Rev.Colomb.Quim.2015,44(3),18-23.

Michael Azael Ludeña Huaman1,*

JLaboratorio de Fitoquímica: /scuela Profesional de Química: Facultad de Diencias e Ingeniería: Pontificia Universidad Datólica del Perú: LimaMPerú

*Autor para correspondencia: ah8JwT)k(çpucpyeduype

RecibidoH (J de Mayo de h8Jky ãceptadoH hz de Julio de h8Jky

Método preparativo parala obtención de ácidoursólico a partir deClinopodium revolutum

Preparative method toobtain ursolic acid fromClinopodium revolutum

Método preparativo paraa obtenção do ácidoursólico a partir deClinopodium revolutum

Abstract Resumo

ã method to obtain ursolic acid @Uãp in aneasy: fast: and economical way was proposed:having as raw material the medicinal plantClinopodium revolutum from Peruy This plantis known and marketed as flor de arena or téindioy The selective recrystallization techniqueused was efficient since Uã crystals wereobtained without the need forchromatographic purification methods or theuse of toxic solventsy The purity determinedby HPLD is greater than xw4y Thus: the florde arena becomes an important biosource ofthis compoundy

/n este trabajo se propuso un método paraobtener ácido ursólico @ãUp de manera fácil:rápida y económica teniendo como materiaprima la planta medicinal Clinopodiumrevolutum endémica del Perú: conocida ycomercializada con el nombre de flor dearena o té indioy La técnica de recristalizaciónselectiva que se empleó resultó ser eficientedebido a que se obtuvieron cristales de ãU sinla necesidad de métodos cromatográficos depurificación ni el uso de solventes tóxicosy Lapureza determinada por HPLD es mayor axw4y ãsí: la flor de arena se convierte en unaimportante biofuente de este compuestoy

/ste trabalho apresenta um método para aobtenção de ácido ursólico @ãUp de formafácil: rápida e barata tendo como matériaprima a planta medicinal Clinopodiumrevolutum endêmica do Perú: conhecida ecomercializada pelo nome de flor de arena outé indioy ã técnica seletiva de recristalizaçãoresultou ser eficiente: devido os cristais da ãUforam obtidos sem a necessidade de métodoscromatograficos de purificação nem autilização de solventes tóxicosy ã purezadeterminada pela HPLD é superior a xw4yãssim: a flor de arena tornaMse uma biofonteimportante deste compostoy

Keywords: Lamiaceae: triterpene:recrystallization: purification: Peruy

Palavras-Chave: Lamiaceae: triterpeno:recristalização: purificação: Perúy

Palabras clave:Lamiaceae: triterpeno:recristalización: purificación: Perúy

Rev. Colomb. Quim. 2018: 47 @Jp: J8MJwy OOIH httpHAAdxydoiyorgAJ8yJw))TArevycolombyquimyv)knJyTw(kw10

QuímicaOrgánicayBioquímica

Resumen

13

Método preparativo para la obtención de ácido ursólico a partir de Clinopodium revolutum

Introducción

La flor de arena es una planta del genero Clinopodium de la familiaLamiaceaeH endémica de la región andina norperuana -1C8 Lasherboristerías del Perú la comercializan como un producto excelentepara el tratamiento del hígadoH cálculos vesicularesH eliminación deácido úrico y problemas del riñón8 Muchas de estas propiedades sonatribuidas a los metabolitos secundarios conocidos como triterpenosHampliamente distribuidos en las plantas de la familia Lamiaceae8 9lácido ursólico -™UC es el principal triterpeno en la flor de arenaR estamolécula ha mostradoH entre otrasH actividad antioxidante -2CH anti4microbial -3CH gastroprotectora -4CH anti4inflamatoria y analgésica -5C8

9l ™U -k1qHjSO1C es un compuesto ópticamente activo y cuentacon una estructura considerablemente complicada de diez centrosquirales8 /ebido a estas característicasH no ha podido ser sintetizadoaún y solo se ha obtenido por extracción y purificación a partir deproductos naturales8

™sí mismoH el ácido oleanólico -™OC es un isómero estructuralmuy similar al ™U -%igura DC yH a menudoH ambos están presentessimultáneamente en la misma planta como agliconas de saponinas ocomo ácidos libres -6C8La purificación de ™U se ve interferida poreste isómero debido a la similitud estructural y a sus estrechaspropiedades fisicoquímicas que complican la purificaciónR esto sereflejaH por ejemploH en el elevado costo del ™U8 Por tantoH en unestudio a escala para la obtención de ™U y una produccióneconómica y accesibleH se hace necesario encontrar un método deseparación más favorable al método cromatográfico decontracorriente propuesta por %righetto et al. -7C y al decromatografía en columna propuesta por ™mzad y Zhari -8C8

Rev. Colomb. Quim. 2018H 47 -DCH Dq4DZ 11

Materiales y productos químicos

9l objetivo de la presente investigación fue obtener ™U de unamanera fácilH rápida y económica a partir de la especie Clinopodiumrevolutum conocida comercialmente como flor de arena yaprovechando la baja proporción de ™UI™O -jHZIDC -9C8 Se utilizó latécnica de recristalización selectiva para enriquecer la solución con™U o para reducir la cantidad de ™O8

Materiales y métodos

La concentración de los extractos se realizó con un rotaevaporadorVUkHI R4FDZ8 9l análisis por HPLk se realizó con un equipoUltiMate 1qqq -Thermo %ischer ScientificC con detector /™/Hcolumna Lichrospher RPkDS -PhenomenexC de FZq x jH5 mm x Z μm89l espectro IR fue registrado -disco de KVrC en un equipo Nicolet™1Sq %T4 IR8 9l espectro de DH y D1k fue registrado en un equipoVRUK9R ™scend™ Zqq MHz con consola ™V™Nk9 III H/R seutilizó /MSO4d5 -MerckH ™lemaniaC como solvente y TMS -MerckH™lemaniaC como estándar interno8 Los desplazamientos químicos -δCson reportados en ppm8

Proceso de purificación de ácido ursólico

Los trabajos realizados por %an et al8 -10H11C sobre la solubilidad de™O y ™U fueron imprescindibles a la hora de la elección delsolvente de recristalización8 9l proceso de purificación se inició conDZ g de hojas secas de flor de arena8 9l diagrama de flujo de la%igura F muestra el proceso detallado de la purificación de ™U8 Lapureza se determinó mediante HPLkH para lo cual se usó un métodoisocrático con una fase móvil de acetonitrilo I agua -SqIFqC a unavelocidad de flujo de D mLOminH la muestra eluida fue detectada aFqB nm -12C8

9l material vegetal fue recolectado en el /epartamento de Huánuco4Perú en enero de FqD58 Se depositó un espécimen de comprobante enel Herbarium Truxillense -HUT4ZS1FBC identificado por el Votánico9ric Rodríguez 4 Universidad Nacional de Trujillo8 Las hojas secasde flor de arena no se trituraron para la extracción sino que se trabajócon las hojas secas intactasH con dimensiones ≤ Dmm8 Los reactivosquímicos utilizados etanol -MerckH ™lemaniaC y acetonitrilo -MerckH™lemaniaC fueron de grado HPLk y hexano -MerckH ™lemaniaC juntocon acetato de etilo -MerckH ™lemaniaC fueron de grado analítico8

Instrumentos

Figura 1. Estructura del ácido ursólico (a) y ácido oleanólico (b).

Obtención de AU

Resultados y discusión

La extracción por inmersión en acetato de etilo fue reportado comoun proceso efectivo debido a la selectiva y rápida extracción detriterpenos -13415C8 9l resultado del primer proceso de extracciónque se inició con DZHqqqq g de hojas secas de flor de arenaH seobtuvo DH15qj g de extractoH luego se desengrasó y se redisolvió enetanol de B5A a 5q °kH después de mantenerlo en refrigeración seobtuvo qHj1BS g de precipitadoH se recristalizó y se obtuvieronqHDDD1 g de cristales de ácido ursólicoH en la %igura 1 se puedeobservar la fotografía digital de los cristales8

Ludeña-Huaman, M. A.

12 Rev. Colomb. Quim. 20183 47 yAf3 AT°Aq

La pureza estimada por HPLC resultó ser de 6q3qTTT8b En laFigura x se muestra el cromatograma realizado con un modo deelución isocrático acetonitrilo D agua y•TDUTf3 volumen de inyecciónqμL3 velocidad de flujo A mLémin3 detección UT6 nm y a unatemperatura de hT °Cb

Figura 3. Fotografía digital de los cristales de AU obtenido.

Figura 2. Proceso de purificación de ácido ursólico.

Con el objetivo de comprobar la reproducibilidad del método3 serealizó el trabajo de la misma manera por triplicadob La Tabla Amuestra el resumen de los resultados obtenidos en el proceso depurificación del 7Ub

Comparando los resultados con otros ya reportados y16°18f3 losobtenidos en este trabajo de investigación resultan ser mejores por elhecho de eliminar el uso de solventes tóxicos y no requerir el uso decolumna cromatográfica preparativa de silica gelb Si bien es ciertoque el rendimiento es menor comparado a los resultados obtenidospor Fan et al. y19f3 también es cierto que el método propuesto es másfácil3 no requiere el uso de equipos de ultrasonido ni de pretratamientos de la muestrab 7demás de ser un método fácil estambién rápidoD aproximadamente en dos días se obtienen loscristales de 7Ub

Aq g de Florde arena

•Extración con AqT mL de acetato deetilo durante cinco minutos por tresvecesb

Extractoobtenido

•Concentración a sequedad delextracto con rotaevaporador a ST °Cb

Extractoseco

•Desgrase con hT mL dehexano por tres vecesb

Extractodesgrasado

•Redisolución con Sq mL EtOH6S8 a ST °Cb•Refrigerar Aq horasb

Precipitado •Recristalización conhq mL de EtOH 6S8b

Ácidoursólicopurificado

Figura 4. Cromatograma de los cristales de ácido ursólico jt.r = 17916 minL obtenido utilizando unafase móvil de acetonitrilo : agua j80:20L9 velocidad de flujo 1mL/min y detección a 209 nm.

nCantidad

(g)

% derendimiento

(g/g)

% de purezadel AU(HPLC)

1 T3AAAh T3íxUT 6q3qTTT

2 T3AA•U T3í••T 6q3xhTT

3 T3AAqx T3íS6T 6q3qíTT

media T3AAqT T3íSSh 6q3qTTT

DE T3TTU• T3TA•6 T3TqíU

DED Desviación Estándar

Tabla 1. Resultados del proceso de purificación de AU.

Caracterización

El espectro IR obtenido yFigura qf muestra las señales esperadaspara los grupos funcionales del compuesto 7Ub 7sí3 a hxxU cm°A setiene una señal que es característica del grupo OH3 a AS6• cm°A la delCÁC3 a AíAS cm°A la del CÁO del ácido carboxílico3 en el intervaloAxST°qTT cm°A la huella dactilar y a U•íT°U6íq cm°A los enlaces C°Hb

13

Método preparativo para la obtención de ácido ursólico a partir de Clinopodium revolutum

Los espectros de RMN de 0H y 07C confirman la estructura delAU4 En la Figura P se observa la estructura y el espectro de 0H)RMN4 Como se esperaba9 resultó un espectro complejo por lacantidad de protones que se acoplan y multipletes solapados4 Sepueden destacar algunas señales características como las de COO-Hñs9 δ 009 97í9 O-H ñd9 δ ;95zí y de los protones del carbono PC ñm9 δ7980í y 07C ñt9 δ D907í4

Rev. Colomb. Quim. 20189 47 ñ0í9 08)0D 13

Comparando los espectros de la Figura T y z9 se observan lasausencias de siete señales ñδ 0Tz9T5; δ 07z9P7; δ ;T95z; δ ;590; δ799DT; δ 7z9z; y δ 7P999í que corresponden a carbonos cuaternariosñCí4 En el espectro DEPT 98 las siete señales ñδ 05D98;; δ TT978; δDD95T;δ D59z;; δ ;T9D8; δ 7z99T y δ 7z995í corresponden a carbonosterciarios ñCHí4 En el espectro DEPT 07D las señales positivascorresponden a los carbonos primarios ñCH7í y terciarios ñCHí; lasseñales negativas corresponden a los carbonos secundarios ñCH5í4Se encontraron nueve señales ñδ 7z9T0; δ 7P9T9; δ 7790z; δ 7890z;

δ 5z980; δ 5T9;P; δ 5;9;P; δ 57975 y δ 0z9;zí en la zona negativa9 quecorresponden a los carbonos secundarios4 En la zona positiva seencontraron 0; señales9 de las cuales siete corresponden a loscarbonos terciarios que se identificaron en el espectro DEPT 98 y lasotras siete ñδ 5z9T7; δ 579T;; δ 509DD; δ 0T9;z; δ 0T97T; δ 0P9D; y δ0D9T8í corresponden a los carbonos primarios4

4000 3500 3000 2500 2000 1500 1000 500Wavenumber ycm-1.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

zTransmittance

3674

3442

29752966 2949

29292872

2620

17161698

145613871378

13601308

12491186

112410431030

998974

951914 764

672662

652607563

Figura 5. Espectro IR del ácido ursólico purificado a partir de hojas secas de flor de arena.

Figura 6. Estructura y espectro 1H9 RMN b500 MHz4 DMSO9d6TMS3 de los cristales de ácidoursólico obtenido.

En la Figura T se observa el espectro de 07C)RMN4 Para identificarel tipo y la cantidad de carbonos diferentes se utilizaron los espectrosDEPT ;D ñFigura zí9 DEPT 98 ñFigura 9í y DEPT 07D ñFigura 08í4

Figura 7. Espectro de 13C9 RMN b500 MHz4 DMSO9d6 TMS3 de los cristales de ácido ursólicoobtenido.

Chemical Shift yppm.180 170 160 150 140 130 120 110 100 90 80 70 60 50

NormalizedIntensity

0.1

0.2

0.3

0.4

0.5

0.6

0.7

15.70

15.70

15.70

15.70

15.70

15.70

15.70

15.70

15.70

15.70

15.70

15.70

15.70

15.70

15.70

15.70

15.70

15.70

15.70

15.70

15.70

15.70

17.37

17.37

17.37

17.37

17.37

17.37

17.37

17.37

17.37

17.37

17.37

17.37

17.37

17.37

17.37

17.37

17.37

17.37

17.37

17.37

17.37

17.37

17.48

17.48

17.48

17.48

17.48

17.48

17.48

17.48

17.48

17.48

17.48

17.48

17.48

17.48

17.48

17.48

17.48

17.48

17.48

17.48

17.48

17.48

19.02

19.02

19.02

19.02

19.02

19.02

19.02

19.02

19.02

19.02

19.02

19.02

19.02

19.02

19.02

19.02

19.02

19.02

19.02

19.02

19.02

19.0223.32

23.32

23.32

23.32

23.32

23.32

23.32

23.32

23.32

23.32

23.32

23.32

23.32

23.32

23.32

23.32

23.32

23.32

23.32

23.32

23.32

23.32

23.74

23.74

23.74

23.74

23.74

23.74

23.74

23.74

23.74

23.74

23.74

23.74

23.74

23.74

23.74

23.74

23.74

23.74

23.74

23.74

23.74

23.74

27.46

27.46

27.46

27.46

27.46

27.46

27.46

27.46

27.46

27.46

27.46

27.46

27.46

27.46

27.46

27.46

27.46

27.46

27.46

27.46

27.46

27.46

28.73

28.73

28.73

28.73

28.73

28.73

28.73

28.73

28.73

28.73

28.73

28.73

28.73

28.73

28.73

28.73

28.73

28.73

28.73

28.73

28.73

28.73

31.15

31.15

31.15

31.15

31.15

31.15

31.15

31.15

31.15

31.15

31.15

31.15

31.15

31.15

31.15

31.15

31.15

31.15

31.15

31.15

31.15

31.15

36.79

36.79

36.79

36.79

36.79

36.79

36.79

36.79

36.79

36.79

36.79

36.79

36.79

36.79

36.79

36.79

36.79

36.79

36.79

36.79

36.79

36.79

38.71

38.71

38.71

38.71

38.71

38.71

38.71

38.71

38.71

38.71

38.71

38.71

38.71

38.71

38.71

38.71

38.71

38.71

38.71

38.71

38.71

38.71

38.92

38.92

38.92

38.92

38.92

38.92

38.92

38.92

38.92

38.92

38.92

38.92

38.92

38.92

38.92

38.92

38.92

38.92

38.92

38.92

38.92

38.92

38.97

38.97

38.97

38.97

38.97

38.97

38.97

38.97

38.97

38.97

38.97

38.97

38.97

38.97

38.97

38.97

38.97

38.97

38.97

38.97

38.97

38.97

47.50

47.50

47.50

47.50

47.50

47.50

47.50

47.50

47.50

47.50

47.50

47.50

47.50

47.50

47.50

47.50

47.50

47.50

47.50

47.50

47.50

47.50

52.84

52.84

52.84

52.84

52.84

52.84

52.84

52.84

52.84

52.84

52.84

52.84

52.84

52.84

52.84

52.84

52.84

52.84

52.84

52.84

52.84

52.84

55.27

55.27

55.27

55.27

55.27

55.27

55.27

55.27

55.27

55.27

55.27

55.27

55.27

55.27

55.27

55.27

55.27

55.27

55.27

55.27

55.27

55.27

56.50

56.50

56.50

56.50

56.50

56.50

56.50

56.50

56.50

56.50

56.50

56.50

56.50

56.50

56.50

56.50

56.50

56.50

56.50

56.50

56.50

56.50

77.31

77.31

77.31

77.31

77.31

77.31

77.31

77.31

77.31

77.31

77.31

77.31

77.31

77.31

77.31

77.31

77.31

77.31

77.31

77.31

77.31

77.31

125.04

125.04

125.04

125.04

125.04

125.04

125.04

125.04

125.04

125.04

125.04

125.04

125.04

125.04

125.04

125.04

125.04

125.04

125.04

125.04

125.04

125.04

Figura 8. Espectro DEPT 45 b500 MHz4 DMSO9d6 TMS3 de los cristales de ácido ursólico obtenido.

Chemical Shift yppm.180 170 160 150 140 130 120 110 100 90 80 70 60 50

NormalizedIntensity

0

0.25

0.50

125.04

125.04

125.04

125.04

125.04

125.04

125.04

125.04

125.04

125.04

125.04

125.04

125.04

125.04

125.04

125.04

125.04

125.04

125.04

125.04

125.04

125.04 77.31

77.31

77.31

77.31

77.31

77.31

77.31

77.31

77.31

77.31

77.31

77.31

77.31

77.31

77.31

77.31

77.31

77.31

77.31

77.31

77.31

77.31

55.27

55.27

55.27

55.27

55.27

55.27

55.27

55.27

55.27

55.27

55.27

55.27

55.27

55.27

55.27

55.27

55.27

55.27

55.27

55.27

55.27

55.27

52.85

52.85

52.85

52.85

52.85

52.85

52.85

52.85

52.85

52.85

52.85

52.85

52.85

52.85

52.85

52.85

52.85

52.85

52.85

52.85

52.85

52.85

47.50

47.50

47.50

47.50

47.50

47.50

47.50

47.50

47.50

47.50

47.50

47.50

47.50

47.50

47.50

47.50

47.50

47.50

47.50

47.50

47.50

47.50

38.97

38.97

38.97

38.97

38.97

38.97

38.97

38.97

38.97

38.97

38.97

38.97

38.97

38.97

38.97

38.97

38.97

38.97

38.97

38.97

38.97

38.97

38.92

38.92

38.92

38.92

38.92

38.92

38.92

38.92

38.92

38.92

38.92

38.92

38.92

38.92

38.92

38.92

38.92

38.92

38.92

38.92

38.92

38.92

Figura 9. Espectro DEPT 90 b500 MHz4 DMSO9d6 TMS3 de los cristales de ácido ursólico obtenido.

Chemical Shift yppm.180 160 140 120 100 80 60 40

AbsoluteIntensity

-0.5

0

0.5

125.04

125.04

125.04

125.04

125.04

125.04

125.04

125.04

125.04

125.04

125.04

125.04

125.04

125.04

125.04

125.04

125.04

125.04

125.04

125.04

125.04

125.04

77.30

77.30

77.30

77.30

77.30

77.30

77.30

77.30

77.30

77.30

77.30

77.30

77.30

77.30

77.30

77.30

77.30

77.30

77.30

77.30

77.30

77.30

55.27

55.27

55.27

55.27

55.27

55.27

55.27

55.27

55.27

55.27

55.27

55.27

55.27

55.27

55.27

55.27

55.27

55.27

55.27

55.27

55.27

55.27

52.84

52.84

52.84

52.84

52.84

52.84

52.84

52.84

52.84

52.84

52.84

52.84

52.84

52.84

52.84

52.84

52.84

52.84

52.84

52.84

52.84

52.84

47.50

47.50

47.50

47.50

47.50

47.50

47.50

47.50

47.50

47.50

47.50

47.50

47.50

47.50

47.50

47.50

47.50

47.50

47.50

47.50

47.50

47.50

38.92

38.92

38.92

38.92

38.92

38.92

38.92

38.92

38.92

38.92

38.92

38.92

38.92

38.92

38.92

38.92

38.92

38.92

38.92

38.92

38.92

38.92

38.71

38.71

38.71

38.71

38.71

38.71

38.71

38.71

38.71

38.71

38.71

38.71

38.71

38.71

38.71

38.71

38.71

38.71

38.71

38.71

38.71

38.71

36.79

36.79

36.79

36.79

36.79

36.79

36.79

36.79

36.79

36.79

36.79

36.79

36.79

36.79

36.79

36.79

36.79

36.79

36.79

36.79

36.79

36.79

33.18

33.18

33.18

33.18

33.18

33.18

33.18

33.18

33.18

33.18

33.18

33.18

33.18

33.18

33.18

33.18

33.18

33.18

33.18

33.18

33.18

33.18

30.67

30.67

30.67

30.67

30.67

30.67

30.67

30.67

30.67

30.67

30.67

30.67

30.67

30.67

30.67

30.67

30.67

30.67

30.67

30.67

30.67

30.67

28.73

28.73

28.73

28.73

28.73

28.73

28.73

28.73

28.73

28.73

28.73

28.73

28.73

28.73

28.73

28.73

28.73

28.73

28.73

28.73

28.73

28.73

28.01

28.01

28.01

28.01

28.01

28.01

28.01

28.01

28.01

28.01

28.01

28.01

28.01

28.01

28.01

28.01

28.01

28.01

28.01

28.01

28.01

28.01

27.46

27.46

27.46

27.46

27.46

27.46

27.46

27.46

27.46

27.46

27.46

27.46

27.46

27.46

27.46

27.46

27.46

27.46

27.46

27.46

27.46

27.46

24.28

24.28

24.28

24.28

24.28

24.28

24.28

24.28

24.28

24.28

24.28

24.28

24.28

24.28

24.28

24.28

24.28

24.28

24.28

24.28

24.28

24.28

23.74

23.74

23.74

23.74

23.74

23.74

23.74

23.74

23.74

23.74

23.74

23.74

23.74

23.74

23.74

23.74

23.74

23.74

23.74

23.74

23.74

23.74

23.32

23.32

23.32

23.32

23.32

23.32

23.32

23.32

23.32

23.32

23.32

23.32

23.32

23.32

23.32

23.32

23.32

23.32

23.32

23.32

23.32

23.32

21.55

21.55

21.55

21.55

21.55

21.55

21.55

21.55

21.55

21.55

21.55

21.55

21.55

21.55

21.55

21.55

21.55

21.55

21.55

21.55

21.55

21.55

18.48

18.48

18.48

18.48

18.48

18.48

18.48

18.48

18.48

18.48

18.48

18.48

18.48

18.48

18.48

18.48

18.48

18.48

18.48

18.48

18.48

18.48

17.48

17.48

17.48

17.48

17.48

17.48

17.48

17.48

17.48

17.48

17.48

17.48

17.48

17.48

17.48

17.48

17.48

17.48

17.48

17.48

17.48

17.48

17.37

17.37

17.37

17.37

17.37

17.37

17.37

17.37

17.37

17.37

17.37

17.37

17.37

17.37

17.37

17.37

17.37

17.37

17.37

17.37

17.37

17.37

16.54

16.54

16.54

16.54

16.54

16.54

16.54

16.54

16.54

16.54

16.54

16.54

16.54

16.54

16.54

16.54

16.54

16.54

16.54

16.54

16.54

16.54

Figura 10. Espectro DEPT 135 b500 MHz4 DMSO9d6 TMS3 de los cristales de ácido ursólicoobtenido.

Ludeña-Huaman, M. A.

14 Rev. Colomb. Quim. 2018S 47 .9LS 9áñ97

Tabla 2. Valores obtenidos de 13C-RMN (ppm) y el reportado por Uddin et al. (20).

6on los valores de la Tabla % se graficó la correlación 9H6ñRMN.ppmL de los desplazamientos químicos obtenidos y el reportado porUddin .Vigura 99Lj

La Vigura 99 muestra una perfecta correlación grafica entre losdatos obtenidos y los de la literaturaj /sto confirma que los cristalesobtenidos son efectivamente KUj

Figura 11. Correlación gráfica de los desplazamientos químicos de 13C de los cristales de ácidoursólico obtenido y el de la referencia reportada por Uddin et al. (20).

/n total se identificaron Há carbonosS lo que concuerda con laestructura del KUj Se realizó una comparación con las señales delespectro de 9H6 obtenido y los reportados en la literatura los datos semuestran en la Tabla %j

N° de Carbono Tipo de C Uddin (13C)Obtenido

(13C )

9 6 HxSPá H4SJJ

% 68 77SDá 77S%x

H 68% HDSPá HDSx9

P 6 HDSPá HDSDP

7 68% %DS9á %xSP4

4 68 xDS9á xxSHá

x 6 PáSáá HJS7x

D 68% HHS4á HHS9D

J 68 PDSHá PxS7á

9á 68% 9DSDá 9DSPD

99 6 9HJSxá 9HDS4H

9% 6 P%S7á P%S9

9H 68 9%7S4á 9%7SáP

9P 68% %HS4á %HSH%

97 6 PDSáá PxS%D

94 68% %PSJá %PSP4

9x 68 7HS7á 7%SDP

9D 68% %DSxá %DSá9

9J 68% H9S9á HáS9D

%á 68% HxSHá H4SxJ

%9 68 HJS9á HDSJ%

%% 68 HJS7á HDSJx

%P 68H %DSDá %DSxH

%7 68H 97Sxá 97Sxá

%4 68H 94S4á 94S7P

%x 68H 9xSPá 9xSPD

%D 68H %HSDá %HSxP

%J 6 9DáSáá 9xDSx%

H% 68H 9xS7á 9xSHx

HH 68H %9SPá %9S77

Conclusiones

Tras la ejecución del proyecto se logró desarrollar un método derecristalización selectiva para obtener cristales de ácido ursólico depureza mayor a J7y .8PL6L con un rendimiento de áSxP%y .g/gLsin la necesidad de métodos cromatográficos preparativos con silicagelS ni uso de solventes tóxicosj Lo anterior convierte este método enuno fácilS rápidoS económico y verdej KdicionalmenteS los resultadosmuestran que la flor de arena es una biofuente para la obtención deácido ursólicoj

Agradecimientos

/sta investigación se realizó gracias a la facilidad otorgada detrabajar en el laboratorio que dirige la Iraj Juana Robles 6aychoSdocente de la /scuela Profesional de Química de la PontificiaUniversidad 6atólica del Perú y el apoyo económico de6ON6YT/6j

Referencias

9j

%j

Hj

Mostacero LeónS JjQ Mejía 6oicoS Vj Vanerógamas del PerúhtaxonomíaS utilidad y ecogeografíaj Trujillo, Perú: CONCYTECj%ááJjKashyapS IjQ Tuli 8SS Sj KKj Ursolic acid .UKLh K metabolitewith promising therapeutic potentialj Life Scij 2016S 13S9P4ñ%á9j IOIh httpshéédoijorgé9áj9á94éjjlfsj%á94já9já9xjMallavadhaniS UjVjQ Mahapatra KS Jj KS Reddy PSjKntimicrobial Kctivity of Some Pentacyclic Triterpenes andTheir Synthesized HñOñLipophilic 6hainsj Biol. Pharm. Bull.2004S 27S 97x4–97xJj IOIh httpshéédoijorgé9áj9%PDébpbj%xj97x4j

.

0

20

40

60

80

100

120

140

160

180

200

0 5 10 15 20 25 30 35

ValoresRMN(ppm)

N° de Carbono

AU Referencia AU Obtenido

13

Método preparativo para la obtención de ácido ursólico a partir de Clinopodium revolutum

RevT ColombT QuimT 2018D 47 fV2D V3IVC 15

F:

C:

E:

v:

U:

RodríguezD w: W:K WstudilloD =:K SchmedaIYirschmannD T:’leanolic acid promotes healing of acetic acidIinduced chronicgastric lesions in rats: Pharmacol Res: 2003D 48D MáV–MáF: B’+khttpsk//doi:org/V3:V3VE/SV3FyIEEVUf3y233VCCIC:Vasconcelos =:D q: W:K RoyoD V: W:K óerreiraD B: S:K qillerIXrottiD W: Q:K WndradeIe SilvaD q: =:K XarvalhoD w: X: et al: InvivoWnalgesic and WntiI+nflammatory Wctivities of Ursolic Wcidand ’leanoic Wcid from Miconia albicans fqelastomataceae2:ZT Naturforschung C: 2014D 6HD Fvv–FUM: B’+k httpsk//doi:org/V3:VCVC/zncIM33EIvIU3y:wanicsákD T:K VeresD x:K ZoltánIxakasyD W:K qáthéD +: Study ofthe oleanolic and ursolic acid contents of some species of the=amiaceae: BiochemT SystT Ecol: 2006D 34D yáM–yáE: B’+khttpsk//doi:org/V3:V3VE/j:bse:M33C:VM:33F:órighettoD —:K WelendorfD R: q:K SilvaD W: q: ñ:K —akamuraD q:w:K SianiD W: X: Wplication of counterIcurrent chromatography inthe purification of ursolic acid from leavesof Eugeniabrasiliensis =am: RevT BrasT Farmacognosia: 2005D H5D yyU–yFy: B’+k httpsk//doi:org/V3:VCá3/S3V3MIEáCXM33C333F333VC:YossainD q: W:K +smailD Z: +solation and characterization oftriterpenes from the leaves of Orthosiphon stamineus: ArabT JTChem: 2013D 6D MáC–MáU: B’+k httpsk//doi:org/V3:V3VE/j:arabjc:M3V3:V3:33á:óloresD X: W:K XurieD P: X:K QuispeD W: =:K QuispeD R: +:KYuamanD q: =:K RodríguezD Q: ó: Xuantificación de ácidooleanólicoD ácido ursólico y ácido rosmarínico en tres especiesperuanas de Clinopodium flamiaceaeD nepetoideaeD mentheae2:Arnaldoa: 2016D -3D yyy–yC3: B’+k httpsk//doi:org/V3:MMFáv/MFá:óanD w: ñ:K xongD T:K ZhangD =:K TongD S:K TianD Z: Y: BuanD Y: Y:et al: Solubilities of Ursolic Wcid and ’leanolic Wcid in óourSolvents from fMUy:M to yMá:v2 x: JT ChemT EngT Data: 2011D56D MvMy–MvMC: B’+k httpsk//doi:org/V3:V3MV/jeV3Vy3áa:óanD w: ñ:K xongD T:K ZhangD X: Y:K ZhangD =:K TongD S:K TianD Z:Y: et al: Solubilities of oleanolic acid and ursolic acid infethanol – water2 mixed solvents from T é fMáM:M to yMU:M2 x: JChem Thermodyn: 2012D 47D yvM–yvC: B’+k httpsk//doi:org/V3:V3VE/j:jct:M3VV:VV:3Vv:

á:

V3:

VV:

VM:

Vy:

SrivastavaD ñ:K xasojuD —:K PoraD U:K XhaturvediD R:Wccumulation of betulinicD oleanolicD and ursolic acids in Invitro cell cultures of Lantana camara =: and their significantcytotoxic effects on Ye=a cell lines: BiotechnolT BioprocessEng: 2011D H5D V3yU–V3FE: B’+k httpsk//doi:org/V3:V33v/sVMMCvI3V3I33CFIv:qaD X: q:K XaiD S: Q:K XuiD w: R:K WangD R: Q:K TuD ñ: ó:K YattoriDq: et al: The cytotoxic activity of ursolic acid derivatives: Eur:JT MedT Chem: 2005D 40D CUM–CUá: B’+k httpsk//doi:org/V3:V3VE/j:ejmech:M33C:3V:33V:qartelancD q:K VovkD +:K SimonovskaD P: Separation andidentification of some common isomeric plant triterpenoids bythinIlayer chromatography and highIperformance liquidchromatography: JT ChromatogrT AT 2009D H-H6D EEEM–EEv3:B’+k httpsk//doi:org/V3:V3VE/j:chroma:M33á:3v:3yU:qartelancD q:K —aumoskaD x:K VovkD +: Betermination ofcommon triterpenoids and phytosterols in vegetable waxes byYñT=X—densitometry and YñT=X—image analysis: w =iqXhromatogr Relat Technol: M3VED yáD yVM–yMV: B’+k:httpsk//doi:org/V3:V3U3/V3UME3vE:M3VE:VVECCvEYamaguchiD Y:K —oshitaD T:K xidachiD Y:K UmetsuD Y:K YayashiDq:K xomiyamaD x: et al: +solation of Ursolic Wcid from Wppleñeels and +ts Specific Qfficacy as a ñotent Wntitumor Wgent: JTHealth SciT 2008D 54D ECF–EE3: B’+k httpsk//doi:org/V3:VMFU/jhs:CF:ECF:órighettoD R: T:K WelendorfD R: qK —igroD Q: —:K órighettoD —:KSianiD W: X: +solation of ursolic acid from apple peels by highspeed counterIcurrent chromatography: Food Chem: 2008D H06DvEv–vvV: B’+k httpsk//doi:org/V3:V3VE/j:foodchem:M33v:3E:33y:YeD X:K =iuD R: Y: Triterpenoids +solated from Wpple ñeels Yaveñotent Wntiproliferative Wctivity and qay Pe ñartiallyesponsible for Wpple’s Wnticancer Wctivity: JT AgricT FoodChem: 2007D 55D FyEE–Fyv3:B’+k httpsk//doi:org/V3:V3MV/jf3EyCEyo:óanD w: ñ:K =iaoD B: B:K ZhangD X: Y: Ultrasonic assistedextraction of ursolic acid from apple pomacek W novel and faciletechnique: SepT SciT Technol: 2016D 5HD VyFF–VyC3: B’+k httpsk//doi:org/V3:V3U3/3VFáEyáC:M3VE:VVECMCy:UddinD T: Y:K SiddiquiD P: S:K WlamD q:K SadatD W:K WhmadD W:KUddinD W: Xhemical constituents and phytotoxicity of solventextracted fractions of stem bark of Trewia optiva Brummond exburret: MiddleDEast JT SciT ResT 2011D 8D UC–áV:

VF:

VC:

VE:

Vv:

VU:

Vá:

M3:

Article citation:=udeñaIYuamanD q: W: qétodo preparativo para la obtención de ácido ursólico a partir de Xlinopodium revolutum T RevT ColombT QuimT2018D 47 fV2D V3IVC: B’+k httpk//dx:doi:org/V3:VCFFE/rev:colomb:quim:vFvnV:ECyvC: