BiologiaPràctica 2

Pràctica 2. Desnaturalització i mètodes d'identificació de les proteïnes IntroduccióUna manera de detectar la presència d'una proteïna en una dissolució és provocant la coagulació de la mateixa, bé per l'efecte de la calor o per l'addició de determinades substàncies. Per detectar fàcilment la presència de proteïnes en qualsevol material biològic hi ha diferents mètodes; entre els quals destaquen la prova de Biuret i la xantoproteïca. La prova de Biuret es basa en la reacció típica dels enllaços peptídics, en la qual els àtoms de coure del reactiu s'uneixen als grups amino d'aquest enllaç, el que provoca una reacció rosa-violàcia característica.Mitjançant la prova xantoproteïca es forma un compost aromàtic nitrat de color groc en ser tractades les proteïnes amb àcid nítric concentrat. Aquesta prova és aplicable a totes les proteïnes que contenen aminoàcids amb grups benzènics en la seva cadena lateral.

Material

- 10 tubs d'assaig.- Gradeta per a tubs d'assaig.- Pinces de subjecció de tubs d'assaig.- Vas de precipitats.- Bec Bunsen. - Trípode per vas de precipitats.

- Dissolució de clara d'ou.- Llet.- Àcid clorhídric.- Acetona.- Hidròxid sòdic.- Sulfat cúpric.- Àcid nítric.- Amoníac.

Procediment Desnaturalització 1. Prepara tres tubs d'assaig amb 3 mL de solució aquosa de clara d'ou (en proporció 1 a 6) i numera dels tubs. Fes el mateix amb altres tres tubs amb 3 mL de llet.2. Escalfa els tubs numerats amb el número 1 al bany maria. Observa i anota què passa. 3. A cada tub numerat amb el número 2 afegeix 0,5 ml d'àcid clorhídric (HCl) i s'escalfa al bany maria.Observa i anota què passa. 4. A cada tub número 3 afegeix 3 mL d'acetona o d'àcid acètic. Agita i deixa reposar uns tres minuts. Observa i anota què passa.Reconeixement de proteïnes1. Prepara quatre tubs d'assaig i numerals com I, II, III i IV. En els tubs I i II diposita 3 mL de dissolució aquosa de clara d'ou, i en els tubs III i IV afegeix 3 ml de llet.2. En els tubs I i III afegeix 2 mL de dissolució d'hidròxid sòdic o potàssic al 20%. Agita i a continuació afegeix 5 gotes d'una dissolució a l'1% de sulfat cúpric. Observa i anota què passa. 3. Als tubs numerats amb II i IV afegeix 3ml d'àcid nítric concentrat. Anota la coloració que observes. Escalfa a continuació els tubs al bany maria durant uns minuts i anota el que passa. Deixa refredar els tubs i afegeix 8 gotes d'amoníac concentrat a cada un. Anota el canvi produït.

Qüestions 1. Quines proteïnes són presents a la clara d'ou i en la llet? A què es deu la coagulació d'aquestes proteïnes? És un procés irreversible?2. Es produirà la reacció de Biuret en una dissolució d'aminoàcids lliures?3. Es pot emprar la prova de Biuret per detectar proteïnes a l'orina? Per què?4. Es pot aplicar la prova xantoproteïca per identificar qualsevol proteïna? 5. De quin color es tornen les dissolucions proteïques en afegir HNO3 concentrat? I quan s'escalfa? I quan s'afegeix amoníac?