SEPARACION Y ESPECTRO DE ABSORCION DE PIGMENTOS VEGETALES

Que son los pigmentos vegetales?En general, el color que presenta un determinado tejido u órgano vegetal, depende del predominio de un pigmento o de la combinación de varios de ellos, los “pigmentos” Son Moléculas capaces de absorber y reflejar la luz, estos les dan el color característico a las plantas.

ClorofilaLas mas comunes Clorofila a: que

tiene un núcleo de magnesio y un radical del grupo metilo en el anillo a.

Clorofila b: tiene un núcleo de magnesio y un radical del grupo formilo(aldehido) en el anillo b. Park s. Novel. physicochemical and enviromental plant physilogy, fourth edition . Capitulo 5

Carotenos Absorben la mayoría

de luz azul y verde en el espectro.

Están constituidos por 40 átomos de C.

A la cadena principal se ligan 8 unidades de isopreno que se ligan 4 a 4 con dobles enlaces.

Park s. Novel. physicochemical and enviromental plant physilogy, fourth edition. Capitulo 5

Xantofilas La xantofila o xantófila es una sustancia química que realiza acción fotosintética y que pertenece al grupo de los carotenoides. Se puede encontrar en la hojas de las plantas, pero también en semillas como la del maíz presenta una coloración que varia del amarillo, naranja al rojo pardo.

Cromatografía La cromatografía es una técnica de separación física de mezclas, la cual mediante el uso las diferentes fuerzas de adsorción que presentan en los compuestos y la velocidad con la que son arrastrados los compuestos sobre un soporte revela la identidad de los componentes de una mezcla. La cromatografía usa el principio de una fase móvil y una fase estacionaria.

Espectrofotómetro La palabra espectrofotómetro se deriva de la palabra latina spectrum, que significa imagen, y de la palabra griega phos o photos, que significa luz. El principio de su funcionamiento es usar la luz de una lámpara de características especiales la cual es guiada a través de un dispositivo que selecciona y separa luz de una determinada longitud de onda y la hace pasar por una muestra.

Espectro de absorción Es espectro de absorción es el rango de energía lumínica en el que los pigmentos vegetales logran un punto máximo para funcionar el cual se representa en graficas comparativas con el espectro de luz o su rango de actividad.Park s. Novel. physicochemical and enviromental plant physilogy, fourth edition. Capitulo 4

Metodología

Extracción y separación de

pigmentos.

Se tritura la espinaca por 10 seg En un mortero

para pasar a un tubo se ensayo 50ml con tapón

.

• Se tritura para romper la pared celular de las hojas y poder separar los pigmentos del resto de sus componentes .

Añadir 4 ml de acetona al tubo

de ensayo.

• Para disolver ya que los pigmentos son insolubles en agua y sus polaridad es a fin con los disolventes .dejar en reposo por 10 min y agregar

4ml de agua destilada

se agregara 3 ml de éter de petróleo y se agitara por 5

segundos.

•El éter de petróleo funciona como separador de los pigmentos

Se dejara reposar hasta que los solventes se

separen y los pigmentos hayan sido extraídos en la capa

superior

Con una pipeta Pasteur se sacara la solución superior

verde oscuro evitando mezclar las dos capas. Esta será la muestra

utilizada para correr la cromatografía.

Se tomara una tira de papel de cromatografía

mida 2 centímetros desde la parte inferior y se marcara un pequeño

punto con lápiz

Con un tubo capilar se coloca el extracto sobre

el punto marcado anteriormente sobre el papel de cromatografía.

Se debe realizar el montaje de la

cromatografía montando el papel cromatografico

en un tubo de ensayo tapado y el disolvente.

• El disolvente hará que los pigmentos corran a través del papel debido a su polaridad

• Para que el montaje sea correcto el papel no debe tocar los bordes del tubo finalmente Se dejara correr la cromatografía en la oscuridad o con luz difusa

Determinación del espectro de

absorción de los pigmentos

fotosintéticos

Se recortara las cuatro bandas principales de

pigmentos de su cromatografía

•La banda gris oscura aparecerá entre carotenos y xantofilas deberá ser desechada

Se colocara en tubos de ensayo independientes, los

trozos de las bandas de clorofila a y b y xantofilas en

2 ml acetona y los carotenoides en 2 ml de éter

de petróleo.

Se deberá cubrir cada tubo de ensayo con papel de aluminio y se deberá guardar en hielo hasta

que se ejecute el espectro de absorción.

Se deberá ejecutar un espectro de absorción de cada solución de pigmento usando un espectrofotómetro.

luego se deberá iniciar las lecturas a 400 nm y

se deberá leer la absorbancia cada 20 nm de intervalo hasta 700

nm

Para clorofilas a y b se deberá reducir el intervalo a 10 nm entre 640 y 670.

Se deberá recalibrar el instrumento con

cada longitud de onda usando acetona o éter

de petróleo como blanco de acuerdo al

caso.

Los resultados deben ser registrados en una tabla,

para comparar los espectros de absorción de los

principales pigmentos se debe realizar graficas

comparativas de su rango de absorción.

Las graficas se realizan con el fin de comparar y observar

los picos de absorción de laboratorio con las

graficas de teoría.

Bibliografía. Park s. Novel

(2009).physicochemical and environmental plant physiology, fourth edition . Los Angeles, California. Estados unidos. Academic press.

Martínez F. G. ( 1995 )elementos de fisiología vegetal . Edición Mundi- prensa .

Gracias