material y metódos.pptx
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Material Y Métodos
1600 × g durante 20 min .
1,5 ml en tubos de ensayo de polipropileno estériles y se congeló a -15 ºC.
Se deja secar a temperatura ambientes y se almacenaron a 2-8 ºC hasta su análisis en bolsas de plástico
Para evaluar la linealidad, la precisión y la sensibilidad del ensayo con sangre total de DBS también obtuvimos, utilizando EDTA como anticoagulante, a partir de un paciente con una VL de plasma de 4,2 × 10 5 copias / mL.
Se prepararon diluciones seriales sobre una base de 5, de 1: 5 a 1:15 625
Se utilizó como un diluyente y se aplico para el secado y preservación
Linealidad fue evaluada por tres ensayos.
El VL se cuantificó en la muestra DBS puro y en los seis diluciones en serie preparadas a partir de ella
Tres repeticiones de todas las concentraciones utilizadas fueron probados, y los ensayos se realizaron en diferentes días, por lo que los resultados podrían ser utilizados para analizar la precisión y determinar la sensibilidad.
Para el procesamiento de la muestra DBS
dos manchas se cortaron (equivalente a 100 l)
se colocaron en un tubo de ensayo de polipropileno estéril
Se añadieron para la elución de sangre para 2 h, a 2-8 ºC;
Un total de 1,2 ml de la solución reguladora Tris-EDTA
Más tarde, 1 ml se recuperó a partir del contenido del tubo de ensayo, para su análisis
Esta prueba, centradas en las regiones gag y LTR del genoma del VIH-1, para su amplificación y detección, y con una sensibilidad de 20 copias. se llevó a cabo en la plataforma para la PCR en tiempo real
El Cobas®Ampliprep / Cobas®Taqman