“monitoreo de microorganismos para determinar la …

ESTUDIAR P ARA PREVERY PREVER P ARA ACTUAR

P R E M I OINTRAGOB

2006

a la

06

RSGC - 617INICIO: 2012.09.28

TERMINO: 2015.09.28

ISO 9001:2008

PROCESO EDUCATIVO

S G C

S N E S T

IMNC-RSGC-617

IMNC-RSGC-617IMNC-RSGC-617

CERTIFICADO BAJO LANORMA ISO 9001:2008

CERTIFICADO BAJO LANORMA ISO 9001:2008

VILLA DE ÁLVAREZ, COL., DICIEMBRE DE 2014

“MONITOREO DE MICROORGANISMOS PARA DETERMINAR LA CALIDAD AMBIENTAL DEL LESP”

OPCIÓN XMEMORIA DE RESIDENCIA PROFESIONAL

QUE PARA OBTENER EL TÍTULO DE INGENIERO BIOQUÍMICO

PRESENTAHERMELINDA SOLANO RODRIGUEZ

ASESOR DRA. ARGELIA JUAREZ ALCARAZ

TECNOLÓGICO NACIONAL DE MÉXICO

Instituto Tecnológico de Colima

INDICE

I. Introducción. 1

II. Justificación. 3

III. Objetivos. 4

IV. Caracterización en el área que participo. 4

V. Problemas a resolver. 8

VI. Alcances y limitaciones. 9

VII. Fundamento teórico. 9

VIII. Procedimiento y descripción de las actividades realizadas.

13

8.1 Laboratorio de Microbiología Médica. 13

8.2 Laboratorio de Cólera y Enterobacterias. 15

8.3 Área de tinciones y microscopia. 16

8.4 Laboratorio de Virus Respiratorios. 17

8.5 Laboratorio de Virus Gastrointestinales. 18

8.6 Laboratorio de Micobacterias. 18

8.7 Laboratorio de Infecciones de Transmisión Sexual. 19

8.8 Laboratorio de Preparación de Medios. 19

8.9 Área de lavado de material. 20

8.10 Laboratorio de Biología Molecular (Extracción). 21

8.11 Laboratorio de Biología Molecular (PCR). 21

8.12 Departamento de Serología Médica. 21

8.13 Laboratorio de Microbiología de Alimentos. 21

IX. Resultados. 23

9.1 Laboratorio de Microbiología Médica. 25

9.2 Laboratorio de Cólera y Enterobacterias. 26

9.3 Área de tinciones y microscopia. 27

9.4 Laboratorio de Virus Respiratorios. 28

9.5 Laboratorio de Virus Gastrointestinales. 29

9.6 Laboratorio de Micobacterias. 30

9.7 Laboratorio de Infecciones de Transmisión Sexual. 30

9.8 Laboratorio de Preparación de Medios. 30

9.9 Área de lavado de material. 31

9.10 Laboratorio de Biología Molecular (Extracción). 32

9.11 Laboratorio de Biología Molecular (PCR). 32

9.12 Departamento de Serología Médica. 32

9.13 Laboratorio de Microbiología de Alimentos. 35

X. Conclusiones y recomendaciones. 39

XI. Referencias. 41

XII. Anexos. 43

1


I. Introducción. El monitoreo ambiental es una necesidad que surge a partir de la

contaminación del ambiente. Los problemas de salud generados en los individuos;

de acuerdo a estudios analizados, por las normas mexicanas1,4, mencionan que los

daños a la salud inducidos por las partículas, han sido estudiados en muchos

países y los resultados obtenidos en todos ellos son consistentes y coherentes

entre sí. Uno de los efectos más importantes, como es la mortalidad asociada a la

exposición a partículas, se describió desde 1952 en los estudios realizados en la

ciudad de Londres1.

En trabajos realizados en la Ciudad de México sobre daños a la salud

ocasionados por partículas suspendidas, reportan incremento en los índices de

mortalidad, semejantes a estudios en ciudades de Europa y Estados Unidos de

América. Un estudio relacionado con la contaminación por partículas suspendidas

totales (PST), indicó que el riesgo a morir aumenta en un 6% por cada 100

μg/m3 de incremento de PST. Otro estudio en personas mayores de 65 años

reportó un incremento de 1.6% en las muertes diarias por cada 10 μg/m3 de

aumento en las concentraciones de PM2.5. En un estudio donde se analizaron

daños provocados por partículas gruesas (PM10-PM2.5), se encontró que por cada

10 μg/m3 de incremento de este contaminante se asocia un aumento de 4% de las

muertes totales diarias1.

En materia de efectos del ambiente en la salud, la Ley General de Salud

contempla el establecimiento de normas, medidas y actividades tendientes a la

protección a la salud humana ante los riesgos y daños que representa el deterioro

ambiental; así como la determinación de valores de concentración máxima de los

contaminantes en el ambiente para el ser humano.

El nombre de partículas suspendidas se refiere a una diversidad de

sustancias que existen en forma de material sólido o líquido finamente particulado,

con un amplio intervalo de tamaño (0.005 μm a 100 μm), que son suspendidas en

el aire. Las partículas son generadas por una gran variedad de fuentes

2


antropogénicas y naturales. Pueden ser emitidas directamente a la atmósfera

(partículas primarias) o formarse por la transformación de emisiones gaseosas

(partículas secundarias) como los óxidos de azufre, óxidos de nitrógeno y

compuestos orgánicos volátiles.1

En México se tienen reglamentadas las condiciones ambientales en una

atmósfera abierta. Sin embargo, no se debe dejar de lado las condiciones

ambientales en lugares cerrados. Hasta el momento no se tiene una norma que

establezca parámetros permisibles y la vigilancia que requieren estos lugares de

trabajo. Por lo que, esta podría ser la principal causa que indique la fuente de

contaminación por partículas o microorganismos. En dichas condiciones no solo

afecta a la salud humana, sino que también se involucran en los procesos,

desfavoreciendo la calidad, eficiencia y finalmente contribuye en la contaminación

del medio ambiente.

En los últimos años los problemas de contaminación biológica en ambientes

interiores han recibido una importante atención, admitiéndose en general que los

microorganismos presentes en el aire interior pueden causar problemas de

naturaleza infecciosa y alérgica. Básicamente, los efectos que pueden causar los

distintos contaminantes biológicos presentes en el ambiente interior de un edificio

sobre la población expuesta pueden ser:

Virus: infecciones, aunque necesitan ser huéspedes de un ser vivo (célula)

para desarrollarlas.

Bacterias: infecciones.

Polen: alergias.

Hongos y sus esporas: alergias, aunque algunos hongos son capaces de

producir sustancias tóxicas denominadas micotoxinas. Un ejemplo de estas

últimas son las aflatoxinas.2

Por esta causa en diferentes países desarrollados se han dado a la tarea de

implementar normas que se encargan de evaluar la calidad del aire en las áreas de

3


trabajo o donde se realiza procesos o se elaboren alimentos. Esto con la finalidad

de medir la cantidad de microorganismos presentes en el ambiente para conocer

las condiciones en las cuales se labora. Sin dejar de lado, que la contaminación del

ambiente también podría contribuir con la posibilidad de contaminar al personal

que trabaja en las mismas áreas

Por lo tanto, el Laboratorio Estatal de Salud Pública, de acuerdo a sus

políticas y certificaciones está comprometido con la calidad de los procesos, así

como del ambiente en el que se labora. Es por ello que se implementa un sistema

de monitoreo ambiental donde se registre las condiciones de la calidad del aire,

principalmente de microorganismos. La importancia de este sistema, es con la

finalidad de evitar que los resultados de las muestras que son analizadas en el

laboratorio, puedan ser alteradas, o en su caso, ocasionar contaminación con el

personal que las manipula. La relevancia de este tipo de trabajo se enfoca

principalmente en que el laboratorio Estatal de Salud provee los resultados de las

muestras analizadas y por lo tanto también para el diagnóstico médico. En este

proyecto se evaluará la densidad de microorganismos presentes en el ambiente de

trabajo y la higiene de las instalaciones del laboratorio.

II. Justificación.

La finalidad con la que se realiza este estudio, es para mostrar en cada uno

de los laboratorios tanto en el área de trabajo, como en ambientes e inmuebles, las

condiciones higiénicas en qué se encuentran, debido a que son laboratorios donde

sus condiciones sanitarias deben cumplir con las exigencias que marcan las

normas. Estas implicaron no solo los instrumentos sino también el ambiente,

mesas, pisos y ductos de flujo de aire acondicionado, que son apremiantes para los

diagnósticos que se emiten por este laboratorio como parte del servicio a la

comunidad.

Por lo que al conocer las condiciones y características higiénicas del área de

trabajo se puede estar en condiciones de confiabilidad. Una vez conociendo las

condiciones en que se encuentran cada una de las áreas se estará en posición

4


para poder determinar los alcances y limitaciones en que se encuentran dichas

áreas.

III. Objetivo general.

Monitorear el ambiente así como las condiciones de higienización de los

inmuebles dentro del LESP para evaluar la calidad microbiana dentro de los

laboratorios.

Objetivos específicos:

Determinar la cantidad de microorganismos presentes en cada área.

Proporcionar medidas preventivas de higienización para la mejora de las

condiciones del ambiente.

IV. Caracterización en el área que se participó.

El Laboratorio Estatal de Salud Pública (LESP), se ubica a partir de enero

del 2010, en la calle Ayuntamiento s/n esquina con Arnoldo Voguel Carrillo de la

Colonia Burócratas Municipales, contando con una superficie total de 7 mil 620 m2,

lo que permite ampliar el marco analítico incluyendo nuevos métodos de

diagnóstico, satisfaciendo y mejorando los servicios de salud de la población del

estado.

En diciembre del 2010 el Laboratorio de Salud Publica logra certificar nueve

procesos bajo la norma ISO 9001:2008. Los procesos certificados son los

siguientes:

1. Recepción y toma de muestra.

2. Determinación y confirmación de VIH.

3. Determinación de dengue y diagnóstico diferencial.

4. Determinación de Yodato de Potasio e Ion Flúor.

5. Bacteriología Médica.

6. Determinación Microbiológica de Agua de contacto.

7. Influenza.

8. Lavado de material.

9. Manejo Integral de Residuos.

5


Las Normas que se encuentran en el marco normativo del laboratorio son las

siguientes:

NMX-EC-17025-IMNC-2006.- Requisitos generales para la

competencia de los laboratorios de ensayos y de calibración.

NMX-EC-15189-IMNC-2006.- Laboratorios Clínicos.- requisitos

particulares para la calidad y la competencia.

NMX-CC-9001-IMNX-2008.- Sistemas de Gestión de la calidad –

Requisitos.

Misión. Somos el laboratorio de referencia en el Estado de Colima con un

marco analítico especializado en análisis microbiológicos, serológicos y

fisicoquímicos que satisfacen las necesidades de los usuarios, emitiendo

resultados confidenciales, oportunos y confiables para la toma de decisiones en las

áreas de epidemiologia y protección contra riesgos sanitarios.

Visión. Ser un laboratorio que ofrezca resultados analíticos confiables con

validez internacional, respondiendo día a día las exigencias institucionales,

tendencias globales y eficientando nuestro sistema integral de calidad.

Objetivo general. Realizar análisis especializados y oportunos a la Comisión

Estatal para la Protección contra Riesgos Sanitarios, a las áreas de vigilancia

epidemiológica y al público en general, con la finalidad de proveer información

confiable para la toma de decisiones en el diagnóstico y tratamiento de los

pacientes, así como en la prevención y pronóstico de desastres o brotes por

enfermedades infecciosas y/o emergentes.

Principios:

1. Servir a la ciudadanía es la función primordial de un servidor público.

2. El talento humano es el capital más valioso de la institución.

3. Preservar los bienes públicos.

6


Organigrama del Laboratorio Estatal de Salud Pública:

7


Diagrama del departamento de control ambiental:

Diagrama del departamento de serología diagnostica:

8


Diagrama del departamento de control microbiológico:

V. Problemas a resolver.

Conocer las condiciones sanitarias y microbiológicas a través de los

monitoreos de cada una de las áreas y sus componentes en el

proceso de trabajo.

Proporcionar sugerencias de mejora, desde las áreas de control de

calidad y preparación de medios de cultivo con la finalidad de que se

inicie con un principio de confiabilidad, a sabiendas de que en los

trabajos microbiológicos que se realicen, los medios de cultivo sean

estériles.

9


VI. Alcances y limitaciones.

Los alcances del proyecto son favorables, puesto que se tiene el equipo,

material y principalmente el apoyo del personal que labora dentro de la Institución,

para que la realización de los muestreos sean llevados a cabo en tiempo y forma.

Esta es una de las razones que se consideran propicias para que la realización del

monitoreo ambiental avance de manera continua y se logren los objetivos

planteados. Sin embargo, se debe reconocer que los costos que genera un

muestreo ambiental puede llegar a ser una limitante por la cantidad de medios de

cultivo que se requieren para las pruebas y el costo que estos implican, que a su

vez conlleva a buscar la forma de optimizarlos pudiendo no concretarse lo

planeado.

VII. Fundamento teórico.

El monitoreo ambiental se define de la siguiente manera: "Sistema continuo

de observación de medidas y evaluaciones para propósitos definidos; el monitoreo

es una herramienta importante en el proceso de evaluación de impactos

ambientales y en cualquier programa de seguimiento y control”3.

"El monitoreo ambiental no es un fin por sí mismo, sino un paso esencial en

los procesos de administración del ambiente"3. Por lo tanto una vez definido el

monitoreo ambiental es importante mencionar las condiciones por las que surge la

contaminación, así como los cambios que se dan en la misma.

Una gran variedad de organismos que cambian su localización geográfica

durante su ciclo de vida, lo hacen a través de la atmósfera. Por tal motivo, las

partículas biológicas están siempre presentes. Las condiciones del tiempo, las

estaciones del año y la ubicación geográfica son uno de tantos factores para que

sea propiciado su número, variabilidad y viabilidad hasta el cambio con las horas

del día. El tamaño de la biota que fluye en la atmósfera varía desde micrómetros,

como en el caso de virus, bacterias, esporas y polen, hasta milímetros, como las

semillas y los insectos sin alas5.

10


La mayoría de las bacterias que entran a la atmósfera provienen de fuentes

naturales como la vegetación, el suelo y los cuerpos de agua, y en menor

proporción de las actividades antropogénicas; su supervivencia y distribución están

moduladas por factores biológicos, meteorológicos (como el viento, la radiación

solar, la temperatura, la humedad relativa) y por la química atmosférica. Su

presencia en la atmósfera ha sido demostrada por su crecimiento en medios de

cultivo (denominándose cultivables). Sin embargo, se considera que esto

representa sólo una pequeña fracción de la población que llega a la atmósfera, de

forma tal que la mayoría podría estar muerta o encontrarse en forma viable no

cultivable.5

El continuo intercambio entre agua, aire y suelo nos obliga a incluir a la

atmósfera como parte del hábitat de los organismos y a descubrir en ella diversos

factores que determinan su distribución, en donde la dispersión juega un papel muy

importante. Es un hecho que sólo para ciertos organismos la atmósfera será

eficiente, y para otros resultará un medio hostil en el cual sólo algunos podrán

soportar la presión, por lo que se le considera un medio selectivo5.

A continuación se menciona los pasos que son requeridos para realizar un

monitoreo de acuerdo a los diferentes criterios.3 a) Criterios de monitoreo, b) Según

la eficiencia de la operación, c) Procedimientos operativos, d) Procedimientos de

supervisión y e) Procedimientos de mantenimiento y limpieza.

Con base a los anteriores criterios y tomando en cuenta la normatividad

existente, es posible definir más claramente los siguientes aspectos: 1)Selección

de los indicadores de impacto (ambientales), 2)Determinación de la frecuencia

mínima necesaria de los muestreos, para el análisis de tendencias y correlación de

causa-efecto, 3)Selección de los puntos de monitoreo, tomando en cuenta la

ubicación específica de las actividades que pueden generar impactantes y 4)

Determinación del tipo de datos a obtener y su forma de almacenamiento y análisis.

11


Cabe señalar, que el aspecto económico en muchas ocasiones limita los

programas debido a que, por lo general, los análisis que deben realizarse implican

un alto costo. Es necesario tomar esto en cuenta, con el fin de llevar a cabo la

programación de la mejor manera posible. A continuación en el Cuadro 1, se

ejemplifica el tipo de parámetros y frecuencia con que deber ser muestreadas las

estaciones de transferencia.3

Cuadro 1. Representa los parámetros y frecuencia para los muestreos

Parámetros

PST partículas viables

biogás Lixiviados ruido

Instalación h s c

Estación de transferencia

b b b b … … d

Fuente: Instituto Nacional de Ecología: Monitoreo ambiental.3

b = bimestral h = hongos y levaduras d = diario s = Salmonella c = coliformes fecales

En el Cuadro 2 se muestran los parámetros, técnicas y normas de la

normatividad empleada en los diferentes tipos de monitoreo. Estos datos podrían

ser útiles como referencia para asignar y programar un sistema de monitoreo

ambiental.

Cuadro 2. Técnicas y normatividad empleada en el monitoreo de estaciones de transferencia

Impactantes Parametros Técnicas Normas

Partículas en aire Partículas

suspendidas

totales

Mestreo de alto

volumen

Norma Oficial Mexicana NOM-

CCAM-02-ECOL-93. Limite

permisible: 275 mg/m3

Microorganismos

en aire

Muestreo con

impactador

andersen

No existe

Ruido ambiental ruido Lectura directa

en campo

No existe

Fuente: Instituto Nacional de Ecología: Monitoreo ambiental.3

12


Usando las consideraciones anteriores, se tiene un muestreo ambiental que

consiste en el método que indica la Norma Oficial Mexicana (NOM-025-SSA1-

1993). El campo de aplicación de esta Norma Oficial Mexicana es en todo el

territorio nacional. Los valores que se establecen deben ser considerados como

referencias para que dependencias, organismos e Instituciones a sus respectivos

ámbitos de competencia, los apliquen en las acciones de prevención de la salud

humana y control de la contaminación ambiental.

Establece los límites permisibles y la cantidad de muestras a emplear en

dicho análisis, haciendo referencia a la Norma Oficial Mexica (NOM-035-

SEMARNAT-1993). Esta Norma tiene la particularidad de establecer los métodos

de medición y determina la concentración de partículas suspendidas totales que se

encuentran en el aire y además el procedimiento para la calibración de los equipos

de medición.

Es importante destacar que en el país no se tiene registro de normas que

establezcan los límites y métodos para determinar la calidad del ambiente laboral.

Pero, existen métodos para el muestreo de agentes biológicos cultivables y/o

totales que están proyectados para determinar la fuente, cantidad e identificación

de agentes biológicos transmitidos fundamentalmente por vía aérea. Dichos

métodos están basados en la toma, recuperación y subsiguiente cultivo de

microorganismos. Estos métodos pueden ser clasificados de acuerdo con el

procedimiento de toma de muestra o el manejo de la muestra tomada, e incluyen:

13


gravitación, impactación, centrifugación, burbujeo y filtración6.

Dichos métodos descritos anteriormente requieren de un instrumento que

proporcione una mayor captación de microorganismos, estos se basan en una

corriente de aire que facilita la recolección de microorganismos que se encuentran

en el ambiente. Aunque existen técnicas, como son la sedimentación en placa y la

técnica del hisopado que no incluyen equipos. Estas resultan ser más económicas,

pero tienden a brindar un estimado de la cantidad de microorganismos presentes.

VIII. Procedimiento y descripción de las actividades realizadas

(Metodología).

8.1 Laboratorio de microbiología médica.

En el trabajo realizado se monitorearon mesas y pisos del laboratorio de

microbiología médica. Se tomaron seis puntos del área con una dimensión de

5cm2. La técnica usada en este muestreo fue la del hisopo sometido a una solución

de fosfatos. Se deslizó en la superficie de los puntos mencionados para finalmente

depositarlos con los tubos en el amortiguador (Fig.1)

Fig. 1. Zonas de mesas y pisos

monitoreadas en superficie

14


En seguida se hicieron las siembras por la técnica de estría (por duplicado).

El total de siembras por mesas en este laboratorio fueron doce. Se incubaron

dichas muestras por 24 horas a una temperatura de 35°C en condiciones de CO2

debido a que se empleó el medio de agar sangre, obteniendo así el crecimiento de

microorganismos.

En relación a las muestras tomadas del piso de este mismo laboratorio,

fueron cinco puntos los monitoreados y también con su repetición; es decir, diez

cajas en el área. Por otro lado, también se monitorearon las ventanas del local (Fig.

2), con un total de seis puntos y sus respectivas repeticiones. .

Fig.2 Ubicación del muestreo en pared y

Ventanas del laboratorio de microbiología

Médica.

También, se realizaron pruebas para verificar la contaminación del aire

emitido de los ductos del aire acondicionado; con dos repeticiones a diferentes

horas del día, 9:00 y 11:00 horas. Estas horas, se determinaron previamente como

las horas pico.

15


8.2 Laboratorio de cólera y enterobacterias.

Una vez terminado el monitoreo del área de microbiología médica el

siguiente laboratorio muestreado fue el de cólera y enterobacterias; el cual se

inició con el muestreo en mesas de trabajo donde se usó la misma técnica del

hisopo sometido a una solución de fosfatos, luego sembrados por la técnica de

estriado en placa en un medio de agar sangre. Las muestras se efectuaron por

duplicado. Debido a la dimensión del local, los puntos muestreados fueron siete los

cuales se observan en la Fig. 3

Fig. 3. Zonas muestreada en mesas del laboratorio de cólera

y enterobacterias.

Posteriormente se siguió trabajando en este sitio; con muestras de pisos y

ventanas, de los cuales se tomaron seis puntos (por duplicado) respectivamente

que fueron procesadas con las técnicas descritas con anterioridad; reuniendo un

total de 12 muestras a analizar.

Enseguida se empleó la técnica de sedimentación en placa (Fig.4 puntos

monitoreados) para la cuantificación de microorganismos presentes en el ambiente

de trabajo y en las salidas de ductos del aire acondicionado, empleando como

medio el agar sangre y agar mycosel respectivamente. En relación a dicha técnica,

se tomó un tiempo de exposición de placas de 20 minutos en general para cada

caso.

16


Fig. 4 Monitoreo del ambiente por la técnica de sedimentación en placa

en el laboratorio de cólera y enterobacterias.

8.3 Área de tinción y microscopía.

Otro sitio muestreado fue el área de tinciones y microscopía, donde se

monitorearon las mesas de trabajo (Fig. 5). Se tomaron tres puntos de muestreo

debido al tamaño pequeño del área de trabajo; usando la técnica del hisopo

sometido a solución de fosfato, y realizando la técnica de estría en placas de agar

sangre, las cuales de incubaron a 35°C en condiciones de CO2 por 24 horas.

Fig.5 Puntos muestreados de mesas y pisos en el área de tinciones

Enseguida se monitorearon los pisos (como se muestra en la Figura anterior

Fig.5) y ventanas de dicha área, tomando tres y cuatro puntos respectivamente

efectuando la técnica del hisopo antes y después de la limpieza del área y

realizando el estriado por repetición, obteniendo un total de 6 muestras y ocho

respectivamente.

17


Por último, se realizaron pruebas para determinar la contaminación de

ambiente de trabajo (Fig.6) y del aire acondicionado; empleando la técnica de

sedimentación en placa con un medio de agar sangre y agar mycosel según el

caso; empleando un tiempo de exposición de placas de 20 minutos por análisis.

Fig.6 Monitoreo ambiental por la técnica de sedimentación en placa.

8.4 Laboratorio de virus respiratorios.

Por otra parte, también se evaluó el laboratorio de virus respiratorios donde

se monitorearon mesas y pisos antes y después de su higienización; empleado el

método del hisopo en solución de fosfatos, para posteriormente pasar a la siembra

por estriado en placa.

Además, se verificaron las condiciones del ambiente (Fig.7) así como los

ductos del aire acondicionado, empleando la técnica de sedimentación; con los

medios de agar sangre y agar mycosel, este último para ver microorganismos en el

aire acondicionado.

Fig.7 Monitoreo del ambiente por la técnica de sedimentación

en placa.

18


8.5 Virus gastrointestinales.

Otra área muestreada fue el laboratorio de virus gastrointestinales,

realizando de igual manera la técnica del hisopo; se tomaron muestras de mesas

(Fig. 8) y pisos antes y después de la limpieza del área; tomando dos puntos de

muestreo y realizando por repetición la siembra por estriado en placa en un medio

de agar sangre.

En relación a los pisos se tomó solo un punto de muestreo debido al tamaño

del local, realizando la siembra por duplicado, en el medio de agar sangre.

También se hizo el muestreo en el ambiente de dicha área empleando la

técnica de sedimentación (Fig. 8) en placa con un tiempo de exposición de 20

minutos, incubando 24 horas a 35°C en condiciones de CO2.

Fig.8 Toma de muestras en mesas y ambiente

por la técnica de sedimentación.

8.6 Laboratorio de Micobacterias.

En esta área se monitorearon las mesas y pisos del local con la técnica del

hisopo y el estriado como ya se mencionó con anterioridad, se tomaron cuatro y

tres puntos de muestreo respectivamente para cada caso. Enseguida se monitoreó

la calidad de ambiente (Fig. 9) en dicha área usando la técnica de sedimentación

en placa.

19


Fig.9 Monitoreo del ambiente por la técnica de sedimentación.

8.7 Laboratorio de infecciones de transmisión sexual.

Por otra parte se analizó el laboratorio de infecciones de transmisión sexual

donde se tomaron dos puntos de muestreo para mesas y pisos con repetición

teniendo un total de cuatro cajas en total para cada caso.

En este mismo laboratorio se realizó el monitoreo del ambiente con la

técnica de sedimentación en placa tomando dos puntos de muestreo (Fig.10) por

duplicado obteniendo cuatro placas que fueron incubadas a 35°C por 24 horas en

un ambiente de CO2.

Fig. 10 Muestreo del ambiente por la técnica de sedimentación.

8.8 Laboratorio de preparación de medios de cultivo

En este sitio se muestrearon las mesas y pisos; se localizaron tres puntos

20


estratégicos para la toma de muestra (Fig. 11), empleando la técnica del hisopo

sometido a la solución de fosfato para enseguida realizar la siembra por estriado en

placa.

Fig.11. Puntos muestreados de mesas y piso en

el área de preparación de medios

En relación al laboratorio de preparación de medios de cultivo, se analizó la

calidad de ambiente empleando la técnica de sedimentación en placa en tres

puntos del local con su respectiva repetición teniendo así un total de seis cajas.

8.9 Área de lavado de material.

Así mismo se monitoreó el área de lavado de material, donde se

muestrearon tres zonas de las mesas y pisos empleando la técnica del hispo para

realizar la siembra por estriado en un medio de agar sangre.

Fig12. Muestreo de mesas y ambiente por la técnica

de sedimentación en placa.

21


8.10 y 8.11 Laboratorio de biología molecular (extracción) y

Laboratorio de biología molecular (PCR).

Dentro de este Departamento de Microbiología Médica se encontraron los

laboratorios descritos con anterioridad, aunque cabe mencionar que se

muestrearon las salidas en los ductos de aire acondicionado de la jefatura de dicho

departamento, así como los módulos restringidos que son: el laboratorio de biología

molecular (extracción); Y el laboratorio de biología molecular (PCR) de los cuales

se realizó el monitoreo del ambiente y de los ductos de aire acondicionado

empleando placas con medio de agar sangre y placas con agar mycosel con una

exposición de 20 minutos. Incubando el agar sangre 24 horas a 35°C en

condiciones de CO2; mientras que las placas de agar mycosel se incubaron 5 días

a una temperatura de 20-25°C.

8.12 Departamento de Serología Médica.

De igual manera se muestreó el Departamento de Serología Médica. El

muestreo ambiental dentro de las áreas de departamento en cuestión se realizó el

día 23 de julio del 2013 a partir de la 9:00 A.M. por un tiempo de exposición de

placas de 15-20 minutos aproximadamente. Las áreas muestreadas son:

Coordinación de Serología Diagnostico, Laboratorio de Control de Paludismo,

Laboratorio de Infecciones de Transmisión Sexual y Laboratorio de Serología

Diagnóstica. Donde se monitoreó la calidad del ambiente de trabajo así como las

salidas de aire acondicionado empleando la técnica de sedimentación en placa con

un medio de agar sangre y otro de agar mycosel según su fin.

8.13 Laboratorio de microbiología de alimentos.

Otro departamento monitoreado fue el Laboratorio de Microbiología de

Alimentos, donde se realizó la técnica de sedimentación en placa para evaluar la

calidad del ambiente y del aire acondicionado. Los laboratorios muestreados son: el

22


laboratorio de físico-químicos donde se realizó monitoreo del ambiente; área de

preparación de medios en la cual se analizaron los dos aspectos sedimentación en

ambiente y en aire acondicionado.

También se evaluó el Laboratorio de Microbiología de Alimentos empleando

la técnica de sedimentación para el ambiente y para los ductos del aire

acondicionado. Y finalmente se muestreó el laboratorio de control de calidad de

medios de cultivo evaluando las dos partes que es ambiente y aire acondicionado.

A continuación se muestra el diagrama de flujo que se empleó para cada una de

las tomas de muestras realizadas para el monitoreo ambiental de laboratorio estatal

de salud pública.

23


24


Diagrama de flujo para el procedimiento del muestreos de mesas, pisos y ventanas.

25


IX. Resultados de los monitoreos microbiológicos de mesas, pisos,

ventanas, aire ambiente y ductos del aire acondicionado de los

diferentes laboratorios.

9.1 Laboratorio de microbiología médica.

Los resultados que se obtuvieron de los análisis realizados en la superficie

de las mesas de trabajo tanto en la parte centro, lado superior, lado inferior

derecho e inferior izquierdo las UFC por cm2 fueron de cero en las dos

repeticiones realizadas.

Los resultados del monitoreo del piso de dicho laboratorio también fueron

nulos, solo la muestra 3 y 5 tuvo un crecimiento de 1 UFC, la cual no fue

significativa debido a que ese muestreo se realizó sin higienización. Además las

colonias son características las que se desarrollan en el ambiente. Estas se

observaron en el microscopio y fueron bacilos Gram (+). Con respecto al muestreo

de ventanas de las 12 repeticiones de placas sembradas no hubo crecimiento de

colonias durante las 24 horas de incubación. En el Cuadro 3, se observan los

resultados obtenidos del monitoreo del ambiente.

Cuadro 3. Resultados obtenidos en el monitoreo del ambiente

del laboratorio de microbiología medica:

MUESTRA Muestreo 1.

(UFC)

Muestreo 2.

(UFC)

PROMEDIO TOTAL

(UFC)

LMM.1A.S 0 4

LMM.1B.S 2 1

LMM.2A.S 0 3

LMM.2B.S 1 2

LMM.3A.S 2 8

LMM.3B.S 7 5

LMM.4A.S 1 3

LMM.4B.S 0 2

LMM.5A.S 0 8

LMM.5B.S 1 6 3UFC

Los números repetidos indican la réplica del muestreo de

de la técnica de sedimentación.

26


Descripción de las colonias desarrolladas:

En la muestra LMM.1B.S se observaron dos colonias redondas y de color

blanco refringentes a la luz. En las muestras LMM.2B.S, LMM.3A.S, LMM.3B.S,

LMM.5A.S y su repetición LMM.5B.S, se encontró que hubo crecimiento de

colonias de color cristalino redonda, las cuales al ser observadas al microscopio,

resultaron ser bacilos Gram (+). Sin embargo, en la muestra LMM.4A.S el

crecimiento fue de una colonia redonda, con hemólisis y borde ondulado con

aspecto de levadura, pero al observar el frotis se detectó como bacilos Gram (+).

Por otra parte los resultados obtenidos del aire acondicionado de cuatro

muestreos son poco significativos, debido a que solo hubo crecimiento de un hongo

en uno de los ductos muestreados y solo en uno de los muestreos.

9.2 Laboratorio de cólera y enterobacterias.

Los resultados obtenidos de las mesas fueron poco significativos, debido a

que en este muestreo se obtuvieron 2 UFC como resultado de la media de dos

repeticiones. Al observar los frotis a través de la tinción Gram, resultaron ser

bacilos, cocobacilos y cocos Gram (+). Por otra parte los resultados obtenidos del

monitoreo en pisos la mayoría fueron de cero. Aunque en el lugar enumerado como

cinco, que es el área donde más se transita, se desarrollaron tres UFC como

resultado de la media de las dos repeticiones.

En relación al muestreo realizado en las ventanas, de las 6 zonas

monitoreadas el resultado fue de 0 UFC.

Sin embargo, los resultados obtenidos del muestreo por sedimentación en el

ambiente, presentaron crecimiento de colonias en cada uno de los puntos

muestreados los cuales se presentan a continuación en el Cuadro 4.

27


Cuadro 4. Crecimiento de Colonias en Placas de Agar Sangre a 24 horas

de incubación.

MUESTRA 1er. muestreo

(UFC)

2 do.. muestreo

(UFC)

Promedio total

(UFC)

CE.1A.S 0 1

CE.1B.S 3 0

CE.2A.S 0 0

CE.2B.S 2 1

CE.3A.S 2 1

CE.3B.S 1 0

CE.4A.S 0 2

CE.4B.S 1 0

CE.5A.S 1 4

CE.5B.S 1 1

CE.6A.S 2 1

CE.6B.S 0 0 1 UFC

Las colonias desarrolladas en este muestreo, se caracterizaron por ser

redondas color amarrillo claro y algunas desarrollaron hemolisis, después de

realizarle el frotis se determinó que las colonias antes descritas fueron bacilos

Gram (+), Gram (-) y cocos Gram (+).

En los análisis realizados en los ductos de aire acondicionado, de los seis

puntos muestreados con sus respectivas repeticiones solo hubo un crecimiento en

dos zonas de las cuales se desarrolló un hongo en dos muestras después de los

cuatro días de incubación.

9.3 Área de tinción y microscopía.

En el muestreo de mesas, de los dos monitoreos realizados, se obtuvo un

crecimiento incipiente como resultado de dos repeticiones, es decir fue mínimo el

desarrollo. Cabe señalar que de los tres puntos a muestrear solamente en uno de

ellos se obtuvo lo señalado anteriormente. Al observar los frotis a través de la

tinción Gram, de las colonias que aparecieron y muy aisladas, resultaron ser

bacilos Gram (-). Estas colonias fueron redondas, puntiformes, color amarillo y

otras de color café con borde ondulado. Por otra parte los resultados obtenidos de

28


piso, de dos monitoreos realizados, en promedio solamente se obtuvo una colonia

en la zona tres. Al ser observada en el microscopio se detectó como bacilos Gram

(+).

En cuanto a los resultados obtenidos de los monitoreos (2) en las ventanas,

no se obtuvo ninguna colonia. Estos resultados consistieron en cuatro puntos

monitoreados con sus repeticiones. Con respecto a los resultados obtenidos sobre

el análisis realizado en el ambiente y con la técnica de sedimentación, solamente

fueron 5 UFC en promedio de las repeticiones. Estos resultados se muestran en la

Cuadro 5. Al observar las colonias microscópicamente, se encontró que algunas

colonias fueron redondas, puntiformes, otras con margen ondulado, color amarillo y

cristalinas, las cuales fueron cocos Gram (+), bacilos Gram (+) y Gram (-) y

cocobacilos Gram (-), respectivamente. Para los resultados que se obtuvieron en

los muestreos de las salidas de los ductos del aire acondicionado se obtuvo el

crecimiento de un hongo en cuatro días de incubación a 25°C de los dos

monitoreos realizados en dicho laboratorio.

Cuadro 5. Resultados de los monitoreos realizados del ambiente por la

Técnica de sedimentación. muestra 1er.muestreo

UFC

2do.Muestreo

UFC

3er.muestreo

UFC

4to.muestreo

UFC

TOTAL

ATM.1A.S 2 3 5 2

ATM.1B.S 4 2 1 5

ATM.2A.S 1 2 10 1

ATM.2B.S 1 0 9 2

PROMEDIO

EN UFC

3 UFC

9.4 Laboratorio de virus respiratorios.

Es importante señalar que los resultados que se obtuvieron en este

laboratorio, aun siguiendo la misma metodología, mismo número de monitoreos y

repeticiones que en los anteriores laboratorios, en la mayoría de los lugares

analizados se obtuvieron resultados positivos. La excepción en el medio ambiente,

con la técnica de sedimentación, resultando 5 UFC en los tres monitoreos, siendo

29


estos el resultado promedio de los tres. Algunas de estas colonias fueron bacilos y

cocos Gram (+). En los resultados de los muestreos de los ductos de aire

acondicionado, de tres monitoreos realizados con repetición solo hubo un

crecimiento de hongo color blanco con un centro negro como se muestra en la

siguiente en la Fig. 5.

Fig. 5. Hongo muestreo de aire acondicionado

9.5 Laboratorio de virus gastrointestinales.

Los datos obtenidos del análisis del muestreo de mesas, fueron realizados

en cuatro muestreos y sus repeticiones respectivas. Estos fueron 5 UFC para el

muestreo sin higienización y una colonia para las mesas higienizadas. Respecto al

muestreo por sedimentación se obtuvieron 7 UFC resultado promedio de las

repeticiones de tres muestreos efectuados como se refleja en el Cuadro 6.

Cuadro 6. Resultado de tres monitoreos del ambiente por la técnica de

sedimentación.

muestra 1er.muestreo

UFC

2do.muestreo

UFC

3er.muestreo

UFC

TOTAL

(UFC)

LVG.1A.S 13 2 7

LVG.1B.S 10 5 3

Promedio

en UFC

11.5 3.5 5 7

30


9.6 Laboratorio de micobacterias.

Los resultados obtenidos de los muestreos de las mesas monitoreadas,

pisos y del medio ambiente fueron nulos para todos los muestreos realizados con

sus repeticiones.

9.7 Laboratorio de infecciones de transmisión sexual.

Los resultados obtenidos en el análisis de las mesas también fueron nulos.

Mientras que en pisos hubo un mínimo crecimiento de colonias de las cuales no se

consideraron ya que fue contaminación del medio de cultivo. Por lo tanto el

resultado fue cero. En cambio, en los tres monitoreos ambientales realizados por

sedimentación se encontró un promedio de 5 y 2 UFC para los puntos muestreados

uno y dos (cuadro 7).

Cuadro 7. Resultados de los monitoreos realizados del ambiente por la técnica

de sedimentación. Muestra 1er.muestreo

UFC

2do.Muestreo

UFC

3er.muestreo

UFC

TOTAL

LITS1A.S 1 4 8

LITS1B.S 0 13 6

LITS2A.S 2 3 3

LITS2B.S 3 3 3

PROMEDIO

EN UFC

1.5 5.75 5 4 UFC

9.8 Laboratorio de preparación de medios

En los muestreos realizados en las superficies de mesas tanto en no

higienizadas como higienizadas, no se obtuvo ningún crecimiento de

microorganismos. En cuanto a los resultados obtenidos de los pisos solamente fue

desarrollada una colonia, de la cual al ser observada con frotis en tinción al Gram

resultaron ser bacilos Gram (+) de diferente forma pues unos fueron cortos y otro

alargados. También se observó una agrupación muy característica en forma de

telaraña (ver anexo 3f), parecidas a la morfología de levadura.

31


Por otra parte en los muestreos por sedimentación hubo un aumento en el

crecimiento de colonias de las cuales de tres monitoreos realizados se tuvo un

promedio de 5 UFC que se muestran en el Cuadro 8.

Cuadro 8. Resultados en UFC de tres monitoreos por la técnica de Sedimentación

muestra UFC

24 de abril

UFC

24 de

mayo

UFC

17 de julio

UFC

TOTAL

LPM.1A.S 4 13 1

LPM.1B.S 5 10 2

LPM.2A.S 3 16 8

LPM.2B.S 1 14 6

LPM.3A.S - 2 5

LPM.3B.S - 5 2

PROMEDIO

UFC

2.16 10 4 5.38

En relación al resultado de este monitoreo se observó en el microscopio por

medio de tinción al Gram, colonias que fueron bacilos y cocos Gram (+), aun

cuando eran de diferente característica la morfología de la colonia.

9.9 Área de lavado de material.

En los monitoreos de las superficies de las mesas sin higienización, el

promedio de dos muestreos con sus repeticiones, los resultados obtenidos fueron 5

UFC, las cuales se observaron al microscopio y consistieron en bacilos Gram (+).

Las colonias manifestaron ser redondas, cristalinos, otras con borde ondulado y

otros con hemolisis. Mientras que, higienizadas el resultado promedio fue

solamente una colonia. En cuanto al muestreo de pisos se tuvo un resultado de 2

UFC promedio de dos monitoreos con sus repeticiones sin higienización y nulo

para los pisos higienizados. Para el muestreo del ambiente por la técnica de

sedimentación los resultados fueron notorios ya que hubo más desarrollo de

colonias dando un promedio de 4 UFC (Cuadro 9) que fueron colonias de bacilos,

32


cocos, cocobacilos Gram (+) y bacilos Gram (-). En relación a estos datos se pasó

a identificar la colonia de bacilo Gram (+) con característica redonda y sin hemolisis

teniendo como resultado un Sthapylococus Sciuri.

Cuadro 9. Resultado de muestreo del ambiente por la técnica de sedimentación

muestra UFC

24 de abril

UFC

24 de

mayo

UFC

27 de junio

UFC

16 de julio

UFC

TOTAL

ALM.1A.S 20 2 7 4

ALM.1B.S 16 7 5 7

ALM.2A.S 4 2 1 0

ALM2B.S 6 5 5 4

ALM3A.S 2 - 2 1

ALM3B.S 4 - 3 2

PROMEDIO

UFC

4 UFC

9.10 Laboratorio de biología molecular (extracción).

Los resultados obtenidos en el monitoreo del ambiente por la técnica de

sedimentación fueron de 3 UFC, de dos puntos muestreados con su repetición en

este laboratorio. Sin embargo, para el muestreo de aire acondicionado hubo

crecimiento de un hongo en cuatro días de incubación de tres zonas monitoreadas

con su repetición.

9.11 Laboratorio de biología molecular (PCR).

En relación al resultado del muestreo de ambiente se tiene 2 UFC como

promedio de cuatro puntos muestreados con su repetición. Mientras que en el

muestreo de los ductos del aire acondicionado el resultado fue nulo.

9.12 Laboratorio de serología médica:

9.12.1 Coordinación de serología médica.

Los resultados obtenidos del muestreo del ambiente por la técnica de

sedimentación en placa después de 24 h de incubación fueron de 8 UFC del

33


promedio de cuatro puntos monitoreados dentro del local (Cuadro. 10). En relación

a las colonias observadas en el microscopio con tinción al Gram fueron bacilos,

cocos y cocobacilos Gram (+).

Cuadro 10. Resultado del muestreo del ambiente por la técnica de sedimentación

Zona Muestreada UFC

CSD.1.S. 9

CSD.2.S. 7

CSD.3.S. 4

CSD.4.S. 11

Promedio 8 UFC

En relación al resultado del monitoreo del ducto de aire acondicionado en

dicha área, hubo un crecimiento de 3 hongos color blanco con negro después de

cuatro días de incubación.

9.12.2 Laboratorio de control de paludismo.

Los resultados que se obtuvieron en el muestreo del ambiente con la técnica

de sedimentación fueron de 3 UFC del promedio de cuatro puntos muestreados

(Cuadro 11). Estas colonias fueron observadas con el microscopio y teñidas al

Gram, las que consistieron en cocos Gram (+). Por otra parte; en el monitoreo del

aire acondicionado, después de cuatro días de incubación hubo un resultado de 5

hongos de los cuales sus características fueron color blancos y otros amarillos

estos se obtuvieron de dos puntos monitoreados en esta área.

Cuadro 11. Resultados del monitoreo

del ambiente con la técnica de

sedimentación en placa.

Muestra UFC

CCP.1.S 3

CCP.2.S 2

CCP.3.S 3

CCP.4.S 2

Promedio 2.5

34


9.12.3 Laboratorio de infecciones de transmisión sexual.

En este laboratorio, los resultados obtenidos del muestreo del ambiente en

tres puntos muestreados se obtuvieron un promedio de 3 UFC, las cuales se

muestran en el Cuadro 12. En relación a las colonias que se manifestaron fueron

observadas al Gram en el microscopio y se encontraron bacilos y cocos Gram (+).

De igual forma se realizó el muestreo de los ductos de aire obteniendo dos hongos

después de cuatro días de incubación. Estos tuvieron las mismas características de

los hongos observados con anterioridad en otros monitoreos. Son blancos a

diferencia de uno que tiene tonalidad rosada.

Cuadro 12. resultados del muestreo

del ambiente por la técnica de sedimentación.

Muestra

UFC

LIST.1.S 3

LIST.2.S 2

LIST.3.S 3

Promedio 2.66

9.12.4 Laboratorio de serología diagnostica.

Por otra parte el muestreo del ambiente de dicho laboratorio y empleado las

mismas técnicas, se obtuvo 5 UFC resultado del promedio de seis puntos

monitoreados, los cuales se muestran en el Cuadro 13. En relación a las colonias

que se encontraron en dichos puntos fueron bacilos, cocos Gram (+) y cocos Gram

(-).

Cuadro 13. Resultados obtenidos

del ambiente por la técnica de

sedimentación en placa.

MUESTRA

UFC

LSD.1.S 5

LSD.2.S 7

LSD.3.S 4

LSD.4.S 5

LSD.5.S 1

35


LSD.6.S 6

PROMEDIO 4.6

9.13 Laboratorio de microbiología de alimentos.

9.13.1 Laboratorio de fisicoquímicos.

Es importante señalar que los resultados del monitoreo del ambiente que se

obtuvieron en este laboratorio, aun siguiendo las mismas metodologías y de seis

puntos muestreados, no hubo desarrollo de microorganismos en las 24 horas de

incubación por lo que los resultados en este laboratorio fueron nulos.

9.13.2 Área de preparación de medios de cultivo.

Sin embargo, en el muestreo del ambiente en este laboratorio el resultado

fue notorio puesto que se obtuvo un promedio de 10 UFC donde se tuvo mayor

desarrollo de microorganismos en cinco puntos monitoreados, los cuales se

observan en el Cuadro 14.

Cuadro 14. Resultados del monitoreo

del ambiente por la técnica de sedimentación.

MUESTRA

UFC

PMC.1.S 5

PMC.2.S 20

PMC.3.S 10

PMC.4.S 4

PMC.5.S 10

Promedio 9.8

En relación a la morfología de las colonias, sus características fueron

redondas cristalinas puntiformes, colonias amorfas planas, otras grandes con borde

enrulado y blancas puntiforme brillosas, todas ellas se observaron cómo bacilos y

36


cocos Gram (+). Algunos bacilos en forma corta y otros alargados, también se

observaron estructuras levaduriformes (Fig.6). Esta última fue identificada con

microescan Walk Away 96 marca SIEMENS, arrojando una probabilidad del

97.21% como Candida laurentii. Al mismo tiempo se realizó el muestreo del aire

acondicionado, donde se emplearon dos medios diferentes (agar papa dextrosa y

agar mycosel) con la finalidad de confirmar el desarrollo de hongos que se presentó

en cada uno (Cuadro 15).

Cuadro 15. Resultados de monitoreo de aires

acondicionados en diferente medio de cultivo

para hongos.

Muestra Agar papa

dextrosa

Agar

mycosel

PMC.1.SA 6 hongos 3 hongos

Fig. 6. Estructuras levaduriforme en

muestreo de ambiente por la técnica

de sedimentación

9.13.3 Laboratorio de microbiología de alimentos.

Los resultados del muestreo del ambiente a través de la técnica de

sedimentación fueron en promedio de 6 UFC en cinco puntos monitoreados, como

se muestran en el Cuadro 16. En relación a dichas colonias fueron observadas al

microscopio y resultaron ser bacilos y cocos Gram (+). Sin embargo, en los datos

obtenidos del muestreo de los ductos de aire acondicionado con dos medios de

37


cultivo distintos y aun empleando la misma técnica, tiempo de exposición y tiempo

de incubación, hubo una diferencia significativa en el crecimiento de hongos

puesto que el desarrollo fue mayor en el medio de agar papa dextrosa, como se

muestra en el Cuadro 17.

Cuadro 16. Resultados obtenidos del

muestreo del ambiente por la técnica

de sedimentación.

MUESTRA

UFC

LMA.1.S 2

LMA.2.S 5

LMA.3.S 18

LMA.4.S 1

LMA.5.S 2

Promedio 6

Cuadro 17. Resultados obtenidos del

muestreo de ductos de aire acondicionado

en diferente medio.

Muestra

UFC

mycosel

UFC

agar papa

dextrosa

LMA.1.S 0 8

LMA.2.S 1 1

LMA.3.S 0 13

9.13.4 Laboratorio de control de calidad de medios de cultivos.

En relación al monitoreo del ambiente con la técnica de sedimentación

realizado en este laboratorio, se obtuvo un resultado de 4 UFC del promedio de

tres puntos muestreados (Cuadro 18). Las colonias fueron observadas en el

microscopio con tinción al Gram y fueron bacilos, cocobacilos y cocos Gram (+).

38


Cuadro 18. Resultados obtenidos

del muestreo del ambiente con

la técnica de sedimentación.

Muestra

UFC

CCM.1.S. 2

CCM.2.S. 7

CCM.3.S. 3

Promedio 4UFC

39


X. Conclusiones y recomendaciones.

Como se observó en los resultados de este trabajo, el desarrollo de

microorganismos fue relativamente bajo, debido a que hay un control de

higienización, aunque existe un movimiento del personal tanto en las actividades

del laboratorio como la de los pasillos. También, influye el flujo del aire de puertas

así como los flujos del aire acondicionado e inmobiliario de las oficinas, etc. Es

susceptible a que se traduzca en una manera fácil de contaminación tanto laboral

como del movimiento de trabajo. Lo que indica que en las condiciones estudiadas

durante el tiempo de este proyecto, existió un control en la contaminación, tanto en

mesas, pisos como en ventanas.

Aun teniendo estos resultados positivos de control de contaminación en los

objetos estudiados, se sugiere indicaciones tales como cambio de zapatos desde

la entrada hasta el final de la jornada. Flujo de aire inverso en la entrada del

laboratorio, para evitar contaminación y tener cuidado con los artículos de limpieza

tales como trapeador y escoba, la cual al concluir la tarea de limpieza sean lavadas

e higienizadas y airados como parte de la rutina de trabajo.

Es fundamental, se tenga un control exigente de calidad de los lotes de

medios de cultivo. Ya que se debe de partir de la seguridad de que los medios de

cultivos sean completamente inocuos así como el control de los mismos durante su

uso para evitar contaminación.

Si no se toman en cuenta todas estas consideraciones sería inútil mantener

un buen control para evitar contaminación cuando el personal que labora y trata

con microorganismos descuida las condiciones más relevantes con su persona

para evitar la contaminación. Estas sugerencias conllevan a la aplicación de un

exigente cumplimiento tanto laboral como de actividades del personal.

Es importante destacar que una de las principales áreas de las que se debe

de partir la importancia del control de higienización, es la preparación de los medios

de cultivo. Todos los laboratorios que requieren de medios de cultivo para las

pruebas pertinentes deben de estar cien por ciento seguros, no solamente de su

calidad nutricional sino también de su inocuidad. Los resultados que se obtengan

40


de cualquier laboratorio deberán ser confiables desde su recibimiento hasta su uso.

Si el control de calidad se lleva de forma rigurosa, impactaría económicamente de

manera importante para el laboratorio.

41


XI. Referencias.

1. Norma Oficial Mexicana NOM-025-SSA1-1993, Salud Ambiental. Criterios para

evaluar el valor Límite permisible para la Concentración de Material Particulado.

valor límite permisible para la concentración de Partículas Suspendidas Totales

PST, partículas menores de 10 micrómetros pm10 y partículas menores de 2.5

micrómetros pm2.5 de la calidad del aire ambiente. criterios para evaluar la calidad

del aire.

2. Centro Nacional de condiciones de trabajadores; norma Española. ntp 335:

Calidad de Aire Interior: evaluación de la presencia de polen y espora fúngicas.

Consultado el 26 febrero 2013

http://www.insht.es/InshtWeb/Contenidos/Documentacion/FichasTecnicas/NTP/Fich

eros/301a400/ntp_335.pdf.

3. Instituto Nacional de Ecología: monitoreo ambiental. Consultado el 26 febrero 2013

http://www.ine.gob.mx/publicaciones/libros/105/8.html.

4. Nom-035-Semarnat-1993, que establece los métodos de medición para determinar

la Concentración de Partículas Suspendidas Totales en el Aire Ambiente y el

Procedimiento para la Calibración de los Equipos de Medición.

5. Instituto Nacional de Ecología. Contaminación del Aire. Consultado el 29 de febrero

del 2013. http://www2.inecc.gob.mx/publicaciones/libros/16/parte4_17.html.

6. Universidad del País Vasco. Vicerrectorado de Investigación. Consultado el 2 de

marzo del 2013.

http://www.unsaac.edu.pe/vrin/archivos/CONTENIDO_CANON.pdf

7. Limpieza, desinfección, esterilización y antisepsia. Pedrique de Aulacio;

Vizcarrondo; Gutiérrez. Enero del 2002. Consultado el 2 de marzo del 2013.

http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/catedraMicro/08_Tema_

14_Limpieza__desinfecci%C3%B3n.pdf.

42


8. Muestreo Ambiental.3m.productos para la toma de muestra y verificación de

limpieza. Consultado el 2 de marzo del 2013. ®3M 2010. All Rights Reserved.

9. Evaluación de los Desinfectantes Utilizados en el Proceso de Limpieza y

Desinfección del área de Fitoterapéuticos en el laboratorio Pronabell LTDA. Alba

Torres, Natalia Elvira; Universidad Javeriana. Consultado el 3 de marzo del 2013.

http://www.javeriana.edu.co/biblos/tesis/ciencias/tesis232.pdf.

10. USP; 2007. Farmacopea de los Estados Unidos de América. Formulario Nacional.

Edición en español. volumen 1.pgs 542-546. 18 Mayo del 2007

11. Microbiología sanitaria. Agua y alimentos vol. 1. Fernández Escartín Eduardo.

Universidad de Guadalajara.

43


XII. Anexos.

1. Método de toma de muestra por la técnica del hisopo

44


45


2. Preparación de los medios de cultivo:

Base de Agar sangre:

Fórmula aproximada para 1000ml de agua purificada

Extracto de levadura 5.0g

Infusión de músculo cardiaco 2.0g

Peptona de caseína 13.0g

Cloruro de sodio 5.0g

Agar 15.0g

pH final

Método de preparación. Suspender 40gr. de polvo en un litro de agua purificada.

Mezclar perfectamente, calentar con agitación frecuente y hervir durante un minuto

hasta disolución completa. Distribuir y esterilizar a 121°C por 15 min.

Para la preparación de placas con sangre, enfriar la base a 45-50°C y adicionar 5%

de sangre estéril desfibrinada.

Agar Mycosel.

(Base para medio selectivo para aislar hongos patógenos)

Formula aproximada por litro

Harina de soya digerida por enzimas papaicas 10.0g

Dextrosa 10.0g

46


Agar 15.5g

Cicloheximida 0.4 g

Cloramfenicol 0.05g

Instrucciones: suspenda 36g. del polvo en 1l de agua purificada, mezcle bien.

Caliente agitando frecuentemente, justo a que hierva el medio para disolver

completamente en polvo. Autoclave 118°C durante 15min. no caliente en forma

excesiva

Buffer de fosfato (diluyente de Butterfield)11.

a. Solución madre:

Fosfato Monopotásico…………………34 g.

Agua destilada ………………………….500 ml.

Disolver y ajustar el pH a 7.2 con NaOH 0.1N y completar a 1 litro con agua

destilada. Esterilizar a 121°C durante 15 min. y conservar en refrigeración.

b. Liquido diluyente:

Diluir 1.25 ml. De la solución madre en 1 litro de agua destilada. Distribuir en

tubos o frascos y esterilizar a 121°C durante 20 min. El error del volumen

distribuido no será de 2% después de la esterilización.

47


3. Fotos de las colonias desarrolladas en algunos muestreos y

microorganismos encontrado:

a). b).

c). d).

e). f).

g). h).

48


i). j).

. .

a). Se aprecia las colonias de cocobacilos Gram (+) en el medio de agar sangre.

b). Colonia de levadura desarrollada en el medio de agar sangre.

c). Otra tipo de estructura de colonia de levadura desarrollada en el medio de agar

sangre.

d). Colonias de bacilos Gram (+).

e). Estructura de levadura observada con objetivo de 100X.

f). Se aprecia otro tipo de estructura levaduriforme con objetivo de 100X.

g). Estructuras de bacilos Gram (+) observadas con objetivo de 100X.

h). Hongos desarrollados en un medio de agar papa dextrosa a cuatro días de

incubación (muestreo realizado en el área de preparación de medios del

departamento de microbiología de alimentos).

i). Hongo desarrollado en un medio de agar papa dextrosa a cuatro días de

incubación.

j). Hongos desarrollados en un medio de agar papa dextrosa a mas de seis días de

incubación (en el departamento de microbiología de alimentos).

“monitoreo de microorganismos para determinar la …

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