guÍa de biología -uni- 2012-i

5/17/2018 GUÍA de Biología -UNI- 2012-I - slidepdf.com

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UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERIA

FACULTAD DE CIENCIAS

ESCUELA PROFESIONAL QUIMICA

G U I A D E P R A C T I C A S

D E

B I O L O G Í A

SEMESTRE ACADEMICO 2012-1

PILAR GARCÍA AVELINO

Jefe de Prácticas



Prácticas de Biología

PRESENTACION

El propósito del Laboratorio es familiarizar al estudiante con la metodología de trabajo de labiología, proporcionarle un ambiente donde tenga oportunidad de encontrarse con sustancias einstrumentos que le motive a experimentar.

Considerando al laboratorio como un lugar donde el trabajo en equipo se facilita, da lugar a unproceso de constante integración, comunicación, investigación, construcción de ideas,surgimiento de nuevas preguntas, donde las actividades experimentales propician lareorganización de conocimientos y facilitan el alcanzar un aprendizaje significativo.

Para logra tales fines, se propone esta guía que, como material de apoyo didáctico, reforzara elproceso constante de enseñanza aprendizaje, requiriendo a participación y guía del profesor.

Material necesario para trabajar por alumno:

Individualmente: un mandil, gafas de seguridad, guantes.

Por equipo: plumón marcador, papel toalla. Y el que se indique para cada práctica.

INSTRUCCIONES GENERALES.

1. Busca conceptos, antecedentesprevios a la realización de las prácticas.

2. Construye la hipótesis de trabajo, antes de solicitar su material.

3. Lee cuidadosamente los experimentos antes de ejecutarlos.

4. Recurre a tus libros de texto y/o consulta para aclarar dudas después de realizadas las

practicas, o consulta al profesor responsable.

5. Al efectuar cada uno de los pasos del desarrollo experimental, observa minuciosamente

y anota los cambios ocurridos.

6. Al concluir el desarrollo experimental, resuelve el cuestionario para su futura revisión.

7. Elabora tus conclusiones.

PRECAUCIONES PARA EL DESARROLLO DE CADA EXPERIMENTO

Las medidas oportunas y la compresión de las prácticas a seguir, hará del laboratorio unlugar seguro como cualquier ambiente de clases.Para ello deberán tenerse en cuenta, en forma general las siguientes precauciones:

1. Observa donde dejas el material caliente, cerciorándote que este frio antes de tomarlo

con la mano.

2. Cuando calientes un tubo de ensayo, no lo apuntes hacia ti o hacia tus compañeros,

pude proyectarse su contenido.

3. Si cae sobre ti o en tu ropa un material corrosivo, lávate inmediatamente con abundante

agua, e infórmalo al profesor del curso.

4. Nunca pruebes una sustancia.

5. Al detectar el olor de un liquido, no coloques la cara sobre la boca del recipiente, con tu

mano abanica hacia ti el aroma.

6. Antes de usar un reactivo lee dos veces la etiqueta de su contenido.

7. Los tubos de ensayo no pueden calentar ser por el fondo sino por las paredes, para

evitar su expulsión del contenido.

8. No arrojes cuerpos sólidos en los lavaderos, no viertas directamente los ácidos.

9. Rotula tu material de trabajo, así te será fácil identificarlos.10. Cuando trabajes con el mechero mantén tu cabello recogido.

11. Nunca emplear papel para encender el mechero.




PRÁCTICA 1

RECONOCIMIENTO DE BIOMOLECULAS ORGANICAS

INTRODUCCIÓN

En los organismos se encuentran cuatro tipos diferentes de moléculas orgánicas en gran

cantidad: carbohidratos, lípidos, proteínas y nucleótidos. Todas estas moléculas contienen

carbono, hidrógeno y oxígeno. Además, las proteínas contienen nitrógeno y azufre, y los

nucleótidos, así como algunos lípidos, contienen nitrógeno y fósforo.

Se ha dicho que es suficiente reconocer cerca de 30 moléculas para tener un conocimiento que

permita trabajar con la bioquímica de las células. Dos de esas moléculas son los azúcares

glucosa y ribosa; otra, un lípido; otras veinte, los aminoácidos biológicamente importantes; y

cinco las bases nitrogenadas, moléculas que contienen nitrógeno y son constituyentes claves

de los nucleótidos.

En esencia, la química de los organismos vivos es la química de los compuestos que contienen

carbono o sea, los compuestos orgánicos.

El carbono es singularmente adecuado para este papel central, por el hecho de que es el

átomo más liviano capaz de formar múltiples enlaces covalentes. A raíz de esta capacidad, el

carbono puede combinarse con otros átomos de carbono y con átomos distintos para formar

una gran variedad de cadenas fuertes y estables y de compuestos con forma de anillo. Las

moléculas orgánicas derivan sus configuraciones tridimensionales primordialmente de sus

esqueletos de carbono. Sin embargo, muchas de sus propiedades específicas dependen de

grupos funcionales. Una característica general de todos los compuestos orgánicos es queliberan energía cuando se oxidan. Entre los tipos principales de moléculas orgánicas

importantes en los sistemas vivos están los carbohidratos, los lípidos, las proteínas y los

nucleótidos.

OBJETIVOS

Determinar cualitativamente los carbohidratos presentes en muestras biológicas.

Reconocer cualitativamente las proteínas presentes en muestras biológicas.

Demostrar la solubilidad de los lípidos en diferentes tipos de solventes.

MATERIALES Y REACTIVOSTubos de ensayo, mechero, placas petri, vasos de precipitado, gradillas, pipetas graduadas,propipetas, pinzas de madera, piceta, almidón

Reactivo de Fehling, solución de glucosa al 1%, solución de almidón 1%, acetona, cloroformo,sulfato de cobre al 1%, hidróxido de sodio al 5%

Por grupo: un gillette, 5 ml de leche, 5 ml de aceite, bilis de pollo (1), una manzana, una papa,un huevo.




IDENTIFICACIÓN DE AZÚCARES REDUCTORES

FUNDAMENTO

Reacción de Fehling:

Es una reacción cualitativa que sirve para determinar la presencia de un azúcar reductor que

no sea sacarosa (carece de carbono anomérico y no es azúcar reductor).

El reactivo de fehling presenta sulfato de cobre, carbonato de sodio, citrato de sodio, y agua.

En la reacción para determinar a los azucares reductores los agentes estabilizantes de la

reacción son el carbonato y citrato, el sulfato de cobre es el reactante específicamente el Cu

que va a reaccionar con los grupos químicos de aldehídos y cetonas. Que en reacciones de

oxido reducción el Cu se convierte en CuO dando un color rojo ladrillo que precipitará

posteriormente.

PROCEDIMIENTO

COMPONENTESTUBO DE ENSAYO

1 2 3

Solución de glucosa 1% 1 ml

Leche evaporada 1 ml

Manzana rallada 1 mlReactivo de Fehling 2 ml 2 ml 2 ml

- Mezclar por inversión el reactivo con cada uno de sus componentes

- Someter a la acción del calor.

- Observar la formación de un precipitado color rojo ladrillo (CH2O), en el baño de agua

fría.

GRAFICAR/ESQUEMATIZAR SUS OBSERVACIONES




RECONOCIMIENTO DEL ALMIDÓN

FUNDAMENTO

Esta prueba se basa en la especificidad del almidón cuando está presente en solución, la cual

da un color azul en presencia del Yodo. El yodo presenta: yoduro de potasio y yodobisublimado, mas agua (solución de Lugol). El yodo de la solución tiene afinidad por losenlaces α 1-4 y α 1-6 de la moléculas de almidón, esta interacción del yodo por dichos enlacesproducen el cambio de coloración. La amilosa en disolución coloidal toma color azul, laamilopectina da una coloración rojo violácea.

PROCEDIMIENTO


1 2 3

Solución de almidón 1% 1 ml

Papa rallada 1 ml

Clara de huevo 1 ml

Reactivo de Lugol 2 gotas 2 gotas 2 gotas

- Observar los primeros cambios de coloración.

- Mezclar por inversión

GRAFICAR/ ESQUEMATIZAR SUS OBSERVACIONES




RECONOCIMIENTO DE PROTEÍNAS

FUNDAMENTO

Reacción de Biuret

Se debe a los componentes que presenta: el hidróxido de sodio y sulfato de cobre; el cual el

agente denaturante de las proteínas es el hidróxido y el reactante es el sulfato de cobre. Las

proteínas después de ser denaturadas facilitan la interacción del Cu con los pares de

electrones sin compartir del grupo amino del péptido mediante enlaces de coordinación con la

formación de un complejo coloreado púrpura – violáceo.

PROCEDIMIENTO

- Rotular tres tubos de ensayo, en el primero agregar 1 ml de albúmina (huevo), en el

segundo tubo leche, y en el tercero la solución de almidón.

- Añadir 0.5 ml de NaOH al 40%, y 4 gotas de sulfato de cobre al 1% a cada tubo.


1 2 3

Huevo 1 ml

Leche 1 ml

Solución almidón 1% 1 ml

NaOH 40% 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml

SO4Cu2 1% 4 gotas 4 gotas 4 gotas

- Observe la formación del color violeta en los tubos que presentan proteínas, siendo

Biuret (+), caso contrario Biuret (-).





RECONOCIMIENTO DE LÍPIDOS

FUNDAMENTO

En este experimento la identificación se da por el comportamiento de las moléculas de aceite

con el agua, las cuales no se homogenizan, debido a que estas presentan característicasdiferenciales, mientras que el agua es polar, el aceite es no polar, esto hace que

microscópicamente se note que el aceite forme micelas en solución acuosa. Donde las colas

hidrofóbicas de las moléculas de aceite se “esconden” del agua adoptando la forma de micelas.

PROCEDIMIENTO


1 2 3

Aceite 2 ml 2 ml 2 ml

Agregar por las paredes del tubo cada componente

Agua destilada 2 ml

Acetona 2 ml

Cloroformo 2 ml

- Hacer la primera observación

- Mezclar por inversión cada tubo, dejar en reposo por 5 minutos





PRÁCTICA 2

AMILASA SALIVAL

INTRODUCCIÓN

Propiedades del almidón.

El almidón es el polisacárido de reserva más abundante en vegetales y constituye laprincipal

fuente de nutrición glucídica para la humanidad. Los almidones estánconstituidos por una

mezcla de dos componentes:

a-amilosa: cadena lineal de unas 200 unidades de D-glucosa unidas por enlaces α(1 4)

amilopectina: cadena lineal de D-glucosas unidas por enlaces tipo α (1 4) con

numerosas ramificaciones α (1 6). El polímero contiene unas 1000 unidades de glucosa.

La proporción en que se mezclan la a-amilosa y la amilopectina para formar el almidóndepende de la especie vegetal en que aparece el almidón. La α -amilosa se disuelve fácilmente

en agua, adquiriendo una estructura secundariacaracterística, de forma helicoidal, en la que

cada vuelta de hélice comprende seisunidades glucosa.

Esta estructura secundaria, en la que los grupos hidroxilo quedan hacia afuera, permite que el

iodo, al penetrar en el interior del helicoide, confiera a la disolución una coloración azul violácea

intensa característica que permite la identificación positiva de trazas de almidón. Como esta

coloración no es resultado de ninguna interacción covalente, el calentamiento origina la

desestabilización del helicoide y la pérdida de color, que se recupera al enfriar lentamente la

disolución. Lavariación en el pH tiene un efecto análogo.

Estructura repetitiva de la amilosa.

Hidrólisis del almidón.

El almidón puede hidrolizarse por medios químicos o enzimáticos.La ebullición con ácidos o

álcalis hidroliza aleatoriamente los enlaces glucosídicosentre unidades de glucosa, dando

polisacáridos de longitud intermedia denominados dextrinas, cada vez menores hasta la

obtención de unidades de glucosa individuales.

Los compuestos que se obtienen en la hidrólisis del almidón y el color que producen con el iodo

son los siguientes:

Almidón (azul).

Amilodextrinas(violeta).

Eritrodextrinas(rojo).

Acrodextrinas(incoloro*).

Maltosa (incoloro*).

Glucosa (incoloro*).




* Tener en cuenta el ligero color amarillo propio del iodo.

El almidón también puede hidrolizarse enzimáticamente.

Uno de los enzimas que hidrolizan el almidón es la amilasa, que se halla presente enel jugo

pancreático y la saliva. Este enzima ataca al azar los enlaces α(1 4) del interior de la cadena.Así, rinde finalmente unidades de glucosa libre y maltosa. Laamilasa no ataca los enlaces

α(1 6), base de las ramificaciones de la amilopectina.

Estos enlaces pueden ser hidrolizados por otro enzima desramificador. La ptialina o amilasa

salival es una proteína enzimática presente en la saliva. Comotodo enzima, la acción que

ejerce sobre su sustrato (almidón) depende de una serie deparámetros: pH, temperatura,

concentración de enzima...

OBJETIVOS

Ver el efecto del pH y la temperatura sobre la actividad enzimática. Ver el efecto de la temperatura sobre la actividad enzimática.

COMPARAR y DISCUTIR los resultados de la actividad de la amilasa a los diferentes

pH. Deducir el pH en el cual la enzima es más activa.

ELIMINACIÓN DE RESIDUOSLos residuos generados en esta práctica deben ser recogidos en el bidón de residuos acuosos.

PROCEDIMIENTO

I. OBTENCIÓN DEL ENZIMA.

1. Tras enjuagar la boca, se mastica un trozo de papel de filtro para estimular lasalivación. Los

líquidos segregados se van pasando a un embudo con un filtrohumedecido colocado sobre un

tubo de ensayo, hasta recoger la suficientecantidad de saliva para realizar la práctica.

2. La saliva así obtenida se diluye 1:10 con agua destilada, obteniendo así lapreparación de

enzima base.

II. EFECTO DEL PH SOBRE LA ACTIVIDAD AMILASA SALIVAL.

1. Tomar tres tubos de ensayo y añadir respectivamente:

1 2 3

ClH 0.1 N 2 ml NaOH 01 N 2 ml Agua destilada 2 ml

Almidón 2% 2 ml Almidón 2% 2 ml Almidón 2% 2 ml

Saliva diluida 1:10 2 ml Saliva diluida 1:10 2 ml Saliva diluida 1:10 2 ml

2. Agitar bien y medir rápidamente el pH de cada tubo. Para medir el pH, se tomauna gota de

la disolución con una varilla limpia y seca y se humedece con ella untrocito de papel

indicador de pH, comparando el color obtenido con el de laescala.

Los tres tubos se colocan en un baño de agua termostatizado a 37ºC durante 15minutos,

dejando que la amilasa vaya hidrolizando al almidón. Una vez transcurridoslos 15 minutos,

se sacan los tubos y se efectúan las pruebas del iodo y de Benedict




Prueba del iodo o del lugol: permite identificar la presencia de almidón que con estereactivo

da un color azul-violeta característico. Tomar 1 ml de muestra de cada uno delos tubos y

añadirle unas gotas de la disolución de iodo iodurada. Si la actividadenzimática de la

amilasa no se ve afectada, catalizará la hidrólisis del almidón y portanto la prueba del iodo será

negativa.

Prueba de Benedict: permite identificar a los azúcares reductores, obtenidos por hidrólisis del

almidón, que con esta prueba dan una coloración rojiza (el almidón notiene poder reductor).

Tomar 1 ml de muestra de cada uno de los tubos y seguir elprotocolo para la reacción deBenedict en la práctica de azúcares.

III. INFLUENCIA DE LA TEMPERATURA EN LA VELOCIDAD ENZIMÁTICA.

1. Preparar 8 tubos: cuatro de ellos con 2ml de almidón 2% y los otros cuatrocon 2 ml desaliva diluida 1:10.

2. Colocar dos tubos, uno conteniendo almidón y la otra saliva, a cada una de las cuatrotemperaturas siguientes (marcar cada pareja de tubos según latemperatura a la que se

ensaya):

en baño de hielo (OºC, si se añade un poco de agua al hielo enfría

más;cuidar que los tubos no vuelquen)

a temperatura ambiente (20ºC)

en baño a 37ºC

a ebullición en baño María* (100ºC).

3. Mantener así los tubos durante 15 minutos para que alcancen la temperatura del

experimento.

4. Añadir al tubo que contiene el almidón el contenido del tubo que tiene la saliva,agitar bien y

dejar que siga a su temperatura correspondiente. Empezar a contarel tiempo (los tubos

deben mantenerse bien inmersos en los respectivos bañospara que la acción de la amilasa

tenga lugar a las temperaturas indicadas).

Transcurridos 1, 2, 3, 4, 6 y 8 minutos coger una muestra de 0,5 ml de cada tubo y ponerla

en la placa de pocillos.

* En el caso del baño María basta con 5 minutos.

5. Añadir a cada muestra unas gotas de reactivo de iodo. Una vez realizada laprueba ANALICE

los distintos cambios de color observados y la razón deestos.

Cuando el almidón está hidrolizado no produce ningún cambio de color a la soluciónde iodo

(punto acromático). El tiempo necesario para alcanzar tal punto da idea de laactividad de la

enzima. La inversa de dicho tiempo equivale a la velocidad de lareacción enzimática.

CUESTIONARIO1. ¿Qué es y qué hace un enzima?2. El enzima empleado en esta práctica se denomina:

Su sustrato es:3. ¿Qué reactivo se emplea para la identificación del almidón? Explicar brevemente comoactúa.

4. Efecto del pH sobre la actividad (en resultados)




Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3pHPrueba de LugolBenedict

5. ¿Cuál es el pH óptimo para la enzima?6. Efecto de la temperatura (en resultados)

0º C Ambiente:ºC 37º C 100 ºC

1´2´3´4´6´8´

7. ¿Cuál es la temperatura oprima para la actividad de la enzima?




PRACTICA N° 3

CROMOSOMAS

INTRODUCCIÓNLos Cromosomas, durante la vida, toda célula pasa por dos periodos que constituyen

un ciclo:

a) Período de interfase

b) Período de división, que conduce a la formación de 2 células hijas.

Este ciclo se repite de generación en generación celular siendo el mismo para un tipo

de célula, pero pudiendo variar en función del tejido que se trate. Durante el ciclo celular el

núcleo de la célula sufre una serie de cambios complejos: desaparición de membrana nuclear y

de los nucleólos y condensación de la cromatina en los cuerpos llamados cromosomas. En los

cromosomas, estructuras responsables de la transmisión de los caracteres hereditarios, se

localizan los genes.

Las células del cuerpo, o células somáticas, de cualquier organismo superior tienen un

número cromosómico definido y característico de la especie, representado por el número

cromosómico 2n o número diploide. Este número significa que los cromosomas en las células

somáticas existen formando pares, recibiendo cada miembro del par el nombre de homólogo.

Los gametos o células reproductoras, se forman por meiosis y tienen un número

cromosómico “n” o haploide (del griego: haplos que significa mitad).

En las especies en las que el sexo está determinado por cromosomas se pueden

distinguir: a) un par de cromosomas sexualesb) autosomas o cromosomas no sexuales

Las características más importantes que identifican los cromosomas durante la mitosis

son su número, tamaño relativo, estructura, comportamiento y organización interna.

El cariotipoes el complemento o conjunto cromosómico típico del individuo o de la

especie en el que se describe el número, forma y tamaño de los mismos. El cariotipo se

perpetúa normalmente en la progenie (Battaglia, 1953). Es decir, en términos generales, se

admite la constancia en forma, tamaño y número de los cromosomas, en todas las células que

componen el núcleo de un individuo y en los individuos de cada especie.

En el cariotipo se ordenan los pares de homólogos en series, de acuerdo a su longitud, en

forma creciente.

La representación esquemática del cariotipo se conoce con el nombre de Idiograma.

El análisis de la morfología cromosómica se lleva a cabo en el estado de metafase que

es el momento en el que los cromosomas presentan el mayor grado de espiralización, y

compactación. Es en este estado también cuando muestra las mejores condiciones de tinción

con tintes que presentan afinidad por los ácidos nucleicos; razón que favorece aún más el

estudio citogenético de una determinada especie en esta fase del ciclo de división celular.

OBJETIVO

El alumno observará células eucarióticas de vegetales y animales e identificará la

organización de genoma.




FUNDAMENTO

El estudio de los cromosomas de células eucarióticas con el microscopio óptico se hace

preferencialmente en metafase, cuando estos tienen la morfología y estructura definida.

La observación de la estructura del genoma en interfase, está fuera de la resolución delmicroscopio óptico, sin embargo, en algunas células es posible observar el cromosoma X

heterocromatizado que se identifica como un corpúsculo, el cuerpo de Barr o cromatina sexual.

MATERIALES Y REACTIVOS

Raíces primarias de Allium cepa (cebolla), células del epitelio bucal, barniz de uña

transparente, 2 portaobjetos, 2 cubreobjetos, 1 vidrio de reloj, 1 cuchilla, pinzas portalaminas,

microscopio, HCl 1N, Ac. Acético 45%, orceína acética o orceínalactopropiónica.

PROCEDIMIENTO

Preparación de los meristemos

1. Cinco días antes de la práctica, se retira con una navaja bien afilada, las raíces de un

bulbo de cebolla, colócala en un vaso con agua sostenido por medio de palillos de

dientes (la superficie del agua debe hacer contacto con el bulbo). Las raíces nuevas

que se reproduzcan serán el objeto de observación (ver la figura)

2. Obtención del material: Se cortan raíces jóvenes de cebolla, aproximadamente unos 20mm, comprobando que conservan el ápice radicular, que se distinguirá por el cambio de

color.

3. Fijación: Se prepara la mezcla fijadora. 3 Etanol:1 Acético (Carnoy).

Según el fijador utilizado el tiempo y temperatura de la fijación varía. Las raicillas de

cebolla se han fijado en 3 Metanol:1 Acético a 4ºC.

4. Conservación: Se lava el material varias veces con la mezcla fijadora y se conserva a

4ºC.

5. Preparación: Las raicillas de cebolla que se hallan en mezcla fijadora se hidrolizan en

HCl 1N durante 10 minutos a 60ºC.




Transcurridos los 10 minutos de la hidrólisis, se lavan las raicillas en agua destilada y

se colocan las raicillas sobre una gota de orceína acética o de orceína lactopropiónica

para su tinción, durante 10 a 15 minutos. A continuación se realiza la preparación.

Primeramente, se toma una raicilla y se coloca sobre un vidrio portaobjetos y se corta el

ápice radicular con un bisturí. Para realizar esta operación se utiliza la lupa. Este ápice

radicular se corta a su vez en 4 fragmentos, se hace un corte longitudinal y otrotransversal. Se separan los cuatro trozos y a continuación se añade una gota del

colorante. Seguidamente se coloca un cubreobjetos sobre el material que deseamos

observar. Con la ayuda de un bastoncillo de madera se golpea y extiende el material. A

continuación se presiona con el dedo pulgar y se retira el exceso de colorante con un

papel de filtro.

6. Se observa al microscopio empezando con el objetivo de menor aumento. No es

necesario utilizar el objetivo de inmersión. Se deben distinguir y dibujar, tal y como se

ven, todas las fases de la mitosis.

Método para la cromatina sexual-cuerpo de Barr

1. En porta objetos perfectamente lavados y desengrasados (alcohol etílico-ácido acético

45%, 3:1), coloque una muestra de epitelio bucal (enjuague varias veces la boca),

tomando por raspado suave con un baja lenguas, haga frotis de hombre y mujer,

etiquételos.

2. Hidrolice con HCl 1N por 30-60 seg. Y absorba el ácido acético por goteo, cubra con un

portaobjetos y selle con barniz. Observa al microscopio a 100X

RESULTADOS

PREGUNTAS

1. ¿Con qué se fin se presiona la preparación?

2. En la mitosis, ¿qué diferencias existen entre la célula original y las células hijas?

3. ¿Cuál es el significado que la mitosis mantenga la continuidad genética de una

generación de células a la siguiente?




ANEXO 2 (PRACTICA3)

MITOSIS

La mitosis es el proceso de formación de dos células idénticas (generalmente) por replicacióny división de los cromosomas de la original que da como resultado una "copia" de la misma.

Los estructura de los cromosomas replicados y condensados tiene varios aspectos de interés.El cinetocoro es el punto donde "anclan" los microtúbulos del huso. Los cromosomas replicadosconsisten en dos moléculas de ADN (junto con sus proteínas asociadas: las histonas) que seconocen con el nombre de cromátidas. El área donde ambas cromátidas se encuentran encontacto se conoce como centrómero, el cinetocoro se encuentra en la parte externa delcentrómero. Se debe hacer hincapié en que los cromosomas son cromatina (ADN máshistonas) y señalar la particularidad que en los extremos del cromosoma (que toman el nombrede telómero) se encuentran secuencias repetidas de ADN.

PROFASE es el primer estadio de la mitosis. La cromatina se

condensa (recordar que el ADN de la cromatina se replica en la

interfase), por lo que en este punto existen dos cromátidas

unidas. La membrana nuclear se disuelve, los centríolos (si se

encuentran presentes) se dividen y los pares migran a los polos,

se forma el huso mitótico. Los centrómeros (o constricciones

primarias) se vuelven claramente visibles, debido a que se le han

asociados placas proteicas a ambos lados: el cinetocoro. En el

citoplasma el retículo endoplasmático y el complejo de Golgi se

fragmentan en vesículas, se desorganiza el citoesqueleto por lo

que la célula pierde su forma original y se hace esférica.

METAFASE los cromosomas (que a este punto consisten en dos

cromátidas mantenidas juntas por el centrómero) alcanzan su

máxima condensación y migran al ecuador de la célula donde las

fibras del huso se "pegan" a las fibras del cinetocoro.

ANAFASE comienza con la separación de los centrómeros y

el arrastre de las cromátidas (los llamamos cromosomas luego

de la separación de los centrómeros) a los polos opuestos.

TELOFASE los cromosomas llegan a los polos de sus

respectivos husos, la membrana nuclear se reconstituye, los

cromosomas se desenrollan y pasan a formar la cromatina y el

nucleolo, que desapareció en la profase se vuelve a constituir.

Donde antes había una célula ahora existen dos pequeñas con

exactamente la misma información genética y númerocromosómico. Estas células pueden luego diferenciarse en

diferentes formas durante el desarrollo.

http://www.biologia.edu.ar/cel_euca/mitosis.htm#mito

http://www.biologia.edu.ar/cel_euca/mitosis.htm#Histonas

http://www.biologia.edu.ar/cel_euca/mitosis.htm#Cromat%C3%ADna

http://www.biologia.edu.ar/cel_euca/mitosis.htm#Cinetocoros

http://www.biologia.edu.ar/cel_euca/mitosis.htm#Cinetocoros

http://www.biologia.edu.ar/cel_euca/mitosis.htm#Cromat%C3%ADna

http://www.biologia.edu.ar/cel_euca/mitosis.htm#Histonas

http://www.biologia.edu.ar/cel_euca/mitosis.htm#mito




PRACTICA N° 4

OBSERVACIÓN DE BACTERIAS Y LA TINCIÓN GRAM(tinción diferencial)

INTRODUCCIÓN

La morfología de las bacterias puede examinarse de dos formas: observando bacterias

vivas sin colorear (en fresco) y observando bacterias muertas teñidas con colorantes.

La observación en fresco de las bacterias permite conocer algunas de sus

características (morfología, tamaño, movimiento). Sin embargo, las bacterias vivas son casi

incoloras no lográndose visualizar fácilmente al microscopio óptico normal cuando se

encuentran suspendido en agua, de ahí que se utilicen colorante para incrementar su contraste

con el entorno que los rodea y de esa forma hacerlos más visibles. Los colorantes son

compuestos aromáticos solubles en agua (generalmente en forma de sales) que contienen union orgánico coloreado y otro ión inorgánico.

Pueden dividirse en dos grupos: ácidos y básicos. El colorante es ácido si la porción

coloreada tiene carga negativa, es decir, si tiene un anión coloreado, siendo en este caso

repelido por estructuras de la célula que presenten la misma carga, como es el caso de la

superficie bacteriana. El colorante se denomina básico si la porción coloreada es el catión,

cargado positivamente y con afinidad por las estructuras de la célula con carga negativa, como

es la superficie celular.

La tinción Gram (tinción diferencial) es una técnica que se desarrollo en 1884, por Hans

Gram (bacteriólogo danés)

La tinción Gram permite

encontrar diferencias características

como la forma de las células

bacterianas, que puede ser individual :

cocos, bacilos, cocobacilos y espirilos;

agrupadas : pareja, racimo, cadenas.

La tinción Gram colorea

selectivamente a las bacterias, los

colorantes que se utilizan reaccionan de

un modo diferente con las distintasbacterias, debido a las diferencias en la

estructura y/o composición química de la

pared celular de éstos.

Debido al tamaño de la mayoría de los

microorganismos, se requiere de un

microscopio óptico, para hacer la

descripción morfológica de éstos.

El microscopio de uso más común es el de campo claro, en el que la observación de células

vivas es limitada debido a que las celular son incoloras y permiten el paso de una gran cantidadde luz.




OBJETIVO

Conocer el fundamento y la utilidad de la tinción Gram.

Aprender una técnica de coloración diferencial e interpretar los resultados obtenidos,

distinguiendo bacterias gram positivas y gram negativas.

FUNDAMENTO

Un primer colorante básico: CRISTAL VIOLETA, se aplica sobre la muestra y

reacciona con las bacterias (cargadas negativamente) coloreándolas.

Un mordiente: LUGOL, que incrementa la afinidad entre el primer colorante y las

bacterias. El mordiente se combina con el colorante para formar un compuesto

insoluble coloreado en el interior de la bacteria.

Un agente decolorante: como el ETANOL de 95% o la mezcla de ALCOHOL-ACETONA

(1:1), que son disolventes orgánicos capaces de eliminar el primer colorante de algunas

bacterias, decolorándolas.

Un colorante contraste: SAFRANINA, igualmente de carácter básico pero de distinto

color que el primer colorante. La safranina es de color rosa, que contrasta con el color

violeta (del primer colorante), y que teñirá solo a las bacterias decoloradas en el paso

anterior.

Las diferencias químicas en sus paredes celulares, son las que permiten o no la salida

del complejo cristal violeta-lugol.

Las bacterias GRAM POSITIVAS debido a la estructura y composición bioquímica de

su pared celular retienen el complejo cristal violeta-lugol y aun después del tratamiento con eldecolorante conserva el colorante básico, por lo que se observan al microscopio de color azul

oscuro a violeta una vez concluida la técnica de tinción

Las bacterias GRAM NEGATIVAS pierden el colorante básico cuando son tratadas con

el decolorante debido a que el alcohol disuelve el contenido lipídico de la pared celular lo que

aumenta la permeabilidad celular, dando como resultado la pérdida del complejo cristal violeta-

lugol. Las bacterias decoloradas captan entonces el colorante contraste, razón por la cual estas

células bacterianas se observan al microscopio de color rosado una vez concluida la técnica de

tinción.


Cultivos bacterianos, láminas portaobjetos, asa de siembra (asa de kolle), pinzas para láminas,

mechero, vaso de precipitado 50 ml, pisceta con agua destilada, alcohol, microscopio, aceite de

inmersión, papel tissue.

Colorantes: la tinción Gram utiliza en estricto orden:

- Cristal violeta : colorante básico

- Lugol: mordiente

- Alcohol acetona: agente decolorante- Safranina (fucsina): colorante de contraste




PROCEDIMIENTO

1. Se proporcionará a los alumnos cultivos sólidos (placas petri con agar) y cultivoslíquidos (tubos de ensayos con caldo de cultivo) de: Escherichia coli , Staphylococcus aureus , Pseudomonas aeruginosa , Bacillus subtilis .

2. Se limpia la lámina portaobjetos con alcohol y papel tissue.

3. Se prende el mechero, para esterilizar el asa de siembra en la flama hasta que seponga al rojo vivo. Enfriar antes de tomar la muestra, para evitar que losmicroorganismos sean destruidos.

4. Acercar al mechero, la placa petri o el tubo de ensayo, para tomar la muestra

5. Preparación de un frotis bacteriano.

a. Extensión. Colocar una pequeña gota de agua destilada en la lámina portaobjeto.

Con el asa de siembra transferir una pequeña cantidad del cultivo bacteriano enmedio sólido a la gota. Remover la mezcla con el asa hasta formar una suspensiónhomogénea y extenderlabien con la propia asa), produciendo la extensión delinóculo, de 2 cm (Si el material de partida es un cultivo en medio líquido, realizardirectamente la extensión).

b. Fijación. Es imprescindible para que las bacterias queden inactivadas y adheridasalvidrio, permitir la evaporación espontánea del porta, ayudándose con la llamadelmechero de manera muy leve (en ningún caso el porta debe quemar al tacto). Sielporta alcanza una temperatura excesiva a la llama, las células pueden deformarseoromperse.

6. Realizar la tinción cubriendo la preparación con abundante colorante y dejarlo actuarpor un determinado tiempo.

a. Cristal violeta: 60 segundos.b. Lugol: 20 segundosc. Alcohol-Acetona: 10-15 segundos (moviendo el portaobjeto)d. Safranina: 20 segundos

Después de cada proceso de tinción, de acuerdo al tiempo señalado se enjuagalentamente con agua destilada




7. Se deja secar al aire después del último enjuague.

8. Observación al microscopio: colocar la lámina portaobjetos en la platina, empezar alocalizar la preparación con el objetivo de 10X, luego pasar al objetivo de 40X. Para laobservación con el objetivo de 100X, se coloca previamente una pequeña gota deaceite de inmersión sobre la preparación.

9. Resultados.

ELABORAR EL INFORME EN EL LABORATORIO




PRACTICA N° 5

METODOS DE AISLAMIENTO, SIEMBRA Y RECUENTO DE BACTERIAS

INTRODUCCION

Las bacterias deben ser cultivadas en medios de cultivo de laboratorio para caracterizar

su crecimiento, realizar su identificación y determinar sus actividades metabólicas. Se debe

acondicionar a la bacteria en un medio de cultivo de acuerdo a sus exigencias, para que en

condiciones óptimas de temperatura, tiempode incubación, pueda multiplicar y desarrollarse in

vitro . Un medio de cultivo está conformada por todos los elementos indispensables que

requieren los microorganismo para crecer (carbohidratos, proteínas, vitaminas, sales).

Las bacterias son inoculadas (ó introducidas) en medios líquidos (caldos) o solidificados con

agar para su propagación y/o conservación. La inoculación de los microorganismos en los

medios de cultivo, siempre debe realizarse en zona aséptica (cerca del mechero) en

condiciones que limiten la presencia de microorganismos indeseables o contaminantes.

El aislamiento de cultivos microbianos puede realizarse por métodos de dilución , donde cada

célula bacteriana que se separa dará origen a una población que formara una colonia

característica a simple vista medios sólidos; por estría en placa o en medios líquidos.

OBJETIVOS

Conocer las diferentes técnicas de aislamiento en medios de cultivo sólido para la

obtención de cultivos puros de bacterias Aprender diversos métodos de siembra.

FUNDAMENTO

Aislamiento: permite la separación de las bacterias al estado de pureza a partir de una

muestra. Se requiere medio solido con gran superficie para que las bacterias diseminadas

sobre el medio generes su propia progenie (cepa) por formación de colonias separadas.

Un cultivo puro es aquel que contiene una solo tipo demicroorganismos. Para

obtenerlo es necesario recurrir a las llamadas técnicas deaislamiento. Aunque existen otras, lastécnicas más utilizadas emplean un medio decultivo sólido, en el que los microorganismosgeneran colonias separadas. La obtención de un cultivo puro es indispensable para conocer lascaracterísticas morfológicas, propiedades de tinción, actividad bioquímica, patogenicidad,sensibilidad a antibióticos e identificación de las especies microbianas.


Asa de kolle, asa de vidrio (espátulas), placas petri con agar nutritivo, bacterias, pipetas

graduadas, plumón marcador, mechero.




PROCEDIMIENTO

Se proporcionará a los alumnos cultivos sólidos (placas petri con agar) y cultivos líquidos (tubosde ensayos con caldo de cultivo) de: Escherichia coli , Staphylococus aureus , Pseudomonas aeruginosa , Bacillus subtilis .

1. Estría múltiple en superficie

Con un asa de siembra, previamente esterilizada, se toma una pequeña

muestra del cultivo de bacterias y se extiende sobre un área pequeña de la superficie

de la placa con agra nutritivo, en forma de estrías muy juntas, pero sin hacer presión

para no dañar el agar.

Se flamea el asa de kolle, se enfría después de rozar la siembra realizada

previamente, se extiende de nuevo por otra zona de la placa haciendo nuevas estrías.

Este proceso se repite sucesivamente, flameando y enfriando el asa al comienzo de las

sucesivas siembras en estría. Se lleva la placa a incubar, a la temperatura adecuada yen posición invertida.

Mediante esta técnica se obtienen colonias aisladas a partir de una muestra que

contenga un elevado número de bacterias.

2. Dilución en masa ó Inmersión

Enunaplaca petri vacía, previamente estéril, se deposita u volumen conocido de

muestra y luego se adiciona el medio de cultivo: agar nutritivo fundido, atemperado

aproximadamente 45ºC., se mezclan ambos por rotación suave de la placa. De esta

forma los microorganismos se distribuirán de forma homogénea en el medio de cultivo

permitiendo el desarrollo de colonias separadas por todo el agar.

La homogenización se deja enfriar en las placas hasta que solidifique el medio y

posteriormente incubarlo a la temperatura adecuada.

MUESTRA




3. Aislamiento de bacterias en placas de agar. Extensión en superficie con asa devidrio.

Depositar sobre la superficie de una placa con agar nutritivo una gota ó 0.1 mlde una determinada dilución del cultivo de bacterias y extenderlos con ayuda de un asa

de vidrio (espátula), previamente esterilizado, en todas las direcciones hasta que esté

completamente seco. Incubar la placa en posición invertida a la temperatura deseada

(durante 24) según el tipo de microorganismo.

Es una técnica usada para el aislamiento de colonias, que permite igualmente el

recuento de bacterias viables en la muestra, si conocemos exactamente el volumen de

muestra sembrado.

RESULTADOS

Tras el periodo de incubación se examinaran las placas.

1. Estría múltiple en superficie. Se observarán las colonias aisladas en alguna región de

la placa inoculada, con esta técnica se logra la separación de los microorganismos que

se encuentren en un cultivo mixto, o bien que procedan de muestras homogéneas,

pero en las que existe un elevado número.

2. Dilución en masa ó Inmersión. Aparecen las colonias distribuidas por toda la masa

del agar. Aquellas que están en la superficie tendrán distintas características,dependiendo del tipo microbiano, mientras que las colonias que se desarrollan en el

interior, bajo la superficie del agar, tiene forma lenticular, aunque los microorganismos




que formen las distintas colonias sean de distinto tipo. Por lo tanto las colonias que

aparecen en la profundidad del agar son siembre biconvexas.

3. Aislamiento de bacterias en placas de agar. Extensión en superficie con asa devidrio. Las colonias aparecen sobre la superficie, distribuidas uniformemente si la

siembra se ha realizado en forma correcta. Podrán diferenciarse las colonias deacuerdo al tamaño, forma color, textura. El recuento viable de organismo se hace en

“unidades formadoras de colonias” (UFC) ya que cada una procede de un solo

microorganismo (o un grupo de microorganismos, en algunos éstos tienden a formar

agregados a partir de las colonias aisladas, los microorganismos pueden transferirse a

otros medios de cultivo para su posterior estudio.

RECUENTO DEL NÚMERO DE BACTERIAS POR MILILITRO

INTRODUCCION

El método que vamos a utilizar consiste en realizar diluciones sucesivasde la muestra

en condiciones de esterilidad con objeto de sembrar después cantidadesconocidas de las

mismas en una serie de placas de petri. Considerando que alguna delas diluciones será tal que

al distribuir una parte de ella en la placa, originará coloniasseparadas. Contando el número de

colonias, el volumen sembrado en la placa y ladilución correspondiente, podremos calcular elnúmero de unidades formadoras decolonias presentes en la muestra inicial.

MATERIAL Y REACTIVOS

Bacterias, Pipetas graduadas, Tubos de ensayo (para dilución 9 ml), Placas de agar nutritivo.

PROCEDIMIENTO

A partir de la muestra hacer una serie de 4 diluciones con tubos de agua destilada estéril (9ml)

Tomar 1 ml de las diluciones 10-1, 10-2, 10-3 y 10-4 en una placa, extender con el asa de vidrio

e incubar toda lanoche.

RESULTADO

A partir del número de colonias presentes en cada dilución, calcular el númerode bacterias por

mililitro en el cultivo original, el resultado se expresa en unidad formadora de colonias por

mililitro (UFC/ml)




PRACTICA N°6

RESISTENCIA DE ANTIBIOTICOS – ANTIBIOGRAMA

INTRODUCCION

Los antibióticos son sustancias químicas producidas por microorganismos o derivados

semisintéticos de éstas, mientras que los quimioterápicos son productos de síntesis química,

pero ambos tienen la propiedad de estar dotados de actividad antibacteriana.

Existen diferentes técnicas para estudiar la actividad de los antibióticos frente a distintos

microorganismos, utilizándose pruebas esencialmente cualitativas, aunque en muchos casos

se requieren determinaciones cuantitativas.

En esta práctica vamos a efectuar ensayos de ambos tipos. Las pruebas cualitativas o

antibiograma se van a efectuar con la bacteria problema mientras que las cuantitativas las

haremos con una bacteria conocida.

Las pruebas que vamos a realizar se basan en la difusión del antibiótico sobre una

placa de medio a partir de un punto central. En este caso, una cantidad concreta del antibiótico

se encuentra incluido en un disco de papel que se deposita sobre una placa de agar común,

que ha sido previamente inoculada con una fuerte dosis de la bacteria a ensayar. Así, el disco

de papel absorbe agua de la placa, se disuelve el antibiótico y se inicia el proceso de difusión

de éste hacia las zonas que lo rodean, generándose un gradiente de concentración cuyo nivel

máximo se encuentra bajo el disco. Las bacterias que se inocularon crecerán durante su

incubación allí donde la concentración del antibiótico sea lo suficientemente baja como para no

impedírselo (normalmente alejado del disco), mientras que no podrán hacerlo en las

proximidades del disco donde las concentraciones del antibiótico son elevadas. Puesto que loslímites de concentración de antibiótico que afectan al cultivo son por regla general muy

estrechos, se suelen formar halos de inhibición, esto es, zonas sin bacterias alrededor de los

discos, de bordes bastantes definidos y cuyo diámetro tiene que ver con la concentración de

antibiótico que había en el disco y con la sensibilidad a éste de las bacterias ensayadas.

Todas las bacterias no tienen la misma sensibilidad a los distintos antibacterianos. La

evaluación de esta sensibilidad nos va a ayudar en la selección del compuesto más adecuado

para el tratamiento de una infección bacteriana. Las pruebas más utilizadas para evaluar la

sensibilidad de una bacteria a un agente antibacteriano están basadas en el enfrentamiento in

vitro de la bacteria con distintas concentraciones del agente.

Concentración mínima inhibitoria (CMI) se define como la menorconcentración de

antimicrobiano capaz de inhibir el desarrollo de unacepa bacteriana dada.

Concentración mínima bactericida (CMB) se define como lamenor concentración de

antimicrobiano capaz de destruir una cepabacteriana dada

OBJETIVOS

Determinar la sensibilidad bacteriana de la bacteria problema a distintos antibióticos.




FUNDAMENTO

El antibiograma por el método de difusión en agar es una prueba en laque se enfrenta

la bacteria inoculada sobre la superficie de un medio de agar con unasolución antibiótica

absorbida en discos de papel de filtro. Este método estáestandarizado y los halos de inhibición

han sido obtenidos correlacionándolos con lasCMI.

Hay varios factores que afectan al halo de inhibición: la carga delantibiótico en los

discos, la difusión del antibiótico en el medio de cultivo, el tamañodel inóculo bacteriano, la

composición y grosor del medio de cultivo, la velocidad delcrecimiento bacteriano y el tiempo

de incubación.

Los discos de antibióticos son adquiridos comercialmente. Debencontener la cantidadestablecida de antibiótico y ser conservados a 4ºC protegidos dela humedad.

El inóculo bacteriano debe tener una turbidez similar al 0,5 de la escala de McFarland, yser preparado en solución salinaestéril o caldo de cultivo.

MATERIALES

Bacteria (cepa pura de Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa ),

antibióticos, discos de papel filtro estériles, tubos de ensayo con 3 ml de agua destilada estéril,

pipetas 1 ml, pinzas, placas con medio de cultivo (agar Luria-Bertini), mechero, asas de

siembra, asas de vidrio/hisopos estériles, escala de McFarland.

PROCEDIMIENTO

1. Preparación del inóculo. Partiendo de un cultivo puro tomar con el asa de siembra X

colonias de la bacteria e introducirlas en el caldo de cultivo. La turbidez del inóculo debe

equivaler al estándar 0,5 de McFarland.

2. Inocular la superficie de una placa de agar Müeller Hinton con el hisopo (estéril) pasándolo

uniformemente por toda la superficie en tres direcciones. Por último, pasar el hisopo por el

reborde de la placa de agar. Dejar secar 5 minutos.

Turbidez del

Inóculo

0.5 McFarland

Inoculación

Extensión con: asa

de vidrio ó

Hisopo esterilizado

Preparación delInoculo




3. Colocar los discos de antibióticos sobre la superficie del agar utilizando unas pinzas

estériles y apretándolos suavemente sobre la superficie del agar. Los discos no deben

estar a menos de 15 mm de los bordes de la placa y lo bastante separados entre ellos

para que no se superpongan sus zonas de inhibición. Dejar las placas 15 minutos a

temperatura ambiente para que comiencen a difundir los antibióticos.

4. Incubar la placa en posición invertida a 37ºC durante 18-24 horas.5. Medir los diámetros de los halos de inhibición con una regla.

PRUEBA CUALITATIVA.

Un mismo cultivo se enfrenta a distintas soluciones antibióticas.

PRUEBA CUANTITATIVA.

Se trata de determinar el grado de sensibilidad o concentración mínima inhibitoria (CMI)

de un antibiótico frente a la bacteria ensayada. Cada grupo sembrará de la forma descrita la

bacteria “X” , y colocará cinco discos con cantidades crecientes (diferentes concentraciones) de

un antibiótico.

Para preparar los discos, cada grupo preparará 5 diluciones seriadas (1:4 en agua estéril) a

partir de una disolución valorada que se le entregará, y añadirán 25ul de cada una de éstas

diluciones (ug/ml) a los respectivos discos de papel estériles. Puesto que los discos no están

marcados, es imprescindible indicar su concentración debajo de la placa. Siempre resulta

conveniente mantener un orden creciente en la disposición de los discos.

Una vez colocados los discos, las placas se incuban en posición invertida durante toda

la noche a la temperatura óptima de crecimiento de la bacteria. A la mañana siguiente hay que

medir el diámetro de los halos de inhibición y anotarlos en el cuaderno.

Colocación de

los discos de

antibióticos




RESULTADOS

En el caso del antibiograma, se hará un cuadro de sensibilidad (S) o resistencia (R)

para cada uno de los antibióticos frente a esta bacteria, y posteriormente serán utilizados como

criterio para la determinación de la bacteria problema. El criterio a seguir, internacionalmente

reconocido por National Committe for Clinical Laboratory Standards (NCCLS), será:

Sensible : si existe una buena probabilidad de éxito terapéutico en el caso de un tratamiento a

una dosis habitual.

Resistente: si la probabilidad del éxito terapéutico es nula o muy reducida. No es de esperar

ningún efecto terapéutico sea cual fuere el tipo de tratamiento.

Intermedia : cuando el éxito terapéutico es imprevisible. Se puede conseguir efecto terapéutico

en ciertas condiciones (fuertes concentraciones locales o aumento de la dosis)

Sensible (S) si el diámetro del halo es mayor de 15 mmResistente (R) si el diámetro del halo es menor de 13 mm

Intermedio (R/S) si el diámetro del halo está comprendido entre 13 y 15 mm

CUESTIONARIO.

1. ¿Para qué se emplean los antibiogramas?

2. ¿Qué significa la concentración inhibitoria mínima (CIM)?

3. Defina: bacteriostato y bactericida

4. ¿Qué es radio de inhibición?

5. ¿Qué relación existe entre el halo de inhibición y eficacia del antibiótico?




ANEXO 1 (Practica 6)

ESCALA NEFELOMETRICA DE MACFARLAND

TUBO Cl2Ba 1% SO4H2 1% BacteriasUFC/ml

1 0.1 9.9 3.0 x 108

2 0.2 9.8 6.0 x 108

3 0.3 9.7 9.0 x 108

4 0.4 9.6 1.2 x 109

5 0.5 9.5 1.5 x 109

6 0.6 9.4 1.8 x 109

7 0.7 9.3 2.1 x 109

8 0.8 9.2 2.4 x 109

9 0.9 9.1 2.7 x 109

10 1.0 9.0 3.0 x 10

Algunos Antibióticos y sus sitios de acción

Antibiótico Abrev.Cloranfenicol C Cefalotina CR Tetraciclina TEA. Nalidíxico NAEritromicina EEstreptomicina STrimetoprim TMPAzotromicima AZTGentamicina GEBactrim SX

Eritromicina EMTetraciclina TEAmplicilina AClindamicina DAL




ANEXO 3

PRESENTACION DEL INFORME

Caratula

I. ObjetivosTema central de estudio.

II. Fundamento teórico¿Qué teorías lo sustentan?

III. Procedimiento experimental (Exp 1. Exp.2…) ¿Cómo se estudió dicho problema?Es el plan ordenado de la forma en que se realizó la práctica para lograr el objetivo dela misma

IV. Observaciones y datos tabulados (para c/exp)Qué se observó? Qué datos hubieron? Durante el desarrollo del experimento

V. Resultados y Cálculos¿Cuáles fueron los resultados? Se indican los resultados tal y como se dieron durante la investigación.Se pueden presentar los datos en tablas, gráficas, o figuras

VI. DiscusiónEs la etapa que encadena los resultados obtenidos por la investigación. Se pone aprueba la capacidad analítica y de autocrítica del autor.La discusión pone el toque personal al trabajo.

VII. Conclusiones¿Qué significan los resultados? Están relacionados con los objetivos.Es el análisis del cumplimiento de cada uno de los objetivos de la práctica

VIII. Bibliografía¿Qué autores se consultaron para fundamentar la investigación?Pueden revisar: Referencias Bibliografías al estilo Vancouver , en:http://www.unap.cl/p4_biblio/docs/Normas_VANCOUVER.pdf

IX. Cuestionario

Preguntas relacionadas al tema

http://www.unap.cl/p4_biblio/docs/Normas_VANCOUVER.pdf



guÍa de biología -uni- 2012-i

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