MEDICINA TRADICIONAL, UNA FUENTE POTENCIAL DE LOS RECURSOS NATURALES DE BAJA CALIFORNIA CON INTERES BIOMÉDICO Y AGROQUIMICO. Rosalba Encarnación Dimayuga Universidad Autónoma de Baja California Sur. Área Interdisciplinaria de Ciencias Agropecuarias. Departamento de Agronomía. Laboratorio de Farmacognosia. A. P. 19-B, La Paz, B. C. S. 23080. RESUMEN

El Programa de Investigación Farmacognóstica de los Recursos Naturales de B. C. S., fue iniciado en la UABCS desde 1983, con el fin de estudiar el potencial biomédico y agroquímico de los recursos naturales del estado, partiendo del inventario de los recursos empleados en su medicina tradicional. Este inventario se llevó a cabo entrevistando en su mayoría, a las personas mayores de las diferentes comunidades y rancherías de los cinco municipios de Baja California Sur. El material fue colectado e identificado taxonomicamente y arrojó el uso de plantas, organismos marinos, animales terrestres, substancias y minerales. Como el material marino detectado en este estudio fue escaso, se colectaron los organismos marinos pertenecientes a grupos, que según la literatura científica podían ser portadores de compuestos activos. Los extractos de los recursos colectados, se sometieron a pruebas de actividad. Dentro de las actividades biológicas y farmacológicas efectuadas, se pueden mencionar: Determinación de la actividad antimicrobiana por el Método de difusión en Agar (MDA), empleando Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis, Streptococcus faecalis y Escherichia coli. Determinación de la actividad antituberculosa por el Método BACTEC 460 y MABA contra Mycobaterium tuberculosis

HRv y una cepa de M. tuberculosis multiresitente, aislada de un enfermo con tuberculosis. Determinación de la actividad

antifúngica por el MDA contra Candida albicans, Fusarium oxysporum y Aspergillus niger . Determinación de la

Actividad antiprotozoara, contra Entamoeba hystolitica, Giardia lamblia y Leishmania mexicana . Determinación de la

actividad nematicida contra nemátodos del orden Rhabditida aislados de cultivos de tomate de La Paz. Determinación de la actividad contráctil sobre el músculo de jejuno de conejo. Determinación de la actividad anticancerígena contra diferentes líneas de células tumorales de próstata, colon, leucemia, sistema nervioso central y busto. Determinación de la toxicidad por el uso de microtécnicas empleando el nemátodo Pangrelus redivivus, entre otras. Los recursos seleccionados potencialmente activos, han sido fraccionados aplicando técnicas cromatográficas y el ensayo biodirigido, para aislar sus componentes activos. La estructura química de los compuestos aislados ha sido definida por diferentes técnicas espectroscópicas, en colaboración con varios grupos de investigación nacionales y extranjeros. Dentro de estos recursos podemos mencionar las plantas: Lepechinia hastata (Lamiaceae), Haploppapus sonorensis (Asteraceae), Calliandra californica (Mimosaceae) y los organismos marinos: la esponja Aplysina gerardogreeni (Demospongia), el pepino Neothione gibbosa (Echinodermata) y el coral blando Muricea cf. austera (Gorgonacea). Los compuestos activos aislados nos explican y correlacionan, el uso que se les da a estas plantas en la Medicina tradicional de B. C. S. y el potencial de los organismos marinos como fuente de substancias activas. INTRODUCCIÓN Los recursos naturales desde la antigüedad hasta nuestros días, específicamente las plantas medicinales han sido empleadas para el control y cura de enfermedades tanto del hombre, como de animales y plantas de interés económico. La utilización de los extractos obtenidos de plantas medicinales para este fin no es nuevo. En los últimos cincuenta años, desde finales de la II Guerra Mundial se habían dejado de utilizar los productos naturales, debido a la aparición de los productos químicos sintéticos llamados pesticidas o plaguicidas, denominados según el fin para el cual eran empleados, cayendo en desuso los plaguicidas caseros, por considerarlos anticuados y con poco futuro. Sin embargo, en la actualidad, la aplicación de substancias naturales no solo para el control de fitopatógenos, ha adquirido una gran importancia a nivel mundial, debido a que son efectivas, y producen menor contaminación ambiental que los productos sintéticos, cuyos residuos persistentes en el medio ambiente, han ocasionado el desarrollo de la resistencia en muchas plagas y microorganismos patógenos (1). Por tal motivo la investigación de los recursos naturales de B. C. S., se lleva a cabo con el propósito de evaluar el potencial biomédico y agroquímico de las plantas medicinales y de los organismos marinos del Mar de Cortés, con el fin de encontrar aquel recurso que sea potencialmente activo y contribuir a controlar los patógenos del sector salud, agrícola, acuícola, alimenticio etc.

MATERIALES Y MÉTODOS El primer proyecto de este programa estuvo relacionado con el inventario de los recursos naturales empleados en la medicina tradicional de Baja California Sur, realizado en forma sistemática por medio de entrevistas (2), y como el recurso marino reportado en este proyecto fue escaso, se procedió a colectar aquellos organismos pertenecientes a géneros que según la literatura científica, podrían ser portadores de compuestos activos, como esponjas, equinodermos, corales blandos, etc. (5). A lo largo de estos años, se han llevado a cabo diferentes proyectos relacionados con la selección de sus extractos por diferentes pruebas biológicas, farmacológicas y toxicológicas y con el aislamiento y caracterización química de sus compuestos activos. Dentro de las actividades biológicas y farmacológicas efectuadas se pueden mencionar: Determinación de la actividad antimicrobiana por el Método de difusión en Agar (MDA), empleando Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis, Streptococcus faecalis, Escherichia coli / (3, 5,10). Determinación de la actividad antituberculosa por el Método BACTEC 460 y MABA contra Mycobaterium tuberculosis HRv y una cepa de M. tuberculosis, multiresitente, aislada de un enfermo con tuberculosis (22, 23). Determinación de la actividad antifúngica por el MDA contra Candida albicans, Fusarium oxysporum y Aspergillus niger (5,10,26). Determinación de la Actividad antiprotozoara, contra Entamoeba hystolitica, Giardia lamblia (22) y Leishmania mexicana (17). Determinación de la actividad nematicida contra nemátodos del orden Rhabditida aislados de cultivos de tomate de La Paz (18). Determinación de la actividad contráctil sobre el músculo de jejuno de conejo (6, 9). Determinación de la actividad anticancerígena contra diferentes líneas de células tumorales de la próstata, colon, leucemia, sistema nervioso central y busto (17). Determinación de la toxicidad por el uso de microtécnicas empleando el nemátodo Pangrelus redivivus (19), entre otras. Los recursos potencialmente activos seleccionados de esta manera, han sido fraccionados aplicando técnicas cromatográficas y el ensayo bioderigido, para aislar sus componentes activos y su estructura química ha sido definida por diferentes técnicas espectroscópicas, en colaboración con varios grupos de investigación nacionales y extranjeros. RESULTADOS Y DISCUSIÓN En el inventario de los recursos empleados en la Medicina Tradicional y Popular de Baja California Sur, se entrevistaron a 381 personas de 127 comunidades de B. C. S y arrojó el uso de: 369 plantas medicinales, 14 organismos marinos, 16 animales terrestres y 9 sustancias (2). Este inventario ha sido el punto de partida en el estudio del potencial agroquímico y biomédico de los recursos del estado, como por ejemplo, en el estudio de la actividad antimicrobiana, los extractos etanólicos que mostraron actividad por el MDA contra B. subtilis fueron los de Hymenoclea monogyra, Jatropha vernicosa y Lantana camara. Contra S. aureus. B. subtilis y S. faecalis fueron L. hastata y C. californica y contra E, coli, S. aureus, S. faecalis y B. Subtilis fue el de Lophocereus schotii. Es sumamente interesante observar la reproducibilidad de la actividad antimicrobiana en los extractos obtenidos de L. hastata y C. californica. La actividad mostrada por L. schotti, H. monogira y J. vernicosa nos indican que estos son recursos que valdría la pena estudiar en un futuro ( 3 ). En relación a la determinación de la actividad antifúngica de 25 extractos evaluados por el MDA, sólo los pertenecientes a Xanthium strumarium y L. schotti presentaron actividad (26). El estudio preliminar realizado para determinar la actividad contra nemátodos del orden Rhabditida, muestra la variación en la actividad dependiendo del tipo de extracto, debido a la solubilidad de los componentes en el agua, siendo los extractos hexánico, de cloruro de metileno los menos activos y los de EtOH:MeOH 5:5 los más activos, y correspondiendo a:, Tagetes patula, Haploppapus sonorensis (Asteraceae), Mentha spicata (Lamiaceae), Calliandra californica (Fabaceae), Solanum nigrum (Solanaceae), Lantana camara, (Verbenceae) y Larrea tridentata (Zygophyllaceae). Es la primera vez que se reporta este tipo de actividad en H, sonorensis y C. californica (18). Los criterios aplicados en la selección del recurso para su estudio, no solo estuvieron relacionados con el resultado de su actividad biológica y farmacológica antes descrita, sino también con su abundancia, su uso en la medicina tradicional y a que no hubiese sido estudiado, lo que nos llevó a investigar la composición de algunas plantas medicinales como: H. sonorensis, L. hastata, C. californica, S. hindsianum, y algunos organismos marinos como: Neothyone. gibbosa, Aplysisna gerardogreeni, Muriciea cf. austera, de los cuales hemos aislados compuestos químicos de estructura conocida y nueva, con actividades biológicas nunca antes reportadas que se describen a continuación:

Hierba del pasmo, Haplopappus sonorensis (A. Gray) S.F. Blake (Asteraceae).

Sinonimia taxonómica : Ericameria difusa, Solidago difusa, Linosyris sonorensis, Bigelovia diffusa,Aster

sonorensis, Chrysoma diffusa

Es una planta ampliamente usada en la medicina tradicional para las llagas, resfriados, infecciones, dolor de muelas, catarro, tétano, heridas, piquetes de animales ponzoñosos y para el mal olor de pies (2). Crece abundantemente en la región noroeste del país. El extracto etanólico que obtuvimos de la parte aérea de la planta, mostró actividad antimicrobiana, contra el músculo de jejuno, actividad nematicida, antimicobacteriana, y citotóxica contra las células tumorales del colon (HCT-116). El fraccionamiento por cromatografía en columna con ayuda del ensayo biodirigido, condujo al aislamiento de tres flavonas: la 1:5.hydroxy.3,7,4´-trimetoxiflavona, 2:la ermanina y la 3: kumatakenina activas contra M. tuberculosis, siendo la ermanina la mas activa, y de la cual la actividad antiinflamotira, antiviral y contra el fibrosarcoma humano ha sido demostrada. La actividad antiviral y contra las ulceras ha sido también demostrada con la Kumatakenina, lo que explica y correlaciona el uso de esta planta en la Medicina tradicional (21). Además, la friedelina, y el friedanol también se han aislado como componentes de la hierba del pasmo (11) y es ya conocida la actividad antialimentaria de la friedelina contra el insecto Spodoptera litoralis . Chicura de la sierra, lavanda o lengua de buey, Lepechinia hastata (A. gray) Epling, (Lamiaceae). Sinonimia taxonómica: Spachele hastata El cocimiento de la raíz y parte aérea de esta planta es empleada para las infecciones vaginales (2). Crece solo en Hawai, en Baja California Sur y en las Islas Revillagigedo, México. Es una planta perenne de 2 a 3mm de altura con un tallo de 1 a 1.5 cm de grueso y flores de color violáceo. El material utilizado para este estudio fue colectado en la Sierra de la Laguna B. C. S en 1987. El fraccionamiento de sus extractos por cromatografía en columna con ayuda del ensayo biodirigido condujo a la obtención de 6 compuestos que por Espectroscopia de Infrarrojo, Espectrometría de Masas y Resonancia Magnética Nuclear de 13C y 1H, resultaron ser Carnosol, β-OH carnosol, ácido ursólico, β-sitosterol y 2 compuestos que están pendientes de definir en su estructura química. El carnosol ha sido reportado como un potente antimicrobiano, antioxidante, y con actividad antitumoral (4, 8, 27). Debido a la dificultad de recolectar L. hastata, a que esta planta crece en un área restringida del estado y por el probable potencial biomédico que presenta, se pensó en someter a un estudio preliminar de germinación con ácido giberélico, a las semillas colectadas en 1997 en San Antonio de la Sierra, B. C. S. lográndose detectar en las plantas cultivadas, los compuestos activos: carnosol y ácido urosólico (15).

Tabardillo, zapotillo o cabello de ángel, Calliandra californica Benth (Fabaceae). El cocimiento de su raíz o ramas es comúnmente empleado, para el mal de orín, inflamación de la próstata, fiebre, dolor de muelas y calambres (2). Sus sinónimos son: Fenillicea californica Kuntze y Anneslia californica Rose. Las Calliandras son hierbas

C. californica perennes, arbustos o árboles pequeños con hojas pineadas, flores pequeñas en cabezas, axiales capitoneadas o racimos, cáliz de cinco sépalos, corola en forma de embudo de cinco lóbulos, y muchos estambres largos formando un tuvo corto. Dos flavonas de estructura novedosa fueron aisladas de esta planta y una de ellas resultó ser activa contra S. aureus (7). Los extractos hexánico y de acetato de etilo obtenidos de la parte aérea de la planta, después de someterlos a la prueba de actividad antimicrobiana por el MDA mostraron actividad contra S. aureus, S. faecalis y B. Subtilis. El fraccionamiento del extracto de acetato de etilo obtenido por maceración de la raíz, por cromatografía en columna y ayuda del ensayo biodirigido condujo al aislamiento de dos diterpenos del tipo casánico de estructura nueva, denominados Escobarína A y B activos contra M. tuberculosis y contra células tumorales del colon (HCT-15), busto (MCF-7), leucemia (K.562 CML) sistema nervioso central (V-251 Glio) y próstata (PC-3), (16), lo que explica y correlaciona su uso en la Medicina tradicional. El extracto etanólico de la parte aérea de la planta presentó actividad contra los nemátodos del orden Rhabditida (18), por lo que se continúa su estudio para evaluar su actividad nematicida e insecticida. MMaarriioollaa:: SSoollaannuumm hhiinnddssiiaammuumm ((SSoollaannaacceeaaee))

LLaa mmaarriioollaa eess uunnaa ppllaannttaa mmuuyy ccoommúúnnmmeennttee eemmpplleeaaddaa eenn llaa mmeeddiicciinnaa ttrraaddiicciioonnaall ddee eessttaaddoo.. EEll ttee

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eerriiooddiiccttiiooll,, 3’,4’,5,7-tetrahydroxy flavone, activo por MDA contra B. subtilis and S. aureus (28).

Neothyone gibbosa Deichmann (Cucumariidae)

Se distribuye desde el Golfo de California hasta el sur de Perú y fue colectado en la Isla Cerralvo. Sus vísceras fueron eliminadas y el resto de su cuerpo fue cortado y extraído con etanol. El extracto etanólico mostró actividad contra el hongo levaduriforme C. albicans y su fraccionamiento por diferentes técnicas cromatográficas con ayuda del ensayo biodirigido, condujo al aislamiento de 3 compuestos, cuya estructura química fue definida por Espectrometría de Masas y Resonancia Magnética Nuclear de +H y 13C como glucósidos de naturaleza tritepénica.(13, 14 ). Se les denominó Neos A, B y C y su actividad contra los hongos fitopatógenos Aspergillus niger, Fusarium oxysporum y contra el protozoario L. mexicana ha sido determinada (17). Aplysina gerardogreeni Gomez y Bakus (Porifera;Demospongia) Esta esponja marina fue colectada en el complejo insular Espíritu Santo: La Partida, de la Bahía de La Paz y sus extractos mostraron actividad contra S. sureus, B. subtilis, S faecalis, E. coli, C. albicans , y M. tuberculosis, (22 ) por lo que se procedió a su estudio, aislandose: la aerotionina, calafianina, el ácido (2-hidroxi-3.5-dibromo-4metoxifenil) acético y un compuesto activo contra M. tuberculsosis cuya estructura esta en estudio. La aerotionina resultó ser un compuesto muy activo contra diferentes cepas de M. tuberculosis, multiresitentes a antibióticos de primera línea (12). El compuesto ácido, mostró una concentración mínima inhibitoria entre 62.5 µg/mL a 500 µg/ mL para S. aureus. B. subtilis, E, coli, Calbicans y Vibrio harveyi (20 ).

Muricea cf. austera (Gorgonaceae)

Fue colectado en la Bahía de la Paz en 1999. Los corales fueron extraídos con cloruro de metileno:Metanol al 30% y su extracto mostró actividad contra S. aureus y B. subtilis por el MDA (4 ), y contra M. tuberculosis (22). Tres compuestos han sido aislados de este recurso: un trihidroxiesterol activo contra S. aureus, B. subtilis y dos glucósidos esteroidales de estructura nueva de los cuales el derivado acetilado presentó ligera actividad contra células tumorales del colon humano HCT-116 (24, 25). CONCLUSIONES. Los resultados logrados nos muestran el gran potencial que poseen los recursos naturales de B. C. S. como fuente de compuestos activos, que pudieran aplicarse no solo en la cura y control de las enfermedades del sector salud sino también, contribuir en la solución de problemas ocasionados por patógenos del sector agrícola. A lo largo de estos años, el desarrollo de diferentes proyectos específicos, ha contribuido desde entonces, al estudio sistemático y científico de la flora del desierto y fauna marina para su mejor aprovechamiento y futura aplicación como fungicidas, antimicrobianos, (antimycobacterianos), nematicidas, insecticidas etc. Es claro que se requieren estudios básicos de domesticación y cultivo, para su aprovechamiento y explotación, y en el caso de los organismos marinos, de estudios mas profundos sobre su ciclo biológico, que servirán de base para el cultivo de esponjas, pepinos, corales, etc. AGRADECIMIENTOS: A DIGICSA-SEP, FOMES, CONACYT, DANIDA, SIDA, SIMAC-CONACYT, Universidad de Upsala en Suecia, Instituto Scripps de Oceanografía, de la Universidad de California en San Diego, USA, UAM-Xochimilco, Instituto de Química de la UNAM, Instituto Orsted de la Universidad de Copenhague en Dinamarca, por el apoyo brindado en las colaboraciones establecidas, así como a las autoridades de la UABCS, profesores y estudiantes que durante mas de 20 años han contribuido al desarrollo de este programa de investigación. LITERATURA CITADA 1.- Cutler, G.H. and Cutler, S.J. (Eds).1999. Biologically Active Natural Products: Agrochemicals. CRC Press. Washington D.C. p. 1-2. 2.- Encarnación Dimayuga Rosalba. Medicina Tradicional y Popular de B. C. S. 1996. Artes Gráficas. UABCS. 3.- Encarnación, D.R. and Keer G. S. (1991). Antimicrobial Screening of Medicinal Plants from B.C.S. (México). Journal of Ethopharmacology. 31, 181-92. 4.- Encarnación, D. R., Keer, G. S., Nielsen, P. H. Christophersen C.(1991). Tradicional Medicine of Baja California Sur, III (México). Carnosol, Diterpenene Antibiotic from L. hastata. Journal of Ethnopharmacology. 31, 43-48. 5.- Encarnación-Dimayuga R. y Keer G.S. (1992). Compuestos con actividad antimicrobiana de organismos marinos. Revista Mexicana de Ciencias Farmacéuticas. 22, 31-45. 6.- Encarnación-Dimayuga R.., K. Aoki and. Cortés A.R. (1993). Effect of Marine Organism on smooth muscle spontaneous contractility. International Journal of Pharmacognosy. 32 (4) 320-329.

7.- Encarnación, D.R., Ochoa, N., Anthoni, U., Christophersen, C. (1994) and Nielsen, P.H. Two new flavones from Calliandra californica. Journal of Natural Products. 57(9),1037-1039. 8.- Encarnación, D. R. Almada T. G. and Virgen F. M.1998. Minimun Inhibitory Concentration of carnosol and of the ethanol crude extract from Lepechinia hastata (A. Gray) Epling (Lamiaceae). Phytomedicine. 5(3) 1-5. 9.- Encarnación, D.R., Altamirano, L. and Maki A (1998) Screening of “Medicinal Plants from Baja California Sur (México) by their effects on smooth muscle contractility. Pharmaceutical Biology 36(2) 1-7. 10.- Encarnación, D. R. Virgen M. and Ochoa, N. (1998). Antimicrobial activity of medicinal plants from B.C.S. Pharmaceutical Biology. Vol 36 (1) 33-43. 11.- Encarnación, D.R., Álvarez, M.I., Nielsen, J., Christophersen, C.1999. Chemical Constituents from Haploppapus sonorensis. Fitoterapia. 70, 536-537. 12.- Encarnación D.R., Ramírez, M. R. and Luna-Herrera J. (2003). Aerothionin a bromotyrosine derivative with antimycobacterial activity from the Marine Sponge Aplisyna gerardogreeni (Demospongia). Pharmaceutical Biology. 41(5)384-387. 13.- Encarnacion, D.R., Carrasco, G., Espinoza, M., Anthony, U., Nielsen, P.H. and Christophersen, C. 1989. Neothyoside A., proposed structure of a triterpenoid tetraglycoside from the pacific sea cucumber, Neothyone gibosa. Journal of Natural Products. 52. 248-251. 14.- Encarnación D. R., Murillo A.J.I., Nielsen,J., and Christophersen, C. 1996. Nethyoside B, a triterpenoid diglycoside from the Pacific sea cucumber Neothyone gibbosa. Acta Chemica Scandinavica. 50. 348-349. 1155..-- EEnnccaarrnnaacciióónn--DDiimmaayyuuggaa,, RR..,, AAggúúnnddeezz EEssppiinnoozzaa JJ.. yy CCaammaacchhoo EEssppiinnoozzaa LL.. 22000055.. EEssttuuddiioo pprreelliimmiinnaarr ddee ggeerrmmiinnaacciióónn ccoonn áácciiddoo ggiibbeerreelliiccoo ddee LLeeppeecchhiinniiaa hhaassttaattaa ((LLaammiiaacceeaaee)).. FFiittootteeccnniiaa.. EEnn eevvaalluuaacciióónn.. 16.- Encarnación-Dimayuga R. Agundez E. J. García A. Delgado G., Salinas-M. G. and Said F. S. 2005. Two new cassane type diterpenes from Calliandra californica Benth (Fabaceae) with antituberculosis and cytotoxic activities. Planta Medica. En evaluación 1177..-- EEnnccaarrnnaacciióónn--DDiimmaayyuuggaa RR.. MMuurriilllloo--ÁÁllvvaarreezz,, JJ.. II..,,CChhrriissttoopphheerrsseenn,, CC..,, CChhaann--BBaaccaabb,, MM.. aanndd ZZaacccciinnoo,, SS.. 22000055.. LLeeiisshhmmaanniicciiddaall aanndd aannttiiffuunnggaall aaccttiivviittyy ooff ttrriitteerrppeennooiiddss ggllyyccoossiiddeess iissoollaatteedd ffrroomm tthhee sseeaa ccuuccuummbbeerr NNeeootthhyyoonnee ggiibbbboossaa.. PPuubblliiccaacciióónn eenn pprreeppaarraacciióónn.. 1188..-- JJiimméénneezz GGaalllleeggooss,, AA.. SSeelleecccciióónn ddee PPllaannttaass MMeeddiicciinnaalleess ppoorr ssuu aaccttiivviiddaadd NNeemmaattiicciiddaa.. TTeessiiss.. UUAABBCCSS.. LLiicc.. IInngg.. AAggrróónnoommoo.. 22000044.. 19.- Kazuko A. M., Encarnación-Dimayuga, R. Y Cortes A. R. 2005. Evaluación toxicológica de extractos de plantas y organismos marinos usando microtécnicas. Revista Mexicana de Ciencias Farmacéuticas. 36 (1 911.17. 20.- León, D. L. Aislamiento, purificación, identificación y evaluación de la actividad antimicrobiana de un compuesto de Aplysina gerardogreeni, Gomez y Bakus, 1992 (Porifera; Demospongia). Tesis de Maestría. CICIMAR. 2003. 21.- Murillo-Álvarez, J.I,, Encarnación D.R., Malmstrom, J., Christophersen, C. and Franzblau S. (2003) Antimycobacterial compounds from Haplopappus sonorensis . Fitoterapia 74 (3) 226-230. 22.- Murillo. Alvarez, J.I., Encarnación, D.R., Franzblau, S., Tapia, C., and Cedillo, R. (2000) Screening of Marine Organisms for Antimicrobial and antiprotozoal agents. Pharmaceutical Biology 38 (5): 379-384. 23.- Murillo-Álvarez, J. I., Encarnación, D. R. and Franzblau, S (2001). Antimicrobial and Citotoxic activity of some medicinal plants from Baja California Sur (México) Pharmaceutical Biology. 39(6);445-449. 2244..-- MMuurriilllloo ÁÁllvvaarreezz,, JJ.. II.. CCoommppuueessttooss ccoonn aaccttiivviiddaadd aannttiimmiiccrroobbiiaannaa yy cciittoottóóxxiiccaa aaiissllaaddooss ddee rreeccuurrssooss nnaattuurraalleess ddee BBaajjaa CCaalliiffoorrnniiaa SSuurr.. TTeessiiss DDooccttoorraall ddeell CCIIBBNNoorr eenn UUssooss,, PPrreesseerrvvaacciióónn yy MMaanneejjoo ddee llooss rreeccuurrssooss nnaattuurraalleess ((BBiiootteeccnnoollooggííaa)).. 22000033.. 2255..-- MMuurriilllloo--ÁÁllvvaarreezz,, JJ.. II..,, aanndd EEnnccaarrnnaacciióónn--DDiimmaayyuuggaa,, RR.. 22000033.. NNeeww bbiiooaaccttiivvee pprreeggnnaaddiieennee--ddeerriivveedd ggllyyccoossiiddeess ffrroomm tthhee GGuullff ooff CCaalliiffoorrnniiaa ggoorrggoonniiaann MMuurriicceeaa ccff.. aauusstteerraa.. 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ccoommoo ffuueennttee ddee ccoommppuueessttooss ccoonn aaccttiivviiddaadd aannttiimmiiccrroobbiiaannaa.. TTeessiiss.. TTeeccnnoollóóggiiccoo ddee LLaa PPaazz.. LLiicc.. IInngg.. BBiiooqquuíímmiiccoo.. 22000044.. 28.-Encarnación D.R., Nogueiras, L. C., Salinas, V. H., Anthoni U., Nielsen P. and Christophersen, C. (1999). Acta Chemica Scandinavica 53: 375-377

MEDICINA TRADICIONAL, UNA FUENTE POTENCIAL DE LOS RECURSOS NATURALES DE BAJA CALIFORNIA CON INTERES BIOMÉDICO Y AGROQUIMICO. Rosalba Encarnación Dimayuga Universidad Autónoma de Baja California Sur. Área Interdisciplinaria de Ciencias Agropecuarias. Departamento de Agronomía. Laboratorio de Farmacognosia. A. P. 19-B, La Paz, B. C. S. 23080. RESUMEN

El Programa de Investigación Farmacognóstica de los Recursos Naturales de B. C. S., fue iniciado en la UABCS desde 1983, con el fin de estudiar el potencial biomédico y agroquímico de los recursos naturales del estado, partiendo del inventario de los recursos empleados en su medicina tradicional. Este inventario se llevó a cabo entrevistando en su mayoría, a las personas mayores de las diferentes comunidades y rancherías de los cinco municipios de Baja California Sur. El material fue colectado e identificado taxonomicamente y arrojó el uso de plantas, organismos marinos, animales terrestres, substancias y minerales. Como el material marino detectado en este estudio fue escaso, se colectaron los organismos marinos pertenecientes a grupos, que según la literatura científica podían ser portadores de compuestos activos. Los extractos de los recursos colectados, se sometieron a pruebas de actividad. Dentro de las actividades biológicas y farmacológicas efectuadas, se pueden mencionar: Determinación de la actividad antimicrobiana por el Método de difusión en Agar (MDA), empleando Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis, Streptococcus faecalis y Escherichia coli. Determinación de la actividad antituberculosa

por el Método BACTEC 460 y MABA contra Mycobaterium tuberculosis HRv y una cepa de M. tuberculosis

multiresitente, aislada de un enfermo con tuberculosis. Determinación de la actividad antifúngica por el MDA contra

Candida albicans, Fusarium oxysporum y Aspergillus niger . Determinación de la Actividad antiprotozoara, contra

Entamoeba hystolitica, Giardia lamblia y Leishmania mexicana . Determinación de la actividad nematicida contra nemátodos del orden Rhabditida aislados de cultivos de tomate de La Paz. Determinación de la actividad contráctil sobre el músculo de jejuno de conejo. Determinación de la actividad anticancerígena contra diferentes líneas de células tumorales de próstata, colon, leucemia, sistema nervioso central y busto. Determinación de la toxicidad por el uso de microtécnicas empleando el nemátodo Pangrelus redivivus, entre otras. Los recursos seleccionados potencialmente activos, han sido fraccionados aplicando técnicas cromatográficas y el ensayo biodirigido, para aislar sus componentes activos. La estructura química de los compuestos aislados ha sido definida por diferentes técnicas espectroscópicas, en colaboración con varios grupos de investigación nacionales y extranjeros. Dentro de estos recursos podemos mencionar las plantas: Lepechinia hastata (Lamiaceae), Haploppapus sonorensis (Asteraceae), Calliandra californica (Mimosaceae) y los organismos marinos: la esponja Aplysina gerardogreeni (Demospongia), el pepino Neothione gibbosa (Echinodermata) y el coral blando Muricea cf. austera (Gorgonacea). Los compuestos activos aislados nos explican y correlacionan, el uso que se les da a estas plantas en la Medicina tradicional de B. C. S. y el potencial de los organismos marinos como fuente de substancias activas. INTRODUCCIÓN Los recursos naturales desde la antigüedad hasta nuestros días, específicamente las plantas medicinales han sido empleadas para el control y cura de enfermedades tanto del hombre, como de animales y plantas de interés económico. La utilización de los extractos obtenidos de plantas medicinales para este fin no es nuevo. En los últimos cincuenta años, desde finales de la II Guerra Mundial se habían dejado de utilizar los productos naturales, debido a la aparición de los productos químicos sintéticos llamados pesticidas o plaguicidas, denominados según el fin para el cual eran empleados, cayendo en desuso los plaguicidas caseros, por considerarlos anticuados y con poco futuro. Sin embargo, en la actualidad, la aplicación de substancias naturales no solo para el control de fitopatógenos, ha adquirido una gran importancia a nivel mundial, debido a que son efectivas, y producen menor contaminación ambiental que los productos sintéticos, cuyos residuos persistentes en el medio ambiente, han ocasionado el desarrollo de la resistencia en muchas plagas y microorganismos patógenos (1). Por tal motivo la investigación de los recursos naturales de B. C. S., se lleva a cabo con el propósito de evaluar el potencial biomédico y agroquímico de las plantas medicinales y de los organismos marinos del Mar de Cortés, con el fin de encontrar aquel recurso que sea potencialmente activo y contribuir a controlar los patógenos del sector salud, agrícola, acuícola, alimenticio etc.

MATERIALES Y MÉTODOS El primer proyecto de este programa estuvo relacionado con el inventario de los recursos naturales empleados en la medicina tradicional de Baja California Sur, realizado en forma sistemática por medio de entrevistas (2), y como el recurso marino reportado en este proyecto fue escaso, se procedió a colectar aquellos organismos pertenecientes a géneros que según la literatura científica, podrían ser portadores de compuestos activos, como esponjas, equinodermos, corales blandos, etc. (5). A lo largo de estos años, se han llevado a cabo diferentes proyectos relacionados con la selección de sus extractos por diferentes pruebas biológicas, farmacológicas y toxicológicas y con el aislamiento y caracterización química de sus compuestos activos. Dentro de las actividades biológicas y farmacológicas efectuadas se pueden mencionar: Determinación de la actividad antimicrobiana por el Método de difusión en Agar (MDA), empleando Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis, Streptococcus faecalis, Escherichia coli / (3, 5,10). Determinación de la actividad antituberculosa por el Método BACTEC 460 y MABA contra Mycobaterium tuberculosis HRv y una cepa de M. tuberculosis, multiresitente, aislada de un enfermo con tuberculosis (22, 23). Determinación de la actividad antifúngica por el MDA contra Candida albicans, Fusarium oxysporum y Aspergillus niger (5,10,26). Determinación de la Actividad antiprotozoara, contra Entamoeba hystolitica, Giardia lamblia (22) y Leishmania mexicana (17). Determinación de la actividad nematicida contra nemátodos del orden Rhabditida aislados de cultivos de tomate de La Paz (18). Determinación de la actividad contráctil sobre el músculo de jejuno de conejo (6, 9). Determinación de la actividad anticancerígena contra diferentes líneas de células tumorales de la próstata, colon, leucemia, sistema nervioso central y busto (17). Determinación de la toxicidad por el uso de microtécnicas empleando el nemátodo Pangrelus redivivus (19), entre otras. Los recursos potencialmente activos seleccionados de esta manera, han sido fraccionados aplicando técnicas cromatográficas y el ensayo bioderigido, para aislar sus componentes activos y su estructura química ha sido definida por diferentes técnicas espectroscópicas, en colaboración con varios grupos de investigación nacionales y extranjeros. RESULTADOS Y DISCUSIÓN En el inventario de los recursos empleados en la Medicina Tradicional y Popular de Baja California Sur, se entrevistaron a 381 personas de 127 comunidades de B. C. S y arrojó el uso de: 369 plantas medicinales, 14 organismos marinos, 16 animales terrestres y 9 sustancias (2). Este inventario ha sido el punto de partida en el estudio del potencial agroquímico y biomédico de los recursos del estado, como por ejemplo, en el estudio de la actividad antimicrobiana, los extractos etanólicos que mostraron actividad por el MDA contra B. subtilis fueron los de Hymenoclea monogyra, Jatropha vernicosa y Lantana camara. Contra S. aureus. B. subtilis y S. faecalis fueron L. hastata y C. californica y contra E, coli, S. aureus, S. faecalis y B. Subtilis fue el de Lophocereus schotii. Es sumamente interesante observar la reproducibilidad de la actividad antimicrobiana en los extractos obtenidos de L. hastata y C. californica. La actividad mostrada por L. schotti, H. monogira y J. vernicosa nos indican que estos son recursos que valdría la pena estudiar en un futuro ( 3 ). En relación a la determinación de la actividad antifúngica de 25 extractos evaluados por el MDA, sólo los pertenecientes a Xanthium strumarium y L. schotti presentaron actividad (26). El estudio preliminar realizado para determinar la actividad contra nemátodos del orden Rhabditida, muestra la variación en la actividad dependiendo del tipo de extracto, debido a la solubilidad de los componentes en el agua, siendo los extractos hexánico, de cloruro de metileno los menos activos y los de EtOH:MeOH 5:5 los más activos, y correspondiendo a:, Tagetes patula, Haploppapus sonorensis (Asteraceae), Mentha spicata (Lamiaceae), Calliandra californica (Fabaceae), Solanum nigrum (Solanaceae), Lantana camara, (Verbenceae) y Larrea tridentata (Zygophyllaceae). Es la primera vez que se reporta este tipo de actividad en H, sonorensis y C. californica (18). Los criterios aplicados en la selección del recurso para su estudio, no solo estuvieron relacionados con el resultado de su actividad biológica y farmacológica antes descrita, sino también con su abundancia, su uso en la medicina tradicional y a que no hubiese sido estudiado, lo que nos llevó a investigar la composición de algunas plantas medicinales como: H. sonorensis, L. hastata, C. californica, S. hindsianum, y algunos organismos marinos como: Neothyone. gibbosa, Aplysisna gerardogreeni, Muriciea cf. austera, de los cuales hemos aislados compuestos químicos de estructura conocida y nueva, con actividades biológicas nunca antes reportadas que se describen a continuación:

Hierba del pasmo, Haplopappus sonorensis (A. Gray) S.F. Blake (Asteraceae).

Sinonimia taxonómica : Ericameria difusa, Solidago difusa, Linosyris sonorensis, Bigelovia diffusa,Aster

sonorensis, Chrysoma diffusa

Es una planta ampliamente usada en la medicina tradicional para las llagas, resfriados, infecciones, dolor de muelas, catarro, tétano, heridas, piquetes de animales ponzoñosos y para el mal olor de pies (2). Crece abundantemente en la región noroeste del país. El extracto etanólico que obtuvimos de la parte aérea de la planta, mostró actividad antimicrobiana, contra el músculo de jejuno, actividad nematicida, antimicobacteriana, y citotóxica contra las células tumorales del colon (HCT-116). El fraccionamiento por cromatografía en columna con ayuda del ensayo biodirigido, condujo al aislamiento de tres flavonas: la 1:5.hydroxy.3,7,4´-trimetoxiflavona, 2:la ermanina y la 3: kumatakenina activas contra M. tuberculosis, siendo la ermanina la mas activa, y de la cual la actividad antiinflamotira, antiviral y contra el fibrosarcoma humano ha sido demostrada. La actividad antiviral y contra las ulceras ha sido también demostrada con la Kumatakenina, lo que explica y correlaciona el uso de esta planta en la Medicina tradicional (21). Además, la friedelina, y el friedanol también se han aislado como componentes de la hierba del pasmo (11) y es ya conocida la actividad antialimentaria de la friedelina contra el insecto Spodoptera litoralis . Chicura de la sierra, lavanda o lengua de buey, Lepechinia hastata (A. gray) Epling, (Lamiaceae). Sinonimia taxonómica: Spachele hastata El cocimiento de la raíz y parte aérea de esta planta es empleada para las infecciones vaginales (2). Crece solo en Hawai, en Baja California Sur y en las Islas Revillagigedo, México. Es una planta perenne de 2 a 3mm de altura con un tallo de 1 a 1.5 cm de grueso y flores de color violáceo. El material utilizado para este estudio fue colectado en la Sierra de la Laguna B. C. S en 1987. El fraccionamiento de sus extractos por cromatografía en columna con ayuda del ensayo biodirigido condujo a la obtención de 6 compuestos que por Espectroscopia de Infrarrojo, Espectrometría de Masas y Resonancia Magnética Nuclear de 13C y 1H, resultaron ser Carnosol, β-OH carnosol, ácido ursólico, β-sitosterol y 2 compuestos que están pendientes de definir en su estructura química. El carnosol ha sido reportado como un potente antimicrobiano, antioxidante, y con actividad antitumoral (4, 8, 27). Debido a la dificultad de recolectar L. hastata, a que esta planta crece en un área restringida del estado y por el probable potencial biomédico

que presenta, se pensó en someter a un estudio preliminar de germinación con ácido giberélico, a las semillas colectadas en 1997 en San Antonio de la Sierra, B. C. S. lográndose detectar en las plantas cultivadas, los compuestos activos: carnosol y ácido urosólico (15). Tabardillo, zapotillo o cabello de ángel, Calliandra californica Benth (Fabaceae). El cocimiento de su raíz o ramas es comúnmente empleado, para el mal de orín, inflamación de la próstata, fiebre, dolor de muelas y calambres (2). Sus sinónimos son: Fenillicea californica Kuntze y Anneslia californica Rose. Las Calliandras son hierbas

C. californica perennes, arbustos o árboles pequeños con hojas pineadas, flores pequeñas en cabezas, axiales capitoneadas o racimos, cáliz de cinco sépalos, corola en forma de embudo de cinco lóbulos, y muchos estambres largos formando un tuvo corto. Dos flavonas de estructura novedosa fueron aisladas de esta planta y una de ellas resultó ser activa contra S. aureus (7). Los extractos hexánico y de acetato de etilo obtenidos de la parte aérea de la planta, después de someterlos a la prueba de actividad antimicrobiana por el MDA mostraron actividad contra S. aureus, S. faecalis y B. Subtilis. El fraccionamiento del extracto de acetato de etilo obtenido por maceración de la raíz, por cromatografía en columna y ayuda del ensayo biodirigido condujo al aislamiento de dos diterpenos del tipo casánico de estructura nueva, denominados Escobarína A y B activos contra M. tuberculosis y contra células tumorales del colon (HCT-15), busto (MCF-7), leucemia (K.562 CML) sistema nervioso central (V-251 Glio) y próstata (PC-3), (16), lo que explica y correlaciona su uso en la Medicina tradicional. El extracto etanólico de la parte aérea de la planta presentó actividad contra los nemátodos del orden Rhabditida (18), por lo que se continúa su estudio para evaluar su actividad nematicida e insecticida. MMaarriioollaa:: SSoollaannuumm hhiinnddssiiaammuumm ((SSoollaannaacceeaaee))

LLaa mmaarriioollaa eess uunnaa ppllaannttaa mmuuyy ccoommúúnnmmeennttee eemmpplleeaaddaa eenn llaa mmeeddiicciinnaa ttrraaddiicciioonnaall ddee eessttaaddoo.. EEll ttee

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tetrahydroxy flavone, activo por MDA contra B. subtilis and S. aureus (28).

Neothyone gibbosa Deichmann (Cucumariidae)

Se distribuye desde el Golfo de California hasta el sur de Perú y fue colectado en la Isla Cerralvo. Sus vísceras fueron eliminadas y el resto de su cuerpo fue cortado y extraído con etanol. El extracto etanólico mostró actividad contra el hongo levaduriforme C. albicans y su fraccionamiento por diferentes técnicas cromatográficas con ayuda del ensayo biodirigido, condujo al aislamiento de 3 compuestos, cuya estructura química fue definida por Espectrometría de Masas y Resonancia Magnética Nuclear de +H y 13C como glucósidos de naturaleza tritepénica.(13, 14 ). Se les denominó Neos A, B y C y su actividad contra los hongos fitopatógenos Aspergillus niger, Fusarium oxysporum y contra el protozoario L. mexicana ha sido determinada (17). Aplysina gerardogreeni Gomez y Bakus (Porifera;Demospongia) Esta esponja marina fue colectada en el complejo insular Espíritu Santo: La Partida, de la Bahía de La Paz y sus extractos mostraron actividad contra S. sureus, B. subtilis, S faecalis, E. coli, C. albicans , y M. tuberculosis, (22 ) por lo que se procedió a su estudio, aislandose: la aerotionina, calafianina, el ácido (2-hidroxi-3.5-dibromo-4metoxifenil) acético y un compuesto activo contra M. tuberculsosis cuya estructura esta en estudio. La aerotionina resultó ser un compuesto muy activo contra diferentes cepas de M. tuberculosis, multiresitentes a antibióticos de primera línea (12). El compuesto ácido, mostró una concentración

mínima inhibitoria entre 62.5 µg/mL a 500 µg/ mL para S. aureus. B. subtilis, E, coli, Calbicans y Vibrio harveyi (20 ). Muricea cf. austera (Gorgonaceae)

Fue colectado en la Bahía de la Paz en 1999. Los corales fueron extraídos con cloruro de metileno:Metanol al 30% y su extracto mostró actividad contra S. aureus y B. subtilis por el MDA (4 ), y contra M. tuberculosis (22). Tres compuestos han sido aislados de este recurso: un trihidroxiesterol activo contra S. aureus, B. subtilis y dos glucósidos esteroidales de estructura nueva de los cuales el derivado acetilado presentó ligera actividad contra células tumorales del colon humano HCT-116 (24, 25). CONCLUSIONES. Los resultados logrados nos muestran el gran potencial que poseen los recursos naturales de B. C. S. como fuente de compuestos activos, que pudieran aplicarse no solo en la cura y control de las enfermedades del sector salud sino también, contribuir en la solución de problemas ocasionados por patógenos del sector agrícola. A lo largo de estos años, el desarrollo de diferentes proyectos específicos, ha contribuido desde entonces, al estudio sistemático y científico de la flora del desierto y fauna marina para su mejor aprovechamiento y futura aplicación como fungicidas, antimicrobianos, (antimycobacterianos), nematicidas, insecticidas etc. Es claro que se requieren estudios básicos de domesticación y cultivo, para su aprovechamiento y explotación, y en el caso de los organismos marinos, de estudios mas profundos sobre su ciclo biológico, que servirán de base para el cultivo de esponjas, pepinos, corales, etc. AGRADECIMIENTOS: A DIGICSA-SEP, FOMES, CONACYT, DANIDA, SIDA, SIMAC-CONACYT, Universidad de Upsala en Suecia, Instituto Scripps de Oceanografía, de la Universidad de California en San Diego, USA, UAM-Xochimilco, Instituto de Química de la UNAM, Instituto Orsted de la Universidad de Copenhague en Dinamarca, por el apoyo brindado en las colaboraciones establecidas, así como a las autoridades de la UABCS, profesores y estudiantes que durante mas de 20 años han contribuido al desarrollo de este programa de investigación. LITERATURA CITADA 1.- Cutler, G.H. and Cutler, S.J. (Eds).1999. Biologically Active Natural Products: Agrochemicals. CRC Press. Washington D.C. p. 1-2. 2.- Encarnación Dimayuga Rosalba. Medicina Tradicional y Popular de B. C. S. 1996. Artes Gráficas. UABCS. 3.- Encarnación, D.R. and Keer G. S. (1991). Antimicrobial Screening of Medicinal Plants from B.C.S. (México). Journal of Ethopharmacology. 31, 181-92. 4.- Encarnación, D. R., Keer, G. S., Nielsen, P. H. Christophersen C.(1991). Tradicional Medicine of Baja California Sur, III (México). Carnosol, Diterpenene Antibiotic from L. hastata. Journal of Ethnopharmacology. 31, 43-48.

5.- Encarnación-Dimayuga R. y Keer G.S. (1992). Compuestos con actividad antimicrobiana de organismos marinos. Revista Mexicana de Ciencias Farmacéuticas. 22, 31-45. 6.- Encarnación-Dimayuga R.., K. Aoki and. Cortés A.R. (1993). Effect of Marine Organism on smooth muscle spontaneous contractility. International Journal of Pharmacognosy. 32 (4) 320-329. 7.- Encarnación, D.R., Ochoa, N., Anthoni, U., Christophersen, C. (1994) and Nielsen, P.H. Two new flavones from Calliandra californica. Journal of Natural Products. 57(9),1037-1039. 8.- Encarnación, D. R. Almada T. G. and Virgen F. M.1998. Minimun Inhibitory Concentration of carnosol and of the ethanol crude extract from Lepechinia hastata (A. Gray) Epling (Lamiaceae). Phytomedicine. 5(3) 1-5. 9.- Encarnación, D.R., Altamirano, L. and Maki A (1998) Screening of “Medicinal Plants from Baja California Sur (México) by their effects on smooth muscle contractility. Pharmaceutical Biology 36(2) 1-7. 10.- Encarnación, D. R. Virgen M. and Ochoa, N. (1998). Antimicrobial activity of medicinal plants from B.C.S. Pharmaceutical Biology. Vol 36 (1) 33-43. 11.- Encarnación, D.R., Álvarez, M.I., Nielsen, J., Christophersen, C.1999. Chemical Constituents from Haploppapus sonorensis. Fitoterapia. 70, 536-537. 12.- Encarnación D.R., Ramírez, M. R. and Luna-Herrera J. (2003). Aerothionin a bromotyrosine derivative with antimycobacterial activity from the Marine Sponge Aplisyna gerardogreeni (Demospongia). Pharmaceutical Biology. 41(5)384-387. 13.- Encarnacion, D.R., Carrasco, G., Espinoza, M., Anthony, U., Nielsen, P.H. and Christophersen, C. 1989. Neothyoside A., proposed structure of a triterpenoid tetraglycoside from the pacific sea cucumber, Neothyone gibosa. Journal of Natural Products. 52. 248-251. 14.- Encarnación D. R., Murillo A.J.I., Nielsen,J., and Christophersen, C. 1996. Nethyoside B, a triterpenoid diglycoside from the Pacific sea cucumber Neothyone gibbosa. Acta Chemica Scandinavica. 50. 348-349. 1155..-- EEnnccaarrnnaacciióónn--DDiimmaayyuuggaa,, RR..,, AAggúúnnddeezz EEssppiinnoozzaa JJ.. yy CCaammaacchhoo EEssppiinnoozzaa LL.. 22000055.. EEssttuuddiioo pprreelliimmiinnaarr ddee ggeerrmmiinnaacciióónn ccoonn áácciiddoo ggiibbeerreelliiccoo ddee LLeeppeecchhiinniiaa hhaassttaattaa ((LLaammiiaacceeaaee)).. FFiittootteeccnniiaa.. EEnn eevvaalluuaacciióónn.. 16.- Encarnación-Dimayuga R. Agundez E. J. García A. Delgado G., Salinas-M. G. and Said F. S. 2005. Two new cassane type diterpenes from Calliandra californica Benth (Fabaceae) with antituberculosis and cytotoxic activities. Planta Medica. En evaluación 1177..-- EEnnccaarrnnaacciióónn--DDiimmaayyuuggaa RR.. MMuurriilllloo--ÁÁllvvaarreezz,, JJ.. II..,,CChhrriissttoopphheerrsseenn,, CC..,, CChhaann--BBaaccaabb,, MM.. aanndd ZZaacccciinnoo,, SS.. 22000055.. LLeeiisshhmmaanniicciiddaall aanndd aannttiiffuunnggaall aaccttiivviittyy ooff ttrriitteerrppeennooiiddss ggllyyccoossiiddeess iissoollaatteedd ffrroomm tthhee sseeaa ccuuccuummbbeerr NNeeootthhyyoonnee ggiibbbboossaa.. PPuubblliiccaacciióónn eenn pprreeppaarraacciióónn.. 1188..-- JJiimméénneezz GGaalllleeggooss,, AA.. SSeelleecccciióónn ddee PPllaannttaass MMeeddiicciinnaalleess ppoorr ssuu aaccttiivviiddaadd NNeemmaattiicciiddaa.. TTeessiiss.. UUAABBCCSS.. LLiicc.. IInngg.. AAggrróónnoommoo.. 22000044.. 19.- Kazuko A. M., Encarnación-Dimayuga, R. Y Cortes A. R. 2005. Evaluación toxicológica de extractos de plantas y organismos marinos usando microtécnicas. Revista Mexicana de Ciencias Farmacéuticas. 36 (1 911.17. 20.- León, D. L. Aislamiento, purificación, identificación y evaluación de la actividad antimicrobiana de un compuesto de Aplysina gerardogreeni, Gomez y Bakus, 1992 (Porifera; Demospongia). Tesis de Maestría. CICIMAR. 2003. 21.- Murillo-Álvarez, J.I,, Encarnación D.R., Malmstrom, J., Christophersen, C. and Franzblau S. (2003) Antimycobacterial compounds from Haplopappus sonorensis . Fitoterapia 74 (3) 226-230. 22.- Murillo. Alvarez, J.I., Encarnación, D.R., Franzblau, S., Tapia, C., and Cedillo, R. (2000) Screening of Marine Organisms for Antimicrobial and antiprotozoal agents. Pharmaceutical Biology 38 (5): 379-384. 23.- Murillo-Álvarez, J. I., Encarnación, D. R. and Franzblau, S (2001). Antimicrobial and Citotoxic activity of some medicinal plants from Baja California Sur (México) Pharmaceutical Biology. 39(6);445-449. 2244..-- MMuurriilllloo ÁÁllvvaarreezz,, JJ.. II.. CCoommppuueessttooss ccoonn aaccttiivviiddaadd aannttiimmiiccrroobbiiaannaa yy cciittoottóóxxiiccaa aaiissllaaddooss ddee rreeccuurrssooss nnaattuurraalleess ddee BBaajjaa CCaalliiffoorrnniiaa SSuurr.. 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ccoommoo ffuueennttee ddee ccoommppuueessttooss ccoonn aaccttiivviiddaadd aannttiimmiiccrroobbiiaannaa.. TTeessiiss.. TTeeccnnoollóóggiiccoo ddee LLaa PPaazz.. LLiicc.. IInngg.. BBiiooqquuíímmiiccoo.. 22000044.. 28.-Encarnación D.R., Nogueiras, L. C., Salinas, V. H., Anthoni U., Nielsen P. and Christophersen, C. (1999). Acta Chemica Scandinavica 53: 375-377