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Estructura, organización y manipulaciónde regiones específicas del genoma

Programas

1.1 Aislamiento, caracterización, manipulación y regulaciónde los gene s del metabolismo nitrogenado de E. coli yotros microorganismos.

1.2 Aislamiento y caracterización del gene de la enzima pe­nicilino acilasa.

1.3 Aislamiento, caracterización y manipulación de genesque codifican para proteínas que integran la membra­na externa de bacterias patógenas.

1.4 Disección y caracterización de elementos molecularesinvolucrados en la replicación del DNA de vehículos dedonación.

1.5 Estudios de polimorfismos en el DNA de la poblaciónmexicana.

1.6 Genética de enterotoxinas.

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Programa 1.1 Aislamiento, caracterización, manipulacióny regulación de los genes del metabolismo nitrogenado deE. coli y otros microorganismos.

Como modelo de estudio se han seleccionado los gene sestructurales de las enzimas glutamino sintetasa, glutamatodeshidrogenasa y glutamato sintasa, ya que codifican paraenzimas clave en el metabolismo nitrogenado.

Nuestro enfoque ha consistido en analizar la expresiónde los genes estructurales para estas enzimas en diferentescondiciones de crecimiento, así como por la influencia dediversas mutaciones en los genes involucrados en su regu­lación.

Por otro lado, la caracterización a nivel molecular de cómoocurren los eventos de activación y/o represión de estos ge­nes, ha sido uno de los enfoques para conocer las caracte­rísticas funcionales y estructurales de los elementos que con­trolan la asimilación de nitrógeno en enterobacterias.

Asímismo, mediante el uso de una metodología fisiológi­ca y del aislamiento y la caracterización genética de muta­ciones en genes estructurales y regulatorios y en las regio­nes de control, se pretende llegar a tener un panorama decuáles son los mecanismos que gobiernan dicha regulación.

Proyectos específicos

Parámetros fisiológicos y genéticos que afectan la sensi­bilidad de E. coli al metilamonio.O. Santana y L. Servín.1985/T/SIDGBM

Obtención y caracterización de cepas mutantes de E. colihipersensibles al metilamonio.T.C. Olamendi y L. Servín.1985/T/SIDGBM

Aislamiento y caracterización de los genes que codificanpara la enzima glutamato sintasa de Escherichia coli K-12.G. Gosset, B. Becerril, G. Oliver y F. Bolívar.1982/PIDGBM

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Aislamiento y caracterización del gene que codifica parala enzima deshidrogenasa glutámica de Escherichia coli K-12.B. Becerril, F. Valle, L. Riba, E. Merino y F. Bolívar.1982/PIDGBM

Aislamiento y caracterización de los genes que codificanpara la glutamato sintasa y la deshidrogenasa glutámica deS. typhi.J.L. Puente, M. Fernández, B. Becerril, F. Bolívar y E. Calva.1986/I/DGBM

Programa 1.2 Aislamiento y caracterización del gene quecodifica para la enzima penicilino acilasa.

La enzima penicilino acilasa se utiliza en la conversióndel antibiótico penicilina, en el ácido 6-aminopenicilánico;este a su vez, es utilizado en la síntesis de penicilinas semi­sintéticas.

Con el fin de caracterizar y manipular este gene, se halogrado aislar lo del genoma de la bacteria E. coli ATCC11105. De esta manera se procede a determinar la secuen­cia nucleotídica del gene para poder manipulado a nivel finoy colocado bajo la expresión de un promotor más fuerte yregulable.

Además se pretende trabajar en aspectos relacionados conel procesamiento del precursor de esta enzima, compuestade dos polipéptidos que provienen, aparentemente, de unprecursor común.

Proyectos específicos

Determinación de la secuencia nucleotídica del gene es­tructural de la penicilino acilasa de E. coli.

G. Oliver, F. Valle, G. Gosset y F. Bolívar.1984/P/SIDGBM

Localización y caracterización de la región regulatoria delgene de la penicilino acilasa de E. coli.F. Valle, G. Gosset y F. Bolívar.1985/P/SIDGBM

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Programa 1.3 Aislamiento, caracterización y manipulaciónde gene s que codifican para proteínas que integran la mem­brana externa de bacterias patógenas.

Se pretende contribuir al conocimiento de la estructurade la membrana externa de S. typhi, agente causal de la fie­bre tifoidea. Esta enfermedad es de gran incidencia en nues­tro país y por ser S. typhi altamente invasiva, presenta gra­ves riesgos para la salud. Interesa conocer qué proteínasprincipales de la membrana externa corresponden a las des­critas para E. coli y cuáles son particulares para S. typhi. Enun futuro, se buscarán relaciones entre proteínas alteradasy cambios en invasividad, resistencia a fagocitosis, o adhe­rencia.

Para ello se trabaja en el estudio de las proteínas princi­pales de la membrana externa mediante el aislamiento y lacaracterización de sus respectivos genes. La secuencia nu­cleotídica de cada gene permitirá postular qué regiones sonregulatorias y qué estructura primaria tiene la proteína co­rrespondiente.

Los genes aislados permitirán la sobreproducción de cadapolipéptido. Así, se prodrán probar las propiedades inmu­nogénicas de cada proteína, en conjunción o en ausencia depolisacáridos. Además se podrán generar anticuerp~s espe­cíficos, lo cual permitirá correlacionar genes con proteínasde un patrón electroforético.

Proyectos específicos

Aislamiento y caracterización de los genes para proteínasde membrana externa de S. typhi por hibridación con los ge­nes ompF, ompC y phoE de E. coli y ompA de S. typhimirium.A. Hernández, V. Flores, ].1. Puente, M. Ferhández y E.Calva1985/P/S/DGBM

Aislamiento de gene s para proteínas de la membrana ex-

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terna de S. typhi por inmunodetección con sueros de pacien­tes con fiebre tifoidea.

J.1. Puente, M. Fernández y E. Calva.1985/P/S/DG BM

Programa 1.4 Disección y caracterización de elementosmoleculares involucrados en la replicación del DNA de ve­hículos de donación.

Se busca profundizar en el conocimiento de los mecanis­mos moleculares que subyacen y regulan la replicación delDNA en un sistema bién conocido. Se utilizan técnicas demanipulación fina de ácidos nudéicos (ingeniería genética),y métodos genéticos clásicos. El conocimiento generado seha aplicado en el diseño y desarrollo de vectores de dona­ción mejorados.

Proyectos específicos

Estudios de transcripción en Escherichia coli en el orígendel plásmido pBR3ZZ.M. Zurita, H. Lomelí, J. Osuna y X. Soberón.1983/T/DGBM/USQM

Aislamiento del sustrato mínimo de RNAsa H, eficienteen replicación, en plásmidos tipo ColE 1.J. Cruz y X. Soberón.1984/T/DGBM/USQM

Programa 1.5 Estudios de polimorfismos en el DNA de lapoblación mexicana.

El propósito de este programa es determinar cómo los si­tios polimórficos en el DNA humano varían en diversos seg­mentos de la población mexicana. Este conocimiento podríapermitir diagnosticar portadores de genes defectuosos paradiversas anomalías congénitas.

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Proyectos específicos

Estudio descriptivo y estadístico sobre haplotipos relacio­nados con el gene de la fenilalanina hidroxilasa, en familiascon historia de fenilcetonuria.H. de la Vega, M. Fernández y E. Calva.1985/P/S/DGBM

Desarrollo de un sistema de diagnóstico de la fibrosis quís­tica con base en la hibridación de ácidos nucleicos.M. Fernández, H. de La Vega y E. Calva.1986/I/S/DG BM

Programa 1.6 Genética de enterotoxinas.

Campylobacter jejuni es el microorganismo causal de unaparte importante de las enteritis tanto en países en vías dedesarrollo, como en los desarrollados. Esta patogenicidad hasido reconocida en los últimos 10 años, dadas las dificulta­des para crecer el microorganismo en el laboratorio. Se hadeterminado que C. jejuni sintetiza una enterotoxina simi­lar a la enterotoxina lábil al calor (LT) de E. coli y la CT de

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Vibrio cholerae. Por otro lado, también se ha postulado queS. typhi, el agente causal de la fiebre tifoidea, posee una en­terotoxina similar a CT, aunque no se ha caracterizado suestructura ni su función.

Interesa conocer en qué elementos genéticos se encuen­tran los genes que codifican para las enterotoxinas de C. je­

juni y S. typhi. Éstos pudieran estar en el cromosoma, en unplásmido, en un transposón, o en un bacteriófago. Pudieraexistir un gene regulatorio específico además del estructural.

La caracterización de los genes para estas enterotoxinaspermitirá entender su similitud con las de E. co/i y con lade V. cholerae. Asímismo, se podrá empezar a conocer so­bre el uso de codones y las características de las regionesregulatorias. En términos de biotecnología, ésto podría per­mitir el diseño de detectores de DNA específicos para cadamicroorganismo enteropatógeno.

Proyectos específicos

Caracterización de plásmidos y fagos en cepas toxigéni­cas y no toxigénicas de C. jejuni.H. de La Vega, M. Vázquez y E. Calva.1985/P/S/DGBM

Clonación del genoma de cepas toxigénicas de C. jejuni:búsqueda del gene de la enterotoxina por inmunodeteccióno hibridación de ácidos nucleicos.

H. de La Vega, M. Vázquez y E. Calva.1985/P /S/DG BM

Caracterización de la enterotoxina de Salmonella typhi.H. de La Vega, M. Vázquez y E. Calva.1986/I/S/DG BM

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