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GRUPOS SANGUÍNEOS NO ERITROCITARIOSDE LAS PLAQUETAS: HPA (human platelet antigens) 1 y 2 (Ag específicos de plaquetas) Comparten Ag con el sistema ABO de los hematíes y el HLA leucocitarioDE LOS LEUCOCITOS: De los neutrófilos NA1, NA2, NB1, ND1, etc.Comparten Ag con el sistema ABO de los hematíesDE LAS PROTEINAS DEL SUERO: Poco interés inmunológico, útiles como marcadores genéticos

GRUPOS SANGUÍNEOS ERITROCITARIOSSISTEMA: conjunto de Ag codificados por un gen o grupo de genes íntimamenterelacionados (ABO, MNS, Rh, Kell, Lutheran, P, etc. Actualmente 26 diferentes).COLECCIÓN: conjunto de Ag relacionados que no cumplen todos los criterios para ser un sistema.SERIE: Ag sin relación conocida entre si (Ag de baja y alta incidencia).

CODIFICACIÓN DE LOS Ag ERITROCITARIOSCada Ag se identifica por secuencia de seis dígitos.Los tres primeros dígitos: El sistema (001 al 026).La colección se identifica con los números 200 a 210.La serie, los Ag de baja incidencia del 700 en adelante y los de elevada del 900 en adelante.Los tres dígitos siguientes identifican el Ag dentro del sistema, colección o serie: Ag B del ABO corresponde al 001002;/ Ag D del Rh corresponde al 004001

Ac FRENTE Ag DE LOS GRUPOS ERITROCITARIOSSEGÚN LA FORMA DE APARICIÓN:NATURALES (presentes sin inmunización previa por ejemplo ABO)INMUNES (tras inmunización)SEGÚN LA PRESENCIA EN LA POBLACIÓN:REGULARES (presentes siempre en ausencia del Ag)IRREGULARES (frente Ag diferentes a los ABO)SEGÚN LA CAPACIDAD DE AGLUTINACIÓN: AGLUTINANTES o COMPLETOS/ SENSIBILIZANTES o INCOMPLETOS

SISTEMAS ERITROCITARIOS 1962(ver foto final)

Ac FRENTE A LOS Ag ERITROCITARIOS

EL SISTEMA ABO Karl Landsteiner 1901Ag DEL SISTEMA ABOPresentes en la mayoría de las células y secreciones del organismo.Los más importantes son A1, A2 y B.Están codificados por cuatro alelos principales A1, A2, B y O.Se heredan siguiendo un patrón codominante (gen O es silencioso, no se expresa fenotípicamente).Seis grupos principales: A1, A2, B, A1B, A2B y O.

Ag DEL SISTEMA ABOAsociado al ABO está el sistema Hh, codificado por dos genes H y h, siendo el Hdominante sobre el h. El gen H codifica la presencia de sustancia H en los hematíes, precursora de los Ag A y B.Los genes A y B codifican transferasas que actúan sobre la sustancia H convirtiéndola en Ag A o B.Los individuos hh serán del grupo O aunque tengan los genes A y/o B (se conocen como fenotipo Bombay u Oh).

VARIACIONES DE LOS Ag ABODEBIDAS A ALELOS POCO FRECUENTES: Existen alelos que codifican Ag A o B débiles, que no deben confundirse con grupo O.DEBIDAS AL MEDIO: Algunas enfermedades (Hemopatías) pueden aumentar o disminuir la reactividad.

Ag ABH EN LAS SECRECIONESLa sustancia H y los Ag ABO están en la saliva y otras secreciones en el 80 % de losindividuos, a los que se denomina secretores. Esto se debe a la presencia de dos alelos: Se y se, siendo Se dominante.Los Ag A o B están en plasma de todos los individuos siendo más abundante en lossecretores. Los individuos se/se serán no secretores y no presentaran Ag H, A ni B en las secreciones.

Ac DEL SISTEMA ABOLos Ac están presentes en el suero cuando no están presentes en los hematies.Son naturales, regulares, aglutinantes y de clase IgM.Si aparecen tras sensibilización, serán inmunes e IgG.Pueden ser anti-A, anti-B, anti-AB, anti-A1 y anti-H.

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DISCREPANCIA ENTRE DETERMINACIÓN CELULAR Y SÉRICAERRORES EN LA TÉCNICA:Confusión de muestras.Tubos sucios (detergentes falsos negativos, contaminación falsos positivos).Confusión en los reactivos.Diluciones inadecuadas hematies.Exceso o defecto de centrifugación.Errores en la interpretación de resultados.

ANOMALIAS DE LA SANGRE EN ESTUDIOPresencia de Ac distintos pero capaces de aglutinar.Deficit natural de Anti-A y Anti-B.Formación de “Rouleaux” (hematies en pilas de monedas).Muestras de cordon Gelatina de Wharton puede simular aglutinación.Anormalida Ag A y B (débiles, suprimidos, adquiridos).Aglutinaciones artificiales (acriflavina y Ac anti- acriflavina).Presencia de células poliaglutinables.Infecciones graves.

CONDUCTA A SEGUIR ANTE INCONGRUENCIA SÉRICO - HEMÁTICAREPETIR LAS PRUEBAS Y SI PERSISTE.DETECCIÓN DE AC IRREGULARES.RELIZAR TEST COOMBS DIRECTO.DETECTAR ANORMALIDAD Ag A Y BRepetir determinación celular en tubo en medio salino. Si no aglutina incubar los tubos 45 min. a temperatura ambiente. Si tampoco aglutina incubar 45 min. a 4 º C.Si no se resuelve repetir la determinación en medio enzimático (papaina, etc).SI PERSISTE LA SOSPECHA DE Ag A o B DÉBIL SE REALIZA LA ADSORCIÓN Y ELUCIÓN DE LOS HEMATIES CON ANTISUEROS COMERCIALES.ESTUDIO DE LA SALIVA (individuos secretores).

EL SISTEMA Rh: El segundo en importancia para las transfusiones sanguíneas tras el ABO.Constituido por más de 40 Ag.Los más importantes son cinco: D, C, E,c y e.Genes RHD (D y d) y RHCE (Ce, cE, ce y CE). La combinación de ambos (DCe,DcE, Dce, DCE, dCe, dcE, dce y dCE).Genotipo una combinación del padre y otra de la madre (por ejemplo DCE/dCE).

Ag DEL SISTEMA Rh: Lipoproteicos, no están en las secreciones ni en otras células.Los principales son cinco: D, C, E, c y e.El D clasifica a las personas en Rh positivos (85 %) y Rh negativos según tengan o no el Ag D.El Ag DU es una variante débil. El Ag D consta de varias subunidades y algunas personas pueden no tener alguna de ellas e inmunizarse frente a esa parte que no tienen (parece que tengan auto Ac anti-D).

Ac DEL SISTEMA Rh: Inmunes, en su mayoría IgG, incompletos,reaccionan mejor a 37º C y atraviesan labarrera placentaria. Para que aparezcan es necesario estar en contacto con sangre que posea el Ag.La sensibilización puede ocurrir por transfusión o en el parto.Los accidentes hemolíticos aparecen en un segundo contacto.La hemolisis se produce en el receptor o en el recién nacido.

DETERMINACIÓN DEL Ag D: Enfrentando hematíes problema a un anti-D y observando la aglutinación. Debe hacerse en porta y en tubo o de la misma forma por dos personas.Se considera positiva si hay aglutinación.La aglutinación negativa no permite clasificar como Rh negativo hasta que no se determina el Ag DU.Siempre hacer control negativo que si da positivo invalida la prueba.

CAUSAS DE FALSOS POSITIVOS EN LA DETERMINACIÓN DE Ag D.Existencia de Ac incompletos unidos a los hematies que producen aglutinación.Existencia de crioaglutininas en el suero del paciente.Formación de “Rouleaux” o pilas de monedas.

DETERMINACIÓN DEL Ag Du : Siempre que salga negativo el anti-D.-->Técnica

CONFIRMACIÓN DE UNA MUESTRA Rh NEGATIVASe deben confirmar con suero anti-CDE.La mayoría de Rh negativos son negativos también para los Ag C y E.La prueba con anti-CDE negativa confirma el Rh negativo.La prueba con anti-CDE positiva obliga a repetir la prueba con anti-C y anti-E.

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DETERMINACIÓN DEL FENOTIPO Rh:Se enfrentan los hematies con sueros anti-C, anti-c, anti-D, anti-E y anti-e y un control negativo.Se realiza dos veces (en porta y tubo o por dos personas).La aglutinación positiva indica la presencia del Ag correspondiente.Siempre hacer control negativo que si da positivo invalida la prueba.

OTROS SISTEMAS ERITROCITARIOSAdemás de los sistemas ABO y Rh existen otros sistemas eritrocitarios que pueden provocar la aparición de Ac irregulares.Algunos de estos sistemas son:Kell: K y k.Duffy: Fya y Fyb.Lewis: Lea y Leb.Kidd: Jka, Jkb y Jk3.MNS: M, N, S y s.Lutheran: Lua y Lub

Ac IRREGULARESAc producidos frente Ag eritrocitarios diferentes a los ABO. Pueden estar o no presentes en el suero en ausencia del Ag.Pueden ser naturales o inmunes.La presencia de Ac irregulares en el suero se hace patente enfrentando el suero a hematies que tengan en su membrana los Ag.Como no se pueden enfrentar a todos y cada uno se ha diseñado una prueba que enfrenta el suero a dos o tres tipos de hematies con una combinación de Ag de los principales sistemas (producen Ac clínicamente significativos). Los hematies deben ser del grupo O.Si la prueba es negativa el suero no tiene Ac irregulares.Si la prueba es positiva significa que hay Ac de uno o de varios tipos, con lo que para saber cúal o cuales son se enfrentan a un panel más amplio cuyos Ag. Se conocen. La combinación de resultados entre todos los eritrocitos permite identificar el Ac o anticuerpos (varios) presentes en el suero.

HEMOTERAPIA:Uso terapéutico de la sangre total o de alguno de sus derivados.Transfusión es la administración de sangre o sus derivados con fines terapéuticos.Homóloga: si es de cualquier donante.Autóloga: si es del propio paciente.Habitualmente sólo se necesitan alguno de los componentes de la sangre.

VENTAJAS DE LA ADMINISTRACIÓN DE DERIVADOS HEMÁTICOSDisminuye la posibilidad de reacciones adversas.

Permite administrar más cantidad del elemento necesario sin producir sobrecarga circulatoria.Se aprovecha más la sangre donada.

SANGRE TOTAL: Una unidad de sangre total corresponde a 450 ml extraidos de un solo donante. La sangre total se anticoagula con CPD-A o con heparina.

SANGRE TOTAL CON CPD-A:CPD-A es una solución anticoagulante y conservadora de la sangre. Contiene citrato, fosfato, dextrosa yadenina (63 ml/450 ml de sangre). El citrato es un anticoagulante quelante del Ca, el fosfato retrasa la disminución del 2,3 DPG y la dextrosa y la adenina favorece la formación de ATP.SANGRE TOTAL CON CPD-A: La sangre total se conserva a 4º C. Los hematies presentan una viabilidad (capacidad de sobrevivir en el receptor 24 h) a las cinco semanas del 70% (mínima aceptada).El factor VIII desciende un 50 % a las 24 h y el factor V a los 10-14 días.Se utiliza para hemorragia aguda grave o para exanguinotransfusión.

SANGRE TOTAL HEPARINIZADA:La heparina anticoagula pero no conserva.La sangre debe ser utilizada en 48 h.Se usa en cirugía cardiaca para evitar la disminución del Ca por el citrato.A una unidad de sangre total se le añaden 25 ml de solución de heparina en SSF a concentración de 75000 U/l.

PREPARADOS DE HEMATIES:CONCENTRADO DE HEMATIES:Hematies de una unidad de sangre total más plasma (100 ml) y solución conservante.Hematocrito del 70-75 %.Se conservan con CPD-A hasta 35 días a 4º C.

CONCENTRADO DE HEMATIES POBRES EN LEUCOCITOS:La sangre obtenida de un donante, mezclada con una solución anticoagulante y conservadora (CPD) y filtrada con la finalidad de eliminar la mayor parte de los leucocitos. Se utilizan para evitar reacciones transfusionales contra Ag leucoplaquetarios, en candidatos a transplante de médula ósea o en politransfundidos.

HEMATIES CONGELADOS:En primer lugar, se añade glicerol al concentrado de hematíes, hasta obtener una concentración intraeritrocitaria de glicerol del 40% y, a continuación, se coloca en un congelador eléctrico de -80 º C.Antes de proceder a usarlo, el concentrado de hematíes es descongelado al baño María, a 37º C y, posteriormente, sometido a un proceso dedesglicerolización, añadiendo una solución hipertónica de NaCl al 12%, y un lavado con una

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solución de NaCl al 0,9 % y de glucosa al 0,2 %, hasta obtener una suspensión de hematíes en esta última solución.

CONCENTRADOS DE PLAQUETAS:Se conservan a 22º C en agitación contínua. Si se obtienen mediante sistema cerrado son viables durante 5 días.Se obtienen por: Centrifugación de unidades de sangre total./ Plaquetaféresis o trombocitaféresis.

PLASMAS:Se utiliza el plasma fresco congelado, pero se pueden obtener otros tipos en el proceso de fraccionamiento de plaquetas. No requieren compatibilidad, aunque se transfunden plasmas isogrupo del sistema ABO o compatibles.

TIPOS DE PLASMA:PLASMA FRESCO CONGELADO (PFC): se prepara y congela antes de 6 horas post extracción y se conserva a -30º C durante doce meses.PLASMA CONGELADO (PC): se obtiene entre las seis y doce horas postextracción y contiene el 50% de factores V y VIII.CRIOPRECIPITADO (5-10 ml): rico en factor VIII y I. se obtiene antes de las seis horas congelándolo a -70ºC, posteriormente se descongela a 4º C formándose el crioprecipitado que se conserva a -30º C durante doce meses.PLASMA SOBRENADANTE DEL CRIOPRECIPITADO: carece de factores V y VIII. Se conserva a 4 º C cinco semanas o a -30º C doce meses.

DERIVADOS DEL PLASMA:Se obtienen por fraccionamiento del plasma.Para conseguir mayores cantidades se mezclan varias unidades de plasma con lo que aumenta el riesgo de transmitir enfermedades infecciosas.Son: Factores de coagulación: VIII, IX, ATIII; Albúmina; Inmunoglobulinas.

EXTRACCIÓN DE SANGRE AL DONANTE:* Tras encuesta y reconocimiento medico (TA, pulso, etc) se realiza determinación de hemoglobina (>12,5 g/dl en mujeres y >13,5 g/dl en varones).Requisitos:Tener entre 18 y 65 años.Pesar más de 50 K y medir más de 1,50 m.No estar en tratamiento con determinados fármacos.Tener buen estado general.No padecer o haber padecido alguna de las enfermedades excluyentes.

SISTEMA DE EXTRACCIÓN SISTEMA TRIPLE:Para extraer 450 ml.

Bolsa 1 contiene CPD (citrato, fosfato y dextrosa).Bolsa 2 contiene SAG-Manitol (sol. Salina, adenina, glucosa y manitol).Bolsa 3 no contiene nada.--> Cuando hablamos de unidad de sangre nos referimos a la extraída en bolsa triple

CONSERVACIÓN DE LA SANGRE DONADA HASTA EL FRACCIONAMIENTODepende del tipo de hemoderivado.Concentrado de plaquetas a 22º C.Plasma fresco refrigerada a 4º C.*Terminado el horario de extracciones y antes de que pasen seis horas se comienza el fraccionamiento

FRACCIONAMIENTO DE LA SANGRE:OBTENCIÓN DE CONCENTRADO DE HEMATIES Y PLASMA FRESCO.OBTENCIÓN DE CONCENTRADO DE HEMATIES, CONCENTRADO DE PLAQUETAS Y PLASMA.

ESTUDIO DE LA SANGRE DEL DONANTE y receptor: Con los tubos obtenidos en el momento de la extracción se realiza:Grupo ABO hemático.Grupo ABO sérico.Grupo Rh.Grupo de otros sistemas si el banco lo tiene en su protocolo.Anticuerpos irregulares.Determinación de transaminasas.Ac anti-VIH 1 y 2.Estudio de hepatitis B (HBsAg).Determinación de Ac anti-VHC.RPR (sífilis).

COMPATIBILIDAD DIRECTA: PRUEBAS CRUZADAS RECEPTOR-DONANTE:PRUEBA CRUZADA MAYOR: para comprobar que el suero del receptor no reacciona con los hematíes transfundidos (si positiva presencia de Ac en el suero del receptor frente a losAg del donante).PRUEBA CRUZADA MENOR: para confirmar que el suero del donante no reacciona con los hematies del receptor (si positiva suero del donante tiene Ac frente a los Ag del receptor).

Las pruebas cruzadas deben realizarse en tres medios:En medio albuminoso (facilita aglutinación por disminuir potencial Z).Con antiglobulina humana (pone de manifiesto Ac IgG incompletos).Con bromelina (refuerza la reacción Ag-Ac de algunos Ac)

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REACCIONES TRANSFUSIONALES:

REACCIONES TRANSFUSIONALES INMEDIATASReacción hemolítica aguda: (hemólisis de los hematies del donante).Reacciones febriles: Por hemolisis aguda; aloAc anti-leucocitarios o anti-plaquetarios del donante;Transfusión de sangre contaminada con bacterias.Edema agudo de pulmón: Por sobrecarga circulatoria; Ac anti-leucocitarios que producen agregados de leucocitos del receptor en el lecho vascular pulmonar.Reacciones alérgicas: Urticaria (Ac frente a proteinas plasmáticas del donante)./ Reacción anafiláctica (personas con Ac anti-IgA).

REACCIONES TRANSFUSIONALES TARDIAS:Transmisión de enfermedades infecciosas.Reacción hemolítica retardada: Ac del receptor frente a Ag eritrocitarios de la sangre transfundida.Púrpura postransfusional:Trombopenia, parece debida a Ac anti-plaquetas.Sobrecarga de hierro:Hemosiderosis (depósito de Fe en los tejidos).

1962