5/12/2018 HDL DIRECTO - slidepdf.com

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Colesterol HDLDirecto. Enzimático colorimétrico

HDLc -D

Determinación cuantitativa de colesterol HDLIVD

Conservar a 2-8ºC

PRINCIPIO DEL MÉTODODeterminación directa del HDLc (colesterol de lipoproteínas de alta densidad)sin necesidad de pre-tratamiento o centrifugado de la muestra.El método se basa en las propiedades de un detergente que solubiliza sólo lafracción HDL, de forma que el HDLc se libera reaccionando con la colesterolesterasa, la colesterol oxidasa y los cromógenos.Las lipoproteínas LDL, VLDL y quilomicrones son inhibidas debido a laadsorción del detergente en sus superficies haciendolas resistentes a laenzima.La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de HDLcpresente en la muestra ensayada.

SIGNIFICADO CLÍNICOLas partículas de HDL son lipoproteínas que transportan el colesterol a lascélulas. El colesterol transportado por las lipoproteínas de alta densidad amenudo se denomina “colesterol bueno”, ya que niveles elevados estánrelacionados con un menor riesgo cardiovascular. Un nivel bajo de colesterolHDL es considerado uno de los principales factores de riesgo cardiovascular yenfermedades de las arterias coronarias

1,5,6.

El diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datosclínicos y de laboratorio.

REACTIVOS

R 1

GOOD pH 7,0Colesterol oxidasaPeroxidasaDSBmT

< 1000 U/L<1300 U/L

< 1 mM

R 2

GOOD pH 7,0Colesterol esterasa4 – AminoantipirinaDetergenteAscórbico oxidasa

< 1500 U/L< 1 mM

< 2%< 3000 U/L

HDLc/ LDLc CAL Calibrador. Suero humano liofilizado.

PRECAUCIONESHDLc/ LDLc CALLos componentes de origen humano han resultado ser negativos para elantígeno HBs, HCV y para el anti-HIV (1/2). Sin embargo, deben tratarsecon precaución como potencialmente infecciosos.

PREPARACIÓN- R 1 y R 2: Listos para su uso.- HDLc/ LDLc CAL: Reconstituir el contenido de un vial con 1 mL de agua

destilada. Tapar el vial y mezclar suavemente hasta disolver sucontenido.

CONSERVACIÓN Y ESTABILIDADTodos los componentes del kit son estables hasta la fecha de caducidadindicada en la etiqueta del vial, cuando se mantienen los viales biencerrados a 2-8ºC, protegidos de la luz y se evita la contaminación. Nocongelar lor reactivos.- R 1 y R 2: Una vez abiertos son estables 8 semanas a 2-8ºC.- HDLc/ LDLc CAL: Una vez reconstituido es estable 1 semana a 2-8ºC o

5 semanas a –20ºC.

No usar reactivos fuera de la fecha indicada.Indicadores de deterioro de los reactivos:- Presencia de partículas y turbidez.

MATERIAL ADICIONAL- Espectrofotómetro o analizador con cubeta para lecturas a 600 nm.- Cubetas de 1,0 cm de paso de luz.- Equipamiento habitual de laboratorio.

MUESTRASSuero o plasma:1 No usar anticoagulantes con citrato.No utilizar muestras hemolizadas. Separar el suero de los hematies loantes posible. Estabilidad de la muestra: 7 días a 2-8ºC.

PROCEDIMIENTO1. Condiciones del ensayo:

Longitud de onda: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 600-700 nm

Cubeta:. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 cm paso de luzTemperatura . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . .37ºC2. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada.3. Pipetear en una cubeta:

Blanco Calibrador Muestra

R 1 (µL) 300 300 300

Calibrador (µL) -- 3 --

Muestra (µL) -- -- 3

4. Mezclar e incubar 5 min a 37ºC5. Leer la absorbancia (A1) del calibrador y la muestra.6. Añadir:

Blanco Calibrador Muestra

R 2 (µL) 100 100 100

7. Mezclar e incubar 5 minutos a 37ºC.8. Leer la absorbancia (A2) frente al Blanco de reactivo.

9. Calcular: ∆A= A2 – A1 .

CÁLCULOS

Calibrador)A(

Muestra)A(

∆

∆x Conc. Calibrador = mg/dL de HDL colesterol en la muestra

Factor de conversión: mg/dL x 0,0259 = mmol/L.

CONTROL DE CALIDADEs conveniente analizar junto con las muestras sueros control valorados:SPINTROL H Normal y Patológico (Ref. 1002120 y 1002210).Si los valores hallados se encuentran fuera del rango de tolerancia, revisar elinstrumento, los reactivos y el calibrador.Cada laboratorio debe disponer su propio Control de Calidad y establecercorrecciones en el caso de que los controles no cumplan con las tolerancias.

VALORES DE REFERENCIA2

Hombres MujeresRiesgo menor > 50 mg/dL > 60 mg/dLRiesgo normal 35 – 50 mg/dL 45 – 60 mg/dLRiesgo elevado < 35 mg/dL < 45 mg/dL

Estos valores son orientativos. Es recomendable que cada laboratorioestablezca sus propios valores de referencia.

CARACTERÍSTICAS DEL MÉTODORango de medida: Desde el límite de detección de 2,5 mg/dL hasta el límite de

linealidad de 200 mg/dL.Si la concentración de la muestra es superior al límite de linealidad, diluir 1/2 con ClNa9 g/L y multiplicar el resultado final por 2.Precisión:

Intraserie (n= 20) Interserie (n= 20)Media (mg/dL) 32,9 50,6 101,4 32,8 50,0 100,1

SD 0,3 0,2 0,7 0,4 0,7 1,1

CV (%) 0,8 0,5 0,7 1,3 1,5 1,1

Sensibilidad analítica: 1 mg / dL = 0.0016 A.Exactitud: Los reactivos SPINREACT (y) no muestran diferencias sistemáticassignificativas cuando se comparan con otros reactivos comerciales (x).Los resultados obtenidos con 50 muestras fueron los siguientes:Coeficiente de correlación (r): 0,996.Ecuación de la recta de regresión: y= 0,98 + 3,42 mg/dL.Las características del método pueden variar según el analizador utilizado.

INTERFERENCIAS

No se han observado interferencias con Bilirrubina T. y D. hasta 60 mg/dL,hemoglobina hasta 1000 mg/dL o lipemia hasta 1800 mg/dL.Se han descrito varias drogas y otras substancias que interfieren en la determinacióndel Colesterol HDL

3,4.

NOTASSPINREACT dispone de instrucciones detalladas para la aplicación de estereactivo en distintos analizadores.

BIBLIOGRAFÍA1. Naito H K HDL Cholesterol. Kaplan A et al. Clin Chem The C.V. Mosby Co. St

Louis. Toronto. Princeton 1984; 1207-1213 and 437.2. US National Cholesterol Education Program of the National Institutesof Health.3. Young DS. Effects of drugs on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC Press, 1995.4. Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC 2001.5. Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999.6. Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995.

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