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Laboratorio N 02 - Concentracin de microorganismos1. Objetivos

Determinacin del nmero de campos en toda la celda Sedgwick - Rafter o el cubreobjetos en el mtodo de la franja. Contar correctamente algas presentes por campo. Determinar la concentracin de los microrganismos (algas). Determinar cul de los dos mtodos es el ms adecuado para los distintos fines relacionados al tratamiento de agua y microbiologa.

2. Fundamento Terico

2.1. AlgasEn general las algas se definen similares a las plantas, organismos fotosintticos y acuticos, pero que a diferencia de las plantas no tiene verdadera raz, tallo, hojas o tejido vascular y tiene forma de reproduccin simple. Se encuentran en todo suministro de agua expuesto a la luz del sol aunque algunas algas se encuentran en el suelo y en superficies expuestas al aire. Conocer el nmero y clase de algas presentes en estanques de aguas negras es de gran utilidad para ver el avance del proceso de oxidacin. Las algas tienen la capacidad de modificar el pH, la alcalinidad, el color y la turbiedad.2.2. Conteo de algasEl objetivo de contar algas no es solamente establecer la poblacin (densidad) de clulas por mililitro que hay en un recipiente, sino tambin determinar numricamente el grado de divisin celular en un determinado tiempo. Los resultados permiten estimar en cierto modo la situacin de un cultivo y relacionarlo con la curva de crecimiento de esa poblacin alga. La metodologa empleada es la que utilizan la gran mayora de los laboratorios; consiste en anlisis cualitativo y cuantitativo; en este ltimo se emplea la cmara de Sedgwick-Rafter que es usada para fines de investigacin.a) Mtodo de sedgwick-rafterLa celda Sedgwick-Rafter es el dispositivo ms comnmente usado para el recuento de plancton en donde los organismos tienen que distribuirse uniformemente en toda la superficie de la celda, para ello se debe de contar con una muestra homognea.Se divide la celda en campos ya sea solo usando el microscopio mediante tangentes o con el micrmetro de Whipple.La concentracin se calcular multiplicando la cantidad de microorganismos promedio por campo y la cantidad total de campos en la celda, dividida entre el volumen de muestra analizada que es 1 ml. El tamao es de 50 mm x 20 mm x 1 mm con un volumen de 1ml. b) Mtodo de la FranjaSimilar al anterior mtodo, se analiza una gota de muestra sobre un portaobjetos y sobre la gota se coloca el cubreobjetos, sin dejar la presencia de burbujas, tomamos una divisin (campo) y contabilizamos la cantidad de microorganismos, posteriormente se toma otra divisin igual y tangente a la anterior, hasta cubrir toda la celda.Si la muestra contiene mucha cantidad de organismos se procede a diluirla.Podemos ayudarnos con la retcula del ocular de Whipple para hacer el procedimiento ms preciso.2.3. Micrmetro de whipple

Lo utilizamos para hacer el procedimiento ms preciso, el cual es un disco de vidrio que contiene un retculo grabado que divide el campo en cien partes o cuadraditos iguales. Para calibrar el microscopio se coloca el micrmetro de objetivo sobre la platina del microscopio y la cuadricula de Whipple en el ocular, se hace la superposicin de ambos y de esta manera se puede medir el lado de uno de los cuadritos.

2.4. Concentracin de algas

Es la cantidad de clulas de determinada especie de alga en un mililitro de muestra. Es importante para la determinacin para poder saber el tratamiento adecuado a las aguas que son puestas a tratamiento.

3. Materiales Procedimiento

3.1. Materiales

Microscopio compuesto

Gotero

Muestra de algas

Cubre Objetos

Porta Objetos

Pera

Celda Sedgwick Rafter

Contador

Pipeta 1ml

Probeta

1

3.2. Procedimiento

a) Mtodo de la celda Sedgewick Rafter

1. Extraer con una pipeta 1ml de la muestra de algas.2

2. Con la pipeta dejar caer el volumen de la muestra de algas sobre la celda Sedgewick Rafter.3

3. Girar en sentido antihorario el cubre objeto de la celda para sellarlo sin producir burbujas.

4. Colocar la celda Sedgewick Rafter sobre la platina y luego seleccionamos una columna, utilizamos el ancho de la celda haciendo que los campos sean tangentes en una misma columna.4

5. Calculamos el nmero de campos a lo largo de la celda:5

N de campos a lo ancho ----------- > 20mmN de campos a lo largo ----------- > 50mm

6. Determinamos el nmero de campos en todo la celda:N total de campos en la celda =

7. Determinar el nmero promedio de microorganismos por campo:De la Tabla:Numero de campoNumero de microorganismos

1X1

2X2

....

nXn

N total de camposN total de microorganismos

=

Promedio de microorganismos por campo.8. Determinamos la concentracin de microorganismos Concentracin de m.o. =

b) Mtodo de la franja:1

1. Extraer con el gotero un poco de la muestra de algas.

2. Con el gotero dejar caer una gota de la muestra de algas sobre el centro del portaobjetos luego se coloca encima el cubreobjetos.

3. Colocar el portaobjetos sobre la platina y luego seleccionamos una columna, puede ser el lado del cubreobjetos haciendo que los campos sean tangentes en una misma columna. 2

4. Determinamos con el microscopio con objetivo de 10x y luego objetivo con 43x, el nmero de campos observados y el total de algas encontradas.4

3

5. Determinamos el nmero de campos en todo el cubreobjetos:N total de campos = ) 2 en el cubreobjetos

6. Determinar el nmero promedio de microorganismos por campo:De la Tabla:Numero de campoNumero de microorganismos

1X1

2X2

....

nXn

N total de camposN total de microorganismos

=

Promedio de microorganismos por campo

7. Determinamos la concentracin de microorganismos Concentracin de m.o. =

c) Volumen de una gota:1

1. Con un gotero llene la probeta hasta 5 ml y contabilice el nmero de gotas.2. Hallamos el volumen de una gota:X gotas ----------- > Volumen de 5ml 1 gota ----------- > Vgota

4. Datos y/o observacionesLos datos obtenidos en el laboratorio son los siguientes: 4.1. Mtodo de la celda Sedgewick Raftera) Objetivo 10x10 campos

Cuadro de campo y numero de microrganismos:Numero de campoNumero de microorganismos

10

21

30

40

51

60

72

81

90

101

10 campos6 microorganismos

b) Objetivo 43x

Distancia de trabajo (DT)DT en el mtodo de la franja es menor por eso no se puede observar con el mtodo de la celda:DT= 0.5mme = 1mme = 0.1mm

DT= 9mme = 4mm

Mtodo de la franja

Mtodo de la celda

4.2. Mtodo de la franja:

a) Objetivo 10x10 campos

Cuadro de campo y numero de microrganismos:Numero de campoNumero de microorganismos

10

20

34

40

50

60

70

80

90

100

10 campos4 microorganismos

a) Objetivo 43x20 campos

Cuadro de campo y numero de microrganismos:Numero de campoNumero de microorganismos

10

20

30

40

54

60

76

80

90

100

110

120

130

140

150

160

170

180

190

200

20 campos10 microorganismos

4.3. Volumen de una gota:Numero de gotasVolumen

70 gotas5ml

5. Clculos y resultados5.1. Mtodo de la celda Sedgewick Raftera) Objetivo 10x10 de campos a lo ancho ----------- > 20mmN de campos a lo largo ----------- > 50mm

= 25 campos

N total de campos en la celda = 10 x 25 = 250 campos

= = 0.6

Concentracin de m.o. = =

b) Objetivo43xNo se pudo determinar nada debido a la distancia de trabajo.5.2. Volumen de una gota:70 gotas ----------- > Volumen de 5ml 1 gota ----------- > Vgota

0.07ml

5.3. Mtodo de la franja:

a) Objetivo 10xN total de campos = ) 2 = 100campos en el cubreobjetos

= = 0.4

Concentracin de m.o. = = 560

b) Objetivo 43xN total de campos = 2 = 400 campos en el cubreobjetos

= = 0.5

Concentracin de m.o. = = 2800

6. Conclusiones

Los datos obtenidos por el mtodo de la celda son ms confiables ya que el agua se evapora en menor cantidad que el mtodo de la franja. Si se realiza los dos el mismo da, ayudara a verificar cual es el mejor mtodo con ms precisin para la toma de una muestra por que estaran a las mismas condiciones. Aun agitando la muestra en el mtodo de la celda se observa que la disposicin de microorganismos no es uniforme por toda la celda. Con el microscopio nmero 14 del laboratorio no se puede visualizar las algas con la tcnica de la celda y objetico 43x. Las algas contabilizadas fueron las verdes, los microrganismos oscuros no fueron tomados en cuenta ya que se trataba de algas muertas.

7. Recomendaciones

En ambas tcnicas se debe evitar formar burbujas ya que no permite la adecuada identificacin de algas, adems que el volumen ser menor. Los conteos de la celda se deben hacer rpidamente ya que el agua que se encuentra expuesto a los rayos que vienen de la lmpara y se puede evaporar. La muestra debe ser agitada antes de captarla con los instrumentos para que la concentracin de microorganismos sea uniforme y precisa. Si no se logra ver con algn objetivo se debe realizar el clculo de la distancia de trabajo.

8. Bibliografa

http://195.55.247.234/webcalidad/estudios/indicadoresbiologicos/Manual_fitoplancton.pdfhttp://microalgasmodulo1.blogspot.com/2013/03/conteo-de-microalgas.htmlhttp://www.bvsde.paho.org/bvsacd/scan/013761/013761-07.pdfhttp://cidta.usal.es/cursos/ETAP/modulos/libros/cryptosporidium2.pdf

9. AnexosQu es el Cryptosporidium? El Cryptosporidium es un protozoario, parsito unicelular que vive en los intestinos de los animales y humanos. Este patgeno microscpico causa una enfermedad llamada criptosporidiosis. La forma inactiva del Cryptosporidium, llamada oocysto es excretada en las heces fecales (excremento) de las personas o animales infectados. El oocystos, que tiene una pared protectora resistente, sobrevive bajo una gran variedad de condiciones ambientales. Cules son los sntomas de la criptosporidiosis? El sntoma ms comn de esta enfermedad es una diarrea acuosa. Tambin puede haber espasmos abdominales, nausea, un poco de fiebre, deshidratacin y prdida de peso. Los sntomas se presentan de 4 a 6 das despus de la infeccin, pero pueden aparecer en cualquier momento entre el segundo y dcimo da pos-infeccin. Cmo se diagnostica y trata esta enfermedad? La Criptosporidiosis no puede ser diagnosticada solo por los sntomas. La diarrea acuosa es un sntoma de muchas enfermedades intestinales causadas por bacterias, virus o parsitos. Si se sospecha que el Cryptosporidium es causante de un padecimiento intestinal, el doctor requerir de pruebas especficas de diagnstico. Por el momento no hay medicamentos que puedan curarla. Las personas con un sistema inmune sano se recuperarn por si solas y aparentemente desarrollarn alguna inmunidad que los defendern de infecciones posteriores. Medicamentos antidiarreicos pudieran aliviar algunos de los sntomas. Cualquier persona con diarrea debe beber gran cantidad de lquidos para prevenir la deshidratacin. Cmo se dispersa el patgeno? Se puede infectar con Cryptosporidium cuando se pone algo a la boca que haya estado en contacto con las heces fecales de algn animal o persona infectada. Cuando a un gran nmero de personas le da criptosporidiosis, la fuente de infeccin puede ser rastreada en algunos casos, pero es imposible determinar el origen de muchos otros casos individuales de esta enfermedad. En los humanos este contacto se da ms por beber agua contaminada con este parasito. Cryptosporidium

10. Cuestionario

1. Cul es el mtodo ms recomendable? Explique.

El mtodo de la celda es lo ms recomendable ya que evita que se evapore mucha ms cantidad de agua adems la celda est diseada para que entre 1 ml de agua as la informacin es ms confiable y exacta.

2. Por qu es importante determinar la concentracin de microorganismos?

La concentracin de algas nos da la informacin de cuanto puede estar contaminada una muestra o cuerpo de agua y conforme a ello se realizan los diferentes procesos para el tratamiento de agua para eliminar o disminuir la posible contaminacin por parte de las algas dependiendo el uso.

3. Qu diferencia existe entre control preventivo y correctivo de microorganismos?

Control preventivo:En este tipo de control limitamos las sustancias nutritivas y otros factores que favorecen al desarrollo y reproduccin de los microorganismos como en las algas que se controla el fosforo y el nitrgeno adems de la luz como el as bacterias el fierro y las sulfobacterias los compuestos de azufre. Control correctivo:Es aplicar inhibidores para controlar o eliminar los microrganismos que son txicos para ellos en las bacterias se aplica cloro como un gran bactericida para el abastecimiento de agua, el sulfato de cobre contra las ferrobacterias, el ozono es tambin un gran desinfectantes contra los protozoarios el yodo utilizado en los virus.

4. Cmo se puede controlar el crecimiento de bacterias, hongos, protozoarios y virus?

Un control sobre bacterias y virus se realiza una reduccin de casi el 98% de nmero de coliformes mediante el proceso de coagulacin decantacin y filtracin en las platas de tratamiento de agua residuales. Adems, el cloro es empleado en aguas de abastecimiento, dejando concentraciones residuales de 0.5- 1.0 mg/l con lo dual asegura la eliminacin de coliformes en agua de consumo.Tratamiento UV El agua queda expuesta a luz ultravioleta (UV). La luz UV destruye gran parte de los microorganismos nocivos en el agua, incluidos aquellos que se suelen encontrar en las aguas subterrneas (como algunos virus y bacterias tambin un gran desinfectante contra los protozoarios). smosis inversa El agua pasa a gran presin a travs de un filtro de membrana con poros diminutos. De esta forma, se eliminan los minerales y los contaminantes, incluidos todos los microorganismos.

5. Cmo se controla el CRYPTOSPORIDIUM en el agua?

Tratamiento de agua Los oosistos del Cryptosporidium tienen gruesas paredes que pueden soportar ambientes hostiles que los hacen resistentes a los desinfectantes qumicos tales como el cloro, que es usado en forma tradicional en los sistemas de agua potable municipal y en las picinas. La remocin fsica de partculas del agua, por filtracin, que incluyan a los oocystos, el agua es bombeada de los ros o lagos a la planta de tratamiento donde se mezcla con un coagulante, que ayuda a sedimentar las partculas suspendidas en el agua. El mtodo de filtracin es el nico mtodo convencional usado en los Estados Unidos para controlar al Cryptosporidium. El ozono es un desinfectante potente que mata a los protozoarios como el oosistos de Cryptosporidium si se usa la dosis suficiente por un tiempo de contacto adecuado ElCryptosporidiumes resistente al cloro, pero se ha demostrado que es desactivado eficazmente por una dosis baja de luz UV, sin que se produzcan subproductos de desinfeccin

6. Qu inconvenientes produce el crecimiento de algas en sistemas de abastecimiento de agua y en zonas de recreacin (cianobacterias)?

Zonas de Recreacin En cualquier lugar donde se utilice el agua como base del ocio puede existir unfoco de enfermedades transmisiblessi previamente no se han adoptado las medidas higinicas necesariaslasalgas contribuyen al desarrollo de bacterias, virus y hongos, y que usualmente proliferan por tratamientos inadecuados del agua o por la presencia de nitratos.Las cianobacterias o algas verdeazuladas, otra de las sustancias contaminantes del agua que generan toxinas peligrosas para la salud, como las neurotoxinas y hepatoxinas.ReservoriosLas algas forman revestimiento verde sobre las paredes hmedas de los reservorios pero esto no tiene gran significado cuando estn en estado incipiente pero cuando alcanzan un desarrollo abundante crecen en las paredes de los sedimentadores y cuando se desprenden caen sobre la superficie de los lechos filtrantes obstruyndolos. Tuberas de conduccinLas algas corroen secciones de tubos de acero expuestas a la luz ya sea porque las algas modifican qumicamente el medio. Produciendo cido carbnico, silcico y oxlico intervienen en la corrosin as como la produccin de oxigeno puede oxidar el revestimiento del tubo de acero.

Microbiologa Sanitaria II15