Informe de Pruebas Realizadas en el Examen Práctico

Análisis de Alimentos Objetivo:

a) Determinación de coliformes totales en una muestra de pepino sospechosa de una intoxicación.

b) Determinación de Enterococos fecales en una muestra de mosto comercial.

Para la realización de la prueba a), en lugar de seguir el procedimiento de determinación de coliformes totales, he seguido el de Enterobacteriaceae sin revivificación, correspondiente al PNT- AL-9, que se basa en la norma NF V 08-054 (Octubre 1993). El motivo por el que decidí realizar esta prueba en lugar de la de coliformes totales, fue que los coliformes totales están incluídos en las Enterobacterias.

Para la realización de la prueba b), a causa de un error, en lugar de determinar los Enterococos fecales, he determinado coliformes fecales. Siguiendo la técnica de filtración por membrana.

Muestras de las que disponemos:

a) Muestra de pepino distribuidas en bolsas estériles, conservado en la nevera a 5ºC.- Fecha de entrega: 30/05/2011- Fecha de análisis: 01/06/2011

b) Muestra de mosto en tetrabrick, conservado a Tª ambiente.- Fecha de entrega: 30/05/2011- Fecha de análisis: 31/05/2011

Medios de cultivo:

- Prueba a): Medio VRBG para sembrar. Sin confirmación, solo recuento.Agua de peptona para realizar la dilución madre.

- Prueba b): Agar FC para siembra de c. fecales. Sin confirmación, solo recuento.

Reactivos:

- No he utilizado ningún reactivo para estas pruebas.

Expresión de Resultados:

Prueba a): Para la prueba a), el recuento de enterobacterias ha dado como resultado 0 UFC. Por tanto, se demuestra que la muestra de pepino no contenía Enterobacterias, por lo que tampoco estaba contaminada con Coliformes totales.

Rubén Lista Facal 30/05/2011 – 03/06/2011

Informe de Pruebas Realizadas en el Examen Práctico

Prueba b): para la prueba b), el recuento de coliformes fecales, da como resultado que no hai contaminación por coliformes fecales en la muestra de mosto.

Aislamiento y Pruebas Bioquímicas de la Cepa 245: Micrococcus luteus Objetivo:

a) Pruebas bioquímicas:

- Indol: Se usa para identificar bacterias capaces de producir indol a partir del triptófano.

- Manitol: Sirve para detectar si los gérmenes son capaces de fermentar el manitol liberando productos ácidos que serán detectados gracias al indicador rojo de fenol que cambiará a color amarillo.

- Movilidad: Se usa para identificar bacterias capaces de desplazarse en un medio semisólido.

b) Aislamiento por estría:

- Se trata de aislar la cepa, para demostrar que continua estando en condiciones de asepticidad.

c) Tinción de Gram:

- Se trata de realizar una tinción de la cepa microbiana para determinar bacterias según sean Gram positivas o Gram negativas.

Muestra de la que disponemos:

Cepa bacteriana 245 correspondiente a la bacteria Micrococcus luteus.

Medios de Cultivo:

a) Pruebas bioquímicas:

- Indol: Caldo de triptona, en el que se siembra la bacteria y después de incubar, se le añade el reactivo de Covacs para confirmar si produce indol.

- Manitol-Movilidad: Agar manitol-movilidad, en el que se siembra la cepa mediante la técnica de picadura.

b) Siembra por agotamiento por estría:

Rubén Lista Facal 30/05/2011 – 03/06/2011

Informe de Pruebas Realizadas en el Examen Práctico

- Placa de agar nutritivo de 90 mm. Se siembra por estrías sucesivas partiendo de la estrían anterior sin reccargar de nuevo el asa de siembra y quemandola entre estría y estría.

c) Tinción de Gram:

- No se necesitan medios para realizar la tinción.

Reactivos:

- Se utiliza el reactivo de Covacs para comprobar si en la prueba del indol, las bacterias analizadas producen indol o no.

- Para la tinción de Gram s han utilizado los siguientes reactivos: Cristal violeta, para teñir, el Lugol como solución mordiente para aumentar la afinidad entre colorante y células, alcohol al 95% para decolorar y finalmente safranina como colorante de contraste.

Expresión de Resultados:

- Indol: Negativo, despues de utilizar el reactivo de Covacs, no se aprecia el cambio de color del reactivo a rojo, por lo que se demuestra que la bacteria no produce indol.

- Manitol-Movilidad: negativo para manitol, debido a que el medio lleva incorporado un reactivo q cambia de color rojo a amarillo si se produce manitol, y positivo para movilidad, la bacteria muestra movilidad en un medio semisólido.

- Siembra por agotamiento por estría: solo pressenta crecimiento el cuadrante número 1, en los demas no se aprecia ningún cambio.

- Tinción de Gram: se observan cocos Gram positivos, mostrados bajo el microscopio con un tono azul. A pesar de que el frotis microbiano, estaba demasiado cargado, se pudieron observar zonas en las que había cocos facilmente visibles.

Análisis de Superficies Objetivo:

- Determinar levaduras y mohos en las manos y las uñas del analista.

Muestra de la que disponemos:

- Manos y uñas del analista.

Medios de Cultivo:

Rubén Lista Facal 30/05/2011 – 03/06/2011

Informe de Pruebas Realizadas en el Examen Práctico

- Agar CGA para siembra- Ringer para lavar las manos. En esta prueba se sigue el método de análisis de

superficies del enjuague.

Reactivos:

- No se utilizan reactivos para realizar esta prueba.

Expresión de resultados:

- La muestra ha sido tomada en una superficie de aproximadamente 180 cm2, es decir en una mano, debido a que no disponíamos de una persona q nos pudiese ayudar a hacer el enjuague de la forma explicada en la guía técnica sobre criterios y procedimientos para el examen microbiológico de superficies. Como resultado de esta prueba, se determina que en las manos del analista, había ausencia de mohos y levaduras.

Caracterización de la Cepa a lo Largo del Curso

Cepa: 245 Micrococcus luteus

Prueba nº 1, Citrato: Siembra en medio Citrato de Simmons. No se aprecia crecimiento, por lo tanto, es citrato negativa.

Pueba nº 2, Indol: Siembra en caldo de triptona y despues de incubar se le añade reactivo de Covacs. Sin cambio de color en el reactivo, por tanto, negativo en indol.

Prueba nº 3, RMVP: Siembra en caldo MRVP. Despues de incubar, se le añade alfa naftol y KOH. Da positivo en R.M. y negativo en V.P.

Prueba nº4, Manitol Movilidad: Siembra en agar manitol-movilidad. Da como resultado negativo en ambas pruebas.

Prueba nº5, DNAsa: Siembra en medio DNAsa. Resultado de la cepa, sin crecimiento, por tanto negativo.

Prueba nº6, McConkey: Siembra en medio McConkey. Resultado negativo, debido a que no hay crecimiento.

Prueba nº7, test de Kligler: Sembrado en KIA. Fermentación de glucosa y de lactosa negativo, producción de gas positivo y producción de ácido negativo.

Rubén Lista Facal 30/05/2011 – 03/06/2011