moderadores: c. colás mesa redonda: polinosis...
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Alergol Inmunol Clin 2003; 18 (Extraordinario Núm.3):24-44
24
La alergia a las Cupressaceae. Pasado yfuturo
L a alergia a las Cupressaceae era conocida en Europa desde hace mu-
chos años como una curiosidad. Por mi parte publiqué en 1962 mi pri-
mera comunicación sobre este tema. Pero en los años 1975-1976 obser-
vé en Provence un incremento repentino. Después muchas investigaciones
fueron publicadas en otros países de Europa y especialmente Italia, España y to-
do el Mediterráneo, demostrando la realidad de esta alergia invernal que ahora
no está todavía minor. Quisiera sotolinear los resultados adquiridos, es decir, lo
que conocemos y después lo que desconocemos para poder bosquejar un cuadro
de la situación en cuanto en lo que se refiere a la inmunoterapia específica.
EL PASADO: LO QUE CONOCEMOS
1. Incremento repentino de los casos de polinosis, aunque no ha sido ob-
servado un incremento significativo de los cuentos polínicos.
2. Importante reactividad cruzada entre los varias Cupressaceae (C. sem-
pervirens; C. arizonica) y las Juniperaceae (J. ashei; J. oxycedrus) y también
las Taxodiaceae (Cryptomeria japonica). Sin embargo C. sempervirens es el ár-
bol principal y desgraciadamente el más difícil para purificar.
3. Las dificultades para conseguir la purificación y la estandarización de
los extractos a fin de llevar a cabo una buena inmunoterapia específica a causa
del bajo contenido en proteínas y la alta cantidad de azúcares. Estos azúcares
pueden desempeñar un papel actuando como “epitopes”. En un trabajo reciente
con Ariano hemos demostrado que entre 1994 y 2000, la actividad alergénica
del polen conservado es la misma pero el contenido proteínico disminuyó a me-
dias, lo que parece indicar que los azúcares tienen una función importante en
esta actividad. Sin embargo, tenemos algunos alergenos purificados: Cup a 1,
Cup s 1, Jun o 4, Jun a 1, 2, 3, Jun v 1, Cry j 1, 2, Cha o 1, 2.
EL FUTURO: LO QUE DESCONOCEMOS
1. ¿Por qué hay pocos casos de monosensitización? ¿Es una entidad clíni-
ca diferente?
2. ¿Por qué este incremento repentino? Midoro Horiuti ha demostrado que
existe una expresión variable de uno de los alergenos de J. Ashei (Jun a 3) en
relación con la polución atmosférica. Hay una diferencia de hasta 1 a 5 en la
cantidad de Jun a 3 segundo los lugares y los años.
3. Tener una buena estandarización de los extractos para realizar una inmu-
noterapia específica eficaz. Por ahora utilizamos una mezcla de varios pólenes.
4. Sería muy interesante de estudiar la capacidad alergénica de todas las
Cupressaceae en el Mediterráneo y también en el hemisferio sur, Australia,
África del sur.
Moderadores: C. ColásSanz, F. Florido López
R. C. Panzani
Laboratorie de RecherchesMarseille. France.
MESA REDONDA: POLINOSIS II
Aerobiología y polinosis por Cupresáceas en España
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Aerobiología y polinosis por Cupresáceasen España
INTRODUCCIÓN
Las Cupresáceas o Cupressaceae son plantas muy antiguas, aparecidas en
el inicio de la vida en la Tierra (Paleozoico). Sin embargo ha sido en los últimos
años cuando se ha reconocido su alergenicidad, siendo subestimadas por la
coincidencia en invierno con infecciones víricas y procesos intrínsecos. Se en-
cuentran repartidas por todo el Mundo, aunque son distintas las del Hemisferio
Norte y las del Sur.
Se trata de árboles o arbustos, con hojas en forma de escama o aciculares,
en disposición opuesta o en verticilos de 3 ó 4, habitualmente perennes. Son de
gran altura y muy longevos. No tienen verdaderas flores y sus órganos reproduc-
tores pueden ser monoicos (en la misma planta los dos sexos) o dioicos (en dis-
tinta planta). La polinización es anemófila, eliminando gran cantidad de polen
desde la base hasta la copa. Las fructificaciones pueden ser leñosas (arizónica) o
carnosas (tejo y enebro).
Son plantas con semilla al descubierto, es decir pertenecen a las Gimnos-
permas, pero quizás sea mejor clasificarlas para conocer sus relaciones taxonó-
micas.
La Botánica se divide en dos reinos: hongos y plantas. Las plantas a su vez
en: algas procariotas, algas eucariotas y embriofitas. Las embriofitas tienen cua-
tro divisiones: Briofitas (musgos), Pteridofitas (helechos), Pinofitas (gimnosper-
mas) y Magnoliofitas (angioespermas)1.
Dentro de las Pinofitas hay clases actualmente desaparecidas (Cycadeidop-
sida, Progimnospermopsida y Pteridospermopsida) y otras que todavía persisten:
Cycadopsida (Cycas), Ginkgopsida (Ginkgo biloba), Pnetopsida (Ephedra) y Co-
niferopsida. En las Coniferopsida hay dos órdenes extintos: Cordaitales y Volt-
ziales, y dos muy importantes desde el punto de vista alergológico: Coniferales y
Taxales.
El orden Coniferales abarca 575 especies de 6 familias: Pinaceae, Cupre-
ssaceae, Cephalotaxaceae, Taxodiaceae, Araucariaceae y Podocarpaceae. El or-
den Taxales tiene sólo una familia, Taxaceae, y la especie más conocida es Taxus
baccata (Tejo).
La familia Pinaceae tiene 5 géneros principales: Abies (Abeto), Cedrus
(Cedro), Picea (Abeto de Navidad), Larix (Alerce) y Pinus (Pino). La morfología
del polen de las Pinaceae es completamente diferente del resto de las Conifera-
les, y además tienen una prevalencia insignificante entre las polinosis, menos del
5%2. Además no se ha demostrado reactividad cruzada entre las Pinaceae y el
resto de Coniferales.
El tejo es un árbol que puede vivir 1.000 años con fructificaciones carnosas
rojizas, que son la única parte no venenosa de este árbol.
La familia Cupressaceae cuenta con 150 especies, repartidas en 19 géneros,
siendo los más importantes: Tetraclinis (T. articulata) sabina de Cartagena,
A. Moral de Gregorio
Sección de Alergología.Hospital Virgen del Valle.Toledo.
A. Moral de Gregorio
Platycladus (P. orientalis) árbol de la vida, Calocedrus (C.
decurrens) Cedro blanco de California, Chamaecyparis
(Ch. lawsoniana) Cedro de Oregón, Thuja (T. plicata) tu-
ya gigante, Juniperus spp. y Cupressus spp.
Hay 60 especies del género Juniperus, con frutos
carnosos y hojas aciculares, entre ellos: J. communis (ene-
bro común), J. oxycedrus (enebro de la miera), J. phoeni-
cea (sabina negra), J. thurifera (sabina blanca) y J. ashei
o sabinoides (cedro de montaña). Este último es muy im-
portante en cuanto a polinosis en Norteamérica3 y también
en los Balcanes.
La madera de Juniperus oxycedrus se utiliza en eba-
nistería y del Juniperus communis se extrae una conocida
bebida de origen inglés, la ginebra.
El género Cupressus tiene 20 especies, entre ellas:
C. sempervirens (ciprés común), C. arizonica (arizónica),
C. macrocarpa (ciprés de Monterrey), C. funebris (ciprés
llorón) y C. lusitanica (ciprés de Portugal). Utilizadas para
reforestación, protección contra el viento y como plantas
ornamentales. Debido a sus resinas aguantan bien el agua
y se utiliza para construir barcos.
Había otras familias dentro del orden Coniferales
además de las Cupressaceae, como las Araucariaceae, con
2 géneros: Araucaria y Agathis, que se encuentran sobre
todo en Australia y Nueva Zelanda. Su madera se utiliza
para mástiles de barcos por su rectitud.
Las Cephalotaxaceae con un solo género, Cephalo-
taxus (C. drupaceae).
Las Podocarpaceae con 7 géneros y originarias de
Oceanía, como Podocarpus neriifolius (podocarpo de ho-
jas de adelfa).
Por último las Taxodiaceae con 10 géneros, entre las
que se encuentran los árboles más viejos (2000-3000 años)
y más altos del mundo (hasta 100 metros), como: Sequoia-
dendrum giganteum (árbol del mamut), Sequoia sempervi-
rens (sequoia), Taxodium mucronatum (ciprés mejicano)
hay un ejemplar con 34 metros de diámetro en Oxaca
(Méjico) y de unos 2.000 años. A esta familia pertenece
también Cryptomeria japonica (cedro del Japón o Sugi),
que es la causa de un 90% de polinosis en Japón4.
MORFOLOGÍA DEL POLEN
Todas las especies del orden Taxales y Coniferales,
excepto las Pinaceae, tienen un mismo tipo de polen, dife-
renciándose sólo en el tamaño, por eso al identificar a es-
tos pólenes al microscopio se les denomina Cupressaceae-
Taxaceae, aunque olvidamos el resto de las familias de las
Coniferales.
Son pólenes de forma esferoidal, con un tamaño va-
riable entre 19 y 38 micras, sin aperturas y con una exina
delgada con gránulos finos y gruesos5, 6. La intina es muy
característica por su grosor (6 micras). En algunas ocasio-
nes se rompe la exina, saliendo el protoplasto que aparece
abrazado por la intina.
Los pólenes de Pinaceae son de gran tamaño entre
60 y 160 micras y trilobulados con dos vesículas aéreas,
semejando a una montera de torero5, 6. Son inaperturados.
Muy diferentes a las Cupressaceae.
AEROBIOLOGÍA
La cantidad de polen de Cupressaceae-Taxaceae re-
cogidas va a depender de muchos factores, como cantidad
de plantas, pluviometría, intensidad del viento, etc.
Los pólenes de Cupressaceae se recogen en el he-
misferio Norte durante los meses de octubre hasta abril,
pero principalmente en febrero y marzo.
En Europa Juniperus oxycedrus poliniza desde octu-
bre a diciembre, Thuja en diciembre y enero, Cupressus
arizonica desde noviembre hasta marzo solapándose con
Cupressus sempervirens que lo hace desde enero hasta
abril7.
En EEUU Juniperus ashei poliniza desde noviembre
hasta marzo8. Cryptomeria japonica poliniza en Japón des-
de febrero hasta abril9.
En los últimos 8 años los recuentos anuales de Cu-
pressaceae en varias ciudades españolas, aparecen en la fi-
gura 1 en granos/m3. 2, 10 El año 1995, fue uno de los más
secos de este siglo y en Barcelona se recogieron 6.313
granos/m3. Durante el año 1996, Toledo, Barcelona y Ma-
drid superaron los 5.000 granos/m3 (10.384, 8.586 y 5.464,
respectivamente). En el año 1997 las tres ciudades anterio-
res igualaron o superaron los 10.000 granos/m3. Toledo en
el año 1998 llegó a 17.241 granos/m3, mientras que Ma-
drid y Barcelona superaron los 5.000 granos/m3. En 1999
de nuevo Toledo, Madrid y Barcelona igualaron o supera-
ron los 10.000 granos/m3, muy por encima del resto de
ciudades. Sin embargo, en el año 2000, sólo Barcelona su-
peró los 10.000 granos/m3 de 15 ciudades españolas. En el
año 2001 superaron los 5.000 granos/m3 Toledo, Barcelona
y Madrid (7.991, 7.377 y 6.330, respectivamente). Por úl-
timo, en el año 2002 en Toledo se recogieron 11.537 gra-
nos/m3, mientras que superaron los 5.000 granos/m3 en
26
Aerobiología y polinosis por Cupresáceas en España
Barcelona, Madrid y Burgos (7.667, 9.417 y 5.272, res-
pectivamente).
Teniendo en cuenta los días de máxima recogida de
pólenes de Cupressaceae en 24 ciudades españolas (tabla
I), los días pico más elevados se produjeron en Toledo
2.660 granos/m3 (19 de diciembre de 1998), Ciudad Real
1.602 granos/m3 (13 de febrero de 2001), Ávila 1.256 gra-
nos/m3 (4 de febrero de 2000) Barcelona 1.077 granos/m3
(13 de febrero de 1997), y Madrid 1.005 granos/m3 (29 de
enero de 1999). En el resto de las ciudades los máximos
se produjeron en el mes de febrero, con cifras inferiores a
900 granos/m3.
El período de polinización de las Cupressaceae pue-
de ser artefactado por las lluvias del invierno, aunque los
mayores recuentos se produjeron los años de precipitacio-
nes más altas. En general la polinización en España se
produce de octubre hasta abril, aunque la mayoría de los
pólenes se recogen durante el primer trimestre del año en
todas las ciudades, excepto en Toledo que tiene cifras ele-
vadas en el cuarto trimestre, probablemente por el género
Juniperus (Figura 2).
La proporción de pólenes de Cupressaceae es muy
variable con respecto al total de pólenes, dependiendo de
la ciudades y de diferencias interanuales, oscilando entre
2,46% de Santander y 33% de Burgos.
CARACTERÍSTICAS DE LA POLINOSIS PORCUPRESÁCEAS
Black describió en EEUU en 1929 el primer caso de
sensibilización a Juniperus ashei11 y en 1945 Ordman en
Sudáfrica el primer caso por Cupressus sempervirens12. El
primer caso por Cryptomeria japonica en Japón fue en
196413. Posteriormente se han descrito numerosos casos en
países europeos: Francia14, Italia15, España16-18, Israel19 y
también en Australia20.
Los pacientes alérgicos a Cupressaceae presentan ca-
racterísticas clínicas diferentes a otras polinosis, siendo
más frecuentes las monosensibilizaciones que con otros
pólenes (23-33%)3-21. Los monosensibilizados a Juniperus
ashei tienen niveles de IgE total significativamente más
bajos (84 UI/ml versus 360 UI/ml, p<0,001), requieren in-
tervalos de exposición a Cupressaceae mucho más prolon-
gados antes de desarrollar la polinosis (14,4 años versus
5,69 años, p<0,001), tienen menos historia familiar de en-
fermedades alérgicas (43% versus 88%, p<0,001), tienen
menos antecedentes de asma o eczema (11% versus 39%,
p<0,001) y desarrollan la enfermedad a una edad más tar-
día (39 años versus 13 años, p<0,001) cuando se compara-
ban con sensibilizados a Cupressaceae y otros pólenes3.
Además los sensibilizados sólo a Cupressaceae tie-
nen una incidencia de conjuntivitis y rinitis superior al
70%, mientras que los síntomas de asma aparecen en me-
nos del 20%3, 22. Caballero en Madrid encuentra asma en
80% de los sensibilizados a Cupressaceae, pero la mayo-
ría se trataba de pacientes sensibilizados a otros pólenes16.
Los niveles de IgE específica a Cupressaceae suele
detectarse en pequeñas cantidades3.
PREVALENCIA
La presencia de pruebas cutáneas positivas a pólenes
de Cupressaceae en un estudio realizado en España en
1997 presentaba resultados muy dispares entre la pobla-
ción española con polinosis, oscilando desde el 0% en Se-
villa hasta el 23% en Madrid.
En el año 2003 se ha realizado un estudio multicén-
trico, por parte del Comité de Aerobiología de la Sociedad
Española de Alergologia e Inmunología Clínica, en 13
ciudades españolas utilizando extractos alergénicos del la-
boratorio Inmunotek (Madrid) para valorar la prevalencia
en pruebas cutáneas por prick test a una batería de los 24
pólenes más relevantes en España. Dentro de las Cupresá-
ceas se incluyeron Cupressus arizonica, Cupressus sem-
pervires y Juniperus oxycedrus (Tabla II). En cada una de
las ciudades la prevalencia fue muy similar con los tres
pólenes de Cupresáceas, sin embargo sí existían notables
diferencias entre las diferentes ciudades. La mayor preva-
lencia con Cupressus arizonica se produjo en Madrid
(55,91%) y la menor en la Coruña (1,28%) y Bilbao
(2,27%). Otras ciudades con elevada prevalencia a Cu-
pressus arizonica y resultados muy similares fueron: Bur-
gos (19,18%), Toledo (20%), Zaragoza (21,62%) y Barce-
lona (21,88%). Las ciudades con prevalencia más elevada
de sensibilización a Cupresáceas coinciden también con
las que presentan mayores concentraciones de dichos póle-
nes en su atmósfera.
En otros países europeos la prevalencia a Cupressa-
ceae en polínicos es similar, así en Montpellier (Francia)
18,5%21, Roma (Italia) 35,1%23, Tel-Aviv (Israel) 32%24,
Tirana (Albania) 4,5%25. En países africanos del mediterrá-
neo como Túnez 11,1%26 y en Marruecos 13,4%27.
En Japón la prevalencia a Cryptomeria japonica es
un 90% de las polinosis4. Muranaka ha demostrado que
27
A. Moral de Gregorio
28
Fig. 1. Concentraciones totales anuales de pólenes de Cupressaceae expresadas como granos por m3 de aire desde 1995 a 2002 en varias ciu-dades españolas (Comité de Aerobiología de la Sociedad Española de Alergología e Inmunología Clínica).
CUPRESSACEAE-TAXACEAE 1995
843
6313
802
30881419 1070 1181
2319676
2614 1987
Badajoz
Barcelona
Bilbao
Madrid
Málaga
Pamplona
Sevilla
Toledo
Valencia
Vitoria
Zaragoza
0
5000
10000
15000
20000
Granos/m 3 de aire totales
474
8586
1397 789
54643470
1791 1374
10384
3706 40281984
Badajoz
Barcelona
Bilbao
Ciudad Real
Madrid
Málaga
Salamanca
Sevilla
Toledo
Valencia
Vitoria
Zaragoza
0
5000
10000
15000
20000
CUPRESSACEAE-TAXACEAE 1996Granos/m 3 de aire totales
2460 2078
9946
756
4437
18212646
4484
10228
1190306
3453
14790
2383 2749
AvilaBadajoz
Barcelona
Bilbao
Burgos
Ciudad Real
La Coruña
ElcheM
adrid
Málaga
San Sebastian
Sevilla
Toledo
Vitoria
Zaragoza
0
5000
10000
15000
20000
CUPRESSACEAE-TAXACEAE 1997Granos/m 3 de aire totales
3820
348
6718
17653425
72
5685
877 2682010
94 3731270
17241
2828
AvilaBadajoz
Barcelona
Burgos
Ciudad Real
La Coruña
Madrid
Málaga
Oviedo
Salamanca
Santander
San Sebastian
Sevilla
Toledo
Zaragoza
0
5000
10000
15000
20000
CUPRESSACEAE-TAXACEAE 1998Granos/m 3 de aire totales
2354
5059
9941
2188955 124 452
10096
2799
428 164
13606
1857
AvilaBadajoz
Barcelona
Burgos
Ciudad Real
La Coruña
ElcheM
adrid
Oviedo
Pontevedra
Santander
Toledo
Zaragoza
0
5000
10000
15000
20000
CUPRESSACEAE-TAXACEAE 1999Granos/m 3 de aire totales
5329
2553
10222
825 9681947
5766 5794
23541344
526 256
5379
10872914
AvilaBadajoz
Barcelona
Bilbao
Ciudad Real
ElcheJaén
Madrid
Oviedo
Salamanca
San Sebastián
Santander
Toledo
Vitoria
Zaragoza
0
5000
10000
15000
20000
CUPRESSACEAE-TAXACEAE 2000Granos/m 3 de aire totales
897
3498
7377
671
32034146
819 227
6330
927 126 270 82 511
7991
18202690
AvilaBadajoz
Barcelona
Bilbao
Burgos
Ciudad Real
ElcheGijón
Madrid
Oviedo
Pontevedra
Salamanca
Santander
San Sebastian
Toledo
Vitoria
Zaragoza
0
5000
10000
15000
20000
CUPRESSACEAE-TAXACEAE 2001Granos/m 3 de aire totales
4611
187
7667,1
1017
5272
25124528
9417
1229 794 270 1093
11537
7552109
AvilaBadajoz
Barcelona
Bilbao
Burgos
Ciudad Real
ElcheM
adrid
Oviedo
Salamanca
Santander
San Sebastian
Toledo
Vitoria
Zaragoza
0
5000
10000
15000
20000
C U P R E S S A C E A E -TA XA C E A E 2 0 0 2Gra nos /m 3 de a ire tota le s
Aerobiología y polinosis por Cupresáceas en España
los japoneses que viven en zonas cercanas a autopistas,
tienen más posibilidades de sensibilizarse a Cryptomeria
japonica, probablemente en relación con partículas de los
motores diesel28.
TEST IN VIVO E IN VITRO
La obtención de extractos estandarizados para Cu-
pressaceae plantea problemas debido al escaso contenido
proteico (menos del 3%) y a una elevada cantidad de hi-
dratos de carbono (50-90%)29. Los pólenes utilizados de-
ben haberse recogido recientemente30. La dificultad para
encontrar sueros con IgE específica a títulos elevados di-
ficulta la realización de estudios de RAST de
inhibición21.
La sensibilidad de los métodos in vitro para detectar
IgE específica es superior para Juniperus ashei o sabinoi-
des y Cryptomeria japonica, con respecto a Cupressus ari-
zonica y Cupressus sempervirens31.
La determinación de basófilos activados midiendo
CD63 (91,2%) es más sensible que el ELISA (76%) para
la determinación de IgE in vitro a Cupressaceae32.
En la actualidad disponemos en España de los si-
guientes extractos de Cupressaceae para prick test sin es-
tandarizar: Cupressus sempervirens (Stallergens, ALK-
Abelló, CBF-Leti, Probelte), Cupressus arizonica
(Bial-Aristegui, IPI, DIATER), Juniperus spp. (Bial-Aris-
tegui, CBF-Leti), Thuja occidentalis (CBF-Leti, Inmuno-
tek), Taxus baccata (CBF-Leti, Inmunotek).
Para prick test ya se encuentran estandarizados: Cu-
pressus arizonica (ALK-Abelló, CBF-Leti, Inmunotek,
Probelte), Cupressus sempervirens (Inmunotek), Junipe-
rus oxycedrus (Inmunotek) y Juniperus ashei (Staller-
gens).
Se encuentran comercializados para la determinación
de IgE específica in vitro los siguientes árboles relaciona-
dos con las Cupressaceae: Cupressus arizonica (Pharma-
cia), Cupressus sempervirens (Pharmacia, Sanofi-Pasteur),
Cryptomeria japonica (Pharmacia), Juniperus sabinoides
(Pharmacia, Sanofi-Pasteur), Libocedrus decurrens (Phar-
macia), Juniperus oxycedrus (Sanofi-Pasteur) y Taxus bac-
cata (Sanofi-Pasteur).
En 42 pacientes alérgicos a pólenes de Cupresáceas
residentes en Toledo se realizaron prick test con extractos
comerciales de Juniperus ashei (Stallergens), Juniperus
oxycedrus (Inmunotek), Cupressus sempervirens (Staller-
gens, Inmunotek), Cupressus arizonica (Probelte, ALK-
Abello, Inmunotek y CBF-Leti), Thuja occidentales (In-
munotek) y Taxus baccata (Inmunotek). El diámetro
medio de las pápulas del prick test del género Juniperus
(Juniperus ashei, 8,98 mm y Juniperus oxcedrus, 8,43
mm) fue marcadamente superior a los del género Cupres-
sus (Cupressus arizonica, 7,04-6,71 mm y Cupressus sem-
pervirens 5,92-5,48 mm) y a los de Thuja occidentalis
(4,47 mm); mientras que para Taxus baccata (Taxaceae)
sólo aparecieron micropápulas.
En estos 42 pacientes con polinosis por Cupresáceas
en el estudio in vivo de la IgE específica a diferentes Cu-
presáceas por CAP Pharmacia se obtuvieron los siguientes
valores medios: Juniperus ashei (11,04 KU/l), Cupressus
sempervirens (3,61 KU/l), Cryptomeria japonica (2,95
KU/l), Cupressus arizonica (2,69 KU/l) y Libocedrus de-
currens (0,47 KU/l).
Estos resultados demuestran tanto in vivo como in
vitro la mayor actividad alérgenica de los extractos de Ju-
niperus ashei sobre los de Cupressus arizonica y Cupres-
sus sempervirens.
29
Tabla I. Días pico de pólenes de Cupressaceae en variasciudades españolas durante 8 años consecutivos (1995-2002) (Comité de Aerobiología de la Sociedad Española deAlergología e Inmunología Clínica)
Ciudad Pico (granos/m3) Día
Toledo 2660 19 Diciembre 1998
Ciudad Real 1602 13 Febrero 2001
Ávila 1256 4 Febrero 2000
Barcelona 1077 13 Febrero 1997
Madrid 1005 29 Enero 1999
Badajoz 890 9 Marzo 1999
Burgos 778 22 Marzo 2002
Sevilla 756 26 Febrero 1997
Oviedo 742 18 Febrero 1999
La Coruña 602 3 Febrero 1997
Salamanca 486 11 Enero 1997
Jaén 480 17 Febrero 2000
Vitoria 473 12 Febrero 1997
Zaragoza 387 16 Febrero 1998
Elche 336 24 Febrero 1997
Valencia 261 19 Febrero 1996
Málaga 259 4 Abril 1995
San Sebastián 226 1 Febrero 2002
Bilbao 156 5 Mayo 1996
Valladolid 132 24 Marzo 1997
Pamplona 119 8 Abril 1995
Pontevedra 105 24 Enero 1999
Santander 53 26 Febrero 2000
Gijón 25 2 Febrero 2002
A. Moral de Gregorio
30
Octubre
Noviembre
Diciembre
EneroFebrero
Marzo
Abril
0
100
200
300
400
500
600
TOLEDO 1995-2002Granos/m 3
Octubre
Noviembre
Diciembre
EneroFebrero
Marzo
Abril
0
100
200
300
400
500
CIUDAD REAL 1996-2002Granos/m 3
Octubre
Noviembre
Diciembre
EneroFebrero
Marzo
Abril
0
100
200
300
400
500
ZARAGOZA 1995-2002Granos/m 3
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BARCELONA 1995-2002Granos/m 3
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MADRID 1995-2002Granos/m 3
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ELCHE 1996-2002Granos/m 3
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BILBAO 1995-2002Granos/m 3
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BURGOS 1996-2002Granos/m 3
Fig. 2. Concentraciones medias diarias de pólenes de Cupressaceae entre 1995 y 2002 en varias ciudades españolas (Comité de Aerobiologíade la Sociedad Española de Alergología e Inmunología Clínica).
Aerobiología y polinosis por Cupresáceas en España
IDENTIFICACIÓN DE ALERGENOS
El primer alergeno que se identificó en las Cupressa-
ceae tenía 40 kD y fue reconocido como el alergeno mayor
del polen de Juniperus sabinoides o cedro de montaña33.
También se ha identificado un alergeno de Cupressus sem-
pervirens de 43 kD, denominado Cup s131. Posteriormente
Di Felice y colaboradores describieron un alergeno de 43
kD, Cup a 1 como el alergeno mayor de Cupressus arizo-
nica22. La mayoría de los alergenos tienen residuos glucosí-
dicos como se ha demostrado por unión a lectinas.
Barletta y colaboradores han detectado alergenos de
43, 36 y 70 kD en Cupressus arizonica, y en Cupressus
sempervirens varios alergenos entre 97 y 14 kD34.
En Juniperus oxycedrus se han detectado dos alerge-
nos, uno de 43 kD (Jun o 1) y otro de 17 kD (Jun o 2)7, 35.
Jun o 2 tiene estructura similar a las calmodulinas y inter-
viene en la fijación de calcio.
En la Cryptomeria japonica se ha detectado un aler-
geno de 40-45 kD, que se le denominó proteína básica de
Sugi (en japonés cedro del Japón) o Cry j 136 y otro de 37
kD o Cry j 237.
Por técnicas de biología molecular se han purificado,
identificado y clonado los alergenos de Juniperus ashei:
Jun a 1 (43kD)38, Jun a 2 (37kD)39 y Jun a 3 (30 kD)40.
Las moléculas de alergenos recombinantes obtenidas
en pólenes de Cupressaceae y Taxodiaceae se han clasifica-
do en 4 grupos en relación con su actividad biológica: Pec-
tatoliasas (rCup a 141, rCry j 142, rCha o 143 y rJun a 138), Po-
ligalacturonasas (rCry j 244 y rCha o 245), Proteínas relacio-
nadas con la patogénesis de las plantas (rJun a 346 y rCup a
3) de 23 kD y proteínas de unión al calcio (rJun o 2)32.
La pectina de la pared celular son substratos de las
pectatoliasas, que facilitan el crecimiento del tubo polínico
durante la polinización, por degradar el pistilo de las flo-
res femeninas47.
En estudios in vitro Juniperus ashei es 20 veces más
potente que Cupressus sempervirens y 11 veces más que
Cupressus arizonica, por presentar mayor contenido del
alergeno de 42 kD48.
INFLUENCIA DE LA POLUCIÓN AMBIENTALSOBRE LA POLINOSIS POR CUPRESÁCEAS
Cortegano y cols. encuentran que 63% de los alérgi-
cos a Cupressus arizonica lo son a Cup a 3, mientras que
a Cup a 1 lo son un 72%, por lo que Cup a 3 sería el se-
gundo alergeno principal de Cupressus arizonica, después
de Cup a 1. Cup a 3 es un hómologo de los miembros de
la familia de las proteínas relacionadas con la patogénesis
de las plantas (PR-5) y podría contribuir al aumento de la
alergenicidad del polen de Cupressus arizonica49. La ex-
presión de Cup a 3 es dependiente de de los niveles de
polución en el área donde el polen es recogido. Esto tiene
una incidencia directa sobre la alergenicidad del polen, co-
mo se ha demostrado por test cutáneos y RAST de inhibi-
ción (Allergy, pendiente de publicación).
Hay varios factores que podrían explicar el aumento
de la incidencia de polinosis por Cupresáceas, así el au-
mento de la exposición a especies de Cupresáceas debido
al aumento de su utilización en parques y jardines, pero
también por el potencial efecto adyuvante del incremento
de polución en el aire.
En un estudio realizado en Toledo con 75 pacientes
diagnosticados de polinosis por cupresáceas, valoramos la
diferente alergenicidad del polen de Cupressus arizonica
recogido durante el mes de febrero de 2002, en dos zonas
diferentes de Toledo. Una de ellas era una zona industrial
en las proximidades de una autovía con elevado tráfico y
la otra una zona residencial ajardinada con escasa polu-
ción. El promedio de edad de los pacientes fue 32,05 ±
9,18 años y con predominio del género femenino, 59% de
mujeres versus 41% de varones, además de determinar la
IgE total media de 182,4 ± 168,9 KU/l y no se apreció eo-
sinofilia periférica (246,24 ± 116,85 eosinófilos/mm3).
31
Tabla II. Prevalencia de sensibilización a Cupressaceae en elaño 2002-2003 en varias ciudades españolas (Comité deAerobiología de la Sociedad Española de Alergología eInmunología Clínica)
Ciudad Cupressus Cupressus Juniperus(nº pacientes) arizonica Sempervirens oxycedrus
Badajoz (191) 4,19 1,57 0,52
Barcelona (32) 21,88 18,75 18,75
Bilbao (44) 2,27 - -
Burgos (146) 19,18 11,64 15,07
Ciudad Real (175) 11,43 5,14 12
La Coruña (78) 1,28 1,28 1,28
Logroño (38) 13,16 10,53 10,53
Madrid (93) 55,91 40,86 49,46
Santander (56) 3,57 3,57 1,79
Sevilla (99) 4,04 2,02 5,05
Toledo (135) 20 15,56 22,22
Vitoria (67) 5,97 4,48 4,48
Zaragoza (148) 21,62 12,84 16,89
A. Moral de Gregorio
Los dos extractos de Cupressus arizonica empleados
se prepararon según la técnica descrita previamente22. Los
resultados obtenidos muestran que las pruebas cutáneas en
prick (mm de diámetro de la pápula) en los 75 pacientes
con los extractos de autovía en zona industrial y el de zo-
na residencial, eran estadísticamente diferentes. La media
de los valores por prick con extracto procedente de auto-
vía en zona industrial polucionada fue de 8,13 ± 1,02 mm,
mientras que el diámetro de la pápula en la zona residen-
cial no polucionada fue de 6,67 ± 0,78 mm, encontrándose
una diferencia significativa de p<0,0005.
En el immunoblotting de ambos extractos de Cupre-
ssus arizonica (autovía en zona industrial y zona residen-
cial) el antisuero de conejo anti Cup a 3, sólo reconocía
Cup a 3 en el extracto de polen recogido en autovía y no
en el de la zona residencial sin polución.
Después de incubar un pool de sueros de alérgicos a
Cupressus arizonica con discos de nitrocelulosa sensibiliza-
dos a Cupressus arizonica, se inhibieron con los extractos
de Cupressus arizonica a diferentes concentraciones recogi-
dos en autovía en zona industrial y en zona residencial ajar-
dinada no polucionada. En concordancia con los resultados
de las pruebas cutáneas, el RAST de inhibición demostraba
una actividad alergénica 5 veces superior en el extracto de
autovía en zona polucionada que en el de zona residencial.
Las proteínas relacionadas con la patogénesis de las
plantas, son producidas en respuesta a situaciones de estrés
como infecciones por virus, hongos, bacterias, ozono, polu-
ción, sequía, heladas. Así, árboles de la misma especie en
diferentes localizaciones expresan niveles variables de pro-
teínas relacionadas con la patogénesis, como Cup a 3.
REACTIVIDAD CRUZADA
Se ha demostrado reactividad cruzada de Cupressus
sempervirens con varios extractos de Cupressaceae y otras
especies de familias relacionadas, por medio de ELISA de
inhibición e inhibición de inmunoelectrotransferencia de
SDS-PAGE. Las especies en las que se encontró reactivi-
dad cruzada con Cupressus sempervirens han sido: Cu-
pressus arizonica (Cupressaceae)22, Juniperus oxycedrus
(Cupressaceae)34, Callitris glaucophyla (Cupressaceae) pi-
no ciprés blanco o de Murray50, Podocarpus gracilior (Po-
docarpaceae)51 y Cryptomeria japonica (Taxodiaceae)52.
Se ha demostrado recientemente que el alergeno ma-
yor de Cupressus arizonica (Cup a 1) pierde capacidad de
unión a la IgE, después de eliminar residuos glicosilados
con periodato. Estos residuos glicosilados tienen una es-
tructura similar a la bromelina de la piña y a la fosfolipasa
de Apis mellifera, pudiendo tratarse de β 1-2 xilosa, α 1-3
fucosa y α 1-6 fucosa, que explicaría la reactividad cruza-
da con especies no relacionadas53.
Barletta demuestra que la reactividad cruzada entre
Cupressus sempervirens y Cupressus arizonica radica en
los epitopos glúcidos y proteicos al utilizar anticuerpos
monoclonales sensibles a periodato54.
Yashueda encuentra reactividad cruzada entre Cryp-
tomeria japonica y Chamaecyparis obtusa o ciprés del Ja-
pón (Cupressaceae)36.
Con un anticuerpo monoclonal frente a Cryptomeria
japonica, se ha demostrado reactividad cruzada con Juni-
perus ashei, demostrando la reactividad cruzada entre Cu-
pressaceae y Taxodiaceae38.
Las bandas 40 y 74 kd se encuentran en todas las
Cupressaceae (42 kD en Cupressus sempervirens y 43 kD
en Cupressus arizonica) y Taxodiaceae (43-46 de Crypto-
meria japonica), pero la banda de 36 kD no se encuentra
en todas las Cupressaceae, pero probablemente coincide
con la de 37 kD de Cryptomeria japonica, Cry j 2.
La reactividad cruzada entre diferentes familias de
plantas podría deberse a la conservación de la actividad
pectatoliasa. Las pectatoliasas hidrolizan también estructu-
ras de mamíferos, como el glucocalix, que se encuentra en
la superficie luminal de las células epiteliales. Esto favore-
cería la penetración de otras proteínas del polen, estimu-
lando la alergenicidad.
Cup a 1 tiene un elevado grado de identidad con Jun
a 1(91%), Cha o 1(81%), Cry j 1(75%), pero también con
otras pectatoliasas (46-51%): Arabidopsis thaliana, Zinnia
elegans, Fragaria amanassa, Medicago sativa.
En un estudio de Ariano con 93 pacientes sensibili-
zados a Cupresáceas, 90,1% estaban sensibilizados a
Cryptomeria japonica, 88,8% a Cupressus arizonica,
87,6% a Juniperus oxycedrus, 76,5% a Cupressus semper-
virens, 76,5% a Chamaecyparis obtusa, 65,4% a Thuja
orientalis y 61,7% a Taxus baccata55.
Por tanto existe reactividad cruzada entre las diferen-
tes especies de los géneros Cupressus y Juniperus, y tam-
bien entre los dos géneros. Esta reactividad se extiende a
familias relacionadas: Podocarpaceae y Taxodiaceae.
No parece existir reactividad cruzada de las Cupre-
ssaceae con Taxus baccata, al pertenecer este al orden Ta-
xales y no al Coniferales. Tampoco existe reactividad cru-
zada con la familia Pinaceae (Pinus, Abies, Cedrus, Larix
y Picea), aunque todas pertenecen al orden Coniferales.
32
Aerobiología y polinosis por Cupresáceas en España
INMUNOTERAPIA CON CUPRESÁCEAS
Existen pocos datos sobre la eficacia de inmunotera-
pia con pólenes de Cupresáceas, debido a la escasa calidad
de los extractos utilizados hasta hace pocos años56.
Uno de los primeros estudios con inmunoterapia
frente a Cupressaceae fue el de Miller con Juniperus as-
hei a doble ciego57. Parker demostró elevación de IgG1 e
IgG4 específica con extracto hiposensibilizante de Junipe-
rus ashei, además de una disminución significativa de la
respuesta cutánea tardía y de la puntuación de síntomas58.
Posteriormente Ariano utiliza una mezcla de extrac-
tos conteniendo Cupressus sempervirens y Cryptomeria
japonica59. El grupo tratado presentaba resultados signifi-
cativamente mejores en cuanto a la puntuación de sínto-
mas, consumo de medicamentos, pruebas cutáneas, deter-
minación de IgE específica in vitro y test de provocación
nasal, que el grupo con placebo. No se observaron efectos
adversos. En la actualidad han incorporado a la mezcla Ju-
niperus oxycedrus con buenos resultados.
Más recientemente Ariano demostró una mejoría sig-
nificativa de los síntomas de alergia y una disminución de
la puntuación de consumo de fármacos y de la reactividad
nasal específica a alergeno; tras un año de tratamiento con
inmunoterapia sublingual con extracto de polen de Cu-
pressus arizonica60.
SOLUCIONES A LAS POLINOSIS PORCUPRESÁCEAS
Las Cupressaceae se utilizan como árboles ornamen-
tales en parques y jardines, para evitar la erosión del suelo
y para proteger otros cultivos del viento. También se han
utilizado en reforestaciones sobre todo Cupressus arizoni-
ca.
El aumento de la prevalencia de las alergias respira-
torias producidas por Cupressaceae se ha intentado expli-
car de diferentes modos. Panzani sugería que el silicato
alumínico de la polución actuaría como adyuvante14, mien-
tras que otros estudios implican a las partículas de los mo-
tores diesel28. Sin embargo, para otros se debería al au-
mento de los niveles de pólenes por el aumento de la
plantación de Cupressaceae21, o por modificación de las
glucoproteínas del polen por estrés, o simplemente la me-
jor calidad de los test diagnósticos. Lo más probable es
que se deba a una sumación de los factores anteriores.
En estudios experimentales se ha comprobado que
Cupressus sempervirens y Cupressus arizonica son capa-
ces de producir pólenes a los cinco años de estar planta-
dos, mientras que otras Cupressaceae como: Cupressus
drupeziana, Cupressus atlántica, Cupressus torulosa y Cu-
pressocyparis leylandii lo hacen a los 10 años y con me-
nor cantidad de pólenes61. Sería más aconsejable plantar
estas últimas especies, aunque son más caras y estaría jus-
tificado la selección de clones de especies que produzcan
menos pólenes.
Un hongo llamado Seiridiun cardinale parasita las
Cupressaceae, produciendo el chancro cortical, que au-
menta la producción de polen en árboles parasitados. Ac-
tualmente se está trabajando para conseguir plantas resis-
tentes a este hongo y que a la vez produzcan poca
cantidad de polen y durante un corto periodo de tiempo62.
Otra opción sería conseguir clones por ingeniería ge-
nética que produzcan esterilización de las especies mascu-
linas, seguido por propagación vegetativa.
En futuras plantaciones de bosques y jardines se de-
bería contar con un grupo de profesionales, en el que ten-
drían que estar incluidos los alergólogos, para aconsejar
las plantas que no se deberían utilizar, como sería el caso
de las Cupressaceae. Con esto se evitarían errores como
los ocurridos en Bari, Senas o en Japón, donde se planta-
ron millones de Cupressaceae. Las ventajas económicas
obtenidas con estas plantaciones han sido netamente supe-
radas por el sufrimiento de miles de personas y sus gastos
médicos. Los bosques no sólo deben ser una fuente de
madera o un lugar de recreo.
El impacto ambiental de las Cupressaceae es notorio
y se ha convertido en unos de los aeroalergenos más im-
portante en los últimos años, por lo que sería deseable la
existencia de legislación al respecto. Los pólenes alergéni-
cos de plantas salvajes (gramíneas, ambrosía, parietaria,
etc), no pueden ser controlados, pero sí los de especies
plantadas como las Cupressaceae.
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Servicio de Inmunología.Fundación Jiménez Díaz.Madrid. *Unidad de Alergia.Hospital Virgen del Valle.Toledo.
Alergenos de las Cupresáceas
INTRODUCCIÓN
La Familia de las Cupresáceas se encuentra ampliamente extendida por di-
versos lugares de la geografía de Europa (climas del tipo mediterráneo), América e
incluso África, Asia y Australia. La temporada de su polinización hace que esta fa-
milia sea considerada como la responsable de los llamados catarros invernales de
origen alérgico (conjuntivitis y asma). Las Cupresáceas son utilizadas como barre-
ras para el ruido y el viento en autovías y en parques y jardines con motivos orna-
mentales, lo que hace que la frecuencia de la sensibilización sea cada vez mayor
debido al incremento de la carga antigénica. La riqueza en esencias y resinas per-
mite la utilización de algunas de estas plantas como medicinales, con fines indus-
triales o para la fabricación de licores1, 2.
Según datos del Comité de Aerobiología de la Sociedad Española de Alergia e
Inmunología Clínica es en Toledo donde existe la mayor concentración de pólenes
de Cupresáceas y donde su polinización está más extendida en el tiempo, seguida de
Madrid y Barcelona. La polinización se realiza a través del aire, siendo los pólenes
de forma esferoidal sin aperturas y con un gran contenido en hidratos de carbono, por
lo que es particularmente difícil la extracción de las proteínas de polen para su análi-
sis o utilización en diagnóstico y tratamiento.
C. Lahoz, et al
Dentro de la familia de las Cupresáceas el género
Cupressus es el más abundante distinguiéndose en nuestro
entorno las especies arizonica (CA), sempervirens (CS) y
lusitanica (Fig. 1).
Otros miembros importantes de esta misma familia
desde el punto de vista alergénico son los correspondien-
tes al género Juniperus siendo las especies más importan-
tes el ashei que es el cedro de montaña y el oxicedrus. En
Japón existe el género Chamaecyparis cuya especie más
conocida es la obtusa. Por último, en la familia de las Ta-
xodiáceas se distingue la Cryptomeria japonica.
Dado que la polinización de alguna de estas varieda-
des se solapa parcialmente en el tiempo y debido a que
existe una gran reactividad cruzada entre ellas, la presen-
cia de síntomas es continua durante varios meses, con apa-
rición de picos fuera de la estación. La prevalencia de
pruebas cutáneas positivas para CA y CS es muy variable
dentro de áreas que tienen condiciones climáticas simila-
res y contajes muy parecidos de ambos pólenes. La causa
de ello puede ser a la baja calidad de los extractos por la
difícil extracción, lo que hace que varíe el contenido pro-
teico de los mismos3-5.
El cedro de montaña o Juniperus ashei (JA) tiene una
alta reactividad cruzada con CA y CS, esta variedad no
presenta tantas dificultades en la obtención de los extractos
alergénicos por lo que ha sido utilizada en muchas ocasio-
nes como estándar para otras variedades de Cupresáceas y
para comparar unas con otras. La reactividad cruzada no
sólo es debida a identidades en determinantes proteicos, si-
no que los carbohidratos tienen un importante papel dado
el alto contenido que tienen los respectivos pólenes6.
En el esquema siguiente se puede observar un resu-
men de la taxonomía de la familia las Cupresáceas. Otras
familias que también pertenecen a las Coniferales son las
Taxodiáceas (Criptomeria) las pináceas (pino y cedro) que
también pueden ser alergénicas7.
El antígeno descrito por Di Felice et al.8 como más
reactivo en CA ha sido clonado en nuestro laboratorio y
hoy se conoce su secuencia y actividad (Cup a 1). Este
antígeno mayor lo hemos expresado en E. coli como una
proteína de fusión9. La Tabla I muestra las homologías
entre Cup a 1 y otros antígenos relacionados.
En un estudio realizado en nuestro laboratorio por
Ascensión Mínguez en colaboración con el Servicio de
Alergia de la Clínica Puerta de Hierro, se encontró por
inmunodetección que el 100% de los pacientes positivos
para CA (55% de alérgicos a Cupresáceas), reconocen
Cup a 1. Los datos están resumidos en la Tabla II.
En la figura 2 se observa el extracto crudo de CA y
rCup a 1 o alergeno mayor recombinante que debido a que
está expresado en E. coli, aparece con un peso molecular
algo menor que en la forma nativa del extracto crudo
(43kDa), debido a que la forma recombinante así expresa-
da carece de carbohidrato (37kDa).
36
CHAMAECYPARIS JUNIPERUS
CUPRESÁCEAS
CALITRIS CUPRESSUS THUJA
Tabla I. Porcentajes de homología entre las secuencias deaminoácidos de los alergenos Cup a 1 y otras Cupresáceas recombinantes
Cry j 1 75
Cha o 1 81
Jun a 1 91
Jun v 1 n.d.
Cup a 1 -
Tabla II.
Pacientes CLÍNICA Prick Test IgE Esp IDT143 RC ASMA CA Otros(+) CA Otros(+) CA Otros(+)
48% 52% 100% 68% 88% 66% 55% 45%RC: Rinocinjuntivitis; CA: Cupressus arizonica
(+) otras especies de cupresáceas: Cupressus sempervirens y Juniperus oxicedrus
IDT: inmunodetección
Fig. 1. Cupressus arizonica.
Alergenos de las Cupresáceas
Recientemente ha sido clonado el antígeno mayor de
Cupressus sempervirens Cup s 1, que como era predecible
tiene una alta homología con Cup a 1.
La expresión de un antígeno de las mismas caracte-
rísticas que Cup a 1 ha sido descrito por I. Ansótegui y G.
Gastemiza7 en el polen del pino. En la Fig.3 (cedida por
G. Gastemiza) se observa por inmunodetección con sueros
de enfermos alérgicos a polen de pino, que existe una pro-
teína de 43kDa. La proteína que corresponde a su homólo-
go Cup a 1, está indicada con una flecha en la figura.
37
Fig. 2.
Cup a 1 nativo
rCup a 1
SDS-PAGE
Inmunodetección
Fig. 3.
43kDa
1gat D
aat N
ccc P
atc I
gac D
agc S
tgc C
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gat D
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26gtg V
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gat D
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301gat D
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aca T
caa Q
aat N
gct A
gga G
gtt V
gta V
gca A
taa *
Fig. 4. Secuencia de nucleótidos y secuencia de aminoácidos deducida de Cup a 1.
Sitios activo pectato-liasa
Epitopo TGlicosilación
C. Lahoz, et al
La secuencia de nucleótidos y de aminoácidos de
Cup a 1 se muestra en la Fig. 4. Se indican además los si-
tios de actividad pectato liasa, los posibles epítopos T y
los sitios de glicosilación.
Se ha descrito un interesante dato relacionado con
las Cupresáceas que corresponde a Jun a 310 que es un
alergeno que se encuadra dentro del grupo de las proteínas
relacionadas con la patogénesis (PR) y de hecho, su expre-
sión varía de unos años a otros en el extracto completo,
dependiendo de las condiciones climáticas.
En nuestro laboratorio se ha estudiado si en Cupres-
sus arizonica puede existir ese antígeno relacionado con la
patogénesis. Para ello, utilizando los cebadores descritos
para Jun a 3 hemos clonado la proteína Cup a 3, que efec-
tivamente y como sospechábamos se expresa en condicio-
nes de estrés de la planta11.
Existen 14 familias de PR. Dentro de la familia PR-5
se encuentran alergenos con un dominio homólogo a la
taumatina y otro dominio con actividad kinasa (Fig. 5)12.
La proteína clonada la hemos descrito como Cup a 3
y ha sido registrada en el Banco de Genes como
AJ294411. Su peso molecular teórico es de 21 kDa y su
punto isoeléctrico pH 4.82. Al contrario de la Cup a 1 no
tiene sitios de glicosilación, pero sí tiene diez sitios poten-
ciales de fosforilación (Ser, Thr, Tyr).
En la Fig. 6 se puede observar el resultado (PAGE-
SDS), obtenido con la transformación de bacterias E.coli
con pGEX-5X-1-Cup a 3 y la expresión como proteína de
fusión "GST-Cup a 3". El corte de la proteína de fusión da
lugar a la proteína recombinante Cup a 3 de 21kDa11.
Esta proteína es en un 96% homóloga con Jun a 3
como era de esperar al ser clonada utilizando los cebado-
res de Jun a 3.
Lo más interesante es que hemos demostrado que la
Cup a 3 se expresa en condiciones de alta polución atmos-
férica y lo que es más peculiar es que el polen obtenido en
esas condiciones es más alergénico que el obtenido en ca-
sos de condiciones ideales carentes de polución.
El efecto de la polución sobre la actividad alergénica
es variado y va desde un efecto propiamente adyuvante
aumentando la alergenicidad de los antígenos, al aumento
38
Dom.taumatina Dom. kinasa
Fig. 5.
Fig. 6.
GST (32kDa)
Cup a 3 (21 kDa)
96%
95%
95%
93%
90%
89%
89%
Pyrus pyrifolia mRNA forthaumatin-like proteinprecursor
Atriplex nummulariaosmotin-like protein (A9)
Vitis vinifera Thaumatin-like protein VVTL1 mRNA
Vitis vinifera Thaumatin-like protein gene
Juniperus virginianapollen allergen 3-2-allergen
Juniperus virginianapollen allergen 3-1 mNA
Fig. 7. Porcentajes de homología con varias proteínas relacionadas con lapatogénesis en las que no todas tienen actividad alergénica reconocida.
RAST Inhibición
0.01 0.1 1 10 1000
20
40
60
80
100
C.arizonica AutoviaJuniperus oxicedrus
[proteína] µg/mL
%Inhibición
Fig. 8.
Alergia a pólenes de Quenopodiáceas
39
de su expresión y a la irritación mucosa producida por la
propia polución que altera la permeabilidad de las muco-
sas y condiciona la respuesta inmunológica13-15.
La Fig. 8 muestra el RAST inhibición, cedido por
M. Lombardero, (ALK-Abelló), que se realizó utilizando
extracto de polen recogido en una "Autovía" (poluciona-
do), en un jardín "Hospital" (círculos abiertos) y un ex-
tracto comercial de Juniperus oxicedrus. Claramente, el
extracto "polucionado" tiene más actividad que el resto y
es precisamente este el que contiene Cup a 3.
Como conclusión, debemos deducir la importancia
del conocimiento de la composición de los extractos utili-
zados en el diagnóstico y tratamiento, pues no sólo deben
estar adecuadamente estandarizados, sino que su composi-
ción en determinados componentes antigénicos es funda-
mental y depende entre otros factores muy directamente de
las condiciones ambientales de los cultivares. Todo ello in-
fluye en la actividad final del extracto y es precisamente el
clonaje molecular de los diversos antígenos contenidos en
el extracto, la clave para un mayor conocimiento de los
mismos.
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J. Pola Pola
Servicio de Alergia. PoliclínicaSagasta. Zaragoza.
Alergia a pólenes de Quenopodiáceas
INTRODUCCIÓN
Los pólenes procedentes de la familia de las Quenopodiáceas han venido
considerándose tradicionalmente como causantes de alergia respiratoria. En
1933, Lamsom y Watry describieron los primeros casos de alergia a dichos pó-
lenes en Arizona1.
En la actualidad, y en lo referente a la península ibérica, podemos decir
que se consideran como una de las principales fuentes de sensibilización a póle-
nes en numerosas ciudades de nuestro país, existiendo además una correlación
J. Pola Pola
entre los recuentos totales y la prevalencia de tests cutáne-
os positivos2.
Las Quenopodiáceas son plantas fundamentalmente
anemófilas con un amplio periodo de polinización que va
desde abril a octubre con algunas variaciones regionales
dependientes de las condiciones climáticas.
CLASIFICACIÓN BOTÁNICA
La familia de las Quenopodiáceas-Amarantáceas per-
tenece al orden de las Centrospermas, que posee más de
8000 especies (Tabla I).
Se caracterizan por tener flores pequeñas, un ovario
unilocular con un rudimento seminal en su base y fruto
nuciforme.
Se considera que esta familia, con alrededor de
2.500 especies, tiene 2 subfamilias: Chenopodiodeas y
40
Tabla I. Clasificación botánica de las Quenopodiáceas-Amarantáceas
Familia Subfamilia Género
Chenopodioidae Chenopodium album
Atriplex
Kochia
Beta
Chenopodiaceae Bassia
Salicornia
Salsoloideae Salsola Kali
Salsola Vermiculata
Halogeton
Amaranthaceae Amarantus retroflexus
Archyranthes
Alternanthera
Fig. 1. Chenopodium album.
Fig. 2. Chenopodium album-Detalle de su flor.
Fig. 3. Salsola kali.
Alergia a pólenes de Quenopodiáceas
Salsoloideas. Dentro de estas, las especies más relevantes
desde el punto de vista alergológico son el Chenopodium
album (Figs. 1 y 2) y Salsola kali (Figs. 3 y 4). Hay otras
plantas pertenecientes a esta familia sin apenas importan-
cia alergológica pero sí económica como son la Beta (re-
molacha azucarera), remolacha roja, espinacas y acelgas.
AEROBIOLOGÍA
Como la mayoría de las plantas con flores poco
atractivas, las Quenopodiáceas son anemófilas (poliniza-
das mayoritariamente a traves del viento). La morfología
del polen de las Quenopodiáceas (indistinguible a la visión
óptica de las Amarantáceas) es muy característica. Es un
polen pantoporado (40-60 poros), es decir toda su superfi-
cie (microgranulada) está cubierta de poros dando una
imagen típica de "pelota de golf" (Fig. 5). Mide entre 15-
30 micras, aunque el de algunas especies como la Beta
puede llegar a medir menos de 10 micras.
El periodo de polinización es muy amplio aunque los
picos se obtienen en los meses de agosto y septiembre.
En algunas ciudades como Elche pueden llegar a re-
presentar hasta el 18% de los pólenes recogidos, aunque la
media se sitúa en torno al 4-5%3-13.
Los días pico se suelen ver durante la segunda quin-
cena de agosto y la primera de septiembre con una media
en los últimos años de 48 granos m3 (máximo 180 gra-
mos/m3 recogidos en Elche el 7-9-96).
Así pues, si los comparamos con los pólenes de ár-
boles y gramíneas, las Quenopodiáceas tienen una presen-
cia aerobiológica bastante reducida.
En las figuras 6 y 7 podemos ver los recuentos obte-
nidos en las estaciones más importantes de la Red de Ae-
robiología de la SEAIC durante los últimos años.
41
Fig. 4. Salsola kali-Detalle de la flor.
Fig. 5. Polen de Quenopodiáceas al microscopio óptico y electrónico.
Marzo Abril Mayo Junio Julio Agos. Sept. Oct. Nov .0
10
20
30
40
50
60
Gr/ m3
Ciudad Real
Polinización de las Chenopodiáceas I
0
10
20
30
40
50
60
0
10
20
30
40
50
60
0
10
20
30
40
50
60
Madrid
Elche
Toledo
Fig. 6. Polinización de las Quenopodiáceas en varias ciudades(medias de 10 días). Periodo 1995-2002.
Marzo Abril Mayo Junio Julio Agos. Sept. Oct. Nov .0
1 0
2 0
3 0
4 0
5 0
6 0
Gr/ m3
Bilbao
Polinización de las Chenopodiáceas II
0
1 0
2 0
3 0
4 0
5 0
6 0
0
1 0
2 0
3 0
4 0
5 0
6 0
0
1 0
2 0
3 0
4 0
5 0
6 0
Zaragoza
M‡laga
Sevilla
Fig. 7. Polinización de las Quenopodiáceas en varias ciudades(medias de 10 días). Periodo 1995-2002.
J. Pola Pola
Un aspecto a destacar de estas plantas y sobre todo
de la Salsola kali es su gran resistencia a la sequía. De he-
cho en España hay 2 zonas donde esta planta es predomi-
nante: Valle del Ebro y el área de confluencia entre Alme-
ria, Albacete y Murcia. Estas son áreas semidesérticas con
una pluviosidad de alrededor de 300 litros anuales.
Debido a esta gran resistencia, las diferencias objeti-
vadas en los contajes de pólenes en un año lluvioso res-
pecto a otro seco no superan el 30%.
En Kuwait, país desértico con un índice de pluviosi-
dad menor de 150 litros al año y una temperatura media
durante el verano de 42ºC , el polen de Quenopodiáceas es
uno de los aeroalergenos más relevantes14.
COMPONENTES ALERGÉNICOS
La experiencia clínica y la positividad que objetiva-
mos en las pruebas cutáneas nos hacen pensar en la exis-
tencia de una reactividad cruzada importante entre, al me-
nos, las 2 especies más relevantes: Chenopodium album y
Salsola kali.
Entre pacientes monosensibilizados a polen de Que-
nopodiáceas se objetivó una concordancia entre ambas es-
pecies del 96,4% en test cutáneos y del 75% en RAST15.
Otros estudios nos confirman dicha reactividad cru-
zada en test cutáneos que oscila entre del 70-90%, que se
hace extensiva a las Amarantáceas5, 12, 13, 16.
La Dra. De La Hoz.15, tras la separación de los com-
ponentes proteicos de un extracto de Salsola kali identifi-
có 28 bandas diferentes de polipéptidos con un peso mole-
cular entre 13 y 106 kDa. A pesar de que el patrón de
reconocimiento para IgE es muy heterogéneo, un 64% de
los pacientes fijaron IgE específica frente a una banda de
54 kDa y un 44% frente a otra de 36,6 Kd.
Lombardero16, encuentra bandas que fijan IgE específi-
ca entre 14 Kd y 35 kDa. No obstante los patrones de las di-
ferentes Quenopodiáceas son diferentes, sugiriendo que los
determinantes alergénicos comunes están presentes en ban-
das proteicas con diferente peso molecular o punto isoeléc-
trico.
En 1981, Shafiee y cols17 aislaron en el polen de Sal-
sola Kali 2 glicoproteínas (RT1y RT2) de 39 kDa y 42
kDa, respectivamente. Cada uno de los mismos posee una
única cadena polipeptídica, concluyendo después de múlti-
ples estudios inmunológicos que ambas proteínas tienen la
misma masa y potencia alergénica, en definitiva, que am-
bas son inmunológicamente idénticas. Posteriormente los
Dres. Carnés y Fdez-Caldas18 aislaron el alergeno predomi-
nante de Salsola Kali: Sal k 1 (inscrito con ese nombre en
el banco de alergenos), proteína de 43 kDa con al menos 6
isoformas sin aparente homología con otras proteínas des-
critas.
En relación al polen de Chenopodium, el grupo de la
Dra. Rodríguez del departamento de Bioquímica y Biolo-
gía Molecular de la Facultad de Ciencias Químicas de la
Universidad Complutense, aisló en 200118 el Che a 1 (antí-
geno relevante de Chenopodium album), glicoproteína de
18,8 kDa y 143 residuos aminoácidos, cuya secuencia
muestra una identidad del 27-45% con Ole e 1. A pesar de
ello encuentran escasa reactividad cruzada in vitro entre
los mismos, probablemente debido a diferencias significa-
tivas en la secuencia polipeptídica.
ASPECTOS CLÍNICOS
Los pólenes de Quenopodiáceas, y a pesar de las re-
lativamente pequeñas cantidades recogidas en los estudios
aerobiológicos, son la primera causa de sensibilización a
polen en ciudades como Elche, la tercera en Zaragoza, To-
42
Tabla II. Test cutáneos y recuentos de quenopodiáceas media1995-2002. Estudio multicéntrico 2002
% Pólenes PCP* Total granosElche 18,7% 54% 3.235
Toledo 5,8% 49% 1.783
Zaragoza 5,4% 42% 1.411
Ciudad Real 5,8% 43% 884
Sevilla 2,9% 21% 598
Madrid 1,8% 35% 470
Barcelona 1,2% 12% 589
Badajoz 1% 34% 209
Media 5,32% 36,25% 1.117
Correlación significativa entre los recuentos totales y la prevalencia de PCP (Spearman rs:0,81, P<0,05). *PCP: Prueba Cutánea Positiva.
Tabla III. Perfil clínico de los pacientes sensibilizados aQuenopodiáceas
Quenopodiáceas GramíneasSexo V 42% H 58% V 54% H 46%
Edad media 29 años 24 años
Monosensibilizados 2% 24%
Rinitis 98% 99%
Asma 19% 25%
Nº total de pacientes: Quenopodiáceas 1212. Gramíneas 3996.
Alergia a pólenes de Quenopodiáceas
ledo, Jaén, Bilbao y Ciudad Real y la cuarta en Badajoz,
Burgos, y Sevilla según el último estudio multicéntrico
llevado a cabo en 2002-2003 por el Comité de Aerobiolo-
gía de la SEAIC (pendiente de ser publicado).
Si nos fijamos en que tan sólo aportan alrededor del
5% del total de pólenes recogidos y que la media de los
"picos" es de alrededor de 50 granos/m3 podemos suponer
que son pólenes bastante "agresivos".
Los resultados preliminares del estudio de umbrales
de reactividad que estamos llevando a cabo dentro del Co-
mité de Aerobiología nos hacen sospechar que los pacien-
tes alérgicos a polen de Quenopodiáceas se reactivan a
partir de 10-15 granos/m3.
En la mayoría de las regiones, la época de poliniza-
ción de dichas plantas no coincide con la de ninguna otra,
pudiendo distinguirse perfectamente la sintomatología atri-
buible a dichos pólenes.
En la Tabla II se muestran los resultados del estudio
multicéntrico, llevado a cabo por el comité de aerobiolo-
gía, en relación al porcentaje de pacientes polínicos sensi-
bilizados a Quenopodiáceas y su correlación con la canti-
dad de pólenes obtenidos en cada una de las ciudades.
El perfil clínico de nuestros pacientes sensibilizados
frente a Quenopodiáceas (Policlínica Sagasta-Zaragoza)
difiere ligeramente de los alérgicos a pólenes de Gramí-
neas como muestra la Tabla III.
INMUNOTERAPIA
El primer trabajo realizado sobre inmunoterapia con
pólenes de Quenopodiáceas se lo debemos a la Dra. Belen
De La Hoz.
Utilizó inmunoterapia en un grupo de 25 pacientes
monosensibilizados (15 pacientes grupo activo y 10 pa-
cientes grupo control) con un extracto estandarizado bioló-
gicamente (dosis máxima 3 HEP) de Salsola kali.
Fundamentalmente concluye que la inmunoterapia
con Salsola Kali:
• Tiene eficacia clínica en el tratamiento de la rino-
conjuntivitis.
• Disminuye la sensibilización cutánea, conjuntival y
nasal frente a dichos pólenes, con diferencias estadística-
mente significativas frente al grupo placebo.
• Tiene un efecto protector del incremento postesta-
cional de la HBI.
• Produce cambios cualitativos en la respuesta de an-
ticuerpos específicos IgE e IgG.
• Disminuye de forma significativa la sensibilidad
cutánea frente al polen de Chenopodium album.
Posteriormente en 2000-2001 se realizó un nuevo es-
tudio con 44 pacientes en HCU de Zaragoza20 con un ex-
tracto de polen de Salsola kali (Alergoide despigmentado,
polimerizado y absorbido en hidróxido de aluminio), com-
parado con placebo, en pacientes monosensibilizados du-
rante 1 año. En dicho trabajo también se demuestra una
reducción significativa de los síntomas de rinoconjuntivitis
y asma respecto a placebo, una reducción significativa de
días con síntomas intensos, un aumento de los días libres
de síntomas y una mejoría en los cuestionarios de calidad
de vida en rinoconjuntivitis.
CONCLUSIONES
• La polinización máxima de las Quenopodiáceas
se extiende por toda la primavera y verano. El pico se
sitúa durante la segunda quincena de agosto y la primera
de septiembre con una media de alrededor de 50 gra-
nos/m3.
• Las Quenopodiáceas son plantas muy resistentes a
la sequía y pueden aportar a la atmósfera cantidades relati-
vamente importantes de pólenes en los años secos.
• Los pólenes de Quenopodiaceas son bastante "agre-
sivos" ya que con tan sólo un 5% de presencia atmosférica
generan sensibilización en el 30-40% de los polínicos con
un umbral de reactividad en torno a 10-15 granos/m3.
• Se objetiva una correlación significativa entre los
recuentos de Quenopodiáceas y la prevalencia de pruebas
cutáneas positivas.
• Los pacientes con alergia a Quenopodiáceas suelen
ser polisensibilizados, y en comparación con los alérgicos
a gramíneas, predomina el sexo femenino, la edad media
es más alta y tienen un porcentaje menor de asma.
• Existe una muy importante reactividad cruzada (in
vivo e in vitro) entre los pólenes de las Quenopodiáceas-
Amarantáceas. Los alergenos más importantes son Sal k 1
para Salsola kali de 43 kDa y Che a 1 para Chenopodium
album de 18,8 kDa.
• En los estudios existentes controlados con placebo
y realizados en pacientes monosensibilizados, la inmuno-
terapia con un extracto de Salsola kali se mostró eficaz en
la mayoría de los parámetros estudiados.
• A la vista de todo esto, podemos concluir que los
pólenes de Quenopodiáceas constituyen una fuente alergé-
nica muy a tener en cuenta en la península ibérica.
43
J. Pola Pola
44
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