informe de bioquÍmica-universidad nacional san luis gonzaga de ica (1)

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“Año de la Inversión para el Desarrollo Rural y la Seguridad Alimentaria” UNIVERSIDAD NACIONAL“SAN LUIS GONZAGA” DE ICA QUÍMICA BIOLÓGICA II (PRÁCTICA) DOCENTE: BLGA. ISABEL YARMAS DUEÑAS INTEGRANTES: BENDEZÚ RAMOS, Alex DOMINGYEZ MENDOZA, Fernanda GARCÍA SORIA, Yovana PERALES PAREJA, José Miguel CICLO: VI AÑO: 3ro

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Page 1: INFORME DE BIOQUÍMICA-Universidad Nacional San Luis Gonzaga de Ica (1)

“Año de la Inversión para el Desarrollo Rural y la Seguridad Alimentaria”

UNIVERSIDAD NACIONAL“SAN LUIS GONZAGA” DE ICA

QUÍMICA BIOLÓGICA II (PRÁCTICA)

DOCENTE: BLGA. ISABEL YARMAS DUEÑAS

INTEGRANTES:

BENDEZÚ RAMOS, Alex

DOMINGYEZ MENDOZA, Fernanda

GARCÍA SORIA, Yovana

PERALES PAREJA, José Miguel

CICLO: VI

AÑO: 3ro

ICA – PERÚ

2013

Page 2: INFORME DE BIOQUÍMICA-Universidad Nacional San Luis Gonzaga de Ica (1)

PRÁCTICA N° 1

DETERMINACIÓN DE LA TASA METABOLICA BASAL

APARTIR DEL PESO Y DE LA ALTURA.

FUNDAMENTO:

El Metabolismo basal es la cantidad de energía que precisa nuestro

organismo en un día, aun cuando se encuentra en reposo, es decir el

gasto calórico mínimo, diario necesario para el desarrollo de la vida.

En un adulto en condiciones basales requiere 960 Kcal diarias por cada

m2 de superficie corporal es decir podemos calcular el metabolismo basal

a partir de la superficie cutánea mediante la forma:

MB (Kcal/día) = S.C (m2) x 960

Según Dubois:

S.C (m2) = (P0.425 X A0, 725X 71,84)/10 000.

P= Peso en kg.

A= Altura en cm.

1. OBJETIVOS:

Determinación de la taza metabólica basal a partir del peso y la altura,

realizando para ello los cálculos respectivos.

2. PROCEDIMIENTO:

Para hallar le metabolismo basal se realizara a partir del peso y de altura

de una persona.

Page 3: INFORME DE BIOQUÍMICA-Universidad Nacional San Luis Gonzaga de Ica (1)

a) Datos de la persona :

Peso: 56 kg

Altura: 1.64m

b) Para poder aplicar la formula se convertirá la altura en

metros a centímetros.

1.64x100=164

c) Aplicaremos la fórmula para hallar el metabolismo basal:

= (560.425 x 164 0.725 x 71.84) /10000

= 1.6

MB (Kcal/día) = 1.60x 960

= 1536

Nota: de acuerdo a la actividad la taza metabólica puede variar.

PRÁCTICA N° 2

SC (M2) = (P 0.425 x A 0.725 x 71.84) /10000

MB (Kcal/día) = SC (M2) x 960

Page 4: INFORME DE BIOQUÍMICA-Universidad Nacional San Luis Gonzaga de Ica (1)

URISTI K

(Examen químico de orina)

1. OBJETIVO:

Determinar la composición química de la orina, con la utilización de la

técnica de URISTI K.

La orina es un líquido que en su mayor parte está contenido de agua y

metabolitos.

Con esta técnica solo se determinara el lado cualitativo de la muestra,

determinaremos la presencia de compuestos orgánicos en la orina.

Este examen nunca debe ir solo, es necesario acompañarlo de un

examen físico y microscópico de sedimento urinario.

Ex. físico.

Ex Químico. URINALIS o Examen

completo de orina.

Ex Microscópico de sedimento.

2. MATERIALES:

Muestra de orina fresca.

Tubos de ensayo, gradillas.

Tira reactiva.

Equipo: centrifuga (para el examen microscópico de sedimento).

3. PROCEDIMIENTO DE LA PRÁCTICA

a) En un vaso de precipitación traemos la orina.

Page 5: INFORME DE BIOQUÍMICA-Universidad Nacional San Luis Gonzaga de Ica (1)

b) En un tubo de ensayo vertemos la orina hasta las ¾ partes, no se

centrifuga la orina.

c) Luego se inserta una tira reactiva en el interior del tubo del ensayo

por 30 a 60 seg.

d) Esta tira reactiva viene provista de colores que ya están

clasificadas, solo nos indican lo que queremos encontrar.

e) Para el examen de sedimento es necesario centrifugar la muestra a

5000 revol. por 10 min. , colocar una gota de sedimento en una

lámina portaobjeto y observar al microscopio. Anotar resultados.

Page 6: INFORME DE BIOQUÍMICA-Universidad Nacional San Luis Gonzaga de Ica (1)

Con esta tira podemos medir cualitativamente lo siguiente:

Glucosa.

Bilirrubina.

Cuerpos cetónicos.

Densidad (parámetro físico).

Presencia de sangre.

pH (parámetro físico).

Proteínas.

Urobilinógeno.

Nitratos.

Leucocitos (células que se encuentran en el Ex Microscópico).

4. RESULTADOS :

A) Exámen físico:

- color: amarillo

- olor: -

- pH: ligeramente acido

B) Exámen químico : La tira reactiva nos da una determinación

cualitativa de compuestos químicos presentes :

Page 7: INFORME DE BIOQUÍMICA-Universidad Nacional San Luis Gonzaga de Ica (1)

Glucosa: negativo

Bilirrubina: 5+

Cuerpos cetónicos (ketona): negativo

Densidad: 1.010

Sangre: negativo

pH: 6.5

Proteínas: negativo

Urobilinógenos: traza 16

Nitratos: negativo

Leucocitos: trazas

C) Exámen de sedimento urinario:

Se halló:

Células epiteliales y cristales

Muestras microscópicas:

Page 8: INFORME DE BIOQUÍMICA-Universidad Nacional San Luis Gonzaga de Ica (1)

PRÁCTICA N° 3

URICOSTAT

(Método URICOSTAT enzimático)

Fig.1- Restos orgánicos.

Fig.2 – Células epiteliales

Fig.3- Glóbulos blancos que nos indica algún tipo de infección. En

el paciente.

Page 9: INFORME DE BIOQUÍMICA-Universidad Nacional San Luis Gonzaga de Ica (1)

1. SIGNIFICACION CLINICA

El ácido úrico es un metabolito de las purinas, ácidos nucleicos y

nucleoproteínas. Habitualmente la concentración de ácido úrico en suero

varía de un individuo a otro de acuerdo a diversos factores tales como:

sexo, dieta, origen étnico, constitución genética, embarazo.

Niveles anormales de ácido úrico en suero son índice de desorden en el

metabolismo de las sustancias que lo originan de defectos en su

eliminación.

2. MATERIALES:

Muestra de sangre (paciente en ayunas)

Set de uricostat.

Pipetas ,micropipeta,tubos de ensayo

Equipos: centrifuga y espectrofotómetro.

3. REACTIVO A USAR:

El set de URICOSTAT está formado por:

-C.C Estándar: 100 mg/l

-Buffer

-Enzimas: URICASA PEROXIDASA

Descripción:

Standard: solución de ácido úrico 100 mg/l.

Uricasa: solución de uricasa (UOD) mayor o igual a 3 kU/l.

Reactivo de trabajo

Page 10: INFORME DE BIOQUÍMICA-Universidad Nacional San Luis Gonzaga de Ica (1)

Reactivo 4-AF/POD: frasco conteniendo más de 100 U de peroxidasa

(POD), 12,5 mmol de buffer fosfatos para pH 7,3 y 3 mmol de 4-

aminofenazona.

Reactivo Fenol: solución de clorofenol 24 mmol/l.

UOD Y POD son las enzimas que participan.

4. PROCEDIMIENTO

a) Se obtiene el suero.

b) Marcar tres tubos de ensayo con “B (blanco)”,”S (Stándar)”,”D

(desconocido)” y colocar en orden lo siguiente:

c) Se mezcla suavemente y se incuba por 5 minutos en baño maria a 37

°C o a temperatura ambiente por 10 minutos.

d) Colocar un poco de las soluciones de los tubos en cubetas y realizar

la lectura a 505 nm/ 530 nm (luz verde).Luego se hace la lectura si

TubosComponentes(ml)

B S D

ESTANDAR --- 20ul --

MUESTRA --- -- 20ul

RX DE TRABAJO 1ml 1ml 1ml

Page 11: INFORME DE BIOQUÍMICA-Universidad Nacional San Luis Gonzaga de Ica (1)

es en Espectrofotómetro será a 505 nm y si es en Colorímetro será

a 530nm con filtro verde.

e) Realizar los cálculos correspondientes con la siguiente fórmula:

FÓRMULA PARA LOS CÁLCULOS

C.C Ac. Úrico (mg/l) = FACTOR x D.O (D)

Dónde:

Factor = 100/ D.O (S)

D.O (D): Densidad óptica del desconocido.

VN = 25-60 MG/L (HOMBRES)

20-50 MG/L (MUJERES)

Page 12: INFORME DE BIOQUÍMICA-Universidad Nacional San Luis Gonzaga de Ica (1)

5. RESULTADOS

• Las D.O de cada tubo son las siguientes:

D.O

B 0,000

S 0,057

D 0,066

• Hallando factor:

F= 100/ S (D.O)

F= 100/ 0,057

F= 1 754,39

• Hallamos cc.Ac. Úrico:

cc.Ac. Úrico (mg/l) = F x D.O (D)

cc.Ac. Úrico (mg/l)= 1 754,39 x 0.066

cc.Ac. Úrico (mg/l)= 115,79 mg/l.

PRÁCTICA N° 5

Page 13: INFORME DE BIOQUÍMICA-Universidad Nacional San Luis Gonzaga de Ica (1)

DETERMINACIÓN DE CREATININA EN SUERO U ORINA

La Creatinina se genera a partir de la degradación de la creatina es un

producto metabólico de desecho del metabolismo normal de los

músculos, lo cual es filtrada por los riñones y excretado por la orina.

1. MATERIALES:

Muestra de sangre (paciente en ayunas)

Set para la determinación de CREATININA.

Pipetas ,micropipeta,tubos de ensayo

Equipos: centrifuga y espectrofotómetro.

REACTIVOS:

Acido Pícrico: 46.2 mmol/l de

ácido pícrico en solución.

Tampón Base: Solución

conteniendo 300mmol/l de NaO

adicionado con 1%, de

tensioactivo no iónico.

El reactivo premezclado

(ac.picrico + tampón base) debe

preparse máximo para 15 días y

deben ser embotellados en

frascos de vidrio color caramelo.

Estándar: Solución de creatinina

20 mg/l.

2. PROCEDIMIENTO:

Page 14: INFORME DE BIOQUÍMICA-Universidad Nacional San Luis Gonzaga de Ica (1)

a) Se extrae sangre 3ml aprox y se centrifuga.

b) Se trabajara con 2 tubos.

c) Mezclar inmediatamente. Se preparan las cubetas para realizar las

lecturas.

d) Hacer la lectura en Espectrofotómetro a 505 nm (longitud de onda)

a los 30 segundos en los tubos E1 y D1 (la primera lectura) y a los

5 minutos E2 y D2 (la segunda lectura).

TubosComponentes(ml)

S D

Rvo.PREMEZCLADOS 1ml 1ml

ESTANDAR 0.2ml --

MUESTRA(suero) --- 0.2ml

Page 15: INFORME DE BIOQUÍMICA-Universidad Nacional San Luis Gonzaga de Ica (1)

e) Realizar los cálculos correspondientes,usando la siguiente formula:

mg creatinina / l = D2−D1E2−E1

X 20

Dónde:

D1 y E1 = Corresponde a la 1° lectura (a los 30 seg.).

D2 y E2 = Corresponde a la 2° lectura (a los 5 seg.).

El número 20 es la concentración del Estándar.

3. RESULTADOS :

a) Se presentan las lecturas:

VN= 7-14 mg/L

Page 16: INFORME DE BIOQUÍMICA-Universidad Nacional San Luis Gonzaga de Ica (1)

LECTURA A LOS 30 SEGUNDOS

E1 D10,070 0,099

LECTURA A LOS 5 MINUTOS

E2 D20,152 0,143

La D.O del S = 0,058

b) Reemplazando en la fórmula:

mg creatinina / l = D2−D1E2−E1

X 20

mg creatinina /l = 0,040,08

X 20

mg creatinina /l = 10 mg/l

PRACTICA N° 6

DETERMINACIÓN DE PROTEÍNAS TOTALES Y ALBUMINA

Page 17: INFORME DE BIOQUÍMICA-Universidad Nacional San Luis Gonzaga de Ica (1)

I. DETERMINACIÓN DE PROTEINAS TOTALES

( METODO DE BIURET MODIFICADO)

1. FUNDAMENTO:

La reacción está dada por el reactivo de biuret en medio alcalino,

en la cual los enlaces peptídicos de las proteínas reaccionan con

los iones cúpricos del reactivo cupro –alcalino dando un complejo

de color Azul violáceo cuya concentración se mide

fotocolorimetramente a 540 nm.

2. MATERIALES:

•Muestra de sangre (paciente en ayunas)

•Set para la determinación de PROTEINAS TOTALES.

•Pipetas, micropipeta, tubos de ensayo

•Equipos: centrifuga y espectrofotómetro.

REACTIVO DE TRABAJO:

CUPRO-ALCALINO (Cu SO4 Y Na OH)

C.C ESTÁNDAR: 6,9 g/dl

3. PROCEDIMIENTO:

a) Centrifugar la muestra de sangre a 5000 rev. Por 5 min.

b) Realizar lo siguiente en cada tubo:

B S D

Page 18: INFORME DE BIOQUÍMICA-Universidad Nacional San Luis Gonzaga de Ica (1)

Stándar - 50 ul -

Muestra - - 50 ul

Reactivo de

trabajo

3.5 ml 3.5 ml 3.5 ml

c) Mesclar e incubar a 37°C por 15 min. en baño maria.

d) Realizar las lecturas a 540 nm.

d) Realizar los cálculos correspondientes, usando la siguiente

formula:

P.T (g/dl)=D.O del D x F

Dónde:

F= c.c estándar/ D.O del S

Page 19: INFORME DE BIOQUÍMICA-Universidad Nacional San Luis Gonzaga de Ica (1)

4. RESULTADOS:

a) Se presenta las D.O correspondientes:

b) Reemplazamos los valores en la fórmula:

F= c.c estándar/ D.O del S

F= 6,9 g/dl / 0,370

F = 2,55

II. DETERMINACIÓN DE ALBÚMINAS (MÉTODO DE

UNION A COLORANTES) :

1. FUNDAMENTO :

V.N = 6,5- 8,0 g / dl

P.T (g/dl)=D.O del D x F

P.T (g/dl)= 0,205 x 2,55

D.OB 0,000S 0,370D 0,205

Page 20: INFORME DE BIOQUÍMICA-Universidad Nacional San Luis Gonzaga de Ica (1)

Unión a colorantes. En medio de reacción tamponado a pH 3.6 y

con adecuada fuerza iónica, la albumina presente en la muestra se

une específicamente con el colorante verde de Bromo-Cresol. El

cambio en las propiedades ópticas que muestra el complejo

albumina colorantes traducido a un incremento de la absorbancia

medida a 625nm respecto de la solución del colorante libre, permite

cuantificar fotométricamente a la albumina de forma proporcional a

su concentración en la muestra.

2. MATERIALES:

•Muestra de sangre (paciente en ayunas)

•Set para la determinación de ALBUMINA.

•Pipetas, micropipeta, tubos de ensayo

•Equipos: centrifuga y espectrofotómetro.

REACTIVO DE TRABAJO:

Verde de bromocresol (90 umol/l

adicionado con 1% de tensoactivo no

iónico) + solución tamponada pH 3,6.

C.C. ESTÁNDAR: 3,5 g/dl.

3. PROCEDIMIENTO:

a) Centrifugar muestra de sangre.

b) Realizar lo que se indica en la tabla:

Page 21: INFORME DE BIOQUÍMICA-Universidad Nacional San Luis Gonzaga de Ica (1)

TUBOSCOMPONENTES

E D

ESTÁNDAR 10 ul --

MUESTRA -- 10 ul

RVO. DE VBC 3.5 ml 3.5ml

c) Mezclar.Reposar a temperatura ambiente 15 minutos.

d) Leer en espectrofotómetro a 625 nm o fotocolorímetro a 620-

650 nm llevando a cero con reactivo de trabajo.

Page 22: INFORME DE BIOQUÍMICA-Universidad Nacional San Luis Gonzaga de Ica (1)

e) Realizar los cálculos correspondientes con la siguiente formula:

4. RESULTADOS:

a) Se presentan las D.O de cada tubo :

D.O

ALBUMINA (g/dl) = D.O del D x F

Dónde:

F= C.C Estándar / D.O del estándar

V.N = 3,4 – 4,5 g/dl

Page 23: INFORME DE BIOQUÍMICA-Universidad Nacional San Luis Gonzaga de Ica (1)

B 0,000S 0,250D 0,300

b) Reemplazamos los datos en la fórmula:

F= C.C Estándar / D.O del estándar

F= 3,5 g/dl / 0,250

F= 14

Entonces:

ALBÚMINA (g/dl) = D.O del D x F

ALBÚMINA (g/dl) = 0,300 x 14

ALBÚMINA (g/dl) = 4,20

PRÁCTICA N° 7

DETERMINACIÓN DE LA FOSFATASA ALCALINA EN

SUERO O PLASMA.

Page 24: INFORME DE BIOQUÍMICA-Universidad Nacional San Luis Gonzaga de Ica (1)

1. FUNDAMENTO :

La fosfatasa alcalina está distribuida en diversos tejidos siendo

particularmente importante su presencia en el hígado, riñón e

intestinos.

La actividad enzimática esta aumentada en hepatitis

enfermedades óseas y normalmente también se eleva en la

niñez.

2. MATERIALES:

•Muestra de sangre (paciente en ayunas)

•Set para la determinación de FOSFATASA ALCALINA.

•Pipetas, micropipeta, tubos de ensayo

•Equipos: centrifuga y espectrofotómetro.

REACTIVO DE TRABAJO:

Dietanolamina con cloruro de Mg (10 ml) +

fosfodionitrofenilfosfato de sodio (2 ml).

3. PROCEDIMIENTO:

a) Centrifugar la muestra.

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b) En una cubeta colocar 1 ml de reactivo de trabajo y 10 ml de

muestra (suero).

c) Se mescla y se toma el tiempo:

1° LECTURA se realiza a los 30 seg. y a una longitud de

onda de 403 nm.

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2° LECTURA consta de tres lecturas más:

-A los 60 seg. -Alos 120 seg. -A los 180 seg.

d) Se realizan los cálculos correspondientes:

Fosfatasa alcalina (u / l) = 5 460 x A

Dónde:

A = Diferencia de lecturas c/ 60 “ (promedio)