Guía de estudio.

1- Esquema 1. Manos humanas. Nombre coloquial de los dedos.

2- Esquema 2. Forma correcta de sacar a una rata de una caja de contención.

Una de las técnicas más recomendadas para su sujeción consiste en apoyar la nuca del animal en el borde interno del dedo índice, si se sujeta con la mano derecha, el dedo pulgar pondrá el miembro anterior izquierdo del animal frente a su hocico, el miembro anterior izquierdo quedará sujeto entre el dedo índice y medial, de manera que la cabeza quede inmóvil.

Pulgar

Anular

Meñique

Medio

Índice

3- Esquema 3. Forma de manipulación de la rata, para marcar, sexar, administrar y tomar muestra vaginal.

La forma de sujeción del esquema no.2 es útil para sexar a la rata.

- Sujeción para administrar a la rata.

Administración Intramuscular.

La inyección intramuscular se utiliza como una vía de administración sistémica, en estudios de liberación lenta (formulaciones oleosas) y en valoración de vacunas.

Administración Intraperitoneal.

Aplicando la sujeción con una mano e inmovilizando la pata izquierda del ratón, con una inclinación hacia craneal para producir un desplazamiento de las vísceras con el fin de no lesionarlas.

Se inserta la aguja en la piel en el cuadrante izquierdo inferior del abdomen, luego se lleva hacia craneal y se introduce en la cavidad peritoneal, levantando la aguja en contra de la pared abdominal para evitar la punción en el interior del intestino; la jeringa con aguja debe estar paralela a la columna vertebral. Se puede administrar hasta 3 mL.

Una rápida administración del fluido puede causar daños en el tejido y Hemorragia debido a la presión interna.

Administración subcutánea.

Esta vía es utilizada como alternativa a la intramuscular, en los ratones.Se prefieren los sitios en que abunde tejido conjuntivo, en el dorso a nivel del cuello o los flancos. La aguja se inserta en la piel paralela a la columna vertebra.

Administración esofágica.

Comúnmente usada para la administración de compuestos irritantes o imposibles de ser administrados por otras vías.

4- Tipos de marcado animal.

Los métodos de marcaje generalmente utilizados son: Físicos: Directo: Corte de pelo, perforaciones y muescas en orejas, mutilación, tatuaje eléctrico.

Indirecto: Libretas, tarjetas, aretes, collares, pulseras, chips. Químicos: Tatuaje, colorantes, fotografías.

Biológicos: Especie, marcas naturales, sexo, color edad. Las tarjetas se utilizan principalmente para colocarlas en las jaulas o cajas. Como marcas naturales se consideran las características fenotípicas que sean fácilmente detectables.

5- Sexado de la rata.

Sexado de los adultos.

Los adultos son muy fáciles de sexar. En esta etapa los testículos están completamente descendidos y sonexcepcionalmente difíciles de pasar por alto!Si una rata tiene calor, se colgarán más fuera de lo normal para mantenerlas frías, al igual que los sereshumanos. A pesar de que atraerán sus testículos cerca de su cuerpo cuando tengan frío, todavía seránevidentes.Las hembras adultas se ven muy similares a la etapa juvenil, que contarán con dos aberturas que se colocanmuy juntas, y tendrá bajo su piel los pezones.

6- Vías de administración mas empleadas.

El método mas común es la inyección con depósitos de sustancias dentro de la piel (vía intradérmica ID), o debajo de ella en el tejido subcutáneo (vía subcutánea SC) en los

músculos (vía intramuscular IM), en venas (vía intravenosa IV), o en cavidades como la pleura (vía intrapleural) o peritoneal (vía intraperitoneal IP).

7- Porque se dice que los animales de laboratorio son reactivos en las practicas.

¿Qué se busca cuando se usa un animal en investigación, estudios farmacológicos, toxicológicos, etc.? Se busca una “Respuesta Biológica”. Como debe ajustarse a las condiciones del Método Científico, esa respuesta debe ser estable y reproducible en cualquier parte del mundo, en las mismas condiciones experimentales. Surge entonces el concepto que el Animal de Laboratorio es un “Reactivo Biológico” que al igual que un Reactivo Químico debe FABRICARSE / CRIARSE, ALMACENARSE / MANTENERSE y USARSE en condiciones estandarizadas para asegurar la estabilidad de la respuesta; siempre dentro de los límites de lo biológico que no son tan exactos como los matemáticos.

Esa Respuesta Biológica es la expresión de la carga genética del animal, en interacción con el medio ambiente, la sanidad y la nutrición.

Los reactivos biológicos se utilizan en todo experimento que tenga como misión evidenciar o aclarar fenómenos bilógicos de comportamiento, fisiológicos y anatómicos al someterse o no a sustancias químicas.

8- Bioterio.

Bioterio (animal care facility, animal care house, animalerie, animalario, estabulario) es un ámbito de evaluación biológica que está destinado a la crianza, mantenimiento, cuidado y uso de animales de laboratorio. Esta unidad debe tener condiciones sanitarias dentro de patrones establecidos, para que los animales puedan ser utilizados como materia prima, reactivo o modelo biológico y en docencia. Los animales alojados en este recinto deben contar con la definición de su estructura genética y estar libres de zoonosis.

9- Cuidados básicos a animales de laboratorio.10- Normas de experimentación con animales.

CAPÍTULO QUINTODE LOS EXPERIMENTOS CON ANIMALES

Artículo 23.- Para realizar algún experimento con animales los interesados deberán justificar ante las autoridades correspondientes, que la naturaleza del acto por realizar, es en beneficio de la investigación científica, y que para ello cuentan con la autorización de experimentación en animales, que se expidan por la Autoridades Sanitarias del Estado, y demostrar los siguientes requisitos:

a) Que los experimentos no pueden realizarse con otras alternativas;

b) Que son necesarios para el control, prevención y diagnóstico, para el tratamiento de enfermedades que afecten al hombre y a los animales;

c) Que los animales no pueden ser substituidos por esquemas, dibujos, películas, fotografías, videocintas o cualquier otro procedimiento análogo.

Al experimentador que no cumpla con algunos de los requisitos anteriores, se le aplicará la sanción respectiva de acuerdo a lo dispuesto por esta Ley o reglamentos.

Artículo 24.- Los animales que vayan a ser utilizados en experimentos de disección, deberán previamente ser insensibilizados y al término de la operación, curados y alimentados en forma debida, si las heridas causadas son considerables o implican mutilación grave, el animal será sacrificado bajo los medios más adecuados que eviten sufrimiento.

11- Frotis.

Un frotis o extendido de sangre es un mecanismo científico que consiste en el extendido de una gota de sangre sobre la superficie de un portaobjetos o de un cubreobjetos, con el fin de analizarla posteriormente al microscopio.

Frotis de sangre periférica.

Un frotis de sangre periférica se realiza con una gota de sangre fresca que se extiende sobre un protaobjeto con ayuda de otro que se denomina extensor y se deja secar al aire.

Para la fijación se emplea metanol puro en lugar de formol 10%.

La coloración que se utiliza es la de May Grünwald-giemsa o simplemente Giemsa. El colorante de May Grünwald es una solución metílica de eosinato de azul de metileno y el Giemsa es una solución metílica de azur II y eosina.

Los extendidos de sangre una vez coloreados no se montan como los preparados histológicos (con bálsamo y cubreobjeto), se secan y están listos para ser observados.

Frotis vaginal.

Es un estudio citológico, que se realiza a las hembras de diferentes especies, es la obtención de una muestra biológica de células epiteliales de la vaginamediante un exudado y nos sirve para diagnosticar el estado de salud en que se encuentra la persona por medio de las características de las células presentes. En los animales se realiza para saber laetapa en que se encuentra el ciclo estral.

13- Ciclo estral.

Un ciclo reproductivo o ciclo estral es el conjunto de acontecimientos fisiológicos que se producen en el ovario, a intervalos de tiempo cíclicos, como consecuencia de las variaciones en los niveles hormonales. Sin embargo a diferencia del ciclo menstrual el ciclo estral se presenta por estaciones y no por meses, depende de las características en las que se presente la especie ya sea desde temperatura, condiciones alimenticias, etc.

Para estudiar el ciclo estral se utiliza a la ratas de laboratorio ya que su ciclo es muy corto (4 – 6 días) y se pueden apreciar las etapas muy facilmente.

Se hace un frotis vaginalque consta en introducirles en su vagina una pipeta con la punta redondeada para no lastimarla con una solución salinea, posteriormente se observa al microscopio para identificar por su citología en que etapa del ciclo estral se encuentra.

Las fases del ciclo estral en la rata son:

Proestro: Dura aproximadamente 12 horas, en esta etapa en la vagina se produce un engrosamiento epitelial, se ven células epiteliales, muy pocos leucocitos y muy escasas células cornificada, los ovarios están en plena producción folicular. El diámetro de la luz uterina es de 5 mm.

Estro: Dura de 9 -15 horas, en el epitelio vaginal se ven mas células cornificadasy muy pocas células epiteliales. Los estrógenos circulantes provocan cambios en el útero y aparece el deseo de apareamiento, aumenta la producción de FSH y LH en los 2 días siguientes. El estro se caracteriza por cambios conductuales en el animal, se ve que la rata corre más que de costumbre, sacude las orejas y en presencia de otra rata presenta lordosis. La ovulación ocurre 8 -11 horas después de la aparición del estro.

Metaestro: Se divide en 2 etapas. El metaestro I que dura 15 horas, se produce el pico de LH y la consecuente ovulación múltiple y espontánea, este pico esta relacionado con las horas luz que recibe el animal, si recibe 12 horas de luz al día y una temperatura ambiente de 20 -22 ºC se verá favorecida la función reproductiva. El pico de LH determina el final de la producción de estrógenos y comienzo de la producción de progesterona por los cuerpos lúteos, la progesterona determinará el comportamiento materno de la rata. El metaestro II dura 6 horas, en esta etapa la vagina se ve húmeda y los óvulos liberados se encuentran en el oviducto. En esta fase se inicia la regresión del epitelio vaginal, las células cornificadas se degeneran.

Diestro: Dura 57 horas, el diámetro de la luz uterina es de 2.5 mm, los cuerpos lúteos producen abundante progesterona que desbloquea la producción de FSH y LH, esto inicia nuevamente el ciclo con el desarrollo de nuevos folículos. Hay abundantes leucocitos y muy escasas células epiteliales.

14- Células que se observan en un frotis vaginal de rata.

Leucocitos.

Epiteliales.

Cornificadas.

Referencias:

http://animalosis.com/ciclo-estral-en-la-rata/

https://es.wikipedia.org/wiki/Ciclo_estral

http://www.facmed.unam.mx/deptos/biocetis/Doc/Tutorial/tejidos_archivos/Page1183.htm

http://www.bbf.uns.edu.ar/dptobioterio.php

http://www.bioterios.com/2013/archive.php?cat=tips

http://www.veterinaria.org/revistas/redvet/n050511B/051116.pdf

https://www.youtube.com/watch?v=3SZceylye4M

http://www.cddiputados.gob.mx/POLEMEX/leyes/Ley45.html

http://dpd.fvet.uba.ar/cartelera/00013655.pdf