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RECONOCIMIENTO Y MANEJO DEL MICROSCOPIO

JENSY STEFANNY IGLESIAS GUTIÉRREZ MARIANA CAROLINA URECHE GONZÁLEZ

Universidad del Magdalena, Estudiantes del Programa enfermería, Facultad de salud. Carrera 32 No 22-08 Santa Marta, Colombia.

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Resumen

Durante el desarrollo de este laboratorio se reconocerá al microscopio, sus partes, los diferentes tipos de microscopios, sus usos, ventajas y desventajas de los mismos. Con el microscopio óptico observaremos con objetivos de 4x, 10x, 40x muestras de una hebra de cabello, hilos, letra de periódico, código de barra y papel milimetrado permitiéndonos conocer muy detalladamente la textura. Se aprenderá a manipularlo correctamente adquiriendo habilidad para preparar muestras, lo cual es de suma importancia para nosotros como futuros profesionales que analizaremos muestras con cualquier tipo de sustancia química y biológica. También se identificaran las utilidades que se le dan al microscopio en el desarrollo de la Biología.

PALABRAS CLAVES: Microscopio, óptico, objetivo, muestra.

SUMARRY

During the development of this laboratory will be recognized under the microscope, parts, different types of microscopes, their uses, advantages and disadvantages thereof. Observe with optical microscope with objectives 4x, 10x, 40x samples of a strand of hair, threads, letter paper, bar code and graph paper allowing us to know in great detail texture. They will learn to manipulate properly acquired ability to prepare samples, which is very important for us as professionals to analyze samples with any type of chemical and biological substance. The profits are given to the microscope in the development of Biology is also identified.

KEYWORDS: Microscope, optical, lens, shows.

UNIVERSIDAD DEL MAGDALENA PROGRAMA DE ENFERMERIA

Introducción

En el siglo XVII, la necesidad de observar los detalles más mínimos de algunos objetos y seres vivos principalmente, condujo al científico Robert Hooke a lograr uno de los más importantes avances que la ciencia haya podido tener en esos tiempos y que aún en nuestra época, ha llegado a ser de gran utilidad: la elaboración del microscopio y el descubrimiento de la célula como la unidad básica de la estructura de todo ser vivo. (Karp, G. 2000.)

EL microscopio es un instrumento óptico que aumenta la imagen de los objetos, los últimos tres siglos han permitido ampliar el campo de las investigaciones biológicas y se ha convertido en el instrumento básico para abrir nuevas fronteras en la

biología. La lupa puede considerarse como el microscopio más simple y fue usada inicialmente por algunos investigadores para adquirir los primeros conocimientos del mundo microscópico. Posteriormente se perfeccionó y en la actualidad existen varios tipos de microscopios, algunos de ellos altamente especializados para una gran variedad de uso.

Entre los diferentes tipos podemos citar: microscopio óptico, microscopio electrónico, microscopio electrónico de transmisión, entre otros. El microscopio, al aumentar la imagen de los objetos, nos permite analizar la estructura, forma y tamaño de diferente tipo de muestras. En esta práctica se utilizará el microscopio óptico en el cual se combinan dos lentes, el ocular y el objetivo, para aumentar la imagen

OBJETIVOS

Objetivo general: Valorar la importancia del

microscopio como instrumento básico para el estudio e investigación en las Ciencias Biológicas.

Objetivos específicos: Identificar las diferentes partes

que constituyen el microscopio y reconocer las funciones de cada una de ellas

Adquirir habilidad en el uso y manejo correcto del microscopio, siguiendo las indicaciones de las guías de laboratorio.

Entender los conceptos básicos de microscopia tales como el poder de resolución, poder de aumento y campo visual en relación con las lentes utilizadas.


MATERIALES Y MÉTODOS

MATERIALES

Microscopio óptico Lamina porta objetos Cubre objetos Hilos de diferente colores Letra de periódico Código de barras Hebra de cabello Hoja milimetrada Goteros Tijeras Papel absorbente

METODOS

PARTE A: Visualización de la imagen invertida, movimiento y poder de resolución.

Se tomó un portaobjetos sobre el cual se colocó una letra “a” impresa en papel de revista y se vertió una gota de agua sobre la misma para luego poner el cubreobjetos a la muestra. Más adelante, se realizaron enfoques con los objetivos de 4x, 10x y 40x.

Siguiendo los pasos descritos para la realización del montaje, se realiza uno para los códigos de barras.

PARTE B: Visualización del poder de aumento

Se tomó un portaobjetos sobre el cual se colocó una hebra de cabello y se vertió una gota de agua sobre la misma, para luego poner el cubreobjetos a la muestra. Más

adelante, se realizaron enfoques con el ocular de 10x y los objetivos de 4x, 10x y 40x.

PARTE C: Visualización del grosor y profundidad

Se tomó un portaobjetos sobre el cual se colocaron 3 hebras de hilos de diferentes colores (rojo, gris y negro), y se vertió una gota de agua sobre ellos, para luego poner el cubreobjetos a dicha muestra. Después, se realizaron enfoques con los objetivos de 10x y 40x.

PARTE D: Mediciones microscópicas

Se tomó un portaobjetos sobre el cual se colocó una pequeña muestra de papel milimetrado y luego se puso sobre ésta el cubreobjetos. Posteriormente se realizaron enfoques con los objetivos de 4x, 10x y 40x para determinar el diámetro del campo.

RESULTADOSLETRA DE PERIODICO


zz

1.Observación de la letra en 4x

.Observación de la letra en 10x

.Observación de la letra 40x

HEBRA DE CABELLO

4.Observación de la hebra del cabello en 4x




CODIGO DE BARRA

7.Observación del código de barra en 4x




HEBRAS DE HILO

10.Observación de los hilos en 10x

11.Observación de los hilos en 40x

PAPEL MILIMETRADO

12.Observaciones del papel milimetrado en 4x




Observación diámetro del campo visual

DCV= Diámetro Objetivo Objetivo a Conocer Objetivo Conocer

DCV (4x): 4.6mm = 4.600um

DCV (10X):4.600um = 4.600um

10x 2.5 4x

=1.840um 1,8 mm

Al observar en 10x se ve un cuadro y el 50% del otro.

DCV (40X): 4.600um = 4.600um 40x 10 4x

=460um 0.46 mm

Al observar en 40x se ve una línea vertical de color verde.

DISCUSIÓN DE RESULTADOS

-Al observar con el objetivo de 4x la muestra de la letra “a” impresa en papel de revista, hemos notado que ésta se encuentra en posición invertida con respecto a la forma inicial a la que se montó en el portaobjetos. Esto se debe a que la lente del ocular emplea la imagen que ha sido formada por la lente del objetivo para producir una imagen virtual y aumentada que luego va a ser utilizada por la parte frontal del ojo humano para observar una imagen real e invertida en la retina.En cuanto a la tinta, se observó un poco transparente y además, poseía pequeños puntos a su alrededor, debido a la impresión original de la revista de la cual se tomó la muestra.Esta misma muestra al ser observada con el objetivo de 10x, mostró mejores detalles de la letra impresa y se observaron de mayor tamaño los


círculos que acompañaban a la muestra.Al observar con el objetivo de 40x, se logró observar muy detalladamente el entramado de la textura de la hoja en la que se encontraba impresa la letra “a” tomada como muestra. En esta ocasión, el campo visual estaba concentrado en la parte central de el objeto observado y mostraba muchos detalles que a simple vista es imposible verlos.

-Se realizó la observación de la hebra de cabello con el objetivo de 4x y el ocular de 10x, con lo cual obtuvimos un aumento de 40 veces con respecto al tamaño real de la muestra y ésta a su vez, presentaba una transparencia muy característica y sus bordes se veían bien definidos y delineados.Luego, se observó la muestra aumentada 100 veces con respecto al tamaño real, es decir, con un ocular de 10x y un objetivo de 10x, para más tarde observarla con el mismo ocular de 10x y el objetivo de 40x con lo cual se logró un aumento de 400 veces. De acuerdo con esto, podemos decir que la imagen se observa cada vez más translúcida a medida que aumentaba el número del objetivo con el cual se realizaba la observación. Este es el resultado demuestra que el poder de aumento es directamente proporcional a los valores de los objetivos utilizados, ya que a mayor valor mayor poder de aumento.

-Al realizar el montaje propuesto, se ve, con el objetivo de 4x, la marca de la impresión del código de barras y el borde de los números y las barras se ve irregular. Al cambiar el objetivo de 4x por el de 10x, se observa más

claramente el borde de los números y las barras; la tinta está esparcida por todo el papel; es decir, salpicó toda la fibra. Cuando se cambia al objetivo de 40x, se puede ver la porosidad del papel y la distribución no uniforme de la tinta; a pesar de que a simple vista, el borde parece perfectamente uniforme, en realidad es un efecto óptico que produce la distancia del ojo del papel.

-Al observar la muestra de los 3 hilos de colores (morado, rojo y naranja) con el objetivo de 10x, se ha hecho el enfoque sobre el hilo rojo que se encontraba en la mitad de la muestra y, éste se tornaba transparente y borroso con respecto al hilo naranja y el morado que mostraban buen detalle del entramado de sus hebras.Luego, al ser observado con el objetivo de 40x, presentaba muy bien definidas las hebras el hilo rojo que se encontraba ubicado en el plano central de la muestra.Es muy importante anotar en esta parte que las distintas dimensiones del espacio observadas en esta muestra han sido la longitud, grosor y ancho, lo que nos demuestra la gran capacidad de resolución que poseen los lentes de los objetivos del microscopio.

-La observación de la porción de papel milimetrado con el objetivo de 4x ha dado como resultado un diámetro del campo visual de 4.6mm, lo que equivale a 4600µ. De esta manera, al ser observado con el objetivo de 10x, la muestra se redujo a más del 50% de la observación inicial, es decir, medía aproximadamente 1840µ (1.8mm). Continuando con la conversión y el cálculo de la medida del próximo


objetivo 40x, resulta que es imposible observar siquiera un cuadrito completo, ya que la medida observada en esta ocasión es de 460µ, es decir, menos de medio milímetro, lo que hace que nuestro campo visual se vea reducido debido al gran aumento.

CONCLUSIONES:

El desarrollo del microscopio, hace más de 300 años, mostró que la vida no está limitada a lo que se ve por observación directa. Para la ciencia, este instrumento ha sido uno de los más revolucionarios y útiles. Permitió la identificación de las unidades básicas que conforman a todo ser vivo (células) y ayudó a comprender el funcionamiento de las estructuras orgánicas.

Con el avance tecnológico se han hecho mejoras al microscopio original, llegando a los microscopios electrónicos que poseen una gran capacidad de aumento y resolución; lo que a su vez conlleva al descubrimiento de nuevas estructuras celulares y mecanismos de funcionamiento de los seres vivos.

Bibliografía De Robertis. 1991. Biología

Celular y Molecular. Editorial El Ateneo. Buenos Aires, Argentina. P63-64

Karp, G. 2000. Biología Celular y Molecular. Cap. 18

LINETH D. Y LOZANO P. Ciencias Naturales y Educación Ambiental, Vida 6. Editorial Voluntad. Bogotá. 2005. Pág. 50

Anexos:

1) Mencione los diferentes tipos de microscopios y realice una breve descripción de cada uno de ellos.

Microscopio compuesto: aparto óptico hecho para agrandar objetos; consiste en un número de lentes formando una imagen cruzada lentes posicionados cerca del objeto proyectándola hacia los lentes oculares. Es el más utilizado.

Microscopio óptico: microscopio compuesto que utiliza una combinación de lentes agrandando la imagen de pequeños. Son antiguos, simples de utilizar y fabricar. Microscopio digital: tiene una cámara LCD adjunta y está conectada con un LCD o a una pantalla de computador usualmente tiene ocular para ver los objetos directamente.

Microscopio fluorescente: tipo especial de micros livianos que en vez de tener un reflejo utiliza fluorescencia para ver las pruebas y sus propiedades.

Microscopio electrónico: es uno de los más usados e importantes con la capacidad más alta de magnificación.

El microscopio electrónico: es una herramienta mucho más poderosa en comparación con los comunes más


utilizados.

Microscopio estéreo (estereoscopio): utiliza dos objetivos y dos oculares que permiten ver un espécimen bajo ángulos que permiten una visión óptica de tres dimensiones

2) Porque la imagen del microscopio óptico aparece invertida?Porque el lente de los objetivos es convexo, lo cual invierte la imagen por la difracción de las ondas de luz.

3) ¿Qué sucede con el campo de observación cuando se aumenta el objetivo? ¿Y la iluminación?

El área del campo visual varía de acuerdo el número de aumento del objetivo que se está utilizando. El campo de observación visto a través del objetivo del microscopio es inversamente proporcional al aumento – por ejemplo, a mayor aumento menor campo de observación. La iluminación también se REDUCE pasa menos luz.

4) A que se debe que las letras del periódico o el código de barra de las revistas utilizadas sean vistos uniformemente impregnada de tinta por nuestros ojos?

Se debe a que el poder de resolución del ojo humano es de 0,2 mm, es decir que para ver dos objetos separados estos deben estar como mínimo a esa distancia, el cristalino es incapaz de separar "los puntos" de tinta de las letras sobre el papel. El microscopio aumenta la imagen hasta

el nivel de la retina, para captar la información.

5) Cuales técnicas se utilizan en la microscopia electrónica, tanto en la preparación demuestras como en montaje?

Microscopio electrónico: se trabaja sobre fotografías.

• Fijación: tiene mucha importancia se sigue el mismo proceso que en el microscopio óptico.

• Seccionado: los cortes muy finos son atravesados por electrones de muy poco poder de penetración. Se debe incluir la muestra en una resina muy dura (polimerizada)

• Montaje de la preparación: se coloca en una rejilla de cobre que actúa como red en la mini-piscina. La rejilla es el porta objetos se usa de cobre porque los tejidos se adhieren mejor ahí.

• Tinción: se tiñe siempre aunque sin colorantes. Se emplean metales pesados ya que estos átomos desvían a los electrones, mientras que los átomos ligeros no lo hacen.

6) Que es un microscopio invertido y para que se utiliza?

Es un microscopio que tiene una disposición invertida de sus componentes respecto a un microscopio convencional. La fuente de luz y el condensador esta sobre la plataforma apuntando hacia abajo, los objetivos están debajo de la


plataforma apuntando hacia arriba. Los únicos componentes en la misma posición son los oculares, asimismo la muestra es colocada sobre la platina mecánica. El microscopio invertido permite observar organismos o tejidos en cultivo sin una preparación previa favoreciendo el seguimiento del estado decrecimiento, comportamiento y parámetros investigados en el desarrollo del cultivo. Su desventaja es la limitada magnificación ya que sus objetivos más potentes son de 40x y60x

7) Cuáles son las limitantes del microscopio de luz y el microscopio electrónico?

El microscopio de luz utiliza un haz de luz en el rango de las longitudes de onda visibles, pero no se puede utilizar en investigaciones muy avanzadas porque no posee mucha precisión.

La resolución de un microscopio electrónico también está limitada por las longitudes de onda de los electrones, además el costo y el

mantenimiento del equipo son muy altos.

8) Por que se deben utilizar colorantes a la hora de observar muestras en el microscopio, cuáles deben ser alguna de las propiedades de los colorantes de usos común en microscopia?

Cuando el tejido es casi transparente hay que añadirle colorantes para permitir la visión. Normalmente se emplea más de un colorante para permitir la visión, estos colorantes son químicamente distintos. Estas sustancias químicas reaccionan con moléculas determinadas del tejido quedándose fijadas, así se obtiene el contraste.


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