micropropagación e injerto in vitro de pistacho

7/24/2019 Micropropagacin e Injerto in Vitro de Pistacho

1/11

Micropropagacineinjertoinvitrodepistacho

E.Garca;P.Lorente;J.A.Marn;A.Arbeloa;P.Andreu

EstacinExperimental

de

Aula

Dei

CSIC

[email protected]

Resumen

Elcultivodelpistachero(P.veraL.)hadespertadoungranintersenzonasdeEspaaenlas

quecultivostradicionales,comolavidoelolivo,hanperdidorentabilidad.Sinembargo,su

expansinestfrenadaporladificultaddepropagacinporinjertodelasvariedadesde

intersyla

seleccin

de

un

patrn

clonal

propagado

vegetativamente.

La

aplicacin

de

las

tcnicasdecultivoinvitroalasespeciesdePistaciapermitir,ademsdelapropagacin

clonalymasiva,profundizarenelestudiodelosproblemasqueafectanalinjertoaldisponer

deunmodeloexperimentaleficazyflexiblequepermitaelseguimientodelinjertodurantelas

etapasiniciales,dondeesmsprobablelaaparicindesntomasdefaltadeafinidadentrela

variedadyelpatrnquellevenalafaltadeprendimientodelinjerto. Seiniciaroncultivosde

P.

veraapartirdeexplantosnodalesydeP.terebinthusapartirdesemillasgerminadasin

vitro.Lamultiplicacininvitrodeambasespeciesseaproxima2brotesporbrotecada3

semanas.SeobtuvounaltoenraizamientodelpatrnP.terebinthus(82%)enunmedioWPM

modificado

y

las

plantas

fueron

trasplantadas

en

invernadero

con

xito.

pices

de

brotes

de

P.

verade1020mmfueroninjertadosinvitrosobrebrotesenraizadososinenraizardelpatrn

P.

terebinthusyseestudihistolgicamentelaevolucindelosinjertos.Msdel70%delas

plantasinjertadassobrevivierondurantelas35semanasinicialesyalgunasplantas

continuaronsucrecimientoeninvernadero.Delamismaformaserealizaronhomoinjertosde

controlentreP.terebinthusconsigomismoysuestudiorevelquelatcnicautilizadaes

prometedora,aunquedeberserperfeccionadaenposteriorestrabajos.

Palabrasclave:Pistaciavera,P.terebinthus,cultivoinvitro

Micropropagationandinvitrograftingofpistachio

Abstract

PistachiocultureisbecominghighlyinterestinginSpain,wheretraditionalcropsasgrapeand

olivehavereducedtheirprofitability.However,itsexpansionishamperedbyboththe

difficultyofpropagationbygraftingofvarietiesofinterestandbythelackofaclonalselected

rootstock.Theapplicationofinvitroculturetechniqueswouldallowtheclonalpropagationof

Pistaciaspecies,aswellastoperformindepthstudiesoftheproblemsaffectinggrafting.In

vitrotechniquesprovideaneffectiveandflexibleexperimentalmodelthatallowsus

monitoringthegraftunionduringtheinitialstages,whenlackofaffinitysymptomsaremost

likelyto

appear.

In

vitro

P.

veracultures

were

initiated

from

nodal

explants,

whereas

cultures

ofP.terebinthuswereinitiatedfromseedsgerminatedinvitro.Theinvitromultiplicationof


2/11

bothspecieswascloseto2shootspershootevery3weeks.Ahighrootingpercentage(82%)

ofP.terebinthuswasobtainedinamodifiedWPMmediumandplantsweresuccessfully

transplantedtothegreenhouse.ShootapicesofP.veraof1020mmlengthweregraftedin

vitroonrootedorunrootedshootsofP.terebinthusinwhichtheapexwasremovedandthe

evolutionofthegraftunionswerestudied.Over70%ofthegraftedplantssurvivedduringthe

firts35weeksandsomeplantscontinuedtheirgrowthinthegreenhouse.Similarly,control

selfgraftedP.terebinthuswerestudied.Homograftsshowedthatthetechniqueofgraftingin

vitroispromisingbutshouldbeimprovedinfutureworks.

Keywords:Pistaciavera,P.terebinthus,invitroculture

Elcultivodelpistachero(P.veraL.)hadespertadoungranintersenzonasdeEspaaenlas

quecultivostradicionales,comolavidoelolivo,hanperdidorentabilidad.Sinembargo,su

expansinestfrenadaporladificultaddepropagacinporinjertodelasvariedadesde

intersylaseleccindeunpatrnclonalpropagadovegetativamente.Elpatrncornicabrao

terebinto(PistaciaterebinthusL.)poseeunaadecuadaadaptacinalclimaysueloespaolpor

serautctono,ademsdevigormoderadoytoleranciaalasenfermedadesdesuelo(Guerrero

etal.,2004).Lostrabajosdeseleccindeestepatrnsebasanensupropagacinporsemilla,

yaquenopropagaporestaquilla,ademsdeporsuscaracterespomolgicos,comosuvigor,

porteoproduccin(Guerreroetal.,2002)ytoleranciaalasequa(Gijnetal.,2010).Lafalta

deunadecuadomtododepropagacinlimitalaseleccinclonaldeestepatrn.

Enestetrabajoseinicianestudiospreliminaresdesupropagacininvitrocomoherramienta

deapoyoasuseleccin.P.terebinthushasidopropagadoinvitrotantoapartirdematerial

juvenil(ChelliyDrira,2002)comoadulto(Gannounetal.,1995),aunquesernecesarioajustar

elprotocoloalascondicionesdecultivoyalmaterialdeinters,yaqueesunaespecieque

planteaproblemasdefaltadeadaptacinalcultivoinvitro(Tabiyehetal,2006)conuna

frecuentepresenciadeexudadosenelmedioqueprovocansuoscurecimientoymodificacin.

Lamicropropagacinpermitevencerlafaltadeaptitudalenraizamientoy lamultiplicacin

masivadeplantas,porloqueeslatcnicadeeleccinparaestepatrn.

SegnGuerreroetal.(2004)elxitodelinjertodependedenumerososfactorescomo,entre

otros,latemperatura,quedeterminaelcrecimientodelostejidosdecicatrizacin,lahumedad

ambiental,quepuedeprovocarestrshdricoenlavariedadinjertada,lanecesidadde

oxigenacindelostejidosencicatrizacin,lahiperactividadohipoactividaddelpatrnque

determinaelflujodesaviayquenodebeserexcesivooreducido.Todosestosfactorespueden

serlacausadelavariabilidadenlosresultadosdelinjertoeneltiempo,yaquelosfactores

ambientalesseescapananuestrocontrol.Adems,debemosconsiderarquealinjertaryemas

deunavariedadsobreunpatrnpocovigoroso,comoelcornicabra,hayqueesperarhasta

queeldimetrodelpatrnpermitalaoperacindelinjerto,loqueocasionaquesteserealice

avecesencampo,generandoplantacionesirregulares.Enestetrabajoplanteamos,adems,el


3/11

cultivoinvitrodeP.veraparapoderavanzarigualmenteenelestudiodelprendimientodel

injerto.P.vera hasidopropagadoinvitrotantoapartirdematerialjuvenil(Benmahiouletal.,

2009)comoadulto(Onay,2000;Tilkatelat.,2009). Losprotocolosdebernajustarse

igualmenteanuestrasvariedadesycondicionesdecultivo.Elpistacheroesuncultivoque

presentaproblemasdepropagacindelasvariedadesdeintersporinjerto,yaquelos

resultadossonirregularesdebidoalosproblemasdeprendimientodelinjerto.

Adiferenciadeotrosfrutales,enlosquelosproblemasdeinjertosecentranenla

incompatibilidadyenlabsquedayseleccindepatronescompatibles,enpistacholos

problemasparecenserdebidosalacapacidadderespuestadelavariedadyelpatrnfrentea

undeterminadoestadofisiolgico,loquehacequesuestudioexijaunmayorconocimientode

losprocesosquetienenlugardurantelasdiferentesfases,perosobretodoenlasiniciales.En

estetrabajoproponemosunaaproximacindiferentealestudiodelinjertoenpistacho

mediantetcnicasdecultivoinvitro,queproporcionanunmodeloexperimentaladecuadoy

flexible,msfcildecontrolarydeestudiar.Losinjertosdepicesdebrotesdepistacho(P.

vera)realizadossobrebrotesdescabezadosdecornicabra,ambosmicropropagadosinvitro,

permitenelseguimientodelossucesosquetienenlugaranivelcelularehistolgico,ascomo

anivelmacroscpicoysuevolucineninvernadero.Laobtencindeunatcnicadeinjertoin

vitroeficazycontrastadasevefacilitadaenestetrabajoporladisponibilidaddehomoinjertos

delpatrnconsigomismoque,ejerciendodecontrolexperimental,permitirndetectarlos

aspectostcnicosquedebensermejoradosyasdetectarprecozmentelossntomasdefalta

deafinidaddelinjertoysusposiblescausas.

MaterialesyMtodos

Sehan

utilizado

para

este

trabajo

cultivos

in

vitro

de

cornicabra

(Pistacia

terebinthusL.)

originadosapartirdesemillasrecolectadasenplantassilvestresdeportearbustivoenla

localidaddeRiglos(Huesca),ydenudosconunayemaaxilarprocedentesdeunrboladulto

crecidoenelCampusdeAulaDei(Zaragoza).Elestablecimiento invitrosellevacaboenlos

aos 2009y2008respectivamente.

Establecimientoinvitro

Losexplantosnodalesde P.vera serecolectaronenprimavera, selavaron conagua

corrienteyseesterilizaronconHgCl2al0,05%durante15minutos, aclarndose enagua

estriltres

veces.

Se

cultivaron

un

total

de

33

explantos

nodales

en

medio

DKW

(Driver

yKuniyuki,1984)modificadoconantioxidante(0.01gl1decidoascrbico)ysedejaroncrecer

dosmeseshastasertrasplantadosamediodemultiplicacin.

Porotraparte,sesembraroninvitro 24semillasdecornicabra(P.terebinthus)quese

esterilizaronconlejaal10%durante30minyseaclararonconaguadestiladaestril3veces.

Encondicionesaspticasse eliminaronlostegumentosysepusieronagerminarenmediode

cultivoen oscuridad a5Cdurante6semanas.Seemplearontresmediosdiferentesde

germinacin:WP(LloydyMcCown,1980),MS (MurashigeySkoog,1962)yC2D(CheyPool,

1987).Transcurridas6semanaslassemillassepasaronalacmaradecultivoconiluminacin

(fotoperiodode

16

hcon

luz

blanca

proporcionada

por

fluorescentes

"cool

white"

yuna


4/11

intensidadde35molm_2s_1)yunatemperaturade24C,tomndoseeldatodegerminacin

semanalmente.

Multiplicacininvitro

Una

vez

brotadas

la

yemas

de

P.vera,

los

brotes

obtenidos

se

subcultivaron

en

distintos

mediosparasupropagacin.Seensayarontresmediosdiferentesparalamultiplicacin

basadosenelmedioDKW,MSyWP,aadiendo0.5MIBA,5MBA,30gl_1desacarosa,y7

gl_1deagar(Bactoagar,Difco,FisherScientific).Loscultivossemantuvieronenunacmara

decultivoenlasmismascondicionesdescritasanteriormenteysesubcultivaroncadatres

semanas.Secompararon losdiferentesmediosdecultivoatendiendoa: necrosisapical(%),

tamaomediodelbrote(mm),nmerodeentrenudosporbroteytasademultiplicacin

(nmerodebrotesapartirdeunbrote),alas3semanasdelsubcultivo. Seanalizaron56

brotesportratamientoyserealizarondosrepeticiones.

Los

pices

de

las

plntulas

obtenidas

a

partir

de

los

embriones

germinados

de

P.

terebinthus

fueronsubcultivadoseliminandopreviamenteloscotiledonesylasracesysesometieronalos

mismostratamientosqueP.veraparasumultiplicacin.

Enraizamientoinvitro

BrotesdeP.terebinthussesubcultivaronenmediodeenraizamientoparainducirel

crecimientoderaces.SeensayarondosmediosdeenraizamientobasadosenlosmediosMS y

WPdescritosanteriormenteymodificados, reduciendolassalesmineralesalamitad,sinBAP

yaumentandolasconcentracindeIBAa 5M. Loscultivossemantuvieronen cmarade

cultivoenlasmismascondicionesdescritasanteriormenteypasadas 48semanasenmedio

deenraizamiento,seanalizelnmerodebrotesenraizadosdeuntotalde78brotesen

medioWPy24brotesenMS.

Injertoinvitro

SeseleccionaronbrotescultivadosinvitrodeP.terebinthusdeunos4cmdelongitudyse

realizelinjertoconpicesdeP.verade12cmcultivadosinvitro.Elinjertoserealiz

decapitandoelpicedelportainjerto(enraizadoono)yrealizandounahendiduraeneltallo

dondeseencajelbrotedelavariedad, cuyabasehabasidorecortadaenformadeV(Onay

etal2004;Thimmappaiahetal2002).Paraayudaramantenerelinjertoseleaplicunagota

deagarosa

liquida

al

4%

que

se

dej

solidificar

(Jonard

et

al.

1983).

Los

injertos

se

realizaron

encondicionesaspticasconlaayudadeunmicroscopioestereoscpico.Losbrotesinjertados

secultivaronenlacmaradecultivoduranteuntiempovariableentre1y2meses,cuando

algunasplantasinjertadassetrasladaronalinvernadero.Asimismosehanrealizado

homoinjertosdeP.terebinthussobreP.terebinthusparacomprobarlaidoneidaddelatcnica

encondicionesdecompatibilidadtotal(control).

Serealizaron 50injertosinvitro,delosque34correspondierona P.vera/P.terebinthusy 16

aP.terebinthus/P.terebinthus.

Elestudio

histolgico

del

injerto

se

realiz

entre

4y8semanas

despus

del

injerto.

Los

brotes

injertadosseobservaronconelmicroscopioestereoscpicoyposteriormentesecortaron


5/11

longitudinalmenteamanoalzadaparasuobservacinconunmicroscopiodefluorescencia

(Olympus AX60)equipadoconcmarafotogrficaOlympus C7070WZ.Laproliferaciny

diferenciacincelularenlazonadelinjerto,ascomolacomunicacinvascularentrepatrny

variedadfueobservadatraslatincindeloscortesconnaranjadeacridina 0.01%enagua

(Pearse,1968)

Anlisisdelosdatos

Losdatosfueronanalizados,segnsudistribucin,condiferentespruebasestadsticas:ANOVA

(longituddelosbrotes),testdeKruskalWallis(nmerodeentrenudosporbroteynmerode

brotesporbroteotasademultiplicacin)yeltestdeproporciones"prop.test"(necrosis

apical).SeutilizelpaqueteestadsticoR(RDevelopmentCoreTeam,2008)

ResultadosyDiscusin

GerminacininvitrodeembrionesdeP.terebinthus

Lagerminacintuvolugar alrededorde40dasdespusdesusiembrainvitro.Seobtuvouna

germinacinmuyaltaenlosdiferentesmedios,llegandoal100%enelmedioMSyun75%de

promedioenelconjuntodelosmedios(Tabla1).Elcrecimientodelasplntulasfuevigoroso

enlamayoradeloscasoshastaeltrasplantedelpicecaulinaralosmediosdemultiplicacin.

Laaparicindeexudadosfuemuybajayelmedionoseoscureci.

MultiplicacinyenraizamientodebrotesdeP.terebinthus

Lospices

trasplantados

se

multiplicaron

en

los

tres

medios

ensayados

con

tasas

cercanas

a2

brotesporbrotecada3semanas(Tabla2,Figura1A),sinembargo,elmedioDKWhamostrado

brotesdemayorcalidad:mslargos,conmayornmerodeentrenudosyconmenornecrosis

apicalqueelMSoelWP.Sehanencontradodiferenciassignificativasenelnmerode

entrenudos,lalongituddelbroteoenelporcentajedenecrosisapical.Lostrabajosencurso

debernconfirmarestosresultados,peroelhechodequeelmediodecultivobasadoenlas

salesDKWsecomportetambinmejorenP.verarefuerzalabondaddeestosresultados.

Trabajosprevioshanutilizadomediossimilares.ChelliyDrira,(2002) ensayaronlosmedios

MSyOM(Rugini,1984)condistintasconcentracionesdemacronutrientes,observandoqueel

medio

MS

favorece

la

formacin

de

callo

basal

mientras

que

el

medio

OM

estimula

el

vigor

de

losbrotes.Nuestrotrabajosealalaadecuacindestemedioparalamultiplicacin.

LosbrotesmicropropagadosfueronenraizadosconxitoenelmedioWPmodificadodonde

enraizaronun82%delosbrotes(Figura1C),mientrasquesolamenteun42%enraizaronenel

medioMS.Sinembargoelenraizamientonofuesincrnico,apareciendolasraces

escalonadamentealolargode48semanas.Lasplantasfueron trasplantadasconxitoenel

invernadero.

MicropropagacindeP.vera

Iniciode

los

cultivos

apartir

de

explantos

nodales


6/11

Loscultivosfueroniniciadosapartirdeexplantosnodalesconunasupervivenciadel40%de

losexplantosalas12semanasdecultivo(Figura1B).Eloscurecimientodelmedioporlos

exudadosfuecontroladoeficazmenteconlaadicindecidoascrbicoalmediodurantelos

primerossubcultivos.Esteoscurecimientocestrasvariossubcultivosinclusoenelmediosin

antioxidante.Delaslneasdecultivoiniciadasconlosexplantossupervivientesseeligiuna

paralosestudiosposteriores,demaneraqueelmaterialfuerahomogneo.

Multiplicacindebrotes

SerealizunacomparacindemediosdecultivodeformasimilaralarealizadaconP.

terebinthusylosresultadosobtenidossemuestranenlaTabla2.Losbrotesdesarrollaron

entre2.1y3.3nuevosbrotesdepromediocada3semanas,segnelmediodecultivo.Las

diferenciasfueronestadsticamentesignificativas,siendomayorlamultiplicacinenelmedio

WP,sinembargo,estemediomostrelmayorporcentajedenecrosisapical,porloqueel

mediomsadecuadoparalamultiplicacindeP.verafueelDKWquemostr

significativamentebrotes

con

mayor

calidad:

ms

largos,

con

ms

entrenudos

ycon

menor

necrosisapical(Figura1D).OtrosautoresutilizaronelmedioMSconalgunasmodificaciones,

tantoenlosreguladoresdecrecimientocomoutilizandolasvitaminasdeotromediodecultivo

(Onay,2000; Tilkatetal.2009).

InjertoinvitrodePverasobreP.terebinthusyhomoinjertosdeP.terebinthus

Losinjertosrealizadosencondicionesaspticasmostraronunasupervivenciamuyaltasiendo

del73%enelhomoinjertoydel44%enelP.vera/P.terebintoalas35semanasdecultivo.

Algunasdelasplantastrasplantadaseninvernaderocontinuaronsucrecimiento(Figura1E,F).

EnlosinjertosdeP.vera/P.terebinthuslaaparienciaexternadelosinjertosmostruna

notablevariabilidad:delos23injertosobservados,el4%mostrunaspectobueno(Figura1

H),el8%noprendiyestabasuelto,el26%mostrunengrosamientoenlazonadelinjerto

debidoaunaexcesivaproliferacindecalloyel61%tenauncoloroscuroenlazonadel

injerto.Sinembargo,elexamenhistolgicodelazonadeuninpermitiverqueelaspecto

externonosecorrespondasiempreconlaevolucininterna,yaqueelporcentajedeinjertos

quemostraronunazonadecontactoentrevariedadypatrneradel75%yhastael93%

mostrdiferenciacindeclulasdelxilemaenlazonadecontacto(Tabla3,Figura1,J).A

pesardequelamayoramostrunaevolucinpositivayquelaproliferacindeclulasdecallo

fuedel

87

%,

un

porcentaje

similar

(81%)

mostr

alguna

zona

con

clulas

necrticas

que

creabanunadiscontinuidad.Dadoqueestosdatosfuerontomadosentrelaterceraylaquinta

semanatrasrealizarelinjertoyqueelestudioeradestructivo,seramuyprobablequemuchos

injertoshubieranevolucionadohaciamayoresconexionesvascularesyaunbuen

prendimiento.Seestnrealizandonuevosestudiosparaconocerlaevolucindelosinjertos

enetapasmstardas.

LoshomoinjertosdelpatrnP.terebinthushanmostradoengeneralunabuenaevolucin.La

aparienciaexternahasidobuena,sinapenascoloracinoscura(Figura1G).Lazonadeinjerto

mostrenelestudiohistolgico,alas11semanas,proliferacincelularydiferenciacinde

clulasdel

xilema

en

la

totalidad

de

los

injertos

estudiados

(Figura

1I).

Sin

embargo,

un

80

%

delosinjertosmostrunazonadecontactoreducidafrenteal20%enlosquelazonaera


7/11

extensayel60%mostralgunazonaconnecrosiscelular.Estosaspectosnegativosenlos

homoinjertosindicanquealgunosaspectosdelatcnicadeinjertodebenmodificarsede

maneraqueseasegureuncontactontimoentrevariedadypatrnevitando laseparacin

fsicaentreambosque impediraquetraslaproliferacincelularyladiferenciacindeclulas

delxilemaseestablezcanconexionesqueasegurenelaportedeaguaynutrientesalavariedad

ypermitanelprendimientodelinjerto.Disponerdeuninjertocontrolnoshapermitido

distinguirproblemastcnicosdeposiblesproblemasdeafinidadentrevariedadypatrn.Para

mejorarlafijacindelinjertoquegaranticeunfirmecontactoentrelostejidosdelavariedady

delpatrnhemosaadidoagarosaalazonadecontacto,perodadoslossntomasdefaltade

afinidadenloshomoinjertos,habrqueestudiar elefectodesistemasmecnicosdefijacin

enprximostrabajos.Jonardetal.(1983)aadieronagar,peroconelfindemejorarla

nutricindelayemayGebhardtetal(1988)utilizarontrozosdetubodesiliconaestrilpara

asegurarlafijacinentrepatrnyvariedad.Enestetrabajo,hemosobservadobuenas

conexioneseninjertosquehancrecidoencondicionesdeinvernadero,tantodeP.vera/P.

terebinthus

(Figura1J)

como

en

los

homoinjertos

(Figura

1I),

pero

slo

aunos

pocos

injertos

se

leshapermitidocrecerporperiodosprolongadosdetiempodebidoalosestudiosrealizados.

Latcnicaempleadaaquhamostradounosresultadosmuypositivos,yaquenoshapermitido

observardiferentesetapasdeproliferacinydiferenciacincelularenlazonadelinjertoque

podrnserrelacionadasconlaevolucinposterior,demaneraquesepuedahaceruna

determinacinprecozdelprendimiento.Porotraparte,laaparicindesntomasdemal

prendimiento,comounazonadecontactoreducidaolapresenciadenecrosiscelularpuede

ayudarnosacomprenderlascausasdelairregularidaddelprendimientoysuvariabilidad,de

maneraquepuedandeterminarselascondicionesquefavorezcanelxito.

Agradecimientos

EstetrabajohasidofinanciadoenparteporelproyectoRTA201000053C0303yporlaayuda

recibidadelGobiernodeAragncomoGrupodeExcelenciaA43.

Referenciasbibliogrficas

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9/11

Tabla1.GerminacininvitrodePistaciaterebinthus

Table1.InvitrogerminationofPistaciaterebinthus

Medio

n

Germinacin(%)

WP 12 58.33

MS 6 100.00

C2D 6 83.33

Tabla2.ComparacindemediosdecultivoenlamultiplicacininvitrodePistaciaveraydeP.

terebinthus.Valores

promedio

(

error

estndar)

de

la

longitud

de

los

brotes,

el

nmero

de

entrenudos,latasademultiplicacin(nmerodebrotesporbrote)yelporcentajedenecrosis

apical(*,***,n.s.:P


10/11

Table3.InvitrograftspercentagesofP.vera/P.terebinthusandP.terebinthus/ P.terebinthus

showingcellularproliferation,xylemcelldifferentiation,contactareabetweenpartnersand

necroticcells.

n

Proliferacincelular

Diferenciacinclulasxilema

Zonade

contactovariedad/patrn

Necrosis

P.

vera/P.terebinthus

16 87% 93% 75% 81%

P.terebinthus/P.terebinthus

5 100% 100%20%extensa80%reducida

60%

Figura1.Micropropagacineinjertodepistacho.Pistaciaterebhintus:A)Brotes

micropropagados;C)Brotesenraizados;E)Injertoterebinto/terebintoenmaceta.Laflecha

indicalaposicindelinjerto;G)Aspectoexternodelinjerto;I)Imagendelcortelongitudinal

delinjertoconmicroscopadefluorescencia.Pistaciavera:B)Instalacindelcultivo;D)Brotes

micropropagados; F)Injertovera/terebintoenmaceta.Laflechaindicalaposicindelinjerto;

H)Aspectoexternodelinjerto;J)Imagendelcortelongitudinaldelinjertoconmicroscopade

fluorescencia

Figure1.Micropropagationandinvitrocultureofpistachio.Pistaciaterebhintus:A)

Micropropagatedshoots;C)Rootedshoots;E)SelfgraftedP.terebinthusgrowinginthe

greenhouse.Arrowindicatesgraftposition;G)Graftexternalappearance;I)Graftlongitudinal

sectionunderfluorescencemicroscopy.Pistaciavera:B)Cultureinitiation;D)Micropropagated

shoots; F)P.vera/P.terebinthusplantgrowinginthegreenhouse. Arrowindicatesgraft

position;H)Graftexternalappearance; J)Graftlongitudinalsectionunderfluorescence

microscopy


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C

I

B

D

F

H

J

micropropagación e injerto in vitro de pistacho

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