MANUAL PROCEDIMIENTOS TECNICOS HEMATOLOGIA

LABORATORIO CLINICODR. MAURICIO SALAS LINARES

SAN JOSE DE CUCUTA2012

INDICE

1. INTRODUCCION2. TOMA DE MUESTRAS3. CUADRO HEMATICO HEMOGLOBINA (Hb) HEMATOCRITO NDICES ERITROCITARIOS RECUENTO CELULARES RECUENTO HEMATIES RECUENTO DE LEUCOCITOS RECUENTO DE PLAQUETAS VELOCIDAD DE SEDIMENTACION GLOBULAR (VSG) MONTAJE E INTERPRETACION ALTERACIONES NDICES ERITROCITARIOS SECUNDARIOS CUADRO HEMATICO AUTOMATIZADO PARAMETROS CALCULADOS DIFERENCIAL LEUCOCITARIO HISTOGRAMAS PLAQUETAS ERITROCITOS LEUCOCITOS PARAMETROS ERITROCITARIOS PARAMETROS LEUCOCITARIOS PARAMETROS PLAQUETARIOS VALORES DE REFERENCIA4. FROTIS DE SANGRE PERIFERICA METODO DE LOS DOS PORTA OBJETOS REACTIVOS PARA LA COLORACION COLORACION LECTURA DEL RECUENTO DIFERENCIAL DE LEUCOCITOS CARACTERISTICAS MORFOLOGICAS DE LOS LEUCOCITOS MORFOLOGIA DE LOS GLOBULOS ROJOS ALATERACIONES MORFOLOGICAS ERITROCITARIAS ALTERACIONES DEL TAMAO (Anisocitosis) MACROCITOSIS MICROCITOSIS ALTERACIONES MORFOLOGICAS (Poiquilocitosis) ALTERACIONES DEL COLOR HIPOCROMIA POLICROMATOFILIA RANGOS DE ANISOCITOSIS DE A CUERDO AL VCM RANGOS DE CUNATIFICACION DE LOS GLOBULOS ROJOS NORMOBLASTOS5. RECUENTO DE RETICULOSITOS FUNDAMENTOS DE METODO REACTIVOS MUESTRA PROCEDIMIENTO6. HEMOSTASIA Y COAGULACION TIEMPO PARCIAL DETROMBOPLASTINA TIEMPO DE PROTROMBINA (PT)7. CALIBRACION DEL TIEMPO DE PROTROMBINA PROCESAMIENTO DE MUESTRAS 9. BIBLIOGRAFIA

HEMATOLOGIA CLINICA

1. INTRODUCCION

Un correcto procedimiento, en el anlisis de los diferentes compuestos sanguneos, proporciona una ayuda eficaz en el diagnstico de las diferentes patologas. Este procedimiento, inicia desde la toma de la muestra hasta la entrega del resultado al medico.

Este manual, es una gua practica de los procedimientos, recomendaciones, y explicaciones, de cmo es el manejo y los pasos a seguir, de las muestras que llegan para ser analizadas en parmetros referentes a la hematologa.

2. TOMA DE MUESTRAS

La responsabilidad de un buen anlisis de los componentes sanguneos, comienza en la toma de la muestra, este es el paso ms importante, pues, de la cantidad de muestra y rapidez con que llegue al laboratorio depende un adecuado anlisis.

La persona encargada de la toma de la muestra, debe tener una serie de precauciones para su recoleccin manteniendo las reglas de esterilidad, de bioseguridad y evitarle perturbaciones al paciente.

Los materiales utilizados para la recoleccin de la muestra de un anlisis hematolgico son: Agujas estriles y desechables. Tubos al vaco, si se utiliza el sistema venojet, y a presin atmosfrica si se utilizan agujas normales. Anticoagulantes EDTA 1-2 mg/ml sangre o citrato de sodio 3.8%. Alcohol Algodn

Lo primero e indispensable que se debe realizar, es rotular el tubo de recoleccin con el nombre del paciente, historia clnica, servicio que procede, fecha y nmero de radicacin asignado en el laboratorio.

La puncin se realiza, por lo general, en la parte anterior del brazo, en el pliegue del codo. Se debe limpiar la zona de venopuncin, con un algodn impregnado de alcohol, del centro hacia fuera en crculos.

Las muestras deben ser procesadas en el menor tiempo posible y lo ms conveniente es refrigerarlas mientras esto sucede.

3. CUADRO HEMATICO

Sin duda alguna el cuadro hemtico (CH), es de las pruebas ms solicitadas al laboratorio clnico como un perfil de exmenes relacionados con los diferentes elementos celulares en la sangre y seguimiento de entidades hematolgicas como no hematolgicas.

El CH se basa en la determinacin de hemoglobina, hematocrito, recuentos celulares, morfologa globular, velocidad de sedimentacin, e ndices eritrocitarios secundarios.

3.1 Hemoglobina (Hb): Es un pigmento respiratorio de la naturaleza proteica que constituye el 95% del peso seco eritrocitario. A travs de esta, el hemate, realiza su funcin transportadora de oxgeno desde los pulmones a los tejidos.

La determinacin de concentracin de hemoglobina, es de criterio fundamental, para el diagnstico de una anemia. Los mtodos, se basan en las propiedades fsico-qumicas de la hemoglobina. Desde 1967, se recomienda el mtodo colormetro de la cianometahemoglobina (Hb + k3Fe(CN)6 Hi + CNKHiCN) como el mas fiable.

3.2 Hematocrito: Es la relacin, entre el volumen de la masa de eritrocitos y la masa total de la sangre. Refleja la concentracin de los eritrocitos, ms no la masa total de estos. El hematocrito se expresa en porcentaje o preferiblemente de acuerdo al sistema internacional de unidades. La relacin entre el Hto. Y Hb. En la clnica contribuye al diagnstico de la anemia.

Montaje manual: Llenar un capilar hasta las 2/3 partes aprox., sellando la parte inferior con plastilina y llevarlo a la micro centrfuga, por 5 a 10 minutos entre 10000 y 5000 rpm respectivamente. Se lee con una tabla estndar, y se informa en porcentaje %.

3.3 ndices eritrocitarios: El hematocrito, la concentracin de hemoglobina y el recuento de glbulos rojos, se relacionan entre s mediante los llamados ndices eritrocitarios, de gran utilidad en la orientacin diagnostica de una anemia. Estos ndices son:* Volumen Corpuscular Medio (VCM).* Hemoglobina Corpuscular Media (HCM).* Concentracin Corpuscular Media de Hemoglobina (CHCM).

El tamao d los glbulos rojos, ser otra variable que influye en la valoracin del hematocrito, si los glbulos rojos son muy pequeos, ocupan menor volumen y de igual manera si son mas grandes ocuparan mayor volumen, ambas situaciones de hecho son patolgicas y cursarn con estado anmico.

3.4 Recuento celulares: Los estudios cuantitativos de los elementos formes de la sangre (eritrocitos, leucocitos y plaquetas), se refieren a la concentracin de cada uno de ellos en un microlito de sangre.

3.4.1 Recuento de hemates: El mtodo tradicional, es mediante la cmara cuenta glbulos, presentando un error excesivo. En actualidad el empleo de mtodos electrnicos para el recuento celular da una mayor precisin y exactitud. El descenso del numero de hemates, va con una disminucin de la concentracin de hemoglobina y puede ser debido a una hemorragia, hemlisis o a una falta de formacin celular a nivel de mdula sea.

3.4.2 Recuento de leucocitos: Se utiliza la solucin de Turk (1:10), que tie ligeramente el ncleo y elimina los hemates por hemlisis. Las proporciones son: 0.38ml de solucin de Turk y 20 de sangre, se mezcla, se monta en la cmara de Neubauer, en el microscopio se hace el conteo, se multiplica por 50 y obtenemos el recuento de leucocitos.

3.4.3 Recuento de plaquetas: Las plaquetas son fragmentos de clulas de 2 a 4 micras de dimetro, son de color azul con grnulos prpura centrales. El recuento de plaquetas se basa en la observacin en un frotis de sangre y el conteo de las plaquetas en 10 campos del mismo, en una zona donde los glbulos apenas se toquen entre s y en nmero sean mas o menos cien. Se hace la sumatoria de las plaquetas contadas en los 10 campos y se realiza el promedio y este resultado se multiplica por 22.000. El resultado se informa como nmero de plaquetas/mm3.

3.5 Velocidad de sedimentacin globular (VSG): Las propiedades fsico-qumicas en hematologa son fundamentales tres:

1. La velocidad de sedimentacin globular.2. La viscosidad plasmtica y de la sangre total.3. El volumen total de la sangre, el volumen plasmtico y el eritrocitarios.

Desde el punto de vista fsico, la velocidad de sedimentacin globular constituye una medida de agregabilidad de los hemates y depende fundamentalmente de los siguientes factores:

Tamao de los hemates o VCM. Diferencia de densidad entre los hemates y el plasma. Viscosidad plasmtica (concentracin de fibringeno y/o globulinas). Temperatura ambiente.

LA VSG es constante, gracias al equilibrio entre el efecto de la albmina y de las restantes protenas del plasma.

3.5.1 Montaje e interpretacin: Se llena el tubo de Wintrobe de sangre sin burbujas, con la ayuda de la aguja de Pasteur, y una jeringa, hasta la marca O. Colocar en un soporte vertical y al cabo de una hora, se lee en la escala descenderte, la cantidad de milmetros cbicos que sedimento la sangre.

La sedimentacin globular se realiza en tres etapas:

1. Periodo inicial: agregacin (10 minutos) hemoaglutinacin o tendencia de los hemates a formar agregados en forma de pilas de monedas.2. Sedimentacin rpida o desplazamiento de los hemates hacia el fondo del recipiente, a velocidad constante (40 minutos).3. Perodo final: acumulo de hemates en el fondo del recipiente (10 minutos).

La etapa ms importante es la hemoaglutinacin porque de esta depende todo el proceso.

Alteraciones: Los hemates pequeos, o en nmero bajo, y el aumento de la concentracin plasmtica de ciertas protenas como: el fibringeno, y las globulinas, la sfilis, la artritis, TBC, y la hemodilucin son las principales causas de un aumento.

La VSG disminuye en: insuficiencia cardiaca congestiva, hipofibrinogenemia y alteraciones congnitas eritrocitarias, entre otras patologas.

ndices eritrocitarios secundarios: Los ndices eritrocitarios llamados secundarios, son los que relacionan el hematocrito con el nmero de hemates y la concentracin de hemoglobina, denominada a su vez ndices eritrocitarios primarios. Son fundamentalmente tres:

a. Volumen Corpuscular Medio (VCM): Es el valor medio del volumen de cada hemate. Se calcula a partir del hematocrito y el valor de hemates as:

VCM = Hematocrito / Recuento de glbulos rojos.

La unidad es el fentolitro (fl) y la cifra normal es de 85+-10fl.

b. Hemoglobina Corpuscular media (HCM): Expresa el valor medio contenido de hemoglobina que existe en cada hemate.

Se determina mediante el HCM = concentracin de la hemoglobina en sangre total y el numero de hemates por litro. La unidad es el pico gramo.

c. Concentracin de Hemoglobina Corpuscular Media (CHMC): Es la concentracin de hemoglobina de un decilitro de hemates, y se calcula con la concentracin de hemoglobina por litro de sangre y el valor del hematocrito.

Cuadro hemtico automatizado: A travs de la historia tecnolgica, el CH, ha ganado un nivel de precisin como de lo parmetros que lo constituyen. Los mtodos convencionales conocidos tambin como manuales, aparte de ser poco exactos aportan pocos parmetros.

Varias tecnologas realizan el CH electrnico, informando parmetros internacionales tales como: RBC (recuento de rojos), WBC (recuentos de leucocitos), PLT (recuento de plaquetas), HGB (hemoglobina) y HCT (hematocrito).

3.7.1 Parmetros calculados: El VCM, MCH, MCHC, amplitud de distancia Eritrocitaria (RWD), su aumento indica una poblacin de eritrocitos con anisocitosis, volumen plaquetario medio (MVP), sus valores elevados indican, una adecuada respuesta medular en caso de Trombocitopenia.El MCV y RDW tienen una gran utilidad clnica ya que permiten enfocar el diagnstico del paciente con anemia.

MCV bajo, RDW normal: deben descartarse anemias de enfermedad crnica y talasemia. MCV bajo, RDW alto: debe descartarse anemias de enfermedad crnica, leucemia, hemorragia aguda. MCV normal, RDW alta: deben descartarse anemia aplsica y poblacin heterognea. MCV alto, RDW alto: deben descartarse anemia megaloblstica, linfoctica crnica.

3.7.2 Diferencial leucocitario: Distingue tres poblaciones, estas son:

1. Linfocitos (LYMPH).2. Neutrfilos (NEUT).3. Clulas mixtas (MXD): Sumatoria de los eosinfilos, basfilos y monocitos. Si estas clulas son ms de un 6% de los leucocitos o se detecte otra anormalidad, el laboratorio informara un diferencial manual.

Histogramas: Suministran datos sobre el tamao promedio de las partculas o clulas, la distribucin de las mismas sobre el tamao y la presencia de subpoblaciones. En estas condiciones el histograma puede ser considerado como una forma grfica de reportar el CH. Los histogramas muestran el tamao y frecuencia relativa de las plaquetas, eritrocitos y leucocitos.

Plaquetas: aparicin de un nuevo pico a la derecha de las plaquetas, deben descartarse eritrocitos, Microcitos y fragmentos Plaquetarios.Eritrocitos: Detecta transfusin reciente o anemia por diferencia nutricional bajo tratamiento.Leucocitos: aumento del pico de linfocitos, deben descartarse linfocitos. Aumento de clulas medianas, descartar Eosinofilia, Basofilia o Monocitosis. Aumento del pico de Neutrfilos, descartar Neutrofilia y desviacin a la izquierda de granulositos.

Convencionalmente, los parmetros del Hemograma pueden ser reunidos en tres grupos de acuerdo con los componentes celulares de la sangre. Son los parmetros eritrocitarios, Leucocitarios y Plaquetarios.

Parmetros Eritrociatrios: Son aquellos relacionados ntimamente con los eritrocitos. En combinacin de los parmetros eritrocitarios es el punto de partida para la clasificacin morfolgica de las anemias, estos son:

Recuento de Eritrocitos. Hemoglobina. Hematocrito: El hematocrito electrnico es el resultado de relacionar el nmero de eritrocitos con el tamao de los mismos. Promedio Eritrocitario: Conocido como promedios corpusculares este se obtiene por mediacin directa de los glbulos rojos al momento de hacer el recuento de eritrocitos, en un promedio de 75.000 clulas. El promedio de Hemoglobina corpuscular (PCPC): Se obtiene con frmulas matemticas incorporadas al computador del equipo sobre la base del recuento de eritrocitos, el hematocrito y hemoglobina. Ancho de distribucin de los eritrocitos (ADE): Corresponde al coeficiente de variacin en el tamao de los eritrocitos que se obtiene por mtodos electrnicos, clasificando morfolgica las anemias.

El histograma de eritrocitos da la informacin necesaria para determinar el promedio volumen corpuscular (PVC) y el ADE. Muestra el tamao normal de las clulas rojas. El histograma tpico, muestra una poblacin entre 30 y 130fl con una distribucin Gaussiana, y una segunda poblacin, ms pequea, conocida como dedo entre 130 y 185fl que aparece a la derecha de la poblacin principal. Los dedos del histograma presentan eritrocitos aglutinados o artefactos. Mediante el histograma es posible identificar varias poblaciones de eritrocitos cunado se presentan.

Parmetros leucocitarios: Conocido como leucograma, corresponden al recuento total y diferencial de leucocitos, siendo este, criterio indispensable para definir las leucocitosis y la leucopenia. Son bien conocidas las alteraciones en el recuento total de leucocitos en los procesos infecciosos.

Recuento diferencial de leucocitos: Los leucocitos son sometidos a un agente ltico que acta sobre la membrana y el citoplasma, provocando un encogimiento de la membrana celular alrededor del ncleo. De acuerdo al volumen del ncleo, el histograma de leucocitos muestra tres poblaciones.

La primera poblacin ncleos entre 30 y 90 fl, constituida por linfocitos. La segunda poblacin ncleos entre 90 y 160 fl en la parte baja del histograma y representa los monocelulares (monolitos). La tercera poblacin, con ncleos entre 160 y 450 fl. Es la zona ms amplia del histograma y corresponde a los granulocitos.

A travs de estas tres poblaciones celulares se pueden ubicar otras poblaciones (anormales), que son sealizadas por el instrumento. De acuerdo a la distribucin de los histogramas se obtiene el recuento diferencial electrnico de leucocitos. El recuento diferencial obtenido por esta tecnologa se caracteriza por una alta especificidad y sensibilidad (97%), muy superiores a los mtodos convencionales.

Parmetros plaquetarios. El CH convencional no ha considerado el estudio de las plaquetas como parte integral del mismo, el CH electrnico no solo a recuperado el recuento plaquetario, sino que ha aportado nuevos parmetros que han demostrado ser de utilidad clnica. Los parmetros plaquetarios de nuevos hemogramas son:

Recuento de plaquetas los nuevos parmetros plaquetarios son importantes en diferentes entidades clnicas como alteraciones en el recuento de plaquetas pro infeccin y en los estados anmicos. El recuento de plaquetas por medios electrnicos se caracteriza por su alto grado de precisin (CV 4%) comparado con el de los mtodos convencionales (hasta mas de 60%). Volumen Medio Plaquetario (VMP).Es el tamao de la plaqueta expresado en la unidad de volumen fl. su resultado promedio es la medida electrnica del tamao de unas 3000 plaquetas. La utilidad clnica, est en la clasificacin etiolgica de las diferentes alteraciones plaquetarias como trombocitopenicas y no trombocitopenicas. Ancho de distribucin de las plaquetas (ADP): Presenta el coeficiente de variacin en el tamao de las mismas. El ancho de distribucin de las plaquetas desde el punto de vista morfolgico, representa una forma electrnica de cuantificar el tamao plaquetario. Plaquetocrito (Pto): Equivalente al Hto., se define como la relacin entre el volumen de la masa de plaquetas con la masa total de la sangre. Refleja la concentracin de las plaquetas, mas no la masa total de estas. El plaquetocrito se obtiene para clculos matemticos que relacionan el nmero de plaquetas por volumen y tamao de las mismas. Histograma de plaquetas: Se define como plaquetas las partculas con volumen entre 2 y 20 fl. El histograma plaquetario es ms sensible para determinar las trombocitopatias que los estudios convencionales de visin directa en los extendidos de sangre perifrica.

valores de referencia:

PARAMETROSNEONATOS1MES-11 AOSADULTOS

WBC 6000-19000/mm34500-12000/mm35000-10000NEUTROFILOS VA 6000-18000 1100-66002000-7000VR 45-75 %31-51 %54-62 %LINFOCITOSVA 2500-105001000-70001500-4000VR 41-61 %38-42 %30-40 %MONOCITOS VA 0-35000-1000200-800VR 0-10 %0-10 %4-10 %EOSINOFILOS VA 0-20000-7000-450VR 0-5 %0-5 %1-3 %BASOFILOSVA 0-4000-1000-200VR 0-2 %0-2 %0-1 %RBC4.1-6.7X10/63.8-5.3X10/64.5-5.5 10/6HB15-22 g/dl10.5-14.4 g/dlM M 12-16 g/dl H 14-18 g/dlHTO44-66 %32-43 %M 40-44 %H 46-50 %VCM102-115 fl72-90 fl80-100 flHCM33-39 pg24-32 pg27-32 pgCHCM28-36 g/dl28-36 g/dl32-36 g/dlPLAQUETAS 150000-450000 150000-450000 150000-450000

4. FROTIS DE SANGRE PERIFERICA

La observacin de la morfologa celular es de gran utilidad en el diagnstico de diversas patologas como son: anemias, leucemias, prpuras parsitos, etc. La realizacin de la lamina de frotis de sangre perifrica debe ser impecable, procurando que este no sea excesivamente grueso, con ello se conseguir una distribucin acertada de las clulas en diferentes reas del frotis cuyo conocimiento es fundamental, tanto para la morfologa eritrocitaria como para la realizacin de la formula leucocitaria o recuento diferencial.

En cualquier mtodo que se utilice para la realizacin del frotis, deber tenerse en cuenta las siguientes precauciones:

Todo el material que se utiliza debe estar limpio y desengrasado. Si es de puncin digital, no deber emplearse la primera gota. Si es de puncin venosa, se deber hacerse con la mxima rapidez posible.

5.1 Mtodo de los dos porta objetos: se debe colocar una gota de sangre en la parte anterior de la superficie del porta objeto. Formando un ngulo de aproximadamente 45 o, colocar el otro porta objeto sobre la gota de sangre, esperando que por capilaridad toda la sangre se distribuya, no dejando que llegue al extremo y luego desplazarlo suavemente, a velocidad moderada, en sentido longitudinal hasta que la gota de sangre quede bien extendida.

El grosor del frotis sanguneo, varia segn el ngulo que se forme entre los dos porta objetos. El frotis se deja sacar a temperatura ambiente y en posicin horizontal, este tendr tres reas de diferente grosor y con diferente distribucin de componentes formes de la sangre.

Zona excesivamente gruesa(cabeza): se halla en la regin inmediata al punto de partida de la extensin. Zona excesivamente fina: corresponde al final de la extensin es un rea donde las clulas terminan con una disposicin acordonada. En esta zona existe un exceso de granulocitos y monocitos. Zona ideal: corresponde a la regin intermedia del frotis y en ella existe una distribucin equilibrada de las clulas.

5.2 Reactivos para la coloracin

Colorante de Wright . Solucion de buffer

5.2.1 Coloracin: Para conseguir los mejores resultados hay que colorear las extensiones en cuanto se hayan secado al aire, sin dejar en ningn caso mas de una hora.

El frotis secado al aire se coloca sobre una gradilla de tincin. La extensin se cubre en su totalidad con el colorante sin diluir durante un minuto. El alcohol metlico fija la sangre. Se diluye el colorante con el buffer, aproximadamente el mismo volumen hasta que aparezca la escarcha metlica, para conseguir la mezcla del colorante con el diluyente se sopla con suavidad en varios puntos de la placa, para establecer corrientes suaves, igualando as la distribucin. Se deja actuar este colorante diluido durante dos minutos. Sin mover el porta objetos se lava con agua destilada hasta que las partes mas delgadas sean de un color rosado. El colorante que haya quedado en el vidrio de la lmina se limpia con una gasa limpia y se deja en forma vertical hasta que seque.

5.2.2 Lectura del recuento diferencial de leucocitos: Con objetivo de 100x del microscopio ptico, en la parte media del frotis, se comienza en un punto no muy cercano al borde y se va recorriendo a lo ancho del frotis, hasta llegar a contar un total de 100 leucocitos consecutivos diferencindolos morfolgicamente. Se realizan siempre a muestras de bebes y a muestras que se quiera confirmar el resultado.

A diferencia de otros tejidos, la sangre esta constituida por tres tipos de clulas muy diferentes entre s, tanto del punto de vista morfolgico, estructural y de funcional.

Clulas nucleadas(leucocitos), con funcin diversa. Clulas anucleadas (hemates) con funcin respiratoria. Seudo fragmentos citoplasmticos(plaquetas),con funcin hemosttica.

Los leucocitos o glbulos blancos, constituyen un conjunto de clulas con funcin diversa, como la defensa del organismo frente a diversas sustancias o agentes patolgicos, estas clulas tienen en comn las caractersticas de tener ncleo y organelos citoplasmticos, lo que permite su fcil diferenciacin morfolgica con los hemates y las plaquetas.

Desde el punto de vista morfolgico, los leucocitos se han clasificado en dos grupos:

Polinucleares: Cuyo ncleo es lobulado de apariencia mltiple (neutrfilo,eosinfilo y basfilo) Mononucleares: Con ncleo nico (linfocito y monocito)

5.2.2.1 CARACTERISTICAS MORFOLOGICAS DE LOS LEUCOCITOS

Neutrofilo: Es el 60-65 % de los leucocitos. Su dimetro est entre 10 y 14 micras. El citoplasma es ligeramente acidfilo, con granulaciones de carcter neutro, distribuidas en el citoplasma. El ncleo de color violeta oscuro y cromatina densa se caracteriza morfolgicamente por presentar lbulos fragmentados o separados entre s, por puentes de cromatina.

Eosinofilos: es el 1-3 % de los leucocitos. Su dimetro es de 10-12 micras. El citoplasma repleto de granulaciones, constituidas por grnulos redondos y de gran tamao, casi nunca cubren el ncleo; estos contienen sustancias de carcter bsico, fijando colorantes cidos como la eosina, dando un color pardo o anaranjado. El ncleo posee una coloracin violeta, es bilobulado, forma masas simtricas unidas por uno de sus extremos.

Basofilos: Su proporcin, es inferior al 1% de los leucocitos. Su dimetro es de 12-14 micras. El citoplasma acidfilo, forma grnulos irregulares, fijando colorantes bsicos como el azul de metileno. Las granulaciones, cubren el ncleo, el cual es de forma irregular con lobulaciones.

Linfocito: Constituye el 20-40 % del total de los leucocitos, su dimetro es de 7-18 micras. El citoplasma es escaso o abundante; su coloracin es azul plida, debido a su Basofilia, que le confiere el contenido elevado de RNA, la granulacin azurfila puede ser escasa y se encuentra en el citoplasma. El ncleo redondo, cromatina homognea.

Monolitos: Del 2-10 % del total de leucocitos; el dimetro es de 14-20 micras. El citoplasma es abundante y gris azulado: en ocasiones se halla vacuolado, con granulaciones finas azurfilas. El ncleo localizado en el centro, casi siempre es redondeado con invaginaciones, presentando variaciones dado su gran tamao, ocupa gran parte del citoplasma y su cromatina es laxa, filamentosa e irregular, formando una trama reticular.

5.3 Morfologa de los glbulos rojos: Para el diagnostico de algunas anemias, presentan alteraciones caractersticas esferocitosis hereditaria, hemoglobinopatia S, eliptocitosis congnita. Asimismo, ante cualquier anemia de origen desconocido, resulta til valorar la intensidad de la policromatofilia, presencia de normoblastos, punteado basfilo, anillos de Cabott, cuerpos de Howell-Joly.

5.3.1 Alteraciones morfolgicas eritrocitarias: Se pueden clasificar en cuatro grandes grupos: alteraciones de tamao, forma, color y policromatofilia adems de la presencia de inclusiones.

5.3.1.1 ALTERACIONES DE TAMAO (anisocitosis): Son de dos tipos fundamentales:

5.3.1.2 Macrocitosis: Cuando el hemate es de tamao y VCM, superior al glbulo9 rojo normal. Se observa en anemias diseritropoyeticas, cuando hay un aumento de eritropoyesis, enfermedades hepticas.

5.3.1.3 Microcitosis: Es la existencia de hemates cuyo tamao y VCM es inferior al del glbulo rojo normal, las causas mas frecuentes es la anemia ferropnica y la talasemia.

5.3.1.4 Las alteraciones morfolgicas (Poiquilocitosis): Las ms frecuentes son: esferocitos codocitos drepanocitos, eliptocitos, equinocitos, acantocitos, dacriocitos, esquistocitos, estomatocitos.

5.3.1.5 Las alteraciones del color: Reflejan las anormalidades en el contenido hemoglobnico.

5.3.1.6 Hipocromia: Los hemates se tien dbilmente, por la disminucin de hemoglobina. Si no existe una enfermedad que la explique, se debe pensar en una anemia ferropenica o en una talasemia.

5.3.1.7 Policromatofilia: Los hemates con tonalidad gris azulada, esto es signo de inmadurez celular, observndose en ciertas anemias acompaadas de reticulocitos en sangre perifrica. Los hemates se caracterizan por ser de mayor tamao y su coloracin azulada, debido al contenido de ARN.

5.4 Rangos de Anisocitosis de acuerdo al VCM.

Ligera: 95-108 ft (macrocitos), 76-80 ft(microcitos)Moderada: 109-120 ft(macrocitos),66-75 ft(microcitos)Marcada: mayor de 120(macrocitos),Menor de 65(microcitos)

5.5 Rangos de cuantificacin de los glbulos rojos:

Normal: anisocitosis e hipocromia: 0-5, poiquilocitosis 0-5, policromatofilia 0-2Ligera: anisocitosis 6- 15,poiquilocitosis 1-5, policromatofilia 2-3Moderada: anisocitosis 16-30,poiquilocitosis 6-15, policromatofilia 3-4Marcada: anisocitosis e hipocromia mayor de 30, poiquilocitosis mayor de 30, policromatofilia mayor de 4.

La anisocitosis e hipocromia y la policromatofilia se lee en 10 campos. La poiquilocitosis se informa la que predomina.

5.6 Normoblastos: Se informan por porcentaje su presencia. Si se encuentran ms del 10 %, se realizar correccin al recuento leucocitario empleando la siguiente formula:

Leucocitos corregidos: ____Nmero de leucocitos contados x 100 _________________________________ Nmero de normoblastos + 100El recuento de normoblastos ser, nmero de normoblastos observados por 100 leucocitos, esta relacin se hace con el diferencial en el FSP.

Para confirmar el recuento de leucocitos se cuentan en pequeo aumento (10 X) 3 campos donde los glbulos rojos apenas se toquen entre s, se promedian por campo y se multiplica por 300.

6. RECUENTO DE RETICULOCITOS

Un Reticulocito es un eritrocito que se halla circulando en sangre perifrica en estado inmaduro o sea que aun posee restos de cromatina nuclear.

6.1 Fundamentos de Mtodo: Esta tcnica de coloracin se basa en la precipitacin de dichos restos de cidos nucleicos por medio del NEW METHYLENE BLUE, formando una red granulada dentro del eritrocito, sin destruirlo.

6.2 Reactivos: Colorante Reticulocitos: New Methylene Blue, listo para usar.

6.3 Muestra: Sangre Venosa anticoagulada o Sangre Capilar.

6.4 Procedimiento: Usando una pipeta para glbulos tome sangre capilar o venosa hasta la marca 0.5 y luego a 1.0 con el colorante. Lleve la mezcla al bulbo de la pipeta, mezcle bien y deje en reposo 10 minutos.Pasado el tiempo y descartando la primeras gotas, coloque una gota de la mezcla en una lamina portaobjetos limpia y efecte un extendido de la manera usual.Deje secar y examine directamente al microscopio usando aceite de inmersin y objetivo 100x

Calculo:

% Reticulocitos= No reticulocitos por 500 Eritrocitos X0.2

% Reticulocitos= No de reticulocitos x 100 ----------------------------------- 1000

Interpretacin: Mediante este mtodo normalmente se encuentran valores comprendidos entre 0.5 y 1.5 % en adultos. En recin nacidos entre 3 y 6 %

Notas

Una buena coloracin depende del extendido, este no debe ser muy grueso y se debe evitar la formacin de grumos y estras.Usar placas preferiblemente nuevas, sin ralladuras y libres de grasa.

7. HEMOSTASIA Y COAGULACION

Complejo proceso mediante el cual la sangre se mantiene en estado fluido dentro de los vasos sanguneos. Es dependiente de la integridad vascular, el recuento de plaquetas, su funcin y las protenas plasmticas de la coagulacin. La definicin incluye una interaccin entre estos tres compartimientos adems de los sistemas.

7.1 Tiempo parcial de Tromboplastina (PTT): Al aadir fosfolpidos plaquetarios al plasma, se activan los factores de la coagulacin necesarios para la formacin de protrombinasa intrnseca; esta activa la protrombina y la trombina convirtiendo el fibringeno en fibrina. El tiempo parcial de tromboplastina (PTT), evala anormalidades de los factores de la va intrnseca, especialmente detecta deficiencias del factor VIII,IX,XI,XII, precalicreina y kiningeno, y tambin en factores II,V,X o fibringeno.La prueba se emplea principalmente para Monitoreo de pacientes con heparina, donde la formacin del coagulo es proporcional al nivel de heparina utilizado.En pacientes que reciben anticoagulantes orales, los factores II,VII,IX,X, se disminuyen y el PTT se puede prolongar.La presencia de inhibidores no especficos, tales como anticoagulante lpido puede prolongar el PTT

El PTT es una importante prueba clnica, con amplia aplicacin en el diagnstico de desordenes de coagulacin y monitoreo teraputico de enfermedades hemorrgicas o trombticas.

7.2 Tiempo de protrombina (PT): La tromboplastina mstica y calcio adicionados a plasma citratado, reacciona con los factores V,VII,X, para formar un compuesto activo que convierte la protrombina en trombina. La trombina al actuar sobre el fibringeno forma la fibrina.

El reactivo inicia la va extrnseca de la coagulacin y las vas comunes. Despus de la adicin de la tromboplastina y el calcio, el tiempo de coagulacin obtenido refleja la actividad de los factores II,V,VII,X, fibringeno. La prueba se emplea principalmente para

Detectar deficiencias simples o combinadas del sistema de coagulacin extrnseco, indicativos de trastornos en la coagulacin hereditarios o adquiridos, enfermedad heptica o deficiencia de vitamina K.

Control de terapia con anticoagulantes orales.

La organizacin mundial de la salud unida al comit internacional de trombosis y hemostasis ha recomendado reportar el resultado del PT en pacientes con anticoagulantes orales usando los valores INR (Radio Internacional Normalizado).

INR=R (isi)

Dnde PT del paciente ---------------------- PT control

El valor del ISI es determinado para cada reactivo y en la mayora va de acuerdo con las normas de l OMS.

8. CALIBRACION DEL TIEMPO DE PROTROMBINA

S un reactivo es de diferente lote y el valor de fibringeno del plasma calibrador cambia, se debe calibrar. Verifique el nivel de la solucin de referencia. Realice una purga con la funcin PGR: Seleccionar PRIME. Reconstituya 1 vial de plasma calibrador con 1 ml de agua destilada. Hidratar por 30 minutos, agitar suavemente. Actualice los datos del ISI y nmero de lotes de los reactivos en la opcin PGR: DATOS DE REFERENCIA. Sirva el plasma calibrador en una copilla de 0.5 ML y ubquelo en la posicin Pool del rotor de muestras. Sirva 2 Ml del plasma calibrador en una copilla de 0.5 ml y ubquelo en la posicin Pool del rotor de muestras. Sirva 2 ml de emulsin de referencia en la posicin Dil del rotor de muestras. Dispensar el reactivo de Pt en el reservorio 1. Colocar rotor nuevo. Seleccionar la prueba de PT-FIB en pantalla. Enter. Con el cursor seleccionar la opcin Calibracin enter. Actualizar los datos de ISI y nmero de lotes. Enter. Seleccionar Start con el cursor. El equipo imprime la curva de calibracin con los datos de la Media, CV y coeficiente de correlacin r2 Se obtiene los siguientes valores de coeficientes de variacin: CV(PT)= 100 %