PREPARACIN DE UNA LMINA HISTOLGICA

La muestra llega al laboratorio en frascos con formolCon su cdigo y su orden

se realiza un examen macroscpico de la muestraDonde se determina el Color Tamao Peso

se corta una porcin pequea de muestra y se coloca en el caseteTerminando el examen macroscpico

Comenzando la parte microscpica se prepara la muestra para su observacin en el microscopioSe coloca el casete en una canastilla la cual pasa 1 hora por diferentes alcoholes

Primero son los alcoholes corrientes que sirve para hidratar la muestra

Segundo los alcoholes absoluto que sirve para deshidratar la muestra

Tercero los alcoholes neoclear que sirven para aclarar la muestra

Y las parafina

Luego de terminado todo el proceso que demora 12 horas se comienza a hacer los moldes

Se utiliza una plancha a 50 grados donde se hace el molde de parafina con la muestra Primero se convierte la parafina en liquida usando la estufa y se vierte a los moldes

Luego de ello se quita la tapa del casete colocando la muestra y la parte interior del casete dentro del molde presionando para que se unan

Se coloca en el hielo para que la parafina y la muestra se solidifiquen juntas

Luego de la solidificacin de la parafina queda Lista para el corte

Para el corte se usa el micrtomo Con el cual realizamos cortes de 3 micrones

Luego de ello el corte se coloca en agua fra para evitar que se desparafine antes de colocar el portaobjeto

Ya pasado eso se lleva a bao de flotacin a 37 grados para que se expanda la muestra

Luego se coloca en la lmina y se lleva a la estufa para que se desparafine

Procede a colorear la muestra con la coloracin hematoxilina eosinaSiguiendo los siguientes pasos Sumergir los preparados histolgicos en xilol para eliminar los excesos de parafina. El xilol es un alcohol txico pero existen reactivos (como el Hemo-D) que ejercen la misma funcin aclarante de parafina sin la toxicidad del xilol.Luego pasan por una serie de alcoholes en concentracin decreciente para rehidratar la muestra (100, 95 y 70).Se lava en agua para eliminar exceso de alcoholSe sumerge en hematoxilina por 10 minutos, luego se lava en agua para eliminar excesos y se pasa rpidamente por alcohol cido.Se lava nuevamenteSe sumerge 30 segundos en eosina.Se pasa por otra serie de alcoholes, esta vez en orden creciente (70, 95 y 100) para deshidratar la muestra y que se pueda realizar el montaje con un pegamento no soluble en agua.se deja remojar 10 minutos en xilol, antes de realizar el montaje final.

Finalmente la lmina coloreada se entrega al patlogo para su lectura

INTRODUCCIN

El uso de tinciones de tejidos para facilitar su observacin microscpica se inici con la hematoxilina-eosina en el siglo XIX. En el primer tercio del siglo XX se introduce la histoenzimologa que utiliza tejidos sin fijar y de la que quedan nicamente restos, como los estudios con DPNasa y ATPasa en enfermedades musculares. La primera inmunohistoqumicase realiz con anticuerpos fluorescentes sobre tejidos frescos como los que se utilizan actualmenteen diversas enfermedades de piel y rin. Los mtodos inmunoenzimticos (peroxidasa, avidita-biotina) que permitan amplificar la seal del cromgeno favorecieron la utilizacin de tejidos fijados en formol e incluidos en parafina. Actualmente se utilizan polmeros sintticos para amplificar la seal

La Histologa Parte de la biologa que estudia la composicin, la estructura y las caractersticas de los tejidos orgnicos de los seres vivosLa Histoqumica se refiere a la demostracin por reacciones qumicas de afinidad entre u componente celular o tisular y el colorante. Aun los laboratorios ms sencillos pueden contar con algunas de estas tcnicas. Mencionano solo algunas de las mas frecuentemente usadas: PAS para demostrar carbohidratos, membranas bsales y mucinas; para colgeno la Tricromica de Masson; para fibras reticulares ; para fibras elsticas; Tinciones a base de plata para demostrar hongos como la de G0rocott y la de Gomori ; Ziehl -Neelsen para bacilo tuberculoso; Perls para depsitos de h.ierro; von Kossa para calcio; Fontana para melanocitos y grnulos argentafines y Rojo Congo para material amiloide

HISTOQUMICAEs el estudio de los componentes tisulares y celulares por medio de colorantes especiales, reacciones bioqumicas y reacciones inmunolgicas.Tecnicas de histoquimica Es el estudio qumico de los tejidos, independientemente del mtodo de anlisis empleado, con el auxilio de los microscopios pticos (MO) y electrnico (ME). Esta tcnica permite la identificacin y localizacin de compuestos o radicales qumicos en las clulas y tejidos. Principales sustancias de inters biolgico demostrable histoqumicamente.1. IONES IN HIERRO- EL in frrico se demuestra por la reaccin con la mezcla de ferro- cianuro potsico y cido clorhdrico (azul de Prusia) que forma un precipitado azul oscuro de ferrocianuro frrico. - Sirve para localizar los macrfagos del SRE en el hgado y diagnosticar enfermedades en las cuales hay depsitos de hierro en los tejidos. Por ejemplo hemocromatosis y hemosiderosis.

2. LPIDOS. Se usan colorantes que se disuelven en las grasas como el Sudan IV y el Sudan negro. Sirven para el diagnstico de enfermedades metablicas que producen depsitos intracelulares de lpidos. Por ejemplo Enf. de Gaucher, Enf. de Niemann-Pick, Enf. de Fabry, esteatosis heptica (hgado graso).3 CIDOS NUCLICOS. DNA .-Se usa la reaccin de FEULGEN que consiste : - Hidrlisis del DNA con cido clorhdrico para extraer las bases pricas y dejar en libertad los grupos aldehdicos del azucar. - El reactivo de SCHIFF (PAS) reacciona con el aldehdo y forma un precipitado rojo. RNA.-Tiene gran afinidad por los colorantes bsicos (basoflia) lo que hace que se tia intensamente con el AZUL DE TOLUIDINA o de METILENO.4. PROTENAS Su identificacin se basa en mtodos de deteccin de aminocidos. - Reaccin de aminobenceno. - Reaccin de Sakaguchi que detecta la arginina de las protenas bsicas como las histonas y protaminas. Para Dx. de proteinosis pulmonar.

5.- POLISACARIDOS La reaccin ms usada es la del PAS (cido peridico-Schiff). El cido oxida a los azucares en posicin 1-2 y deja grupos aldehdos libres que reaccionan con el reactivo de SchifF dando un compuesto de color magenta . De este modo se demuestra la presencia de: - Glucgeno en el hgado y msculo. - Depsito intracelular de glucgeno en enfermedades congnitas. - Glucosaminoglicano o mucopolisacrido que forman parte de los proteoglicanos. - Glucoprotenas. Los azucares cidos tambin reaccionan con el colorante AZUL DE ALCIAN.6.- ENZIMAS FOSFATASA CIDA Se usa el mtodo de GOMORI que consiste en incubar cortes de tejidos en una solucin que contengan glicerol fosfato sdico y nitrato de plomo a pH 5 . Se usa para localizar lisosomas. DESHIDROGENASAS Se usan cortes no fijados junto con tetrazol para formar un precipitado coloreado llamado formazan. Se usa para detectar mitocondrias.

CONCLUSINSin duda la principal finalidad de la citologa cervical es poder diagnosticar lesiones precancerosas o cncer incipiente, para poder as actuar sobre el mismo, cuando la lesin es todava curable. La realizacin sistemtica de citologas a toda la poblacin desde los aos 60 ha disminuido de forma muy importante el nmero de casos de cncer de cuello uterino. Por eso resulta imprescindible realizar cada ao una citologa. Tambin es til para diagnosticar infecciones, as como alteraciones inflamatorias y/o hormonalesHoy en da es muy importante el hecho de poder diagnosticar y tratar con especificidad cualquier enfermedad para as poder ofrecer al paciente el mejor tratamiento. En el laboratorio de Anatoma Patolgica se desarrollan para ello tcnicas de histoqumica e inmuno-histoqumica.

CITOLOGAEl trmino "CITOLOGA" se refiere al estudio integral de la clula en sus mltiples aspectos: estructurales, biofsicos, bioqumicos, fisiolgicos, patolgicos, nutricionales, inmunolgicos, genticos, etc. A medida que el uso de la citologa ha sido implementado en la prctica mdica cotidiana, se ha desarrollado un captulo muy importante de sta " La citologa clnica o citodiagnstico ginecolgico."Debe destacarse que existe una diferencia fundamental entre la citologa y la histopatologa; como su nombre lo indica la histopatologa se refiere a la estructura y forma de los tejidos. As como los estudios histolgicos requieren una biopsia, los estudios citolgicos en cambio, utilizan clulas originadas en los distintos rganos y que representan el estado del tejido del cual se estn desprendiendo.El estudio citolgico permite:1 - Detectar la patologa inflamatoria, al observar las alteraciones celulares causadas por diversos factores: fsicos, qumicos y biolgicos como bacterias, hongos, virus y protozoos.2 - Detectar lesiones premalignas del cuello uterino, donde se ha demostrado su mayor utilidad.Coloracin de citologas de cuello uterino. PAP

La coloracin de papanicolaou fue descrita por el Doctor George Papanicolaou en 1942 y desde ese momento ha sufrido algunas modificaciones. Esta coloracin es la recomendada para la citologa de cuello uterino, por el contraste que presentan los ncleos y los citoplasmas de las clulas, lo que facilita la interpretacin de los extendidos.

Pasos para la coloracin de citologas de cuello uterino.

1. Se coloca la canastilla con las lminas en un recipiente con alcohol al 95% de 15 a 20 minutos 2. Lavado con agua corriente..3 minutos 3. Hematoxilina de Harris.2 a 3 minutos 4. Lavado con agua corriente..3 minutos 5. Alcohol amoniacal al 70%....3 inmersiones 6. Alcohol al 96%.........................................................10 inmersiones 7. Alcohol al 96%.........................................................10 inmersiones 8. Alcohol al 96%.........................................................10 inmersiones 9. ORANGE G3-5 minutos 10. Lavado con agua corriente..3 minutos 11. Alcohol al 96%.........................................................10 inmersiones 12. Alcohol al 96%.........................................................10 inmersiones

13. Alcohol al 96%.........................................................10 inmersiones 14. EA 50...3 minutos 15. Lavado con agua corriente..3 minutos 16. Alcohol al 96%.........................................................10 inmersiones 17. Alcohol al 96%.........................................................10 inmersiones 18. Alcohol al 96%.........................................................10 inmersiones 19. Las lminas se dejan secar al aire por 5 minutos y se procede a su montaje.

En Cada lavado tiene que cambiarse el agua Se usa una resina sinttica para montar la lmina y protegerla contra la oxidacin del material celular, se aplica una pequea cantidad del medio de montaje que cubra completamente el extendido bajo la laminilla cubre objeto, este procedimiento logra una imagen lo ms transparente posible para una adecuada interpretacin.

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