Introducción a la Histología y

técnicas Histológicas

básicas

Que es la Histología?

Es la rama de la Anatomía que se encarga de estudiar los tejidos celulares de un organismo. También se le llama Anatomía microscópica.

El cuerpo humano esta compuesto por células, matriz intercelular y liquido tisular.

El liquido tisular transporta los nutrientes y oxigeno, así como drena a la sangre y vasos linfáticos los productos de desecho y el dióxido de carbono.

Microscopia de luz

Preparación de los tejidos

Los pasos para preparar los tejidos son:

Fijacion

Deshidratacion y aclaramiento

Inclusion

Corte

Montaje y tincion de los cortes

Fijación Tratamiento del tejido con sustancias químicas que no sólo retardan las alteraciones tisulares subsecuentes a la muerte sino que también conservan su configuración normal.

Deshidratación y aclaramiento

Debido a que una gran parte del tejido está constituida por agua, se aplica una serie gradual de baños de alcohol iniciando con alcohol al 50% y alcanzando de manera paulatina el alcohol al 100% para eliminar el agua (deshidratación). A continuación, el tejido se trata con xileno,una sustancia química que es miscible con parafina fundida. Este proceso se conoce como aclaramiento, ya que el tejido se torna transparente en xileno.

A las células les falta rigidez y se les proporciona con un soporte adecuado antes del corte, convencionalmente por inclusión.

Inclusión

Un medio de inclusión debe:

*Infiltrar el tejido en medio líquido

*Solidificarse por enfriamiento o polimerización para dar el soporte

a los pequeños detalles del interior de la muestra.

PARAFINA: PUNTO DE FUSIÓN 56º

Con una buena técnica se pueden obtener secciones de unas 5 micras e incluso menores.

Sección o corte

Eliminación de la parafina

Estufa a 60º para derretir la parafina

Rehidratación

No se debe permitir que la muestra se seque porque se causarían daños por tensión superficial.

Colorantes hidrosolubles para microscopía de luz.

Los más usados: Hematoxilina y eosina

TINCIÓN

Eosina 10 seg.

Hematoxilina eosina

Hematoxilina:*Tinte básico*Se une a ácidos nucleicos: ADN y ARN*Da color azuloso

Eosina:*Tinte ácido*Se une a componente básicos*Da color rosado

Lengua de rata

Wright

Tricrómica

Azul oscuro: núcleo

Rojo: músculo, queratina, citoplasma

Azul claro: mucinógeno, colágena

deMasson

Conducto deferente

Impregnación Argéntica

ÁCIDO PERYÓDICO DE SCHIFF

Magenta: moléculas ricas en glucógeno y carbohidratos.

Intestino delgado

Microscopía de luzGrupos de lentes que amplifican una imagen .

Luz: bombilla eléctrica.Lentes de objetivo.

Lentes del ocular aumentan la imagen en un factor de 10.Macro y micro métricos.

Imagen invertida.

TECNICAS DE

IMÁGENES

DIGITALES

El advenimiento de la computadora proporcionó un medio para capturar imágenes en forma digital.

Ventajas: Observacion inmediata de la imagen adquirida

Modificación digital de la imagen

Capacidad para realzar la imagen mediante el uso de programas de computadora disponibles en el comercio

PROCEDIMIENTOS

AVANZADOS

DE OBSERVACION

Histoquímica

Método de tinción de tejidos que proporciona información sobre la presencia y localización de macromoléculas intracelulares y extracelulares.

*Ácido peryódico de Schiff (PAS).*

“INMUNOCITOQUIMICA”

En esta se utilizan anticuerpos marcados con fluoresceína o rodamina y anti anticuerpos para identificar una localización intracelular y extracelular de las macromoléculas mas precisa de la que es posible con la histoquímica.

Existen dos métodos de marcado con anticuerpo:

Directo: se marca el anticuerpo contra la macromolécula con un colorante fluorescente, se espera la reacción y el complejo resultante se puede observar con un microscopio de fluorescencia.

Indirecto: se prepara un anticuerpo marcado con fluorescencia contra el anticuerpo primario especifico para la macromolécula de interés. Una vez que reacciona el anticuerpo primario con el antígeno, se lava la preparación para eliminar el anticuerpo primario no unido, en seguida se añade el anticuerpo marcado y reacciona con el complejo antígeno-anticuerpo.

INMUCITOQUIMICA DIRECTA INMUNOCITOQUIMICA INDIRECTA

Es un método en el que se incorporan isotopos radioactivos en macromoléculas, que a continuación se observan con el uso de una película de emulsión superpuesta.

“AUTORRADIOGRAFIA”

Esta se da mediante el uso de electrones como fuente de luz lo que permite lograr una amplificación y resolución mucho mayores que las obtenidas con la microscopia de luz.

“MICROSCOPIA ELECTRONICA”

Microscopia electrónica de transmisión.

•cortes mas delgados.•Tinción con técnicas de precipitado de

metales pesados.•Fijadores especiales: preservan los

detalles estructurales y actúan como un colorante electrodenso.

•Perdida de energía cinética de los electrones.

Microscopia electrónica de barrido.

•Proporciona una imagen tridimensional del espécimen.

•Se utiliza para observar la superficie de un espécimen solido.

•El objeto que se observa se prepara de una forma especial.

Técnica de fractura por congelación (criofractura).

•La estructura macromolecular de las superficies interna de la membrana.

•Los especímenes congelados con criopreservadores no crean cristales de

hielo durante la congelación.•El tejido no sufre daño.

•Permite mostrar las proteínas transmembranales de membranas

celulares.