31 Preparacioacuten de la muestra
Utilizar una solucioacuten cuyo valor en azuacutecares sea del 25 (mm) (25o
Brix) y que se habraacute
preparado del modo indicado en el capiacutetulo laquopHraquo (41) Filtrarla en un filtro con membrana
de una porosidad de 045 μm
32 Determinacioacuten de la absorbancia
Ajustar a cero para la longitud de onda 425 nm en una cubeta de 1 cm de trayecto oacuteptico que
contenga agua destilada
Determinar la absorbancia A a esta longitud de onda de la solucioacuten al 25 de
azuacutecares (25oBrix) obtenida en el apartado 31 y colocada en una cubeta de 1 cm de trayecto
oacuteptico
4 Expresioacuten de los resultados
La absorbancia a 425 nm del mosto concentrado rectificado en solucioacuten al 25 (mm) de
azuacutecares (25o Brix) se expresaraacute con 2 decimales
Repetibilidad (r)
r = 001 U Abs agrave 25degBrix
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
12
86 Incertidumbre
La incertidumbre se evaluoacute a partir de la desviacioacuten tiacutepica de la reproducibilidad y fue de
010vol
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
13
ANEXO G SACAROSA
(CROMATOGRAFIacuteA LIacuteQUIDA DE ALTO RENDIMIENTO) Tipo IV
1 Fundamento de los meacutetodos
Meacutetodo de deteccioacuten y determinacioacuten por cromatografiacutea liacutequida de alta resolucioacuten La
sacarosa se separa mediante una columna de siacutelice con alquilamina y se detecta por
refractometriacutea Para calcular la cantidad se establece una comparacioacuten con un patroacuten externo
analizado en las mismas condiciones
Notas
La autenticidad de un mosto o de un vino puede controlarse mediante el meacutetodo de RMN del
deuterio descrito para la deteccioacuten del enriquecimiento de mostos de mostos concentrados
rectificados y de vinos
Las condiciones de cromatografiacutea son presentadas a tiacutetulo orientativo
2 Reactivos
21 Agua purificada para uso de laboratorio de calidad corriente EN ISO 3696
22 Acetonitrilo (CH3CN) de calidad HPLC ndash Nuacutemero CAS 75-05-8
23 Sacarosa ndash Nuacutemero CAS 57-50-1
24 Fase moacutevil acetonitrilo-agua previamente filtrados por membrana (045 μm) (8020 vv)
(La composicioacuten de la fase moacutevil se da a tiacutetulo indicativo)
Antes de su utilizacioacuten se deberaacute desgasificar
25 Solucioacuten de referencia solucioacuten acuosa de sacarosa de 12 gl Filtrada por membrana
(045 μm) (La concentracioacuten de la solucioacuten de referencia se da a tiacutetulo indicativo)
3 Material
31 Cromatoacutegrafo de fase liacutequida de alta resolucioacuten dotado de
1) Inyector con loop de 10 μl (a tiacutetulo indicativo)
2) Un detector un refractoacutemetro diferencial o refractoacutemetro interferoacutemetro
3) Columna Alkylammina (25 cm de longitud por 4 mm de diaacutemetro interno) (a tiacutetulo
indicativo)
4) Precolumna de la misma fase (a tiacutetulo indicativo)
5) Un dispositivo para mantener aislado o a la misma temperatura (30 degC) el conjunto
formado por la precolumna y la columna
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
14
6) Un registrador o en su caso un integrador
7) Flujo de la fase moacutevil 1 mlmin (a tiacutetulo indicativo)
32 Dispositivo de filtracioacuten por membrana (045 μm)
4 Procedimiento
41 Preparacioacuten de la muestra
Utilizar la solucioacuten obtenida diluyendo el mosto concentrado rectificado al 40 (mv) tal
como se indica en el Anexo H del meacutetodo laquoAcidez totalraquo seccioacuten 51 y filtrarla por
membrana (045 μm)
42 Determinacioacuten cromatograacutefica
Inyectar sucesivamente en el cromatoacutegrafo 10 μl de la solucioacuten de referencia y 10 μl de la
muestra preparada como se indica en el punto 41
Repetir las inyecciones en el mismo orden
Registrar el cromatograma
El tiempo de retencioacuten de la sacarosa es de unos 10 minutos
El volumen de la muestra y la secuencia se dan a tiacutetulo orientativo La determinacioacuten
cromatograacutefica puede realizarse tambieacuten con una curva de calibracioacuten
5 Caacutelculo
Utilizar para el caacutelculo el promedio de 2 resultados de la solucioacuten de referencia y de la
muestra
Sea C gl el contenido en sacarosa de la solucioacuten de mosto concentrado rectificado al 40
(mv)
Contenido en sacarosa en gramos por kilogramo de mosto concentrado rectificado 25 ∙ C
6 Expresioacuten de resultados
La concentracioacuten de sacarosa se expresa en gramos por kilogramo con una cifra decimal
7 Caracteriacutesticas del meacutetodo
Repetibilidad (r)
r = 11 gkg mosto
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
15
ANEXO H ACIDEZ TOTAL Tipo IV
1 Definicioacuten
La acidez total de un mosto concentrado rectificado es la suma de los aacutecidos valorables
cuando se lleva el pH a 7 antildeadiendo una solucioacuten alcalina valorada El dioacutexido de carbono no
se incluye en la acidez total
2 Fundamento del meacutetodo
Valoracioacuten potenciomeacutetrica o valoracioacuten en presencia de azul de bromotimol como indicador
del final de reaccioacuten mediante comparacioacuten con un patroacuten de coloracioacuten
3 Reactivos
31 Soluciones tampones
311 pH 70
Fosfato monopotaacutesico (KH2PO4) 1073 g
Solucioacuten 1 M de hidroacutexido soacutedico (NaOH) 500 ml
Agua csp 1 000 ml
312 pH 40
Solucioacuten 005 M de ftalato aacutecido de potasio Solucioacuten con 10211 gl de ftalato aacutecido de
potasio (C8H5KO4) a 20 degC (duracioacuten maacutexima de la solucioacuten 2 meses)
Nota Tambieacuten pueden utilizarse soluciones tampones de referencia comerciales para las que
exista correspondencia con unidades del SI
Por ejemplo pH 1679 plusmn 001 a 25degC
pH 4005 plusmn 001 a 25degC
pH 7000 plusmn 001 a 25degC
32 Solucioacuten 01 M de hidroacutexido soacutedico (NaOH)
33 Solucioacuten de azul de bromotimol de 4 gl
Azul de bromotimol (C27H28Br2O5S)hellip 4 g
Alcohol neutro 96 vol hellip 200 ml
Una vez solubilizado antildeadir
Agua sin CO2 helliphelliphellip 200 ml
Solucioacuten 1 M de hidroacutexido soacutedico
csp coloracioacuten verdeazulada (pH 7) helliphelliphelliphellip75 ml
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
16
Agua csp helliphelliphellip 1000 ml
4 Equipo
41 Potencioacutemetro con escala graduada en unidades de pH y electrodos A tiacutetulo indicativo el
electrodo de vidrio debe conservarse en agua destilada El electrodo de calomelanos de
cloruro potaacutesico saturado debe conservarse en una solucioacuten saturada de cloruro potaacutesico
Generalmente se emplea un electrodo combinado que se conserva en agua destilada
42 Vasos de precipitados de 100 ml de capacidad
5 Procedimiento
51 Preparacioacuten de la muestra
Poner 200 g de mosto concentrado rectificado exactamente pesado en un matraz aforado de
500 ml Enrasar con agua Homogeneizar
52 Valoracioacuten potenciomeacutetrica
521 Puesta a cero del aparato
Se efectuaraacute antes de cada medida siguiendo las instrucciones dadas para el aparato utilizado
522 Calibrado del pH metro
El pH metro se debe calibrar a 20ordmC usando soluciones tampoacuten de referencia acopladas con el
SI Los valores de pH seleccionados deben abarcar la gama de valores que pueden encontrarse
en los mostos Si el pH metro usado no es compatible con la calibracioacuten a valores
suficientemente bajos se deberiacutea realizar una verificacioacuten usando una solucioacuten tampoacuten de
referenencia acoplada con el SI y que tenga un valor de pH cercano a los valores hallados en
los mostos
523 Teacutecnica de medicioacuten
En un vaso de precipitados (44) introducir 50 ml de la muestra preparada como se indica en
51 Antildeadir 10 ml de agua destilada aproximadamente y verter con una bureta la solucioacuten 01
M de hidroacutexido soacutedico (32) hasta que el pH sea igual a 7 a 20 degC La adicioacuten de la solucioacuten
alcalina debe realizarse lentamente agitando constantemente la solucioacuten Se denominara n el
nuacutemero de mililitros de NaOH 01 M utilizados
53 Valoracioacuten con indicador (azul de bromotimol)
531 Ensayo previo obtencioacuten del patroacuten de coloracioacuten
En un vaso de precipitados (44) echar 25 ml de agua destilada y hervida 1 ml de solucioacuten de
azul de bromotimol (33) y 50 ml de muestra preparada como se indica en (51) Antildeadir la
solucioacuten 01 M de hidroacutexido de sodio (32) hasta obtener una coloracioacuten verdeazulada Antildeadir
5 ml de la solucioacuten tampoacuten pH 7 (311)
532 Determinacioacuten
En un vaso de precipitados (44) echar 30 ml de agua destilada y hervida 1 ml de solucioacuten de
azul de bromotimol (33) y 50 ml de muestra preparada como se indica en (51) Antildeadir la
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
17
solucioacuten 01 M de hidroacutexido soacutedico (32) hasta obtener una coloracioacuten ideacutentica a la obtenida
en el ensayo previo (531) Se denominaraacute n al nuacutemero de mililitros de solucioacuten de hidroacutexido
soacutedico 01 M utilizados
6 Expresioacuten de los resultados
61 Meacutetodo de caacutelculo
Acidez total expresada en miliequivalentes por kilogramo de mosto concentrado rectificado
A = 5 n
Acidez total expresada en miliequivalentes por kilogramo de azuacutecares totales A = (500 n)P
P = contenido en (mm) de azuacutecares totales
Se daraacute con 1 decimal
7 Caracteriacutesticas del meacutetodo
Repetibilidad (r)
r = 04 meq kg azuacutecares totales
Reproducibilidad (R)
R = 24 meq kg azuacutecares totales
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
18
ANEXO I pH Tipo IV
1 Fundamento
Medida de la diferencia de potencial entre dos electrodos sumergidos en el liacutequido que se
estudia Uno de los dos electrodos tiene un potencial que es una funcioacuten definida del pH del
liacutequido el otro tiene un potencial fijo y conocido y constituye el electrodo de referencia
2 Reactivos
21 Soluciones tampoacuten
211 Solucioacuten saturada de tartrato aacutecido de potasio al menos de 57 gl de tartrato aacutecido de
potasio (C4H5KO6) a 20oC Esta solucioacuten puede conservarse hasta 2 meses en presencia de 01
g de timol por cada 200 ml)
pHtemperatura
357 a 20oC
356 a 25oC
355 a 30oC
212 Solucioacuten 005 M de ftalato aacutecido de potasio Solucioacuten con 10211 gl de ftalato aacutecido de
potasio (C8H5KO4) a 20 degC (duracioacuten maacutexima de la solucioacuten 2 meses)
pHtemperatura
3999 a 15oC
4003 a 20oC
4008 a 25oC
4015 a 30oC
213 Solucioacuten que contenga
Fosfato monopotaacutesico KH2PO4 hellip 3402 g
Fosfato bipotaacutesico K2HPO4 hellip 4354 g
Agua csp hellip 1 000 ml
(Duracioacuten maacutexima de la solucioacuten 2 meses)
pHtemperatura
690 a 15oC
688 a 20oC
686 a 25oC
685 a 30oC
Nota Tambieacuten pueden utilizarse soluciones tampones de referencia comerciales para las que
exista correspondencia con unidades del SI
Por ejemplo pH 1679 plusmn 001 a 25degC
pH 4005 plusmn 001 a 25degC
pH 7000 plusmn 001 a 25degC
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
19
3 Material
31 pH metro graduado en unidades de pH que permita efectuar medidas con una
aproximacioacuten de plusmn001 como miacutenimo
32 Electrodos
321 Electrodo de vidrio
322 Electrodo de referencia de calomelanos de cloruro potaacutesico saturado
323 O electrodo combinado
4 Procedimiento
41 Preparacioacuten de la muestra para anaacutelisis
Diluirlo con agua a fin de obtener una concentracioacuten de 25 plusmn 05 (mm) en azuacutecares totales
(25oBrix) Si P es el contenido en (mm) en azuacutecares totales del mosto concentrado
rectificado pesar una masa igual a 2 500 P y completar con agua hasta 100 g La
conductividad del agua utilizada deberaacute ser inferior a 2 microsiemens por centiacutemetro
42 Puesta a cero del aparato
Se efectuaraacute antes de cada medida siguiendo las instrucciones dadas para el aparato utilizado
43 Calibrado del pH metro
El pH metro se debe calibrar a 20ordmC usando soluciones tampoacuten de referencia acopladas con el
SI Los valores de pH seleccionados deben abarcar la gama de valores que pueden encontrarse
en los mostos Si el pH metro usado no es compatible con la calibracioacuten a valores
suficientemente bajos se deberiacutea realizar una verificacioacuten usando una solucioacuten tampoacuten de
referenencia acoplada con el SI y que tenga un valor de pH cercano a los valores hallados en
los mostos
44 Medida
Introducir el electrodo en la muestra a analizar cuya temperatura deberaacute estar comprendida
entre 20 y 25oC y tan proacutexima como sea posible a 20
oC Leer directamente el valor del pH
Efectuacuteense al menos 2 determinaciones de cada muestra Tomar como resultado la media
aritmeacutetica de ambas determinaciones
5 Expresioacuten de los resultados
El pH de la solucioacuten al 25 (mm) (25oBrix) del mosto concentrado rectificado se expresaraacuten
con 2 decimales
6 Caracteriacutesticas del meacutetodo
Repetibilidad (r)
r = 007
Reproducibilidad (R)
R = 007
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
20
ANEXO J DIOacuteXIDO DE AZUFRE Tipo IV
1 Definiciones
Se denomina dioacutexido de azufre al dioacutexido de azufre presente en el mosto en las formas
siguientes H2SO
3 H SO3
- cuyo equilibrio es funcioacuten del pH y de la temperatura
H2SO
3 H
+ + HSO
3
macr
H2SO
3 representa el dioacutexido de azufre molecular
Se denomina dioacutexido de azufre total al conjunto de las distintas formas de dioacutexido de azufre
presentes en el mosto en estado libre o combinado con sus componentes
2 Materiales
Se extrae el dioacutexido de azufre total por arrastre en caliente (aproximadamente 100oC) del
mosto concentrado rectificado previamente diluido
21 Reactivos
211 Aacutecido fosfoacuterico al 85 H3PO4 (ρ20 = 171 gml)
212 Solucioacuten de peroacutexido de hidroacutegeno de 91 gl H2O2 (3 voluacutemenes)
213 Reactivo indicador
rojo de metilo hellip 100 mg
azul de metileno hellip 50 mg
Alcohol de 50 vol hellip100 ml
214 Solucioacuten de hidroacutexido de sodio (NaOH) 001 M
22 Material
221 El material utilizado debe ajustarse al esquema que figura a continuacioacuten
principalmente en lo que se refiere al refrigerante
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
21
Figura 1
Las dimensiones estaacuten indicadas en miliacutemetros Los diaacutemetros internos de los 4 tubos
conceacutentricos que constituyen el refrigerante son 45 34 27 y 10 mm
El tubo de conduccioacuten de los gases al borboteador B termina en una pequentildea esfera de 1 cm
de diaacutemetro que lleva en su mayor ciacuterculo horizontal 20 agujeros de 02 mm de diaacutemetro
Tambieacuten puede terminar en una placa de vidrio fritado que garantice la formacioacuten de gran
nuacutemero de pequentildeas burbujas realizando asiacute un buen contacto entre las fases gaseosa y
liacutequida
El flujo de gas que debe recorrer el aparato debe ser de 40 lh aproximadamente El frasco
situado a la derecha del aparato de destina a limitar de 20 a 30 cm de agua la depresioacuten
producida por la trompa de agua Para poder regular dicha depresioacuten de forma que el caudal
sea el correcto conviene colocar un medidor de flujo de tubo semicapilar entre el borboteador
y el frasco
222 Una microbureta
3 Procedimiento
31 En el caso del mosto concentrado rectificado utilizar la solucioacuten obtenida diluyendo la
muestra para analizar al 40 (mv) tal y como se indica en el capiacutetulo laquoAcidez totalraquo en el
apartado 51 En el matraz A de 250 ml del aparato de arrastre introducir 50 ml de esta
solucioacuten y 5 ml de aacutecido fosfoacuterico (2 11) Acoplar el matraz al aparato
32 Introducir en el borboteador B de 2 a 3 ml de solucioacuten de peroacutexido de hidroacutegeno (212)
neutralizarla con la solucioacuten 001 M de hidroacutexido soacutedico (214) llevar a ebullicioacuten el mosto
contenido en el matraz A con una pequentildea llama de 4 a 5 cm de altura que debe tocar
ligeramente el fondo del matraz No colocar bajo el matraz ninguna tela metaacutelica sino
depositarlo sobre un disco perforado con un agujero de 30 mm de diaacutemetro Se evita asiacute la
pirogenacioacuten de las materias extractivas de la muestra sobre las paredes del matraz
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
22
Mantener la ebullicioacuten durante el paso de la corriente de aire (o de nitroacutegeno) En 15 minutos
el dioacutexido de azufre total habraacute sido arrastrado y oxidado Valorar el aacutecido sulfuacuterico formado
con la solucioacuten 001 M de hidroacutexido soacutedico (214) Sea n el nuacutemero de mililitros utilizados
4 Caacutelculo
Dioacutexido de azufre en miligramos por kilo de azuacutecares totales (muestra 50 ml de muestra
preparada (31))
(1600 n)P
P = contenido en (mm) de azuacutecares totales
5 Expresioacuten de los resultados
El dioacutexido de azufre total se expresa en miligramos por kilogramo (mgkg) de azuacutecares
totales
6 Caracteriacutesticas del meacutetodo
Repetibilidad (r)
muestra de 50 ml lt 50 mgl r = 1x 250P mgkg de azuacutecares totales
Reproducibilidad (R)
muestra de 50 ml lt 50 mgl R = 9x 250P mgkg de azuacutecares totales
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
23
ANEXO K CARACTERIacuteSTICAS CROMAacuteTICAS Tipo IV
1 Fundamento
Medida de la absorbancia a 425 nm en cubetas de 1 cm de espesor del mosto concentrado
rectificado cuya concentracioacuten en azuacutecares se haya reducido al 25 (mm) (25o Brix)
2 Material
21 Espectrofotoacutemetro que permita efectuar medidas entre 300 y 700 nm
22 Cubetas de vidrio con un trayecto oacuteptico de 1 cm
23 Filtro con membrana y de una porosidad de 045 μm
3 Procedimiento
31 Preparacioacuten de la muestra
Utilizar una solucioacuten cuyo valor en azuacutecares sea del 25 (mm) (25o
Brix) y que se habraacute
preparado del modo indicado en el capiacutetulo laquopHraquo (41) Filtrarla en un filtro con membrana
de una porosidad de 045 μm
32 Determinacioacuten de la absorbancia
Ajustar a cero para la longitud de onda 425 nm en una cubeta de 1 cm de trayecto oacuteptico que
contenga agua destilada
Determinar la absorbancia A a esta longitud de onda de la solucioacuten al 25 de
azuacutecares (25oBrix) obtenida en el apartado 31 y colocada en una cubeta de 1 cm de trayecto
oacuteptico
4 Expresioacuten de los resultados
La absorbancia a 425 nm del mosto concentrado rectificado en solucioacuten al 25 (mm) de
azuacutecares (25o Brix) se expresaraacute con 2 decimales
Repetibilidad (r)
r = 001 U Abs agrave 25degBrix
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
13
ANEXO G SACAROSA
(CROMATOGRAFIacuteA LIacuteQUIDA DE ALTO RENDIMIENTO) Tipo IV
1 Fundamento de los meacutetodos
Meacutetodo de deteccioacuten y determinacioacuten por cromatografiacutea liacutequida de alta resolucioacuten La
sacarosa se separa mediante una columna de siacutelice con alquilamina y se detecta por
refractometriacutea Para calcular la cantidad se establece una comparacioacuten con un patroacuten externo
analizado en las mismas condiciones
Notas
La autenticidad de un mosto o de un vino puede controlarse mediante el meacutetodo de RMN del
deuterio descrito para la deteccioacuten del enriquecimiento de mostos de mostos concentrados
rectificados y de vinos
Las condiciones de cromatografiacutea son presentadas a tiacutetulo orientativo
2 Reactivos
21 Agua purificada para uso de laboratorio de calidad corriente EN ISO 3696
22 Acetonitrilo (CH3CN) de calidad HPLC ndash Nuacutemero CAS 75-05-8
23 Sacarosa ndash Nuacutemero CAS 57-50-1
24 Fase moacutevil acetonitrilo-agua previamente filtrados por membrana (045 μm) (8020 vv)
(La composicioacuten de la fase moacutevil se da a tiacutetulo indicativo)
Antes de su utilizacioacuten se deberaacute desgasificar
25 Solucioacuten de referencia solucioacuten acuosa de sacarosa de 12 gl Filtrada por membrana
(045 μm) (La concentracioacuten de la solucioacuten de referencia se da a tiacutetulo indicativo)
3 Material
31 Cromatoacutegrafo de fase liacutequida de alta resolucioacuten dotado de
1) Inyector con loop de 10 μl (a tiacutetulo indicativo)
2) Un detector un refractoacutemetro diferencial o refractoacutemetro interferoacutemetro
3) Columna Alkylammina (25 cm de longitud por 4 mm de diaacutemetro interno) (a tiacutetulo
indicativo)
4) Precolumna de la misma fase (a tiacutetulo indicativo)
5) Un dispositivo para mantener aislado o a la misma temperatura (30 degC) el conjunto
formado por la precolumna y la columna
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
14
6) Un registrador o en su caso un integrador
7) Flujo de la fase moacutevil 1 mlmin (a tiacutetulo indicativo)
32 Dispositivo de filtracioacuten por membrana (045 μm)
4 Procedimiento
41 Preparacioacuten de la muestra
Utilizar la solucioacuten obtenida diluyendo el mosto concentrado rectificado al 40 (mv) tal
como se indica en el Anexo H del meacutetodo laquoAcidez totalraquo seccioacuten 51 y filtrarla por
membrana (045 μm)
42 Determinacioacuten cromatograacutefica
Inyectar sucesivamente en el cromatoacutegrafo 10 μl de la solucioacuten de referencia y 10 μl de la
muestra preparada como se indica en el punto 41
Repetir las inyecciones en el mismo orden
Registrar el cromatograma
El tiempo de retencioacuten de la sacarosa es de unos 10 minutos
El volumen de la muestra y la secuencia se dan a tiacutetulo orientativo La determinacioacuten
cromatograacutefica puede realizarse tambieacuten con una curva de calibracioacuten
5 Caacutelculo
Utilizar para el caacutelculo el promedio de 2 resultados de la solucioacuten de referencia y de la
muestra
Sea C gl el contenido en sacarosa de la solucioacuten de mosto concentrado rectificado al 40
(mv)
Contenido en sacarosa en gramos por kilogramo de mosto concentrado rectificado 25 ∙ C
6 Expresioacuten de resultados
La concentracioacuten de sacarosa se expresa en gramos por kilogramo con una cifra decimal
7 Caracteriacutesticas del meacutetodo
Repetibilidad (r)
r = 11 gkg mosto
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
15
ANEXO H ACIDEZ TOTAL Tipo IV
1 Definicioacuten
La acidez total de un mosto concentrado rectificado es la suma de los aacutecidos valorables
cuando se lleva el pH a 7 antildeadiendo una solucioacuten alcalina valorada El dioacutexido de carbono no
se incluye en la acidez total
2 Fundamento del meacutetodo
Valoracioacuten potenciomeacutetrica o valoracioacuten en presencia de azul de bromotimol como indicador
del final de reaccioacuten mediante comparacioacuten con un patroacuten de coloracioacuten
3 Reactivos
31 Soluciones tampones
311 pH 70
Fosfato monopotaacutesico (KH2PO4) 1073 g
Solucioacuten 1 M de hidroacutexido soacutedico (NaOH) 500 ml
Agua csp 1 000 ml
312 pH 40
Solucioacuten 005 M de ftalato aacutecido de potasio Solucioacuten con 10211 gl de ftalato aacutecido de
potasio (C8H5KO4) a 20 degC (duracioacuten maacutexima de la solucioacuten 2 meses)
Nota Tambieacuten pueden utilizarse soluciones tampones de referencia comerciales para las que
exista correspondencia con unidades del SI
Por ejemplo pH 1679 plusmn 001 a 25degC
pH 4005 plusmn 001 a 25degC
pH 7000 plusmn 001 a 25degC
32 Solucioacuten 01 M de hidroacutexido soacutedico (NaOH)
33 Solucioacuten de azul de bromotimol de 4 gl
Azul de bromotimol (C27H28Br2O5S)hellip 4 g
Alcohol neutro 96 vol hellip 200 ml
Una vez solubilizado antildeadir
Agua sin CO2 helliphelliphellip 200 ml
Solucioacuten 1 M de hidroacutexido soacutedico
csp coloracioacuten verdeazulada (pH 7) helliphelliphelliphellip75 ml
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
16
Agua csp helliphelliphellip 1000 ml
4 Equipo
41 Potencioacutemetro con escala graduada en unidades de pH y electrodos A tiacutetulo indicativo el
electrodo de vidrio debe conservarse en agua destilada El electrodo de calomelanos de
cloruro potaacutesico saturado debe conservarse en una solucioacuten saturada de cloruro potaacutesico
Generalmente se emplea un electrodo combinado que se conserva en agua destilada
42 Vasos de precipitados de 100 ml de capacidad
5 Procedimiento
51 Preparacioacuten de la muestra
Poner 200 g de mosto concentrado rectificado exactamente pesado en un matraz aforado de
500 ml Enrasar con agua Homogeneizar
52 Valoracioacuten potenciomeacutetrica
521 Puesta a cero del aparato
Se efectuaraacute antes de cada medida siguiendo las instrucciones dadas para el aparato utilizado
522 Calibrado del pH metro
El pH metro se debe calibrar a 20ordmC usando soluciones tampoacuten de referencia acopladas con el
SI Los valores de pH seleccionados deben abarcar la gama de valores que pueden encontrarse
en los mostos Si el pH metro usado no es compatible con la calibracioacuten a valores
suficientemente bajos se deberiacutea realizar una verificacioacuten usando una solucioacuten tampoacuten de
referenencia acoplada con el SI y que tenga un valor de pH cercano a los valores hallados en
los mostos
523 Teacutecnica de medicioacuten
En un vaso de precipitados (44) introducir 50 ml de la muestra preparada como se indica en
51 Antildeadir 10 ml de agua destilada aproximadamente y verter con una bureta la solucioacuten 01
M de hidroacutexido soacutedico (32) hasta que el pH sea igual a 7 a 20 degC La adicioacuten de la solucioacuten
alcalina debe realizarse lentamente agitando constantemente la solucioacuten Se denominara n el
nuacutemero de mililitros de NaOH 01 M utilizados
53 Valoracioacuten con indicador (azul de bromotimol)
531 Ensayo previo obtencioacuten del patroacuten de coloracioacuten
En un vaso de precipitados (44) echar 25 ml de agua destilada y hervida 1 ml de solucioacuten de
azul de bromotimol (33) y 50 ml de muestra preparada como se indica en (51) Antildeadir la
solucioacuten 01 M de hidroacutexido de sodio (32) hasta obtener una coloracioacuten verdeazulada Antildeadir
5 ml de la solucioacuten tampoacuten pH 7 (311)
532 Determinacioacuten
En un vaso de precipitados (44) echar 30 ml de agua destilada y hervida 1 ml de solucioacuten de
azul de bromotimol (33) y 50 ml de muestra preparada como se indica en (51) Antildeadir la
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
17
solucioacuten 01 M de hidroacutexido soacutedico (32) hasta obtener una coloracioacuten ideacutentica a la obtenida
en el ensayo previo (531) Se denominaraacute n al nuacutemero de mililitros de solucioacuten de hidroacutexido
soacutedico 01 M utilizados
6 Expresioacuten de los resultados
61 Meacutetodo de caacutelculo
Acidez total expresada en miliequivalentes por kilogramo de mosto concentrado rectificado
A = 5 n
Acidez total expresada en miliequivalentes por kilogramo de azuacutecares totales A = (500 n)P
P = contenido en (mm) de azuacutecares totales
Se daraacute con 1 decimal
7 Caracteriacutesticas del meacutetodo
Repetibilidad (r)
r = 04 meq kg azuacutecares totales
Reproducibilidad (R)
R = 24 meq kg azuacutecares totales
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
18
ANEXO I pH Tipo IV
1 Fundamento
Medida de la diferencia de potencial entre dos electrodos sumergidos en el liacutequido que se
estudia Uno de los dos electrodos tiene un potencial que es una funcioacuten definida del pH del
liacutequido el otro tiene un potencial fijo y conocido y constituye el electrodo de referencia
2 Reactivos
21 Soluciones tampoacuten
211 Solucioacuten saturada de tartrato aacutecido de potasio al menos de 57 gl de tartrato aacutecido de
potasio (C4H5KO6) a 20oC Esta solucioacuten puede conservarse hasta 2 meses en presencia de 01
g de timol por cada 200 ml)
pHtemperatura
357 a 20oC
356 a 25oC
355 a 30oC
212 Solucioacuten 005 M de ftalato aacutecido de potasio Solucioacuten con 10211 gl de ftalato aacutecido de
potasio (C8H5KO4) a 20 degC (duracioacuten maacutexima de la solucioacuten 2 meses)
pHtemperatura
3999 a 15oC
4003 a 20oC
4008 a 25oC
4015 a 30oC
213 Solucioacuten que contenga
Fosfato monopotaacutesico KH2PO4 hellip 3402 g
Fosfato bipotaacutesico K2HPO4 hellip 4354 g
Agua csp hellip 1 000 ml
(Duracioacuten maacutexima de la solucioacuten 2 meses)
pHtemperatura
690 a 15oC
688 a 20oC
686 a 25oC
685 a 30oC
Nota Tambieacuten pueden utilizarse soluciones tampones de referencia comerciales para las que
exista correspondencia con unidades del SI
Por ejemplo pH 1679 plusmn 001 a 25degC
pH 4005 plusmn 001 a 25degC
pH 7000 plusmn 001 a 25degC
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
19
3 Material
31 pH metro graduado en unidades de pH que permita efectuar medidas con una
aproximacioacuten de plusmn001 como miacutenimo
32 Electrodos
321 Electrodo de vidrio
322 Electrodo de referencia de calomelanos de cloruro potaacutesico saturado
323 O electrodo combinado
4 Procedimiento
41 Preparacioacuten de la muestra para anaacutelisis
Diluirlo con agua a fin de obtener una concentracioacuten de 25 plusmn 05 (mm) en azuacutecares totales
(25oBrix) Si P es el contenido en (mm) en azuacutecares totales del mosto concentrado
rectificado pesar una masa igual a 2 500 P y completar con agua hasta 100 g La
conductividad del agua utilizada deberaacute ser inferior a 2 microsiemens por centiacutemetro
42 Puesta a cero del aparato
Se efectuaraacute antes de cada medida siguiendo las instrucciones dadas para el aparato utilizado
43 Calibrado del pH metro
El pH metro se debe calibrar a 20ordmC usando soluciones tampoacuten de referencia acopladas con el
SI Los valores de pH seleccionados deben abarcar la gama de valores que pueden encontrarse
en los mostos Si el pH metro usado no es compatible con la calibracioacuten a valores
suficientemente bajos se deberiacutea realizar una verificacioacuten usando una solucioacuten tampoacuten de
referenencia acoplada con el SI y que tenga un valor de pH cercano a los valores hallados en
los mostos
44 Medida
Introducir el electrodo en la muestra a analizar cuya temperatura deberaacute estar comprendida
entre 20 y 25oC y tan proacutexima como sea posible a 20
oC Leer directamente el valor del pH
Efectuacuteense al menos 2 determinaciones de cada muestra Tomar como resultado la media
aritmeacutetica de ambas determinaciones
5 Expresioacuten de los resultados
El pH de la solucioacuten al 25 (mm) (25oBrix) del mosto concentrado rectificado se expresaraacuten
con 2 decimales
6 Caracteriacutesticas del meacutetodo
Repetibilidad (r)
r = 007
Reproducibilidad (R)
R = 007
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
20
ANEXO J DIOacuteXIDO DE AZUFRE Tipo IV
1 Definiciones
Se denomina dioacutexido de azufre al dioacutexido de azufre presente en el mosto en las formas
siguientes H2SO
3 H SO3
- cuyo equilibrio es funcioacuten del pH y de la temperatura
H2SO
3 H
+ + HSO
3
macr
H2SO
3 representa el dioacutexido de azufre molecular
Se denomina dioacutexido de azufre total al conjunto de las distintas formas de dioacutexido de azufre
presentes en el mosto en estado libre o combinado con sus componentes
2 Materiales
Se extrae el dioacutexido de azufre total por arrastre en caliente (aproximadamente 100oC) del
mosto concentrado rectificado previamente diluido
21 Reactivos
211 Aacutecido fosfoacuterico al 85 H3PO4 (ρ20 = 171 gml)
212 Solucioacuten de peroacutexido de hidroacutegeno de 91 gl H2O2 (3 voluacutemenes)
213 Reactivo indicador
rojo de metilo hellip 100 mg
azul de metileno hellip 50 mg
Alcohol de 50 vol hellip100 ml
214 Solucioacuten de hidroacutexido de sodio (NaOH) 001 M
22 Material
221 El material utilizado debe ajustarse al esquema que figura a continuacioacuten
principalmente en lo que se refiere al refrigerante
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
21
Figura 1
Las dimensiones estaacuten indicadas en miliacutemetros Los diaacutemetros internos de los 4 tubos
conceacutentricos que constituyen el refrigerante son 45 34 27 y 10 mm
El tubo de conduccioacuten de los gases al borboteador B termina en una pequentildea esfera de 1 cm
de diaacutemetro que lleva en su mayor ciacuterculo horizontal 20 agujeros de 02 mm de diaacutemetro
Tambieacuten puede terminar en una placa de vidrio fritado que garantice la formacioacuten de gran
nuacutemero de pequentildeas burbujas realizando asiacute un buen contacto entre las fases gaseosa y
liacutequida
El flujo de gas que debe recorrer el aparato debe ser de 40 lh aproximadamente El frasco
situado a la derecha del aparato de destina a limitar de 20 a 30 cm de agua la depresioacuten
producida por la trompa de agua Para poder regular dicha depresioacuten de forma que el caudal
sea el correcto conviene colocar un medidor de flujo de tubo semicapilar entre el borboteador
y el frasco
222 Una microbureta
3 Procedimiento
31 En el caso del mosto concentrado rectificado utilizar la solucioacuten obtenida diluyendo la
muestra para analizar al 40 (mv) tal y como se indica en el capiacutetulo laquoAcidez totalraquo en el
apartado 51 En el matraz A de 250 ml del aparato de arrastre introducir 50 ml de esta
solucioacuten y 5 ml de aacutecido fosfoacuterico (2 11) Acoplar el matraz al aparato
32 Introducir en el borboteador B de 2 a 3 ml de solucioacuten de peroacutexido de hidroacutegeno (212)
neutralizarla con la solucioacuten 001 M de hidroacutexido soacutedico (214) llevar a ebullicioacuten el mosto
contenido en el matraz A con una pequentildea llama de 4 a 5 cm de altura que debe tocar
ligeramente el fondo del matraz No colocar bajo el matraz ninguna tela metaacutelica sino
depositarlo sobre un disco perforado con un agujero de 30 mm de diaacutemetro Se evita asiacute la
pirogenacioacuten de las materias extractivas de la muestra sobre las paredes del matraz
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
22
Mantener la ebullicioacuten durante el paso de la corriente de aire (o de nitroacutegeno) En 15 minutos
el dioacutexido de azufre total habraacute sido arrastrado y oxidado Valorar el aacutecido sulfuacuterico formado
con la solucioacuten 001 M de hidroacutexido soacutedico (214) Sea n el nuacutemero de mililitros utilizados
4 Caacutelculo
Dioacutexido de azufre en miligramos por kilo de azuacutecares totales (muestra 50 ml de muestra
preparada (31))
(1600 n)P
P = contenido en (mm) de azuacutecares totales
5 Expresioacuten de los resultados
El dioacutexido de azufre total se expresa en miligramos por kilogramo (mgkg) de azuacutecares
totales
6 Caracteriacutesticas del meacutetodo
Repetibilidad (r)
muestra de 50 ml lt 50 mgl r = 1x 250P mgkg de azuacutecares totales
Reproducibilidad (R)
muestra de 50 ml lt 50 mgl R = 9x 250P mgkg de azuacutecares totales
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
23
ANEXO K CARACTERIacuteSTICAS CROMAacuteTICAS Tipo IV
1 Fundamento
Medida de la absorbancia a 425 nm en cubetas de 1 cm de espesor del mosto concentrado
rectificado cuya concentracioacuten en azuacutecares se haya reducido al 25 (mm) (25o Brix)
2 Material
21 Espectrofotoacutemetro que permita efectuar medidas entre 300 y 700 nm
22 Cubetas de vidrio con un trayecto oacuteptico de 1 cm
23 Filtro con membrana y de una porosidad de 045 μm
3 Procedimiento
31 Preparacioacuten de la muestra
Utilizar una solucioacuten cuyo valor en azuacutecares sea del 25 (mm) (25o
Brix) y que se habraacute
preparado del modo indicado en el capiacutetulo laquopHraquo (41) Filtrarla en un filtro con membrana
de una porosidad de 045 μm
32 Determinacioacuten de la absorbancia
Ajustar a cero para la longitud de onda 425 nm en una cubeta de 1 cm de trayecto oacuteptico que
contenga agua destilada
Determinar la absorbancia A a esta longitud de onda de la solucioacuten al 25 de
azuacutecares (25oBrix) obtenida en el apartado 31 y colocada en una cubeta de 1 cm de trayecto
oacuteptico
4 Expresioacuten de los resultados
La absorbancia a 425 nm del mosto concentrado rectificado en solucioacuten al 25 (mm) de
azuacutecares (25o Brix) se expresaraacute con 2 decimales
Repetibilidad (r)
r = 001 U Abs agrave 25degBrix
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
14
6) Un registrador o en su caso un integrador
7) Flujo de la fase moacutevil 1 mlmin (a tiacutetulo indicativo)
32 Dispositivo de filtracioacuten por membrana (045 μm)
4 Procedimiento
41 Preparacioacuten de la muestra
Utilizar la solucioacuten obtenida diluyendo el mosto concentrado rectificado al 40 (mv) tal
como se indica en el Anexo H del meacutetodo laquoAcidez totalraquo seccioacuten 51 y filtrarla por
membrana (045 μm)
42 Determinacioacuten cromatograacutefica
Inyectar sucesivamente en el cromatoacutegrafo 10 μl de la solucioacuten de referencia y 10 μl de la
muestra preparada como se indica en el punto 41
Repetir las inyecciones en el mismo orden
Registrar el cromatograma
El tiempo de retencioacuten de la sacarosa es de unos 10 minutos
El volumen de la muestra y la secuencia se dan a tiacutetulo orientativo La determinacioacuten
cromatograacutefica puede realizarse tambieacuten con una curva de calibracioacuten
5 Caacutelculo
Utilizar para el caacutelculo el promedio de 2 resultados de la solucioacuten de referencia y de la
muestra
Sea C gl el contenido en sacarosa de la solucioacuten de mosto concentrado rectificado al 40
(mv)
Contenido en sacarosa en gramos por kilogramo de mosto concentrado rectificado 25 ∙ C
6 Expresioacuten de resultados
La concentracioacuten de sacarosa se expresa en gramos por kilogramo con una cifra decimal
7 Caracteriacutesticas del meacutetodo
Repetibilidad (r)
r = 11 gkg mosto
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
15
ANEXO H ACIDEZ TOTAL Tipo IV
1 Definicioacuten
La acidez total de un mosto concentrado rectificado es la suma de los aacutecidos valorables
cuando se lleva el pH a 7 antildeadiendo una solucioacuten alcalina valorada El dioacutexido de carbono no
se incluye en la acidez total
2 Fundamento del meacutetodo
Valoracioacuten potenciomeacutetrica o valoracioacuten en presencia de azul de bromotimol como indicador
del final de reaccioacuten mediante comparacioacuten con un patroacuten de coloracioacuten
3 Reactivos
31 Soluciones tampones
311 pH 70
Fosfato monopotaacutesico (KH2PO4) 1073 g
Solucioacuten 1 M de hidroacutexido soacutedico (NaOH) 500 ml
Agua csp 1 000 ml
312 pH 40
Solucioacuten 005 M de ftalato aacutecido de potasio Solucioacuten con 10211 gl de ftalato aacutecido de
potasio (C8H5KO4) a 20 degC (duracioacuten maacutexima de la solucioacuten 2 meses)
Nota Tambieacuten pueden utilizarse soluciones tampones de referencia comerciales para las que
exista correspondencia con unidades del SI
Por ejemplo pH 1679 plusmn 001 a 25degC
pH 4005 plusmn 001 a 25degC
pH 7000 plusmn 001 a 25degC
32 Solucioacuten 01 M de hidroacutexido soacutedico (NaOH)
33 Solucioacuten de azul de bromotimol de 4 gl
Azul de bromotimol (C27H28Br2O5S)hellip 4 g
Alcohol neutro 96 vol hellip 200 ml
Una vez solubilizado antildeadir
Agua sin CO2 helliphelliphellip 200 ml
Solucioacuten 1 M de hidroacutexido soacutedico
csp coloracioacuten verdeazulada (pH 7) helliphelliphelliphellip75 ml
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
16
Agua csp helliphelliphellip 1000 ml
4 Equipo
41 Potencioacutemetro con escala graduada en unidades de pH y electrodos A tiacutetulo indicativo el
electrodo de vidrio debe conservarse en agua destilada El electrodo de calomelanos de
cloruro potaacutesico saturado debe conservarse en una solucioacuten saturada de cloruro potaacutesico
Generalmente se emplea un electrodo combinado que se conserva en agua destilada
42 Vasos de precipitados de 100 ml de capacidad
5 Procedimiento
51 Preparacioacuten de la muestra
Poner 200 g de mosto concentrado rectificado exactamente pesado en un matraz aforado de
500 ml Enrasar con agua Homogeneizar
52 Valoracioacuten potenciomeacutetrica
521 Puesta a cero del aparato
Se efectuaraacute antes de cada medida siguiendo las instrucciones dadas para el aparato utilizado
522 Calibrado del pH metro
El pH metro se debe calibrar a 20ordmC usando soluciones tampoacuten de referencia acopladas con el
SI Los valores de pH seleccionados deben abarcar la gama de valores que pueden encontrarse
en los mostos Si el pH metro usado no es compatible con la calibracioacuten a valores
suficientemente bajos se deberiacutea realizar una verificacioacuten usando una solucioacuten tampoacuten de
referenencia acoplada con el SI y que tenga un valor de pH cercano a los valores hallados en
los mostos
523 Teacutecnica de medicioacuten
En un vaso de precipitados (44) introducir 50 ml de la muestra preparada como se indica en
51 Antildeadir 10 ml de agua destilada aproximadamente y verter con una bureta la solucioacuten 01
M de hidroacutexido soacutedico (32) hasta que el pH sea igual a 7 a 20 degC La adicioacuten de la solucioacuten
alcalina debe realizarse lentamente agitando constantemente la solucioacuten Se denominara n el
nuacutemero de mililitros de NaOH 01 M utilizados
53 Valoracioacuten con indicador (azul de bromotimol)
531 Ensayo previo obtencioacuten del patroacuten de coloracioacuten
En un vaso de precipitados (44) echar 25 ml de agua destilada y hervida 1 ml de solucioacuten de
azul de bromotimol (33) y 50 ml de muestra preparada como se indica en (51) Antildeadir la
solucioacuten 01 M de hidroacutexido de sodio (32) hasta obtener una coloracioacuten verdeazulada Antildeadir
5 ml de la solucioacuten tampoacuten pH 7 (311)
532 Determinacioacuten
En un vaso de precipitados (44) echar 30 ml de agua destilada y hervida 1 ml de solucioacuten de
azul de bromotimol (33) y 50 ml de muestra preparada como se indica en (51) Antildeadir la
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
17
solucioacuten 01 M de hidroacutexido soacutedico (32) hasta obtener una coloracioacuten ideacutentica a la obtenida
en el ensayo previo (531) Se denominaraacute n al nuacutemero de mililitros de solucioacuten de hidroacutexido
soacutedico 01 M utilizados
6 Expresioacuten de los resultados
61 Meacutetodo de caacutelculo
Acidez total expresada en miliequivalentes por kilogramo de mosto concentrado rectificado
A = 5 n
Acidez total expresada en miliequivalentes por kilogramo de azuacutecares totales A = (500 n)P
P = contenido en (mm) de azuacutecares totales
Se daraacute con 1 decimal
7 Caracteriacutesticas del meacutetodo
Repetibilidad (r)
r = 04 meq kg azuacutecares totales
Reproducibilidad (R)
R = 24 meq kg azuacutecares totales
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
18
ANEXO I pH Tipo IV
1 Fundamento
Medida de la diferencia de potencial entre dos electrodos sumergidos en el liacutequido que se
estudia Uno de los dos electrodos tiene un potencial que es una funcioacuten definida del pH del
liacutequido el otro tiene un potencial fijo y conocido y constituye el electrodo de referencia
2 Reactivos
21 Soluciones tampoacuten
211 Solucioacuten saturada de tartrato aacutecido de potasio al menos de 57 gl de tartrato aacutecido de
potasio (C4H5KO6) a 20oC Esta solucioacuten puede conservarse hasta 2 meses en presencia de 01
g de timol por cada 200 ml)
pHtemperatura
357 a 20oC
356 a 25oC
355 a 30oC
212 Solucioacuten 005 M de ftalato aacutecido de potasio Solucioacuten con 10211 gl de ftalato aacutecido de
potasio (C8H5KO4) a 20 degC (duracioacuten maacutexima de la solucioacuten 2 meses)
pHtemperatura
3999 a 15oC
4003 a 20oC
4008 a 25oC
4015 a 30oC
213 Solucioacuten que contenga
Fosfato monopotaacutesico KH2PO4 hellip 3402 g
Fosfato bipotaacutesico K2HPO4 hellip 4354 g
Agua csp hellip 1 000 ml
(Duracioacuten maacutexima de la solucioacuten 2 meses)
pHtemperatura
690 a 15oC
688 a 20oC
686 a 25oC
685 a 30oC
Nota Tambieacuten pueden utilizarse soluciones tampones de referencia comerciales para las que
exista correspondencia con unidades del SI
Por ejemplo pH 1679 plusmn 001 a 25degC
pH 4005 plusmn 001 a 25degC
pH 7000 plusmn 001 a 25degC
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
19
3 Material
31 pH metro graduado en unidades de pH que permita efectuar medidas con una
aproximacioacuten de plusmn001 como miacutenimo
32 Electrodos
321 Electrodo de vidrio
322 Electrodo de referencia de calomelanos de cloruro potaacutesico saturado
323 O electrodo combinado
4 Procedimiento
41 Preparacioacuten de la muestra para anaacutelisis
Diluirlo con agua a fin de obtener una concentracioacuten de 25 plusmn 05 (mm) en azuacutecares totales
(25oBrix) Si P es el contenido en (mm) en azuacutecares totales del mosto concentrado
rectificado pesar una masa igual a 2 500 P y completar con agua hasta 100 g La
conductividad del agua utilizada deberaacute ser inferior a 2 microsiemens por centiacutemetro
42 Puesta a cero del aparato
Se efectuaraacute antes de cada medida siguiendo las instrucciones dadas para el aparato utilizado
43 Calibrado del pH metro
El pH metro se debe calibrar a 20ordmC usando soluciones tampoacuten de referencia acopladas con el
SI Los valores de pH seleccionados deben abarcar la gama de valores que pueden encontrarse
en los mostos Si el pH metro usado no es compatible con la calibracioacuten a valores
suficientemente bajos se deberiacutea realizar una verificacioacuten usando una solucioacuten tampoacuten de
referenencia acoplada con el SI y que tenga un valor de pH cercano a los valores hallados en
los mostos
44 Medida
Introducir el electrodo en la muestra a analizar cuya temperatura deberaacute estar comprendida
entre 20 y 25oC y tan proacutexima como sea posible a 20
oC Leer directamente el valor del pH
Efectuacuteense al menos 2 determinaciones de cada muestra Tomar como resultado la media
aritmeacutetica de ambas determinaciones
5 Expresioacuten de los resultados
El pH de la solucioacuten al 25 (mm) (25oBrix) del mosto concentrado rectificado se expresaraacuten
con 2 decimales
6 Caracteriacutesticas del meacutetodo
Repetibilidad (r)
r = 007
Reproducibilidad (R)
R = 007
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
20
ANEXO J DIOacuteXIDO DE AZUFRE Tipo IV
1 Definiciones
Se denomina dioacutexido de azufre al dioacutexido de azufre presente en el mosto en las formas
siguientes H2SO
3 H SO3
- cuyo equilibrio es funcioacuten del pH y de la temperatura
H2SO
3 H
+ + HSO
3
macr
H2SO
3 representa el dioacutexido de azufre molecular
Se denomina dioacutexido de azufre total al conjunto de las distintas formas de dioacutexido de azufre
presentes en el mosto en estado libre o combinado con sus componentes
2 Materiales
Se extrae el dioacutexido de azufre total por arrastre en caliente (aproximadamente 100oC) del
mosto concentrado rectificado previamente diluido
21 Reactivos
211 Aacutecido fosfoacuterico al 85 H3PO4 (ρ20 = 171 gml)
212 Solucioacuten de peroacutexido de hidroacutegeno de 91 gl H2O2 (3 voluacutemenes)
213 Reactivo indicador
rojo de metilo hellip 100 mg
azul de metileno hellip 50 mg
Alcohol de 50 vol hellip100 ml
214 Solucioacuten de hidroacutexido de sodio (NaOH) 001 M
22 Material
221 El material utilizado debe ajustarse al esquema que figura a continuacioacuten
principalmente en lo que se refiere al refrigerante
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
21
Figura 1
Las dimensiones estaacuten indicadas en miliacutemetros Los diaacutemetros internos de los 4 tubos
conceacutentricos que constituyen el refrigerante son 45 34 27 y 10 mm
El tubo de conduccioacuten de los gases al borboteador B termina en una pequentildea esfera de 1 cm
de diaacutemetro que lleva en su mayor ciacuterculo horizontal 20 agujeros de 02 mm de diaacutemetro
Tambieacuten puede terminar en una placa de vidrio fritado que garantice la formacioacuten de gran
nuacutemero de pequentildeas burbujas realizando asiacute un buen contacto entre las fases gaseosa y
liacutequida
El flujo de gas que debe recorrer el aparato debe ser de 40 lh aproximadamente El frasco
situado a la derecha del aparato de destina a limitar de 20 a 30 cm de agua la depresioacuten
producida por la trompa de agua Para poder regular dicha depresioacuten de forma que el caudal
sea el correcto conviene colocar un medidor de flujo de tubo semicapilar entre el borboteador
y el frasco
222 Una microbureta
3 Procedimiento
31 En el caso del mosto concentrado rectificado utilizar la solucioacuten obtenida diluyendo la
muestra para analizar al 40 (mv) tal y como se indica en el capiacutetulo laquoAcidez totalraquo en el
apartado 51 En el matraz A de 250 ml del aparato de arrastre introducir 50 ml de esta
solucioacuten y 5 ml de aacutecido fosfoacuterico (2 11) Acoplar el matraz al aparato
32 Introducir en el borboteador B de 2 a 3 ml de solucioacuten de peroacutexido de hidroacutegeno (212)
neutralizarla con la solucioacuten 001 M de hidroacutexido soacutedico (214) llevar a ebullicioacuten el mosto
contenido en el matraz A con una pequentildea llama de 4 a 5 cm de altura que debe tocar
ligeramente el fondo del matraz No colocar bajo el matraz ninguna tela metaacutelica sino
depositarlo sobre un disco perforado con un agujero de 30 mm de diaacutemetro Se evita asiacute la
pirogenacioacuten de las materias extractivas de la muestra sobre las paredes del matraz
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
22
Mantener la ebullicioacuten durante el paso de la corriente de aire (o de nitroacutegeno) En 15 minutos
el dioacutexido de azufre total habraacute sido arrastrado y oxidado Valorar el aacutecido sulfuacuterico formado
con la solucioacuten 001 M de hidroacutexido soacutedico (214) Sea n el nuacutemero de mililitros utilizados
4 Caacutelculo
Dioacutexido de azufre en miligramos por kilo de azuacutecares totales (muestra 50 ml de muestra
preparada (31))
(1600 n)P
P = contenido en (mm) de azuacutecares totales
5 Expresioacuten de los resultados
El dioacutexido de azufre total se expresa en miligramos por kilogramo (mgkg) de azuacutecares
totales
6 Caracteriacutesticas del meacutetodo
Repetibilidad (r)
muestra de 50 ml lt 50 mgl r = 1x 250P mgkg de azuacutecares totales
Reproducibilidad (R)
muestra de 50 ml lt 50 mgl R = 9x 250P mgkg de azuacutecares totales
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
23
ANEXO K CARACTERIacuteSTICAS CROMAacuteTICAS Tipo IV
1 Fundamento
Medida de la absorbancia a 425 nm en cubetas de 1 cm de espesor del mosto concentrado
rectificado cuya concentracioacuten en azuacutecares se haya reducido al 25 (mm) (25o Brix)
2 Material
21 Espectrofotoacutemetro que permita efectuar medidas entre 300 y 700 nm
22 Cubetas de vidrio con un trayecto oacuteptico de 1 cm
23 Filtro con membrana y de una porosidad de 045 μm
3 Procedimiento
31 Preparacioacuten de la muestra
Utilizar una solucioacuten cuyo valor en azuacutecares sea del 25 (mm) (25o
Brix) y que se habraacute
preparado del modo indicado en el capiacutetulo laquopHraquo (41) Filtrarla en un filtro con membrana
de una porosidad de 045 μm
32 Determinacioacuten de la absorbancia
Ajustar a cero para la longitud de onda 425 nm en una cubeta de 1 cm de trayecto oacuteptico que
contenga agua destilada
Determinar la absorbancia A a esta longitud de onda de la solucioacuten al 25 de
azuacutecares (25oBrix) obtenida en el apartado 31 y colocada en una cubeta de 1 cm de trayecto
oacuteptico
4 Expresioacuten de los resultados
La absorbancia a 425 nm del mosto concentrado rectificado en solucioacuten al 25 (mm) de
azuacutecares (25o Brix) se expresaraacute con 2 decimales
Repetibilidad (r)
r = 001 U Abs agrave 25degBrix
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
15
ANEXO H ACIDEZ TOTAL Tipo IV
1 Definicioacuten
La acidez total de un mosto concentrado rectificado es la suma de los aacutecidos valorables
cuando se lleva el pH a 7 antildeadiendo una solucioacuten alcalina valorada El dioacutexido de carbono no
se incluye en la acidez total
2 Fundamento del meacutetodo
Valoracioacuten potenciomeacutetrica o valoracioacuten en presencia de azul de bromotimol como indicador
del final de reaccioacuten mediante comparacioacuten con un patroacuten de coloracioacuten
3 Reactivos
31 Soluciones tampones
311 pH 70
Fosfato monopotaacutesico (KH2PO4) 1073 g
Solucioacuten 1 M de hidroacutexido soacutedico (NaOH) 500 ml
Agua csp 1 000 ml
312 pH 40
Solucioacuten 005 M de ftalato aacutecido de potasio Solucioacuten con 10211 gl de ftalato aacutecido de
potasio (C8H5KO4) a 20 degC (duracioacuten maacutexima de la solucioacuten 2 meses)
Nota Tambieacuten pueden utilizarse soluciones tampones de referencia comerciales para las que
exista correspondencia con unidades del SI
Por ejemplo pH 1679 plusmn 001 a 25degC
pH 4005 plusmn 001 a 25degC
pH 7000 plusmn 001 a 25degC
32 Solucioacuten 01 M de hidroacutexido soacutedico (NaOH)
33 Solucioacuten de azul de bromotimol de 4 gl
Azul de bromotimol (C27H28Br2O5S)hellip 4 g
Alcohol neutro 96 vol hellip 200 ml
Una vez solubilizado antildeadir
Agua sin CO2 helliphelliphellip 200 ml
Solucioacuten 1 M de hidroacutexido soacutedico
csp coloracioacuten verdeazulada (pH 7) helliphelliphelliphellip75 ml
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
16
Agua csp helliphelliphellip 1000 ml
4 Equipo
41 Potencioacutemetro con escala graduada en unidades de pH y electrodos A tiacutetulo indicativo el
electrodo de vidrio debe conservarse en agua destilada El electrodo de calomelanos de
cloruro potaacutesico saturado debe conservarse en una solucioacuten saturada de cloruro potaacutesico
Generalmente se emplea un electrodo combinado que se conserva en agua destilada
42 Vasos de precipitados de 100 ml de capacidad
5 Procedimiento
51 Preparacioacuten de la muestra
Poner 200 g de mosto concentrado rectificado exactamente pesado en un matraz aforado de
500 ml Enrasar con agua Homogeneizar
52 Valoracioacuten potenciomeacutetrica
521 Puesta a cero del aparato
Se efectuaraacute antes de cada medida siguiendo las instrucciones dadas para el aparato utilizado
522 Calibrado del pH metro
El pH metro se debe calibrar a 20ordmC usando soluciones tampoacuten de referencia acopladas con el
SI Los valores de pH seleccionados deben abarcar la gama de valores que pueden encontrarse
en los mostos Si el pH metro usado no es compatible con la calibracioacuten a valores
suficientemente bajos se deberiacutea realizar una verificacioacuten usando una solucioacuten tampoacuten de
referenencia acoplada con el SI y que tenga un valor de pH cercano a los valores hallados en
los mostos
523 Teacutecnica de medicioacuten
En un vaso de precipitados (44) introducir 50 ml de la muestra preparada como se indica en
51 Antildeadir 10 ml de agua destilada aproximadamente y verter con una bureta la solucioacuten 01
M de hidroacutexido soacutedico (32) hasta que el pH sea igual a 7 a 20 degC La adicioacuten de la solucioacuten
alcalina debe realizarse lentamente agitando constantemente la solucioacuten Se denominara n el
nuacutemero de mililitros de NaOH 01 M utilizados
53 Valoracioacuten con indicador (azul de bromotimol)
531 Ensayo previo obtencioacuten del patroacuten de coloracioacuten
En un vaso de precipitados (44) echar 25 ml de agua destilada y hervida 1 ml de solucioacuten de
azul de bromotimol (33) y 50 ml de muestra preparada como se indica en (51) Antildeadir la
solucioacuten 01 M de hidroacutexido de sodio (32) hasta obtener una coloracioacuten verdeazulada Antildeadir
5 ml de la solucioacuten tampoacuten pH 7 (311)
532 Determinacioacuten
En un vaso de precipitados (44) echar 30 ml de agua destilada y hervida 1 ml de solucioacuten de
azul de bromotimol (33) y 50 ml de muestra preparada como se indica en (51) Antildeadir la
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
17
solucioacuten 01 M de hidroacutexido soacutedico (32) hasta obtener una coloracioacuten ideacutentica a la obtenida
en el ensayo previo (531) Se denominaraacute n al nuacutemero de mililitros de solucioacuten de hidroacutexido
soacutedico 01 M utilizados
6 Expresioacuten de los resultados
61 Meacutetodo de caacutelculo
Acidez total expresada en miliequivalentes por kilogramo de mosto concentrado rectificado
A = 5 n
Acidez total expresada en miliequivalentes por kilogramo de azuacutecares totales A = (500 n)P
P = contenido en (mm) de azuacutecares totales
Se daraacute con 1 decimal
7 Caracteriacutesticas del meacutetodo
Repetibilidad (r)
r = 04 meq kg azuacutecares totales
Reproducibilidad (R)
R = 24 meq kg azuacutecares totales
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
18
ANEXO I pH Tipo IV
1 Fundamento
Medida de la diferencia de potencial entre dos electrodos sumergidos en el liacutequido que se
estudia Uno de los dos electrodos tiene un potencial que es una funcioacuten definida del pH del
liacutequido el otro tiene un potencial fijo y conocido y constituye el electrodo de referencia
2 Reactivos
21 Soluciones tampoacuten
211 Solucioacuten saturada de tartrato aacutecido de potasio al menos de 57 gl de tartrato aacutecido de
potasio (C4H5KO6) a 20oC Esta solucioacuten puede conservarse hasta 2 meses en presencia de 01
g de timol por cada 200 ml)
pHtemperatura
357 a 20oC
356 a 25oC
355 a 30oC
212 Solucioacuten 005 M de ftalato aacutecido de potasio Solucioacuten con 10211 gl de ftalato aacutecido de
potasio (C8H5KO4) a 20 degC (duracioacuten maacutexima de la solucioacuten 2 meses)
pHtemperatura
3999 a 15oC
4003 a 20oC
4008 a 25oC
4015 a 30oC
213 Solucioacuten que contenga
Fosfato monopotaacutesico KH2PO4 hellip 3402 g
Fosfato bipotaacutesico K2HPO4 hellip 4354 g
Agua csp hellip 1 000 ml
(Duracioacuten maacutexima de la solucioacuten 2 meses)
pHtemperatura
690 a 15oC
688 a 20oC
686 a 25oC
685 a 30oC
Nota Tambieacuten pueden utilizarse soluciones tampones de referencia comerciales para las que
exista correspondencia con unidades del SI
Por ejemplo pH 1679 plusmn 001 a 25degC
pH 4005 plusmn 001 a 25degC
pH 7000 plusmn 001 a 25degC
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
19
3 Material
31 pH metro graduado en unidades de pH que permita efectuar medidas con una
aproximacioacuten de plusmn001 como miacutenimo
32 Electrodos
321 Electrodo de vidrio
322 Electrodo de referencia de calomelanos de cloruro potaacutesico saturado
323 O electrodo combinado
4 Procedimiento
41 Preparacioacuten de la muestra para anaacutelisis
Diluirlo con agua a fin de obtener una concentracioacuten de 25 plusmn 05 (mm) en azuacutecares totales
(25oBrix) Si P es el contenido en (mm) en azuacutecares totales del mosto concentrado
rectificado pesar una masa igual a 2 500 P y completar con agua hasta 100 g La
conductividad del agua utilizada deberaacute ser inferior a 2 microsiemens por centiacutemetro
42 Puesta a cero del aparato
Se efectuaraacute antes de cada medida siguiendo las instrucciones dadas para el aparato utilizado
43 Calibrado del pH metro
El pH metro se debe calibrar a 20ordmC usando soluciones tampoacuten de referencia acopladas con el
SI Los valores de pH seleccionados deben abarcar la gama de valores que pueden encontrarse
en los mostos Si el pH metro usado no es compatible con la calibracioacuten a valores
suficientemente bajos se deberiacutea realizar una verificacioacuten usando una solucioacuten tampoacuten de
referenencia acoplada con el SI y que tenga un valor de pH cercano a los valores hallados en
los mostos
44 Medida
Introducir el electrodo en la muestra a analizar cuya temperatura deberaacute estar comprendida
entre 20 y 25oC y tan proacutexima como sea posible a 20
oC Leer directamente el valor del pH
Efectuacuteense al menos 2 determinaciones de cada muestra Tomar como resultado la media
aritmeacutetica de ambas determinaciones
5 Expresioacuten de los resultados
El pH de la solucioacuten al 25 (mm) (25oBrix) del mosto concentrado rectificado se expresaraacuten
con 2 decimales
6 Caracteriacutesticas del meacutetodo
Repetibilidad (r)
r = 007
Reproducibilidad (R)
R = 007
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
20
ANEXO J DIOacuteXIDO DE AZUFRE Tipo IV
1 Definiciones
Se denomina dioacutexido de azufre al dioacutexido de azufre presente en el mosto en las formas
siguientes H2SO
3 H SO3
- cuyo equilibrio es funcioacuten del pH y de la temperatura
H2SO
3 H
+ + HSO
3
macr
H2SO
3 representa el dioacutexido de azufre molecular
Se denomina dioacutexido de azufre total al conjunto de las distintas formas de dioacutexido de azufre
presentes en el mosto en estado libre o combinado con sus componentes
2 Materiales
Se extrae el dioacutexido de azufre total por arrastre en caliente (aproximadamente 100oC) del
mosto concentrado rectificado previamente diluido
21 Reactivos
211 Aacutecido fosfoacuterico al 85 H3PO4 (ρ20 = 171 gml)
212 Solucioacuten de peroacutexido de hidroacutegeno de 91 gl H2O2 (3 voluacutemenes)
213 Reactivo indicador
rojo de metilo hellip 100 mg
azul de metileno hellip 50 mg
Alcohol de 50 vol hellip100 ml
214 Solucioacuten de hidroacutexido de sodio (NaOH) 001 M
22 Material
221 El material utilizado debe ajustarse al esquema que figura a continuacioacuten
principalmente en lo que se refiere al refrigerante
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
21
Figura 1
Las dimensiones estaacuten indicadas en miliacutemetros Los diaacutemetros internos de los 4 tubos
conceacutentricos que constituyen el refrigerante son 45 34 27 y 10 mm
El tubo de conduccioacuten de los gases al borboteador B termina en una pequentildea esfera de 1 cm
de diaacutemetro que lleva en su mayor ciacuterculo horizontal 20 agujeros de 02 mm de diaacutemetro
Tambieacuten puede terminar en una placa de vidrio fritado que garantice la formacioacuten de gran
nuacutemero de pequentildeas burbujas realizando asiacute un buen contacto entre las fases gaseosa y
liacutequida
El flujo de gas que debe recorrer el aparato debe ser de 40 lh aproximadamente El frasco
situado a la derecha del aparato de destina a limitar de 20 a 30 cm de agua la depresioacuten
producida por la trompa de agua Para poder regular dicha depresioacuten de forma que el caudal
sea el correcto conviene colocar un medidor de flujo de tubo semicapilar entre el borboteador
y el frasco
222 Una microbureta
3 Procedimiento
31 En el caso del mosto concentrado rectificado utilizar la solucioacuten obtenida diluyendo la
muestra para analizar al 40 (mv) tal y como se indica en el capiacutetulo laquoAcidez totalraquo en el
apartado 51 En el matraz A de 250 ml del aparato de arrastre introducir 50 ml de esta
solucioacuten y 5 ml de aacutecido fosfoacuterico (2 11) Acoplar el matraz al aparato
32 Introducir en el borboteador B de 2 a 3 ml de solucioacuten de peroacutexido de hidroacutegeno (212)
neutralizarla con la solucioacuten 001 M de hidroacutexido soacutedico (214) llevar a ebullicioacuten el mosto
contenido en el matraz A con una pequentildea llama de 4 a 5 cm de altura que debe tocar
ligeramente el fondo del matraz No colocar bajo el matraz ninguna tela metaacutelica sino
depositarlo sobre un disco perforado con un agujero de 30 mm de diaacutemetro Se evita asiacute la
pirogenacioacuten de las materias extractivas de la muestra sobre las paredes del matraz
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
22
Mantener la ebullicioacuten durante el paso de la corriente de aire (o de nitroacutegeno) En 15 minutos
el dioacutexido de azufre total habraacute sido arrastrado y oxidado Valorar el aacutecido sulfuacuterico formado
con la solucioacuten 001 M de hidroacutexido soacutedico (214) Sea n el nuacutemero de mililitros utilizados
4 Caacutelculo
Dioacutexido de azufre en miligramos por kilo de azuacutecares totales (muestra 50 ml de muestra
preparada (31))
(1600 n)P
P = contenido en (mm) de azuacutecares totales
5 Expresioacuten de los resultados
El dioacutexido de azufre total se expresa en miligramos por kilogramo (mgkg) de azuacutecares
totales
6 Caracteriacutesticas del meacutetodo
Repetibilidad (r)
muestra de 50 ml lt 50 mgl r = 1x 250P mgkg de azuacutecares totales
Reproducibilidad (R)
muestra de 50 ml lt 50 mgl R = 9x 250P mgkg de azuacutecares totales
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
23
ANEXO K CARACTERIacuteSTICAS CROMAacuteTICAS Tipo IV
1 Fundamento
Medida de la absorbancia a 425 nm en cubetas de 1 cm de espesor del mosto concentrado
rectificado cuya concentracioacuten en azuacutecares se haya reducido al 25 (mm) (25o Brix)
2 Material
21 Espectrofotoacutemetro que permita efectuar medidas entre 300 y 700 nm
22 Cubetas de vidrio con un trayecto oacuteptico de 1 cm
23 Filtro con membrana y de una porosidad de 045 μm
3 Procedimiento
31 Preparacioacuten de la muestra
Utilizar una solucioacuten cuyo valor en azuacutecares sea del 25 (mm) (25o
Brix) y que se habraacute
preparado del modo indicado en el capiacutetulo laquopHraquo (41) Filtrarla en un filtro con membrana
de una porosidad de 045 μm
32 Determinacioacuten de la absorbancia
Ajustar a cero para la longitud de onda 425 nm en una cubeta de 1 cm de trayecto oacuteptico que
contenga agua destilada
Determinar la absorbancia A a esta longitud de onda de la solucioacuten al 25 de
azuacutecares (25oBrix) obtenida en el apartado 31 y colocada en una cubeta de 1 cm de trayecto
oacuteptico
4 Expresioacuten de los resultados
La absorbancia a 425 nm del mosto concentrado rectificado en solucioacuten al 25 (mm) de
azuacutecares (25o Brix) se expresaraacute con 2 decimales
Repetibilidad (r)
r = 001 U Abs agrave 25degBrix
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
16
Agua csp helliphelliphellip 1000 ml
4 Equipo
41 Potencioacutemetro con escala graduada en unidades de pH y electrodos A tiacutetulo indicativo el
electrodo de vidrio debe conservarse en agua destilada El electrodo de calomelanos de
cloruro potaacutesico saturado debe conservarse en una solucioacuten saturada de cloruro potaacutesico
Generalmente se emplea un electrodo combinado que se conserva en agua destilada
42 Vasos de precipitados de 100 ml de capacidad
5 Procedimiento
51 Preparacioacuten de la muestra
Poner 200 g de mosto concentrado rectificado exactamente pesado en un matraz aforado de
500 ml Enrasar con agua Homogeneizar
52 Valoracioacuten potenciomeacutetrica
521 Puesta a cero del aparato
Se efectuaraacute antes de cada medida siguiendo las instrucciones dadas para el aparato utilizado
522 Calibrado del pH metro
El pH metro se debe calibrar a 20ordmC usando soluciones tampoacuten de referencia acopladas con el
SI Los valores de pH seleccionados deben abarcar la gama de valores que pueden encontrarse
en los mostos Si el pH metro usado no es compatible con la calibracioacuten a valores
suficientemente bajos se deberiacutea realizar una verificacioacuten usando una solucioacuten tampoacuten de
referenencia acoplada con el SI y que tenga un valor de pH cercano a los valores hallados en
los mostos
523 Teacutecnica de medicioacuten
En un vaso de precipitados (44) introducir 50 ml de la muestra preparada como se indica en
51 Antildeadir 10 ml de agua destilada aproximadamente y verter con una bureta la solucioacuten 01
M de hidroacutexido soacutedico (32) hasta que el pH sea igual a 7 a 20 degC La adicioacuten de la solucioacuten
alcalina debe realizarse lentamente agitando constantemente la solucioacuten Se denominara n el
nuacutemero de mililitros de NaOH 01 M utilizados
53 Valoracioacuten con indicador (azul de bromotimol)
531 Ensayo previo obtencioacuten del patroacuten de coloracioacuten
En un vaso de precipitados (44) echar 25 ml de agua destilada y hervida 1 ml de solucioacuten de
azul de bromotimol (33) y 50 ml de muestra preparada como se indica en (51) Antildeadir la
solucioacuten 01 M de hidroacutexido de sodio (32) hasta obtener una coloracioacuten verdeazulada Antildeadir
5 ml de la solucioacuten tampoacuten pH 7 (311)
532 Determinacioacuten
En un vaso de precipitados (44) echar 30 ml de agua destilada y hervida 1 ml de solucioacuten de
azul de bromotimol (33) y 50 ml de muestra preparada como se indica en (51) Antildeadir la
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
17
solucioacuten 01 M de hidroacutexido soacutedico (32) hasta obtener una coloracioacuten ideacutentica a la obtenida
en el ensayo previo (531) Se denominaraacute n al nuacutemero de mililitros de solucioacuten de hidroacutexido
soacutedico 01 M utilizados
6 Expresioacuten de los resultados
61 Meacutetodo de caacutelculo
Acidez total expresada en miliequivalentes por kilogramo de mosto concentrado rectificado
A = 5 n
Acidez total expresada en miliequivalentes por kilogramo de azuacutecares totales A = (500 n)P
P = contenido en (mm) de azuacutecares totales
Se daraacute con 1 decimal
7 Caracteriacutesticas del meacutetodo
Repetibilidad (r)
r = 04 meq kg azuacutecares totales
Reproducibilidad (R)
R = 24 meq kg azuacutecares totales
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
18
ANEXO I pH Tipo IV
1 Fundamento
Medida de la diferencia de potencial entre dos electrodos sumergidos en el liacutequido que se
estudia Uno de los dos electrodos tiene un potencial que es una funcioacuten definida del pH del
liacutequido el otro tiene un potencial fijo y conocido y constituye el electrodo de referencia
2 Reactivos
21 Soluciones tampoacuten
211 Solucioacuten saturada de tartrato aacutecido de potasio al menos de 57 gl de tartrato aacutecido de
potasio (C4H5KO6) a 20oC Esta solucioacuten puede conservarse hasta 2 meses en presencia de 01
g de timol por cada 200 ml)
pHtemperatura
357 a 20oC
356 a 25oC
355 a 30oC
212 Solucioacuten 005 M de ftalato aacutecido de potasio Solucioacuten con 10211 gl de ftalato aacutecido de
potasio (C8H5KO4) a 20 degC (duracioacuten maacutexima de la solucioacuten 2 meses)
pHtemperatura
3999 a 15oC
4003 a 20oC
4008 a 25oC
4015 a 30oC
213 Solucioacuten que contenga
Fosfato monopotaacutesico KH2PO4 hellip 3402 g
Fosfato bipotaacutesico K2HPO4 hellip 4354 g
Agua csp hellip 1 000 ml
(Duracioacuten maacutexima de la solucioacuten 2 meses)
pHtemperatura
690 a 15oC
688 a 20oC
686 a 25oC
685 a 30oC
Nota Tambieacuten pueden utilizarse soluciones tampones de referencia comerciales para las que
exista correspondencia con unidades del SI
Por ejemplo pH 1679 plusmn 001 a 25degC
pH 4005 plusmn 001 a 25degC
pH 7000 plusmn 001 a 25degC
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
19
3 Material
31 pH metro graduado en unidades de pH que permita efectuar medidas con una
aproximacioacuten de plusmn001 como miacutenimo
32 Electrodos
321 Electrodo de vidrio
322 Electrodo de referencia de calomelanos de cloruro potaacutesico saturado
323 O electrodo combinado
4 Procedimiento
41 Preparacioacuten de la muestra para anaacutelisis
Diluirlo con agua a fin de obtener una concentracioacuten de 25 plusmn 05 (mm) en azuacutecares totales
(25oBrix) Si P es el contenido en (mm) en azuacutecares totales del mosto concentrado
rectificado pesar una masa igual a 2 500 P y completar con agua hasta 100 g La
conductividad del agua utilizada deberaacute ser inferior a 2 microsiemens por centiacutemetro
42 Puesta a cero del aparato
Se efectuaraacute antes de cada medida siguiendo las instrucciones dadas para el aparato utilizado
43 Calibrado del pH metro
El pH metro se debe calibrar a 20ordmC usando soluciones tampoacuten de referencia acopladas con el
SI Los valores de pH seleccionados deben abarcar la gama de valores que pueden encontrarse
en los mostos Si el pH metro usado no es compatible con la calibracioacuten a valores
suficientemente bajos se deberiacutea realizar una verificacioacuten usando una solucioacuten tampoacuten de
referenencia acoplada con el SI y que tenga un valor de pH cercano a los valores hallados en
los mostos
44 Medida
Introducir el electrodo en la muestra a analizar cuya temperatura deberaacute estar comprendida
entre 20 y 25oC y tan proacutexima como sea posible a 20
oC Leer directamente el valor del pH
Efectuacuteense al menos 2 determinaciones de cada muestra Tomar como resultado la media
aritmeacutetica de ambas determinaciones
5 Expresioacuten de los resultados
El pH de la solucioacuten al 25 (mm) (25oBrix) del mosto concentrado rectificado se expresaraacuten
con 2 decimales
6 Caracteriacutesticas del meacutetodo
Repetibilidad (r)
r = 007
Reproducibilidad (R)
R = 007
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
20
ANEXO J DIOacuteXIDO DE AZUFRE Tipo IV
1 Definiciones
Se denomina dioacutexido de azufre al dioacutexido de azufre presente en el mosto en las formas
siguientes H2SO
3 H SO3
- cuyo equilibrio es funcioacuten del pH y de la temperatura
H2SO
3 H
+ + HSO
3
macr
H2SO
3 representa el dioacutexido de azufre molecular
Se denomina dioacutexido de azufre total al conjunto de las distintas formas de dioacutexido de azufre
presentes en el mosto en estado libre o combinado con sus componentes
2 Materiales
Se extrae el dioacutexido de azufre total por arrastre en caliente (aproximadamente 100oC) del
mosto concentrado rectificado previamente diluido
21 Reactivos
211 Aacutecido fosfoacuterico al 85 H3PO4 (ρ20 = 171 gml)
212 Solucioacuten de peroacutexido de hidroacutegeno de 91 gl H2O2 (3 voluacutemenes)
213 Reactivo indicador
rojo de metilo hellip 100 mg
azul de metileno hellip 50 mg
Alcohol de 50 vol hellip100 ml
214 Solucioacuten de hidroacutexido de sodio (NaOH) 001 M
22 Material
221 El material utilizado debe ajustarse al esquema que figura a continuacioacuten
principalmente en lo que se refiere al refrigerante
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
21
Figura 1
Las dimensiones estaacuten indicadas en miliacutemetros Los diaacutemetros internos de los 4 tubos
conceacutentricos que constituyen el refrigerante son 45 34 27 y 10 mm
El tubo de conduccioacuten de los gases al borboteador B termina en una pequentildea esfera de 1 cm
de diaacutemetro que lleva en su mayor ciacuterculo horizontal 20 agujeros de 02 mm de diaacutemetro
Tambieacuten puede terminar en una placa de vidrio fritado que garantice la formacioacuten de gran
nuacutemero de pequentildeas burbujas realizando asiacute un buen contacto entre las fases gaseosa y
liacutequida
El flujo de gas que debe recorrer el aparato debe ser de 40 lh aproximadamente El frasco
situado a la derecha del aparato de destina a limitar de 20 a 30 cm de agua la depresioacuten
producida por la trompa de agua Para poder regular dicha depresioacuten de forma que el caudal
sea el correcto conviene colocar un medidor de flujo de tubo semicapilar entre el borboteador
y el frasco
222 Una microbureta
3 Procedimiento
31 En el caso del mosto concentrado rectificado utilizar la solucioacuten obtenida diluyendo la
muestra para analizar al 40 (mv) tal y como se indica en el capiacutetulo laquoAcidez totalraquo en el
apartado 51 En el matraz A de 250 ml del aparato de arrastre introducir 50 ml de esta
solucioacuten y 5 ml de aacutecido fosfoacuterico (2 11) Acoplar el matraz al aparato
32 Introducir en el borboteador B de 2 a 3 ml de solucioacuten de peroacutexido de hidroacutegeno (212)
neutralizarla con la solucioacuten 001 M de hidroacutexido soacutedico (214) llevar a ebullicioacuten el mosto
contenido en el matraz A con una pequentildea llama de 4 a 5 cm de altura que debe tocar
ligeramente el fondo del matraz No colocar bajo el matraz ninguna tela metaacutelica sino
depositarlo sobre un disco perforado con un agujero de 30 mm de diaacutemetro Se evita asiacute la
pirogenacioacuten de las materias extractivas de la muestra sobre las paredes del matraz
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
22
Mantener la ebullicioacuten durante el paso de la corriente de aire (o de nitroacutegeno) En 15 minutos
el dioacutexido de azufre total habraacute sido arrastrado y oxidado Valorar el aacutecido sulfuacuterico formado
con la solucioacuten 001 M de hidroacutexido soacutedico (214) Sea n el nuacutemero de mililitros utilizados
4 Caacutelculo
Dioacutexido de azufre en miligramos por kilo de azuacutecares totales (muestra 50 ml de muestra
preparada (31))
(1600 n)P
P = contenido en (mm) de azuacutecares totales
5 Expresioacuten de los resultados
El dioacutexido de azufre total se expresa en miligramos por kilogramo (mgkg) de azuacutecares
totales
6 Caracteriacutesticas del meacutetodo
Repetibilidad (r)
muestra de 50 ml lt 50 mgl r = 1x 250P mgkg de azuacutecares totales
Reproducibilidad (R)
muestra de 50 ml lt 50 mgl R = 9x 250P mgkg de azuacutecares totales
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
23
ANEXO K CARACTERIacuteSTICAS CROMAacuteTICAS Tipo IV
1 Fundamento
Medida de la absorbancia a 425 nm en cubetas de 1 cm de espesor del mosto concentrado
rectificado cuya concentracioacuten en azuacutecares se haya reducido al 25 (mm) (25o Brix)
2 Material
21 Espectrofotoacutemetro que permita efectuar medidas entre 300 y 700 nm
22 Cubetas de vidrio con un trayecto oacuteptico de 1 cm
23 Filtro con membrana y de una porosidad de 045 μm
3 Procedimiento
31 Preparacioacuten de la muestra
Utilizar una solucioacuten cuyo valor en azuacutecares sea del 25 (mm) (25o
Brix) y que se habraacute
preparado del modo indicado en el capiacutetulo laquopHraquo (41) Filtrarla en un filtro con membrana
de una porosidad de 045 μm
32 Determinacioacuten de la absorbancia
Ajustar a cero para la longitud de onda 425 nm en una cubeta de 1 cm de trayecto oacuteptico que
contenga agua destilada
Determinar la absorbancia A a esta longitud de onda de la solucioacuten al 25 de
azuacutecares (25oBrix) obtenida en el apartado 31 y colocada en una cubeta de 1 cm de trayecto
oacuteptico
4 Expresioacuten de los resultados
La absorbancia a 425 nm del mosto concentrado rectificado en solucioacuten al 25 (mm) de
azuacutecares (25o Brix) se expresaraacute con 2 decimales
Repetibilidad (r)
r = 001 U Abs agrave 25degBrix
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
17
solucioacuten 01 M de hidroacutexido soacutedico (32) hasta obtener una coloracioacuten ideacutentica a la obtenida
en el ensayo previo (531) Se denominaraacute n al nuacutemero de mililitros de solucioacuten de hidroacutexido
soacutedico 01 M utilizados
6 Expresioacuten de los resultados
61 Meacutetodo de caacutelculo
Acidez total expresada en miliequivalentes por kilogramo de mosto concentrado rectificado
A = 5 n
Acidez total expresada en miliequivalentes por kilogramo de azuacutecares totales A = (500 n)P
P = contenido en (mm) de azuacutecares totales
Se daraacute con 1 decimal
7 Caracteriacutesticas del meacutetodo
Repetibilidad (r)
r = 04 meq kg azuacutecares totales
Reproducibilidad (R)
R = 24 meq kg azuacutecares totales
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
18
ANEXO I pH Tipo IV
1 Fundamento
Medida de la diferencia de potencial entre dos electrodos sumergidos en el liacutequido que se
estudia Uno de los dos electrodos tiene un potencial que es una funcioacuten definida del pH del
liacutequido el otro tiene un potencial fijo y conocido y constituye el electrodo de referencia
2 Reactivos
21 Soluciones tampoacuten
211 Solucioacuten saturada de tartrato aacutecido de potasio al menos de 57 gl de tartrato aacutecido de
potasio (C4H5KO6) a 20oC Esta solucioacuten puede conservarse hasta 2 meses en presencia de 01
g de timol por cada 200 ml)
pHtemperatura
357 a 20oC
356 a 25oC
355 a 30oC
212 Solucioacuten 005 M de ftalato aacutecido de potasio Solucioacuten con 10211 gl de ftalato aacutecido de
potasio (C8H5KO4) a 20 degC (duracioacuten maacutexima de la solucioacuten 2 meses)
pHtemperatura
3999 a 15oC
4003 a 20oC
4008 a 25oC
4015 a 30oC
213 Solucioacuten que contenga
Fosfato monopotaacutesico KH2PO4 hellip 3402 g
Fosfato bipotaacutesico K2HPO4 hellip 4354 g
Agua csp hellip 1 000 ml
(Duracioacuten maacutexima de la solucioacuten 2 meses)
pHtemperatura
690 a 15oC
688 a 20oC
686 a 25oC
685 a 30oC
Nota Tambieacuten pueden utilizarse soluciones tampones de referencia comerciales para las que
exista correspondencia con unidades del SI
Por ejemplo pH 1679 plusmn 001 a 25degC
pH 4005 plusmn 001 a 25degC
pH 7000 plusmn 001 a 25degC
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
19
3 Material
31 pH metro graduado en unidades de pH que permita efectuar medidas con una
aproximacioacuten de plusmn001 como miacutenimo
32 Electrodos
321 Electrodo de vidrio
322 Electrodo de referencia de calomelanos de cloruro potaacutesico saturado
323 O electrodo combinado
4 Procedimiento
41 Preparacioacuten de la muestra para anaacutelisis
Diluirlo con agua a fin de obtener una concentracioacuten de 25 plusmn 05 (mm) en azuacutecares totales
(25oBrix) Si P es el contenido en (mm) en azuacutecares totales del mosto concentrado
rectificado pesar una masa igual a 2 500 P y completar con agua hasta 100 g La
conductividad del agua utilizada deberaacute ser inferior a 2 microsiemens por centiacutemetro
42 Puesta a cero del aparato
Se efectuaraacute antes de cada medida siguiendo las instrucciones dadas para el aparato utilizado
43 Calibrado del pH metro
El pH metro se debe calibrar a 20ordmC usando soluciones tampoacuten de referencia acopladas con el
SI Los valores de pH seleccionados deben abarcar la gama de valores que pueden encontrarse
en los mostos Si el pH metro usado no es compatible con la calibracioacuten a valores
suficientemente bajos se deberiacutea realizar una verificacioacuten usando una solucioacuten tampoacuten de
referenencia acoplada con el SI y que tenga un valor de pH cercano a los valores hallados en
los mostos
44 Medida
Introducir el electrodo en la muestra a analizar cuya temperatura deberaacute estar comprendida
entre 20 y 25oC y tan proacutexima como sea posible a 20
oC Leer directamente el valor del pH
Efectuacuteense al menos 2 determinaciones de cada muestra Tomar como resultado la media
aritmeacutetica de ambas determinaciones
5 Expresioacuten de los resultados
El pH de la solucioacuten al 25 (mm) (25oBrix) del mosto concentrado rectificado se expresaraacuten
con 2 decimales
6 Caracteriacutesticas del meacutetodo
Repetibilidad (r)
r = 007
Reproducibilidad (R)
R = 007
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
20
ANEXO J DIOacuteXIDO DE AZUFRE Tipo IV
1 Definiciones
Se denomina dioacutexido de azufre al dioacutexido de azufre presente en el mosto en las formas
siguientes H2SO
3 H SO3
- cuyo equilibrio es funcioacuten del pH y de la temperatura
H2SO
3 H
+ + HSO
3
macr
H2SO
3 representa el dioacutexido de azufre molecular
Se denomina dioacutexido de azufre total al conjunto de las distintas formas de dioacutexido de azufre
presentes en el mosto en estado libre o combinado con sus componentes
2 Materiales
Se extrae el dioacutexido de azufre total por arrastre en caliente (aproximadamente 100oC) del
mosto concentrado rectificado previamente diluido
21 Reactivos
211 Aacutecido fosfoacuterico al 85 H3PO4 (ρ20 = 171 gml)
212 Solucioacuten de peroacutexido de hidroacutegeno de 91 gl H2O2 (3 voluacutemenes)
213 Reactivo indicador
rojo de metilo hellip 100 mg
azul de metileno hellip 50 mg
Alcohol de 50 vol hellip100 ml
214 Solucioacuten de hidroacutexido de sodio (NaOH) 001 M
22 Material
221 El material utilizado debe ajustarse al esquema que figura a continuacioacuten
principalmente en lo que se refiere al refrigerante
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
21
Figura 1
Las dimensiones estaacuten indicadas en miliacutemetros Los diaacutemetros internos de los 4 tubos
conceacutentricos que constituyen el refrigerante son 45 34 27 y 10 mm
El tubo de conduccioacuten de los gases al borboteador B termina en una pequentildea esfera de 1 cm
de diaacutemetro que lleva en su mayor ciacuterculo horizontal 20 agujeros de 02 mm de diaacutemetro
Tambieacuten puede terminar en una placa de vidrio fritado que garantice la formacioacuten de gran
nuacutemero de pequentildeas burbujas realizando asiacute un buen contacto entre las fases gaseosa y
liacutequida
El flujo de gas que debe recorrer el aparato debe ser de 40 lh aproximadamente El frasco
situado a la derecha del aparato de destina a limitar de 20 a 30 cm de agua la depresioacuten
producida por la trompa de agua Para poder regular dicha depresioacuten de forma que el caudal
sea el correcto conviene colocar un medidor de flujo de tubo semicapilar entre el borboteador
y el frasco
222 Una microbureta
3 Procedimiento
31 En el caso del mosto concentrado rectificado utilizar la solucioacuten obtenida diluyendo la
muestra para analizar al 40 (mv) tal y como se indica en el capiacutetulo laquoAcidez totalraquo en el
apartado 51 En el matraz A de 250 ml del aparato de arrastre introducir 50 ml de esta
solucioacuten y 5 ml de aacutecido fosfoacuterico (2 11) Acoplar el matraz al aparato
32 Introducir en el borboteador B de 2 a 3 ml de solucioacuten de peroacutexido de hidroacutegeno (212)
neutralizarla con la solucioacuten 001 M de hidroacutexido soacutedico (214) llevar a ebullicioacuten el mosto
contenido en el matraz A con una pequentildea llama de 4 a 5 cm de altura que debe tocar
ligeramente el fondo del matraz No colocar bajo el matraz ninguna tela metaacutelica sino
depositarlo sobre un disco perforado con un agujero de 30 mm de diaacutemetro Se evita asiacute la
pirogenacioacuten de las materias extractivas de la muestra sobre las paredes del matraz
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
22
Mantener la ebullicioacuten durante el paso de la corriente de aire (o de nitroacutegeno) En 15 minutos
el dioacutexido de azufre total habraacute sido arrastrado y oxidado Valorar el aacutecido sulfuacuterico formado
con la solucioacuten 001 M de hidroacutexido soacutedico (214) Sea n el nuacutemero de mililitros utilizados
4 Caacutelculo
Dioacutexido de azufre en miligramos por kilo de azuacutecares totales (muestra 50 ml de muestra
preparada (31))
(1600 n)P
P = contenido en (mm) de azuacutecares totales
5 Expresioacuten de los resultados
El dioacutexido de azufre total se expresa en miligramos por kilogramo (mgkg) de azuacutecares
totales
6 Caracteriacutesticas del meacutetodo
Repetibilidad (r)
muestra de 50 ml lt 50 mgl r = 1x 250P mgkg de azuacutecares totales
Reproducibilidad (R)
muestra de 50 ml lt 50 mgl R = 9x 250P mgkg de azuacutecares totales
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
23
ANEXO K CARACTERIacuteSTICAS CROMAacuteTICAS Tipo IV
1 Fundamento
Medida de la absorbancia a 425 nm en cubetas de 1 cm de espesor del mosto concentrado
rectificado cuya concentracioacuten en azuacutecares se haya reducido al 25 (mm) (25o Brix)
2 Material
21 Espectrofotoacutemetro que permita efectuar medidas entre 300 y 700 nm
22 Cubetas de vidrio con un trayecto oacuteptico de 1 cm
23 Filtro con membrana y de una porosidad de 045 μm
3 Procedimiento
31 Preparacioacuten de la muestra
Utilizar una solucioacuten cuyo valor en azuacutecares sea del 25 (mm) (25o
Brix) y que se habraacute
preparado del modo indicado en el capiacutetulo laquopHraquo (41) Filtrarla en un filtro con membrana
de una porosidad de 045 μm
32 Determinacioacuten de la absorbancia
Ajustar a cero para la longitud de onda 425 nm en una cubeta de 1 cm de trayecto oacuteptico que
contenga agua destilada
Determinar la absorbancia A a esta longitud de onda de la solucioacuten al 25 de
azuacutecares (25oBrix) obtenida en el apartado 31 y colocada en una cubeta de 1 cm de trayecto
oacuteptico
4 Expresioacuten de los resultados
La absorbancia a 425 nm del mosto concentrado rectificado en solucioacuten al 25 (mm) de
azuacutecares (25o Brix) se expresaraacute con 2 decimales
Repetibilidad (r)
r = 001 U Abs agrave 25degBrix
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
18
ANEXO I pH Tipo IV
1 Fundamento
Medida de la diferencia de potencial entre dos electrodos sumergidos en el liacutequido que se
estudia Uno de los dos electrodos tiene un potencial que es una funcioacuten definida del pH del
liacutequido el otro tiene un potencial fijo y conocido y constituye el electrodo de referencia
2 Reactivos
21 Soluciones tampoacuten
211 Solucioacuten saturada de tartrato aacutecido de potasio al menos de 57 gl de tartrato aacutecido de
potasio (C4H5KO6) a 20oC Esta solucioacuten puede conservarse hasta 2 meses en presencia de 01
g de timol por cada 200 ml)
pHtemperatura
357 a 20oC
356 a 25oC
355 a 30oC
212 Solucioacuten 005 M de ftalato aacutecido de potasio Solucioacuten con 10211 gl de ftalato aacutecido de
potasio (C8H5KO4) a 20 degC (duracioacuten maacutexima de la solucioacuten 2 meses)
pHtemperatura
3999 a 15oC
4003 a 20oC
4008 a 25oC
4015 a 30oC
213 Solucioacuten que contenga
Fosfato monopotaacutesico KH2PO4 hellip 3402 g
Fosfato bipotaacutesico K2HPO4 hellip 4354 g
Agua csp hellip 1 000 ml
(Duracioacuten maacutexima de la solucioacuten 2 meses)
pHtemperatura
690 a 15oC
688 a 20oC
686 a 25oC
685 a 30oC
Nota Tambieacuten pueden utilizarse soluciones tampones de referencia comerciales para las que
exista correspondencia con unidades del SI
Por ejemplo pH 1679 plusmn 001 a 25degC
pH 4005 plusmn 001 a 25degC
pH 7000 plusmn 001 a 25degC
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
19
3 Material
31 pH metro graduado en unidades de pH que permita efectuar medidas con una
aproximacioacuten de plusmn001 como miacutenimo
32 Electrodos
321 Electrodo de vidrio
322 Electrodo de referencia de calomelanos de cloruro potaacutesico saturado
323 O electrodo combinado
4 Procedimiento
41 Preparacioacuten de la muestra para anaacutelisis
Diluirlo con agua a fin de obtener una concentracioacuten de 25 plusmn 05 (mm) en azuacutecares totales
(25oBrix) Si P es el contenido en (mm) en azuacutecares totales del mosto concentrado
rectificado pesar una masa igual a 2 500 P y completar con agua hasta 100 g La
conductividad del agua utilizada deberaacute ser inferior a 2 microsiemens por centiacutemetro
42 Puesta a cero del aparato
Se efectuaraacute antes de cada medida siguiendo las instrucciones dadas para el aparato utilizado
43 Calibrado del pH metro
El pH metro se debe calibrar a 20ordmC usando soluciones tampoacuten de referencia acopladas con el
SI Los valores de pH seleccionados deben abarcar la gama de valores que pueden encontrarse
en los mostos Si el pH metro usado no es compatible con la calibracioacuten a valores
suficientemente bajos se deberiacutea realizar una verificacioacuten usando una solucioacuten tampoacuten de
referenencia acoplada con el SI y que tenga un valor de pH cercano a los valores hallados en
los mostos
44 Medida
Introducir el electrodo en la muestra a analizar cuya temperatura deberaacute estar comprendida
entre 20 y 25oC y tan proacutexima como sea posible a 20
oC Leer directamente el valor del pH
Efectuacuteense al menos 2 determinaciones de cada muestra Tomar como resultado la media
aritmeacutetica de ambas determinaciones
5 Expresioacuten de los resultados
El pH de la solucioacuten al 25 (mm) (25oBrix) del mosto concentrado rectificado se expresaraacuten
con 2 decimales
6 Caracteriacutesticas del meacutetodo
Repetibilidad (r)
r = 007
Reproducibilidad (R)
R = 007
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
20
ANEXO J DIOacuteXIDO DE AZUFRE Tipo IV
1 Definiciones
Se denomina dioacutexido de azufre al dioacutexido de azufre presente en el mosto en las formas
siguientes H2SO
3 H SO3
- cuyo equilibrio es funcioacuten del pH y de la temperatura
H2SO
3 H
+ + HSO
3
macr
H2SO
3 representa el dioacutexido de azufre molecular
Se denomina dioacutexido de azufre total al conjunto de las distintas formas de dioacutexido de azufre
presentes en el mosto en estado libre o combinado con sus componentes
2 Materiales
Se extrae el dioacutexido de azufre total por arrastre en caliente (aproximadamente 100oC) del
mosto concentrado rectificado previamente diluido
21 Reactivos
211 Aacutecido fosfoacuterico al 85 H3PO4 (ρ20 = 171 gml)
212 Solucioacuten de peroacutexido de hidroacutegeno de 91 gl H2O2 (3 voluacutemenes)
213 Reactivo indicador
rojo de metilo hellip 100 mg
azul de metileno hellip 50 mg
Alcohol de 50 vol hellip100 ml
214 Solucioacuten de hidroacutexido de sodio (NaOH) 001 M
22 Material
221 El material utilizado debe ajustarse al esquema que figura a continuacioacuten
principalmente en lo que se refiere al refrigerante
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
21
Figura 1
Las dimensiones estaacuten indicadas en miliacutemetros Los diaacutemetros internos de los 4 tubos
conceacutentricos que constituyen el refrigerante son 45 34 27 y 10 mm
El tubo de conduccioacuten de los gases al borboteador B termina en una pequentildea esfera de 1 cm
de diaacutemetro que lleva en su mayor ciacuterculo horizontal 20 agujeros de 02 mm de diaacutemetro
Tambieacuten puede terminar en una placa de vidrio fritado que garantice la formacioacuten de gran
nuacutemero de pequentildeas burbujas realizando asiacute un buen contacto entre las fases gaseosa y
liacutequida
El flujo de gas que debe recorrer el aparato debe ser de 40 lh aproximadamente El frasco
situado a la derecha del aparato de destina a limitar de 20 a 30 cm de agua la depresioacuten
producida por la trompa de agua Para poder regular dicha depresioacuten de forma que el caudal
sea el correcto conviene colocar un medidor de flujo de tubo semicapilar entre el borboteador
y el frasco
222 Una microbureta
3 Procedimiento
31 En el caso del mosto concentrado rectificado utilizar la solucioacuten obtenida diluyendo la
muestra para analizar al 40 (mv) tal y como se indica en el capiacutetulo laquoAcidez totalraquo en el
apartado 51 En el matraz A de 250 ml del aparato de arrastre introducir 50 ml de esta
solucioacuten y 5 ml de aacutecido fosfoacuterico (2 11) Acoplar el matraz al aparato
32 Introducir en el borboteador B de 2 a 3 ml de solucioacuten de peroacutexido de hidroacutegeno (212)
neutralizarla con la solucioacuten 001 M de hidroacutexido soacutedico (214) llevar a ebullicioacuten el mosto
contenido en el matraz A con una pequentildea llama de 4 a 5 cm de altura que debe tocar
ligeramente el fondo del matraz No colocar bajo el matraz ninguna tela metaacutelica sino
depositarlo sobre un disco perforado con un agujero de 30 mm de diaacutemetro Se evita asiacute la
pirogenacioacuten de las materias extractivas de la muestra sobre las paredes del matraz
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
22
Mantener la ebullicioacuten durante el paso de la corriente de aire (o de nitroacutegeno) En 15 minutos
el dioacutexido de azufre total habraacute sido arrastrado y oxidado Valorar el aacutecido sulfuacuterico formado
con la solucioacuten 001 M de hidroacutexido soacutedico (214) Sea n el nuacutemero de mililitros utilizados
4 Caacutelculo
Dioacutexido de azufre en miligramos por kilo de azuacutecares totales (muestra 50 ml de muestra
preparada (31))
(1600 n)P
P = contenido en (mm) de azuacutecares totales
5 Expresioacuten de los resultados
El dioacutexido de azufre total se expresa en miligramos por kilogramo (mgkg) de azuacutecares
totales
6 Caracteriacutesticas del meacutetodo
Repetibilidad (r)
muestra de 50 ml lt 50 mgl r = 1x 250P mgkg de azuacutecares totales
Reproducibilidad (R)
muestra de 50 ml lt 50 mgl R = 9x 250P mgkg de azuacutecares totales
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
23
ANEXO K CARACTERIacuteSTICAS CROMAacuteTICAS Tipo IV
1 Fundamento
Medida de la absorbancia a 425 nm en cubetas de 1 cm de espesor del mosto concentrado
rectificado cuya concentracioacuten en azuacutecares se haya reducido al 25 (mm) (25o Brix)
2 Material
21 Espectrofotoacutemetro que permita efectuar medidas entre 300 y 700 nm
22 Cubetas de vidrio con un trayecto oacuteptico de 1 cm
23 Filtro con membrana y de una porosidad de 045 μm
3 Procedimiento
31 Preparacioacuten de la muestra
Utilizar una solucioacuten cuyo valor en azuacutecares sea del 25 (mm) (25o
Brix) y que se habraacute
preparado del modo indicado en el capiacutetulo laquopHraquo (41) Filtrarla en un filtro con membrana
de una porosidad de 045 μm
32 Determinacioacuten de la absorbancia
Ajustar a cero para la longitud de onda 425 nm en una cubeta de 1 cm de trayecto oacuteptico que
contenga agua destilada
Determinar la absorbancia A a esta longitud de onda de la solucioacuten al 25 de
azuacutecares (25oBrix) obtenida en el apartado 31 y colocada en una cubeta de 1 cm de trayecto
oacuteptico
4 Expresioacuten de los resultados
La absorbancia a 425 nm del mosto concentrado rectificado en solucioacuten al 25 (mm) de
azuacutecares (25o Brix) se expresaraacute con 2 decimales
Repetibilidad (r)
r = 001 U Abs agrave 25degBrix
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
19
3 Material
31 pH metro graduado en unidades de pH que permita efectuar medidas con una
aproximacioacuten de plusmn001 como miacutenimo
32 Electrodos
321 Electrodo de vidrio
322 Electrodo de referencia de calomelanos de cloruro potaacutesico saturado
323 O electrodo combinado
4 Procedimiento
41 Preparacioacuten de la muestra para anaacutelisis
Diluirlo con agua a fin de obtener una concentracioacuten de 25 plusmn 05 (mm) en azuacutecares totales
(25oBrix) Si P es el contenido en (mm) en azuacutecares totales del mosto concentrado
rectificado pesar una masa igual a 2 500 P y completar con agua hasta 100 g La
conductividad del agua utilizada deberaacute ser inferior a 2 microsiemens por centiacutemetro
42 Puesta a cero del aparato
Se efectuaraacute antes de cada medida siguiendo las instrucciones dadas para el aparato utilizado
43 Calibrado del pH metro
El pH metro se debe calibrar a 20ordmC usando soluciones tampoacuten de referencia acopladas con el
SI Los valores de pH seleccionados deben abarcar la gama de valores que pueden encontrarse
en los mostos Si el pH metro usado no es compatible con la calibracioacuten a valores
suficientemente bajos se deberiacutea realizar una verificacioacuten usando una solucioacuten tampoacuten de
referenencia acoplada con el SI y que tenga un valor de pH cercano a los valores hallados en
los mostos
44 Medida
Introducir el electrodo en la muestra a analizar cuya temperatura deberaacute estar comprendida
entre 20 y 25oC y tan proacutexima como sea posible a 20
oC Leer directamente el valor del pH
Efectuacuteense al menos 2 determinaciones de cada muestra Tomar como resultado la media
aritmeacutetica de ambas determinaciones
5 Expresioacuten de los resultados
El pH de la solucioacuten al 25 (mm) (25oBrix) del mosto concentrado rectificado se expresaraacuten
con 2 decimales
6 Caracteriacutesticas del meacutetodo
Repetibilidad (r)
r = 007
Reproducibilidad (R)
R = 007
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
20
ANEXO J DIOacuteXIDO DE AZUFRE Tipo IV
1 Definiciones
Se denomina dioacutexido de azufre al dioacutexido de azufre presente en el mosto en las formas
siguientes H2SO
3 H SO3
- cuyo equilibrio es funcioacuten del pH y de la temperatura
H2SO
3 H
+ + HSO
3
macr
H2SO
3 representa el dioacutexido de azufre molecular
Se denomina dioacutexido de azufre total al conjunto de las distintas formas de dioacutexido de azufre
presentes en el mosto en estado libre o combinado con sus componentes
2 Materiales
Se extrae el dioacutexido de azufre total por arrastre en caliente (aproximadamente 100oC) del
mosto concentrado rectificado previamente diluido
21 Reactivos
211 Aacutecido fosfoacuterico al 85 H3PO4 (ρ20 = 171 gml)
212 Solucioacuten de peroacutexido de hidroacutegeno de 91 gl H2O2 (3 voluacutemenes)
213 Reactivo indicador
rojo de metilo hellip 100 mg
azul de metileno hellip 50 mg
Alcohol de 50 vol hellip100 ml
214 Solucioacuten de hidroacutexido de sodio (NaOH) 001 M
22 Material
221 El material utilizado debe ajustarse al esquema que figura a continuacioacuten
principalmente en lo que se refiere al refrigerante
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
21
Figura 1
Las dimensiones estaacuten indicadas en miliacutemetros Los diaacutemetros internos de los 4 tubos
conceacutentricos que constituyen el refrigerante son 45 34 27 y 10 mm
El tubo de conduccioacuten de los gases al borboteador B termina en una pequentildea esfera de 1 cm
de diaacutemetro que lleva en su mayor ciacuterculo horizontal 20 agujeros de 02 mm de diaacutemetro
Tambieacuten puede terminar en una placa de vidrio fritado que garantice la formacioacuten de gran
nuacutemero de pequentildeas burbujas realizando asiacute un buen contacto entre las fases gaseosa y
liacutequida
El flujo de gas que debe recorrer el aparato debe ser de 40 lh aproximadamente El frasco
situado a la derecha del aparato de destina a limitar de 20 a 30 cm de agua la depresioacuten
producida por la trompa de agua Para poder regular dicha depresioacuten de forma que el caudal
sea el correcto conviene colocar un medidor de flujo de tubo semicapilar entre el borboteador
y el frasco
222 Una microbureta
3 Procedimiento
31 En el caso del mosto concentrado rectificado utilizar la solucioacuten obtenida diluyendo la
muestra para analizar al 40 (mv) tal y como se indica en el capiacutetulo laquoAcidez totalraquo en el
apartado 51 En el matraz A de 250 ml del aparato de arrastre introducir 50 ml de esta
solucioacuten y 5 ml de aacutecido fosfoacuterico (2 11) Acoplar el matraz al aparato
32 Introducir en el borboteador B de 2 a 3 ml de solucioacuten de peroacutexido de hidroacutegeno (212)
neutralizarla con la solucioacuten 001 M de hidroacutexido soacutedico (214) llevar a ebullicioacuten el mosto
contenido en el matraz A con una pequentildea llama de 4 a 5 cm de altura que debe tocar
ligeramente el fondo del matraz No colocar bajo el matraz ninguna tela metaacutelica sino
depositarlo sobre un disco perforado con un agujero de 30 mm de diaacutemetro Se evita asiacute la
pirogenacioacuten de las materias extractivas de la muestra sobre las paredes del matraz
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
22
Mantener la ebullicioacuten durante el paso de la corriente de aire (o de nitroacutegeno) En 15 minutos
el dioacutexido de azufre total habraacute sido arrastrado y oxidado Valorar el aacutecido sulfuacuterico formado
con la solucioacuten 001 M de hidroacutexido soacutedico (214) Sea n el nuacutemero de mililitros utilizados
4 Caacutelculo
Dioacutexido de azufre en miligramos por kilo de azuacutecares totales (muestra 50 ml de muestra
preparada (31))
(1600 n)P
P = contenido en (mm) de azuacutecares totales
5 Expresioacuten de los resultados
El dioacutexido de azufre total se expresa en miligramos por kilogramo (mgkg) de azuacutecares
totales
6 Caracteriacutesticas del meacutetodo
Repetibilidad (r)
muestra de 50 ml lt 50 mgl r = 1x 250P mgkg de azuacutecares totales
Reproducibilidad (R)
muestra de 50 ml lt 50 mgl R = 9x 250P mgkg de azuacutecares totales
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
23
ANEXO K CARACTERIacuteSTICAS CROMAacuteTICAS Tipo IV
1 Fundamento
Medida de la absorbancia a 425 nm en cubetas de 1 cm de espesor del mosto concentrado
rectificado cuya concentracioacuten en azuacutecares se haya reducido al 25 (mm) (25o Brix)
2 Material
21 Espectrofotoacutemetro que permita efectuar medidas entre 300 y 700 nm
22 Cubetas de vidrio con un trayecto oacuteptico de 1 cm
23 Filtro con membrana y de una porosidad de 045 μm
3 Procedimiento
31 Preparacioacuten de la muestra
Utilizar una solucioacuten cuyo valor en azuacutecares sea del 25 (mm) (25o
Brix) y que se habraacute
preparado del modo indicado en el capiacutetulo laquopHraquo (41) Filtrarla en un filtro con membrana
de una porosidad de 045 μm
32 Determinacioacuten de la absorbancia
Ajustar a cero para la longitud de onda 425 nm en una cubeta de 1 cm de trayecto oacuteptico que
contenga agua destilada
Determinar la absorbancia A a esta longitud de onda de la solucioacuten al 25 de
azuacutecares (25oBrix) obtenida en el apartado 31 y colocada en una cubeta de 1 cm de trayecto
oacuteptico
4 Expresioacuten de los resultados
La absorbancia a 425 nm del mosto concentrado rectificado en solucioacuten al 25 (mm) de
azuacutecares (25o Brix) se expresaraacute con 2 decimales
Repetibilidad (r)
r = 001 U Abs agrave 25degBrix
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
20
ANEXO J DIOacuteXIDO DE AZUFRE Tipo IV
1 Definiciones
Se denomina dioacutexido de azufre al dioacutexido de azufre presente en el mosto en las formas
siguientes H2SO
3 H SO3
- cuyo equilibrio es funcioacuten del pH y de la temperatura
H2SO
3 H
+ + HSO
3
macr
H2SO
3 representa el dioacutexido de azufre molecular
Se denomina dioacutexido de azufre total al conjunto de las distintas formas de dioacutexido de azufre
presentes en el mosto en estado libre o combinado con sus componentes
2 Materiales
Se extrae el dioacutexido de azufre total por arrastre en caliente (aproximadamente 100oC) del
mosto concentrado rectificado previamente diluido
21 Reactivos
211 Aacutecido fosfoacuterico al 85 H3PO4 (ρ20 = 171 gml)
212 Solucioacuten de peroacutexido de hidroacutegeno de 91 gl H2O2 (3 voluacutemenes)
213 Reactivo indicador
rojo de metilo hellip 100 mg
azul de metileno hellip 50 mg
Alcohol de 50 vol hellip100 ml
214 Solucioacuten de hidroacutexido de sodio (NaOH) 001 M
22 Material
221 El material utilizado debe ajustarse al esquema que figura a continuacioacuten
principalmente en lo que se refiere al refrigerante
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
21
Figura 1
Las dimensiones estaacuten indicadas en miliacutemetros Los diaacutemetros internos de los 4 tubos
conceacutentricos que constituyen el refrigerante son 45 34 27 y 10 mm
El tubo de conduccioacuten de los gases al borboteador B termina en una pequentildea esfera de 1 cm
de diaacutemetro que lleva en su mayor ciacuterculo horizontal 20 agujeros de 02 mm de diaacutemetro
Tambieacuten puede terminar en una placa de vidrio fritado que garantice la formacioacuten de gran
nuacutemero de pequentildeas burbujas realizando asiacute un buen contacto entre las fases gaseosa y
liacutequida
El flujo de gas que debe recorrer el aparato debe ser de 40 lh aproximadamente El frasco
situado a la derecha del aparato de destina a limitar de 20 a 30 cm de agua la depresioacuten
producida por la trompa de agua Para poder regular dicha depresioacuten de forma que el caudal
sea el correcto conviene colocar un medidor de flujo de tubo semicapilar entre el borboteador
y el frasco
222 Una microbureta
3 Procedimiento
31 En el caso del mosto concentrado rectificado utilizar la solucioacuten obtenida diluyendo la
muestra para analizar al 40 (mv) tal y como se indica en el capiacutetulo laquoAcidez totalraquo en el
apartado 51 En el matraz A de 250 ml del aparato de arrastre introducir 50 ml de esta
solucioacuten y 5 ml de aacutecido fosfoacuterico (2 11) Acoplar el matraz al aparato
32 Introducir en el borboteador B de 2 a 3 ml de solucioacuten de peroacutexido de hidroacutegeno (212)
neutralizarla con la solucioacuten 001 M de hidroacutexido soacutedico (214) llevar a ebullicioacuten el mosto
contenido en el matraz A con una pequentildea llama de 4 a 5 cm de altura que debe tocar
ligeramente el fondo del matraz No colocar bajo el matraz ninguna tela metaacutelica sino
depositarlo sobre un disco perforado con un agujero de 30 mm de diaacutemetro Se evita asiacute la
pirogenacioacuten de las materias extractivas de la muestra sobre las paredes del matraz
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
22
Mantener la ebullicioacuten durante el paso de la corriente de aire (o de nitroacutegeno) En 15 minutos
el dioacutexido de azufre total habraacute sido arrastrado y oxidado Valorar el aacutecido sulfuacuterico formado
con la solucioacuten 001 M de hidroacutexido soacutedico (214) Sea n el nuacutemero de mililitros utilizados
4 Caacutelculo
Dioacutexido de azufre en miligramos por kilo de azuacutecares totales (muestra 50 ml de muestra
preparada (31))
(1600 n)P
P = contenido en (mm) de azuacutecares totales
5 Expresioacuten de los resultados
El dioacutexido de azufre total se expresa en miligramos por kilogramo (mgkg) de azuacutecares
totales
6 Caracteriacutesticas del meacutetodo
Repetibilidad (r)
muestra de 50 ml lt 50 mgl r = 1x 250P mgkg de azuacutecares totales
Reproducibilidad (R)
muestra de 50 ml lt 50 mgl R = 9x 250P mgkg de azuacutecares totales
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
23
ANEXO K CARACTERIacuteSTICAS CROMAacuteTICAS Tipo IV
1 Fundamento
Medida de la absorbancia a 425 nm en cubetas de 1 cm de espesor del mosto concentrado
rectificado cuya concentracioacuten en azuacutecares se haya reducido al 25 (mm) (25o Brix)
2 Material
21 Espectrofotoacutemetro que permita efectuar medidas entre 300 y 700 nm
22 Cubetas de vidrio con un trayecto oacuteptico de 1 cm
23 Filtro con membrana y de una porosidad de 045 μm
3 Procedimiento
31 Preparacioacuten de la muestra
Utilizar una solucioacuten cuyo valor en azuacutecares sea del 25 (mm) (25o
Brix) y que se habraacute
preparado del modo indicado en el capiacutetulo laquopHraquo (41) Filtrarla en un filtro con membrana
de una porosidad de 045 μm
32 Determinacioacuten de la absorbancia
Ajustar a cero para la longitud de onda 425 nm en una cubeta de 1 cm de trayecto oacuteptico que
contenga agua destilada
Determinar la absorbancia A a esta longitud de onda de la solucioacuten al 25 de
azuacutecares (25oBrix) obtenida en el apartado 31 y colocada en una cubeta de 1 cm de trayecto
oacuteptico
4 Expresioacuten de los resultados
La absorbancia a 425 nm del mosto concentrado rectificado en solucioacuten al 25 (mm) de
azuacutecares (25o Brix) se expresaraacute con 2 decimales
Repetibilidad (r)
r = 001 U Abs agrave 25degBrix
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
21
Figura 1
Las dimensiones estaacuten indicadas en miliacutemetros Los diaacutemetros internos de los 4 tubos
conceacutentricos que constituyen el refrigerante son 45 34 27 y 10 mm
El tubo de conduccioacuten de los gases al borboteador B termina en una pequentildea esfera de 1 cm
de diaacutemetro que lleva en su mayor ciacuterculo horizontal 20 agujeros de 02 mm de diaacutemetro
Tambieacuten puede terminar en una placa de vidrio fritado que garantice la formacioacuten de gran
nuacutemero de pequentildeas burbujas realizando asiacute un buen contacto entre las fases gaseosa y
liacutequida
El flujo de gas que debe recorrer el aparato debe ser de 40 lh aproximadamente El frasco
situado a la derecha del aparato de destina a limitar de 20 a 30 cm de agua la depresioacuten
producida por la trompa de agua Para poder regular dicha depresioacuten de forma que el caudal
sea el correcto conviene colocar un medidor de flujo de tubo semicapilar entre el borboteador
y el frasco
222 Una microbureta
3 Procedimiento
31 En el caso del mosto concentrado rectificado utilizar la solucioacuten obtenida diluyendo la
muestra para analizar al 40 (mv) tal y como se indica en el capiacutetulo laquoAcidez totalraquo en el
apartado 51 En el matraz A de 250 ml del aparato de arrastre introducir 50 ml de esta
solucioacuten y 5 ml de aacutecido fosfoacuterico (2 11) Acoplar el matraz al aparato
32 Introducir en el borboteador B de 2 a 3 ml de solucioacuten de peroacutexido de hidroacutegeno (212)
neutralizarla con la solucioacuten 001 M de hidroacutexido soacutedico (214) llevar a ebullicioacuten el mosto
contenido en el matraz A con una pequentildea llama de 4 a 5 cm de altura que debe tocar
ligeramente el fondo del matraz No colocar bajo el matraz ninguna tela metaacutelica sino
depositarlo sobre un disco perforado con un agujero de 30 mm de diaacutemetro Se evita asiacute la
pirogenacioacuten de las materias extractivas de la muestra sobre las paredes del matraz
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
22
Mantener la ebullicioacuten durante el paso de la corriente de aire (o de nitroacutegeno) En 15 minutos
el dioacutexido de azufre total habraacute sido arrastrado y oxidado Valorar el aacutecido sulfuacuterico formado
con la solucioacuten 001 M de hidroacutexido soacutedico (214) Sea n el nuacutemero de mililitros utilizados
4 Caacutelculo
Dioacutexido de azufre en miligramos por kilo de azuacutecares totales (muestra 50 ml de muestra
preparada (31))
(1600 n)P
P = contenido en (mm) de azuacutecares totales
5 Expresioacuten de los resultados
El dioacutexido de azufre total se expresa en miligramos por kilogramo (mgkg) de azuacutecares
totales
6 Caracteriacutesticas del meacutetodo
Repetibilidad (r)
muestra de 50 ml lt 50 mgl r = 1x 250P mgkg de azuacutecares totales
Reproducibilidad (R)
muestra de 50 ml lt 50 mgl R = 9x 250P mgkg de azuacutecares totales
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
23
ANEXO K CARACTERIacuteSTICAS CROMAacuteTICAS Tipo IV
1 Fundamento
Medida de la absorbancia a 425 nm en cubetas de 1 cm de espesor del mosto concentrado
rectificado cuya concentracioacuten en azuacutecares se haya reducido al 25 (mm) (25o Brix)
2 Material
21 Espectrofotoacutemetro que permita efectuar medidas entre 300 y 700 nm
22 Cubetas de vidrio con un trayecto oacuteptico de 1 cm
23 Filtro con membrana y de una porosidad de 045 μm
3 Procedimiento
31 Preparacioacuten de la muestra
Utilizar una solucioacuten cuyo valor en azuacutecares sea del 25 (mm) (25o
Brix) y que se habraacute
preparado del modo indicado en el capiacutetulo laquopHraquo (41) Filtrarla en un filtro con membrana
de una porosidad de 045 μm
32 Determinacioacuten de la absorbancia
Ajustar a cero para la longitud de onda 425 nm en una cubeta de 1 cm de trayecto oacuteptico que
contenga agua destilada
Determinar la absorbancia A a esta longitud de onda de la solucioacuten al 25 de
azuacutecares (25oBrix) obtenida en el apartado 31 y colocada en una cubeta de 1 cm de trayecto
oacuteptico
4 Expresioacuten de los resultados
La absorbancia a 425 nm del mosto concentrado rectificado en solucioacuten al 25 (mm) de
azuacutecares (25o Brix) se expresaraacute con 2 decimales
Repetibilidad (r)
r = 001 U Abs agrave 25degBrix
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
22
Mantener la ebullicioacuten durante el paso de la corriente de aire (o de nitroacutegeno) En 15 minutos
el dioacutexido de azufre total habraacute sido arrastrado y oxidado Valorar el aacutecido sulfuacuterico formado
con la solucioacuten 001 M de hidroacutexido soacutedico (214) Sea n el nuacutemero de mililitros utilizados
4 Caacutelculo
Dioacutexido de azufre en miligramos por kilo de azuacutecares totales (muestra 50 ml de muestra
preparada (31))
(1600 n)P
P = contenido en (mm) de azuacutecares totales
5 Expresioacuten de los resultados
El dioacutexido de azufre total se expresa en miligramos por kilogramo (mgkg) de azuacutecares
totales
6 Caracteriacutesticas del meacutetodo
Repetibilidad (r)
muestra de 50 ml lt 50 mgl r = 1x 250P mgkg de azuacutecares totales
Reproducibilidad (R)
muestra de 50 ml lt 50 mgl R = 9x 250P mgkg de azuacutecares totales
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
23
ANEXO K CARACTERIacuteSTICAS CROMAacuteTICAS Tipo IV
1 Fundamento
Medida de la absorbancia a 425 nm en cubetas de 1 cm de espesor del mosto concentrado
rectificado cuya concentracioacuten en azuacutecares se haya reducido al 25 (mm) (25o Brix)
2 Material
21 Espectrofotoacutemetro que permita efectuar medidas entre 300 y 700 nm
22 Cubetas de vidrio con un trayecto oacuteptico de 1 cm
23 Filtro con membrana y de una porosidad de 045 μm
3 Procedimiento
31 Preparacioacuten de la muestra
Utilizar una solucioacuten cuyo valor en azuacutecares sea del 25 (mm) (25o
Brix) y que se habraacute
preparado del modo indicado en el capiacutetulo laquopHraquo (41) Filtrarla en un filtro con membrana
de una porosidad de 045 μm
32 Determinacioacuten de la absorbancia
Ajustar a cero para la longitud de onda 425 nm en una cubeta de 1 cm de trayecto oacuteptico que
contenga agua destilada
Determinar la absorbancia A a esta longitud de onda de la solucioacuten al 25 de
azuacutecares (25oBrix) obtenida en el apartado 31 y colocada en una cubeta de 1 cm de trayecto
oacuteptico
4 Expresioacuten de los resultados
La absorbancia a 425 nm del mosto concentrado rectificado en solucioacuten al 25 (mm) de
azuacutecares (25o Brix) se expresaraacute con 2 decimales
Repetibilidad (r)
r = 001 U Abs agrave 25degBrix
Certificado conforme
Porto 24 de junio de 2011
El Director General de la OIV
Secretario de la Asamblea general
Federico CASTELLUCCI
copy OIV 2011
23
ANEXO K CARACTERIacuteSTICAS CROMAacuteTICAS Tipo IV
1 Fundamento
Medida de la absorbancia a 425 nm en cubetas de 1 cm de espesor del mosto concentrado
rectificado cuya concentracioacuten en azuacutecares se haya reducido al 25 (mm) (25o Brix)
2 Material
21 Espectrofotoacutemetro que permita efectuar medidas entre 300 y 700 nm
22 Cubetas de vidrio con un trayecto oacuteptico de 1 cm
23 Filtro con membrana y de una porosidad de 045 μm
3 Procedimiento
31 Preparacioacuten de la muestra
Utilizar una solucioacuten cuyo valor en azuacutecares sea del 25 (mm) (25o
Brix) y que se habraacute
preparado del modo indicado en el capiacutetulo laquopHraquo (41) Filtrarla en un filtro con membrana
de una porosidad de 045 μm
32 Determinacioacuten de la absorbancia
Ajustar a cero para la longitud de onda 425 nm en una cubeta de 1 cm de trayecto oacuteptico que
contenga agua destilada
Determinar la absorbancia A a esta longitud de onda de la solucioacuten al 25 de
azuacutecares (25oBrix) obtenida en el apartado 31 y colocada en una cubeta de 1 cm de trayecto
oacuteptico
4 Expresioacuten de los resultados
La absorbancia a 425 nm del mosto concentrado rectificado en solucioacuten al 25 (mm) de
azuacutecares (25o Brix) se expresaraacute con 2 decimales
Repetibilidad (r)
r = 001 U Abs agrave 25degBrix