indicaciones para reportar prá . · pdf fileplata coloidal cobre en solución...

45
Aura Flores Pérez INDICACIONES PARA REPORTAR PRÁCTICAS. Las prácticas se realizaran bajo el formato de guía de práctica , donde el instructor proporciona al alumno : ACTIVIDADES DEL INSTRUCTOR ACTIVIDAD DEL ALUMNO El instructor le proporcionara el objetivo de la práctica. El alumno realizara una revisión bibliográfica y de técnicas de laboratorio para diseñar la práctica bajo la guía del catedrático. En caso de existir un manual de técnicas de laboratorio ,esté será proporcionado para que el alumno seleccione la técnica más adecuada dependiendo de los reactivos existentes. El instructor revisara antes de la práctica la información recolectada, la cual se presentara en borrador, en su cuaderno de laboratorio. Durante su desarrollo experimental el instructor supervisará el trabajo del equipo., siendo esté parte de la El alumno presentara como reporte de la práctica. El marco teórico., ( donde se presentara de forma resumida la información bibliográfica previamente recabada y analizada. El desarrollo experimental será la explicación de la práctica, incluyendo materiales y reactivos., en caso necesario explicar con dibujos. Las observaciones realizadas durante la práctica se anotaran en una libreta de laboratorio estrictamente personal, la cual le servirá posteriormente para el reporte de laboratorio.

Upload: lamkien

Post on 05-Mar-2018

241 views

Category:

Documents


7 download

TRANSCRIPT

Page 1: INDICACIONES PARA REPORTAR PRÁ . · PDF filePlata coloidal Cobre en solución Sulfato de cobre al 20% Metanol Etanol Propanol Bactericidas : Fenol Benzal Cloro Yodo Fluor . Aura

Aura Flores Pérez

INDICACIONES PARA REPORTAR PRÁCTICAS.

Las prácticas se realizaran bajo el formato de guía de práctica , donde el

instructor proporciona al alumno :

ACTIVIDADES DEL INSTRUCTOR ACTIVIDAD DEL ALUMNO

El instructor le proporcionara el objetivo

de la práctica.

El alumno realizara una revisión

bibliográfica y de técnicas de laboratorio

para diseñar la práctica bajo la guía del

catedrático.

En caso de existir un manual de técnicas

de laboratorio ,esté será proporcionado

para que el alumno seleccione la técnica

más adecuada dependiendo de los

reactivos existentes.

El instructor revisara antes de la

práctica la información recolectada, la

cual se presentara en borrador, en su

cuaderno de laboratorio.

Durante su desarrollo experimental el

instructor supervisará el trabajo del

equipo., siendo esté parte de la

El alumno presentara como reporte de la

práctica.

El marco teórico., ( donde se

presentara de forma resumida la

información bibliográfica previamente

recabada y analizada.

El desarrollo experimental será la

explicación de la práctica, incluyendo

materiales y reactivos., en caso

necesario explicar con dibujos.

Las observaciones realizadas durante

la práctica se anotaran en una libreta de

laboratorio estrictamente personal, la

cual le servirá posteriormente para el

reporte de laboratorio.

Page 2: INDICACIONES PARA REPORTAR PRÁ . · PDF filePlata coloidal Cobre en solución Sulfato de cobre al 20% Metanol Etanol Propanol Bactericidas : Fenol Benzal Cloro Yodo Fluor . Aura

Aura Flores Pérez

calificación práctica.

Conclusiones personales.

Discusión de resultados ,

comparando los resultados bibliográficos

con las observaciones prácticas .

La bibliografía se anotara de forma

tradicional.

La practica se entregara al instructor en

la siguiente sesión una ves que está se

ha terminado .

El alumno entregara la práctica, una

semana después de terminada., En caso

de no lograr setenta % de calificación .,

se corregirán los errores marcados .,

asignando una calificación máxima de

ochenta y cinco.

En las evaluaciones teóricas, se harán

preguntas básicas, de técnicas usadas

para diferentes determinaciones de

componentes biológicos, la práctica

contara en un porcentaje de la

calificación de las diferentes unidades.

Page 3: INDICACIONES PARA REPORTAR PRÁ . · PDF filePlata coloidal Cobre en solución Sulfato de cobre al 20% Metanol Etanol Propanol Bactericidas : Fenol Benzal Cloro Yodo Fluor . Aura

Aura Flores Pérez

MATERIAL NECESARIO PARA EL DESARROLLO DE LA PÁCTICA EN EL LABORATORIO

DE MICROBIOLOGIA.

Libreta de laboratorio individual.

Por equipo:

Detergente

Brocha chica para limpiar balanza.

40 Cajas de Petri desechables esteriles

Cajas desechables con medio de cultivo .

Bisturí con navaja.

Cinco jjeringas ;10., 5., 2 ml.

Algodón en paquete. de pliegues de 400gr.

Tijeras de buena calidad medianas.

Cinta adhesiva Maskintape.

Papel de estraza. 20 pliegos.

Cerillos.

Bandeja grande de plástico.

Cubreboca y gorra de forma individual .

Papel aluminio un rollo.

Page 4: INDICACIONES PARA REPORTAR PRÁ . · PDF filePlata coloidal Cobre en solución Sulfato de cobre al 20% Metanol Etanol Propanol Bactericidas : Fenol Benzal Cloro Yodo Fluor . Aura

Aura Flores Pérez

Un paquete de Kleenpack.

Lápiz graso.

Benzal frasco de un galón

Bulbo de hule para gotero.

Tijeras.

Franela o magitel.

Jabón de tocador.

Jabón corta grasa.

Botes metálicos para caja.

Botes para tubos.

Papel de seda para microscópio.( por grupo )

.Escobillón para matraces de 250ml.

Escobillón para tubos 13 x100.

Escobillon para tubos de 20x 150.

1 Kg de bolsas de plastico para un kilo.

Tres metros de tela gaza para los tapónes de matraces erlenmeyer .

4 vasos de plástico desechables pequeños

Page 5: INDICACIONES PARA REPORTAR PRÁ . · PDF filePlata coloidal Cobre en solución Sulfato de cobre al 20% Metanol Etanol Propanol Bactericidas : Fenol Benzal Cloro Yodo Fluor . Aura

Aura Flores Pérez

INSTITUTO TECNOLOGICO DE TUXTLA GUTIERREZ

DEPARTAMENTO DE INGENIERIA BIOQUIMICA .

MICROBIOLOGIA GENERAL

PROPUESTA PRACTICA .No 1

EFECTO DE LOS FACTORES FISICOS Y QUIMICOS SOBRE EL

DESARROLLO MICROBIANO

Objetivo : Demostrar el efectos de algunos factores físicos y agentes

químicos sobre el desarrollo bacteriano.

GENERALIDADES :

En la vida diaria controlar el desarrollo microbiano es de gran

importancia para el profesional que trabaja con organismos vivos, o bien

con materiales estériles es importante conocer el fundamento de las

diferentes técnicas y aplicarlas correctamente , algunos de los factores

físicos que se utilizan para esterilizar es utilizar una temperatura elevada ,

en un medio húmedo y con presión dentro del recipiente como es el

caso de la autoclave la cual inhibe el desarrollo microbiano .

Page 6: INDICACIONES PARA REPORTAR PRÁ . · PDF filePlata coloidal Cobre en solución Sulfato de cobre al 20% Metanol Etanol Propanol Bactericidas : Fenol Benzal Cloro Yodo Fluor . Aura

Aura Flores Pérez

Si se modifican los valores de pH los microorganismos alteran su actividad

metabólica e incluso la inhiben , las diferentes temperaturas influyen en el

crecimiento de los organismos el efecto se observa desde las

temperaturas bajas donde se disminuye la velocidad de reacción hasta la

inactivacion de las enzimas o desnaturalización debido a un aumento en

la temperatura como la usada en los hornos para esterilizar .

Así mismo se propone probar el efecto de algunos compuestos químicos

antimicrobianos dejando abierta la propuesta de los estudiantes para

probar el efecto de algún extracto vegetal con propiedades

bacteriostaticas o bactericidas . En relación a los compuestos propuestos

son : metales pesados , halógenos, desinfectantes comunes como fenol,

benzal, alcohol, determinando si el efecto es bactericida o no., y la

“eficacia” de los compuestos probados observando su efecto en el

crecimiento microbiano.

Así mismo se propone probar el efecto de algunos compuestos químicos

antimicrobiano dejando abierta la propuesta de los estudiantes para

probar el efecto de algún extracto vegetal con propiedades

bacteriostaticas o bactericida . En relación a los compuestos propuestos

son : metales pesados , halógenos, desinfectantes comunes como fenol,

benzal, alcohol, determinando si el efecto es bactericida o no., y la

“eficacia” de los compuestos probados observando su efecto en el

crecimiento microbiano.

Materiales y Reactivos :

Material y Equipo:

Tubos de 16 X 150 con tapón de rosca de baquelita .

Cajas de Petri estériles.

Page 7: INDICACIONES PARA REPORTAR PRÁ . · PDF filePlata coloidal Cobre en solución Sulfato de cobre al 20% Metanol Etanol Propanol Bactericidas : Fenol Benzal Cloro Yodo Fluor . Aura

Aura Flores Pérez

Cajas de Petri no estériles.

Hisopos estériles.

Pinzas de disección.

Asa y porta asa.

Tubos de ensaye pequenos esteriles para perforar el agar

Horno .

Matraces Erlenmeyer.

Mechero Bunsen.

Autoclave.

Algodón.

Papel de estraza.

Gradilla para tubos

Asa

5 Pipetas de 10 ml estériles y no estériles.

5 Pipetas de 1 o 2 ml estériles

REACTIVOS:

Caldo nutritivo . Cobre en forma de sal.( solución al

2% )

Page 8: INDICACIONES PARA REPORTAR PRÁ . · PDF filePlata coloidal Cobre en solución Sulfato de cobre al 20% Metanol Etanol Propanol Bactericidas : Fenol Benzal Cloro Yodo Fluor . Aura

Aura Flores Pérez

HCL al 1 %

NaOH 10% Plata en forma de nitrato o coloidal

Agua destilada Yodo disuelto en alcohol al 2 %

Desinfectante para mesa( Benzal ) Alcholes : etanol 70%, metanol 70%,

propanol al 70%

Tween 80 preparado a una

concentración de 1%..

Cloro en presentación comercial

(cloralex )

Agar nutritivo Fenol al 2 %

Jabón de tocador. ( en solución ) Plomo en forma de sal ( solución al 2

%)

Detergente comercial ( en solución )

Cepas bacterianas

Staphylococcus aureus (10 ml de medio )

Escherichia coli. (10 ml de medio )

Page 9: INDICACIONES PARA REPORTAR PRÁ . · PDF filePlata coloidal Cobre en solución Sulfato de cobre al 20% Metanol Etanol Propanol Bactericidas : Fenol Benzal Cloro Yodo Fluor . Aura

Aura Flores Pérez

PRACTICA 1.-

EFECTO DE LA TEMPERATURA EN EL CRECIMIENTO CELULAR

El catedrático : Expondrá las bases teóricas para el desarrollo

experimental , organizara el trabajo con los alumnos para su desarrollo .

El alumno :

Entregará un diagrama de flujo donde describa las cada uno de los

pasos que realizara en el laboratorio para lograr el Objetivo .

I.- ACTIVIDADES PROPUESTAS :

- Inocular con 1 ml de cada uno de los microorganismos con que se

trabajará en cada tubo con caldo nutritivo estéril.

T2.- Cada tubo será incubado durante 24 horas a diferentes temperaturas :

a - 5 °C., a 35 °C ; 45 °C ; y 75 °C.

T3.-Medir el desarrollo cualitativamente observando turbidez presente y

asignando cruces correspondientes.

T4.-Con los resultados de todas las cepas probadas ,llenar el siguiente

cuadro

Microorganismo -5°C 35 °C 45°C 75°C

E, coli

Page 10: INDICACIONES PARA REPORTAR PRÁ . · PDF filePlata coloidal Cobre en solución Sulfato de cobre al 20% Metanol Etanol Propanol Bactericidas : Fenol Benzal Cloro Yodo Fluor . Aura

Aura Flores Pérez

S. aureus

.- Como explica los resultados obtenidos , con las diferentes temperaturas?

PREACTICA 2.-

IDENTIFICAR LA CONTAMINACION AMBIENTAL

Se sugiere que para probar el efecto del calor húmedo para controlar el

desarrollo microbianos, no se utilice ninguna cepa , se trabajara con la

población existente en el medio ambiente.

1.- Preparar en dos matraces Erlenmeyer , 120 ml de agar nutritivo, cada

uno. Seguir todas las instrucciones de preparación que tienen los frascos.

2.- Un matraz con medio se esteriliza en autoclave. Despues de esterilizar

el medio y esperar que se enfríe de 55°c a 60 °C., se vacía en TRES cajas

de Petri desechables, estériles. Toda la maniobra cerca del mechero.

(aproximadamente 25 -30 ml/caja)

4.- Se espera que se solidifique el medio y se incuban a 37 °C por 24 hr, revisar durante tres

días , para verificar que no exista contaminación.

5.- Una vez verificando que no hay cajas contaminadas, una se conserva la otras dos se

abren en difentes zonas del laboratorio

6.-Se incuban a 37°C por 24 -48 hr., se leen las cajas

Page 11: INDICACIONES PARA REPORTAR PRÁ . · PDF filePlata coloidal Cobre en solución Sulfato de cobre al 20% Metanol Etanol Propanol Bactericidas : Fenol Benzal Cloro Yodo Fluor . Aura

Aura Flores Pérez

PRACTICA 3.-

EFECTO DE LOS FACTORES QUIMICOS SOBRE EL DESARROLLO MICROBIANO,

INSTRUCCIÓNES: Se propone que el estudiante trabaje de forma individual con una cepa,

por equipo se proporcionaran tres cepas diferentes , con las cuales se trabajaran por

diferentes personas del equipo.

Y además se propone que cada equipo utilice con una serie de reactivos otra técnica

para probar inhibición del crecimiento, la misma será investigada por cada equipo

La conclusión del desarrollo experimental se realizara en conjunto .

Previamente antes de iniciar la inoculación se deben tener preparadas y a prueba de

esterilidad suficientes cajas con agar nutritivo.

.-Usando hisópos estériles, sembrar masivamente en cajas de agar nutritivo con

cada uno de los diferentes microorganismos con los cuales se trabajara.

-En cada caja se probarán diferentes compuestos químicos, cada uno de los compuestos

químicos se colocaran colocando las soluciones dentro de los huecos.

4.-Todaslas caja donde perfore con la boca de un tubo de ensayo estéril, haga cuatro

perforaciones equidistantes .,

5..- Inocule cada caja con hisopo estéril, con Staphylococcus aureus

6.- Una caja para los alcoholes y el merthiolate que contiene mercurio : Metanol., Etanol.,

Propanol.

7.- Una caja para los halógenos : Cloro ( Cloralex)., Yodo en solución en alcohol al 2%.,

Fluor o solución bucal con fluor.

8.- Una caja con desinfectantes como Fenol 2%, 4% y al 8% ., Benzal al 2 % y benzal sin

diluir .

Incube por 24 hr a 37 °C.

10- Mida el diámetro del halo de inhibición de cada compuesto.

Page 12: INDICACIONES PARA REPORTAR PRÁ . · PDF filePlata coloidal Cobre en solución Sulfato de cobre al 20% Metanol Etanol Propanol Bactericidas : Fenol Benzal Cloro Yodo Fluor . Aura

Aura Flores Pérez

Llene el cuadro siguiente con los resultados del experimento anotando

el diámetro de inhibición.

COMPUESTO

QUIMICO

Escherichia coli Bacillus subtilis Staphylococcus

aureus.

Plata coloidal

Cobre en solución

Sulfato de cobre al

20%

Metanol

Etanol

Propanol

Bactericidas :

Fenol

Benzal

Cloro

Yodo

Fluor

Page 13: INDICACIONES PARA REPORTAR PRÁ . · PDF filePlata coloidal Cobre en solución Sulfato de cobre al 20% Metanol Etanol Propanol Bactericidas : Fenol Benzal Cloro Yodo Fluor . Aura

Aura Flores Pérez

NSTITUTO TECNOLOGICO DE TUXTLA GUTIERREZ

DEPARTAMENTO DE INGENIERIA BIOQUIMICA .

MATERIA DE MICROBIOLOGIA

PROPUESTA PRACTICA .No 4

TÉCNICAS DE INOCULACIÓN , AISLAMIENTO Y TINCIÓN

OBJETIVO: En esté experimento el estudiante desarrollara las diferentes

técnicas, de inoculación y aislamiento propuestas, comprobando cuales son

las más adecuadas dependiendo de las características morfológicas de cada

organismos .

INTRODUCCION : Las diferentes técnicas utilizadas para aislar o bien para

cultivar un organismo dependen del criterio que se utilice

Las técnicas de inoculación tienen diferente objetivo, algunas se utilizan con

el único fin de que los microorganismos se multipliquen sobre el medio de

cultivo., a estas se les llama técnicas de inoculación masiva.

Cuando se parte de mezclas bacterianas, las técnicas que se utilizan son:

aislamiento por estría cruzada, con estas técnicas se separan bacterias , sobre

la superficie del agar , y además permite comprobar si la técnica cumplió su

función haciendo una comparación de la morfología macroscópica .

El aislamiento o separación de diferentes microorganismos como levaduras

Page 14: INDICACIONES PARA REPORTAR PRÁ . · PDF filePlata coloidal Cobre en solución Sulfato de cobre al 20% Metanol Etanol Propanol Bactericidas : Fenol Benzal Cloro Yodo Fluor . Aura

Aura Flores Pérez

de bacterias , bacterias de bacterias o bien simplemente para contar la

población microbiana por el método de las diluciónes y la siembra por

vaciado es muy común .

Materiales y Procedimientos.

Cajas de Petri estériles, con agar nutritivo.

Cajas de Petri estériles.

Matraz Erlenmeyer de 150 ml con agua estéril

Microscópio binocular.

Varilla angular de vidrio.

Asa con circunferencia.

Varilla de cristal en angulo recto.

Tubos de ensaye con 9 ml de agua destilada estéril.

Tubos de ensaye con medio de cultivo inclinado.

Mechero Fisher.

Alcohol de 95°

Pipetas estériles de 1 ml.

Pipetas estériles de 2 ml.

Page 15: INDICACIONES PARA REPORTAR PRÁ . · PDF filePlata coloidal Cobre en solución Sulfato de cobre al 20% Metanol Etanol Propanol Bactericidas : Fenol Benzal Cloro Yodo Fluor . Aura

Aura Flores Pérez

Medio de Agar de Soya y Trpticaseína .

Algodón

Aguja de disección,

EQUIPO PARA TINCION DE GRAM.

Colorante cristal violeta.

Solución de yodo para Gram.

Solución decolorante, acetona -butanol (95%)

Safranina de Gram.

Palillo aplicador.

5Jerigas de 5 ml y de 10ml

CEPAS BACETRIANAS. por equipo

Cepas 1 de Escherichia coli o Citrobacter sp. en tubo inclinad

EL ALUMNO .

Después de leer cuidadosamente la práctica e investigar lo referente a la

misma para lograr el objetivo entregara al maestro un diagrama de flujo

donde indique los pasos a seguir .

PROCEDIMIENTO PARA BACTERIAS:

Inoculación masiva; De dos bacterias y una levadura en cajas de Petri con

medio de cultivo nutritivo, (previamente colocada a prueba de esterilidad).

Page 16: INDICACIONES PARA REPORTAR PRÁ . · PDF filePlata coloidal Cobre en solución Sulfato de cobre al 20% Metanol Etanol Propanol Bactericidas : Fenol Benzal Cloro Yodo Fluor . Aura

Aura Flores Pérez

Al inocular la caja Petri semi abierta y mantenga la tapa inclinada por encima

del agar para proteger la superficie contra contaminación durante cada paso

de la operación de sembrado como se observa en la figura.

l estudiante debe tener cuidado de no rasgar la superficie del agar, durante el

sembrado, se trata que las bacterias adheridas a la asa se distribuyan sobre la superficie

del agar .

La distribución se hace con un asa o con hisopo trazando lineas paralelas

sobre la superficie y luego se continua estriando sin que se crucen las líneas

Etiquete la cajas con su nombre y el número de experimento, incúbelas a la

temperatura ambiente en posición invertida, para evitar que el agua que se

condensa en el interior de la cubierta gotee sobre la superficie de crecimiento.

La condensación puede dispersar y mezclar los organismos haciendo imposible

el aislamiento de las colonias puras.

POR VARILLA ACODADA.

En una caja de Petri se coloca 0.1ml de una suspención bacteriana ,en el

centro de la caja de Petri.

La varilla, tiene un doblez con un angulo de 90°, esta se sumerge en alcohol,

se acerca a la flama del mechero para que se inflame, siempre cerca de la

zona estéril, se deja enfriar.

Se coloca sobre la muestra se efectúa un corrimiento de la muestra con la

varilla, en un angulo de 360°C.

Se incuba a temperatura de 37°C por 24 hr.

Page 17: INDICACIONES PARA REPORTAR PRÁ . · PDF filePlata coloidal Cobre en solución Sulfato de cobre al 20% Metanol Etanol Propanol Bactericidas : Fenol Benzal Cloro Yodo Fluor . Aura

Aura Flores Pérez

Observar el aislamiento de las colonias, describir la morfología colonial. Decidir en

su base a sus observaciónes cuales son las ventajas y desventajas .

Observe el crecimiento, describa la morfología colonial según se pide para

cada cepa :

ASLAMIENTO POR DILUCIONES

En cinco tubos de ensayo se colocan 9.9 ml de agua destilada estéril , se

esterilizan teniendo cuidado de dar un leve giro en sentido contrario al tapón de

rosca.

Apartir de una suspención de varios(2) microorganismos haga diluciónes ,

utilizando pipeta estéril y a partir de las dos últimas diluciónes inocule por

vaciado , agite con movimientos circulares para dispersar las bacterias .

Incube a temperatura 37 °C por 24 horas

Cuente el número de bacterias que se desarrollaron en un contador de colonias

Cual es su criterio sobre el uso de está técnica y los cuidados que debe tener

TINCIÓN DE BACTERIAS .

La tinción de Gram.

Limpie 4 portaobjetos y prepare 4 frotes idénticos en cada porta, de la

siguiente manera: cerca de uno de los extremos del portaobjetos prepare un

pequeño frotes de la cepa en estudio más o menos del tamaño de una

moneda pequeña.

Page 18: INDICACIONES PARA REPORTAR PRÁ . · PDF filePlata coloidal Cobre en solución Sulfato de cobre al 20% Metanol Etanol Propanol Bactericidas : Fenol Benzal Cloro Yodo Fluor . Aura

Aura Flores Pérez

Caliente el portaobjetos sin excederse solo para fijar las bacterias al cristal.

Cubra el portaobjetos con cristal violeta de Gram teniendo cuidado de que el

liquido bañe al frote déjelo reaccionar por un minuto .

Descarte el exceso de colorante y lave en la llave brevemente.

Aplique el yodo de Gram y déjelo reaccionar por un minuto.

Lave en la llave.

Agregue con cuidado la solución decolorante , gota a gota , tan pronto como

las gotas de la solución ya no arrastren el color , lave a la llave para detener la

acción del decolorante .

Cubra el porta con la solución de Safranina ., y déjela reaccionar por 10 a 20

segundos

Lave el exceso de colorante y seque al aire .

Describa la morfología microscópica de las cepas que inóculo y compare con

las aisladas .

Page 19: INDICACIONES PARA REPORTAR PRÁ . · PDF filePlata coloidal Cobre en solución Sulfato de cobre al 20% Metanol Etanol Propanol Bactericidas : Fenol Benzal Cloro Yodo Fluor . Aura

Aura Flores Pérez

INSTITUTO TECNOLOGICO DE TUXTLA GUTIERREZ CHIAPAS

PRACTICAS DE MICROBIOLOGIA

PROPUESTA PRACTICA N°5

CURVA DE CRECIMIENTO DE ESCHERICHIA COLI .

OBJETIVO :

Se determinarán experimentalmente el tiempo que tardan dos

microorganismos diferentes en desarrollar las diferentes etapas de

crecimiento , condiciónes óptimas y variando las situación para cuantificar

como afecta en su curva de crecimiento.

INTRODUCCION :

Las células vivas presentan diferentes etapas en su desarrollo cada una de

estas indica las características de desarrollo de la población que se está

midiendo . Para medir las diferentes etapas de desarrollo se utilizan diferentes

técnicas , para la las bacterias microscópicas se recomienda la técnica de

aislamiento por diluciónes e inoculación por vaciado., comparándola con la

técnica de lectura de la turbidez .

Para las bacterias fotosintéticas se recomienda la técnica determinación de

clorofila y peso seco para cuantificar su desarrollo .

MATERIAL Y EQUIPO :

Page 20: INDICACIONES PARA REPORTAR PRÁ . · PDF filePlata coloidal Cobre en solución Sulfato de cobre al 20% Metanol Etanol Propanol Bactericidas : Fenol Benzal Cloro Yodo Fluor . Aura

Aura Flores Pérez

7 Matraces Erlenmeyer de 150 ml

2 Matraces Nefelométricos

2 Matraces Erlenmeyer de 250 ml

2 Matraz de 500 ml Erlenmeyer

1 Matraz Kittazato

10 vasos de precipitado de 250 ml.

10 Tubos de ensayo de 16 x 150

20 Pipetas de 1 ml .

7 discos de papel filtro a peso constante

12 cajas de pertri estériles.

Algodón

Mechero Fisher.

Papel de estraza para envolver.

Papel aluminio .

EQUIPO :

Espectrofotómetro

Bomba de vacio

Contador de colonias

Page 21: INDICACIONES PARA REPORTAR PRÁ . · PDF filePlata coloidal Cobre en solución Sulfato de cobre al 20% Metanol Etanol Propanol Bactericidas : Fenol Benzal Cloro Yodo Fluor . Aura

Aura Flores Pérez

Embudo Buchner

Una agitadora de matraces

Una lampara de luz natural

Autoclave

Horno

agua destilada.

agar nutritivo

CEPAS

caldo nutritivo con la cepa de Escherichia coli con un crecimiento de 10 a 12hr

a 37 °C

Matraz con cepa de Phormidum .

Desarrollo experimental propuesto :

DETERMINACION DE LA CURVA DE CRECIMIENTO POR METODOS

ESPECTROFOTOMÉTRICOS

De forma simultánea también leerá la variación de la absorvancia durante el

desarrollo de la curva de crecimiento, de tal forma que compare ambos

resultados .

Page 22: INDICACIONES PARA REPORTAR PRÁ . · PDF filePlata coloidal Cobre en solución Sulfato de cobre al 20% Metanol Etanol Propanol Bactericidas : Fenol Benzal Cloro Yodo Fluor . Aura

Aura Flores Pérez

a) En un matraz nefelométrico prepare 50 ml de medio de cultivo , esterilizar y

dejar 24 horas a prueba de esterilidad .

b) inocular al mismo tiempo los dos matraces el erlenmeyer con 100ml de medio

y el nefelométrico con 50 ml de medio .

c) Iincubar a 37 °C en agitadora

CIANOBACTERIAS :

Para diferenciar la técnica usada en la determinación de el crecimiento de

bacterias y de cianobacterias, prepare medio de cultivo para cianobacterias

y distribúyalo en 7 matraces.

Incubar la CIANOBACETRIA a temperatura ambiente, y con una lampara de

luz blanca .

La determinación se realizara por cuantificación de clorofila y peso seco , en

papel filtro wattman ., y por clorofila la lectura se realizara cada 24 horas en

el caso de cianobacterias .

TECNICA DE AISLAMIENTO :

Page 23: INDICACIONES PARA REPORTAR PRÁ . · PDF filePlata coloidal Cobre en solución Sulfato de cobre al 20% Metanol Etanol Propanol Bactericidas : Fenol Benzal Cloro Yodo Fluor . Aura

Aura Flores Pérez

1.- Una ves que se tiene el cultivo de Escheria coli, en caldo nutritivo en las

condiciónes especificadas .

2.- Rotular los tubos con claves que indique la serie de diluciónes que se

realizaran en los recipientes que contienen 9.9 ml o bien se puede hacer en

frasco de gerber añadiendo 99 ml de agua y esterilizar en agua destilada .

3.- Se recomienda tomar cada hora las muestras durante las siguientes 6

horas y despues cada 2 horas hasta concluir el tiempo de prueba .

4.- Al cumplirse cada uno de los intervalos ,

Usted tomará con la pipeta exactamente 0.1ml de cultivo bacteriano y lo

transferirá al tubo con 9.9 ml de agua destilada estéril .

Tape bien el tubo y agítelo bien para desbaratar los racimos de bacterias

Esta primera dilución es 1:100 del cultivo original .

5.- Transfiera con la pipeta exactamente 0.1ml de está dilución al siguiente

tubo con 9.9 ml de agua estéril, repitiendo el lavado de la pipeta como en el

caso anterior .

Agítelo bien. En esta nueva suspención es una dilución 1: 10 000 del cultivo

original

6.-Repita dos veces más el mismo procedimiento transfiriendo exactamente

0.1ml de esta nueva dilución como anteriormente se explico .

Page 24: INDICACIONES PARA REPORTAR PRÁ . · PDF filePlata coloidal Cobre en solución Sulfato de cobre al 20% Metanol Etanol Propanol Bactericidas : Fenol Benzal Cloro Yodo Fluor . Aura

Aura Flores Pérez

7.- Para inocular de las diluciónes que anteriormente se realizaron, se

seleccionan de las últimas dos diluciónes 1 ml , utilizando la técnica de

vaciado, cuidar que la temperatura del medio no sea muy alta ,

inmediatamente agitar para distribuir las bacterias por todo el medio ,

8.- Espere que solidifique el agar, inviértalas e incube a 37 °C por 24 - 28 hr.

Para preparar el medio para cianobacterias se da siguiente lista de materiales

.

SOLUCION DE MACROELEMENTOS SOLUCION DE MICROELEMENTOS

NaHCO3 25 g/l H3BO3 2.85 g/l

Ca CL 2. 2 H2O 25 g/l MnCL2.4H2O 1.81 g/l

Mg SO4 7 H 2 0 25 g/l ZnSO4.7 H2O 0.222 g/l

Na2CO3 5 g/l CuSO4.5 H2O 0.080 g/l

Na2EDTA. 2H2O 1.1 g/l MoO3Na 0.015 g/l

KNO3. 7H2O 200 g /l

K32HPO4 25 g/l

FeSO4.7H2O 1 g/l

Page 25: INDICACIONES PARA REPORTAR PRÁ . · PDF filePlata coloidal Cobre en solución Sulfato de cobre al 20% Metanol Etanol Propanol Bactericidas : Fenol Benzal Cloro Yodo Fluor . Aura

Aura Flores Pérez

1.- De esta solución se toma 1 ml y se añade a 1 l de agua tanto de

macroelementos como de microelementos .se esteriliza en autoclave.

2.- Se inocula con una suspención de 10 ml de cianobacterias , en condiciónes

de esterilidad con una pipeta estéril .

3.- Se incuba cerca de una lampara de luz blanca , se mueve de ves en

cuando, o bien se coloca en una agitadora para que suavemente se agite .

4.- Para determinar su crecimiento se puede determinar la concentración de

clorofila por día , y hacer una curva de peso seco contra tiempo

Page 26: INDICACIONES PARA REPORTAR PRÁ . · PDF filePlata coloidal Cobre en solución Sulfato de cobre al 20% Metanol Etanol Propanol Bactericidas : Fenol Benzal Cloro Yodo Fluor . Aura

Aura Flores Pérez

INSTITUTO TECNOLOGICO DE TUXTLA GUTIERREZ

DEPARTAMENTO DE INGENIERIA BIOQUÍMICA

MATERIA DE MICROBIOLOGIA

PROPUESTA PRACTICA N°6

INOCULACION EN MEDIOS DE CULTIVO SELECTIVOS ,

DIFERENCIALES Y ENRIQUECIDOS

MEDIOS DE CULTIVO ENRIQUECIDO , SELECTIVO Y DIFERENCIAL

OBJETIVO: Seleccionar los medios de cultivo en base a su función y

composición química, determinar la morfología macroscópica de las cepas

en los diferentes medios .

INTRODUCCION: Los medios de cultivo se clasifican en base a diferentes

características , desde el punto de vista de composición química y en base a su función .

Es importantes identificar las funciones bioquímicas que tiene cada uno de los

componentes dentro de los medios de cultivo, en este desarrollo experimental se

propone que el alumno seleccione diferentes medios de cultivo como pueden ser medios

enriquecidos, selectivos y diferenciales , que más frecuentemente se utilizan para

identificar las características macroscópicas que caracterizan a cada cepa .

Page 27: INDICACIONES PARA REPORTAR PRÁ . · PDF filePlata coloidal Cobre en solución Sulfato de cobre al 20% Metanol Etanol Propanol Bactericidas : Fenol Benzal Cloro Yodo Fluor . Aura

Aura Flores Pérez

Para estudiar el medio donde se cultiva un tejido vegetal ., se sugiere hacer

una revisión bibliográfica del tema y visitar un laboratorio que se especialice en

esto .

MATERIALES Y REACTIVOS:

MATERIALES Y EQUIPOS. REACTIVOS.

Autoclave

Medio de cultivo sólido

enriquecido, selectivo,

diferencial.

Estufa de incubación Medio de cultivo líquido.

Horno Agua destilada

Mechero. Desinfectante.

Cajas de Petri. Soluciónes Bouffer para calibrar

potenciómetro.

Tubos con tapón de rosca.

Matraces Erlenmeyer CEPAS.

Probeta. Escherichia coli (bacilos, G-)

Espátula. Bacillus subtillis (bacilus, G +)

Balanza. Staphylococcus aureus ( cocos G

+)

Gradilla. Pseudomonas aeruginosa (

Page 28: INDICACIONES PARA REPORTAR PRÁ . · PDF filePlata coloidal Cobre en solución Sulfato de cobre al 20% Metanol Etanol Propanol Bactericidas : Fenol Benzal Cloro Yodo Fluor . Aura

Aura Flores Pérez

bacilo G-)

Microscópio estereoscópico .

Potenciómetro.

Asa y portasa.

Algodón.

PROCEDIMIENTO:

MEDIOS DE CULTIVO SELECTIVOS Y/ DIFERENCIALES.,Y ENRIQUECIDOS .

Para el desarrollo de está práctica se recomienda primero a partir de una lista

de medios existentes en el laboratorio seleccionar y clasificar los medios de

estos distinguir dos o tres medios que se encuentren clasificados como medios

complejos y sintéticos.

Elegir dos medios de cultivo enriquecidos, dos selectivos, y dos diferenciales

A partir de una lista de medios hacer la clasificación y llenar el siguiente

cuadro:

Page 29: INDICACIONES PARA REPORTAR PRÁ . · PDF filePlata coloidal Cobre en solución Sulfato de cobre al 20% Metanol Etanol Propanol Bactericidas : Fenol Benzal Cloro Yodo Fluor . Aura

Aura Flores Pérez

Clasificación de Medios de Cultivo

PROCEDIMIENTO :

Preparar medio de cultivo:

MEDIO DE CULTIVO : Escherichia coli Staphylococcus aureus

EMB

MAC CONKEY

XLD

VERDE BRILLANTE

ASM

SS AGAR

1. Para los medios con agar , se siguen las instrucciones que hay en cada uno

de los medios , para pesar y disolver los componentes del medio.

2. Se debe dejar a “ Prueba de Esterilidad “ por 24 hr .

3. Los medios después de prepararlos y haber pasado la prueba de esterilidad

, se pueden utilizar, o bien guardarlos en refrigeración.

4. La inoculación de los medios con las cepas se hará con una asa. Y se

recomienda la estría cruzada para aislar las colonias y hacer la descripción

Page 30: INDICACIONES PARA REPORTAR PRÁ . · PDF filePlata coloidal Cobre en solución Sulfato de cobre al 20% Metanol Etanol Propanol Bactericidas : Fenol Benzal Cloro Yodo Fluor . Aura

Aura Flores Pérez

morfológica de cada una de las cepas microbianas en los diferentes medios

de cultivo.

5. Anotar las características morfológicas de las diferentes cepas como son:

forma de la colonia:

tamaño de la colonia:

bordes:

elevación:

apariencia:

7. Por regla general siempre se debe hacer frote y tinción de la cepa que se

inocula antes y despues que está se desarrollo para verificar que no hubo

contaminación.

Con respecto al desarrollo morfológico en los diferentes medios se recomienda

consultar el Manual Bioxon para verificar que la colonia inoculada se

desarrollo conforme se esperaba.

Se recomienda consultar el capítulo de medios de cultivo de esté texto ,como

guía.

Anote y fotografie el color de los medios antes de inócular compruebe que es

como lo marca la bibliografía

Después del desarrollo microbiano y diga como es el color del medio e

interprete el significado del cambio , del crecimiento o de la inhibición del

microorganismo .

OBSERVACIONES

INSTITUTO TECNOLOGICO DE TUXTLA GUTIERREZ

Page 31: INDICACIONES PARA REPORTAR PRÁ . · PDF filePlata coloidal Cobre en solución Sulfato de cobre al 20% Metanol Etanol Propanol Bactericidas : Fenol Benzal Cloro Yodo Fluor . Aura

Aura Flores Pérez

DEPARTAMENTO DE INGENIERIA BIOQUIMICA .

MATERIA DE MICROBIOLOGIA .

PROPUESTA PRACTICA N° 7

PARA PROBAR MEDIOS DE CULTIVO DIFERENCIA

( PRUEBAS BIOQUÍMICAS.)

MEDIOS DE CULTIVO DIFERENCIALES .

Durante el proceso de aislamiento e identificación de bacterias en el trabajo

de laboratorio se seleccionan medios de cultivo para dirigir la selección de

bacterias que se consideran patógenas o enterotoxigenicas ., en el caso de

que el aislamiento sea dirigido a otros fines como aislar microorganismos con

actividad antibiótica, o productores de enzimas, vitaminas u otros., la estrategia

de selección cambia .

Una ves que las bacterias se aislaron en medios selectivos y/o diferenciales, y

se determina que se ha logrado aislar una sola colonia microbiana, con las

características morfológicas que son interesantes, como lo es el que sean o no

fermentadoras de azucares como lactosa , tamaño, apariencia , color entre

otros.

Posteriormente se inoculan en medios enriquecidos para que de aquí, se

toma un inóculo para hacer las pruebas bioquímicas,

Page 32: INDICACIONES PARA REPORTAR PRÁ . · PDF filePlata coloidal Cobre en solución Sulfato de cobre al 20% Metanol Etanol Propanol Bactericidas : Fenol Benzal Cloro Yodo Fluor . Aura

Aura Flores Pérez

MATERIAL: REACTIVOS:

Tubos de ensaye de 13 x100 Agar MIO

Matraces erlenmeyer de 125 ml. Agar SIM

Probeta de 50 ml Agar de LIA

Espátula Agar TSI

Mechero Agar de Citaro de Simons.

Balanza granataria. Gelatina nutritiva.

Autoclave. Caldo R.M. - V.P.

Gradilla. Caldo Urea.

Asa bacteriológica.

CEPAS

Escherichia coli.

Pseudomonas aeruginosa

Proteus mirabilis.

Aerobacter sp.

Page 33: INDICACIONES PARA REPORTAR PRÁ . · PDF filePlata coloidal Cobre en solución Sulfato de cobre al 20% Metanol Etanol Propanol Bactericidas : Fenol Benzal Cloro Yodo Fluor . Aura

Aura Flores Pérez

Estas pruebas se desarrollan en medios diferenciales , donde el

microorganismo inoculado debe tener una única célula de origen., aislado de

las otras colonias que se hayan desarrollado. Las pruebas que se realizan

reciben diferentes denominaciones ., las más comunes son :

MIO : M : MOVILIDAD., I INDOL., O: DESCARBOXILACIÓN DE LA ORNITINA.

SIM : S: SULFURO DE HIROGENO I : INDOL M: MOVILIDAD.

LIA: L : LISINA DESCARBOXILACIÓN.

TSI : FERMENTACIÓN DE TRES AZÚCARES : GLUCOSA., SACAROSA., Y

LACTOSA.

CITRATO DE SIMMONS: UTILIZACIÓN DEL CITRATO COMO UNICA FUENTE DE

ENERGIA Y DE CARBONO..

CALDO R.M. - V.P. : DETERMINA LA HABILIDAD DE LOS MICROORGANISMOS

PARA PRODUCIR, ACIDO( R.M.) O ACETOINAS ( V.P.) A PARTIR DE GUCOSA.

CALDO UREA: DETERMINAR LA CAPACIDAD PARA PRODUCIR UREASA .

Desarrollo:

1.- Preparar los medios de cultivo especificados, calculando los mililitros para

un tubo por cepa y un tubo testigo. (Verificar antes de preparar el medio el pH

del agua )

Page 34: INDICACIONES PARA REPORTAR PRÁ . · PDF filePlata coloidal Cobre en solución Sulfato de cobre al 20% Metanol Etanol Propanol Bactericidas : Fenol Benzal Cloro Yodo Fluor . Aura

Aura Flores Pérez

2.- Distribuirlos, colocando 3 ml en cada tubo. Taparlos con algodón y

colocarlos en un recipiente para esterilizar.

3.- Esterilizar según las indicaciones específicas para cada medio de cultivo .

4.- Después de esterilizar, gelificar los medios de:

LIA, la inclinación no debe ser pronunciada.

TSI (Triple azúcar y hierro) , se debe inclinar lo suficiente para que se forme un

pico de flauta largo.

El Citrato de Simons inclinación normal.

El SIM no se inclina , se deja detenido en la gradilla para que se gelifique en

ese lugar.

5.-Dejar a prueba de Esterilidad por 24 hr a 37°C.

6.- Inocular cada cepa en la serie de pruebas bioquímicas preparadas,

siguiendo las instrucciones de sembrado para cada una.

7.-Incubar el tiempo señalado para cada prueba y a la temperatura

especificada.

8.-Después del tiempo de incubación , observar detenidamente cada prueba

comparando con el tubo testigo los cambios que se han producido y en el

caso necesario agregar reactivos que se indican.

9.- Con los resultados obtenidos , elaborar un cuadro y consultar la bibliografía

para comprobar la identidad del microorganismo estudiado.

PRUEBAS COMUNES PARA EL ESTUDIO DE LA FAMILIA ENTEROBACTERIACEAE.

Page 35: INDICACIONES PARA REPORTAR PRÁ . · PDF filePlata coloidal Cobre en solución Sulfato de cobre al 20% Metanol Etanol Propanol Bactericidas : Fenol Benzal Cloro Yodo Fluor . Aura

Aura Flores Pérez

PRUEBA MEDIO/

INOCULO

REACTIVO INCUBACION

a 37°C

POSITIVO NEGATIVO.

INDOL caldo peptonado

o caldo triptona.

0.5 de reactivo

Kovacs.

1-2 dias Rojo Amarillo claro

R.M.

ROJO DE

METILO (RM)

Caldo glucosa 0.5 ml rojo de

metilo

1-2 Rojo Amarillo

V.P.

VOGES-

PROSKAUER.

Caldo glucosa 0.2ml de KOH

0.6ml de alfa

naftol 5%.

1-2 Rojo Turbio o café

CITRATO DE

SIMMONS

Medio de

Simmons con

Azul de

bromotimol,

inoculado en

estría

ninguno 4 días Crecimiento y

vire del medio a

color azul.

Medio de color

verde

( no vira )

PRODUCCIÓND

E H2S

TSI o Kligler

(inoculación por

picadura y

estria)

ninguno 1-2 hasta 7 días En la picadura se

lee un

precipitado

negro.

No cambia.

PRODUCCION

DE UREASA

Caldo Stuart rojo

de fenol

ninguno 2 horas Violeta Rojizo

CRECIMIENTO

EN KCN

Caldo cianuro de

Moeller.

2 dias crecimiento no crece.

PRODUCCION

DE FENIL

ALANINA DE 5

AMINASA

Agar fenil

alanina(estria)

0.4 de FeCl 10% 1 dia Producción de

ac. fenilpirúvico ,

verde en la estría

.

Amarillo

L I A. Medio de Moeller

con púrpura de

ninguno 4 días Moeller : violeta

ó Rojo

Amarillo

fermentación de

Page 36: INDICACIONES PARA REPORTAR PRÁ . · PDF filePlata coloidal Cobre en solución Sulfato de cobre al 20% Metanol Etanol Propanol Bactericidas : Fenol Benzal Cloro Yodo Fluor . Aura

Aura Flores Pérez

M I O.

DESCARBOXILA

SA DE LA

ORNITINA,

LISINA Y

ARGININA.

bromocresol ,

sello de aceite

mineral o

parafina./ inoculo

picadura.

Medio de

Falkow con

purpura de

bromocresol.

Falkow púrpura.

la glucosa.

SIM

SULFURO DE

HIDROGENO.

INDOL.

MOVILIDAD.

SIM (picadura)

indol:

0.5 ml de

reactivo de

Kovacks

2 dias Sulfhidrico :

precipitado negro

Indol : rojo

Movilidad: turbio

o difución del

inóculo.

SH: color del

medio no

cambia.

Indol: amarillo.

Movilidad :solo

crece en la

picadura.

T S I

FERMENTACIO

N DE

AZUCARES

:GLUCOSA

SACAROSA Y

LACTOSA.,

T S I.

Medio

enriquecido y

con rojo de fenol

., tiosulfato.,

fierro.

18- 24 Hr Superficie

lactosa +

:amarillo.

Fondo amarillo y

burbujas de aire

:

Sin cambio o de

color rojo

:lactosa -

Sin cambio:

Page 37: INDICACIONES PARA REPORTAR PRÁ . · PDF filePlata coloidal Cobre en solución Sulfato de cobre al 20% Metanol Etanol Propanol Bactericidas : Fenol Benzal Cloro Yodo Fluor . Aura

Aura Flores Pérez

MOVILIDAD Y

PRODUCCIÓN

DE SH

GAS DE

GLUCOSA

glucosa +., gas

+

Fondo y

picadura negro:

H2S +

glucosa -

sacarosa -

Fondo sin

cambio.

PRUEBA MEDIO REACTIVO INCUBACIÓN POSITIVO NEGATIVO.

INSTITUTO TECNOLOGICO DE TUXTLA GUTIERREZ.

DEPARTAMENTO DE BIOQUIMICA

PROPUESTA PRACTICA DE MICROBIOLOGIA

Page 38: INDICACIONES PARA REPORTAR PRÁ . · PDF filePlata coloidal Cobre en solución Sulfato de cobre al 20% Metanol Etanol Propanol Bactericidas : Fenol Benzal Cloro Yodo Fluor . Aura

Aura Flores Pérez

PRACTICA N° 8 HONGOS

OBSERVACION E IDENTIFICACIÓN MORFOLOGICA DE HONGOS.

OBJETIVO:

Identificar las características macroscópicos y microscópicas más distintivas de

algunas cepas de hongos , observando la organización de sus estructuras

reproductoras Para esto se deberá utilizar la técnica de inoculación para

hongos filamentosos, y para levaduras

MATERIAL: REACTIVOS:

Estufa de incubación. Alcohol para flamear las pinzas y aguja.

Caja de Petri. Fenol al 2%

Varilla doblada en V Medio de cultivo para hongos : PDA O

AGAR CZAPEC.

Pipetas pasteur. Glicerina 20% , estéril.

Pipetas graduadas de 10 ml. (estériles) Formaldehido 10%

Porta objetos. Colorantes para la técnica de gram

Cubreobjetos. Colorantes para la técnica de azul de

algodón acético.

Espátula Desinfectantes.

Bisturí. MEDIO DE CULTIVO :

Pinzas de disección. P.D.A.

Aguja de disección CZAPECK

Page 39: INDICACIONES PARA REPORTAR PRÁ . · PDF filePlata coloidal Cobre en solución Sulfato de cobre al 20% Metanol Etanol Propanol Bactericidas : Fenol Benzal Cloro Yodo Fluor . Aura

Aura Flores Pérez

Vaso de precipitado de 100 ml

Mechero Fisher.

Cepas:

Rhizopus nigricans

Mucor rouxxi

Aspergillus niger.

Penicillium sp.

Neurospora sitophila.

Hansenula polymorha.

Sacharomyces cerevisiae.

Desarrollo :

1.- Preparar con anticipación cajas con medio de PDA. Y Czapeck .

2.- A partir de los tubos donde se han desarrollado las cepas de hongos y

levaduras, tomar el inoculo con el asa recta o bien asa con un doblez en un

angulo de 90°., tomar una muestra de las hifas o esporas de los hongos y

depositarla en el centro de la caja con medio de cultivo.

En el caso de levaduras se inocula haciendo estrias para separar las colonias

.

3.- Las cajas se incuban a temperatura ambiente durante 4 a 8 días ., se

deben revisar diariamente , para verificar el desarrollo .

Page 40: INDICACIONES PARA REPORTAR PRÁ . · PDF filePlata coloidal Cobre en solución Sulfato de cobre al 20% Metanol Etanol Propanol Bactericidas : Fenol Benzal Cloro Yodo Fluor . Aura

Aura Flores Pérez

4.- Cuando se observe que el desarrollo es suficiente se anotan los siguientes

datos: ver tabla N° 1.

5.-Describir la morfología microscópica tomando un poco del micelio entre

porta y cubreobjetos, tratando de desorganizar lo menos posible las estructuras

del hongo. Puede usarse lugol o lactofenol para la preparación.

6.-A las cepas de hongos levaduriformes , hacerles frote y teñir por el método

de Gram, observar a inmersión.

7.-A las cepas de hongos filamentosos practicarle el método del microcultivo,

para su completa observación.

8.-Compara sus observaciones con la bibliografía y anotar sus conclusiones.

Tabla N°1 Descripción de las características macroscópicas y

microscópicas de los hongos

Si las hifas son septadas o no.

El color del micelio

Si el micelio es claro o ahumado

Aspecto de la colonia si es un hongo filamentoso ; algodonosa.,

aterciopelada .,arenosa, vellosa.

La producción de esporas : sexuales o asexuales

Clasificación de el tipo de espora que se produce : oospora.,

cigospora., ascospora., basidiospora.

Page 41: INDICACIONES PARA REPORTAR PRÁ . · PDF filePlata coloidal Cobre en solución Sulfato de cobre al 20% Metanol Etanol Propanol Bactericidas : Fenol Benzal Cloro Yodo Fluor . Aura

Aura Flores Pérez

Tabla N°1 Descripción de las características macroscópicas y

microscópicas de los hongos

Clase de esporas asexuales : esporangiosporas , conidios o

artrosporas

Característica de las estructuras donde se forman las esporas:

esporangios: tamaño, forma , color y locallización.

Conidios : simples ., ramificados , en cadena., formados por

gemación., en masas.

Forma y disposición de los esterigmas o fiálides.

Aspecto de los esporangióforos o conidióforos : simples o ramificados ,

tipo de ramificación ., tamaño y forma de la columnela apical del

esporangióforo.

Presencia de estructuras especiales: estolones., rizoides., células

basales., apófisis., clamidospoas., esclerocios ., etc.

METODO DEL MICROCULTIVO:

a.- Esterilizar cajas de petri de cristal , y dentro de está una varilla de cristal en

V ., encima de este se coloca un portaobjeto y un cubreobjeto.

b.- Preparar una caja con medio de cultivo para hongos (sabourond.,

czapeck. o papa dextrosa agar), en la parte externa de la caja cuadricular de

manera que se formen cuadros de 1 cm 2 .

Page 42: INDICACIONES PARA REPORTAR PRÁ . · PDF filePlata coloidal Cobre en solución Sulfato de cobre al 20% Metanol Etanol Propanol Bactericidas : Fenol Benzal Cloro Yodo Fluor . Aura

Aura Flores Pérez

c.- En forma estéril , con bisturí, cuadricular por dentro del agar y transferir un

cúbito del mismo, al portaobjetos.

d.- Inocular con una cepa pura el centro de los cuatro costados con el asa en

angulo en 90° y despues colocar el cubreobjetos sobre el cubo de agar

inoculado.

e.- Con una pipeta estéril colocar en la base de la caja 10 ml de glicerol al 20%

estéril, cuidando de no mojar el microcultivo.

f.- Incubar a 28°C, observar cada 24 hr hasta detectar un buen desarrollo.

g.- Cuando se observe crecimiento del hongo, retirarle con una pipeta pasteur

y bulbo de hule, el glicerol al 20% estéril, cuidando de no mojar el microcultivo

.

h.- Agregar solución de formaldehido al 10% y dejarlo un mínimo de 2 horas

para su inactivación.

i.- Sacar el microcultivo. Puede observarse en microscopio estereoscópico y

después practicarle alguna tinción para hongos.

J.- Separar cuidadosamente el portaobjetos del cubreobjeto, quitar el agar

con cuidado , para no desorganizar el crecimiento , y teñir cada uno por la

técnica de azul de algodón acético.

Page 43: INDICACIONES PARA REPORTAR PRÁ . · PDF filePlata coloidal Cobre en solución Sulfato de cobre al 20% Metanol Etanol Propanol Bactericidas : Fenol Benzal Cloro Yodo Fluor . Aura

Aura Flores Pérez

Page 44: INDICACIONES PARA REPORTAR PRÁ . · PDF filePlata coloidal Cobre en solución Sulfato de cobre al 20% Metanol Etanol Propanol Bactericidas : Fenol Benzal Cloro Yodo Fluor . Aura

Aura Flores Pérez

Page 45: INDICACIONES PARA REPORTAR PRÁ . · PDF filePlata coloidal Cobre en solución Sulfato de cobre al 20% Metanol Etanol Propanol Bactericidas : Fenol Benzal Cloro Yodo Fluor . Aura

Aura Flores Pérez